MXPA97007662A - Peptidas y agente terapeutico para enfermedades autoinmunes que contienen las mismas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un péptido que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representan cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena natural de alquilo o heteroalquilo que puede estar substituida por un grupo hidroxi, amino o guanidilo;Xaa2 y Xaa6 cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alquilo o heteroalquilo que puede estar substituída por un grupo hidroxilo;Xaa3 y Xaa5 cada uno independientemente unresiduo de aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrofóbica;y n representa 1ó0);o derivados del mismo y una modificación del mismo. El péptido o derivados del mismo de conformidad con la presente invención esútil como una composición farmacéutica para la prevención y tratamiento de enfermedades autoinmunes, reacción de rechazo inherente en el transplante deórgano, inflamación o lo semejante.

Description

PEPTIDAS Y AGENTE TERAPÉUTICO PARA ENFERMEDADES AUTOINMUNES QUE CONTIENEN LAS MISMAS Campo Técnico de la Invención La presente invención se relaciona con peptidas o deri vados de las mismas. Las peptidas o derivados de las mismas de conformidad con la presente invención son útiles para el trata-miento supresor no específico de antígeno de inmunorreacción an almente aumentada en enfermedades autoin unes. Teniendo un ef to anti inflamatorio, también es útil para el tratamiento de la i f lamación. Consecuentemente, la presente invención se relaciona -con los campos interesados en peptidas o derivados de las mismas y también con productos farmacéuticos que contienen las mismas.

Antecedentes de la Invención Las enfermedades autoinmunes se inducen mediante la producción continua de un anticuerpo o.linfocito que reacciona con un componente del tejido conocido. En las enfermedades auto inmunes, descritas específicamente, la interrupción de toleranci inmunológico eleva la respuesta inmune a componentes orgánicos propios, que ocasiona la reacción entre un anticuerpo o célula a torreactiva T así producida y un autoantígeno o célula correspon diente al mismo, ocasionando de esta manera disfunción celular o daños de tejido. En la actualidad, se conocen 50 o más tipos de enfermedades autoinmunes y de conformidad con el grado de dispe sión de una lesión sobre los órganos, pueden clasificarse en en fermedadews autoinmunes específicas de órgano y enfermedades au inmunes no específicas de órgano. Los ejemplos de las primeras enfermedades incluyen di betes ili i tus dependiente de insulina en las que una lesión es ocasionada por la destrucción selectiva de células B en la isla pancreática de Langerhans, enfermedad de Basedow y enfermedad d Highimoto, en la que la disfunción tiroidea es ocasionada por e anticuerpo contra un receptor de hormona estimuladora de la tir des, iastenia grave que tiene contracción de músculo reducida por un anticuerpo contra un receptor de aceticolina del músculo estriado, y anemia hemolítica autoinmune en la que la hemolisis es ocasionada por el anticuerpo contra el eritrocito. Los ejemplos de las últimas enfermedades incluyen art tis reumatoide crónica en la que los desórdenes generalizados e el tejido óseo o cartilaginoso se considera que ocurren, dispar da por el agregado de IgG y anticuerpos anti-IgG (factores reum toides), lupus eritematosus sistémico en el que una reacción de perturbación es ocasionada por la deposición de anticuerpos con tra DNA o componentes nucleares al riñon, articulación o piel. Síndro a de SjUgren en el que ocurre la disfunción debido a la -infiltración linfocítica hacia la glándula salival o glándula la crimal y organolesión sisté ica tal como nefritis intersticial ocurre al mismo tiempo a cierta frecuencia, y esclerosos múltipl en la que nudos y glioeis de desmiel inación diseminada aparecen en la substancia alba del sistema nervioso central y ocasionan p rálisis del motor sistémico, oftalmopatí a, prestesia o lo semeja te.

Técnica Anterior Para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, es la práctica común administrar un inmunosupresor tipificado mediante una preparación de gluco-esteroide, ciclosporina A o FK 506. El tratamiento que utiliza dicha preparación, sin embargo, es acomp nado por la desventaja tal como efectos laterales serios, por ejemplo, enfermedades infecciosas, nefrotoxidad de la propia dro ga o carcinogenésis , que resultan del espectro amplio de inmunos presión /_~Sadao Kashiwazaki, .iSogo Ri nsho ' ' , 43 (9), 1725-1729-(1994)_7. En los años recientes, ha habido algunos esfuerzos par tratar enfermedades autoinmunes sin utilizar dicho inmunosupreso con espectro amplio. Durante la reacción con un antígeno, las células B rec nocen al propio antígeno, mientras que las células T reconocen e complejo de una molécula de MHC sobre la superficie de la célula que presenta el antígeno y una peptida de antígeno ajustada en l ranura de la molécula de MHC. La molécula de MHC difiere con in dividuos y células T humanas que tienen MHC congenial a un ciert antígeno muestra buena respuesta a este antígeno. Esta es una d las razones porqué algunos seres humanos son probables de ser re activos aun cierto antígeno. Esta es una de las razones por qué algunos seres humanos son probables que sean reactivos a un cier to antígeno. Por otra parte, los receptores de antígeno de célu la T (receptores de célula T: TcR) pueden clasificarse en dive sas familias. Existe una substancia que activa las células T, l gando con una o varias de las familias TcR y la substancia se de nomina superantígeno. El superantí geno activa un número mayor d células T comparado con aquellas en el caso de la inmunorreación ordinaria de maneda que sucede que ocasiona una reacción grande, que conduce a una enfermedad. Para la activación de células T, el ligado de una molécula socia (ligando) a la mplécula de adhe sión sobre la superficie es necesario además del reconocimiento del antígeno. La reacción de las células T, por lo tanto, puede inhibirse bloqueando la molécula de adhesión, o la reacción pued ampliarse mediante la expresión mejorada del ligando de la célul asociada . Se reporta que entre los grupos de célula T, existen c lulas T que suprimen la inmunorreación que se denominan células supresoras /~Tada y Takemori, J. Exp. Med., 140, 239 (1974)_7-Se elucida que estas células T producen factores inmunosupresore solubles para producción de anticuerpo específico de antígeno su presor /~Tada, y col., J. Immul., 111, 952 (1973)_7. La relació entre los factores inmunosupresores solubles y una cadena TcR al fa se reporta (Dorf, y col., J. Immunol., 145, 2809-2819 (1990)) La encefalomiel itis alérgica experimental (EAE) que es un model de esclarosis múltiple se induce mediante la administración de proteína de mielina básica. En la EAE, la presencia de un rece tor de antígeno de célula T (TcR específico de enfermedad) que expresa específicamente en el linfocito patógeno se conoce. El método de tratamiento utilizando un anticuerpo contra un TrC es cífico de enfermedad o vacuna de peptida de TcR, pon. lo tanto, ha desarrolado /""Howell , y col., Science, 251, 430-432 (1991); Vandenbrk, y col., Nature, 341, tratamiento de enfermedades autoinmunes se considera que está a ciado con efectos laterales menos serios comparados con el méto que emplea un inmunosupresor tal como preparación de glico-este-roide o ciclosporina A. El método anterior solamente puede apli carse al caso en donde la célula T o antígeno que ha ocasionado una enfermedad se ha circunscrito dentro de una escala marcadam te estrecha. Se considera que es difícil aplicar el método ant rior a enfermedades autoinmunes, tales como artritis reumatoide crónica, de la cual el antígeno no se ha determinado todavía y e la que un número plural de linfocitos patógenos existen. Este todo requiere el establecí iento de célula T supresora individual específica a cada antígeno y análisis de su TcR. Bajo el presen te estado en donde las células T supresoras derivadas del ser hu mano no pueden establecerse fácilmente, es extremadamente difíci desarrollar el TcR anterior como un agente inmunosupresor.. Por otra parte, se reporta un caso en donde la toleran cia inmunológica se induce utilizando una peptida que tiene una secuencia de aminoácido derivada de antígeno /"Greenstein , y col Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 9, 7608-7612 (1993 )_7. Como un méto do para usar un inmunosupresor compuesto de un fragmento de pept da TcR, se describe un método en el que polipeptida derivada de TcR cadena-beta (compuesto de 13 residuos de aminoácido como mín mo) se utiliza para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, particularmente artritis reumatoide crónica (Publicación Abierta en Idioma japonés No. HEI 6-511241); y un método en el que frag mentó de peptida TcR de células T patógenas que ocasionan escler sis múltiple se administra para suprimir el principio de EAE ( 090/11294) . Mohapatra y col. han comprobado que una peptida sintética compuesta de 15 residuos de aminoácido que contienen CDR3 (región de determinación complementaria), que es un sitio d determinación de antígeno específico de TcR derivada de la Célul T de supresor, tiene un efecto inmunosupresor /~J. Immunol., 151 688-698 (1993)_7. Los fragmentos de peptida arriba descritos no son mejo res que un agente inmunosupresor caracterizado por tener la espe cificidad de antígeno de modo que un problema que no puede usars para el tratamiento de todas las enfermedades autoinmunes ha per manecido sin resolver.

