MXPA96004901A - Agentes de contraste - Google Patents

Abstract

La invención proporciona un agente de contraste para combinado sanguíneo que tiene una porción molecular completa de al menos 10 KD, que comprende una macroestructura que tiene unida aésta una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización y posee porciones paramagnéticas iónicas o de un metal pesado, queladas, los grupos quelantes para dichas porciones queladas son macrocíclicos, donde la macroestructura es liposomal.

Description

AGENTES DE CONTRASTE Esta invención se refiere a los agentes de contraste para formación de imagen diagnóstica, y en particular a los agentes de combinado sanguíneo, que son los agentes de contraste que tienen un tiempo de residencia prolongado en la vasculatura. Las modalidades médicas de formación de imagen, tales como la formación de imagen por resonancia magnética, los rayos X, PET, SPECT, magnetotomografia, EIT, escintigrafia gamma y exploración por CT se están volviendo herramientas extremadamente importantes en el diagnóstico y en el tratamiento de enfermedades. Algunas técnicas de formación de imagen pueden confiar completamente en los atributos inherentes de los componentes corporales, tales como el tejido óseo y suave, para lograr la diferenciación en las imágenes entre tales componentes, otros requieren la administración de agentes (agentes de contraste) para permitir tal diferenciación y para mejorar el contraste de imagen entre diferentes componentes tales, o entre tejido viable y dañado. REF: 23322 El uso de agentes de contraste está bien establecido en la mayoria de las modalidades de formación de imagen. La eficiencia de un agente de contraste, sin embargo, es dependiente no solamente de su capacidad inherente para mejorar el contraste de la imagen en la modalidad de formación de imagen en cuestión, sino también por su farmacocinética, por ejemplo, su patrón de distribución espacial y temporal después de la administración. Para los agentes de contraste administrados hacia la vasculatura sistémica, como una regla general, las moléculas hidrofilicas de bajo peso molecular (por ejemplo, de peso molecular por debajo de 5000 D) se distribuyen hacia el fluido extracelular (ECF) y son relativamente excretadas de manera rápida a través de los riñones mediante la filtración glomerular, mientras que los particulados, liposomas o moléculas lipofilicas tienden a acumularse relativamente rápido en el higado. Varios agentes de contraste ECF y hepáticos son comercializados o están en desarrollo clínico. Sin embargo, mientras que diversos agentes de combinado sanguíneo han sido propuestos (por ejemplo agentes que no se distribuyen hacia el ECF y tienen aun tiempos de residencia relativamente prolongados en el combinado sanguíneo) su desarrollo no ha progresado del todo. De este modo, en el campo de la formación de imágenes de resonancia magnética, las primeras sugerencias para agentes de combinado sanguíneo incluían conjugados de quelato para agnético-macromolécula, por ejemplo, donde la macromolécula era un material biotolerable soluble tal como dextrano, con un peso molecular por arriba del umbral renal, y donde el quelato era por ejemplo GdDTPA. Las sugerencias ulteriores involucraban la proposición de que se usaran poliquelantes, especies solubles en agua de alto peso molecular capaces de quelar a muchos, por ejemplo 20-100, metales paramagnéticos. Los materiales propuestos han encontrado problemas de pobre caracterización, biodistribución impredecible, tiempos de residencia en el combinado sanguíneo, insatisfactorios, acumulación hepática y bioeliminación inadecuada mediante filtración glomerular. La demanda para agentes de combinado sanguíneo efectivos y tolerables, por lo tanto subsiste aún. Se ha propuesto una nueva clase de agentes de contraste de combinado sanguíneo que tiene porciones que controlan la opsonización, enlazadas a una macroestructura que posee iones metálicos paramagnéticos o pesados, quelados. Vista desde un aspecto, por lo tanto, la invención proporciona un agente de contraste de combinado sanguíneo que tiene un peso molecular total de al menos 10 KD (preferentemente al menos 15 KD y especialmente aproximadamente 20 KD o mayor) que comprende una macroestructura que tiene unida a ésta una pluralidad de porciones que inhiben la opzonización, y posee porciones paramagnéticas iónicas o de metal pesado queladas, los grupos quelantes para dichas porciones queladas son macrociclicas donde dicha estructura es liposomal. La opsonización es el proceso mediante el cual las proteínas sanguíneas se unen a la materia extraña en la vasculatura, para facilitar la captación rápida de tal materia mediante el sistema reticuloendotelial (RES) , principalmente el higado, bazo y médula ósea. Pueden ser usados diversos inhibidores de la opsonización de acuerdo a la invención, pero en general éstos serán polímeros anfifilicos, opcionalmente terminalmente modificados, por ejemplo para la unión a la macroestructura. Por un polímero anfifilico se entiende un polímero que tiene unidades repetidas con segmentos lipofilicos e hidrofilicos . Un ejemplo preferido de tal polímero es el polietilenglicol el cual tiene una unidad repetida [CH;CH0], la cadena de alquileno que proporciona el segmento lipofilico y el oxigeno del éter que proporciona el segmento hidrofilico. De este modo, las porciones inhibidoras de la opsonización usadas de acuerdo a la invención son convenientemente de la fórmula I -A-(R!R2)n-b (I) donde A es un enlace o un grupo funcional que permite la unión a la macroestructura, por ejemplo el residuo de un grupo con un hidrógeno lábil u otro átomo o grupo desplazable, por ejemplo el residuo de un grupo carboxilo, hidroxilo, amino, succinilo, nitrofenilcarbamato o tiol, o de un oxiácido de fósforo, azufre o boro, unido a (R?R2)n por un enlace o una porción ligadora, por ejemplo, una cadena de alquileno de 1 a 8 átomos de carbono; uno de Ri y R2 es una porción lipofilica, por ejemplo una cadena de alquileno de 1 a 8 átomos de carbono opcionalmente insaturada y opcionalmente substituida e interrumpida por un grupo arilo o cicloalquilo, por ejemplo, fenilo o ciciohexilo, y el otro de Ri y R2 es una porción hidrofilica, por ejemplo, un grupo oxa, tia o aza, o una cadena de alquileno de 1 a 8 átomos de carbono interrumpida o substituida por grupos seleccionados de oxa, aza, tia, amina, tiol, hidroxilo, oxo, tio, imido, sulfinilo, sulfonilo o fosfono; n es un número entero que tiene un valor de 3 a 200, especialmente 5 a 100, más especialmente 10 a 80; y B es un grupo terminal, por ejemplo un átomo de hidrógeno o un grupo hidrofilico o hidrofóbico, o una porción de quelato de metal paramagnético o pesado. Se apreciará a partir de lo anterior que la porción de metal paramagnético o pesado, quelado, en el agente de diagnóstico de la invención, puede estar unida a la macroestructura directamente o via un grupo intermediario, y que mientras que tales grupos intermediarios pueden funcionar como ligadores, éstos pueden también funcionar como inhibidores de la opsonización. Especialmente preferidos como inhibidores de la opsonización están las porciones que contienen como la unidad que se repite R1R2, los grupos alquilenoxi, alquilentio y alquilenimino, y en particular tales grupos en donde la porción alquileno es etileno o propileno. Más particularmente preferidos son los inhibidores de la opsonización basados en polietilenglicol (PEG) . Los métodos para la unión de PEG o derivados de PEG son revisados por ejemplo en Crit. Rev. ia Therapeutic Drug Design 9: 249 (1992) y Rev. Macromol.

