MXPA96006550A - Composiciones de polipeptidos de liberacion controlada y metodos para tratar enfermedad inflamatoria del intestino - Google Patents

Abstract

La invasión se refiere a una formulación farmacéutica de liberación controlada que tiene una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en:(a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNFR), (b) receptor de interleucina-1 (IL-1R), (c) receptor antagonista de interleucina-1 (IL.1ra);(d) receptor de interleucina 6 y (e) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1;estando el polipéptido encapsulado en alginato. La invención también se refiere a los métodos para tratar enfermedad inflamatoria del intestino administrando la composición anterior a un paciente que lo necesite.

Description

COMPOSICIONES DE POLIPEPTIDOS DE LIBERACIÓN CONTROLADA Y MÉTODOS PARA TRATAR ENFERMEDAD INFLAMATORIA DEL INTESTINO Campo de la invención Esta invención pertenece a las composiciones farmacéuticas de liberación controlada que contienen un polipéptido y una sal de un ácido algínico. Esta invención también se dirige a métodos para tratar enfermedades inflamatorias del intestino que están mediadas por un factor de necrosis de tumor, interleucina-6 o interleucina-1 administrando las formulaciones entéricas de liberación controlada a un paciente.

Antecedentes de la Invención La enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) está marcada por la presencia de inflamación crónica del tracto gastrointestinal. Una forma de la enfermedad es la colitis ulcerativa, una enfermedad que afecta al intestino grueso exclusivamente y que se caracteriza por la ulceración de la mucosa, infiltración superficial inflamatoria de las células de la pared del intestino, y en casos extensos de larga duración, transformación neoplástica. Otra forma de la enfermedad se llama enfermedad de Crohn (enteritis regional o ileítis regional) . La enfermedad de Crohn puede afectar cualquier parte del canal alimentario, desde la boca hasta el recto, aunque comúnmente involucra el ileo terminal y el colon ascendente. Recientemente se ha reportado que la colitis ulcerativa de larga duración en pacientes está correlacionada con una incidencia creciente de cáncer colorrectal . Ver por ejemplo Lennard-Jones, y colaboradores, Gut, 31:800-806 (1986); y E bom y colaboradores, N. Engl . J. Med. ; 323:1228-1233 (1988) . Además la enfermedad de Crohn ha estado firmemente asociada con un riesgo creciente de cáncer colorrectal, Ekbom y colaboradores, Lancet, 336:357-359 (1990) . Aproximadamente el 10 por ciento de los casos que involucran ya sea la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerativa involucran la misma ubicación anatómica, es decir, el intestino grueso. Estas dos formas de inflamación son parcialmente y posiblemente enteramente distintas en sus eventos patógenos, sin embargo también es probable que compartan procesos patofisiológicos comunes importantes. Fue reportado por Podolsky, N. Engl . J. Med . , 325 (13): 928-837 (1991) , que ciertas citocinas eran mediadoras de la inflamación, a saber interleucina-1 (IL-1) e interleucina-6 (IL-6) . Junto con la interleucina-1 y la interleucina-6, Stevens, y colaboradores, Dig. Dis . and Sciences, 37 (6) :818-826 (1992) , recientemente reportó que el factor alfa de la citocina proinflamatoria de la necrosis de tumor (TNF-Q;) estaba expresada en el intestino de pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino. Los agentes de manejo usados más comúnmente para la enfermedad inflamatoria del intestino incluyen corticoesteroides y sulfasalazina. La sulfasalazina es un congénero de la sulfapiridina y el ácido 5-aminosalicílico. Podlosky, N. Engl . J. Med . , 325 (14): 1008-1016 (1991) reportó que la sulfasalazina actúa entre otras cosas, como un inhibidor de la sintasa de prostaglandina y la 5- lipogenasa. La sulfasalaxina, aunque en general