Compendio de la Invención Un objeto de la presente invención es superar las des- ventajas o defectos arriba descritos de los métodos convenciona les, proporcionando de esta manera un agente terapéutico para en fermedades autoinmunes, que tiene efectos inmunosupresores no es pecíficos de antígeno y, por lo tanto, puede utilizarse para el tratamiento de enfermedades autoinmunes de las cuales todavía no se han determinado los antígenos. Otro objeto de la presente invención es proporcionar u agente terapéutico para enfermedades autoinmunes, que puede utiH zarse para el tratamiento de enfermedades autoinmunes acompañada con inflamación. Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar una peptida que se caracteriza por tener un peso molecula bajo en comparación con aquel empleado en el méotodo convencional de modo que puede prepararse a un costo bajo y tiene efectos lat rales marcadamente reducidos tales como ocurrencia de antigeneci-dad debidad a administración frecuente. Como resultado de una investigación extensa sobre la re lación mutua entre la secuencia de aminoácido de una proteína o -fragmento de peptida originado de una proteína tal como CDR3 de -TcR derivado de las células T supresoras y un agente terapéutico para enfermedades autoinmunes, los presentes inventores han encojn trado que existen algunas peptidas que tienen actividad sopresora contra la producción de antígeno IgG no específico. Encontrando que una peptida compuesta de 9 residuos de aminoácido, que se muestra como Secuencia ID No. 1 en la Lista de Secuencia, suprime no solamente la producción de anticuerpo de antialbúmina de huev (OVA) sino también la producción de anticuerpo de anti agujero 1 impet-hemacianina (KLH) en cada uno de los experimentos in vivo que los presentes inventores han completado la presente invenció Incidentalmente OVA y KLH son antígenos típicos utilizados como inmunogenes (I munology Dictionary, 1993, Tokyo Kagaku Dojín, pá 101 y 130). En general, TcR derivado de células T supresoras corre pone con uno por uno específicamente a diversos antígenos. La peptida de la presente invención, por otra parte, suprime produc ción de anticuerpo contra diferentes antígenos tales como OVA y KLH y, por lo tanto, tiene actividad inmunosupresora no específi ca de antígeno. Los presentes inventores también encontraron que la pe tida compuesta de 9 residuos de aminoácido, que se muestra como Secuencia ID No. 1 en el Listado de Secuencia, suprime el princi pio de encefalomiel itis alérgica experimental (EAE), un modelos de esclerosos múltiple, que es una de las enfermedades autoinmu- nes para las que las células T son responsables. Además, es sor prendente que han encontrado la peptida compuesta de 9 residuos de aminoácido, que se indica mediante la Secuencia ID No. 1 en e listado de Secuencia, suprime el edema en un modelo de edema de garra inducido para carrageenina y, por lo tanto, tiene un efect anti i nf lamatorio . La peptida de la presente inveción tiene una propiedad de inmunosupres ion suprimiendo actividades de célula T •W"» "•--ijiyjuj JI ?i-*Hjfl t|¿.»j¡iLi. («W}ji:iJ»)". r?V"/ wr* r!s? así como anti - inf 1 amación. Como resultado de esfuerzos extensos para desarrollar una peptida de bajo peso molecular que tiene menos antigenecidad y puede sintetizarse fácilmente, los presentes inventores han en contrado que la peptida compuesta de 8 residuos de aminoácido, • que se muestra como Secuencia ID No. 2 en el Listado de Secuenci suprime no solamente la producción de Anticuerpo anti-OVA, sino también la producción de anti-KLH, en cada experimento in vivo. Los presentes inventores también han encontrado mediante e l méto do de substitución de alanina "Geysen H.M., y col., J. Immunol. Methods, 102, 259^274 (1987)_7 que existen, en algunas peptidas que tienen un cierto consenso de secuencia de aminoácido, pepti das que tienen una actividad supresora de producción de IgG no e pecífica de antígeno. Encontrado que dichas peptidas tienen una secuencia de aminoácido general suprimer no solamente la produc ción de anticuerpo de antialbúmina de huevo (OVA) sino también l producción de anticuerpo de agujero-pimpet-hemac ianina (KLH) en cada experimento in vivo, los presentes inventores completaron l presente invención. Consecuentemente, la presente invención se relaciona • con una peptida que tiene una secuencia de aminoácido representa da por la siguiente fórmula: Ala-xaaULeu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representan cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alqu lo o .beteroalqui lo que puede estar substituida por un grupo hidr xi , amino o guanidi lo; Xaa2 y Xaa6 representan cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alqu lo o heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxilo Xaa3 y Xaa5 representan cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrofó bica; y n representa 1 ó 0), o derivados de la misma; una composición farmacéutica que conti ne la misma; y un método para el tratamiento de enfermedades ut lizando la misma.

Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 es una gráfica del cromatograma de Peptida (I). La Peptida (I) obtenida de conformidad con la presente in vención tiene una pureza de 100%. La Figura 2 es una gfafica del cromatograma de Peptida (II). La Peptida (II) obtenida de conformidad con la presente i venciób tuvo una pureza de 99.6%. La Figura 3 es una gráfica del cromatograma de Peptida (III). La Peptida (III) obtenida de conformidad con la presente invención tuvo una pureza de 98.8%. La Figura 4 es una gráfica del cromatograma de Peptida (IV). La Peptida (IV) obtenida de conformidad con la presente invención tuvo una pureza de 97.2%. La Figura 5 es una gfafica del cromatograma de Peptid (V). La Peptida (V) obtenida de conformidad con la presente in vención tuvo una pureza de 98.5%. La Figura 6 es una gráfica del cromatograma de Peptid (VI). La peptida (VI) obtenida de conformidad con la presente vención tuvo una pureza de 98.4%. La Figura 7 es una gráfica de un creomatogra a de Pep da (VII). La Peptida (VII) obtenida de conformidad con la pres te invención tuvo una pureza de 97.9%. La Figura 8 es una gráfica del cromatograma de Peptid (VIII). La Peptida (VIII) obtenida de conformidad con la prese te invención tuvo una pureza de 98.1%. La Figura 9 es una gráfica del cromatograma de Peptid (IV). La Peptida (IV) obtenida de conformidad con la presente vención tuvo una pureza de 97.5%. La Figura 10 es una gráfica del cromatograma de Pepti (X). La Peptida (X) obtenida de conformidad con la presente in vención tuvo una pureza de 98.2%. La Figura 11 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XI). La Peptida (XI) obtenida de conformidad con la presente vención tuvo una pureza de 97.6%. La Figura 12 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XII). La Peptida (XII) obtenida de conformidad con la present invención tuvo una pureza de 97.5%.

La Figura 13 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XIII). La Peptida (XIII) obtenida de conformidad con la prese te invención tuvo una pureza de 98.2%. La Figura 14 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XIV). La Peptida (XIV) obtenida de conformidad con la present invención tuvo una pureza de 98.6%. La Figura 15 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XV). La Peptida (XV) obtenida de conformdiad con la presente vención tuvo una pureza del 100%.

