MXPA97004792A

MXPA97004792A - Gen de proteasa de cuerpo de inclusion nuclear adel virus de la mancha de anillo de la papaya

Info

Publication number: MXPA97004792A
Application number: MXPA/A/1997/004792A
Authority: MX
Inventors: L Boeshore Maury; Russell Mcmaster J; M Tricoli David; Gonsalves Dennis; J Carney Kim; F Reynolds John; L Slighton Jerry
Original assignee: Asgrow Seed Company; L Boeshore Maury; J Carney Kim; Cornell Research Foundation Inc; Gonsalves Dennis; Russell Mcmaster J; F Reynolds John; L Slighton Jerry; M Tricoli David
Priority date: 1995-12-30
Filing date: 1997-06-25
Publication date: 1998-11-09

Abstract

Se proporcionan genes de proteasa de cuerpo de inclusión A. (NIa) de las cepas FLA83 tipo W y USA tipo P (atenuada HA) del virus de la mancha de anillo de la papaya.

Description

GEN DE PPOTFASA DE CUERPO DE INCLUSI N NUCÍ FAR A DEL VIRUS DE LA MANCHA DE A II LO DF LA PAPAYA CAMPO DE LA INVENCIÓN F . i -t l i l V' I 11 I' I ¡J t i -i ^ 1 ' -» f J. i-11 >•* H I i 11 'J > í • l • i "-' ; i I > l i l " l > ' ' ' J ' í í 1 '.' 1 I J i I ' I c-11 vi tus. ile i f i >: amant , la ¡ >-- 'í » g?-f ?¿ i ua >. p3ard;a-? y a <>u t do p=>ra pt opon: t ipi' re?íj i = l rn. t -< > opíra vii'Uá a ?n-t latica > ,-,-' i » ]> J >it? a J i ii^n >Jr, ?t? ni h? >-r± a f O 3 ] >" > f- ' 3 'i O -i ! ) -í PRV Ft O". W '-> l?- ? r 3 >•' -i -"?-? du ! i µ FRV I !SA F ) ffnu?¡.? HA *. „ M>?> h -, i ? 3 i. i ' ;, iiiirini' l - ?-¡ -?--, ,_!(;; f-, } I i.!)!"-"1--! ¡ i 11 f "-->"->: i Ó por < j. i i i .,,- , ?i>.-j latd.aíi, H-.-JIÍ-1!. i a 3 ?f'i d » • -.- i í ^i, r|p. 3a iintu-lta dtj dfo l li» >j -J p^ '-iy-a CJIJI-1 1 "i " l ?' l-»l OilÓlttl '. < ) ¡l-4 t'H '-1 l' lll ) I v jdlll'; O j lll. I '.•"-fi'-'t ti" -i 1 l> ¡1 > "II l"-Or>l, O ¡ l ? L CH ?-'i uto üo¡' . i.or rol -i i >.» H l tít | )? f?->|-| l ?l, h-1 i * 1 i -3. i" iJ-ii-H lt I |IÜ1 ni) ..' i ( . i -, ,j>--> µl ppt'i i" > >i|| p r i-1 j >^HH i 3 i » i-1 ' ii u -. i j>~' 3 -, r?i« i i i ) -i i lf-> -! ! i i 3 ! 11 i- 3 ,t p-¡ ¡ >,? ,, , TÍO -i f ti ?~'l!|?'>a ' i i. I l — p -> ?, óiji-'f lOn V ¡ I H I --"=1 -> )lj???-jti i i i H -. i J I I I \ t->l I JO ¡ll! p i'i >! > 3 ?jtna i i ijtt i f i i" -i i J >/? / i-m 3 i -tij i i i i i 3 !. ¡ i 1 -? , | l ?— I I l~ I i í f j 1 I >-— ! ) -, f \ , !?-~ — -< i' i' I 1 -^ ) }>_} i'f-ii l µ?ll µ|»µ, |l H ll I -|[)>}-' I > ! V> l-? fHI'i i i i - ii f i' p 3 A d > -» -> a 3 • i -% -J f ¡ 11 -, i i ,a i idi.i ),¿? fl I ? -, i (i-^ i t i.ji-'t i 1 i-11 í 1 ?_?i-( >> l >' -i « Ta l i- > f i li ti n-- ?--í? i i i O',. -» b r>, > > ¡t_n- • ¡--O iitaí.i-, I H ! ijtín¿ I I O ¡i' uiioi' uift-i 3 :? pr?)l,p?.r j en -. -1 j fu.orpot'a ^n i-d yi-?oru df-> 3 a p] 3nt=» ?t?} ->ma \ üi.i??Je |}--t ?ar-jií 3 a" >-* r - l5 nl --' i i r '"> ien ret sriJ 3 a nt'-i 11 i p 3 1 -". i ''•• di-1 u? I .' > t • > -• , o i ' i J? , •- .-- -. , 3 3 j > 5 -í nti'una => pa 1 og¿>n J i o-.-. P r " rt-»*, i » I i'iil.e" *^ enl i tüTidn1 3 o ?J?.->¿io " ,?.? ,? *t»µ t i lj 11-» " , y m-idí-1 i ? t t i'aß «n; f l ) 13 t Í , (?) fin.nl w i ai la , u bJ í^rt <"*. > taa j3 rn -i^l fiiti a , sfc>y?'?ft =.? i ,.a f e,_- j, j , i IJ?I-J , F ßeni" J a 3 t»t??t i !• j ,,r\-* pl -ird -a t ^ -, i -, 3. e¡ rd; * t?uej-¿ I, i 9 ?.¡fi-? ?=;! µi'i-' i ?n i ?»?kn i da ?i lii -^p au-ioni i -i »-| »-- -,i f ?t?M ;; y l c? 10 iií 111 ? » 3 j i -,, ? .f? 'v j al di-ni i o *3 dj i a pl -t?d a ^f-» t > ,,r^ ,-, |> i un i-1-! I":, lijl'll í U J||¡, . i t'iii nl-Jii' i -' i"!»-1 li )- -ai-i' ?'l- i t .l,H||l,|J a : f 1 J U1, fcJ.-d ,. i i 3 ?J? lUfl||?->?ll. i- 1 -< ( i ? ?f ?, '• ". ' i-13 í»? 1 v' 1 i l i et? t o 1 "5 v n -tl . i ? ? - prtl ] j ? ?i -, ß?>?? iift I pfhj d J -_d. i f d ? di- V I l'iiá ?|?-? l rd ^i p -t i,? >J/JI"! t '.i > > -* •" s I- i jn ?n-¡ i. p3 ífl n di--* f itt i 3 f A -5 H I Ctif-p |l >.?-, ¡ i > , '>.' | | 'i i T}("i i-1 APN d-— I n-'l) t" -< i'ifij i. í i'i idi-'á 1.I0 ¡jm' ni| ?>» nt?itu-'l d-^1 ¡"M C* i ^ J f I .i [ ?,i? 1 µ^ i. I L f ' O 1 )i ' ir ~, ? 1 l.i|!? ll. i-1 ) > íO p Í O ?*>"J í 1 -« i J i-4 r I-1 *,' ,-^ - í I l?l 1 H1 ¡1 i, o (Tf1 ) , I 1 ni a _. 1 ?? í i 1 li 311 . p? d i -. 1 1 11 , -,? \\ 1 I • -. n -,? ? j I" t ?" => l a' m-~> i iff =? l l i pt-? f •> 1 -d fcJi 1 ! 1-1 i"jl 3 ii— -1 f 1 di" -> . Olliln"! -,.— lj— -— t ' ? a a t t l tÉ-l -llipl ( I I ¡,;¡ '"J' I d---.-1 I l l-|Hl-llR -. f I-?!" t 3 dd =1 H| ]l| , fioti ^i lu^j ?-j3 (--¡.ny rí ¡ léspe fTi ifn/lu i-'1 f stn í 3 ri d i '.<*>i'~,3 i, de plantas como por ejemplo Bol a n:t?- , Chertopodiaceae, Grammeae, Compo i ta , l gumi nos , Dio=nrroea ea , CUG.IÍGI) I taceae , y Ca r i caceae . I pot i v i rusesi nc 1 oyen v i -us I d.-sl mi i-a < > i i i de 3 ! . i i id ( ! ;IJM'.'T T ) ,_ i ?-? i ; de IIH I H O am ro lio de la r l aba r ita f/YMV) , u?n?<s Y de la papa , VI GUÜ del aur-i-.ado del tabaco y muchos otros. Ot vo !.?v?ru de impor lanc i a g rtó j e a e=, el •/-i m- de Ja mancha de anillo de la papaya (PR' ) . Dos grupos de PRV han sido oJent i f j cados ; fr t po "P" n bien m ha de anillo d la papay-»" infei l,a -t l s p<-¡?-<y -.,-.> y el í" i ? i "Ul" r ^ i n 11 ? i en de ] A plaln' "?»n ' er el on" o ,f-? IJIII-. infpi ls 3 -» -•> 1.1 i?_ 111 I t t Ai" 1-13 s 3 por e j mp 3 o , >~ a 1 aba 3 , peri) no f >j iikiJt— iiifµ.. ! -) 1 3a pa a, Poi 1. on "1 tyi ? i en , e ilos de-. Ol iipi) 1 n?n-»r|?-.. l I I tyi ¡ } ¡' -,e pijf ?j 1 í^l tíili i =? S e r uyí"' de 1 *Ti I ti (**> ->peder> . L?i;? pi d i v'il "! Oí is i =- I- n e -I r t { i 111 -t f 11 iOiet d,n-.a -. „ f lt-i il?1?-'-3 de d i tin-'ti 3 ] oftes de tµm i triad amen te 78<"> , i*"1 -™ i ?ó????-> 1.1 Or.. I .< a p -i i I. í • ni -* => v t t ? 3 =, i oíd IUGI H nn y?~ io?rt3 de R de ¡n?l ?| iliil po i I I i vi de bebí t i'in ii a ijfie ?"?? d, I ell ?¡". ipi'i» t m-f d ?Pfj ?!e l.i-, prd lV I I'Hi tiii-'-ti fi?_- e 3 APN ?"fi I t f 11 'i. ?i?i-1 pul ?¡>! iili- íii la rcia i'u • i • i de IJM O i iit-id-fiti t e ~t,~r,C | D. F"-d -i pol i < > >'? •' •' -i c nl ti-'iii' v i - ¡.IGUIH Í IH ,¡ iiµ l 3 - e i eve-d iii fíi ci, l'i-í pi /l ína - de j ni ln-i i ?«i? 3-t'í N J -t -,.

NTb, pr i d,e{ na de i rn lii.ii?n >. i Ui l^?mi .a ÍCT ) . y of ra proteasa-. y prote i na :-:• de aiü imifiito <vet f igin-a 1 ) . F^i-^ proteínas se encuentr'an en la élula de la pl nt a infec tada y forman 1 o% otitponen te-, pí e—n'io? pi ra la i'epl ic a. j óti v 1 ra 1 « de l -i p I i » e f I t-a - ' » i n i d a n en 1 a u i ]|ir? Hi ( i-- , un:-» i. <'? ?.(l e 35 \.T> o b • en p» ote ( de reves3 ifniefit ue cnbre y protege el ARN vi rd contr a la degrídaí i on. Una de li, pro í de int Uni ón nucl r', N7b, ?i un r, i e t & [ epl i !_ -?3 de ARN y -=e pif-ii i uue fn» un jct i vidad pol } itiei'á .-.« . i l i-'e une ' •; ???"?:? seynri l? i l' jna di-» 1 f ti l??-, ? ?n, pa id j.1 i pa en ?-3 r i mifi 3 e _?? i repl ir -,=,=< y 1 i e e Uft l HI t? f d«>l bel ir ,? sa ,. N T i , m>? I >= ce> -. p l µf iH >le i n> lusi ón, 1 1 ef ?e . i i t - ? f 1 I > I a d p i i d e-, sa - Fi i 3 ?_ i.U ---.,' i de 3 ll f i i ó f i ?" 011 ii! j. ' s i =? , I -i _- Nlb s • _> r "i lt , = l ac lona iriente i m i i"a -?s ! l a 'é--. .Je 3a meifi r' fi HUL I--.- ¡ & rt e3 nú IHÚ de 3 a •_ t- - 11 > 1 -< de l añía j itf i" tada en 3 a -> -j- O ' ^I i re™. i;1 3 a i tiffi >~ J óu •, -se a?:u?i?n3 ati n ni el -íj al tus- I a u i i ," 1 i-'iii del n ti e la p? id r- a s -1 pdt'ei. e i ?t"tr>?-'t ., -i ? = en e-t -i -. H iJn , Fl i el 1 l'n -. i' í -i u ?_ -i ' i j del t J i ) -I i ' i , el 31 I ii.i i |e íil ^Hi l 3? I r. f? e l n pt'ilí >'r -.b J -i I do de t e | tu 1 (1 -1 i |?.? , i nlifi ?~> ] ?.3 ¡ péri l ) no Gln OPI , Gl n-Rl , >• ! j n ^ n— Ala . ! a i í i -,j ?> i -, i t ' el i d V 1 i » i . ( ; - i e ¡ , i ?~ pa l'b r Je 1 a - • , e i ?_ ( ?«» n i - lie i - ml, 1 -. L i 1' -j 3 } d -lií' i -. -< t ! i )_!.-< ,.

L H|, ;-H-? I o e I I I y ne- ?!e n i/ípj iy de f e e-. I iiiii -¡ par l i t del i ro-, del niioa i o del t ? ¡?rr?, - J Í S del .nosa ic -» de la al fal fa , j.ru-.. del mosaico del pep j no, y v i fi ?s X de la papa, entre otros, en planta* t ransg mca , r ud ó en plantas ren i ^t erd e- a la ?nfe> ?" ion por el i ru re->per 11 vo. F a t a t ,j 1 , , 4, 139 M993) y Wilsou, Pro: . Nati . Arad. . i, U , 90, 3134 ¿1993) . En el caso del 'tms de la manch i de aro lio de la papaya, L i ng el, <* 1. ¿BJ o Te hnol gy , 9, 7^2 H 1 ) ) encontr ron el g n de 3a i i ju-f de r s' ? mu r o (rp) e PRV a i - 3 =tdo I n ¡- 1 i i de 1 << i. e * HA ""i- 1 .' -.K?VI-1 * de PF?V tfio ? 1 f :-- -i <m de ,a r r i d 3 11 i d.Oflií» t 1 i O i el -. rdadi.i y at?l?>?a? r on de l?j~. -.ii iMti s ' U-'m oé-, de 'iifm i ion pot f??i?m-r O-? ". i. I VI MÜ, •TtUO e i t u .-. -u? el i -iba i ÍTG , -. ^ ¡FVV' , 3SJ i i ti" i - i r n . del illii 'dfli' de 3 -t iiHj?iibi ÍPt-M ) - R i ft e?¡! i -f t'iji i l PRV u i fifpi I a e 1 '" a b 3 •_ e r P r '.i MI-I ! y'i i n e , plat s t bi L rau-í y-c o • is de proteíua de , .-es? » ro ent ?i de P_PV t?? i pni-'deft emp 1 rse p 11 -a i-i.'dina.' l a µ? ?!e?„r li'm i ?i? d a PRVr Fi l? h et l r ÍF.i??/Te? ouoloby 10, 14¿,ó d^?"' ) , Don-, - ,-e-. íñíno ii -ot J. f Dol . , 79, P, Í199?} ) , . Luis e t 3. í 91 r,l, Anim l Mee t i >> >>f h Ame» 0-311 ur jel, fot ' 11111 r a 1 i en e H? 483 > i '-' íj. ) ,' << . T ^ 1 fin ni -i f? I 1 e ¡ '( | i 1 s 1 I-"' 1 ?-i i ilpsO i 1 i? -3 ti plt'a nn jen d rol eína de r>??.',l, HIII HUI ,J >|i' FRV t ad di-1 fifia e a HA 3~ 1 ' íl".' v1?' p 1 F UU a P 3 OS yrado's i? r e=> i. -11 ?-. i ? =¡ 1 nid f 33 irifpr oóft por PRV, y un-* línea (553-1 ) pareció totalmente resi stente l ontra PPV. Esto parece ser la ?nica línea de papaya ue muestra una resist ncia com leta cont ra ¡? infección por PPV. ún ?._uaud? i.j i e -i i -i ui.j J t i a l nníd i ld-1 pot 1 -f p? ?d.et ?ta de r vestimien ha >" oniprubado se f'itil en , t'id:. s J iuar i es , no pttede ^ r iempre el modo má-, efectiv.i ,j deseable para pi'oporc" íona r resi stenc ia vi ral . Frt ilyurnis c isos, 5 t'i.? provechoso tenei otros par--? ni oporr i oiia r a las 3 -i I d i r, i *?---, i i e¡ |i j a r ord" \'3 3?"C-? V I ('O r> , L "-> i', pl ?'-ii ó?? del y n de p? d ea »a íNTa ) a parl j i del viro-, del m le do de vena de tab-3?_ ? ÍTVMV) y i m =, Y de l a p -tp 3 (PVY) n rjl ant-.iS 11 _? •_ 3 >_?»-- e ple r i lifijli'iii l' -j de y e n d ¡n ?i| i -5a p-t i ? miii i i p 1 ^ 111 -I -a ! t -¡ i isyén i c-.? -s p ,"? ) I ey i d=. , ronti'-' i f » f e?_ ,- i ó (1 p?>t pt d j v i pi , f -t i ? i el rf -) , ^ J, r 3 . Fito, heo.. , F,npp3. -,F , ? 1 "7 2'.5 •o l''.i l a l r- C> U Na 13 ad. 90, 711 .' 1 T ) ; ría 3 ! 3 et -ti -. , P r o... Na 11 , Af a d , ¡ I, . 9<:. , 1 r í1°93) > . Ma i t" i el al - M993) iflOSt I a ron ij.iH 3-3 e;,p? e -.lóf? >h^l g n e Nía de TVf V n pl-?fil i:-, de tab'fi. ?i . ? 1 -,' J d n-d 3 =. pl n as h 3 I am n r -,? i eul f, contra l eto poi TVtl , Arf?-?i?As. 11, ¡ t, i ,-d, a 3 "ti ?-= t i" a i ou une l gen N J -i e' p re i -t do ^u e ; ' ¡ -i oí nla-. e¡ a p ( I J I.CIIIH'HI'I' 1 5, J --i.;, ii'il i l -J 3 - I i "- 11 , f OÍ iii-.. fifi lañí -, •"je ! a h -> • O i. i" i i n -s I i i i?. I =? de N T -t i l P VY r | a p i i <? ?en i e R 1 .-! p : i t i F i-le 111 i-. ] i i ? a -, ilut'l '.'tü-'r de e I -í u 1 •! 11 i a >. -' i ir- f i >> uá da fue i e-,t t ut =) i l n i. on vj rus.