es segura, se da a menos de aproximadamente el 20 por ciento de los pacientes debido a hipersensibilidades como erupción cutánea, artritis, pericarditis, pancreatitis y pleuritis. El uso de corticoesteroides está algo limitado por el riesgo considerable de efectos secundarios y complicaciones potenciales. Fármacos adicionales, como clonidina, cromoglicato, cloroquina, interferona, y metotrexato son algunos de los fármacos descritos por Peppercorn como terapias potenciales para la enfermedad inflamatoria del intestino en Aon . Int . Med. , 112:50-60 (1990). Otra complicación al tratamiento efectivo ha sido la aplicación del medicamento en el sitio inflamatorio. El tiempo en el cual un material terapéutico administrado oralmente permanece en el estómago es un factor importante en términos de su absorción. La mayoría de los fármacos se absorben óptimamente en el intestino delgado, y así el vaciamiento gástrico rápido puede llevar a la pronta biodisponibilidad del fármaco. Sin embargo, una biodisponibilidad prolongada del fármaco es posible a través de un vaciamiento gástrico retrasado. Se han hecho intentos para prolongar el tiempo de residencia de los fármacos en tránsito a través del tracto gastrointestinal. Una variedad de formulaciones de liberación lenta y liberación controlada son muy conocidas en la técnica, por ejemplo ftalato de celulosa hidroxipropilmetílica, succinato de acetato de celulosa hidroxipropilmetílica y ftalato de acetato de celulosa. Un material muy conocido sensible al pH es el alginato. El alginato es un copolímero aniónico de ácido 1,4-ligado-0-D-manurónico y ácido a-L-gulurónico. Varias formas de alginato están disponibles comercialmente. Estas formas son típicamente 60 por ciento de ácido 1, 4-ligado-ß-D-manurónico y 40 por ciento de ácido a-L-gulurónico; o 30 por ciento de ácido 1, 4-ligado- -D-manurónico y 70 por ciento de ácido CK-L-gulurónico. El ácido algínico puede formar espontáneamente un gel transparente cuando se asocia con iones de calcio en un ambiente ácido. El uso de sistemas de gel de alginato para los sistemas de administración de fármacos de liberación sostenida ha sido documentada. Las ventajas de usar un sistema de suministro de gel de alginato para un fármaco administrado oralmente se base en el hecho de que el alginato no es tóxico cuando se toma oralmente, las perlas de alginato pueden proteger a los fármacos sensibles al ácido de los fluidos gástricos y proporcionar la liberación controlada del fármaco cuando se expone a ambientes ácidos. Ejemplos o combinaciones de varios fármacos con alginato incluyen Stockwell y colaboradores J. Controlled Reléase, 1:167-175 (1986) en donde se describen los sistemas de suministro de alginato de sodio para los fármacos catiónicos cafeína, salicilato de sodio y clorfeniramina. Segi, y colaboradores, Chem . Phar . Bull . , 37:3092-3095 (1989) describen el fármaco catiónico, propanolol, y su interacción con perlas de gel de alginato. Otro fármaco catiónico, teofilina, fue examinado con perlas de gel de alginato por Bahkoo, y colaboradores, Proc . Int . Symp. Controlled Reléase bio . Mater. , 18.:441-442 (1991). Recientemente se ha explorado el entrampamiento de materiales proteicos. La encapsulación del factor-alfa de crecimiento de fibroblasto (FGF) , el factor de crecimiento epidérmico (EGF) el factor de crecimiento transformante (TGF-a en perlas de gel de alginato de sodio está descrito por Downs y colaboradores, J. Cell Physiol . , 152:422-429 (1992). Downs y colaboradores observaron que la cantidad de proteína atrapada dentro del granulo de alginato depende de las interacciones electrostáticas de la proteína con el anión de alginato . En vista de lo anterior, queda la necesidad en la técnica para un medicamento efectivo para la enfermedad inflamatoria del intestino y un medio eficiente para suministrar este medicamento al sitio de inflamación.