Exposición de la Invención La presente invención se relaciona con una peptida qu tiene una secuencia de aminoácido representada por la siguiente fórmula : Ala-Xaa1-leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representa cada uno independientemente un residuo aminoácido que puede tener una cadena lateral de alquil o heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxi, am no o guanidilo; Xaa2 y Xaa6 representa cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de A 1 q lo o heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxil Xaa2.y Xaa5 representa cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrof bica ; y n representa 1 ó 0, con la condición de aquel caso en donde Xaa2 representa glicina, se excluye), o un derivado de la misma. Xaa1 y Xaa4 representa cada una independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de a 1 q lo o heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxi, amino o guanidilo. Los ejemplos pueden incluir Lys, Arg, His y Ala. Xaa2 y Xaa6 representa cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alq lo o heteroalqui lo que puede estar substituida por un grupo hid xilo. Los ejemplos pueden incluir Thr y Ala. Xaa3 y Xaa5 representa cada uno independientemente un residuo d aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrofóbica. Los ejemplos pueden incluir Gly y Ala. El término "alquilo" como se utiliza en la presente s nifica un grupo que abarca grupos alquilo de C1-C15 primarios, cundarios y terciarios saturados, de preferencia grupos de C1-10 que pueden ser lineales o ramificados. Extermino "he roalquilo" como se utiliza en la presente, significa un grupo e el que cuando menos uno de lso átomos de carbono del grupo de C1 15 , de preferencia "alquilo de C1-10 arriba descrito se ha sub tituido porun número semejante de átomos hetero tales como azuf (S) u oxígeno (0) (ordinariamente, en la forma de un (tio)éster (tio)éter) . n representa 1 ó 1. En el derivado de peptida de la presente invención, t dos o parte de los aminoácidos pueden estar en la forma D, un g po funcional teniendo un hidrógeno activo puede substituirse co un grupo protector apropiado o el grupo carboxilo en la termina C puede estar en la forma de un derivado carboxi tal como amida éster. No se impone limitación particular en el grupo protecto apropiado para la substitución con el grupo amino o carboxilo e la peptida, sin embargo, se prefiere un grupo acetilo (Ac) o gr po t-butoxicarboni lo (tBoc). Como un derivado de carboxi en la terminal C, se prefiere una amida. La conversión hacia un derivado de peptida puede ocas nar una mejora en la estabilidad. Específicamente descrita, la presente invención perte ce a una peptida que tiene la siguiente secuencia de aminoácido: Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representa cada uno independientemente cu quiera de Lys, Art, His y Ala; Xaa2 y Xaa6 representa cada uno independientemente Th o Ala ; Xaa3 y Xaa5 representa cada uno independientemente Gl o Ala; y n representa 1 ó 0) o derivado de la misma. Más específicamente, la presente invención se relacion con una peptida que tiene una secuencia de aminoácido selecciona da a partir del grupo que consiste de las siguientes secuencias de aminoácido: Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly, y Ala-Lys-leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala. Todavía más específicamente, la presente invención se relaciona con una peptida o derivado de la misma seleccionada a partir del grupo que consiste de las peptidas y derivados de la misma representadas por las siguientes fórmulas (I) a (XII): Ala-Lys-Leu-thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (I) DAla-DLys-Dleu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr (II) Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (III) tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (IV) Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-Dphe-Gly-DLys-Gly-DThr (V) Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr-NH2 (VI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VII) Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VIII) Ala-Lys-Leu-AIa-Phe-Gly-Lys-Gly - (IX) Ala-Lys-Leu-Tñr-Phe-AIa-Lys-Gly (X) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly (XI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala (XII) (en donde D representa una forma D, Ac representa un grupo acet lo y tBoc representa un grupo t-butox icarboni lo) , o un derivado de la misma. Noi se impone limitación particular sobre el proceso de preparación de la peptida que tiene una secuencia de aminoác do representada por la siguiente fórmula: Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Caa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representa cada uno independiente un resi duo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alquilo heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxi, amin o guanidi lo; Xaa2 y Xaa6 cada uno representa independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alq lo o heteroalqui lo que puede substuirse por un grupo hidroxilo; Xaa3 y Xaa5 representa cada uno independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrof bica; y; n representa 1 6 0), o un derivado de la misma. Por ejemplo, es posible sintetizar una peptida utilizando un sintetizador de peptida de conformida con la síntesis de peptida de fase sólida (Fmoc) de conformidad con una manera oridnaria, seguido por purificación mediante una columna de HPLC de fase de reversa. Las peptidas Ul) a (XII) también pueden sintetizarse mediante el sintetizador de peptida pueden convertirse químicamente como se necesite. La peptida de la presente invención se prefiere que tenga propiedades fisicoquímicas solubles. Debido a que la pep da de la presente invención tiene un peso molecular bajo, los efectos laterales tales como ocurrencia antigenicidad pueden red cirse significativamente aún después de administración frecuente y además, su toxicidad es muy baja. La presente invención tam-bien pertenece a una composición farmacéutica que contiene una peptida que tiene una secuencia de aminoácido representada por l siguiente fórmula: Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 cada una representa independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alqu lo o heteroalqui lo que puede substituirse por un grupo hidroxi, amino o guanidilo; Xaa2 y Xaa6 cada uno representa independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alqu lo o heteroalqui lo que puede substiruirse por un grupo hidroxilo Xaa3 y Xaa5 cada uno representa independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrofó bica; y n representa 1 ó 0) . o un derivado de la misma, o una composición farmacéutica que co tiene dicha peptida o derivado de la misma y un portador farmacé ticamente aceptable. '. - . Descrita específicamente, la presente invención perten ce a una peptida que tiene una secuencia de aminoácido represent da por la siguiente fórmula: Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 representa cada uno independien mente cualquiera de Lys, Arg, His y Ala; Xaa2 y Xaa6 cada uno representa independientemente Th o Ala ; Xaa3 y Xaa5 cada uno representa independientemente Gl o Ala; y n representa 1 ó 0) , o derivado de la misma. Más específicamente, la presente invención pertenece una composición farmacéutica que contiene una peptida que tiene una secuencia de aminoácido seleccionada a partir del grupo que consiste de las siguietnes secuencias de aminoácido: Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly, . .. Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly y Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala, o derivados de la misma, o una composición farmacéutica que con tiene la peptida o derivados de la misma y un portador farmacéu camente aceptable. Todavía más específicamente, la presente invención ta bien pertenece a una composición farmacéutica que contiene una peptida o derivados de la misma seleccionada a partir del grupo que consiste en peptidas y derivados de las mismas representados por las siguientes fórmulas (I) a (XII): Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (I) DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr (II ) Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (III) tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ley-Gly-Thr (IV) Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr (V) Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr-NHs (VI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VII) Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VIII) Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly (IX) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly (X) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly (XI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala (XII) (en donde D rperesenta una forma D, Ac representa un grupo acetir lo y tBoc representa un grupo t-butoxicarboni lo) ; o una composición farmacéutica que contiene la peptida o derivados de la misma y un portador farmacéuticamente aceptable En los derivados de peptida usados para ia composición farmacéutica de la presente invención, todos o parte de los amino ácidos pueden estar en la forma D, un grupo funcional que tiene -un hidrógeno activo puede substituirse con un grupo protector apropiado o el grupo carboxilo en la terminal C puede estar en la forma de un derivado carboxi tal como amida o éster. No se impo ne limitación particular en el grupo protector apropiado para la substitución con el grupo amino o carboxilo en la peptida, sin e bargo, se prefiere un grupo acetilo (Ac) o un grupo t-butoxicarb nilo (tBoc). Como un derivado carboxi en la terminal C, se pre fiere una amida. La conversión hacia un derivado de peptida pue de ocasionar una mejora en la estabilidad. La composición farmacéutica arriba descrita de la pre sente invención es útil particularmente para el tratamiento de e_ fer edades autoinmunes. Consecuentemente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes. La composición farmacéutica de la presente invención p_ ra el tratamiento de enfermedades autoinmunes se caracteriza por su no especificidad de antígeno. La peptida o derivados de la misma de conformidad con la presente invención suprimen la activ dad de las células T de manera que la presente invención también se relaciona con una composición farmacéutica para el tratamient de una o más de una enfermedades seleccionadas del grupo que con siste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide crónica, lupus erithematosus sistémico, síndrome de SjUgren, enfermedad de Basedow, enfermedad de Hashimoto y anemia hemolítica autoinmune. La composición farmacéutica arriba descrita de la pre sente invención también es útil para la prevención y tratamiento de episodio de rechazo inherente al trasplante de órgano. Conse cuentemente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para la prevención y tratamiento del episodio de r chazo inherente al trasplante de órgano. Además, la composición farmacéutica arriba descrita d la presente invención tiene un efecto anti inflamatorio y es útil como un agente anti inflamatorio. Consecuentemente, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para el trat miento de inflamación. La presente invención también se relaciona con un mét do de tratamiento para enfermedades autoinmunes, que comprende a ministrar una cantidad farmacéuticamente efectiva de la peptida arriba descrita o derivados de la misma. La presente invención también se relaciona con un método para el tratamiento de una o más de una enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide crónica, lupus eritemat so sistémico, síndrome de SjUgren, enfermedad de Basedow, enferm dad de Hashimoto y anemia hemolítica autoinmune, que comprende a ministrar una cantidad farmacéuticamente efectriva de la peptida arriba descrita o derivados de la misma. La presente invención también pertenece a un método pr ventívo y curativo de episodio de rechazo inherente al trasplant de órgano, que comprende administrar una cantidad farmacéut icame te efectiva de la peptida arriba descrita o derivados de la mism La presente invención también pertenece a un método de tratamiento para inflamación, que comprende administrar una cant dad farmacéuticamente efectiva de la peptida arriba descrita o d ri vados de la mi sma. La presente invención también se relaciona con el uso de la peptida arriba descrita o derivados de la misma para la pr paración de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades autoinmunes. La presente invención también se rela ciona con el uso de la peptida arriba descrita o derivado de la misma para la preparación de una composición farmacéutica para e tratamiento de una o más de una enfermedades seleccionadas del -grupo que consiste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide crónica, lupus eritematoso sistémico, síndrome de SjUgren, enfer medad de Basedo , enfermedad de Hashimoto y anemia hemolítica au toinmune. La presente invención también se relaciona con el uso de la peptida arriba descrita o derivados de la misma para la pr paración de una composición farmacéutica para la prevención y tr tamiento del episodio de rechaza inherente al trasplante de órga no. La presente invención también se relaciona con el uso de la peptida arriba descrita o derivados de la misma para la pr paración de una composición farmacéutica para el tratamiento de inflamación. Aún cuando la dosis clínica de la peptida de la presen te invención varía dependiendo del método de administración, eda peso o condiciones de cada paciente, o lo semejante, queda típi mente dentro de una esacala de 0.05 a 500 mg, de preferencia -0 a 100 mg por día y adulto. Como un método de administración, puede emplearse la inistración intravenosa. Además de la inyección intravenosa o dinaria, la transfusión también es posible. Como una preparaci de inyección, la peptida de la presente invención o los derivad de la misma pueden formularse, por ejemplo, hacia una preparaci pulverulenta para inyección. En este caso, la preparación de i yección puede obtenerse añadiendo uno o más de uno excipientes lubles en agua apropaidos, seleccionados a partir de anitol, s crosa, lactosa, maltosa, glucosa, fructosa, o lo semejante añad do a la preparación pulverulenta, disolviendo la mezcla resulta te en agua, vertiendo porciones de la solución resultante en vi les o ampolletas, liofilizando y luego sellando herméticamente. También es posible administrar en sisté ico la preparación pulv rulenta a través de la nariz o pulmones como una preparación en aerosol en partículas finas. Además, la preparación pulverulen puede administrarse oralmente después de añadirse con un excipi te apropiado o lo semejante. En la presente invención, los efectos supresores de producción de anticuerpo de antialbúmina OVA y*.la producción de anticuerpo de anti-KLH en ratones se estudiaron mediante el mét do ELISA. Comparado con el grupo no administrado, la peptida d la presente invención exhibició actividad supresora significati mente elevada contra la producción de anticuerpo anti-OVA. Aún en comparación con un fragmento de peptida compuesto de 15 resi duos de aminoácido originados de CDR3, la peptida de la present invención mostró actividad sopresora de producción de anticuerp marcadamente elevada. Comparada con el grupo no administrado, la peptida de la presnete invención exhibió actividad supresora marcadamente elevada contra producción de anticuerpo anti-KLH. Además, los efectos supresores contra el principio de encefalo iel itis alérgica experimental (EAE) en ratones se exam nó. Comparado con el grupo no administrado, la peptida de la p senté invención mostró efecto supresor significativo contra el principio de EAE, Adicionalmente, el efecto supresor de la pep da de la presente invención sobre el modelo de edema de garra i ducida por carrageenina en rata se examinó, resultando en efect supresor de edema considerablemente elevado comparado con el gr po no administrado. Hasta ahora no se ha reportado que una peptida de baj peso molecualr que se deriva de una región de cadena J de alfa TcR y pueda sintetizarse artificialmente tenga un efecto inmuno presor no específico de antígeno. La peptida o derivados de la presente invención son útiles como un agente terapéutico de enf edades autoinmunes, particularmente, una composición farmacéut ca para el tratamiento de una o más de una efermedades seleccio das a partir del grupo que consiste en esclerosis múltiple, art tis reumatoide crónica, lupus ertematoso sistémico, síndrome de Sjügre, enfermedad de Basedow, enfermedad de Hashimoto y anemia hemolítica autonimnume. También tiene un efecto anti inflamatori de modo que es útil como un agente terapéutico para, entre enfe medades autoinmunes, aquellas acompañadas con inflamación tal c mo artritis reumatoide crónica. Además, la peptida de la prese te invención tiene efectos supresores de producción de anticuer de modo que es útil como un preventivo o agente terapéutico par alergia de tipo inmediato en donde se relaciona IgE, tal como p linosis, dermatitis atópica, asma, choque anafiláctico o fiebre del heno, o alergia a la droga. La presente invención se describirá a continuación con detalle mediante ejemplos, pero, sin embargo, debe mantenerse en mente que la presente invención no está limitada a o por los si guientes ejemplos.