E;,js e la nei.e-.idad • on inua de 3a t ransgém •: a de genes derivados de potivjrus a niveles que proporcion n re—i eii ¿ cont ra infec ión por1 estos virus. C?MPFNDTD DF I A TNV?NCT?U Esta nvern ion propori. i ona una molfV-u.-i de ADN aislada y pui á ficada qu cod i fica la proteasa para la c p de tipo de FLAB3 del irus de la am-. ha de ani l lo de la papaya i PRV) o bien la p?otea-,a p ra 1-f c p de tipo PRV l ¡5A P int rin da HA) -. F-,l a luvetic ión p. opot í ?ona t ambién ¡n\-< on 3 A" i > 3 -t I; ADN at-,lad-< y pur> fn."=? a ue codi f u d 1 ^ pí o te asa y loi -j ytrien oá i.1 gen de f lam o ^r^ la ?-«— j » •=> *- I i pi.i Fl F¡ W i* 3 Jim, de 3a ??i3(U 11 -j de a n r 3311 e 3a pap., a ÍFRV1 o bien lo-, -,eq>??e? on de g?-n f 1 aiit.n 3 a pro en na e 3 i epa 'it* i ipo PRV I I5A P f i ermai ia HA ' , l - inven, i ón ?ro?o,? ?ona amb én un r-f.-iS l te de e' pi sióft ,.,U 1 tFlt>r i ,. a que i om rende i 3 tlieui)-, I.IIH de ?tj-, 1113 a de AD uti otor u e funi. ?ona n lul -, de lañí a p -t ra provoi -, r la nulnc ión de una tt(i?3é?-ula de ARfl * -< 1 mello» '.i na :? ñ 3 de ijiil i i.den I 3 i ó? i que i.i >m ? n e el ADN uo r i si -a da do 3' rp.ie í"fi?-?u ?a n i. é ] i > ] :? -., í plan! -t pa r^- pi • ?-'i ><---< r la l.ermirtai tófi de 1.* i . -.¡,-., i ¿ i i ón j 3a adici n de l>,t, , • b. inu e !, i do-, pol i IÜHIH üiir .1 i-., t r iiii i ~r,' de la :,e?_(ifi"i? 1--. » 11 — wiR m I. t -nlSi I' I I < - -j ?'n.?i|iji-* el [j i i)i??? _?)? -,o enla.:-! de u¡.,ue? * n or ih i-i.iii 3a mole ni- ..le ?DN « 3 ,? ?llf)l I^I. n 13 de AD — mil ,. ,- i i ]?-- iliaiief /j >.jper-bl-r i.iin ln -.eñ a 3 de pol ladero 1 ion, Olr-i modal idad de la if. ni j ón ...i-. e jemp 1 i f 11. =t mediante la ins rc i n de ass e de e¡,pr-esión de yen de vii us in?l iples en una mol¿»? ul i de ADN pur i f icada, por ejemplo, un p A-smido. De preferein ?a . es3 os c a-,set te ., i I IV. 1 ?.? j t i >-; i i i i i .n . ) I i j I i l? « 3 y O? i "lO'-'. l '<- , ,~- ,_, - ?j -- lo S .< o • i ~i> ' 3 l col i flor y la señal de pol j adeni 1 ac i ón del gen *5*3 del virus de ttn.s'.-? i co de la coli flor. c,e pr oporc lon-ui también células ba te i anas, y i. planta 1 r-a n 3 form d s u i. on ienen 1 •_ * ; • - tle ^ de expresi ón u imé ica e , iim reui -1 el yen e i tea b cle?'j de! .' | n¡- d l a ,HÍ, nc -t de añil lo de ^ a (, ?.»n ?. ?do -tqul i omo PRV Fl AR3 W) o ¡> ¡en e 1" '.. p- d ' i.lel yen 359- del - i rus del mosa ico de la rol i flor. 3e f-iipoi ?_ l n^n t3tltb ? n p 33 rd -< _% , ep donde 1 -t s plantar. • o iprendeu um lur alidad e ?.?i3nl,? = nsfor da ., > o-t un a s t de , rn'o- i fi ue i.ont i ene l yen e pi ¡ilf ¡:>; d i ' ide de 1 i r a PPV Fi AR3 W o íii n ie i ,.< t' a de ipil I.IR P f a I enu-tdo l-! ) de PRV, _-- de ef renc ia el r i ifu i i 5" cl?-1 v t rr.is de un "--? i? ii di-- 1 -< I-DI i flos y 3 a -,e~, a ' • Je p, j 3 j n lien ? 1 -i f i i,, i i li-* 1 g n d v i r u -, d H(0 íi a i ?_ i de ] -j i" O 11 ' 3 O i , P 1 -. i - i n . I, 1 a U -i f ot'tlt-1 a -< de -.II i i ' i >, ? ?? i 11 i pr iiu µfi t-i! i ai i i , .>!- ( :„ P,JP ' ' l? t , u luí i en I ? , ¡i-tp-n-!, .oy ¡ , a 1 ab a ,' i y i i !. r?m-? I-e - 3e ? e f i ofi e-,?e? j a I ent i bro '-le 3a fai.ol i a de las pif u¡li' tc'n ea ., (por ejemplo c a ] ab-i .. - y pepino) .

Ot o as ei. lo de la presente invención es un nit odo para preparar unn planta resistente a PPV, como por ejemplo un dicot iledón, que comprendes ransf rmar células de planta > i lil i 11 > i i -, 11 d I i ' i 11" ' J i 1 i- , 1 > > i i >p i i iir-'- i 1 l lo i >?t?>p .'ni)" i 11 i promot or func ional en i.élulas de planta enl jadas de ane a operable, con una moléru 3 A de ADN que codi f ica una. p? o n a de conformidad con ln a m iba ?l*"-t rd n; r eyenera r la s lula.; de pl aid -i pa ra propori Í UIM I una planta di f ereuc ?ada ¡j e i derd, i f i a r una pl-anl s h' ifnfunii ua que e¡ rrre-..a la r iti-.a -,<, de PG,'<K n un lo ^el -.u f o n-*nte ?a ? a que 3a pl . ptf se \u l a i ^ 5 | _, l fj|i ¡,o rontr'a i fifef i i n ni G ÜI I pfii ce as e-_,?e? 1 f i r -t => de PRV pr s ntad ar|i?í . Comii -,1-. líiiip 3 ea ,, quí , i ou r eí -,> ? ?t •< una mo]?--?. n] 3 ,\>> D o b 1 efi "yi- i" , 3 -J e: |Vn 1 ófi '' -i ! :r>3 -<?.!? 1 y pUi 1 f ] ? -¡?'!u" ni-' de i e r,,i';? -, 111 ro ' i i -i V u l a filo 1 -"í" u 3 - ya S a ->-£} e ,-. i r ae de -,? i i oni o' Lo e el iiom i ra l pot ilied l OS qi.f í m 1 ?.? ) S y - e µnf i f I I. -_. \ ''fi mod 1 f ir a n 1 -,. p i en que pnedt' i ritrOi.inC i i se en 3oa I?G i ores ureaente-. en 1 -t er ientat. i ón -tur-o iada , -i def i i , s f J i i o bien atd i s- nl o.lo. Como if emplea iquj , el t-?í>rni? r?o "IJH iiiiírii o" ->e ref ¡. i e al nlace i- -. ?l a j m-^-, itli.i 1 ?_-->?: i i 1 i-, de ADN r i d -i -s de Ci n - dt f i en 11-' a ,, ?"?"-? -if d i f e i ?-?r? i i- -, o ie e , t . i e-, 11 i T , e? d f por e _< emp lo • 11 — . iij t-" i a -.i - p 3 a i '- -i ) i) ien ^ 1 i-nla. e de ?j?>, o ?u '*. ~ tlifi 3 é?_t> 3 < ? de APN j I]IIH -,e di-'i • >-' -< 11 de 3 'i -> uo -.uta S e peí |e:, o u e ni-1 enlajan e una ner'a que o ? i.u i >-. n e3 yen na ivo.

Co o se emplea aquí, e3 termino "het r ó 3 ogo" e* define p ra -significar secuenria d nui.leótidos y/o aminore idos uo idéntico^, por ejemplo diferentes, genotipo o bien un , ? -, ?]? i ?p?]"p?i|i?ln'|?l i', í"? -ti|i ,e i ?n; .3 C-~ ~ p i í ,, --' ' i ^ i iio uo "e presión" se define pi r a s?gni fi» ar t> an-cripc ?¿p o bien transcri ci n seyuída poi traslación de una moiÍOtS i particular de ADN, Co o ~>e emplea aquí, l^ nuuo "seymeid os de g n de flanco" se ref iere ecuet „_-_ i , a de rnu.1 ?-'ó t ido 5' -¡I e , 1. remo N der i vado pn f ei.d { I o m fue de a •secuen ia de i. f )?.i i f 11, i. i?ft d T" y 3' al e i r emú C di- i i vauo oi l 11 i camente de j a ,e> UI- ti * a de > • J l f i i. 3? I qi ?e •ae I tlf lu en <, p i ¡ i , j ?.l a n I e 1 Oi'.O niji 1 I i a f I a u o. PRFVF DESCRIPCIÓN ?F I OS DIF. -?", G¡ IJUI'/Í 1 . Pe i i-us n t ai fi e- que íi l (i -• de 1 o r na Ti i i i <-, n yeriótl i -! de pot I -¡ i ru . roju a 2r i -i -,e? nefn" ? de nui leótldoS ? e3 oeit di-1 p r . d ?~.,¡ a,, i- 1 i-n pii A de i i n.1 u -.i i ón < ni 3 *• a t fUTa '. y -r- iH n -., de íi de f l au?-o de PRV F! A~3 Ul Í F TP f -¡H t 1 .. :,.¿nw. . i -¡ do ut i i iO-Ji 1 d>.)S de f u d i i > d 1 ei J? u í ¿ a b l ef I, a i < >d 1 f 11, a -- p 1 ¡ e?_ I-Í d ii jo en l a =,e? uenc ! -< o 1 t'ó I jd?S„ i^FR ID Ni") i" ' . t i s .Hi.n?i||?: u, ,']•' uuc eót i o , di- lo-, o] OjOtlu 1 i µ?l, ¡p,?, RM|"iT .'S- TD Nn; -. PMH355 íRFC 3 D NC - 4 '< n-, H„ -, . r . b -, de 1. -,e? neni J _•< de riiif lo i.drí , , ?~>n lo-, e '< i'eiyi - *" 3 t 1 -i =,?--? u iii 1 , de nui l t id -i, i - - i- i. I i '. ?r?e> ! H, { ^ -?. -?H???-?|?? i -i -, es eí If t) as par a irus en Rf1M35':l y RI1M355 von e l ? a a las secuencias en PRV HA (atenuado) USA P (Quemada et al., T. Gen. Vi rol., 71, 203 (1990)). Además, PIM334 tiene sitios de diso iación de endonucleasa de restric ión novedosos para F.i i RI y Ni OT ntli'iil i -i . RMM355 i, ? em~ - I I I O . ?! i.l i -,? i i -i j ,u de endonuc l a-a de re ine» ?órt novedosos para Pa HI y Ncol . Fiyura 3. !.a al ineac ión de las ßeruenc ias de nucleótidos del cuerpo de i nclusión nu l ai A (Nía) y de seymenios de yen de fl irteo provenientes de a i -, lado PRV: HA-P (Yeb et- a l , , T r Gen. Vi rol . , 73, 2331 (1792) ) (SFQ ID NH. 7) ? U P (Quemada O el l „ , T. Gen. Vi r l , , 73 , 2¡"Í d 99 (F.Fq TD NO. 8) ; FI A1??,.

I. a a 3 i neac i fie^ de env-nc. J a _, fueron yener-?d=ís in-?ii u el piroyrama Pi leup de IIWBRR. l o-, puntos r es n I a n o bi n 1 ,< l en 1 o =? e> I- pern s del yen d ? t 3 =>a O b • efl bu oor. en U fltoloy í -r n S i n n i en 3 rela i a ol t -i er. 1,, 1 > ?>e,. i ? f?. Fiijur -i 4. I -> l i n a- i on de l-i - ~??> H.ÍHI. J a a de m i no;i-~ i os -i a i I. j r e i l do de v i i u - e l mam ba de ani l l de l a papaya t t en 3 -t f oji.u 3 l.o-i s i i in-r. d u i :-.o?" i a >. i ón de t ni lu- t ón i i i indi ti a p? «¡j d?-l (Fl ) VP , VPy NJ,¡ . \ NIa /NIb ¡"' en a ri a d - am i n -"ir i dos a l ineado-, (Q R ) . i a-, al i ne c i one-, uer n e n -rad 3.» u_a~nid el p royram-t Fi 'n de I IWpFp , i o:, piunto-. i ep i ?--. en I a ¡ i O ien 1-, f - 3 1 a de i ?ifn| tlUCl ólt .lOi.iioni i -. n el o; I pemi 5 ' el y i -"> í l de t i o ! e S -i i.) i ) i e? > ni I I f .-, i-" n b? riiii ? oy í a n S i nefi i í en pe a ón n ti e e33 s n 3 a -i 3 ¡ neac ? n» Figura 5 „ La i ueue la de. nuc le?t i ció-, del gen de proteasa. del cuerpio A de in lusión nuclear (Nía) y segmentos de gen de flanco de la cepa de tipo PPV USA P (SFQ ID N0: ). L;? i i l.ietli. i -i o -i ? el i uadl o de leí I • U" -t u'f1! ' ' codificado ebajo de la secuencia de nueleótidos (SEO ID NOsA) . Las secuencias de núcle t i do-a de lo ol igonuí- l t j o RMM354 (SFO ID N0:3) y RHM355 (SFO ID ND:4) aparecen en loa e¡ 11 erao = 5' y 3' de la e?-ueno?a de mu.1 eót i >los , t s íe* t j e. Figur a . Una rept er.ef sc i órt esque At 11, a ele la e=,-l r*te ia de • I H?I" ion pi ra 3 o=> •. - - I. I. , de e;-.p?res?ón del yeu FI B3. Finco 7 r l!,?-¡ ?'epres fd-ac i ?ri e quema i i c a de la er nsl y a de i. Tona" l?ft pi r 3 o-3 i- ^ _ =,et- te ; de e:.?restóu d^l gen de t i o PPV USA P í l.enu-t.lo HA • . Fiyi.u a R. Un -i rep eser a>_ i óu esquemática la uñí r'legia de ?"3?.-?rii? i n p -t :? 3o¿ • üs.í e-, de e, pipes i ó del n de ' i pío PRV LISA F (a t nu d H " >_r f i un r fi ón e -nspen-i i ón i ^? cs i-'l i-?; t r iii 3' e la , i i'.iii'iii M , de cojí f if -ji ion, l o., iruc i .-idoi e-, . ,3 t , . ,, ._,, leót jdos RMM333 r¡p3~'.4 í .-'¿-< .o f luiif 1 5 par 3 -. sei nefir i i ríe 11¡ >, 3 fc- I l -? cíe ¿¡---ios lfi ir i.-idope -. ÍC.F ir -JF! - <5 '., 1 O ,( pe-, peí ; i airii Jf i I i-u * ) :,pJ uip ] ea i i MI par a -nnu"! I f . -i > 3 a-. -,e? nein i -,-" d>-. I-. d?-_ !. Ipo PRV ift ~ ( -i i ui IH da HA) - ¡ ?d-r odu?. i r nfi • odón de ,u a en -. i óu >-'u d,e ?íO i i te i i i si DFRFR1PCT0N DETAL L DA DF 1 A TUVENCinr, El vi ms de la mancha de anillo de la piapiaya (PRV) es un virus de planta de APN (+) de hebra única tra sl adada en una pol i pr-otei na única. Fl genoma di- APN vir l es de ap l O. 1 til .-) daiiii.-'u I i 1 , i OO b ,.-> ,,- -, de 1 i n i y i ? <j i „ I i i' .1 i -l lijij i- i je es presi ón ele lo-u pot i i rus i ncluye la traslac ión de una poliprotef na com leta a piar ir1 del APN genómiro vi ral de sentido p sit ivo, l a traslación del ?RN genómieo pt odui. e ???:? proteína de 330 D subsecuentemente di ,oc? ?d=i en ^1 irieno-, 7 pi ot í na s v i r a 3 - menor es por un t rul a ->a i. m 11 f j c achí v i i a Itii r 11 . I a n i' 'liii-i ?-o i f 11 d-t-? * i ra 3 en - inf lu en i.i, .a proteína de 55 I en el e:^ t rem efíiunal amiuo de l a ri pote (na e 550 P que --,e r peí-. -,e f~>m nenl t a in.'oliu a a -c'U l a l"rall ai?l I -a 1 ó? i de i ?lnl-i 3 r^lnl 3 , 3 a p , ,?.\ e ( r?,-¡ | -J C -i-., de 5ó> I- 1") i le I a ano .-' ,o • t HH ue e -. ! ¡-i i n O i e " '-^ fl a i 3 a t r n mi si ón en i ns í lo-, ?o.-,ee una -n !. j - jd-nl colmil H ica , uiia p?'?3,e! l?-3 de 50 J. D , n,la pt'oleína d ' ñ? 1 p -u ó 11 i ¡ l lildl ti fit-1 " \ T (Cl ) . u es p-o r te ' -tl '- i. nilp 3 i-- _t 11 el rep 1 jca-a v pich-.ee un •*> • i / id -id b l ii -> ,a , un--' p ot j na d¡ • ó ID VPg que =,e fimei t .t nfijiía i o ¿ a 3 ?-n i eme n t, e „ ] >- i-? f.iiio 5 ' del ARN yenóntii o 1 i 1 , u,? etd? í 3?, I D) . Do 1 tipio? de FPV nari -.o le , I, ab3 > !..)- en b 1 =e l pny di-» hues ede-.. Un I > i - se 1 m re uimu " ! ipro P" ; ?ft?-> ¡-F^ 1 _ rfi ae i e _?eu, l o „ pa ay ) , Ht.ii" 1 irb 1 t -?_e;, .¡ (p r e je p 1 i.r. cucurb tis) , y Chenopod i ac ae (pior ejemplo, Chenopiodi um) ( ang efe al . , Pby topa tbolog , 84, 1205 (1994) ) . Un segundo tipo se conoi. e como "ti o W" 5 i nfei t solamente Cu 1 uro í I. i 1 > • 1 ' >' R b i-' 111 ipo d i. 1 1 i---» ' N i? <y » I - 3 - , bj iow i ? , 84, 1205 (1994) ) . Ai -.lado- del tipo P incluyen ai si -trios severos para HA, ll mado-:, aquí HA— P (Wang t" al - , Fbytopa l b. , 1 7 (349 d°92) ) , HA5 -1 , 33 m-iclc..., aquí USA P, YL (Wang, e =t 1. , Phy topa tbology , B4, 1205 (1994) ) , v otros ai -?l act s >eg?'?n lo demeri te en ennant ei 13 » (Fhy topa i bology , S4 , 1359 .' 1 9¿| ) ) , Ai -1 ados del bu,, N incluyen F1. H , re-ienl ado a uí , de t inu PRV -W (Yeb el -< 1 » , . ? e-,on el, l , , Areh~V?o3. , 125. 1 Oí .' 1 <""-?2 ) ) . País tiracl o „, i 1 , e nte ¿riv ni i n, el yen de pi otea "-! (NI 3 ' r' 3 vi i n-;, i... he ~-er a ¡ si adi, del ij n ma vi , si *-. |os,-r1 ado n i 111 .'P? . t OP j Por nl>i3i>]?< H l ¡JGH .Hfp H I I I .'I->U> i ó I I pi'iipni i ion-;, n>? - 3 v¿? i?l„., de D 1 a 1 -> 3 -a ,S de 3 ' oiiip 1 Oiii r - -i i i. i i.ínOi ida t -i ittb i .''I i f i ?«?.j 3 -t h?-1". " -< d?- b:-<->e-> a a ada-. Pi.rr ejem l , una mol t'»? u3a ADN que n odi fii.a la proteasa de PPV FIA 8. , por- ejemplo, incluye la mol¿»?-ula de ?DN que tiene la secuencia de rmcleót los de la figura 2 (SEQ ID NOí l ) , una molécula de ADN compl ment ia a ?? -, - i- -C i l iµ i í i l i I ll 1 i •/-, I Oji l ?1> •• | , i y i I l I i -.1- 1,1 i i . i -j! | ? i ' , , | como una moler ul d ADN u melifica también una p o et»-.