Chem. Phys. C25: 325 (1985). La longitud de la cadena del inhibidor afecta su habilidad para inhibir la opsonización y con inhibidores similares a PEG el peso molecular óptimo parece probablemente estar en el intervalo de 1 a 10 KD. Como una alternativa a los polímeros anfifilicos tales como PEG, pueden alternativamente ser usadas porciones de glucosaminoglucano como los inhibidores de la opsonización. A este respecto, se puede hacer mención particular de la heparina, heparano, dermatán, queratán y condroitina, y especialmente condroitin-4-sulfato . Estos pueden, por supuesto, ser derivatizados para la unión a la macroestructura, o donde sea aplicable, a las estructuras del quelato. En general, los glucosaminoglucanos usados serán unidades de aproximadamente 10 a 100, especialmente de 20 a 60, disacáridos de longitud. Tales materiales son comercialmente disponibles, por ejemplo de Sigma. Pueden ser usados como los inhibidores de la opsonización otros polímeros tales como polioles, polivinilpirrolidona, alcohol polivinilico e inhibidores adicionales como se describe en la Patente Británica GB9407812.8 (una copia de la cual se presenta con la presente) y derivados de los mismos. Lo que se requiere en general para que esta función sea realizada por un polímero es: solubilidad en agua; baja interacción con la macroestructura, por ejemplo con el núcleo de una macroestructura agregada; baja toxicidad; baja interacción con las proteínas plasmáticas; y la habilidad para formar una estructura en "cepillo" o "rizada" que se extiende con dirección hacia afuera desde la macroestructura, lo cual deteriora el enlace a la proteina. La macroestructura en los agentes de contraste de la invención puede ser de construcción unitaria, por ejemplo un particulado, un poliquelante o un polímero dendrimérico, o alternativamente ésta puede comprender una pluralidad de componentes individuales mantenidos conjuntamente por efectos fisicoquimicos, por ejemplo un liposoma o un agregado molecular.

La última ruta de bioeliminación para al menos las porciones de quelato metálico en los agentes de contraste de la invención, es preferentemente renal, y de este modo donde la macroestructura es eventualmente para ser abstraída por el RES, se prefiere que la unión del quelato deba ser via enlaces biodegradables los cuales con la escisión liberen fragmentos que son renalmente excretables, por ejemplo, con un peso molecular de menos de 20 KD, preferentemente menos de 10 KD, especialmente 200 a 5000 D. Esto es especialmente importante donde la macroestructura es particulada o liposomal. La macroestructura en los agentes de contraste de la invención tomará en general una a cuatro formas: un particulado; un liposoma; un agregado molecular; o una molécula de alto peso molecular (por ejemplo un poliquelante tal como se describe en WO-90/12050) . De éstos, los últimos tres son preferidos y los últimos dos son especialmente preferidos debido a su mayor confiabilidad para facilitar la excreción renal que la captación de RES de las porciones de quelato . Los agregados moleculares son particularmente interesantes a este respecto ya que éstos permiten posibilidades de residencia prolongada en el combinado sanguíneo asi como excreción renal (mediante erosión del agregado, que provoca la pérdida gradual de los componentes agregados, los cuales están por debajo del umbral de filtración de los riñones) . En general, tales estructuras pueden ser generadas usando componentes moleculares anfifilicos de la fórmula II C - D - E (II) donde C es una porción que contiene el quelato metálico hidrofilico, D es un ligador que inhibe la opsonización y E es una porción hidrofóbica. En la fórmula II, como en los otros materiales de acuerdo a la invención, la porción quelante de metal comprende preferentemente un quelante macrociclico, por ejemplo como se describe en WO-93/06868. Otras porciones quelantes pueden, por supuesto, también ser usadas, y muchas porciones tales han sido descritas en la literatura científica y de patentes con relación en particular a los agentes de contraste por resonancia magnética. Se hace referencia particularmente a las solicitudes de patente publicadas de Schering, Nycomed Salutar, Nycomed Imaging, Braceo, Mallinckrodt, Guerbet y Squibb. Las porciones quelantes macrociclicas y aciclicas como se describen en la Patente Británica GB9407812.8, son especialmente preferidas. 5 El ligador inhibidor de la opsonización en el componente agregado, es preferentemente un material tal como se describe anteriormente, por ejemplo un polialquilenglicol, especialmente PEG, o un glucosaminoglucano . La porción hidrofóbica comprende preferentemente un grupo alquilo o arilo o un esteroide, vitamina, porfirina o ftalocianina. Un agregado molecular particularmente preferido está basado en la ftalocianina con los grupos inhibidores de la opsonización conjugados a éste y opcionalmente, por ejemplo via tales grupos inhibidores, grupos quelatos de metal paramagnético o "*" pesado. La porción de ftalocianina aqui puede actuar ya sea como una porción hidrofóbica y como una porción quelante de metal. 20 Otras moléculas anfifilicas, sin embargo, pueden ser usadas para formar tales agregados, y tendrán en general la fórmula C-D-E 25 o C^-E-D-B donde C es un grupo quelato de metal unido a un grupo hidrofóbico E directamente o via una porción ligadora, y C, B, D y E son como se describe anteriormente. C1 puede ser hidrofilico o hidrofóbico, y puede ser una porción quelante convencional como se discute anteriormente para C en la fórmula II. De estas dos estructuras, la primera, la cual coloca las porciones de quelato en la periferia del agregado, es la estructura preferida para los agentes de contraste de resonancia magnética Ri . En general, el inhibidor constituirá del 15 al 85%, especialmente del 30 al 80% del peso del componente agregado, y el peso molecular total de los componentes moleculares individuales de los agregados moleculares de acuerdo a la invención, es deseablemente menor de 15 KD, especialmente 200 a 10,000 D, particularmente 500 a 5,000 D. El uso de agregados de esta naturaleza asegura que la erosión del agregado en la vasculatura dé como resultado la pérdida de fragmentos que son fácilmente excretados renalmente, aun cuando el agregado como un todo tenga un tiempo de retención prolongado en la sangre. La excreción renal, la ruta de bioeliminación más rápida para la mayoria de los agentes de ECF, es por supuesto preferida ya que son minimizados los problemas de toxicidad asociados con la retención de metales pesados en el cuerpo. En el caso de agentes de contraste liposomales de acuerdo a la invención, el quelato metálico puede estar libre dentro de la cavidad central del liposoma o alternativamente, éste puede ser llevado por la membrana del liposoma, y en el último caso, éste puede ser colocado sobre la membrana interior o exterior del liposoma. Para agentes de contraste por resonancia magnética Ti, se prefiere que el quelato sea colocado sobre el exterior del liposoma, para maximizar la interacción de los centros paramagnéticos con el fluido corporal circunvecino.