Compendio de la Invención La invención se dirige a las composiciones de liberación controlada para el suministro de un polipéptido a la región gastrointestinal de un paciente. Estas formulaciones de liberación controlada comprenden una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNF) , (b) receptor de interleucina-l (IL-1R) , (c) receptor antagonista de interleucina-1 (IL-lra) y (d) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; y una sal de un ácido algínico. La invención también pertenece a un método para tratar enfermedades gastrointestinales mediadas por interleucina l, interleucina 6 o factor de necrosis del tumor, que comprende administrar a un paciente con necesidad del mismo una formulación farmacéutica de liberación entérica controlada que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado entre el grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNF) , (b) receptor de interleucina-l (IL-lR) , (c) receptor antagonista de interleucina-l (IL-lra) ; (d) receptor de interleucina 6 ; y (e) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; y una sal de un ácido algínico.

Descripción detallada de la Invención La invención descrita en la presente se dirige a las composiciones farmacéuticas que proporcionan la liberación controlada de un ingrediente activo en la cavidad gastrointestinal de un paciente. Estas composiciones proporcionan el suministro de un material polipéptido al intestino grueso y comprende una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNF) , (b) receptor de interleucina-l (IL-1R) , (c) receptor antagonista de interleucina-l (IL-lra) y (d) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; y una sal de un ácido algínico. Como se usa en la presente, "TNFR" se refiere a un género de los polipéptidos de la membrana del plasma, o fragmentos del mismo, que se unen independientemente con el factor de necrosis de tumor. Se conocen dos clases de TNFR en la técnica y se incorporan por esta invención, un primer TNFR es una proteína madura de 80 kD descrita por Smith, y colaboradores, Science, 248:1019-1022 (1990), incorporado en la presente mediante referencia. Un segundo TNFR es una proteína madura de 55-60 kD y está descrito en EP-A-0308, 378 ; Schall, y colaboradores, Cell , 61:361-370 (1990); y Loetscher, y colaboradores, Cell , .61:351-359 (1990), cada uno de los cuales está incorporado en la presente mediante referencia. El término TNFR como se usa en la presente también contempla las porciones solubles o fragmentos de estas dos formas, cuyas porciones solubles predominantemente incluyen el dominio extracelular de las proteínas, manteniendo actividad de unión y que son capaces de ser secretadas por una célula. Las proteínas de fusión que incluyen un TNFR también se contemplan en esta invención. Por ejemplo, las fusiones diméricas de dos dominios extracelulares del TNFR de 80 kD con el dominio constante de una IbGl humana se conocen bien (p80TNFR:Fc) y se describe en Mohler y colaboradores, J. Immun . , 151 (3) : 1548-1561 (1993) , incorporada en la presente mediante referencia. Fusiones similares usando las regiones extracelulares del TNFR de 55 kD con el dominio constante de una IgGl humana están incluidas en esta definición, como se describe en Peppel y colaboradores J. Exp. Med. , 174 = 1483-1489 (1991), incorporada en la presente mediante referencia. El término "IL-1R" significa un género de polipéptidos de la membrana del plasma, o fragmentos de la misma que se unen independientemente a interleucina 1. Se sabe que existen dos de los IL-1R, a saber el IL-1R tipo I y el IL-IR tipo II. Estos IL-lr y los fragmentos de mismo, se describen en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,319,071; 5,180,812; 5,081,228 y 4,968,607, y cada una de las cuales está incorporada en la presente mediante referencia. El término IL-1R como se usa en la presente también contempla las porciones o fragmentos solubles de estas dos formas, cuyas porciones solubles predominantemente incluyen el dominio extracelular de las proteínas, mantienen actividad de unión y que son capaces de ser secretadas por una célula. El término "IL-lra" se refiere a un género de polipéptidos, y fragmentos de los mismos, que son capaces de unirse a la IL-1R para inhibir la unión de la interleucina 1 a la misma. Una IL-lra se describe en Esienberg, y colaboradores, Nature, 343 :341-346 (1990), e incorporada en la presente mediante