PPV Fl AR3 Nía y su •- om? 1 n! o ue .->e hibrídsi ?-on una /onda ,!e ADN es ec í fica ¡>a? a PRV Fl AR"^ en reyulador de hibndaí ion n ÓXRSC, 5 reao ivo de D nha. dt , RD il 0„5*« y 1 O pg ,nl i-. ADN e e-.perm-í i--1 "->-<! iii ó n fi agii n 1 -ida esn t ural j 2 da 'y riii per f.ia nef e unid ) i pjrnln "-.e 3 « -< ÓE!T fl (;, 1 X^íf BDB al .*5»*/. Rami oot fd, il . , Moleí u3a>- Hlpmiiijf A I aboi a tory Manu l # ?-l edl'-l ón, Í1C?R9V. '< „ Ad mí-i a , I a -i tito 1 é'C u 1 a -, de ADfJ de Irf p pe-,, -i n l,?--. i n f i i n pueden • ni 111 l I ill leói |?J?" de ¡j r u I i- ,a di-1 n,?--FRV NTa que uo i , i ! e ?> f ¡ wi i'tiri 1 ! e' ppesión, i Ciitr e = , e3 - -o-.o ?_|e -j cn iii" I <1., de ??u> 3 eó >" i d' *-> n los iiñ de yen de f 3 -u H n- Fl gen de protea-^a fie PRV >,,-, root i rre l s ñal s ne. esa t tas pi-a i j su e,.p r a l ÓU una Vi-» ' I r,| u -. f er } do e l n pa .;!• ) en Un yeuOt??-1 di- 1 ?l -"íltt-.< - Por i on- igii iente Ü Vec !?")i debe i oti- I i n i rs iaf p i opo t i" 1 > ina r la-, ,H, iit-iin Hñ i'Mijiil Í l.i i I -< -, de I -, 3 tlt luei 't que -,e;? n fmii ínmli— il 1 t"l aecd, a i -,e ,?,\ gen Fuaudo -,e en ?-ti?ib3 -, el i or¡-d i iir i de ei l,o? de -,eF, -* 3 >' 111 =1 ?r l.i i , ^e o p 3 e -i r -. I , -, ¡ > , f a o?í> 3 > 13. - , de , ¡ 1 -¡ ¡ d, a ,?, -,?-? e,?ip 3 e-, n i ' .p?i?-'? -> j i- r a i eye- --i -ii p 3 a n I. a =-, , F-i , pl -tpl ---.* ti nu-iijé'to 3-? l l v ui el en v | r^ 3 n l POOS "UC ' O de ei l,OF ,je ei-pres i ón/ i nsert o . Fl gen se e¡ pi'esa en la planta y se confiere de esta forma ima re-, i steñe i a incremen a a contra i nf i n v i ral . V i 1 ' I -} (lie i Ol I' i-. , ¡ t i- ' 1 Ol d i»1 - e 1 - í I- n 1 -. I -. - ( -. i a . I-13 , i--' i i i |e pirotegsa. Para bacep e --.>-> , una fiepsona c on • ii-pt-.- -, ?-ono?- i mi eutos en 3 a ater i a pu plear i nfot tuai r n en i n . n a !-"•< organ J -ic i ón genómn a '"te pot ivi i us p t1:) ub o- y a i ;.lar el n de prole aa .. Fl g n de proteas i :, nb o a en 3 a iit i !,acl 3' del y iii.iin >- nl¡ l n VPR y el n NT¡? ; ( f i rji 11 a O 1 ) . Ad i f i ona 1 n fd . l i i nfoi mai i ón > el a>- i .-mad--, a lo- -l i t i de 11 i -sOi ! a i- i ón u ro n 1 í t o i ->•- tii 3 e n -i i -i d tertii i a r e > e, tremo N n de i te , H. LOS ii I i n=> de re?- n < iiiiti-nl o di-» U ?"? d;e -, ,-, -,e i.ol ?-jer v-a n ?»tt l 3 ío! i ' i rus y lian i, ,?|o de I e t?o n-j. i ?:-? i cuno 1.1 to n el l tpiijil i ?|t i Ri o— ; „ Rln— Rl;» . o 5 b ien R3 n-A3 , l s 2-a? m- » 1 a -. de nm 3 eó I. i i ir- que •_ o l f ii- an H TI I I, d?p ?l lijes pued?-.|? de I e r?t, ( I ?a i -,e , lb,=fudo i-iél o lf)-. b te>' i- iiniii i do - n 3. . l é m i , n mi l ?S y oO-iei'ba i ¡i i -i o-, ntldad di-» " i pu , „ F3 ARN 'U I .-ijj , 1 a fie ,pu - -, \ ir'l ei , ? |e l i. d .3 -, -j -e ..' a i 111 :, 0 pr?)? e?"l i ??, I en ir i-, i i.im n. i di i-i. 9 f ,',-,-j uf ii b 1 b 1 i •") I ef -, de r HM ?> -viudo el R Ji t -i l , pop tt?>-'» toi So •> t onoi i .i-í en la !,¿>? • •! ' -i , F3 ARM i r al -,e i nf nb-t ¡ o i í o . j -, i l i ?~ - q? ,?- -,e 11 i I) •' i d -. f i ?.)f i ^ 1 ?RN Vi H 3 y I pan >? 1' i pr I -< aa i e,/ | .3 , „ a.-' p. odu' e un iiiidéi ¡,? -< di- ADN i om l .ri ni a ? ¡ a , !_!,> r omp 1 eme 1 d o de ADN de l mo i¿», ul < f|e ADN ?.n?¡ 1 iiient a 1 J -I de pr duc e y e-.t c o m i rep 1 eneu I, a una copia de ADN (cADN) de la molécula de APN vir l original. Fl complemento de ADN puede p oducirse de manera q e pesul te en un cADN de dubl heb a i'niu o o bien de I ,-.,|ip 3 i - e p -d i f o l • ADN i. on el uso de los i nii jadorea ol ig?-?m?-'»p ico-, -^ r í f icos ppia el gen dee ro l e va , Fi os t foi i Juan-i-, pu en i nclui r si t ios de pe j rii i i u no do os empleado» efi p>aso-3 subse«.uen te s de r l oit ti l ón. Pa ri.iria t gu ?en I e f na iio 3 i u 3 "a de ADN ue dot» le hebr-? i-1 ne que c ont jene 3 a i nformac 1 óft de ,PI. nene i a => de ARN v i ra 3 - F ,ta- mol 1^1 <• 1 a -, de ADN piue eu -.,••-'1- i-lnU?da-, en •/Oí tot'en de p 3 S- H o lt 1 de F -. 1 o3 l de ?ü?if', de 3 -., a i.l i 1 len s itii ?l i'-» 1 1.11 -< -> il en 3 a r i do 1 de en 1 tit -¡ il*1 t ?-»s 1 1 > • 1 ó 11 po> 3 ÍÍJ -, a de ADN . l.OS il O »<••> f r ayttti-'U ' - 1 -, ->e j n iU't.ifi en .?I tul'--'; i e i lou-ii t n, 1 imifi pioi iii i.i pl -?-,m ¡ o rac l ei 1 ?ado->, qi.ie , e l an ?jespu¿< 1 pa t a i 1 •» n a f nrifld »' F„ 1 el 1 1 r al nu-bi ti tote, a ije 1 ADN Reí id . de FRV NI,, pire v t -iitleí e olefd. j f 11 a?j?_?-, pueden e p le ?. X -, 1 OtitO ,' U.í ;-, di- b I u r 1 i.l •) 1. I óí 1 p it '-t tami -> t la b ibl ioteca d-i ADN par-, de! e? no ?i=t » ., 1 una de 3 -1 luí l,e? 1 a =. I p n-, f orre-ida -, 1 fin I lene f i iijm.'iil ?j-, di-1 ?DN 1 OH -> 1— • > ? u? 1 a ~> fp le 1 od t f \, i"? 3 a y e? 11 ti f 1 e 1 > \ 1 n 1- --, -. " . rvir" 1 n.f i leu ~.?? 1 , e| ti |,t|' 3 fi -. 111 -}e , I o = . e i 1 ADN el ' 1 I . l ijn l -'l1 1 ? )l ? ||l | rt b u l eí ' i| |rt i jl le i i )f|l, p 'H" e - I, ,4 pi- ¡o i ó U . r~ 1 ye 11 de p i o i e^ -> -í ' e í 'i i ?e|i I i -i O ? e -ii- t ' e i ~}f i !?d.-<l idad n coloro -i -, que i jenert -.i f u r» i a S CJI.I -.e e, I ¡en eu 5 ' a las secuenc las que udi f i> an un si t m de d?-.??" i i i óp pirot-eol í t ica de e;.tremo N y 5 ' a -,er?.?enc i aa que r o i f i rar un •=3? tio de i so iac n proteol í I ic d e; 1 remo F pa a Nía . H 1 I |'?|a t i -,'a lú | i I H ,f f i I uii >U 1 • i , ?|e ' N . , 1 i . — ?l?- . i I II -,!-' i !, 3 , —i? 1 „ oi' i l ai , ón de men ido en y« torea te e; pires} órt. Ard i cue»'p>os i nutra l a pr oteas-a u den l ) se ?=? ra mi z r la bibl oteca de e'.presi ón de i ADN y el yen ued ser a islado a part ir de •. o3om s que e, ? -,au 3 , pr oteína . Di t e«d ? a l,eui a iln » 1 ef u 3 -( f pal ) pr o or iona r re-, ( --, i i- fu j - a Ion virus en plantas I r-i n-nj^in i - -e nasa en ARN de aitt 1 senl- i do. Filmo -;e b o t i Oltoi ido, mta i. élnla Mif ti -< pirot e í r ?a med iante 3a t rau->? rirn i óu iel ADN del yei que i ijil i f li a e- a pt nteín-t p i pa pi ndlii i r ARN, que Í?Í, e:.,-.!. - . i ore - do en ARN titen-,a _¡e i o íARNtii' er ejemplo 1-, l e or j n de introne-.) y f t ilarhiln f»o? i li n-'m,,-. en 3 ;) p rote í na . F ,t,e proi i-1 ai i puede sei inh ib ido en 3 a i é nl med í anl e la p esefii |(j de A N de a nt i seo t i do . Fi 3,é| ,.? nn ARN l]e -lll' 1 -if'tll' ntl.l ,1'Jfl l í ll i .. í i-Pl'lll'lll d ARN I i I..II I 1 e, ,,. , d ? ? 1 5 e un . -.éi ??e, ?? ? a ?.|e h-.,se-> ef el RNm eu rué -.! i ,' r< — ',, e] s í di i qu da h 3 ,»-» ( hi--,? 1 , inavo Ja de 3 --j -, 1 — i .< -,, -ii.i if.i 11 ?a d -1 II t 1 -ent idn ( leída -, en l »en t t do de "" ' a 5 ' . Si-1 i 1 ee niie i-.:,!» tlti lt J I i -.e 1 I- 1 , -< m ij , - , i !; ,, i nfor mación fie un comn e iu entr e l a-, >-},->-, complement i s de ARN, impidiendo r» ( la foi aoi ón de protetna . La forma como fui ir i ona esto n i ncierta ; el c onip le-io puede i nterfei ir con una transc ripc i ón adicional , lll'ill l-'-jaill i ei i I o , t i - i < . O , i O ! i 1 1" ' t i i S 1 - i 1 ó U i • ¡l ien , |?'?j? _. d a , el APNm o bi n tener1 m^ de uno de estos efecto^. F--, I e ARN cié antisentido puede ? r reproducido en 1 a •= • ¿lula-; me i ante t parts for «na > i n de la • -du n un cosrd. ruc to de ADN apropiado a rregl -ido ra I ra n pc ib 11 ^ hebr de no tem l do (en opi.i-. i o i ón a labeni a I emp] <? do) del gen p le -o e (o bien de una - í' Ut'fii".1 =• ADN qu mues ra un, hom log í ~>?>_, anc 1 a 1 1 011 l til t siff ) . Fl na ?"i?-"J R de ¡n1 l í nl ido a r nja t e maner a 1 le t te l a e, -e-,? ',,, ?.|e ene- e-. e?; [ f ? 1.1 , de fi 1 a ni a .3 , b i en 1 1.1 r ??i? 1 do - 1 -i re ,.,.> , .-. n de l a e u ^i n e yene-. lia l l ado -J Ull i -?ii(bli-) en el yenotjdo de 1? p iih í , -1 -"-ea en el ni vel. d 3 i d i f f er.i ta ye<l? _ {pi? a j } 1 ',, 31.. j p,or . • Ji-ih i 1 ij l a eje n%? ii.lni-.i- 1 ? n e n 1 d oc i jiii ti efi f)¿l -n ."i , de "Hore-. de etun a que 3 1?-.va a pé I -t ío-. --. i n i ?")3ore 3 en Ve ; de p d l o-. ,. , 13op 1 do-. < L' ^ o i-1! \ 1 1)3 el, a l . , Ndiin , ",55 ¡ Rt'? ( I^EE) ) ; o bien i UU ni vel b t equ í ?>"? i ' O tit-a-i sU i l l , por' ej l o, camb i efi 1 i c a 111 i d a iJ de i l ij d . l iii iiitHd y r edui 1 1 ón en 1 u :i) d o * 1 -t de-pol lllteí I ,' , 1 l n di-"1 p í t i lia dl.ir-aill e ] -, fli-n lí! ,?. , ,|| de] .. i Lómate (3-. ? tb - a l -. , Na l ,, re, 554 i 734- "" /, í l ^RRt t . Otro ,?t?¿d 1 icli.) i.li-'ricpi ¡ o »n — 1 - , ri->~ lefd efiieid.e p ' F'-? 11 tb I b J r 3 1 e pu' sj óti dt' yene.-, en pl anl-.- =. ti a rir.yóo] -¡ :• s el n^p de ARN 0 de sentido transcri to a parti de un te pilado e-.-ógeno para regular de manera descendente la expresión de yene-., espec i f i eos p> 1 a id a ( Jorgenser» , l-ey stone ,ympos i uní Tatp '1 Ci i ?l? I din t 1 , 11 ' lUl lll ~>'~-< hu li.gy , " O osecti i y ro u i s vegetales iorados mediante l a bi tec nología , resumen X 1 -022 (1994) 3. Por consiguiente, tanto el ARN de serd ido • orno ci anti en! ido li n i ompi obadi i ser ó i les para l g a- 3 s regula'., ion de-,? enden de 3 a e;. pires lón lo., yene-, en las p 3 -ri.1'?la-?, f Fn la i se rite i u ni ? -'>. l a- mol r u3 -> s de AD f¡n od ¡ f i c 3 n 1 o--> yene-:- d n I O !", C-> 3 -, _-. de 3 1 e a FRF Fl AR5 ',',! } ) ; i.ep a de t I r Í 1- > I ISA F í a l.ein itld"f MA) b-u Sf do dot et ?\,] fi3,"!a -j . 31.1S gefie-, hgfi .,i?|u 1 ¡ 1 =>er t, tiln-, en ei. tores do e: resi ón,, rutila -i -j ¡ 1 e.-. de e, pr e-,j r pueden :.er c ol or a i 1-, i r\d 1 - 1 du? luiente 5 en un vec or que pue-¡>- ser tr insmi t 1 do en ni a n :) "- -, e p? fe uui ? un t oi l.i-iiiai , o . Altern t 1 v emente, d 1.1 o "! i ."Je l s yer»e-, i- p? >d -'-, aa í PRV ue en '.---..da uno estar r 1 Jet d,e J en ?.H"? 1 aa ,--- Le de e. ?pe-,tón que ue e 1 eloi -S Í j n ?-"?3 110 •:> tiro - t,u? l)if . ,0, o bien cu l ui r de Ir.»- 1 asset es - de e¡ pre i ón di- PRV .T -» de 1 a r sent tn tii i on pinedo ."OlOi-a» -1-' it nn ','e 1 t,. l"? 11 ,n ,' 111 1. u uno i- v'-il lo-i f . -1 -..e t e ' pt f1.j fi de ?jfi,? I ? - •", 11 ~ » lore-? ue -~-? ?re«?ón c ont 1 erten 3 í'n -ji-.'i i elii.ia i Oyul -, ' f)i 1 : -, ?ja||''Ji ii -> ?v e "> a 1 i a--. ?-t? a 33 e, pu e -t on ele nn yon 1 -t-? t-?do. F3 gen di--. i t a -, -, " , inset t, a de tal an r u -tri .-? ? uenc ¡.a-, ivuul =1 tor 1 a :•> -,^3n fun ionales y los genes piueden ei-pr- tatirs-a cuando se incorporan en un genoma de planta. Por ejemplo, vectores de la piresente invención que contiene co b ina c iones de o te 5 de o, pi o -.1 ? i que ion l uyen ADN de ?j?»?? de ur otef na de revés 1 mi en I-i i de virus de mancha cié anil le» de papaya (PRV) o bien un gen de proteasa de PRV heterólogo (por ejemplo un g n que proviene» de una cepa di fer ente) , un gen de proteína de reves imien o de vj u.a de mo-.a o o del pepino, nf? gen d ri >t-e f na de re esti i n o del vins de mosaico am ril lo l-¡ cal aba» i i , y >u\ gen de pn ut eín-a de r vesl i mi n o del -. ? ru„ "? ,\&] mosa ico 1 » -,aud(a . i ¡?.-»pti , , i nando l outb iu i lorien de c a ?>se 1- 1 e ue e: pr?-'Sión di-1 gen v'i ül se , OI OC Í U n el mi ,mo pl-3 ,m?do binario, y que f -»ae ¡. t e •. ue en -, nii'i] I, j ni os ue . ont- i ene lA^mid :-.*> 1, i a ris ffirma en n,,^ plañid, lo-n gene-, v' p alp-. im'il t ¡ 1 er, p s u n todos de ri i e fe? enr. i a -ñus taili la lui n e los iiO ili grado-, ue ef ¡c í i i cu indo s eru n ?d;?- n ? ?-> s ?d-(r»:-? ITI l ñí as I i a u ->IJI-VI o -j , . Poi je lo, -< uno e; airona nmnero , * a l lm-n-. ! l a n-.y-?} i i i -i , uiif i oíd t en do-. ? a ,¿H I tes i ¡e ' p pe _, i óli i.Je yene-, '-, ¡ palé-, j p ! iii l -, di f i-1 r t 11 e:, , la linea I , 5 fiSyé i c a r , ? minu u ¡"oí i JI n uot ittbo-, i ril-,, De inclín -t 31 iii i 3 a r , a t Ufl- ] í fie;. p i o ,et d , ni, t'e t -t i di) ?-->l » i HJ ti I O | 1 i | v i -, - p í , ] 1 ¡ , , je a í 111. fl i -i t ? ?"e 3 ,? i -,\ \ i on 11 ñ v i i u -j , p i i-1 se i i" -a ra t a ni¡ i o£ n > 111 ' fl|- a í >l? e, 1 ?_ I i s f |t I I -< 3 ijl- - ,-! I I" O 31 l"l «te- ¿lili 1.1(113 , r-1! i i l ll 1 A n i- u el segundo i t n. F i n d en , i ti. i"-.» 11 I susceptible a uno de lo» vi rus pA -,uscepd ible al ot o. Fste f enómeui i -> inesperado, i no e:,?sl l í uru correla ión entre el desempeño ele c_acla gen en estos • oristruc to=> y t ?é I i i ' Ilil'l 1 t l p 1 i ' -> , • -i te et f oque n i i . -1 n ' ' . i i' I 1 -. ili I • i 1 - ei , la r eprocluc •_ i ón de la-, lant i-, -arfd probablemente proh ib i 1 ament di íi ?3 em l'?a . ?ón con construí t. n genét ii os I'IIII c • ».•> , utt'i debe pirobi» nnm ri. , .-, l íne,c%, de pil juta I a para uiii oí ra r une qut» re -¡ente l ni l J{1 i ' ?p i ai lo r|e e i i 11 i . I i p rob a b i 3 o I ai i d µfn ri[|l i ji O nn-l 3 í f ?e i i iin n? ve3e--, i'i I t 1 e-r. ilf. e, pi e.ii óti puede e? fiord, ra¡ -.o ijefd i ?? del i ¡figo de 10 i '"?O f-ji-j m l as espe, ?e-> if! ??3i?f ?',|ih ..' , P-.r mayor i ifnpiitai »?l» véa-e 1 -, SOl l t tud de nat.ente • opond i ui e ele lo-., -IH MHH Í » o .-. de 3 •.» .-. ->o3 ic > I. ant a no „ de ,?'|?> OF '"".óó, „ 993 ¡.¿ t ul ida "Ti -?u-ye?tiC Plan! i *3 E;q»re:-,-, ¡ ny Df-I? pnilr i m ts Ford a -i itiny a P]n? al } l c ?.,f Fef?e-? t > , Imjl«, i Vli u ; Pe , i d ance" (Pl auti-, Ira u . a -, que e pir s -ni con tr uí I o de ADN Une i fin I ( en p i na p]?u ,1 I "I id de ofi t ,i fji'i ipOi i l of ia p ¡" -, i l i-ili > -a i mil i ! ', 1 l'i.-".l , ?, .r.-,-?d ?d-> el d ía "V, de i 1 i i i e b i e de 1 c~?¿i . , p ??-. -,e i t ¡, ot ?o? -.! -i. |i . í 11,11 i e f e? ei ti l . í" Pa p-^ e .pi e-,--. ! el w i'd , -,?-» Cí?»be,t i iifn ifi oifiíil' 1 a -> , r ueiii i A -. i'iiijnl t liii i i ; ???»?l?'Jt i i j -> itei -, • 1 -a -. - Pue a ¡" L ) nlii' 1 -, ,_> Í i d i- -. >a ni- • i .(¡ pn i ! , i i 11 , ^ , |ij ?,?l?i? lija ? ,, e p rrir e- un 3 en ti » in! I i'i -ihi i 13?» -i 3 iti- i-. ?o3 i p i l,e { f l , ,-.] yen de p i i d;e-j -. a l ra Uní. r i ¡. le -, i a i ??n n i esa r i a ).) a ' i " p r e r.1 r, t 1 ve:: transferido e integrado en un geuoma de planta. De pir ferenc ia , lo-, c s ttes de expresión de 3a presente invención -»e someten ingeniería genética pars contener un I i i ?l.,|ot i ?? i O? I - I i i ?? I ' ' i *"• i ' -U i i » 1 ,'. I i ili- I I i i 1 1 i 1 ¿,?1 de ba lcti i óu (ATG) y un señal de pol i (A'< adición (AATAAA) Z' de su codóu de ter ina i n de traslaf i n. V i s promotores que fufti lonar» en plantas se encuentran d i aponi ti le=, , sin embargo, l promotor pire fer ido los promotores cou-it s t,nt i i/?)3 "t.c?r3 pn overn ent e , jel v i ru- del mos ) i co de la col i flor íPa ' . 1 3 -,eña] pol i (A) puede i ib I ene r ->>-• J íi ti f del gen "^ de PaMV o lni'ti i. arí ? t de cualquier núinet o de tjt-ifi -. fie plarua b en r rai I r t .. -d -, , e_, de ?r5 uot) -i 1 i i»", i id, _? -,-a , o?. I ou i u-i i td -, > , 1 * "aseo! in-i, gen de pro ína de ?i-? en un i ? d o i le fi i ?3. I )- ' oflS l rúe C ¡ Ciner- SOii ón di-1 la prcdeínp ,je evé-, t • m f ti.) C|'1V C en la u 3 n.i t ud de F tenl PCT PrT l)S8F/04"", 1 , publ o a ia el di * 2r? de T„ o de 19C9 r n l a pefei efu. i i WD ' 'r\"r",FJ , qiu- r.?? 3 un e] beneficio de I J , .7 » H . 1 "" i ,ric?1 , fid-osTii -n-Jii el dí i TI de ii u'tithi ir de 1 7 , I dnh?1p ? "Cn, ombe Hu,ui - V? ru-> Co"i I Protein G n , " (Ren de Proteína de Reve -,1 oioei o de i rus de3 IV|-,i ico del Pepu no) ].- pF e {na de r , r--,', liloeut.O CUV Wl en ] .-¡ Sel ii ) I fifi de F i ente per PCT 'I ?ÍT? ?- RG-!, µui»i ?..ida i , t -i r, , , p-n-vu d <79o, 101T1O WO 9?". ?^ ISr? -j que r 1- 1 3 a.ii-t el llene f o I O te I I _ c", , 7 , i . =. 734,404, pr es nt ada e] día Io de Agos I o de 1CRE, lulad "Cuuutubei Mosa ic Vi us Coat Pt tein Cene. " n de Proteir 3 de Revest nfiienfci.) del Virus del Mosaico del Pepino) . adecuados pueden ser i corporados en los seleccionar las células o pl anta-a ue han sido r ansformad s. Fl gen marc ador empleado puede e;.?re-,ar l a l a un ant i b i ó 11 r o , • • nno por ejemplo c anam • na , yent i c i na , G418, higromo i na ,, c¿l rept muci ii-i , e toec 1 norn 11 i fia , » e I, i 11 11_ 3 i ua , • 1 or -i irt f ef t j ?.? 11 , ¡ --. i •• i 3 11 *'-.. Ot ros iit-e i .!• lor e.a pun.ll íafl rmi l H lt )1 tdom? flf- _-.,! ?_.^ ,-, bien ?."c)i'lo a 3 tei 11 i t 1 va -J , > otilo por e e pl Uft gen que oiij i f i r i p "i i a 1 , í i-il er, f ti lí a 1 f»:, ln't bic u " i i mu i j ) f 11 e i- itipln l olef inc j .i al ?.¡ 1 lU ' íü-ií l ii, -?i 13 f ou i f 1 I |0 t i 1 i ( na i i i en b ?'? nrii j' ¡ 11 i 3 i o D I ,p , »S i t i -,'?j > .< ,J l r i ou-? 1 e=. pía y -< -e l«-? i i if ?-? p io lr t afi 11 ti li'ii "¡ i'?-,:?i i -i al me I ol r * a I o, a los m tales i ?»? ) leme¡ d I 'itl que t.?? nriop» ! '")!")- p ro i t, nij . nu I tí ii-» ?i ef ¡ ..d r'ó I I o . -i i i 1 Fl ltl'< r'l , iil 'ttlf! 1 i I M l u r i' i te 3 i i- i . i I r, i i i I e l i- » I U J ) i 1 I' f S •- .1 > > t 0 -i i ¿] H M , ipf1 fli i e-d n tl'aU ?í.')l"'ii' "h ^- Feni'in el ni'io f i • cíe i- -,? ,? -. " i e ^ de bi i?-? ani »d i fore e uno o .-?? i o - ma • . moi i » -il? iOn U t't'ill i ?»^ i -i-1. OUt?e fiíidj t ¡ i ,? |H= dl t i i- id 5'-1 I { .-i f I l'd I 3 ?-»S el l | l )t i M u! ilUe -i l,-.? I i ) ¡ 7" ,- | -— , 1 ! O , -.i- , !AGI 1 ifio ido l e de e- e pe, l u-i efi 1 ,< ,.,,, I e , ¡ ., , I),, ftia i" i adei I aiTii -.,-shlf' ?'?)?ll?l p)C)f e eiiiplo e yen d bet=) — » o gl ucuroni d ^>a puede emplearse en lugar de un marcador selei.c i onable, o bien junto con el. Células transforinada =¡ p,->P e gen pueden ser1 iderd i fie ad 1- ediarit.e la producción l |e l li t |)| l |?|??? i i i U 3 -I 3 > i .< ' - I -I » i i lí l ' l i . , O'lil 1 i 3 i I I • i ~" luden 3 —b l -a-D- l nc u rom do ( X-Gl u>. ) . Al de-.a rml 1 r el con tructo de expresi ón piresertte, s cleí i r, el f asset le r|e ei-. )pe-,3 n, los VJ GJ?-I c mponentes del con"- 1 íe t.r") de e..p r».. i ón o por jem lo las moie'ícu las de ADf3, e¡¡3 a„ adore -, v o bien fragm nt s e 3 o-, misnio-^ => • i u-er t,a i ¿ui norm a 1 mor d.e en un /* ,-_ ,,,,-< ,.le c 1 otiai i n i ilIKSnitínt't'j c o por' ejem lo mi U l -a ritió do o b ien fayo, que p? e l'C'pil o a rse ?- i un hu?~-,pe?l bai tet 1 a l »0 , • omo pot ejemplo F. •_ • 11 i . nin r o ,o-, v i fcriraj di-» clona i óu e, l-iteii cp íe han ni o d--»-?i I' I i-. el) 3 -J 1 1 f lori-li I : 11 , l .'p? tor de , loli-i. jóll p??e?|e ?.er j ela o y Somet ido , lta 11 t p? 11 JI t -<?| i c i n * 1 , l oittci por e e.ill l l e , 1 i • i i r i n ? 1 r.fl i .i ¡ i i-, l t ;i i ntie i ?nr I g I I i cill, i ' tiii >? I i e f 1 e , i ó u , I -?t'1 i. I r. ( 1 , l»|? O" lyt- j |.-i i t, i i i , , d i • t ó o di-f r i ti n I.O-i ni- > p? ?l | e¡¡l „ d t , j, =, J til j 3 a i e-. / pa -, p r i ipf )i'? i n i | i U . e> I o? que i ¡ uiij > 3 a i of » i ¡na liei -'-> 1 d o na i I 11 ] a V . Fu e] i a >o ue I l'-ill-ifuffiíic i ?|i iti d ? -i 11 a por Ayt'ob n f i-u i mu, el l - -- i-1 ! t e ?l?-. i », i) , i-»--, i ?n -,e i -- ll|> lll tilil e| t U (i Vi-'i I Oí „ f 3 «tiqueado pOi f l -djiili >n I", i -. de! p 1 'a Sill 1 • ¡o Tt b ien R i de Al U t) 1 i J e. O.llll -j ii i t | , t I---' e ? ? t ] i. i -• ?? n i le-, r|et e. ? ,? ¡ opi i i ?? ?a 1 en 1 ,'?i?ji?'l ilp ?.|e_ M I !' -tn-.- f r 3 di"» di-1 j » 1 ¿»:-?ll I do i T6 bien Pi (T-ADN . Fsto facil i ta la integ aci n de las ppes ntes ec.u ni ?a ci ADN quimérii as en el genoma de a célula de planta hu sped. Fste et I r contendrá t mbi n j- i _U.-í| |i i rt .1 i 1 -J i i r a i. | J f I i l I - i 'J¡ll | i > ' I •"» U 'ir- p 1 -i ,, , i i ii ) i- ¡ t célula» de Ay rob-ie ter i um, a-,1 L orno en i.élulas de F. c o] i , Tod J -? l -, maní un lac i rte-3 ADN ae rea 1 i :• a u í amente en :él u] i a ti* E- >] i >1 pl Asm i do f i ris 1 que 31e^-¡ el i. aHi tl de x r e i ón de] gen d pol iv ir'us de--pj3 r di i en i éln] t -. di- Ay i t ibac t er i uiit tt. ?.11 a t d >» I r .i ns f cicm i l n i ref la de ADN, i oltji.iy i. i ÓU ' •-. i til t 1 a re- . F^l,!;, i-ilul -i-, i le An i oba C ' i.' 1 1 uto i ?i||iti?i?|? ¿?? uii -le iin o pl '?:ji??ul'i, t mb ién de 3o-, l ü -tiido i o bien Ri . U--', -enundo p>l ^sutido l le. rí* lodo-, lo > yen s J i li-i » i ippi iiin- psi t r nn f » ene i a el ADN fin -'nten e|? 3 a -. i é 3 i 11 -t -, i le plafd -i » V 1,o i 'e-, i i n v ', , . n - , iii'tll-li i r f t ele pi 3 )fd a ade, n;i?i?j, if¡f luyen 3 o., dei'i -'-¡ o , de ?_? ' i p 3 d =n?l"? do TJ de Ayl" ba? tet o ¡ lum?;fi?" lena, IWIJI'HI 3o g n i tlmefd pi t»n G3 -i -tria rt el •* 1. Pé l en e TJ >p te-uitei o sna No. 1 , "r?" 5 ' f' '. , o b i n y i ob.si.í ¿ ?u t T i1.-. léi ro i" =? -• t»e i'lif .itiili 3f? 'U -pilt'i s p .o- i l mil i??|?i? L ii'in de] mi I ur La 3 y---m'»! o o en i.-11 i lili» .iped e i é 1 u 3 a iji- i p 3 i ,1 I ,1 b lOlt p -i I t -?i? i I -?ft-> f?)i |!|?f t Í-', i t - F? i t I etltb a . i (i i , 1 J for a parí O "1 ir de j u I ron.,, lóu ¡ic-3 Veo t r do4 p3 ÜU a e? ,.¡ ??.?e;?peu fio e , un f a i lo» » • 1 t t > o p-o -i 3.- p> i,,. I o- a 3 i p, e-.er?t in fi i n y >. na 1.... ?er in toijr) cp.ie iu'op i i i oue i.in-f tr'apsformac i ót eficiente puede empl arse. Ad más di-1 3a tr ns orma i n que emplea v i torea di-» rans orma i n cte pl nta derivados de 1 o-n plSs ido, que inducen tumor (Ti) o i) t ' I 1 i lili » i i )? 11 ii - i i 1 -' 1 i e i ÍR i ' i ¡e Ay I oh - • > -» l > 'lili , -,?- p uji ? ,?i| emplear m I o os a 1 tepua t i vos para i r i i ¡ a r los onstru tor de ADN de 1 s pn-eaeule i nvenci ón en célul as de pl anta . Ta les íii l odo-- pueden i nc lui r , por1 e jemplo, el ?>so de l iposoma - , e3 ec t roporai. i ón, quf ii o^ que i m rem n la la absorc i ón 3 ibre de ADN ( i^d cniii el jl , F?B? ' ? '73 til ¡ i o í i n| i .Tt'i »:> r>i»(a Mol Get . Ge fi I BI i . H^A, P," . S~4 M^R'",) ) , O bien un, i .io. oveí ti les de a] v 311 •<!-! d 1--H1 a ¡ a I I I i e , (1"?BT> a -, L c om l r iO'-- > i »? til -«i l i-'il Us3r-tn?? i l' o no] en, l a l . i i on d nfH fn fil ii ?_le t ej i cíe planta o bien de i - 1 u ] -i r- d uldfi , ul i a as p - i a 3 , 11 * n s f o r a . i ó u ijf. efidi-i a de 3 a na tura 3 e;. a de 3 l rd hués ed di-1 i U i O t '"o 3 d t i a u S f Ol ar [ ó? i „ F? ii- .i d o . J ¡ e id i'i 1, 13 e , I ( |i~ 1 i i vi'l i i -i 33 o , i é 311 t a -. de . .i M i o -, i -,. ?e? i-, i mi . p i o 1,1 ij_? 3 a s t?-> ( iHijillt'íl 'la de I tu i 3 , ,? ornen tos fie i,a 1 l?, ?-»-?( i 1 i ! I 3 1 J -i , pO 3 -efi . e?»?b r 1 ol le ; , iltpni iil i l? ., -egritet i lo -. de i nbél i u]o-, , ic-.i ione - trie r 1 -, t, em i t t i a -> , y - .111 I - I BG, 1 i fnent i-1 de 1 ej ido e , peijouer j! 13 e f»u 3 ¿ ilied i i I . >-->> que i ?n-?i-»? "i 3 a i. a p -, i i r|a ,] , Je i ey ene ? a i i nin a-, ot t ? e ) a -. , f t I ¡ 1 e -- ci >- j -. ? i é - i l 3 a 1 i a 11 n t o r tila •_ • ó r • .