Para los agentes de contraste liposomales no obstante, puede ser preferido que el quelato esté sobre el exterior del liposoma y unido al liposoma por un enlace biodegradable. Mediante la portación del quelato sobre la superficie del liposoma es también posible el usar liposomas particularmente pequeños, por ejemplo, de 50 a 100 nm de diámetro, y con esto retrasar la captación del RES. Para las macroestructuras liposomales, los inhibidores de la opsonización deben, por supuesto, ser unidos al exterior del liposoma.

La preparación de los agentes de contraste liposomales es ya una técnica bien establecida y pueden ser usados métodos convencionales y materiales convencionales para la formación de membranas liposomales, en la producción de los agentes de contraste de la invención. De este modo, por ejemplo, los materiales que forman la membrana liposomal, anfifilicos, tales como lipidos y en particular fosfolipidos, se pueden usar para formar la estructura liposomal básica que actúa como el portador para el quelato y las porciones que inhiben la opsonización. Los agentes liposomales incluirán en general, además de las moléculas portadoras del quelato y de los compuestos formadores de la membrana del liposoma, los materiales que constituyen el núcleo del liposoma y su ambiente externo, en general en cada caso un medio acuoso. Los liposomas mismos son vesículas esféricas que tienen una bicapa lipidica que rodea un espacio central. La presente invención está particularmente relacionada con los liposomas unilaminares y multilaminares, los cuales respectivamente tienen una bicapa lipidica simple o bicapas lipidicas múltiples que rodean un núcleo acuoso.

Los liposomas se forman espontáneamente después de la dispersión de los lipidos, particularmente fosfolipidos, en medios acuosos, y la estructura liposomal de los agentes de la invención puede ser producida mediante técnicas convencionales. Tales técnicas convencionales son descritas en el documento WO 92/21017 (Unger) y por Papahadj opolous en Ann. Rep. Med. Chem. 14_: 250-260 (1979) e incluyen evaporación inversa, congelamiento-descongelamiento, diálisis con detergente, homogeneización, sonicación, microemulsificación y formación espontánea después de la hidratación de una película lipidica anhidra. Los liposomas ultilaminares pueden ser usados de acuerdo a la invención, o pueden ser convertidos a liposomas con laminaridad más baja, o a liposomas unilaminares, mediante métodos conocidos. Los liposomas unilaminares pueden también ser preparados directamente . Las preparaciones liposómicas son tipicamente de tamaño heterogéneo y los liposomas usados de acuerdo a la invención pueden ser ajustados a tamaño al diámetro deseado mediante técnicas conocidas, por ejemplo extrusión, congelamiento-descongelamiento, fragmentación mecánica, homogeneización y sonicación. Los liposomas usados de acuerdo a la invención son ventajosamente de 20 a 400 nm de diámetro, unilaminares o multilaminares . Los liposomas pueden ser liofilizados para incrementar la vida en anaquel y los liposomas 5 liofilizados pueden ser reconstituidos mediante agitación vigorosa con amortiguador acuoso antes del uso. Las formulaciones pueden incluir agentes que sirven para estabilizar el material liposomal para el procedimiento de liofilización . 10 Los liposomas más pequeños de 200 nm pueden ser esterilizados después de la formulación mediante filtración a través de un filtro de 0.2 mieras para eliminar los pirógenos. Los lipidos usados como la membrana liposomal que forma las moléculas, son tipicamente fosfolipidos tales como fosfatidilcolinas naturales o '" sintéticas (lecitinas) (PC) , fosfatidiletanolaminas (PE) , lisolecitinas, lisofosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas (PS) , fosfatidilgliceroles (PG) , fosfatidilinositol (Pl)/ esfingomielinas, cardiolipina, ácidos fosfatidicos (PA), ácidos grasos, gangliósidos, glucolipidos , glicolipidos, mono-, di- o triglicéridos, ceramidas o cerebrósidos, por ejemplo compuestos que forman la membrana liposomal tal como se describe en el documento WO-92/21017.

Los lipidos que forman la membrana pueden también comprender lipidos polimerizables, por ejemplo lipidos de metacrilato, lipidos de tiol y de disulfuro, lipidos de dienoato, lipidos de estirilo y lipidos diacetilánicos como se describe por Johnston en Liposome Technology Vol. Y, Gregoriades Ed., páginas 123-129 (1983) y Singh en Phospholipid Handbook, Cevc De., Dekker, páginas 233-291 (1993) y referencias en éstas. El ' uso de lipidos polimerizables en la formación de los liposomas proporciona una ruta para incrementar la estabilidad del liposoma. La membrana liposomal puede también tener esteroides y otros compuestos incorporados dentro de éste, por ejemplo para afectar la biodistribución del liposoma. Los esteroides apropiados incluyen por ejemplo colesterol, derivados de colesterol, colestano, ácido cólico, y ácidos biliares, pero particularmente colesterol. La inclusión de esteroides sirve para modificar la fluidez de la membrana liposomal, y esto afecta la biodistribución. De este modo, los lipidos de temperatura de transición más alta conducen a vidas medias sanguíneas más prolongadas, y la inclusión de colesterol da como resultado una bicapa más rigida y menos permeable. Una disminución de la captación de RES es observada con la adición del colesterol. Los inhibidores de la opsonización pueden ser incorporados mediante el uso de un derivado 5 fosfolipidico que tiene una función inhibidora de la opsonización, sobresaliente, mediante el uso de un agente inhibidor que tiene una porción de "anclaje" hidrofóbica la cual se asocia con la membrana liposomal o mediante acoplamiento de un agente de 10 inhibición de la opsonización a una molécula de "anclaje" presente en la membrana liposomal, por ejemplo, una molécula que forma la membrana lipidica liposomal . Los inhibidores de la opsonización particularmente preferidos incluyen compuestos, especialmente polímeros anfifilicos, los cuales sirven "*~ para reducir el enlace de la proteina in vivo al liposoma, y de este modo prolongan la vida media de los liposomas en la sangre. Los polímeros de polialquilenoxi, tales como polietilenglicol (PEG) y gangliósidos, tales como Grtii, son efectivos a este respecto . La incorporación de 1 a 10%, con relación al peso del material que forma la membrana liposomal, de derivados de PEG-PE, prolonga significativamente la vida media en sangre. Los liposomas preparados a partir de fosfolípidos perluorados (ver Santaella, FEBS Letters 336: 481-484 (1993) y Angew, Chem. Int. De. Eng. 30: 567-568 (1991) pueden también prolongar las vidas medias en sangre. El apuntar o dirigirse activamente a órganos o tejidos específicos, puede ser logrado mediante la 10 incorporación de lipidos con anticuerpos monoclonales unidos a éstos, o fragmentos de anticuerpo que son específicos para antigenos, lectinas o péptidos asociados al tumor. La biodistribución del liposoma es también significativamente dependiente de la carga superficial, y los liposomas de acuerdo a la invención ""'"' pueden incluir deseablemente 1 a 10%, con relación al peso de la membrana liposomal que forma el material, de fosfolípidos negativamente cargados tales como por ejemplo fosfatidilserina, fosfatidilgliceroles, ácidos fosfatidicos, y fosfatidilinositol. Los metales quelados pueden ser trabados a los liposomas de diversas maneras, por ejemplo: (i) mediante metalación de los grupos quelantes trabados a la superficie de los liposomas preformados; (ii) mediante el acoplamiento de porciones quelato a las moléculas de anclaje en los liposomas preformados; (iii) mediante la formación de liposomas usando una mezcla lipídica que incluye moléculas de quelato : ancla.