referencia. La definición de IL-lra incluye los fragmentos solubles de IL-lra, que predominantemente contienen el dominio extracelular de la proteína nativa, manteniendo actividad de unión y que son capaces de ser secretadas. El término "IL-6R" se refiere a un género de polipétidos, y fragmentos del mismo, que unen con IL-6. Estos fragmentos incluyen las porciones solubles de la IL-6R que predominantemente incluye el dominio extracelular de la proteína IL-6 nativa, manteniendo actividad de unión y que son capaces de ser secretadas. La IL-6R está descrita en Yamasaki, y colaboradores, Science, 241 : 825-828 (1988), Yamasaki y colaboradores, J. Biochem . , 108 : 673-676 (1990), incorporada en la presente mediante referencia. Taga y colaboradores, Cell , 58:573-581 (1989) describe una línea de células T resistentes a la neomicina que expresa un ADNc que codifica la IL-6R humana . Los anticuerpos monoclonales contra tanto IL-la como IL-ljS que son convenientes para su uso en esta invención están descritos por Luger y colaboradores, Immunobiol . 172 : 3467-352 (1986) , incorporado en la presente mediante referencia. Los anticuerpos descritos por Luger y colaboradores son capaces de inhibir la actividad de la interleucina 1. Los anticuerpos monoclonales contra TNFo; y TNF que son convenientes para su uso en esta invención se describen en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,223,395 y en la Patente Internacional WO 9216553, cada una de las cuales se incorpora en la presente mediante referencia. El término "ingrediente activo" se refiere a los polipéptidos descritos en la presente, es decir, TNFR, IL-1R, IL-lra, IL-6R y un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o la interleucina 1; ya sea por separado o como mezclas . la invención también se refiere a un método para tratar enfermedades gastrointestinales mediadas por interleucina 1, interleucina 6 o factor de necrosis de tumor, que comprende administrar a un paciente que lo necesite, una formulación farmacéutica de liberación controlada que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNF) , (b) receptor de interleucina-l (IL-1R) , (c) receptor antagonista de interleucina-l (IL-lra) y (d) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; y una sal de un ácido algínico. En las composiciones de la invención, el ingrediente activo se proporciona típicamente en cantidades de uno (1) por ciento en peso de la composición total, hasta aproximadamente 75 por ciento en peso de la composición total. Los rangos preferidos del ingrediente activo están desde aproximadamente 25 por ciento en peso hasta aproximadamente 50 por ciento en peso. Las soluciones de alginato típicas usadas para preparar las perlas pueden variar desde aproximadamente 0.1 por ciento de peso contra volumen hasta aproximadamente 5 por ciento de peso contra volumen. Las soluciones de alginato preferidas comprenden aproximadamente 0.5 por ciento de peso contra volumen hasta aproximadamente 2 por ciento de peso contra volumen. Ya que la inflamación en el tracto gastrointestinal puede ocurrir en cualquier punto del mismo, es deseable utilizar un sistema de suministro que se pueda manipular fácilmente para suministrar el ingrediente activo al sitio inflamado. La liberación de un ingrediente activo a una cierta etapa de residencia en el tracto se puede hacer manipulando varios parámetros de la composición. El tipo de catión usado para reticular las perlas de alginato efectúa la velocidad de liberación del ingrediente activo, y también el tipo de policatión usado para cubrir la superficie de la perla, ver Figuras 1 y 2, y el Ejemplo 1, más adelante. La liofilización de las perlas de alginato con el ingrediente activo puede conducir a una velocidad de liberación significativamente reducida del ingrediente activo comparado con las perlas no liofilizadas . El ejemplo 2 y la Figura 3, más adelante, ilustran el efecto de esta liofilización. Otra ventaja de la liofilización de las perlas se ve en que mejora la estabilidad en estante del ingrediente activo. Además, al variar la cantidad del contenido de ácido gulurónico en las perlas de alginato, la liberación del ingrediente activo se puede efectuar ya sea rápido o despacio, ver la Figura 4 y el Ejemplo 3 más adelante. Además de lo anterior, se proporcionan los siguientes ejemplos para ilustrar las modalidades particulares de la invención y no para limitar el alcance de la misma.