?B La tran sformac i n e l leva a i. ab hi o condi ione - enfocada:, ha i el tejido de pl an t i de el cc ion. l - >. élul a-j de pil a ni a o b en tej ido -,e ¡-ponen al ADN que lleva ] ca-i-iette de e ?i? , ? , i f de i ?e? ii— -.. ...'i 3 !, i p , e — i- ' o I i . > i i i . p i- . lil i d. , , , t í i i.in período efei t i vo de iempo. F_-d u d ubicarse denli o de un t ango que varía de un impulso de le i i ad m riot i uri -sfujiiiiUcí p-M'5 3a e] ec tropior-u ióri, l?,-h-t un rutnl I i de a 7, di-, , en p» e i a de i ?¿lnl ?, di- Agi ba,. loi i um que lie. U pl A-IIH I di » . 1 o-i l e n] sdoi i-»-. y .lien i o ., ei?i 1 e a i lo a ., -i f i -f Cím I -, mi, ?éu f on 3a ót nl e ip' te ido de planta y e] prol iji o ] rj de i r : i i - f o m > • I i , Une h? )_, p i o I O? o I o - o,- I- i a n -. f o ?"n - i i ón i- nnli» i iift,, r apa di-' ¡l tieulai l ói, de céln] ¡ .-i de i n] I. i vo .-,u ;,pen? I 1 f I -< - (l -ali o I"J bli-'fi fia í M o no yi o, por ej m lo! en 3 ¡ ji Ht'í n i?- de [)1 J iii- . K» me i -, .-ól iiliin, -,?-.pa i a cío-, poi U(> .11 -co de pape1! f j ] ! i o e-lépi] de l as célul < -n di-, lanta o liifi. tejido - de planta qu- -? ?»-;lí?? t t ansf orní, "do. De-? 1 a t a lili etl I O ?_ ?.i¡ ', ADN, 3 u 3 a r- clt i a f 11 a o b L^Mt e i iilfj.-, di-» p ] i t I -, ueden i n 1 t i i r se cj i i > H i t! _• a i ( o ;> p?Jt'1 ?nlii-? di--" t, i empo "jfd e-, ?¡?- l >o3e>_> i /', i - , '.i l¡ i?-.?i p???ed?-'f t e, piíi ii- '-e i umetl 1 -i t' m i'it. un gente de - leci ló?) C 0(110 por e ? etiip 1 o 3 o:, de.-,' i 1 l ?"? - '.i i'l'l i] i i F i'i 111.1.. 3 O ue i 11 VO 3 m i a p 1 -i e pOri l f j ólt .1 HiJl ullHl l í ' l O.it'il - I" l n¡ i '-) f ) I. | Hn l?(| -j i , r- 1 >! e ipil . i nh i be al , reí. oto et 11 o de 3 ,, --, > >'- o.i -) , ,|e A.jl'ci'¡-,? l i-., j iult.