Los tres métodos representan aspectos de la presente invención, pero el segundo es el más preferido. Este proceso simplifica el procedimiento para la preparación de agentes unidos a la membrana, al evitar la síntesis y purificación de quelatos hidrofóbicos (implícitos en el proceso (iii)) y al evitar el enlace débil no deseado (fácilmente reversible in vivo) del metal al liposoma, que está asociado con el proceso (i) . Los liposomas de la invención son preferentemente producidos mediante el acoplamiento de moléculas de quelato metalado a moléculas de anclaje en los liposomas pre-preparados . De esta manera, el quelato es únicamente unido al exterior de la membrana liposomal. Los liposomas que son formados con los quelatos derivatizados tienen el complejo unido al interior y al exterior de la membrana. La permeabilidad al agua de la membrana o la proporción de difusión del agua a granel a través de la membrana, determinará la relajación de los iones paramagnéticos internos. Con los liposomas apretados, estables, la relajación del gadolinio dentro del liposoma puede ser muy baja. De este modo con los grupos quelatos trabados únicamente al exterior del liposoma, se optimiza la eficiencia del uso del metal, por ejemplo los liposomas tienen una alta relajación por ion metálico . El tener los quelatos ligados únicamente al exterior de los liposomas es también una ventaja para el enlace de radionúclidos, especialmente emisores alfa, ya que la membrana del liposoma no tiene que ser penetrada por los rayos alfa. De este modo, los liposomas pueden ser preparados mediante un método convencional a partir de una mezcla de fosfolipidos que incluye el compuesto de anclaje, un compuesto que tiene una porción de anclaje hidrofóbica trabada a un grupo funcional reactivo, el cual proporciona un punto de unión para la porción quelato. Los liposomas pueden ser luego ajustados a tamaño al diámetro requerido, mediante métodos conocidos. El grupo funcional reactivo es luego acoplado a un grupo funcional compatible sobre el quelato, y el quelato de bajo peso molecular sin reaccionar puede ser fácilmente eliminado, por ejemplo, mediante cromatografia de permeación en gel, diálisis o ultrafiltración. El compuesto de anclaje comprende convenientemente de 10 a 80% con relación al peso total de los compuestos que forman la membrana liposomal, pre erentemente de 10 a 50%, especialmente de 25 a 50%. La eficiencia de acoplamiento, del quelato a los grupos reactivos dirigidos externamente puede ser en verdad muy alta, por ejemplo de aproximadamente 90%. Los grupos reactivos sobre el compuesto de anclaje pueden simplemente ser aminas primarias sobre un lipido de la membrana liposomal, las cuales se pueden hacer reaccionar con un grupo carboxilo no coordinado de una molécula de quelato. En general, se pueden usar métodos más conocidos de acoplamiento de quelatos a moléculas, tales como proteínas, para el acoplamiento del quelato a los liposomas. La química superficial estará no obstante limitada por la estabilidad del liposoma y de este modo puede ser deseable la verificación periódica del pH y la osmolalidad de la mezcla de reacción. Se ilustran unos pocos ejemplos de estrategias de acoplamiento esquemáticamente enseguida: Como una alternativa al acoplamiento de quelatos a las moléculas de anclaje en el liposoma, los grupos de anclaje pueden ser acoplados al quelato antes de la formación del liposoma. El quelante es metalado en solución acuosa y luego el quelato es acoplado a la molécula de anclaje mediante métodos convencionales usando un solvente mixto. El liposoma es luego formado usando una mezcla de lipidos que incluye las moléculas de quelato : ancla . Esto evita dificultades con el enlace no específico de los iones metálicos a los liposomas, lo cual puede ocurrir cuando los quelatos son metalados in situ sobre la superficie del liposoma, asi como los problemas de solubilidad asociados con la metalación de los quelantes insolubles en agua, antes de la formación del liposoma. Los iones metálicos sirven también como grupos protectores durante la formación del liposoma para grupos quelantes potencialmente activos. En el liposoma acabado el quelato está trabado a la superficie membranal mediante una porción lipofílica (el ancla o anclaje), por ejemplo una cadena larga de alquilo o un grupo arilo, el cual está preferentemente unido mediante un enlace biodegradable, por ejemplo un enlace éster, carbamato, doble éster, disulfuro o éster de fosfito. De este modo, para las porciones quelato trabadas a la membrana, pueden ser usados los compuestos de la fórmula III G-C" III (donde G es un grupo lipofílico, por ejemplo una cadena larga por ejemplo grupo alquilo (de 10 a 20 átomos de carbono) o un grupo arilo (por ejemplo fenilo o heteroarilo de 5 a 7 miembros) , C" es un grupo quelante ciclico metalado (por ejemplo, un grupo ciclopoliazaalcano que posee un grupo carboxilo, o un derivado del mismo), y el enlace G-C" involucra preferentemente un enlace biodegradable tal como un éster, carbamato, doble éster o enlace disulfuro) . G representa convenientemente un grupo fosfolipídico unido a C" via un ligador opcionalmente biodegradable. Los dobles enlaces éster, por ejemplo enlaces de la fórmula -0-CO-0-CH2-0-CO-0- a partir de la cual puede ser omitido uno o ambos de los oxígenos terminales, y en la cual el grupo metileno puede estar substituido, son particularmente apropiados como enlaces biodegradables. Cada liposoma llevará preferentemente de 10 a 50% mol de iones metálicos quelados (con relación a las moléculas que forman la membrana liposomal) y este nivel de carga puede ser seleccionado mediante la elección apropiada de las concentraciones relativas del quelato y de las porciones que forman la membrana, y del tamaño del liposoma. La discusión anterior se ha concentrado en los liposomas donde el quelato está unido a la superficie del liposoma. Si se desea, una porción quelato adicional, tal como los quelatos de bajo peso molecular, solubles en agua, convencionales (por ejemplo, GdDTPA y GdDTPA-BMA) , pueden ser llevados dentro del interior del liposoma. El inhibidor de la opsonización puede nuevamente en general ser cualquiera de los tipos discutidos anteriormente, y se puede proporcionar con una porción lipofilica, en general un grupo extremo hidrofóbico como se describe anteriormente, para hacer posible que éste sea trabado a la superficie de la membrana. Cada liposoma llevará preferentemente de 1 a 10% mol (con relación a las moléculas que forman la membrana liposomal) de tales inhibidores de la opsonización, trabados, que constituyen en general del 3 al 30% en peso con relación al material que forma la membrana . La tercera forma de macroestructura mencionada anteriormente incluye, como una estructura de columna vertebral, una macromolécula tal como un poliquelante oligomérico, polimérico o dendrimérico, por ejemplo, como se describe en las Patentes Mundiales Nos. WO-91/05792, WO-90/12050, WO-93/06868 y la Patente Británica GB 9407812.8, las descripciones de las cuales se incorporan por referencia en la presente. En esta modalidad el esqueleto macromolecular sirve para llevar la pluralidad de porciones de quelato y una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización. Los poliquelantes dendriméricos tales como se describen en la Patente Mundial WO-93/06868 son 5 especialmente preferidos como las estructuras de columna vertebral, particularmente aquellas donde el peso molecular total está en el intervalo de 2,000 a 20,000 D. En la producción de tales poliquelantes, "~ las porciones quelantes son cargadas sobre el esqueleto polimérico en una pluralidad de sitios de unión. Para fines de la invención, no obstante, al menos 3 de tales sitios y preferentemente 2 a 50% de tales sitios serán cargados en general con las porciones inhibidoras de la opsonización. 15 Una vez más el quelato y los inhibidores de la opsonización como se discutieron anteriormente " pueden ser usados, siendo unido preferentemente el primero via enlaces biodegradables. Tales enlaces biodegradables pueden ser en el quelante: la interfaz macroestructural, o pueden ser colocados así dentro de la estructura polimérica para liberar los fragmentos que llevan el quelato, que tienen pesos moleculares por debajo del umbral del riñon. Para la conjugación macromolécula : quelato y macromolécula : inhibidor a ser efectuada, la macromolécula, el quelante y el inhibidor pueden necesitar ser derivatizados para proporcionar sitios de unión apropiados. Esto puede ser realizado por medios convencionales, por ejemplo mediante activación con éster de carbamato de monometoxi-PEG, para dar nitrofenil-carbamato-PEG-metoxi o mediante cualquier medio descrito para la preparación de poliquelantes en el campo de la resonancia magnética, por ejemplo, en la Patente Mundial WO-90/12050 o la Patente Británica GB 9407812.8. La categoría final de agentes de acuerdo a la invención son los denominados particulados. Estos podrían incluir, por ejemplo, zeolitas, por ejemplo como se describe en la Patente Mundial WO-93/08846, las cuales pueden actuar como una reja o celda quimica/fisica que lleva las especies metálicas de diagnóstico, queladas. Tales estructuras, sin embargo, serán en general de menor interés para la administración dentro de la vasculatura, debido a su captación eventual por el sistema RES y la probabilidad resultante de que los metales quelados tendrán biorretención más prolongada. No obstante, tales portadores de quelato, particulados pueden ser conjugados a inhibidores de la opsonización, tales como aquellos discutidos anteriormente, para proporcionar agentes de contraste de acuerdo a la invención. Donde esto es realizado, el tamaño del particulado (diámetro) estará preferentemente en el intervalo de 20 a 1000 nm, especialmente de 50 a 500 nm y los niveles de carga serán de 2 a 20% en peso de metal paramagnético, respectivamente. En general, mientras que al menos 3 porciones inhibidoras de la opsonización deben de ser unidas a cada macroestructura en los agentes de la invención, existe un nivel de carga óptimo por arriba del cual la inhibición de la opsonización es reducida, y en general las porciones inhibidoras no representarán más del 50% de la masa completa de la estructura. Vista desde un aspecto adicional, la invención también proporciona un proceso para la preparación de los agentes de contraste de la invención, comprendiendo dicho proceso (i) la metalación de una macroestructura la cual ha unido a ésta una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización y grupos quelantes; o (ii) el enlace de una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización a una macroestructura que posee porciones de metal paramagnético iónico o pesado, quelado; o (iii) la generación de una macroestructura a partir de una pluralidad de componentes moleculares, cuya pluralidad de componentes incluye las porciones inhibidoras de la opsonización y las porciones de metal paramagnético pesado, iónico, quelado. En general, donde los agentes de contraste de la invención comprenden moléculas poliquelantes, éstas pueden ser sintetizadas mediante la conjugación de las porciones quelantes a una molécula polimérica de columna vertebral antes de la conjugación del polímero de columna vertebral a cualquier inhibidor de la opsonización tal como PEG. Los iones metálicos pueden ser agregados para formar el complejo metálico de los poliquelantes antes de o después de la conjugación del poliquelante al inhibidor. Preferentemente, el metal será agregado antes de la conjugación del poliquelante al inhibidor. Preferentemente, el metal será agregado antes de la conjugación del poliquelante al inhibidor. Sin embargo, para los mismos iones metálicos tales como radionúclidos con una vida media corta, la metalación será preferentemente realizada después de la conjugación, justo antes del uso. En general, pueden ser usados métodos conocidos para unir los quelantes a las moléculas de columna vertebral. Ver Patente Mundial WO-90/12050.