Ejemplo 1 Síntesis de Peptidas Síntesis de Peptida (I) Se sintetizó peptida (I) mediante el método de fase só lida (Fmoc) utilizando un sintetizador de peptida ("Model 430A", Applied Biosystems Inc.). Un aminoácido que tiene una N-terminal protegida con u grupo 9-f luoreni lmeti loxicarboni lo (Fmoc) se copuló sobre una re sina de p-hidroximet i 1 fenoximet i lpol iesti reno (HMP) mediante el método que se describe más adelante. Primero, el aminoácido en la resina se desprotegieron temperatura ambiente durante 30 minutos utilizando 20% de piperi dina/N-meti lpirrol idona (NMP), seguido por lavado dos veces con NMP y luego con 50% de diclorometano (DCM)/metanol . Después de lavar, seañadió una peptida diluida con un o-benzotriazol-1 -i 1- N,N,N=N=-tetrametiluronio-hexaf 1 uoro-fosfato al 50% (HBTU)/DCM y se con IduIjo una reacción de copulación a temperatura ambiente dur* rante alrededor de 60 a 120 minutos. Los pasos arriba descritos se repitieron para copular todos los aminoácidos. Después de la terminación de la reacción, el grupo Fmoc N-terminal se removió utilizando HBTU/DCM al 50%, seguido por recuperación de la pepti da libre de la resina utilizando ácido trif luoacético (TFA) al 95%. La peptida así recuperada se diluyó con una solución de ác do acético al 5%, seguido por la purificación por la HPLC de fas invertida.

Síntesis de Peptidas (II), (III), (IV), (V) y (VI) Las peptidas (II), (III), (IV), (V) y (VI) se sintetiz ron mediante el método de fase sólida (tBoc) utilizando un sinte tizador de peptida ("Beckman 990c"). Un aminoácido que tiene un N-terminal protegido con un grupo t-butoxicarboni lo (tBoc) se copuló sobre una resina median te el método que se describe más adelante. incidentalmente, una resina de feni lacetomidometi lo (Pa ) se utilizó para la síntesis de una peptida que tiene un grupo carboxilo como un C-terminal y una resina de 4-meti lbenzihidr i lamina (MBHA) se usó para la sínt sis de una peptida que tiene un grupo amida como un C-terminal.

Primero, el aminoácido en la resina se desprotegió a temperatura ambiente durante 25 minutos utilizando 50% de TFA/D seguido por lavado dos veces con isopropanol, DIPEA y DCM, resp tivamente. Luego, se añadió una peptida diluida con 50% de DMF DCM y la reacción de copulación se llevó a cabo a temperatura a biente durante alrededor de 60 a 120 minutos. Los pasos arriba descritos se repitieron y las reacciones de copulación de todos los aminoácidos se completaron. La peptida (IV) se obtuvo recu rando la peptida libre de la resina mediante el método HF (J.M. Ste art y col. Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, 1984), luyendo la peptida libre resultando con una solución de ácido a tico al 5% y luego purificando con el métod HPLC de fase invert da. La peptida (II) se obtuvo removiendo el grupo tBoc en el N-terminal utilizando 50% de TFA/DCM, recuperando la peptida li bre de la resina mediante el método HF, diluyendo con una solu-cioópn al 5 % de ácido acéitco y, luego purificando mediante el r todo HPLC de fase invertida. Las peptidas (III), (V) y (VI) se obtuvieron cada una añadiendo un grupo acetilo (Ac) al N-termin utilizando 20% de anhídrido acético, recuperando la peptida lib mediante el método HF, diluyendo con una solución al 5% de ácid acético y luego purificando mediante el método HPLC de fase inv tida.

Detección de la pureza de peptida así sintetizada. La pureza de cada peptida sintetizada de esta manera determinó utilizando una columna C-18 (Vydac Corp.) mediante el método HPLC de fase invertida. Con un gradiente lineal de 5% a 25% de acetonitrilo/agua purificada como una fase móvil, la crest de elución se detectó midiendo una absorbancia a 215 nm. La Figura 1 es una g afica del cromatograma de Peptid (I). La Peptida (I) arriba sintetizada tuvo una pureza del 100 La Figura 2 es una gráfica del cromatograma de Peptida (II). La Peptida (II) arriba sintetizada tuvo una pureza de 99.6%. La Figura 3 es una gráfica del cromatograma de Peptida (III). La Peptida (III) sintetizada tuvo una pureza de 98.8%. La Figura 4 es una gráfica del cromatograma de Peptida (fV). La Peptida (IV) sintetizada arriba tuvo una pureza de 97.2%. La Figura 5 ;es una gráfica del cromatograma de Peptida (V). La Peptida (V) arriba sintetizada tuvo una pureza de 98^5% La Figura 6 es una gráfica del cromatograma de Peptida (VI). La Peptida (VI) sintetizada tuvo una pureza de 98.4%.