OOtl!CIU?-o, ! ,_,;, e pl ado-'. h b í !,U a ] tí ti"-» -lOtl I , ,1 , I., | i-, I. o. i i-, - ifilO p n ejemp l o i ef? ,- i?n-t y i -i ?' >'|i)?" l 1 i • ! "i , l os (lied l o- et'itf ) t r-, i !? i-, etl 1 sel ? ión pueden -er formulados para mantener callo transformado o bien élul de cultivo en suspensión en un e-.tado indiferem íado, o bien para permitir la pu-oducr i ón de 1 ,- 1 o~? i t p i i i I i l ie i -! 1 "i i ) j - .1 y ?|- ' I d, O - ?"|? ¡ |? i I i i i uO I , 1 3 i . i s os de tubeF'cnl y simi l i es» r;,¿1??3 a . o cal lo observados en crecimien o en presem. l de i orii entrar iones itor-m 1 mente inhibí tor i =ts de 1 os agente -,e] ec 1 a -_,e considei au i orno p. n->f ormados y pnederi aer -,n|?? u] t i s os '.'-(p? a-, i e- o * I i i o tus ] es en e] 'til i -.itiici mee! i o pJl1"- reniove, -,e?. i. tone-, no > e -. ¡ -t n l e :, . l -., i é 3 u ] a r, o >. a ] 1 o pueden i le -prué--, ena y tt -,? . p x\ a d termin r l i- -ofir O del i. a ..el le de] yon .'i r-tl , o bien ueden ,o fcd o\ -,e í( pr otoc olf»-couOi. ol?"?s eje rey?-»ner i i ón d o 1 -i M I, i , Fn t oto olon que i u ol i ??. p -i n l -i p P f|(J?."?. ? ó?? lil i * ¡a d í oño-, , lo-, pol oño-, I]HH a a c en en el edi -,e3e>" t i vo se • onsideraft t ra n ;• f ci irct lo=. y pu den cort-ti -? a i" F a oj i r - , a ,oa en med io .". 3 ? I i JII JilCl IIS'JII f 1 "? T ' S la pt odui. f |?,n de i -« ic s, o b i efi .-i 1 iiip 1 e?"?i?=M 1 e -i ui?.-»|.y i eudo el t el; oí", o coi 1 -ido n un c Onipue , to ue t nCi 'i i» l -i a í i e- j. p) 1 a I i I, f* r» >ol c ¡ , ) i peí i a o i 11 e en itl i i • i 3 i t - . P ¡ra ¡i! nijiii- j i lañi 1, l» a u-.gén i c a -, que resentan r e- i 3 I ^, ; i a Vi ril ¡ 3?-> yol ir» a vi l" ile d ben -,?- r r?.»? yido, en 1 i i 'luí-, i le pl an! -' o > n ley p-t F'Se i |e mane) . - ^bl ijpiih i) de¡ ijnium, < de 3 = n 3 -. f? l -< r I i S i.ó 1 U 1 i de pl , , , I -i y Ir), 1-. , i o -J d<. p 3 , , ,1 -¡ ,t'l i-'f ' I UU-a i lf?-? piot ,n ? -o -, li'fu i i in"? ay ul e di-- 1 i ?!"l i h i i j ..' i i =e c f )f o, 1 i li-'t' a 11 que tí 11 ül iiii t ido e] gen nnl'. adot a l c i ouab le que oodi f i c a. e-,ta resi stenc ia r|ur a, *?] tratamiento de t ansformac i ón. Puesto que e3 yen nnn ador s encuent a unm nte enlapa o a Ice- genes virales, e puede 1 i ?> I -_, o je | , | gue lo-, gei li-1 -- . i r , 3 e . ll lll ;? 1 i.' -t Ui ¡i i I I i d, -, de Hguera simi lar . F3 au- i i - ci b i br' i clac i ón por t i n i ón Southern que ijy uní IGW n er í f i i. a pai'3 los gene-, u . -il-a-, puede f|e~,pué-". m l ar se pi t'-i conf i r ma! que l s genes e t paños han -sido ab =>or bidón e i n egr do-- ri el g n nc d- 1 , i tdul i de ??ant.3. =U lé> ,?o i pnoP' I . n.ti i n p)> ?,p, ,? ?.,f?j? ?o >. let'l a t íid ic í t on en i ??.;nl ?i ¡3 num r de c on i i- un 3 y — o . ¡ui-. h n -= i di i nc c rpo t 11 t , r lio. i r ¡ n .,,- 1 i pie \ ó r. e, t ' o -, a ,',,-- en fot -nieo efi ?RNin uede MH:I- . j i -".o i le ] fi, i soia a fie 1 -. 11 — --rifle» til'il l - . i - d p iill t 11 a i. ón de I t i i - i ó 1 i No i t ti e r n del AR N . e 1111 a •" l o! ,] y -',j ARN i ei n] a i giii- h- -, i do el i» oiiioc t do ? i-r ? yi _,n ir. p..3 ? ade?n 3acla Mfiléi n - e APNt»? abar ad -, d ut r .i l al. a ("ti e de 3 a inven i n -.cu l 3 -i titoléi lila- ue i oíd l d n -,ef"uef?f 1 ', s i 1 i al e:- e i. ¡ ¡ , ^ _ ?.|e? ¡ '.-- il- -, de 3?i— i efié , --' i c -..1 -, u i e .t n l e - e i l .< ?—? i > 11 1, r o i i i m ,i?.. , ?t III.H I » -— » i i 5 t"i? J St?t-3 p 331 (dad que 3 a . 1 ¡1- 3 p e|?ó?t? 1 ' o ' t r -. ] di-1 ta ,,,--, 1 ?e ; :- yiiO pliedoU fm'?»l-l 1 pll H;' • If t.-i-e-j c 1.1 f i RN V± r a 3 e -peo í í , r i > >_¡¡.. 1 . pnl -t t ld id opueal i t l a pol ir ol id de] APN genó.i, i C. i i -.3 h -. o l -. f o? ifl i r I i IÍ e-? uo— i i i i - . en t- ] P , ,, ! ¡ i , 3 , ¡ -t ,p? ^ - , ,'- ..» i] e! d i] '.il i . U de ola i ioOn. t -'- u ~.ou iiti o é id as UUe coi I ] .J -^U -5 e?. neft) 1 a •— V i i a 3 es espec i f j ca-. c'i-.r l ad^ S de 3 i. ' S wnp-, virales presan e er» el vec or ransf rina que son de polaridad opuesta a la polaridad del APN genóinica iral de tal manera que pueden formar pares de bases con APN genónuro v i r a l ba o l a -, cond i c i one:, de >ct i .. en el o -p í ' n lo 7 d c,8íi?brnol efe d 1 . < 1 *?BV> . L a presenc ia de np yeit ele proteasa v i ral u d tamb i én aer ter l acla nie i ard e en-, ?yo-> i tu") i rec 1 os i orno poi ejempl o en el • - -o del en-cayo de 1 =t I i fn i ón W t n ?]e.-,?. i t í o por Ma t t i ol „ 1 íPnn , N t t l . i id . r., t . l l.?.A. Df?, Al Ci ^^ ^ r , Ha i t í et 'ti . i ?( ?-t 1 i i »e nn Ull-t p| ?|h» | ?w d fu-, l ón ijiie i ?l|¡l l fifli-' 3 a ) I 1 ll l-.-, -.--, I 1, TV'o','' I ' . "- I yol 1 i i ] l |! ? I ,J I" l l I I -> fe, fcirtiia 1 ofl el cons t i ul- tft efi l baí o. Pl ant.t -, t r a USciéni > -, fnet'OU Oll-v yadaS llied j 3 I 1 '" ^ Jp i] t -i i , de 3 -3 ' 1 i |? l li Je-,t?-.pu U- t a l f ) rodnf i, O de yon d y 1 i irl i Of i un nt i u r o d y 1 uH „ N -,? d ame.?-1 e =.,>. e; pi o, . >_>rta i roí í na y r?! n e- ^-?3 anta , -, i tic que '-»] ni odi ,<- o g l iiH fue d i U I ado de 3 -t i i eín-i de fr.ci i n, p )'ob - b 1 c tu n t c med an e Ní a . I - i ?» ?i ,l,t'fn i ¡ .1 l o-, pi d i •- i i u - ni ?? »d e| ?-,a y -i i ,e I -)ui¡? ? ¿i| por mi- 1 I o de o l ud i o . de i ,p - > i i.ia d e , |?fp? i d,?? i.le i nn ' i fit i dad i , ."i l o pi re---"1! 1 ta i ) en I é i ,»? t n.i -, yenera l e-, por1 I a hd et -") 1 . .'"r-ue , 1 ;"< , 1 R1 í l ?71 ! '. donde iil iil i ; -sou c 1 ) -, i f 11 nh . > orno , tott.at ii a -, i na,, do i lu í ¡U i er hoja I i i?.)? U 1 -J u » mué ,lt,? -f h i l? i ói i de «,' f !¿< , -, í i d . m-i - de ni -i a i i O o b i n ? 'i.?'r'.l , ! >) , , V??o 3 3as de nl afi l, , a reuenei -uia -. .-i p.¡ r l > r ele triil l i . o I ? -,?.¡l a r ,e i ul t i va fi e] i .|f?po y =e -«ut cipo! i , » Z a p-31 a yeñei ip plantas de r pro ucci n fie] . La pn gema de e ta pil ardas se vuelve línea? de r irodui-f i n fi l ev luada a para det rminar la esisten ia a los virus en el cam o dentro de i , 1 I i , , ,, JO U l Dll'l P I O I I ' , 1„l| l | l-'lli ^ l l».| , l I - - 3 lj t" I i l|„e I i 1 -a 3 di - 5 la plantas rv-?i st nt es a los virus es mayor ^i muchas coitli i pm. i onea híbrida- diferentes con resi-tem ía n.» ui uei p rt disponible-, par .-» su n ri a , Ad i c i oui 3 mc-nt , híbridos adaptado.-? a nru parle de un pa í -> no e jt,An adaptados ?il,r3 ial t deb i do < u» fe( em i "i b en ) -,y, i— i ?|i?> i poi ejempl o tuadus'e- , en f , o i p., 11 <* - ! i oftto t o *-4¡- ,¡ r>? t ., l o-, i n -,e, lo,, , r.->h i do a ,_ .! , . . ,p. »? I o -»-, |ie? . - — a t i o i »¡' oí i p i. i l a e- i -i l í !? J a. >, i » a 1 en mi M I -o i ii'iifiei o e ] J i , a - j ) a t eñl a 1 es d ! =< 3 iiWI?I' -t ue -j pued |i? n?l???.1 i' ?">..iti--11 i i -,a _-, i > )t(¡b mil 1 i »e 1 '" í i ad i i i on l a i e- i r, tertc i a H' H' I a l r- l i n e -, .groitóiíil C ?in i d O é] l ie-. Se ogí ije ?i"? inai a nd-t , P ¡ ir o»flte 1 natli i » -=>e ei 1 I, j ef i? l?-> el iTiiihi ?] geue J ?"? de 3 1 •- -j -.teUf » -, ! > 13 . F , t O 1 ' e 1111 I o t o del c t u 1 1 > di p 3 nt - 1 o .1 - , I u I e " > _,c>lt-, 1 pj 1 s V dr- 3 e-d nd ' o el na ! 1 óu de bei efn 1 < , 1 — eiia r T'C, yenet i i nrtc» -- p-. ? a uel eí ?u i n-. r ni l a t t rii ei i _=d o-a -e e' pre-,a . oiiii.i dotlt l <>a t 1 I e O b i n 1 e. e ; 1 ¿- l l 1 µ'iilio ro e ,,e,,e- Li?. > l ?i?. t 3f|?')=? , y 1 ii- l?iu f'l ? pl r ,?rr l ri po- i bl e f-'td [ ?- e - -.1 3e req?¡ ? r»re ,J?- (P-3 , ?¡.- miu µ i i' í e p n-» , 1 ó 11. Pi , c?-, |d.o a pl 3 afil i a l l1 a - ?n 11" - S del t ipo pp o ,enl fjo ^a cp 1 í 3 -, T^í l rj fisgo ríe-, pi sent -in un ,-ompor t ano et tto u n el i a ,-» •, dom í nenl e gen único. Fste anál isis genético puecie ser p te de los efectos, iniciales p ra conver ti las l íneis agronómicamente él ites y sin e bargo sensibl p en I fne.ts res i siente . Un i )l ?)? o ~,u i je i U I I - . -, (. ó U »' pe I 1 ?-|i i 'U ,_ í i Í ! -,e 1 o. V S t i. -jiji) medíanle e3 ruce i a línea. r es i =.,lent e t. ransg?>ni ca original con mía línei l ite sensible y el cpi.ice de la pirogertia cié nuev » ion el pariente -,eits?b]e„ la progenia de» este i ñu e -,era segrey-da di-1 tal manera que algunas plantas lleven en o los ene:, de l esistern. ¡a mientra-", ue olra=. nr» . tas p>l mías qu lle -ui el o los genes de ic-i-denc i -f ;,er -?>n i i i i ' , do "i I" I < , . - i o? i O l ¡h l l Hlll r.1 ", 01) -i l h l e 1 i , i j Ue 1'lSlll l t | 'i en pn ocjero i ue -,e se í eg;? i i pa r'e . isleui i y ,en- i b i 1 i dad una e,? ird-i . E - 1 ú »e rep i te b-i -ata ue el ar lente 01 ujirt-l -,et i-, i b 1 i-1 hay-ei Sido C OU -'e i1 I 1 i lo en una 3 lltf'J t e l -i I el d e , y -, i n emb go siga no.-, j. < tdo t culo 3 ?.? -i etit?-,1 at r ¡bulo , i p rtante.-, or 1 y i i ti 1 tttei 11 e ? n ,-,, d i a i i o. a n l i ?a , t et) L e -?Jt IS I b 1 . I íl i programa e re I > o, .-i i ,' a ill 1 en 1 O le r tdo o- i op] emeulai |n para c d 1 íliea él i l e -.,---.» I i .. i h 1 f» que debe ?" ?n',-'t !,? i -,e en una I i tea F e— l -- I el de -• 1..) , v i i U1-) D .¡..i i »:, el re!, i - »c F U -tiii i e I ?.? 3 a ~> 1 I ftoa -, r si ten e-, y l -, i o?lb 1 i ! J i lilli"', i Op l 'i d i -, d 3 í I ll » 1 r, Cj' .o -J i n bueno- I I í b T1 i i lo-. i i )il?e ¡ i i - 3 e- -,e e ,' =? 3 ?.i a i t p l a de t, e p¡?? n i 1 3 t re",) -.ti-» iii Í -•, -> i.iu conjunto do- i -.. .yo.-agi i-i i i ó m i o-, iiH ij l ¡ I H ,, e p criiji i? en 1 i fie-, - ?>- -, ( -, I, ef 11 e-, e híbi oíos que --o,-, f íele» ,¡ t ipo l - l ín as e híbridos sensible-i or i g i na l es. F-=,to requ i ere de la ev a 3 nac i ón d ntro de un ra riyo de n i c i one s amb i ent, a 1 e -, n l a s c.ua le=. la s l í neas o bi en h íbr i do:, -r>erán cul t i do^, c omepi i a lnii'itt.i-' , I i |i? '--. ' ; ' l o . di ' I i ' o . O lo - ' ; .o d •..,,,, i I ?, I, i fai t en ¡ a itte nt se i uc r ^ent a ti y -.e e il ean p ra 3 a prodm c ión de h íbri do » U a Mido p? á? t ? _ ^, de pi'odui. i i ón es I n -* r s de h íbri do- , | A i nveru lótl se de ,r 1" i b i r :V ad í i ona 1 i ierd e r oñ l e fef en, (. a lo--., -., i yu i en I e-, e e»?f) 3 o-, de l a 3 1 -jil s . Fn,"1. i ma - frieron obteni d -i- part í l de f?>ettte-, i i.itliei i 1 -a l e . ~ó ^. nr, etit,-) 3 earla -, de i. O? i f Ci ? ii, ¡ 11 -i i oí i 1 "I - • e i ¡tile i ii I ,-n I OUi » - i li- 1 .' ende rio i ' o il l ml t t'a ~? .'.it tai- j rni - c ono i da , efi l a n • i - „ O os i ,f ¡ ¡ ,,?- , peyi i 1 i do I e", , t-» ! , . f i ? r Ol) ? )|) hi?|i ?|?"?-. a a t 1 i i de f ueut e , i oüte i i. i a l e- GI.II..'. po) e m l o -UFiOfl F,R! . e I I le-da „ ?ir , ^ ojtit-. ol ?et"' i. a 3 Ho _ , *?d -, I • )U I - , oo , -t tito n » .. cioo ,e e -iCiei 1 f -t ?p I—' 3 i ' Hit!, l a t' i o. L a >t,-tyo, í -f e 3 o- tfié I. Oí !?. i-, de D eí. O.TÍG» I . ¡3 - ) I e l ead - en l a tir-li l -i i ?|- l i pF ,->-enl f nvern ? r,n -ou ! ?)?. ,-'il ? ,?? i Hi-(l ?;i e - I 3 i t> I a re"-, b ien ,- f ,< i, „~ ¡ , lo , po ! p _? F I >- • de 3 r?— o ' pµ )" i i i , n l t i i a '- ? !-r,r r i l n-, i n de a l l , - e emp 1 n , i-f i l a puh 1 ( i ai l í' de ??)l n i i i id de Pa ten F? , . -,pe i No „ "?",, r?? , pn l o o!, e] di - ^n di-1 ?") i eutb l'e de ' -"r- , que -i-1 i r poi < aqu í por' ' o rei - i.i ? rf r Ro fei eni I i -3 nei " e qu..-' . 01 ! l eUeti ¡ a l e . péi fo 1 - -, 1- , ! ii t u i0 | , l iu 31 >y? .( , 3 - - - t -¡ > 1 eft t e , R . UÍ , . er| . , riethod- J . rn yniolog , vol . A„ ( i -701.. ? , p. rii l l er , Expíen i ents in Molec ul iv Genet í s (197?) f 1. ßambrool et al « , Molecular Cloni ny: A l aboratory Manual , ?da. ed „ (1989) ; y D, M. Glover» ed . , ADN Clomny Vol . II (1 87) . I , -, f o n , ' P< - . e I ' i i ii iili , 1 p t i a I > i i , ! | t ] -, ons I ui ci riñe de e, i i uverii ion. GTFM? ? I Para ai -lar manipular el en PFV Ta , ¿ lean do lo-, ni ui ide;, -?s s: 1) Puri f ic )1 vir ionea de PFV aislar ARN vi ral i PPV a y d 3 t prepat ai i óu de v i r i OÍ ler, ¡j ?? construc ci ón de i ADN de lieb» a t'm a do ?RM vi r ?l de PP ^ \ a lí f ?> ai 3 . Í :t d NI - i -d iaide am l dn a ión en reat. i iófi efi ?_-n¡en,, ue p> ) 1 t tile t -i -,-, n — -otilo j n } •_ i -j , Icirr -, e-,p c i f 1 i or, i le -.?_-»C i ii »|i? » a v i 1 j 4 '' el o na. i" l p?'?nlnr 1 ?| di-1 pe -ir i |ó|i efi i -,?|en,-< ?|e po] I tlio r a -,,.. un cu» c-t,c>s el l.e ije e; ore— ion 1*1 d pla.|d -i i fl]?..)? jij ell ??f| tíi tcil bífl3.? lo t)f)t ftp t Hi i; 0). pi i.idiii ? planta -> l i a I ?~?yó|l f i -t - pn1,' GJT -¡ • y ,'-,', i ? I; Í i "l p j oyen i i de l nta-. I r =» u ,g>»n i • i -, P> > p - 1 a i e, i f i c- r 1 f n a -, que i o i i f l — | ei i l,p, j i i Op i Oí I i i le -, > |e ,e -i i P. -, „ ri . H ! -i I a 'll t t i i o i ¡e , t-th t 'I >•' I l -! i l ?O ( ) r t H'-< r-W Ci l nl t . de i l lia, ' de cuel lo i y, ¡do i m r 11 -. de "* ,\ia-- de ii.l I nflilp-, en j u ve rn -i d ro f •• ni , , ,n, n l ad a > i. o» • 3 i • opi i Ul ís niilli-i de PP '^ Floi id-.-FTo, ?1 ía-, do ,pué- do ] -¡ 1 t ,1 UU i I 1 Ó I . - - h? - - flll-»f? |l) I I I ,1 I ¡I I I 1 -J - L -.1 i I - 3 ó ll|, v 1 I u , ?|e P . i" i lo i' i- -l i "i ?l) I e ( i i i , et ii i e , t i Q -,t- b a -, -, e l U i . tué i, i ii f i i T^i ,r>?.)d i f i i arlo n -ad por pin i i f??]l ?-d -, 3 » ( Fll \ i,?,p a I, bed Oyy , A0 , 11? ( 1979) ) pira ai -.l-ic PPV de t ipo W. Ap r •»!- i mau-tmerd e OO gramosi de t ej ido de bo e f re-i o fueron tioni geu ¡ a do-, en 1 OO tn3 de un regu3 dor' de fo-,f lo de pol a- ¡o ("•,. > M ípH 7 f"? TF.' i 2 1.. , , ,t , i e i i } -? í , 1 , 11 ' ,? i i , i i , 11- -, 01 | I o . 1 . - 111 -' 1 1 o I o o 11 uO ?r-? ml io ¡ el 1 i lornpo e c arbono. T)e=.pu>í>-, e 1 ent r i fuyai ióít del e' I rji l.o i 1 OOO g durant e 1 mi nutos 3 i pie] ] -, fue snspefiri ida do nuevo e l O jíi 3 de . egulador de PP y , entt i fugadi otl'i e ' A 1 OO > g durante O til! lint, na, I o:3 b i ena i I 5 rd e- i le nl- lt) t t O 11 i -i i l A, f i r t rí >_ i ),?b i p -«i lo -i.lo -.pi lA- i ení i i fugado:, -1 , nn d i.i r an e i nn ,_}- -,ob peí i _? da ut e pe-i i ] I, o i e , l y l egó Tr i ten i 1 o o i o i ?? e n I i .i t i ó n i na l de ] l 'l í v o ] n use > u' v o 1 u ?i>o i i ' } p?-,1 i "d; ? ?-»ng ] "? c?.»3 (PER ' " , 000 ''G fio de r>-.a i . 1, j vo pfi ?'ti ? ^.-| l,? de ro "a heiTl i C -- ] C? 1. ) a Un i of|i e¡ d. t -J? t i- 1 | f I l -i 3 de » ' í f)e -,! ),' Vol llllli'f I 3 y - l n| | I i t ii if el d: 3C l óf? f I • > -i 1 i h» 1 OO íllM . l -ji i -peí i'i i ó? i fue ii f t ada 1 n n a -t O-.I Tl - i"7 -- l i -.ll.,pHl(:, i f'lt f i.i i e¡ d 1 I f i ?y->? i -i i ¡?l i ,| 1 I e í , 00«" ;, i i illi, ,|?l ?- 1 ("> lio 1 |U 1 o— . I t •11 >rn I i i I--1 ir.3 - 1 p u e -. ni.. i. eril-? i fnyai i on . 1 ? •, O O ;, y ijm -i n i e 1 í" lio. fu.i i o-, , 3 -, p?-ll l ." f .?e llf íl 'l l l lil i >-' CJ 3 V I l I r -, f i 11-5 p |-|-"»1 )_ p 1 !_ Ci di I j ll l l'f i i !, ,1 ,oh reí ?a i |a t 11 µ tned i , u l e 3 - ^i ¡ o i » ( i d P G en i 111 i i of ?? i- 11 I ¡ I > i . I i t ' i,, 3 ?.l ," ,'n,. -,o k'? ) 3 nittoi i '< ^ rb T 1 h a - i -, oh l .~ Ue? ntl--. ,o3. ?, , ót t I i ll-l i Ue t i " 1 )|1, i , li l i i, -o i. i?.) i in t a i , fe , . , , i ¡ tot De-piué-. i.ie la , en! i'i ugai i on -i 1 ? , 00 1 I f |i?? -"ii l fi 1 mi nut H, las pellas fueron suspen ida -a de nuevo cuu la ayuda de un triturador de tejido en 5 mi de ?0 M de PE y a ] ir,--ido -lObr'e una protei ión de oS?sp al tí . en ? l| l I ¡ 1 , OOi flu i a,,l e IR liopd a una em r i ura de 5T, ,je centr i f uijdi. i óu, la banda de vi i u.a fue cosechada y d ial i , , n(a i. oi t ? mf de pp durante l a no he a 'C. La u e a r a.- 1 óu de i rus ?t? d i ada fue 1 -ri d y e] PNA Ji l f>) ec i pi tatio ed í anl l a -n c ón de 1 i Rt ha-i s u,?<a ui.iftcord i ai t on f i nal de ?!vi Fl P V i » =) 1 fue i ei n i-ii ,-??|n m d í nle i e? 11 p i f Uy ?c ¡ ól i Fl APN v t i ¡ 1 fue ,j ? nel to y fii Oi" tp t t do por el -uno ' .->u -.peí id J do de un ..o en . P. p ?)|?a?. t ólt y l Uyeu tei f -, o --• i 1- i FR\ í =, ' Fi a RR W Se p¡ epia i'? >d AR d PR',' Fi AR W d 1 i Cinfot oi > on 1 i , r i h -t descr ? t o„ Rub-,.->? o,-n l -.»,¡,o, d e ],? iinuí- I h '.r . de i D t r » e t ?RV AR" «i i-if-l t Uft-a i e -, i i , r, I ? . ¡ue ! II i i j ó lo - oju i n I e ? a i Olí i ' t m i 1 . e-.. ¡r-.1? no PPV1 Fl ARR LiJ 1 • t e nl adoi de Tt :<p-.? t i t ;. :,- T < vep -.a de R, ,!.pe?- ;,a pi l í-inlllti d i -do por RR ¡ - R T CT t Ri -and T-.?-Un! Y> , ? ,1,M de d TP " , l io , -do, de ol tyiiiliePO Pr"1" '".r". ( Z~> O un 'mi , RF tr< rjn- v, , -,o ni .p. ni .,,?, (GI MH.-OÍ , N:)> -„,f,- ÍA! T ' „ ', ^ . *". í 'I i |e T i -, t i ,? i o"l I t . { T ti .-'• t"1 -.3 ili- Ri -i"! i i-.. - -f i , 1 o ' Fp I plF-pp en ufi-i s ?-? 1 i- ', 1 I , 1 '1- -. i ?? | .,.^| ,¡ „ i ie e,-, i, a pe=¡ ? ? i , U Uu i-a i i Ut „i i (1.1 i, f c i- ,»-' HiPÜ i t'o 1.1 I » 1 R al icuota de la pi imepa re=n. ». i ón de IIPIIIU I orno templado en una reacci n en • adena de pol i mera-, a con RMM ?R-1 y PMMRR' (SEO ID NO : Z y -1, r sp i amente) pa , ampil i f n ar una peí i i ó U dw 3 y i lOlli i |o ' l.l'ir ' ¡.4 ! f l l I | . A l -, i I i i i | i i , Jl , i ¡!!"¡l"¡ ',' , 1 iiiii i n i s 11 a un c ?-)dón de inic raci ón de I r.-shi t?ii ATR„ E t r yíón inclu e 1 9 pare- de hjnn. de] e r emo T' del gen de CT , todo el gen ' 'ij. t do el gen de pr ol -n fila , 1 , pa t es de basea del e. i remo R ' del yen NTIi. F3 pu ndui.f o a nipi 1 J f ji ado por r a* i .óu en i d n di-í pul i i.iei --, a de 'iRRR \,? fi e i" ]?.)f)"id? l-'U i-»] e? i o, ¡iRRI T t il' l u i do en e] e,p, , po fie TA R 3 Of 1 t fly lll t '' -illlfo i I ( - i, i i i.l ? ? UO 1 T U I t 1 oyen O • l n , >e i ei I ip í ó nft c l on ijiit-' i. oíd en f a -w ?i?-;??? i a — de FRV (FFVNT-iFI A TA— "3 ) . ?.-d, e c ] i ifl f ?_)e —i i ueui i a do , i? i e i u -,? , i ie 11 ' i p?? lini ( euuon 3 —e ? -« rill i i i ?.io en I 'RF , P 3 e ve ] a ni I , Hlt l fi f , Fl r , yinenl. ) e N. oT de 1 F bp de PPVNI aFLA TA- -1 . ..ni en í -.i l a -, -ei.uenc i a a de PRV fi le cor l do d Pn T F| A T- - ,, -• i ,3 a,|? , l 1 l =? I1 t H C 11.1 i- I i i -i — r> ! 1 e -, , | e , ¡ i 1 e -, 1 n U l U 1 U 1 l jr.1 R t ß? pie¡ p >'e -, , „ l o- i . -,e I 1 i -i >ñ . f?r>:. ?ii?->? i i a f? I,?.? U i p-jitiip fia t i a •,p,z r-T..-'!?'! e i i , -ni i ido -", n e i o l o-.i RIJ 1 T T de pFFol 1 1 •"> . i -, m onot í . orri l pFF ""RO ( i l i , i f ; ni - . i ót i .'.11 o I OU i I i', ib i - - i i i ii e . I , i , , . i i o , |.,a i e> d a 1 ,-.-, iiti.) 31 . ado , en l a T -¡ i.) 3 ,-_< 1 ( „,'-.;, -,- 1 i " ,1 , , , ;_ , , J .1.