Tales métodos incluyen por ejemplo el procedimiento de anhídrido mixto de Krejcarek y colaboradores (Biochemical and Biophysical Research Communications 77 : 581 (1977)), el procedimiento de anhídrido cíclico de Hnatowich y colaboradores (ver Science 220 : 613 (1983) y otros), el procedimiento de derivatización de la columna vertebral de Meares y colaboradores (ver Anal. Biochem. 142 : 68 (1984)) y el método descrito por Manabe y colaboradores en Biochemica et Biophysica Acta 883: 460-467 (1986) para unir los residuos de DTPA sobre una columna vertebral de poli-L-lisina usando una modificación del procedimiento de anhídrido cíclico. Mientras que los quelantes macrocíclicos preferidos, tales como DOTA, las técnicas convencionales de conjugación por anhídrido mixto y por anhídrido ciclico descritas por Krejcarek y Hnatowich no son efectivas, se ha encontrado que la modificación del procedimiento de anhídrido mixto mediante la reacción de un quelante macrociclico policarboxilico en un medio anhidro, con una base de amina de suficiente fuerza para extraer todos los protones carboxilo (por ejemplo un pKa suficientemente alto) produce una sal de amina que puede reaccionar con un haloformiato de alquilo para producir un anhídrido activado capaz de conjugarse a una poliamina de columna vertebral sin provocar la reticulación indeseada, asociada con los poliquelantes bifuncionales de la técnica anterior. Para la mayoría de los quelantes macrocíclicos la tetra etilguanidina, o una base de amina de fuerza similar, será la base, preferida . Las técnicas de conjugación más complejas, que involucran por ejemplo el uso de quelantes macrocíclicos derivatizados en la columna vertebral, de una manera análoga a aquella de Meares y colaboradores (supra), pueden por supuesto ser usadas, pero el costo incrementado y la complejidad de la producción completa hace a esta ruta menos deseable. De manera similar, los quelantes pueden ser unidos al polímero de la columna vertebral mediante un método de haluro de haloacetilo, de un fosgeno o de un tiofosgeno, dependiendo del grupo reactivo disponible sobre el agente quelante. Para los quelantes, por ejemplo, macrociclos, con un carboxilato sobresaliente, incluyendo pero no limitados a DOTA, TETA, TRITA (ácido 1, 4, 7, 10-tetraazaciclotridecantetraacético) y NOTA, uno de los carboxilatos pueden formar una entidad que puede reaccionar con un grupo amino primario del polímero de columna vertebral. Los métodos para la formación de una entidad reactiva a partir de un grupo carboxilato incluyen la reacción modificada por anhídrido mixto, por ejemplo usando cloroformiato de isobutilo (IBCF), o la formación de un "éster activado" usando una carbodiimida (DCC o EDAC, ver Pierce Catalog (1988), páginas 252 y 253). Ambas secuencias de reacción dan lugar a una pluralidad de polímeros de columna vertebral substituidos con las porciones quelantes a través de enlaces amida estables. El método de anhídrido mixto, modificado, no obstante es el método preferido para el uso en la unión de quelantes macrociclicos que contienen carboxilato, al polímero de columna vertebral . La reacción de anhídrido mixto modificado es realizada en un solvente anhidro, preferentemente con un punto de fusión por debajo de 5°C, enfriado a una temperatura no menor de 5°C o mayor de aproximadamente 55°C por arriba de su punto de congelamiento. La solubilización del quelante en el solvente apropiado es convenientemente efectuada mediante la preparación de la sal de amina del quelante usando la base de amina in situ. La elección de la base es determinada por el pKa de los carboxilatos relevantes. Para la mayoría de los quelantes, es especialmente preferida la tetrametilguanidina (TMG) . En general, las bases serán convenientemente seleccionadas de aquellas bases cuyo valor de pKa excede el pKa más alto del quelante por al menos 0.5, preferentemente 0.8, especialmente y preferentemente al menos 1.0. Las bases de amina que tienen pka's de al menos 11, especialmente al menos 11.3, particularmente al menos 12, son particularmente preferidas y además de TMG, se puede hacer mención particular de la piperidina, quinuclidina y N-etilpiperidina, y más especialmente DBU (1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno) y DBN (1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno) . Las bases adicionales son enlistadas por Martell y Smith en "Critical Stability Constants" Vol. 5, primer suplemento, Plenum Press, NY 1982. La cantidad apropiada de haloformiato de alquilo puro (enfriado) es ahora agregada con agitación y la temperatura original del solvente es mantenida mediante enfriamiento, por ejemplo, mediante la adición de un refrigerante, si se requiere. Es especialmente preferido el cloroformiato de isobutilo. El anhídrido activado resultante del quelante puede hacerse reaccionar con un dendrímero que contiene amina, para formar un poliquelante amplificador. El poliquelante amplificador, para la mayoría de las aplicaciones, es metalado en este punto y purificado mediante cromatografia o cristalización, para eliminar los iones metálicos en exceso y los complejos metálicos de bajo peso molecular. Para el uso con moléculas especificas al objetivo el poliquelante amplificador, o * la forma al menos parcialmente metalada del mismo, que contiene aun al menos una amina libre, es conjugado a la molécula objetivo, por ejemplo mediante la reacción con uno de muchos agentes de acoplamiento heterobifuncionales bien conocidos. Es en esta etapa en que la carga con el inhibidor de la opsonización puede ser convenientemente efectuada. En situaciones donde la metalación previa no es apropiada, por ejemplo con iones metálicos de radionúclidos con vidas medias cortas, el inhibidor: conjugado de poliquelante se puede preparar usando un poliquelante libre de metal, y el acoplamiento como se describe anteriormente, seguido por la metalación (ver más adelante) y la purificación simple, rápida, final mediante cromatografia o filtración. Los quelantes pueden también ser unidos al polímero de columna vertebral a través de un grupo amina primaria no coordinado, o un grupo carboxilo remoto no involucrado en la coordinación del metal.