Ejemplo2. Medición del efecto supresor de Peptida (I) sobre pro ducción de anticuerpo anti-OVA en ratones. El día 5 y día 3 antes de la administración de antígen la Peptida (I) compuesta de 9 residuos de aminoácido como se ind ca mediante la Secuencia ID No. 1 en la Lista de Secuencia de la presente invención y una peptida 15 sintética compuesta de 15 re siduos de aminoácido derivados del clon 17.2 TcR, cuya peptida s había reportado por Mohapatra y col. como se describe arriba, 1 OOg de cada una, se disolvieron en 100 1 de salina fisiológica cada solución obtenida de esta manera se administró subcutáneame te a ratones Balb/c de 9 semanas de edad. Como un control, un grupo no administrado al que se administró la misma cantidad de salina fisiológica se empleó. En 200 1 de salina fisiológica, s disolvieron 100 g de OVA (Sigma Chemical Co.), seguido por admi-¡ nistración subcutánea. Se recogió sangre en el día 21 después d la administración de antígeno y se midió un título de anticuerpo mediante el método abajo descrito. Se diluyó OVA a 10 g/ml con salina tamponada con fosfa to (PBS) y porciones de 50 1 de la solución se vertieron en una icroplaca de 96 pozos. La operación se revestimiento se conduj durante la noche a 409C La microplaca luego se lavó tres veces con 0.05% de PBS que contiene Tween-20 ((T-PBS). Porciones de 200 1 de salina fisiológica tri\>tamponada que contiene caseína a 0.5% (caseína TBS) se vertieron en cada pozo y la microplaca se dejó reposar a temperatura ambiente durante una hora. La micro placa luego se lavó tres veces con T-PBS. Después el suero de l sangre recogida de los ratones se diluyó a 1/200 con 0.5% de ca seína TBS, porciones de 50 1 del, suero diluido se vertieron en C da pozo y la placa se dejó reposar durante una hora (reacción pr mar ia ) . Después de la terminación de la reacción primaria, la microplaca se lavó tres veces con T-PBS. Porciones de 50 1 de a ticuerpo etiquetado IgG-peroxidasa antiratón (TAGO Co.) diluidas a 1/4000 con TBS caseína al 0.5% se vertieron en cada pozo, segu do por reacción a temperatura ambiente durante una hora (reacció secundaria). Después de la terminación de la reacción secundari .a placa se lavó tres veces nuevamente. Porciones de 50 1 de un substrato 1 í quido/cromogeno (susbrato de cromogeno : Behringwerk AG) se vertieron en cada pozo, seguido por reacción a temperatur ambiente durante 30 minutos, después de la terminación de la re acción, se añadió ácido sulfúrico diluido 0.5N para terminar la reacción y se midió una absorbancia a 450 nm mediante un colorím tro ("BEP-II", producto de Behringwerke AG/Alemania) con una ab sorbencia a 650 nm como control. Los resultados se muestran en el Cuadro 1.

Cuadro 1 Efecto supresor de Peptida (I) de esta invención sobre producció de anticuerpo anti-OVA en ratón. Tratado con Título anticuerpo AntiOVA Ig-G (unida Grupo no administradi 59 + 40.0 Peptida 15 derivada de clon 17.2 13.5 + 12.0 Peptida (I) 8.8 + 10.8 A partir de los resultados anteriores, se ha encontrado que comparado con el grupo no administrado, la producción de anti cuerpo se suprimió significativamente en los ratones a los que s administró la peptida 15 sintética derivada del clon 17.2 y Pep da (I) de esta invención, respectivamente. Incidentalmente, cad grupo consistió de 8 ratones.

Ejemplo 3 Medición del efecto supresor de Peptidas (I) a (VI) e producción de anticuerpo anti-KLH en ratones Los días 5 y día 3 antes de la administración de antíg no, 100 ug de cada Peptida (I) a (VI) de la presente invención compuestas de 9 residuos de amino ácido indicadas por la Secuen cia ID NO. 1 en el Listado de Secuencia se disolvieron en 200 ul de salina fisiológica. La solución resultante se administró sub cutáneamente a ratones Balb/c de 9 semanas de edad. Como un con trol, un grupo no administrado al que se administró la misma can tidad de salida fisiológica se empleó. En 200 ul de salina fisi lógica, se disolvieron 25 ug de KLH como un antígeno y la solu-ción resultante se administró subcutáneamente. La sangre se rec gió en el día 21 después de la administración de antígeno y se pu dio un título de anticuerpo mediante el método que se describe más adelante. Se diluyó KLH a 10 ug/ml con una salina fisiológica ta ponada con fosfato (PBS). Porciones de 50 ul de la solución resultante se vertieron en una microplaca de 96 pozos y la placa se dejó reposar a 4QC durante la noche. Después la microplaca se l_a vó tres veces con PBS que contiene Tween-20 al 0.05% (T-PBS), po_ ciones de 200 ul de salina fisiológica tri tampocana con caseín al 0.5% (caseína TBS) se vertieron hacia los pozos, respecti vam te. La micropaca luego se dejó reposar a temperatura ambiente rante una hora. La microplaca se lavó tres veces con T-PBS y p ciones de 50 ul del suero de ratón diluidas a 1/200 con caseína TBS se vertieron hacia los pozos, seguido por reacción durante una hora (reacción primaria). La microplaca resultante se lavó tres veces con T-PBS a la que se vertieron porciones de 50 ul de un anticuerpo etiqu tado anti-ratón IgG-peroxidasa (TAGO Co.) diluido a 1/4000 con seía TBS. La reacción se efectuó a temperatura ambiente durant una hora (reacción secundaria). Después de la terminación de l reacción secundaria, la placa se lavó tres veces nuevamente. P ciones de 50 ul de un substrato 1 í quido/cro ogeno (substrato de cromogeno: Behrißngwerke AG) se vertieron hacia los pozos, res pectivamente, seguido por reacción a temperatura ambiente duran 30 minutos. Después de la terminación de la reacción, se añadi ácido sulfúrico difluido 0.5N para terminar la reacción y se mi dió una absorbancia a 450 nm por medio de un colorímetro ("BEP-producto de Behringwerke AG/Alemania) con la absorbancia a 650 como control. Los resultados se muestran en el Cuadro 2.

Cuadro 2 Efecto supresor de Peptidas de esta invención sobre producción d anticuerpo anti-KLH Tratado con Título anticuerpo Anti-KLH IgG (unidad + SD) Peptída (I) 78.7 + 28.3 Peptida (II) 48.4 + 13.1 Peptida (III) 50.1 + 25.8 Peptida (IV) 48.5 + 24.9 Peptida (V) 37.7 + 17.7 Peptida (VI) 29.5 + 19.5 Tratado con Ttiulo anticuerpo Anti-KLH igG (uni dad + SD Salina Fisiológica 133.8 + 48.2 De los resultados anteriores, se ha encontrado que com parado con el grupo no administrado al que se había administrado salina fisiológica, la producción de anticuerpo se suprimió sign ficativamente en los grupso de ratones a los que se habían.-admi nistrado las Ppetidas (I) a (VI) respectivamente, incidentalmen te, cada grupo consistió de 8 ratones. Se ha entendido de lso resultados de los Ejemplos 2 y que las peptidas de la presente invención tuvieron acción inmuno supresora no específica de antígeno.