EJEMPLO 1 Preparación del Complejo TNFR:Fc-Alginato Este ejemplo describe un procedimiento para preparar un complejo de TNFR: Fe-perlas de hidrogel de alginato. Se obtuvo alginato de baja viscosidad (LF10/60) en Pronova Corp. Se preparó una solución al dos por ciento (peso/volumen) de sodio-alginato en agua destilada. La solución se agitó durante la noche y se filtró a través de una unidad de filtración de 0.45 mieras. La solución al dos por ciento de sodio-alginato se diluyó 1:1 con 2 miligramos de TNFR: Fe. Se preparó la proteína de fusión dimérica TNFR: Fe de acuerdo con el procedimiento descrito en Mohler, y colaboradores, J. I mun . , 151 (3) ,-1548-1561 (1993) . Usando una jeringa de plástico de 3 mililitros con una aguja de medida 25 3/8, se transfirió por goteo la solución de sodio-alginato que contenía la proteína (aproximadamente 10 centímetros desde la superficie de la solución) en un vaso de precipitado de 15 mililitros que contenía 10 mililitros de una solución de catión divalente de reticulación (Ca2+ como CaCl2, Ba2+ como BaCl2 o Sr2+ como Sr(N03)2), con agitación suave durante 15 minutos, aproximadamente, 60 perlas esféricas de aproximadamente 2 milímetros de diámetro se produjeron de un mililitro de solución de alginato-proteína. Después de 15 minutos se separaron las perlas de la solución de reticulación mediante una columna desechable de Bio-Rad de 20 mililitros. Se determinó la proteína no incorporada espectrofotométricamente a 280 nm. Las perlas que se retuvieron en la columna se lavaron con 20 mililitros de agua destilada. Las perlas lavadas se transfirieron a un frasco de 5 mililitros con 4 mililitros de 50 mM de reticulador de fosfato (KPi) , pH 7.4 (regulador de liberación/disolución) y se incubaron a 37°C con sacudido suave a 100 revoluciones por minuto. Luego las perlas se separaron de la solución usando una columna Bio-Rad como se describió anteriormente. Se añadieron cuatro mililitros de KPi nuevo a las perlas y se transfirieron las perlas a un nuevo frasco. Se repitió la renovación de KPi y la transferencia de las perlas cada 30 minutos o 60 minutos. También se determinó la liberación de la proteína cada 3 minutos o 60 minutos. El tiempo total de liberación fue de cuatro horas. Los resultados del efecto de los cationes divalentes en la liberación de la TNFR: Fe a partir de las perlas se mostró en la Tabla I en seguida. Tabla I Liberación acumulativa porcentual de la TNFR: Fe a partir de Perlas de Alginato reticuladas con varios cationes divalentes Tiempo (horas) Ba2+ Sr2+ Ca2+ 0 0 0 0 0.5 12 22 18 1.0 27 38 68 1.5 36 43 68 2.0 47 46 67 2.5 59 50 67 3.0 63 52 66 3.5 66 55 66 4.0 66 55 66 De la Tabla I, los datos muestran que tanto las perlas reticuladas con Ba y Sr exhiben perfiles de liberación prolongados en comparación con las perlas reticuladas con Ca (3.5 horas contra 1 hora). Las perlas reticuladas con calcio se disolvieron parcialmente y formaron grupos a tal grado a la hora de tiempo que fue difícil la cuantificación precisa de proteína. Sin embargo las perlas reticuladas con Ba y Sr, retuvieron una forma esférica a través de todo el estudio, y probablemente se debe a la mayor afinidad de los cationes de Ba2+ y Sr2+ para el anión de alginato que el exhibido por el catión de Ca2+ .