P-¡ e i f i eí ?? I i e. d e di--- 3 o"-? Re- ¡ of?-? • l o— , ii- l o , " 1 i t J , No, de eí ?e O?i.'R.'. ,^^1 , l i l , ¡3 -da " Tr ., .-.-.y- .. o Pl E,- re -si uy UNA Cun.t R? >rd a i ni f "J a Plural itv of Genes t I tupi a t l P , 1 S I a |)? e" (Plantan Transyét uca s que F,.?n»: -an Roei-I i iic t os ?ie ?RN que Cont ienen una Plural idad de Rene-, l 1 -i , -1 Pl i llll )! I t O U ! 1 í" ' '-> I - t e? 1 I , 3 O - ' , I - I j ¡ll l- iHljl -)l) •) I .3 día RO .Jo Td f lembre ,je 1 94 y qu se mcprpiora aquí pior of penci . Para i n formar i ón adicional sobre gen de pipo e f fia if e ve l i ilt i ef 11 o de PPV, é -^- 3a Ro 3 O i l ?i?| de p,, tente r en l nte de los Re-", i OIH r i os d los Sol No , il Ret ?e ?<P,'Zf-,?. RR1 , t i lnlad,( "p-t ya Pi ny.- f)¡ Vi pus Coat, pr lnin Rene" 'Reu de Fr otetn-t Re'-,e-.? imierito de] Vi I II-, de 3 a Min ha de ni l le de l a Papa^. -, 1 p? ,n||l a l ,\\ \ Ri" de p o. (etiiiu de 1 r'' 3 , que ,e o» oi por a uí por' ? ,.. e? fi? 1-1. Pai i infoi itsai i n -,\ , l ntl -?oh i e yene , de p. oleína re^e-l ? <et o 7VMV y UMV l Ro3 n i li.nl i Ojiend i en i e e ]o-. R gion l (o-, de 3?-> Ro3 Í? I t,if|l t»c No. de Re, ]- OR .'RR^ ,R«3ó , i ,,..,-,1,1,1, .-3 di-, ?R de Ab i il ch I^R-I , I l idi ada "PolyV , , n:, Roa t Prole».-, Renes tftd Fl dilo Tr a i t -o Ol illed ril j-eiiO ! h -, " ( Ret ?,S de P i i d e } i (a de Pe»'o i l i lll t e i U O i ¡e Fo ! y - I i u -, -i - í ? ? ulti i F 3 -o ) i -> -i I" • a 11 -o o? MI-, la-, po t 3 o-, Mi stf»? )"-> i jne -.e , ( ti oí i lo i , Jiiii { pin ) e f et ofii i -.. Para j f) forma i } f > id.i i on .1 en . i-itlo a 3 O , yeili» . de p po e 'ni de pe'vi — oit i en I O GM -C y RMV -...1 , ,¿ -.>. uotti ..!-) el l - , T Re,,, Vi ril , , "t , 1 OAR 19RR ¡ , l o - pl -í-m olo - b i ii-iri i f.?,-, o,? 1 , i , ..,f o? m-nli . - en 1 a i " en a i i PT > ' ," V Mi )? ' .»? 1 i |e t , , , , , l e, i i m I nitie , .-, i " , e f~t -, ' T a b 3 , 1 ' - (b) USA Tipo P (HA atenuado) Un lon de i APN (No. 9R J obtenido de P, R. ?os-< t e- di-1 3a Universi ad 'ie Cornel 1 en el e, tremo Z' de l ._ epi de tipo j? • • ! ! - i" " ,' !- i A i i i- ' i 11 i ' u * , t t ., i ' - I •- ' 1 u ó 1RP upi d ] extremo Z' tel gen Rl , el en ','pR eidero, e] yen de 1 -) pr oteasa NT a entero, y 14ó, bp i.te] e. ti mo R' del yeu Nlb (f igur R) . l o-, iniciadm - RMM .04 v PMMRRR (RFC) ID No, Z y 4. » • — p í I ( sám nt , -e m lea i on 10 diñ ante Ta a.?ip 3 i f t i- ¿i l ófl poi r ii o i n n ul I i lie. ¡ - a p 1 ra i • ? i'oi.luí i r -. • t | On di-» 1 e — t r r i i ó fi ni i >< rt i. ? oft i acta '- I i eftn-» ni-.] leyíllC l to de FVR . ?.....al , cío ?< tune • » e i ' I . i)i-?||?i!-i? i - Fl g,|,et i t'"? t e -u 1 t i li I e -t?n¡?l I f ICídu ¡lu. i i- a i ,.1 ó l i n f -tden-i de pol í r a .), fui-» diget ido , on V, ?,RI -. J-".-mLiT ' é-t ->o IR f l Cii'-f • ? y R ' y » lortulo iitOfi j ,? ni e tfi-itr-ri. ? ó(? efi e'i r-,, lin ¡iGFMX "1 (Pi ineya , fiad» .?"Ul , l'H '' I * - ".i" necicj , --, ,je PPV e,, el i 3 on i'í ,n 3 i a u l ípRFM','- 1 NT.i 1 >! n i n -»--.? ¡iµ-? i,.- j d a -, por i ?? 'i 3 eó I (di o. í f i IJI i ' i R í (RFC TR r-R; R) ) . NO |¡??!.m ,- ? nyuna di fet . (ti i i ?|?- -ii--"! ..ii-w ii. i --. i-Til , e 3 - - uoti i i ríe] .. ! , ,n "-"" l o , on J . GMV- 1 fJT=, - 1. ?RFMY-1 N T a - 1 fue dlyerido , >-,,. ?J? ,-, y el t -t y?,te? i ti ;. de Nc O I i 1 -?3 a, "lo pa i a i iaei , i r, n en l r -. .-,eJ p,_ , p-. n pl|C1 Rr pos , „ Ta o 3?j_ i.3 ot.e P - i o n 13 •¡ ni,"- i l pie1 r e-j -RV 1 i orientación de sentido y t pe, < pw=.,s PRV Nía 1-5 p ra 3.i orientación de -.rit i sept id > que contienen e3 f agmento NcoT de PRV fueron aislados. E3 pl ¿r-niu do que contiene el cassette o f o-'i i ', I 1 r, t i •'ni, t 110 ?l IC1 Re pei.pressPPVNT al-R . Fl pil s ido que cont iene el a sette de or t ntac i n de sentido se conoc e romo pl 1C1 Ri.pe; 1 -- . Rubse. nerd. nt nt , lo-, f p-igmerd os ti i nd T T I que i. ont teñen 3o-, ?.a;.??l l,P5 de e: ?re ;? óu de • ada uno ilti 3 )-, p 1 -isiiu do-, pUC1R ,¡ue i ou i en c ¡¡ , 1 e-~,qn J er .-le los c .• , set I es d >•;, ¡i i e". i ón fu>'i ou inj r t ad en e] -o tic» HindTTT de pUClRtB (clon p! iriR] Re pe- p pe a ;PRVMI-, 1 l y UCIRlD' e p?"e -_, a P T'i 1 " """ % | l 3 f)-"?p r>. 1.1(1,11 -. t i r. adi ionales para m.. l M lo-, c a -, -e 1.1._-» , ,.-n p 1 -i -no do -b i n« t if', ( f I yU i • ~? *> . Rnb :,?-? i ,e| i I efjien t e , -,e i i ,l .r,;)|? ambo-f i ymenl c»-, ?'bal y ^i -, iHT de p!IC1R]R? ue¡ pr es -.PFVf-Ta 1 --"• y pl ;C1 R1 R? pe! pre 3 iPR I i1 -R . Falo-. f r ay<))?-.'i) I O- fueron ¡ i ,-epl ados ti Im si t io "bal o tn--'n By 3 T T >. >.>, r eppurtd t ent e-, e pRA^-RRR, pFPR111 , ¡ FCR. V,, pFPRtO< . rPf.l' ', >-. bo»n ! o-, i ) 3 a -,?tl 1 ilii > ii lilai loS e-n3 ! aule-, fuer on i, 1 -i (t-jf i irui-uJ •=> en i i , -, - iRoyRí" 1 y P'iR/TOT d,-. Ayi ob n I IÍI' I . fcnmefai ?w| ,, i' ,-nl l ?. ?¡- yon de Ti no t . p.. PR'.' I IRA P í„ ! e,,ua,:, , PA "> f i .)-- p Pepa i 1 di) ue , ? ?> 3 I I í -. mi i i jl | U 'lo :,( I -,petl- 1 t t l t U i odi n o lo yi í P-. P i ra p i ep j i ¡ 3 -< ,e? ne, ii i i i ie 4 od i ' o - i -, r.e !, t e e p r -. i ó 11 pUCl Bcpe; p>r es , se i nf i odn leron -^¡i io^ de restricción novedoso-; con i n o i ado en de ol igómero, RMMRRR y PMMRR4 (víase fiyura 4 RFQ 10 NO: 9 y 10 , r-espect i erd- > „ Hipill'l i , RMMRR " 1 l"|l, ,-||?jn _,? , ,l,|- I h-lllOl í , Jt- " U p'. i' -' L I -I.' , ?ruco lo que resul tó en un rodón d -,napens i ón PI CH e] sitio de inicio de t rasl ic i ón. i l p y en ii mul t f u ido por el pa r de o] (g m r :- M RR y PMMRR4 tien una longi ud de 1 R9 fu rc-ñ d ía -ir. - = ?n?.?e -,1 ? a en l a f gnp , R, Re piue,, .Je 3fl.pl i f 1.. ;i... 1 ó f ) pOt i e -" i > i ó. • n i -¡ i ¡en* de po] i i) e ' 3 -, - el f ragmei ¡ I o fue ,> ?„?.?l, pin - ? n e t c ' f yeoél ica pa i =< obt ner' e] r , -, ; I l e de PRVNI a -1 í - i -.. mi ) -, i ón ) (HA ) i i n|?O -,e ,?¡ue- l , A en l i l ljlil a , Ft i. , -e I l e fue | i i-epl ai.li.) e,, ] "11 -a SOI I • Í C? -, Il l Tli l lO - S i- » i i i'i i t l o 131- » .11. ) •" l t o I ) 3 ,-. "^ - I i 3 a 1 , TARI A 1 FU fl: Pl a pi- n > - t GRV F Filt DGA?RG 'R120 MV- V i "i a T PRVoT d-IA'rROO :-,A4P.'",P I-IFPRI ÍCMVw. -? Vh al PR i-JT,.5- R (HA ?01 pRA4R" -l pRA¿! R- -3 nPRprü pp f- ?-? i < *-• 11 l i ' ,' v- XL i I PRVNT.il -"-! I .i \ r j j f f ??PRFt3 pFPR1 :".'? (R ! -' '"" 't-' Xh T PRVNTal -R f , - pRCRl 11 (P.,'7.'I-1 Ttij ] T K ?'J T --í 1 - " -. * r i r -1. *.... »+ i™.. j ? ? > t- n í i - i , -i - i F.gl 1 T F? r-7 . i -4 >'-,' pPRF» ¡"i f.~ P R 1 >"' .•"'-' ( Z Ul Bf.lTT PFVf-7,l- T. (-. - ' C. Transf renc ia d y n de proteasa de PRV a plantas l an f r' ui í mediada por Agroba* tepum de los ger?e=> de protea=-a de PPV u piueden expiresa rse en planta descritos un i f I ii- ' l o ( 1 l d? ? ?? .-mil, , 3 3 ,¡?é i i II I, i , i p ,? t 1 1 o . i i l 3 5 Solicitud publ o adz- PRT WO R9/0RRR9, titulada "Ay robac tor i u Mediated Ti a ?v- fonna 11 oí i o Germ uta 11 riy Plant Re d- íTi'a .-> fui'iHiii óu Mediada por1 Ayrobaí l pum de S i ll de-1 Planta n Germin ón) . I l úea , di-1 pop» no 3 ! r .1 n~,y?-»r 11 as han ..ido pirodu. ida-, on el 0 niiirl i iii lo de g n fJ?- de PRV del ipo l'RA P (HA a tenuad ) p'T'iba de -1- 1 l io. I * progenie d » pl .utas t raos ? n a-, Ro fue -p lada fi e] ?ri "t"i tt-iilc'l'ii, I s re -,u 1 i, a dos de] re o, indi' ait yii 1 a a p 3 a ¡"i I; :? :, Rl ti 111..g?-Vt • c i -„ Ta d » t ipo í^V UR? P )S?,i,i p IO teg 11 I <i -, el) mt-j edida -ulynt f 1 C t i V ¡ l?(|l"?l cniíl |'3 reí,'.) eje •=) PRV |-?o,rtó I ogo i or1' » contra reto de R h-»teró3oyo, Fn • i-iipa ra, 1 óu 1 011 1 os ont ol s no 1 -i 1 isy- n i? 1 ) , , 3 -t progerpe Rl li :i mo-?tr? 'Mi ¡nu. m í rdado y uno- .síntomas re.lu. o|o- -,ohf.-' 3a" hoja- y 3 -t fi nta del pep ino, F] e-,!,ad? 1, )' a U-.yéi .11 o de e-,!,a-, p 3 a t d a - qui-1 >¿er i f i f ó {un -.n ' 1 reí oilieuto V de--? Pol lo en ¡lied los Une 1 Odíenla- • HIMttlii tfia trt d 1 i,d,e a<?ip3 , T o u 1 ?n por re-n 1 < ón c-u 1 adi-ui d?- p?3. ., |)le) -l -,-? i 'e 3 o ! . , .|.,.jµ,|µ., .1 I I I t'lJ[ ?¡? j - T? )d-t . 1 -Í -. 1 J llt', -, 1 ,-• i n ,n?,t i. i - — i le 3 pe¡ ' t i lo y i a 3 -t b i ,- ? p ui >l { , fiir l ? l t lo— t I i ,' i , i t -i ] yi'l. f JPT J T fu U i a i i ó I i efl r a deft-f de ||?)l | lile | -, -, -i.. j -} tta '. oí11 a de 1 a ~> 11 re. n o niel n 'mA- ji- ] RO* ' fue n posi t i vas para PT1 I por reacc i ón en . l a mayoría de 3as plant as íotá=> de] RV/, ) tiv -, p-,p..i 3JPTT T por reac c i ón en c adena de fnd uner isa in^ ,,,, t-¡,t?b lín • n ' I ' "' -j i ) -i i -i -=??..-_? i |i i a -, d>-" o ¡ i . Al una -i plant as de e no I i j -, pa i a lo- ? or?-1 ru. n e,? nFPG^O PRV Mía mo-,t¡ ron un i nic io ret ? d=u > y un í ti fi de si id oma- de PRV redni ..la-, (Tabl -n 1 , 13 y V) , mí n ¡ ra -i une p'.i a- 1 í fie < a de ?o¡ 11 no I r a nsy?-£lu i > a - p * i a pFPRR?i"< nr i ul-,1 r-a t Ofi ningún ? ?-d a pdo o? el l íii. ir, de 3o , , { U I rifii-a ", ro ped ir i- i ón 111-1 3 - -,e , *- t i > i a d (Tabl - 3 T T y T < „ i i i ?e-1 S e ep i i i a u y '''i I O - - ¡' - ' « get ll i '-» p , i d >? , ' i le |µsµ.,l i tfl I e|) I O PP^' ?t» í-i t P I On • i í I .1 I HIÍHI i J i'/il i 11- 3 -e , e t 1 i I -< rl d l)? ?| i-, i entp i ib] i T '.I i ( I >- ,)?|? a t g» ) , - i >?-' i , 11 , odm ei , l,a 11 I o i- ] yi-'t . f-o a y Rp n 1 -, ut i -o-i l an po i 11 b o la i . ó r, -,f n l , l a p i . (y.- , ,¡ e i e:,f i ] I -, n I e . - -, a i i, -, ??,?- u i ,-• f e n i ' | . i e I i i ! H »l PRV. Ron -ni o. 3., u i lye í l ! O - T X MR .-aR-RRI c,V ROO i 1 ) I 1 - i , , J l . o l ll -, |J.| , p , - , , 1 I, , r t " ' , t ' , / ijl l I" ' •3 r u, i,, nFP Ri' I .< ? |?? oo 1 n.Ml-il , i -i < - ' I ,? ( w?» -"O , i I p I oy en I I - I ji le j i ll i I I -,' µ a ||l! i o - i HI..I , ... t - e -. . ' -,.- I Ti t a 3 ti"-11 d o i ,-» , ) , ! , -. f , I i-. i pro'' i 1 11 ou" t < t e »?? '- '-. I - i e— , -i l.i- f i -, * FF.' ,, i - 1 a i lo de F 1 of i .1 ÍFI ARR l? R i 3 , i o - _ Foi . oíl— , . ?? ? | ?- ¡ t ! r- tt " t i l:, ni-'t ii-'-, di— f ( oí í o , i le i e •_' O^ i tlo ei d i i de ?, ole„-=. |fn >>? pt ilo-, en 3 , ifl 1 >.? -t pl « t! i p)or lii!.. .dar ? óft 40 se;,ual proporc iona ni veles al tos de protecc ión contra PPV. Ni I e I OSOS p 1 -~)sm?dos binaros fueron prepa ados e in luy ron tanto genes ci proteína de revest i mi ento om de pircdeasa de PRV p 1 i " 3 ,, I | , I) i O I 1)1 i" 1 ÓU eil ¡l l ni-il, 1 , l"í. >t i , i > i e e. i ' t'iii. ed i miento ambos gene-, fueron i nc or por dos en esta p?3 an< 3 sin ne e -, í d a d de h tbi d-u. ion '-e,-.-ua 1. Al corttrai í o, ambo-, .j rif". fueron i nlrodi i idos pc»r iit i 11 o eje un e;<µer inte t » único de ransferencia de yene a ( I, i i n -f oí ac i ón . Re-,u ] t-tdo:, d r?- ?.? i ón ?-»? i ÍJIÍH' de piol imer-isa Í l - plantas 30 Po fueron pn obada-, p ar i det er m nal lá i rd ont n i on de] I 1 -i t , - JOI l Kl T -, i ¡i-1 PR Hl e> 1 ( t , i i ,- i 1 -, ntp 33 f O . i I ó U f ll i i i -> i i i 1 - fi,) t ifiµ,M do f)?3 iiliiíi o, ,|e ye pe-, {(U-.ii | |Mc)rr-. en Sobos e I, 1" eoO , d 3 '.l-i I ) 1. )l |ll)':? de i of t -, I i i ?? I, o i (", , t" i i lio-, „ Rol de T, ., .. te, do| ?JFTT T 1 IFPV Ta |RMV RP |r-:,->p.je Pe, e. I,,, fñ P- t'á ?í3 -o?t a--. Ir ÍHU>-~MO I -¡ - O „ ] -¡ !-? - ¿ a , piep ¡ n y mr-d ófo , p i e ,µ> .. i a ti T a i je P P ', ' -e e , I, a ! ) 3 e?. t ó itted i a l ó i |e l ef . ( ó í i i ?,_ i l'vOi.l i Ó r i ef¡ i H?¡fi|? i ?|e po] J ,nel -. -.-. de IJPT1 I V Rf1V C í -,'ó= - e |1H¡ , i I t 1 b i * , r ,l i ) , | ?»:?lll I l?|? .- i Cid O" i> I ?"|Ue -, I i ll)i IO-. iji-ilr- -, de PT3 T y Rl'IV RP ~,e .|,?l ?-'? l au, ene . i fd epuo;, -¡ e-,! o-, ,-|o „e Re ? ii Ui- t d p~¡ n I -amb í él i U re ion! o-, , pi- ai i.iiei i di-- 3 , i'.'piil l ido-.. de l ea. c i óli en r a.¡?-. ?,r. >'>>'' i o I mi- I , - de f ) I -í fl ¡ -. > I t "t i t r, o , t ( ", i t -, — i. i. J r . ?_ i 11 | — 1 i i 11 11 i -, n . i > i o||í lene,, . OU-.t) i.. . o líti-'-i de f i T -c de PRV pFPR pFPRROO pEPG114 34 piEFGl 13 3R ó pFP.R-'R -. 0 pFPGROO 4 O En a lyuno-, casos, se provó NT de PPV d i rec la erd , si n bap , en toclc»"., lo- • a i , lardo NPTIT y RMV RP u ron enray dos por ref ce i óri en ad n de po] unoi -^a F -.1; t I hí'". ?l» IP- I i'd l anta1, ele c 1 a b H , "t , e 1 ó f i y tii 3 r, , i i h i rio lO ', -i n-: f opina cl a uo ll l ruriu l i si adlo n 3 i- pr imera > 1 "* n)l( i -t ^ R -, i 1 , -, i 1 ;i t - I 1 1 i I i." — • ' • !"J T -t 1 t -1 P P '. I -. ,? »IJ I i ' íl | i , ) 311 fl 11 i -.