Ej emp l o 4 Efecto Supresor de P r i n c i p i o de Pept i da ( I ) sobre rat nes mode l o EAE Como un antigeno se utilizó he ogeneizado de médula es pinal de cobay. El homogenizado de médula espinal de cobayo se diluyó con PBS para ser 6.6 mg/ml, seguido por la adición de un cantidad equivalente de adyuvante completo de Frend +. La mezcl resultante se formó hacia una emulsión mediante un sonicador ul trasónico. La emulsión resultante se administró a dos áreas deb jo de la piel lateral en una cantidad total de 300 ul. El día 5 y día 3 antes de la administración de antígeno, y 5 días una seip na durante 4 semanas después de la administración de antígeno, l solución de Peptida (I) disuelta en 100 ul de salina fisiológica se administró subcutáneamente a un ratón SJL de 14 semanas de edad. Incidentalmente, a fin de aumentar la relación de princi pio, 400 ug/100 ul de toxina pertusis (PTX) se administraron in travenosamente como un mejorador en el día de administración de antígeno y dos días después de la administración de antígeno. L observación del principio se realizó del día 14 al día 28 despué de la administración de antígeno primaria. El principio se marc basado en el siguiente criterio convencional /"Pettinel 1 i , C. B. Fritz, D. E., y McFarlin, D. E. J. Immunl., 129, No. 3, 1024-102 (1982)_7. En el Cuadro 3, se muestran los varios de marca prome dio + desviación convencional (SD) en cada grupo de administraci en el día 22, día 25 y día 28 después de la admi nsitrac ion de an tígeno primaria. Inc idental ente , cada grupo consistió de 8 rat nes y se usó el método de dos colas de Steel =s para análisis es tadístico.

Marca 0: Ninguna anormalidad Marca 1: Ligera parálisis de pata trasera con debilidad de cola Marca 2: Parálisis moderada en pata trasera con debilidad de co Marca 3: Parálisis total de pata trasera Marca 4: Parálisis ligera de pata delantera con parálisis total de pierta trasera Marca 5: Parálisis total de todas las patas Marca 6: Muerta de parálisis Los resultados se muestran en el Cuadro 3.

Cuadro 3 Principio de Efecto supresor de Peptida (I) de esta invención s bre ratones modelo EAE (marca promedio + SD) Día 22 Día 25 Día 28 ug/cuerpo 0.3 + 0.4 0.1 + 0.2 0.0 + 0 5 ug/cuerpo 0.4 + 0.7 1.0 + 1.1 0.7 + 0 1 ug/cuerpo 1.6 + 1.8 0.9 + 1.1 1.8 + 1 salina fisiológica 3.6 + 2.5 4.2 + 2.6 4.2 + 2 Se ha reconocido que el principio de EAE se suprimió mediante l administración de Peptida (I) sintética de la presente invenció Particularmente en el grupo administrado con 5 7g/cuerpo, el pr cipio se suprimió en el día 25 y día 28 con una diferencia signi ficativa de 5% comparada con la salina fisiológica administrada al grupo. En el grupo administrado con 25 ug/cuerpo, el princi pio se suprimió desde el día 22 con una diferencia significativ del 5% comparada con el grupo de administración de salina fisiol gica Además, desde el día 25, el principio se suprimió con una diferente significativa de 1%. Se ha encontrado a partir del Ejemplo 4 que la peptid de la presente invención es efectiva para el tratamiento de esc rosis múltiple.

Ejemplo 5 Efecto supresor de Peptida (I) sobre modelo de edema de garra inducido por carrageenina en rata A salina fisiológica, se añadió A-carrageenina ("PICNIN-A", Zushi Chemical Co.) a la concentración final de 1% p/v, y se calentó en un baño de agua en ebullición para disolve completamente la 1 -carrageenina . La solución resultante luego s dejó reposar a temperatura ambiente. Antes del experimento, la solución se disolvió completamente calentando en un baño de agua en ebullición y se dejó reposar en un baño de agua durante apro madaßente 60¡C hasta administración. Inmediatamente después, 50 ul de Peptida (I) de la presente invención o salina fisiológica (grupo no administrado) se administraron subcutáneamente a la pa ta izquierda de ratas Splague-Dawley (macho, de 6 semanas de edad), 50 ul de la solución de carrageenina al 1% se administra ron en el mismo sitio. El volumen de la garra se midió usando pletismómetro (producto de BM Instrument Co.) cada hora durante 5 horas después de la administración de carrageenma. Inc?denta mente, cada grupo consistió de 10 ratas y se usó el método de do celas de Dunnet =s para análisis estadístico. Los resultados se ¡tran en el Cuadro 4.

Cßadro 4 EFeeto supresor de Peptida (I) de esta invención en edema (%) 1 hora 2 horas 5 horas ug/sitio 2.3 3.9 4.8 ?fag/sitio 30.2 37.3 27.5 Se ha reconocido que el principio de edema una hora de P&s de la administración de carragenina tendió a suprimirse por la administración de Peptida (I) de la presente invención. En e orapo administrado con 10 ug/sitio, el principio de edema se su ?mid dos horas en y después de la administración de carrageeni con una diferencia significativa de 5% y la tendencia a supri tór el principio de edema se observó cinco horas después de la a ßßistrración de carrageenina. De lo anterior, se ha encontrado K la peptida de la presente invención tiene acción antiinfla a Saria. además, los presentes inventores condujeron el siguiente ßpßrímento a fin de encontra peptidas efectivas de bajo peso o Ißalar. ?jo lo 6 Síntesis de Peptidas. Las Peptidas (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), J0KH) , (XIV) y (XV) se sintetizaron y purificaron de una manera sitiar utilizando el sintetizador de peptida ("Modelo 430A", ABI Co.). Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VII) Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VIII) Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly (IX) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly (X) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly (XI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala (XII) Ala-Lys-Ala-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (XIII) Ala-Lys-Leu-Thr-Ala-Gly-Lys-Gly (XIV) Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (XV) Se realizó la detección de la pureza de las peptidas asi sinteti zadas. La pureza de cada peptida así sintetizada se detectó d una manera similar al Ejemplo 1. La Figura 7 es una gráfica del cromatograma de Peptida (VII). La Peptida (VII) así sintetizada tuvo una pureza de 97.9%. La Figura 8 es una gráfica del cromatograma de Peptida (VIII). La Peptida (VIII) así sintetizada tuvo una pureza de - 98.1%. La Figura 9 es una gráfica del cromatograma de Peptida (IX). La Peptida (IX) así sintetizada tuvo una pureza de 97.5%. La Figura 10 es una gráfica del cromatograma de Peptid (X). la Peptida (X) así sintetizada tuvo una pureza de 98.2%. La Figura 11 es una gráfica del cromatograma de Peptid (XI). La Peptida (XI) así sintetizada tuvo una pureza de 97.6%. La Figura 12 es una gráfica del cromatograma de Pepti (XII). La Peptida (XII) así sintetizada tuvo una pureza de 97. La Figura 13 es una gráfica del cromatograma de Peptid (XIII). La Peptida (XIII) así sintetizada tuvo una pureza de 98.2%. La Figura 14 es una gráfica del cromatograma de Peptid (XIV). La Peptida (XIV) así sintetizada tuvo una pureza de 98.6 La Figura 15 es una gráfica del cromatograma de Peptid (XV). La Peptida (XV) así sintetizada tuvo una pureza del 100%.