EJEMPLO 2 Efectos del recubrimiento de policatión en la cinética de liberación de la TNFR: Fe Para preparar un recubrimiento de policatión sobre las perlas se prepararon 0.1 por ciento de poli-arginina (139 kD) , poli-hitidina (19 kD) o poli-L-lisina (44 kD) en 2 mM Tris reguladora, pH 7.4. Después de que se incorporó la TNFR: Fe en las perlas usando el procedimiento descrito anteriormente, se incubaron las perlas con 10 mililitros de la solución de policatión anterior a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las perlas se enjuagaron en agua destilada antes de la suspensión en el regulador de liberación KPi. Se determinó la liberación de proteína cada hora, y después de cuatro horas se hidrolizaron las perlas en 0.1 M HCl durante una hora y luego se volvieron a suspender en KPi . Después de dos horas en KPi, la proteína no incorporada en la solución se determinó espectrofotométricamente a 280 nm. El porcentaje aproximado de liberación se muestra en la Tabla II en seguida.

Tabla II Liberación acumulativa porcentual de la TNFR:FC a partir de las perlas de alginato-Sr recubiertas con varios policationes .

Tiempo (horas) Control Poli-His Poli-Aro Poli-Lys 0 0 0 0 0 1 10 0 11 18 2 18 0 12 18 3 23 0 12 18 4 26 0 12 18 6 65 35 69 52 Los datos en la Tabla II demuestran que la polihistidina fue el catión más eficiente entre los tres probados por su capacidad para retrasar la liberación de la TNFR: Fe de las perlas. Las perlas recubiertas de polihistidina no liberaron TNFR-Fe aproximadamente hasta 4 horas, después de lo cual todas las perlas se hidrolizaron en 0.1 M HCl durante una hora, y luego se volvieron a suspender en KPi (pH 7.4) .

EJEMPLO 3 Efectos de liofilización de la cinética de liberación de la TNFR: Fe en las perlas de alainato Se prepararon perlas que contenían TNFR: Fe y alginato (70 por ciento de contenido de ácido gulurónico) como se describió anteriormente. Luego las perlas se congelaron a -70°C durante 2-4 horas. Se llevó a cabo la liofilización durante la noche con un liofilizador Virtis Sentry 12SL liofilizador . Después de la liofilización, las perlas se reconstituyeron inmediatamente en el regulador de KPi de liberación/disolución. La Tabla III muestra la cinética de liberación de las preparaciones liofilizada y no liofilizada en liberación acumulativa porcentual aproximada. Tabla III Liberación acumulativa porcentual de la TNFR_Fc a partir de perlas liofilizadas y no liofilizadas que contienen un contenido del 70 por ciento de ácido gulurónico. Tiempo (horas) Liofilizadas No 1iofilizadas 0 0 0 0.5 10 15 1.0 15 30 1.5 18 33 2.0 22 36 3.0 24 43 4.0 27 50 20 70 n.disp.

Los datos muestran que la liofilización de las perlas da como resultado una liberación más sostenida de la TNFR: Fe que las perlas no liofilizadas. Únicamente el 27 por ciento de proteína se liberó en las primeras cuatro horas en comparación con el 50 por ciento de liberación de la TNFR: Fe para las perlas no liofilizadas. Además, se requirieron 20 horas de tiempo para que las perlas liofilizadas liberaran el 70 por ciento del ingrediente activo.