Mi o a el |??'n¡,opo de pi ar !"-. -. en l -, i na le-, -,e nlerd i í 1 i a 1 on ule 11 i a t t l i Pi. i i ó i i eU i a ijet i, 11,- ( )> ) 1 i i' a a -i t a i 11 o 3o , y o, ,, » , ,j WPTI T COltii i de {11 ?.-d-?-? [ , t-t ?.'e tM5:?l l |l|| .'"ii'.fi de tVj . I. a !,er? ?--.t" IR ?_ ol i i lili --i 1 n i i. t e] d?iiei i) de planta . i.iue fnepofl pio-O l 17 a s pa.i -, e] yeil de NPTTT y i ?-»y . t i «' 1 "i ¡t p 1 -t ¡"> o.d.i- f U i de | i'?H,l oioerd o d Rt"íV - «03* d-- law, ¡?] i?i -, p , fib'.td.i -i j ) •< i a l.iFT T T i f? li.-'i Olí i i , 1 I l ." ..i p .- i <: i- 3 y en de 3 -i p I te f t , - d ? e «.' e . ¡ ( nt i e I u i i ni- oí i .-' i ?~ « RO Pi-l d l-' . jüli. .»3 i pn o<,„o-ut n i.Jtr pep i no MR64""--R"",7, 1 on-V, 7 riRó,"] -9R1 -] -? Z. A , oul i ttu -o i u d imo-, i i o--, de |?i ul t'i i i ó r. pi --, l -? p l 'i -y r_- 1 i . e ije O -, t e i 1 11, •< iii I e i t i t 1 „ F 3 .,' 1 t i i , .je l el o i i ii j 11 :i tp ?á .t 1 -i 3 i l o i le PRV ae i »?iij i 3 i- ' ó ¡HG * I O I I- » ' I" p i oy o,, i o I t -' ?-t.,y?i, o i. a el i 11 r?. o » • id í i a > lo . F i , ?ú,?,o ¡ > i di-.

R5 ol an'.i - i ud i i a el n me > o de. iii ouenie de] cpi.ii 1- R-ola ,,, \ de los tres retos listados a c ont i nuac i óu es un e; pep mentí.) separado. Cada e¡,per j mentó de reto incluyó progenie individua] sepiarada a pía id. j r del i t'mt? anterior. Por ,-, . 1 j p ] j i i i a i ?? o i en .- i , l o do > íí ,' i ¡ i-»-, , o , un pl-auta di ferente de la planta no. "1 " en e] pel de PRV-RA. Los rebul tados de la reacc ión en faiiuna de polimerasa afiareí eit resumidos en la c olumna Rp/NTa. Tanto la p rote f na de r eve--t i fit i en i ) di-1 PRV co o HTa de PRV fuei ou ensayados por1 r ai i ion en i (dena de pol itaorasa . IJp "-i-" ¡ndi.. a nue f gen fue identj f 11, nlii, y un '' - " j ud i • a ?i niecl i a rd e i eac c i ón en cadena de pol t m ? » a~>-i no e o Jen l i f ó l g in La i.1 =, => »" i • ac ión de 1 t en f pmed-ad -i-1 l lev a >_abo 1 o-, 37, 34 y 71 11 i =t -, despulí-:, de ] , i µ ir 11 ] a c j ó fi (DPI ) , i. a s c 1 a - 1 f i c: ' " i i me , •Je la etu'ei ilied í] .ae ub i i ail de.-ide O Í-ÍII ñi;i|µ i ÍÍ i síntoma—) -jat i 7 (sínt ma -, -,eve? o., 3< , NT indica ijue la pi iiy riie ret d.! nú fij pt oh i a pior I'IMI >" (ón en i adena di-» pol o>te, a -, i . i i u- i-i | reto Pl -uta No. CF NT ,.1 i s i f o. ac i ón de en fe i n.edad i'r I -'3 'RV--FLA8" o (S ( i 0 + /- NT NT NT NT 1 NT 11 NT o U T 17 NT NT PRV-RA a- .'+ i .'_ + i T ir NT 4? PPV-NC NT NT 3 NT O 5 5 NT 7 5 r> NT 7 5 3 6 NT 3 7 3 NT o 7 7 8 NT O 7 7 9 NT O 7 7 to 10 NT 7 O -J 1 i NT O 3 IR NT 17 NT 7 •=) R TAPIA I PRVµ--N7a 1-4 (s) RnVWI.AR-R Flanl-.-, .-, ni mu Si I i c a -, t í i lea V i r u s D DPP TT N NPGTT--- TT II F F rop i . i ó n ( V, ) riRó4R~9"r130- FRV-Fl IiRr + + O ''AA ÍO) roo-e -- h>t'ft < 73 R(. PRV-TX 44 OO//óó,, (O1. 4.'0 (RO) PP''-NR + A ''IR (Rí PpV-Fl 1f, -i V. ÍO'. ÍR / ) PPV-TX 1/6 (17) 4/5 (RO) PPV-NC 12/12 (100) PRV -El O/A ( O ) PRV-TX 1 /A í 17 ) 4/5 í RO 'i PRV-NR 1^ 17 ( 1 O ) 0 lO d euf oí i O . O 5 ••0-R 7, 3 O . O 7.4 .5 1 ,0 (¡ •1 „ 7 , o O . O 4. O 0 „ ? « 1.o 7 O TAPIA TT PRVH - NI a 1-1 í =, < RMVWI AR- R P 3 a ut - -., -i i 11 i ?..i??ií< !, ?.?. a , i i ne- v¡ pus DG T NPT- TT Frop.H .. J r. Í'P RAR 3 O -^7190-- PRV -F! 1 :" -) :' '9 (O i A ,', (]00) 'RV- R í i--; ' ,' PRV--FS ( 77 ) ( 3 OO ) K - i i\ R/R a" ' í 1 O '• PRV- El R / 9 .'1001 o ,"•} ( 1 OO . í ne - a i i l i I e i ttieij'.. ¡ GA715-93190- { ) . O 200-70 5.0 O. A -i . " 1. o 5.0 4. 7.4 TABLA T I T FR VH- NI -, 1 —a- í - ) /RNVWI ^- Plan* :, -. t f i »n?á I" i C |. í i n-»a V 1 i u - OP I PT-IT ?")l )o? Cl r.r, MRGY- ^R? - PPV-RA R F? - 1 PPK' -RA Í ; 3 i S i f ) ' i i ó le en f r ttied -i :i30- o . o O--R 5.0 7.0 i. o R - O TABLA TV PRVh NT-a 1-4 (s) /RMVWLAR-R P 3 --- 111 a :, s i 111 i indi í o- -i :-, I í ne-i V i ru- ^ P ' NPT-T J P ropior r j óu (Vi 3 HAv15 -97190 - PR - F? O ,'R CO) ? I".- AR ce? Í I G.O\ PR -R? ;". 'A Í ) 7/7 íl O\ PRV- TX o / 4 Í o \ R '9 C S', PRV-Fl = O O ÚV, 9 *? ( 1 ) ppv- O .',£> í ;"? '< O / 4 í O ) R,'° 'RV-Fl (".,"-", í O ) Q ,'CJ o/ 1 OO ) PPV-TX 0/4 (O) 8 -'9 ÍBR) l i rtea > 13 s 1 f 11 a. i ó t de enf e, medad 0 O . O ? 0 -68 <» . (• ío i ( < .. ' TABLA V PNIa?2/CMI.41 /ZY"72/WMBW72 Pl nta-. - 1 n* otr?M 1 c -t s Línea irus DPT NPT-TT Propor.-ión (V.) ¡3A14A 972R1- PRV-Fl 113-A 4 C 1 OO ) PRV-RA Co'7 ( ) h i A í 1 o ¡ PR -TX O/R í "J 4 'A í 67 ) PRV-NR cr *. (RO) PRV-Fl (7~?\ 4/4 í 1 O O ) Í7? ) í 1 u". ' (RO) „'-Nf (47) c 1 or ) 4 C 1 O P o .'"t1 ) C 1 O O '< GR' 5 A PRV-NR A '" 'RA) 1 O ) 1 3 , , 1 f 11 1 1 ,,? 1 de enfermeda 14A-937B1 O „ O z- A 7 ,. O O ("< A.' ¡O (í , o ÍJ „ l 7.4 R . O 7. A 1.1 5. O "1. O i» 5/ ? .8 4.7 4.3 TABLA I FRVWMRP1AÍR) RWL/ZY72/WMF;N77 Planta -> hiiiln.ii n.3.