Los quelantes macrocíclicos que tienen un grupo amina primaria no coordinada incluyen los macrociclos DOTA derivados de cadena lateral amina primaria, D03A derivado de amina primaria, y hexaazasepulcratos derivados de amina primaria, y sarcofaginas, asi como la clase amplia de criptatos de éter corona derivatizados . Donde se usan grupos carboxilo sobre el quelante (o más bien sobre cualquier otra porción activa) para el enlace, puede ser usada la química rutinaria para la activación de carboxilo, para la unión, por ejemplo a los grupos funcionales amina sobre la columna vertebral o sobre un ligador conjugado a la columna vertebral. El grupo amina primaria no coordinado sobre estos quelantes se puede hacer reaccionar con un haluro de haloacetilo bajo condiciones bien conocidas, para formar una haloacetamida . La haloacetamida puede reaccionar con una amina primaria del polímero de columna vertebral para formar un enlace amida estable entre el quelante y el polímero. El método de haluro de haloacetilo descrito en De Riemer y colaboradores, J. Labelled Compd. Radiopharm. 1_8: 1517 (1981) se puede usar para unir los quelantes que contienen amina al polímero de columna vertebral.

Los grupos amina sobre un quelante pueden también hacerse reaccionar con un fosgeno o trifosgeno para generar un grupo isocianato reactivo, o con tiofosgeno para generar un grupo isotiocianato reactivo. Aquellos grupos pueden reaccionar con una amina primaria del polímero de columna vertebral para formar una urea estable o enlace tiourea más estable, respectivamente, entre el ligando y el polímero de columna vertebral. Gansow, Inorg. Chimica Acta 91 : 213 (1984) y Moi y colaboradores, J. Amer. Chem. Soc. 110: 6266 (1988) describen los métodos de enlace de quelantes a proteínas, que tienen un grupo amina, a través de la formación de las porciones isocianato o isotiocianato, usando los métodos del fosgeno o del tiofosgeno, respectivamente. Ver también Desreux, Inorg. Chem. JL_9: 1319 (1980); Bryden y colaboradores, Anal. Chem 53_: 1418 (1981); Delgardo y colaboradores, Talanta 29_: 815 (1982); Cacheris y colaboradores, Inorg. Chem. 2_6: 958 (1987); Moi y colaboradores, Inorg. Chem 2_6: 3458 (1987) y Meares y colaboradores, Acc. Chem. Res. 11_: 202 (1984). Los medios adicionales de acoplamiento de porciones quelantes al polímero de columna vertebral, se ilustran por los siguientes esquemas de reacción: EDAC (L) DO3A-CH2C0OH + NH2 polímero > > D03A-CH,CONH polímero NaCNBH3 (M) D03A-CH2CHO + NH2 pol ímero > > D03A-CH2CONH po l ímero metanol (N) polímero-OH + D03A-R-NCO > > D03A-R-NCO-0-polímero Para los polímeros dendriméricos que terminan en amina, el material NH2--polimero representa un dendrimero de generación completa (por ej emplo, G2.o) . La interposición de una cadena de oligoaminoácido (por ejemplo oligolisina) en el polímero al enlace de la porción quelante (o inhibidor) es particularmente deseable ya que esto proporciona la capacidad para controlar la liberación hidrolitica in vivo de la porción unida. (Ver "The Applications of Drug Polymer Conjugates in Chemotherapy" por Hoes y Feijen en "Drug Carrier Systems" Roerlink y colaboradores, J. Wiley. 1989).