Ejemplo 7. Medición del efecto supresor de Peptidas (I), (VII) (XV) sobre producción de anticuerpo anti-KLH en ratones. De una manera similar al Ejemplo 3, se estudiaron los efectos supresores de Peptidas (I), (VII) a (XV) sobre la produc ción de anticuerpo anti-KLH en ratones. Los resultados se mues tran en el Cuadro 5.

Cuadro 5 Tratado con Título anticuerpo anti-KLH (unidad + SD) Peptida (1) 39.5 + 16.1 Peptida (VII) . 25.9 + 15.4 Peptida (VIII) 44.9 + 18.1 Peptida (IX) 33.9 + 13.7 Peptida(X) 26.5 + 22.0 Tratado con Título anticuerpo anti-KLH (unidad + SE Peptida (XI) 19.9 + 15.9 Peptida (XII) 49.5 + 40.1 Peptida (XIII) 68.9 + 25.1 Peptida (XIV) 59.9 + 32.8 Peptida (XV) 86.4 + 27.8 Salina fisiológica (grupo no administrado) 115.7 + 61.3 Comparado con el grupo no administrado, y el grupo ad nistrado con Peptida (I), la producción de anticuerpo se suprim significativamente en los ratones a los que se administró Pepti (VII), (IX), (X) o (XI). La producción de anticuerpo, por otra parte, no se suprimió en los ratones a los que se administró Pe tida (VIII), (XII), (XIII), XIV) o (XV), comparada con el grupo administrado con Peptida (I). Incidenta lmente , cada grupo cons tió de 8 ratones . De los resultados anteriores, se ha encontrado que la peptida mínima que permite la supresión de la producción de ant cuerpo está compuesta de 8 residuos de aminoácido como se indic por la Secuencia ID No. 2 del Listado de Secuencia.

Ejemplo 8. Efecto supresor de Peptidas (I), (VII) a (XIV) sobr la producción de anticuerpo anti-OVA en ratones; e identificac de la unidad mínima de peptida y aminoácido esencial que exhibe estos efectos.

De una manera similar al Ejemplo 2, se midieron los efectos supresores de Peptidas (I), (VII) a (XIV) sobre la prod ción de anticuerpo anti-OVA en ratones. Los resultados se mues tran enel Cuadro 6.

Cuadro 6 Tratado con Título de anticuerpo anti-OVA Peptida (I) 23.8 + 12.4 Peptida (VII) 20.9 + 21.4 Peptida (VIII) 65.3 + 34.7 Peptida (IX) 10.4 + 6.3 Peptida (X) 49.8 + 28.4 Peptida (XI) 15.3 + 14.3 Peptida (XII) 50.9 + 26.7 Peptida (XIII) 193.5 + 155.9 Peptida (XIV) 90.9 + 89.5 Salina fisiológica (grupo no administrado) 151.0 + 25.3 La producción de anticuerpo de los ratones a los que se había administrado Peptida (VII), (IX) u (XI) se suprimió si nificativamente comparada con el grupo no administrado y el gru administrado con Peptida (I). La producción de anticuerpos de los ratones a los que se administró Peptida (XIII) o (XIV) por otra parte, no se suprimió comparada con el grupo administrado con Peptida (I). Incidenta lmente , cada grupo consistió de 8 ra nes. De los Ejemplos 7 y 8, se ha encontrado que una pepti da que tiene efectos supresores sobre producción de anticuerpo específico de antígeno se requiere que tenga Ala, Leu y Phe en las posiciones primera, tercera y quinta de su secuencia de ami ácido, respectivamente, para la supresión de producción de anti cuerpos .

Claims (14)

REIVINDICACIONES:

1.- Una peptida que tiene la siguiente secuencia de aminoácido : Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n (en donde Xaa1 y Xaa4 cada uno representa independientemente un residuo de aminoácido que puede tener una cadena lateral de alq lo o heteroalqui lo que puede ser substituida por un grupo hidro amino o guanidilo; Xaa2 y Xaa6 cada uno representa independientemente un residuo d aminoácido que puede tener una cadena lateral de alquilo o hete alquilo que puede estar substituida por un grupo hidroxilo; Xaa3 y Xaa5 cada uno representa independientemente un residuo d aminoácido que puede tener una cadena lateral hidrofóbica; y n representa 1 ó 0, con la condición de que el caso en donde Xaa2 representa glicina se excluya), o un derivado de la misma. 2.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con la rei vidnicación 1, en donde n representa 1 ó 0; Xaa1 y Xaa4 representan cada uno independientemente cualquiera de Lys, Arg, His y Ala; Xaa2 y Xaa6 cada uno representa independientemente Th o Ala Xaa3 y Xaa5 cada uno representa independientemente Gl o Ala .

»Sf"

3.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con la reivindicación 1 ó 2, que tiene una secuencia de aminoác do seleccionada a partir del grupo que consiste de las siguient secuencias de aminoácido: Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly, Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly y Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala.

4.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la secue cia de aminoácido está parcial o totlamente en la forma D.

5.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con cualquiera de las rei v idnicacioens 1 a 4, en donde el grupo amino en la terminal N- se ha substituido con un grupo protecto

6.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con la rei vidnicación 5, en donde el grupo protector del grupo amino en la terminal N- es un grupo acetilo o t-butoxicarboni lo

7.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con cualquiera de las rei v i ndi cae ioens 1 a 6, en donde el grupo carboxilo en la terminal C- es un derivado carboxi.

8.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con la reivindicación 7, en donde el derivado carboxi en la ter nal C- es un grupo amida.

9.- Una peptida o derivados de la misma de conformid con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que es una peptid seleccionada a partir del grupo que consiste en peptida represe tada por las siguientes fórmulas (I) a (XII): Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (I) DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-GlyDLys-Gly-DThr (II ) Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (III) tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr (I ) Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr (V) Ac-DAla-DLys-Dleu-DThr-DPhe-GlyDLys-Gly-DThr-NH2 (VI) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly (VII) Ala-Ala-Leu-Thr-Pfie-Gly-Lys-Gly (VIII) Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly (IX) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly (X) Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly (XI) Ala-Lys-Leu-thr-Phe-Gly-Lys-Ala (XII) (en donde D representa una forma D, Ac representa un grupo acet lo y trBoc representa un grupo t-butox icarboni 1 ) , o un derivado de la misma.

10.- Una composición farmacéutica que comprende una más de una de las peptidas o derivados de la misma como se rei vindican en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

11.- Una composición farmacéutica para el tratamient de enfermedades autoinmunes, que comprende una o más de una de peptida o derivados de la misma como se reivindican en cualquie de las reivindicaciones 1 a 10.

12.- Una composición farmacéutica para el tratamient de enfermedaes autoinmunes de conformidad con la reivindicación 11, que se utilia para el tratamiento de una o más de una enfer dades autoinmunes seleccionadas a partir del grupo que consiste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide crónica, lupus erite atoso sistémico, síndrome de SjUgren, enfermedad de Basedow, e fermedad de Hashimoto y anemia hemolítica autoinmune.

13.- Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10 u 11, que es para la prevención y tratamien to del episodio de rechazo inherente al trasplante de órgano.

14.- Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, que es para el tratamiento de inflamación.