Línea i ur. DPT NPT-TI Pt opoi cióu (V. ) NRA47-9771A- FPV-EI 4 +• 'R í '< r-, ' ,• í RA t PRV- '4 í O s. 13 •' 11 Í i or. \ 'PV-TX PPV- NR -O PRV- E| R '8 i 1 O ' í 1.".i" ) 11 /11 ( 1 r ) 1 . ,\ l -No t - V - I" 1 , o . -r C , B í ] ( ,J ) í 1 OO ) PRV-CA 4/4 í 10 ) C 1 O ) , 3 ",r ) ..'A Í 1 OO ) PPV-NC 9/9 ( i o ) ( i oo' i le en f e rtiet I -id .0 i ' . ¡o o 0 r 1.5 o o 4.4 0 ,, , i i O - O . O 4.7 .0 4.8 4.7 4.R TAB1 A VTI PPVWNRP1 A(R) /RWl /7?-.t7''NriR 7' Pl n l- i ni i í . te-, Vi ui , OP I NPT-TT |- f i 11)1 1, 1 I />, i IR GRV- FI 1-1 A/ A í ¿ O ) R/R ' lOO' r J -Ce 8/8 ; 1 o o ' Í i oo -. PRV-F c 1 o o : R/R * r r * i 1 . 'i * PPV-CÍ .' i o o • C 1 O '' PR //, i 3 Oí" ' R •'R í 1 OO '. PRV-RA Í 1..o í 1 OO ) AO L ínea c 1as :i. f ica.c i ón de enfe meda MRRY7 -97.77 - 7.7 71 ?- A 5. O 5 „7. ?.4 3 „ 0 0,0 TABl A VI 1 T PRVMic l A (R CNl /7Y72/WMB ?'? I. í nea. V i. rus RF T •TT GA71 --9-379-7- PRV-F!. - 1 ¡"; PP - /R (O) Al PPV-NC + O/" ( 0 ) 0/7 ( O ) PPV-FL 1A ( 1 OO ) í i OO < PRV-RA ( 1 OO ) A/ ( 100 ) PPV-TX ( i oo ) 8/8 ( 1 oo ) PR -NR ( i oo ;. í 3 Oí ' ) PPV-F í 1 OO ) ( i oo ) PRV í 1 o o *. ( i ."O '- PRV- í 1 OO ) R/R í 1 O O ) ppv- G? .' i oo ) c i o o í IHd -i I ir, o e i fe rttteda I M ' 1 í - ^ o . o o . o o . o 7.0 0 r o 4.5 A.7 3 O 1.O o O (J TAF3I A 9A FNRRRANTRR ^RtJRTRIJRTR 'RV -µ-r,' RA40 17 ' 3 14/1 7/7 lO/l' GA71' RÓR 'A </R 11 R 'f BP1 A O ,'Q "7 R MRA4'; 1 "'1 A4 1 /10 11/11 4 '4 A-' 3 /5 33/1 8 -'8 F. 'R i i 'R°' 'P, A5 8/8 V430A l o / 1 o 17/13 0 4/4 " 11 11 CA95 O, AA O / 12 GA715 R ,'R 4/5 R 'R 1 / 1 4 -'4 .T I M-l- 1 /R 1/1 11 11 9/9 NP A (7 ,'Q 7A10 RA111 TA1 / 1 o 4/4 R.' RA-10 4 '4 A9 /5 RA4O/100 R? r r\t '4 t" '11 * ' Toda - 1 -< 3 publ ii ^C íone-., -l íenl e , y , i.iiliei 1 l?r> de p l en es -10 itn o, popan a?¡n f > > • 1 e f o) e, ,1 ? a l oi-t •-> i ->e i ni orpí »r :> 1 Sn t uu 1 1 di ?a 1 titou le jioi refereiii 1 - - i ~< 1 nu ni 1 n h-? ar í ue-,? i i i 1 i oft ['f'fi-', t-.(t? ir. a „. -t ¡ i :, -, itto =< 3 3-a de =- '-' l ??i? -i - ( n 1 e 1 i U a - :.p f i.. U éf.'li -s l" Uo =3 e d ¡ 11- 1 e ( 11 e t ttti l? ¡ , ,' -i I ( -l 1 O" ICte - y fllod I f I 1 ti. ,?,?H'? µi iOi |?-»? I 3 31 -•'.' -, .' _,o , 1 ,-. ' 111 , l ?? -, < 3 1 t" .e ro i Jo '| e — p í 1 1 l,? 1 i , i del -. ]." ,. i i, o .i. - 3 -1 pl i -.ein , i -- i-i llC I ó I, .

Claims

7 RFI INDICAR IONES 1. Una iit lA o a de ADN aislada y purifica a que consiste sen ialm te de ADN que codifica la Nía proteasa de la cepia i ' l i tio F t AR !?) I I e ] I t i i - d i- > 3 • ¡ lll i i i ',> ' -o o i 3 o i i- 1 , p3pa . 2. l a molécula de ADN ai slada [mr f ir acia e la re v t nd if. i i ón 1 qu consiste di1 ADN que codi fica la Nía pnd cí de la i ep»a de I i p>o Fl AR3 W dt*l JH'iiá de l manc < e ani l lo de 1 ^? papaya . 3. 1 a ?ii?il?-''? u 1 ,< de ARN a i .d la y int't f i >~ ada de la O j ',. , , id l l i I ,-', i , 1 ?|e 1 ¡ , ei i -, . |e ¡ i i l R! ?P7 kl di-r V 1 1 ? , , ? je 1 i 1113 U' ll 1 de f l lo de ] ,_? p » p =f y a i ¡ue I ] en 3 ñ-aoietl iH I if nú. leó f or. esen -id -t en l-i f ojur i 2 (RFQ TR NG ; 1 ) . 4- ! In '.'i-1! ' of u . oiikp end nn i. a---elte de e pu e-o ón qu i ifn-'-u i? " que i i iiti i reí ide 3 -¡ tii lOi ol a de ADN de la rei i ndica i ton 1 , un i ouiot r j una -,e~,,a ] ,\^ pol a ..leti i 1 ac t n, donde el ¡.n ot?i i >>r i-s nld. do ele fitsner -< upé. 13 c- i ou 3 ? tnc i-'f.n 3 a de ADN, y 3 i molécula de ADN i-e,tl', -d-. de ul-, uei t np?-'( aO e i orí ] --eña ] i.le ?.?] t 3 -n l ón. 5. Fl vMt t or de l a Híl ViliHli ai i on 4, donde el p i o.lto t o , es e] proiiiid oi TOR del v i pn -, de1, ,??o , 1 i i.i.t de la col i f lor,, ó.. F 3 . er I ?-?? i |e 3 a pe i V » i id I C n , , ó U 5 „ tli tile ] ,, St-ñ -i 3 i |e pol t njf'iii 1 ?? i no e-, la seña l do pol l ulero 3 ai i n del 'jen 7"»R e ilii.) -i a I i i-i i ti-. 1 -i i ] i f l i . ~7 « I ¡ti i i-Rnl i bai l-epj an-a u coin ren e e] vector de 1 ,( rei indica ón 4. 8. La calilla b;n lertana de la rei indica ión 7 donde la c lula bacteriana se seleo lona dentro del gmptn que i Oi i"-, ? -, i i-' i le nn t i" é 3 i 3 , ?-|e en i ol ?a > ' 1 I i n>?> cédula de Aijrobaí lepuii rh i .'ogfiµa . 9. Una c lula de planta ti ansf orina a con e3 ei tor de la 10. Una c él ul a, do pl anta t r a u-.f oriii-'d-) de ¡ a re i i nd a i ón 9, donde el p roinotoi , el pi orno! o> 75R el v t ? u-> del iim u i Lii di-- 1 ' l ol i f l oi y l a _.efía 1 ue po] a d ro ] -i , j ón e-, 3 ao 3 de .... 3 i oadet 11 3 -u- t n e] ijen 7RR del mo-,a o o de 1 -¡ f > 1 i f 1 o i . 1 ^t ^ l íCi a p ] f fit =1 - e] ? l I llli-Hltl 1 |?| ti l'lj de ] f A ,, } 1 j i |e 3 A , i i IPI U 1") ? I i e t S i ?ue i i ,?.?p | H||I|I I un pi n) .1 ( d d de 1 „ -j ?" l i i 3 a -> T t A_ ns f l'ii) id -i •> de 3 -i i i- i ... í i ti I 1 i a i" ( ór i 1 , 37. ¡ lu ' HUllA ??] l de ADN a i -,1 ada y pm i f l c-il l que i ou n l -.l i-e.>eft> a l tileu' i- de ADN une . í ¡ I f t i a ] -, NT pf lea 'i de l s i en-í de l ipo i IRA P f HA -i i en i-nl ¡ ) d'-u v i i , i . di- 3 -. m- m I n le 1111 11 o 17. I -i ?|l ] él ol a ?|e ADN i -, ] -' ll-. y pnf 1 f o -da de 1 -, l ei v i nd ii ->• i óu 1 " i- ie i on -o -te e ADN , ,^ . > )?l ? Í H -, 1 , T -, t > )l .-'-a -a de -. , ep a ue i o ! IRA P í HA ¡ I- '- , ~>" v i ? n-> de l '. ?,|-? i ?? I, I di- 1 -i ,1 I 3 3 o de l p ' I I I y -1 1 -'i „ I rt ?!)? 11 é? i .1 a di- ADN -j i -, 1 -j i la y ¡ii n t f n d -i de 3 f t'i i i iiil n -i i on I R de 3 <-¡ , ep de I i ?o i IRA F ÍHA d i-mi-jil-a ' ?|?- ! virus de la anc a de anillo de la. papaya que tiene la secuencia de w 1 eó 11 don mostrada en la fujur 5 (SE ID NO : 5 ) , i lili; ) I O! )l i O , t r, I i quimérica que comprende la moléi ul u'e AON d la i ei v i ud i ?;ac j.óti 12, un romotor y mía -s al de piol i adero 1 ac i ón , donde el promo r =,n eu3 a,-a de manera opei ble on la nn-d érul -i de ADN, „- la nmléi nía de ADN =>e enl ar de maner- p í -¡ble i on ] a - i-'ñal do p. /3 i adero ] ac i ón. 16, p v . 1 np de la i e i v i nd 11 31 ion 15, done!* e] ppiimid. or es ?-d p? f??f?nl-??t 70R del J I l'U 7 del tl??j-530 o de la i ol . flii, , 1 "7 , F3 v ? ti.n ?¡o 3a r ei v i ud 1 c ac i n 10, d ni e la ":.e~.¡l de pol i. iden 13 ,- 1 u •-» 5 a --.eñ-il de pol ?adef p 3 -> ? u d.-3 ij n 35R el mo-i-iico de 3 a ?_.o3 i flcir,, IR. Una 1 élnl b-t> l í tana ue com end el ^ c tor jie p,t 19. la 1 lnl bac ter 1 a na de ] a í i ucl o. -<? ton IR, de nde 3 a 1 ]u]a ¡i -t." reí . r-o --e 101 riijn-i den' Po de] ijf n que i. fiS i d e i.ie i i llrt ( 3 i.t 3 ,-i i ' Aij • ? )|.'l i" t i- • í i l l|i, o i (lie f -¡i l t-,1-, y I ?f>-i i lnla .¡e Au , ub -, i i f i , , , ,,), ? h i , oui- 'i te-, „ ^ , Una i u! -i e l -ntla l i an , f.i. iiuiid > o . ,d , e. ' o, e ]a 1 e ! l i I . I ti- 1 a 111 a I i i n s f o i ?i»a d -i • !»- 3 - , e ', i n, I i a i j ,'-, , , I J I.' 1 " t e 3. I )| > )| ll >? i ll -i i-, 1 i i i OiitO t O I '"'RR '"i e V I 1 l I --. lj¡-iit. i i a I i o lie i . i. o i i ? o 11 y 1 -O i' 1 de pol ?_ -?>l?-?n t 3 - i } ór es 3 a señal de pul i ni 1 -*•- ?p de] r, n ".'r»R del ÍIIOBÍÍCO de la c l i flor. 27. Una planta selec ionada derd ro de la familia de ] a =, ?.? n. ?.? i i.i t 1. '4? e . -i i ' inlpí ?;f? I»1 i i > i L U 113 d-"-" > é 3. I 3 < -> 5 transf rmada-* de 3 a rej v ind i cae: i ón 71. 23. Un método pata preparar una planta resistente a3 virus de la maní" ha. de anillo el 1 -a papaya ue comprendes ía) la tpaus foi tua.- i ón d l -. células de planta ron u i. a --.se 11 e de e; presi ón uni ét o a que ?_ nm i ende n?? pt otttotup 10 fiific nin?l ep lnl -t di- pl af.l -i nl-o i' i.i de n ra opet 3t_>le Cutí un mol i.u] -, .je AO ue i d i f o -5 u,-,a c li sa ; dcillde ] a mi 11 f n] i-1 ADN ->o i i Ja d un-.a p - y a ? 1 e? i i na d den t i O de 3 ?j i uj u") que ?-ons? -d e de3 1 i ? • Rl AR3 W y de] i i o I IRA P ÍH? i ltítiiiaao' ; 15 ?'t» í 1 A refjenei a. i ófi de 1 --, c éln3 , e pl arit.a fia a pi-OuOl i iDiiar "ÍU plañí a d i f ep.-.nc ?a a 5 y O ) 3 ,-c o|e||i i f i i. ac i óti de uft-< pl ant l a n » .il-ada ue ;,|jr r>-l el .jet) ?|e jipoi.OH -,-) di.» in of ua de a o l io d- apay a a U ¡ii i-'l i, f j ,; t nt e para .jne la. pl ant, a -,e su l v t e-.i i s I can le -¡ un t '"'O i fifece t ófi pot i--! ' l'n-.- de la t?tA?c¡?<> cíe nil lo de ]a p aj- i . 7 . R3 ,?l?l_O?|?.? ij?i 1 t t e i V I Cid O 1l l '-,r, 77 ; I!H,,I'H ] i if.i , lili". , l j ,-p_? ARN -.l--" ili'U Vi i 11-1 i ?¡ i a , ej.? "i e J i , , i - de 3 A f¡?a i n. I 1 -< de I I , 11 o de 3 a ñ i i -i . -. une i i ,. IH I a ü f 1 í e t ti i -, d i- t ti i i O i t i 10 - mi ' --- t t -id i O t , a ff.j.n -i 7 ÍR R TT. NR.Ü I ) O bien fi-juí -. 5 ÍRFR TD NO: 7'.. 75 2C» . R3 .ni-' I ?.?, io ele l a teiv udii - i ?ór- ""1, donde 3a p3ard -_< os ,,,-> d 1 i olí ledóll . ?¿?. Fl mét odo de la reí v i nd i ac i ón 27, donde el d ifejt i 1 eclón _,,=» selecc iona dentro d la fami l ia de a~? ruc-urbi t-Ai ^. 77. I)?? i'i luí u , ouipi ne?e i.'t. • ¡ -> .el ' e .'- .- _ . e-, ? J,< quimérica que c oiitprertde la m lé ula de ADN de la reivindii ac i ón 1 y al nú -a »i? o-ts-ielte de -.ru e-?ión .i i mér i e:a que » om rende un HI de pu ot a -.a de DR Reler ó 31 >cjo , n,, ij n de p ole-»! m l re-7'-1 -l i m t e? ? to >ir' P 1."', nr\ ueu ele µ? iil H ¡ n-l de l eve-,! ?.i|iaf|l.? de] -Ji ru- el .¡if) ";> a 1 f O dO UOpíinn, mi non di- ¡i? de pi .--, ! i .tó nlo de] i l , i . de iliijwn ii ii a , |e¡ i i 13 O i je 3 a i a 3.-i lia i t l -¡ ,( , i 11 i i •'ti uii IJI-O de i i , i d , , ( i ,,? i !?-. j e i n I i n> i i- . i I o i ¡i- ' L t t u -, " i ' v- • 1 ?o i -r i i o de 1 -i , -i i ¡i I f a i |ot n |? ' i r. cí i a -, -i- * 1, !,e . i1-1 ,-* u t e -, t o i i i ottiu i en' t 111 i ñ roiiiOu j < ,-' ., 11-< -.o,-, a 3 » 11 — pi i 3 i i ( t i 3 -i i I ,' 11 d nde o 1 ?n'>ii??>?l >i? e.-> ef t] - - - o de tita fie ¡ ¡ eJt 13 a , -ida de m •> m - 1 1 e i o( , la -ii-ñ -l 1 de o 1 i a de( O 3 -• o t ó u „ 7R , Una i é ] 113 a ba> le tana CUi- i Oflipi on e e] \. t-.. i m ?|e 3 -t i e l j i. i ?? I 1.1 -n t on *^~" i, 7ri> , lli i i i e 1 , .3 i le i .1 a n ! t r a I ? = , f O i itt -¡.d-a i of t --' ,,>-,, | , >, ,¡, , ] , r ,- i i nd i e -i i t ¡ i 7"? , 7 , I " i. é 1 ll 1 -. de Ll 1 -i | I I n l l1 -i I > -> O"! I 1(1" i !'< de la » 1 J , f ?? i | l -: l I ó I I 7R donde >-• ] pt ???„nl ?>> e --, el 111 otilo po i 70 R del -. i ¡ i , -, e ,,)? , -, , o i ,\, . la i o 3 » f 3 ot . 1 . — en- j di-. pol o, ó ->, , i I -, • , , i , e -i 1 ¡ -,oR 1 ñipo 1 t a > ten 13 i i ó u del ij f) V ?R i l ] tltO j -i I i o ?|e 1 -i i I.I 3 t f 1. I i 1 - Un .,>e?_- i i 11 i ii ? i o n i enr|e ?i|, i a : -.e i ! e d e i u '-? i ó O qniiiiéi o que comprende la moléi. ii] t de ADN de^ l reivindica, I ^I, 17 y al menos un ca-i-ette de e; presi ón quimérica que i emprende un yert ele proteasa de PRV ll o i i , ó 3 I I I 11 1 I 1 ( O I i i I - i 1 l i d O í i I I di •- I > , ' 1 J 11 ! I d ,- n ? . 1 I I I 5 ijou de proteína de revesti i nto del ./m u del sai o del pepino, un 'jen de protoín de rev ¡d miiento del i? u-? del mo -lai o át?t« ri l lo de la cdalnc i , o bien un ejen de piróte (fi de i e ve , I i tu i ei d o d l -J 1 ' u -, 2 de 1 ?t?? isa 1 • o de 3 a aa I'ICJ i a , i I onde C c a -ine ! l e e I-I1 j i re -, i ó ( i > omp) ende nfi . l o.uol fjr .-tef" a 3 l O r'o j n i 3 i a i leí i i 1 -, i ? fl donde e] pi tnotot -.e e?-,? nent r e o 1 =, ;- t_!o de lil i lie. , ? ,, ??? -b3e ..On ] a mol éi u 1 => do APN, y l a illiiI Aoil j de ADN o -i i— i 13 i _ a t l 11 y ' iil-i t ?O t a ou-t-11 --.111 i- ' i o 11 l -. ñ a ] ?_|e ¡"1 ' » 3 1 -l i I i, í 3 -t ' I '> 11 - 7R „ I I f i - i i--' ] i , 3 - 11 , i í e i , „f , u o t- » f ?„~i?tn i i i-'f n ie el v o I, O r de» ] , 15 re i -,' t t n 3 i i -,. i i ó n **,] , 73 , Ull > i é] ..?l a i le pl an ! , a I, i'af)-. for. nad ' or, e] ei l,o, ,\r. ] ,, t'e t v ( (id t i a '" i ói i 71 . 74. ' i '- i-'13 i.i 3 -' i ie fi i A 11 ! a 11 -t n-_- í~> ,\ ni- • I i e l t e i v i i ci e s >. i ói t 7 "3 , dond.-. e] i. i i niiotoi i •" el p rriiiii d or 759 del v i , , , =, de] < tiio-.-. i i" o i le 3 - col ? f o r y la señ l de pt,] i =¡deru 3 ac ton e-i 3 i -,?-.f, de pul 13 ieoi l i lótt del non 35 R del ino -- -' ] r , , de ] j i f » 3 i f I o i „ ..»