Los iones metálicos son elegidos para la quelación en los agentes de combinado sanguíneo de la invención, por su habilidad para llevar a cabo su papel diagnóstico. Estos roles incluyen, pero no están limitados a, la mejoración de imágenes en MRI, exploración escintigráfica gamma o CT, o rayos X. Los metales que pueden ser incorporados, a través de la quelación, incluyen lantánidos y otros iones metálicos, incluyendo isótopos y radioisótopos de los mismos, tales como, por ejemplo, magnesio, calcio, escandio, titanio, boro, indio, cromo, manganeso, hierro, cobalto, niquel, cobre, zinc, galio, estroncio, itrio, tecnecio, rutenio, hafnio, tungsteno, renio, osmio, plomo y bismuto. Los radioisótopos particularmente preferidos de algunos de los anteriores incluyen i53Sm, 64Cu, 67Ga, b8Ga, 83Sr, ^Y, 3 33mTc, a7Ru, 103Ru, ?:?ln, l?6Re, 03Pb, ;?lBi, "Bi, ' 3Bi, y 214Bi. La elección del ion metálico para la quelación será determinada por la aplicación diagnóstica deseada. Como se mencionó, la elección de los iones metálicos a ser mantenidos en los complejos de quelato por los agentes de contraste de la invención, depende de la técnica de diagnóstico para la cual va a ser usado el agente. Para MRI y MRS, los iones metálicos deben de ser paramagnéticos, y preferentemente no radioactivos. Para rayos X y formación de imagen por ultrasonido, deben de ser usados iones metálicos pesados, por ejemplo con números atómicos de al menos 37, preferentemente al menos 50, nuevamente preferentemente especies no radioactivas. Para la escintigrafia, los iones metálicos deben. por supuesto ser iones de isótopos radioactivos. Para MR, rayos X, EIT o formación de imagen magnetométrica, se pueden usar grupos quelantes para enlazarse a los cúmulos de metal pesado (por ejemplo polioxoaniones y análogos completos o parciales de azufre) o a óxidos de hierro u otras especies poliatómicas superparamagnéticas . Para las macroestructuras lipofilicas de acuerdo a la invención, la incorporación del metal se logra preferentemente antes de la formación del liposoma. Para las macroestructuras de zeolita, la incorporación del metal es preferentemente efectuada antes de la conjugación de los inhibidores de la opsonización. Será también preferentemente efectuada la manipulación mediante ingeniería de la boca del poro o la del desaluminación superficial como se describe en el documento WO-93/08846.

Los métodos para la formación de complejos de iones metálicos con quelantes y poliquelantes, están dentro del nivel de experiencia en la técnica. Cada uno de los metales usados puede ser incorporado en una porción quelante mediante uno de los tres métodos generales: incorporación directa, síntesis de plantilla y/o transmetalación. Se prefiere la incorporación directa. Para la metalación directa, el metal es titulado desde niveles subestequiométricos hasta la incorporación completa, eliminando de este modo la necesidad para la diálisis y la purificación cromatográfica intensiva. De esta manera, son evitadas pérdidas significativas asi como la dilución. El enlace no específico de los iones metálicos es también prevenido. Sin embargo, la aplicación de la invención a los radionúclidos con vidas medias cortas puede requerir la metalación como un paso final, seguido por purificación rápida simple (por ejemplo, filtración en gel) para eliminar el radionúclido no enlazado, en exceso. Los iones metálicos Fe(III), Cr(III), Mn(II), Hg(II), Pb(II), Bi(II) y los lantánidos se pueden incorporar directamente dentro de los poliaminopolicarboxilatos mediante el siguiente procedimiento general. Una forma soluble en agua del metal, en general una sal inorgánica, se disuelve en un volumen apropiado de agua destilada, desionizada. El pH de la solución será inferior a 7. Una solución acuosa que contiene una cantidad equimolar del quelante se agrega a la solución metálica a temperatura ambiente, mientras se agita. El pH de la mezcla se eleva lentamente mediante la adición de base. Tipicamente hidróxido de sodio 0.1 M, hasta que los grupos donadores del quelante son desprotonados, en general en el intervalo de pH de 5 a 9, dependiendo de las porciones quelantes. Se debe de tener cuidado particular con los iones lantánidos para mantener el pH por debajo de 8, para evitar la precipitación del hidróxido metálico. La incorporación del metal dentro de las porciones quelantes macrociclicas derivadas y relacionadas a DOTA, será normalmente un proceso lento, como se describe en las referencias citadas más adelante. Los ejemplos específicos del procedimiento están contenidos en las siguientes referencias. Choppin y colaboradores, J. Inorg. Nucí. Chem., 3_3: 127 (1971), Margerum, Rec. Chem. Prog. 24_: 237 (1973) y D'Olieslager y colaboradores, J. Inorg. Nucí. Chem., 3_5.: 4255 (1973) describen la incorporación directa de los lantánidos dentro de los polioaminopolicarboxilatos . Margerstadt, Mag. Res. Med., 3: 808 (1986) y WO-A-87/06229 describen la incorporación de Gd(III) en DOTA. Un método para la preparación de complejos de bismuto y plomo de DOTA se 5 describe por Kumar y colaboradores, J. Chem. Soc. Chem. Commun., 3_1: 145 (1989) . Las referencias anteriores son incorporadas en la presente por referencia, en su totalidad. "*** La incorporación directa de hafnio, circonio, tungsteno, mercurio y tantalio se puede realizar de acuerdo a los métodos bien conocidos. Ver, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 4,176,173 (Winchell) . La transmetalación es útil cuando el ion metálico necesita ser reducido a un estado de oxidación más apropiado para enlazar los átomos - - donadores de la porción quelante. Por ejemplo, para incorporar 39mTc o 18,:,/13bRe, el ion metálico debe de ser reducido a Tc (V) o Re (V) mediante el uso de agentes reductores tales como SnCl2 o cisteina, mediante métodos bien conocidos. Este método requiere la formación de un complejo intermediario. Un ejemplo típico es la reducción de 39raTc con estaño (Sn) en presencia de un ligando débilmente coordinador tal como glucoheptanoato antes de la formación del complejo con los quelantes tales como DOTA. Estos métodos son bien conocidos en la técnica radiofarmacéutica. " Cu utiliza quelatos de tetraamina tales como tet A o tet B (ver Bhardaredj y colaboradores., JACS, 108: 1351 (1986)) para estabilizar Cu (II) para la reacción con quelantes de enlace más fuerte. Los agentes de contraste de la invención se pueden administrar a pacientes para la formación de imágenes, en cantidades suficientes para producir el contraste deseado con la técnica particular de formación de imagen. En general las dosis desde 0.001 hasta 5.0 mmoles de ion metálico formador de imagen, quelado, por kilogramo de peso corporal del paciente, son efectivas para lograr mejoramientos de contraste adecuados. Para la mayoria de las aplicaciones de MRI las dosis preferidas de ion metálico que forma la imagen estarán en el intervalo de 0.001 a 1.2, por ejemplo 0.01 a 0.5, mmoles/kg de peso corporal, mientras que las dosis para aplicaciones en rayos X desde 0.5 hasta 1.5 mmoles/kg, son en general efectivas para lograr la atenuación de los rayos X. Las dosis preferidas para la mayoría de las aplicaciones en rayos X son desde 0.8 hasta 1.2 mmoles del lantánido o metal pesado por kg de peso corporal.