EJEMPLO 4 Efecto del contenido de ácido gulurónico en la cinética de liberación de la TNFR: Fe en perlas de alginato liofilizadas Se prepararon dos composiciones de perlas usando diferentes niveles de ácido gulurónico en el alginato. La primera composición contenía un alginato que tenía un contenido del 70 por ciento y está disponible comercialmente. Esta composición se llamará de aquí en adelante composición de alginato "A". La segunda composición comprendía una mezcla 1:1 de un alginato que tenía un contenido del 40 por ciento de ácido gulurónico y un alginato que tenía un contenido del 70 por ciento de ácido gulurónico. Esto dio como resultado una mezcla final que tenía un contenido de ácido gulurónico total calculado matemáticamente del 55 por ciento. Esta mezcla de alginato se llamará de aquí en adelante la composición "B" . En cada caso, el alginato tiene una concentración de aproximadamente 1 por ciento en peso sobre volumen en la solución final usada para preparar las perlas. Las perlas se liofilizaron usando el procedimiento descrito anteriormente. La liberación de la TNFR: Fe se hizo en la solución reguladora de fosfato potasio de 50 mM descrita anteriormente. La Tabla IV muestra cómo variando el contenido de ácido gulurónico del alginato usado para preparar las perlas se puede efectuar la liberación de la TNFR: Fe, los porcentajes de liberación acumulativa son aproximados.

Tabla IV Liberación acumulativa porcentual de la TNFR: Fe a partir de perlas liofilizadas de diferente contenido de ácido gulurónico. Tiempo (horas) Composición de alginato A B 0 0 0 1 10 10 2 15 38 3 18 43 4 22 49 5 28 52 20 70 55 70 -- 75 La composición de alginato B causó una liberación rápida de TNFR:FC dentro de las primeras cuatro horas en comparación con la composición de alginato A. En un punto de tiempo de aproximadamente 15 horas, ambas composiciones habían liberado aproximadamente el mismo porcentaje de ingrediente activo, es decir, el 55 por ciento. Sin embargo, después de ese punto, la composición de alginato B produjo una liberación más lenta, pero estable el ingrediente activo en comparación con la composición de alginato A. Ya que el tiempo de residencia del material en el tracto gastrointestinal humano puede variar entre varias horas hasta 48 horas, la composición de alginato se puede optimizar usando un contenido variado de ácido gulurónico para liberar el ingrediente activo en un tiempo específico, y así al sitio específico en el tracto intestinal.

EJEMPLO 5 Liberación de TNFR: Fe en ambiente ácido Este ejemplo describe la liberación de la TNFR: Fe a partir de las perlas de alginato-TNFR:Fc liofilizadas descritas anteriormente cuando se exponen a un ambiente ácido.

Las perlas que contenían TNFR: Fe y alginato (79 por ciento de contenido de ácido gulurónico) se prepararon como se describió anteriormente. Las perlas se liofilizaron y se colocaron en 0.1 M HCl a pH 1.2 (jugo gástrico simulado) para determinar si se liberaría proteína en el estómago. Después de 3 horas, se lavaron las perlas con agua destilada y se suspendieron en la solución reguladora KPi (pH 7.4) para simular el ambiente del intestino delgado. La Tabla V en seguida muestra los datos, el porcentaje de liberación es aproximado.

Tabla V Liberación acumulativa porcentual de la TNFR: Fe a partir de perlas liofilizadas en 0.1 M HCl Tiempo (horas) Por ciento liberado 0 0 3 5 4 58 5 65 La Tabla V muestra que menos del 10 por ciento de la TNFR: Fe se liberó en el ambiente de pH 1.2 durante las primeras 3 horas. La Tabla V también muestra que aproximadamente el 65 por ciento de la TNFR: Fe se liberó después de 2 horas en el regulador KPi . Una prueba de inhibición de unión demostró que la TNFR: Fe todavía estaba biológicamente activa después del tratamiento con HCl . Estos datos muestran que el ingrediente activo en las perlas de alginato está protegido del ambiente ácido y se libera en forma activa conforme se eleva el pH.

EJEMPLO 6 Cinética de liberación de IL-lR a partir de perlas de alginato Se preparó el receptor de interleucina 1 usando procedimientos publicados. Se prepararon las perlas de alginato que contenían 70 por ciento de ácido gulurónico y 2 miligramos del receptor de interleucina 1 tipo I siguiendo el mismo procedimiento usado para hacer la TNFR: Fe en el Ejemplo 1, excepto porque se usó Sr(N03)2 como el catión de reticulación. La cinética de liberación se determinó de la misma manera que con la TNFR: Fe. La cantidad de receptor de interleucina 1 se determinó en 280 nm cada 30 minutos durante un total de 90 minutos. La cinética de liberación del receptor de interleucina 1 se muestra en la Tabla VI en seguida.

Tabla VI Liberación acumulativa porcentual de TNFR:FC a partir de perlas de alginato. Tiempo (Horas) Porciento liberado 0 0 0.5 20 1.0 30 1.5 40 Los datos de la Tabla VI muestra que el 40 por ciento del ingrediente activo del receptor de interleucina 1 se libera después de 90 minutos en el ambiente de pH 7.4 KPi.

Como se esperaba, la Tabla VI indica que, al igual que en la TNFR: Fe, la liberación del receptor de interleucina 1 también se puede controlar usando perlas de alginato.

EJEMPLO 7 Preparación de complejos de alginato para receptor antagonista de interleucina 1. receptor de interleucina 6, anticuerpos monoclonales contra factor de necrosis de tumor, interleucina 1 o interleucina 6 Otros ingredientes activos, es decir receptor antagonista de interleucina 1, receptor de interleucina 6, así como anticuerpos monoclonales contra el factor de necrosis de tumor, interleucina 1 o interleucina 6, se preparan usando los métodos descritos en la técnica. Los complejos de alginato para el receptor antagonista de interleucina 1, receptor de interleucina 6, así como anticuerpos monoclonales contra el factor de necrosis de tumor, interleucina 1 o interleucina 6 se preparan fácilmente mediante los siguientes pasos descritos en el Ejemplo 1 anterior. Una variedad de perfiles de cinética de liberación se pueden hacer para cada ingrediente activo siguiendo los lineamentos descritos anteriormente. La determinación de la cinética de liberación para cada proteína se hace usando los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores .

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica de liberación controlada que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNFR) , (b) receptor de interleucina-l (IL-1R) , (c) receptor antagonista de interleucina-l (IL-lra); (d) receptor de interleucina 6 y (e) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de* necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; estando el polipéptido encapsulado en alginato.

2. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es receptor del factor de necrosis de tumor (TNFR) .

3. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es receptor de interleucina 1 (IL-1R) .

4. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es receptor antagónico de interleucina 1 (IL-lra) .

5. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es receptor de interleucina 6 (IL-6R) .

6. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es un anticuerpo monoclonal inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor.

7. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación l, en donde el polipéptido es un anticuerpo monoclonal inmunorreactivo contra interleucina 1.

8. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido es un anticuerpo monoclonal inmunorreactivo contra interleucina 6.

9. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el polipéptido está presente en una cantidad desde aproximadamente el 1 por ciento hasta aproximadamente el 75 por ciento en peso del contenido sólido.

10. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, que está liofilizada.

11. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la composición está recubierta con un policatión.

12. Una formulación farmacéutica de liberación controlada de acuerdo con la reivindicación l, en donde el alginato contiene desde aproximadamente 40 por ciento hasta aproximadamente 70 por ciento de ácido gulurónico.

13. Un método para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino, que comprende administrar a un paciente que lo necesite, una formulación farmacéutica de liberación controlada que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un receptor de factor de necrosis de tumor (TNFR) , (b) receptor de interleucina-l (IL-1R) , (c) receptor antagonista de interleucina-l (IL-lra); (d) receptor de interleucina 6 y (e) un anticuerpo monoclonal que es inmunorreactivo contra el factor de necrosis de tumor, la interleucina 6 o interleucina 1; estando el polipéptido encapsulado en alginato.

14. Un método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la enfermedad es la enfermedad de Crohn.

15. Un método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la enfermedad es la colitis ulcerativa.

16. Un método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la composición está liofilizada.

17. Un método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la composición contiene entre aproximadamente 40 por ciento hasta aproximadamente 70 por ciento de ácido gulurónico.