Para aplicaciones en rayos X, para extender el intervalo de energía fotónica sobre el cual los agentes de contraste de la invención son óptimamente efectivos, se pueden usar simultáneamente dos o más diferentes metales quelados. Existen, muchos métodos disponibles para la unión del polietilenglicol o monometilpolietilenglicol a poliaminas u otras macroestructuras. La unión puede ser por ejemplo lograda a través de un enlace covalente inerte o a través de una unión biodegradable (por ejemplo, carbonato). La metodología para tal unión puede ser encontrada en las siguientes referencias : Harris, Rev. Macromol. Chem. Phys. C25 (3) : 325 (1985), y Delgado, Critical Rev. Drug Carrier Sys. 9(3,4) : 249 (1992) . De este modo un esquema ejemplar es como sigue: Métodos generales para construir un compuesto cargado con inhibidor de opsonización: H2N-R es un grupo amino sobre una macroestructura (o un componente de macroestructura o sobre un grupo que puede conjugarse a una macroestructura, por ejemplo mediante incorporación de una membrana liposomal o reacción con un grupo superficial de un particulado) que puede o no tener porciones activas (por ejemplo quelatos metálicos) ya unidas. MePEGX es el PEG terminado en metoxi, de peso molecular de 500 a 10,000.

Posibles rutas que usan la química de unión del PEG Se debe de notar que muchos compuestos PEG activados, apropiados para el uso en la preparación de composiciones de agregado de acuerdo a la invención, son comercialmente disponibles, por ejemplo de Shearwater . 1. Ruta del cloruro cianúrico: Condiciones de acoplamiento - pH 9, reacción con tioles, posible dimerización con derivado mono, cromóforo con UV.

Reacciones (ver por ejemplo Anal. Biochem. 165: 114 (1987) y J. Biol. Chem. 252: 3582 (1977)). 2. Ruta que conduce a un enlace amida entre PEG y el amplificador: una macroestructura o componente de. macroestructura no reactivo con los tioles, posible hidrólisis del éster con derivado succínico.

Reacciones : ción MePEG02CCH2CH?CONHR [0] i . Activación MePEG-OH > MßPEG-COOH > MePEG- CONHR 2 . RNH3 (ver por ejemplo Appl. Biochem. Biotechnol. 1_1: 141 (1985) y Cáncer Biochem. Biophys. 1_: 175 (1984)). 3. Enlace carbamato entre PEG y una macroestruct?ra o componente de macroestructura: Tiempo de reacción prolongado, condiciones de acoplamiento = pH 8.5-9.2, hidrólisis apreciable, el PEG activado puede ser almacenado .

Reacciones : —* Mattoo-cojoai MePEG-OH HjNR Cl -CO-O-Ar > MePEG-O-CO-O-Ar > MePEG-O-CO-NHR (ver por ejemplo Klin. Paediatr. 200: 184 (1988) y Anal. Biochem. 131 : 25 (1983)). 4. Unión con cloruros de sulfonilo: Condiciones suaves (pH 7.5, temperatura ambiente), reacción rápida Reacciones : C 1 S0?CH2C F , R-NH2 Me PEG-OH -> MePEG-O-Tres -> MePEG-NHR (ver por ejemplo Biotechnol. Appl. Biochem. 12_: 119 (1990) ) .

Enlace amina: Enlace muy estable Reacciones MePEG-OH > MePEG-CHO > MePEG-CH2NHR Na(CN)BH, 1. t-BuOK MePEG-OH / 2. BrCH2CH(OEt)2 3. HCl (ver por ejemplo J. Macromol. Sci., Rev. Poly. Chem. Phys. C2_5: 325 (1985) y J. Polymer Sci. 22: 341 15 (1984) ) . ?) Hacer reaccionar PEO primeramente B) Hacer reaccionar - - D03A primeramente* » )—-« <N«-JM_10QI?)-«r V«-*-*rtO>? *Usar menos de la cantidad estequiométrica de quelato (<y eq) para dejar sitios abiertos para la unión de varias porciones PEG.

En el esquema anterior D representa una enésima generación, el dendrímero que se hace reaccionar al quelante de carga y a las porciones inhibidoras de la opsonización sobre el mismo. n es en general bajo, por ejemplo hasta 5. 10 Observada desde un aspecto adicional, la invención proporciona por lo tanto una composición de agente de contraste diagnóstico que comprende un agente de contraste de acuerdo a la invención, junto con al menos un portador o excipiente fisiológicamente tolerable. Los agentes de contraste de la presente " "* invención se pueden formular con productos farmacéuticos convencionales o auxiliares veterinarios, por ejemplo emulsificantes, esteres de ácidos grasos, agentes gelificantes, estabilizadores, antioxidantes, agentes de ajuste de la osmolaridad, amortiguadores (por ejemplo, clorhidrato de trometamina) , conservadores, agentes antimicrobianos, agentes ajustadores del pH, adiciones (por ejemplo, 0.01 a 10 por ciento mol) de quelantes (tales como, por ejemplo, DTPA o bisamida de DTPA) , o complejos de quelato de calcio (como por ejemplo DTPA de calcio o CaNaDTPA-bisamida) , u, opcionalmente, adiciones (por ejemplo, 1 a 50% mol) de calcio o sales de sodio (por 5 ejemplo, cloruro de calcio, ascorbato de calcio, gluconato de calcio o lactato de calcio), etc., y puede estar en una forma adecuada para la administración parenteral, por ejemplo inyección o infusión directamente, o después de la dispersión en medios portadores fisiológicamente tolerables. De este modo, las composiciones del agente de contraste de la presente invención pueden estar en formas de administración farmacéuticamente convencionales tales como polvos, soluciones, suspensiones, dispersiones, etc.; sin embargo, las soluciones, suspensiones y dispersiones en medios portadores fisiológicamente *•* aceptables, por ejemplo agua para inyecciones, serán en general preferidas. Las composiciones de acuerdo a la invención pueden ser por lo tanto formuladas para la administración usando portadores o excipientes fisiológicamente aceptables, de una manera completamente dentro de la experiencia en la técnica. Por ejemplo, los agentes de contraste, opcionalmente con la adición de excipientes farmacéuticamente aceptables, serán suspendidos o disueltos en un medio acuoso, con la solución o suspensión resultante que es esterilizada . Las composiciones parenteralmente administrables de acuerdo a la invención, por ejemplo, soluciones intravenosas, deben de ser estériles y libres de agentes fisiológicamente inaceptables, y deben de tener baja osmolaridad para minimizar la irritación u otros efectos adversos después de la administración. Los vehículos apropiados incluyen vehículos acuosos comúnmente usados para la administración de soluciones parenterales tales como soluciones de Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer Lactatado y otras soluciones, tales como se describen en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 15a de., Easton: Mack Publishing Co . , pp . 1405-1412 y 1461-1487 (1975) y The National Formulary XIV, 14a de. Washington: American Pharmaceutical Association (1975) . Desde un punto de vista adicional, la presente invención proporciona el uso de un agente de contraste de acuerdo a la invención, para la fabricación de una composición de diagnóstico.

Desde otro punto de vista la presente invención proporciona un método para la generación de una imagen de un cuerpo de un animal, humano o no humano, especialmente mamífero, cuyo método comprende el administrar dentro de la vasculatura sistémica de dicho cuerpo, una cantidad mejoradora de la imagen de un agente de contraste de acuerdo a la invención, o una sal del mismo, y después de esto se genera una imagen, por ejemplo, una imagen de resonancia magnética, de rayos X, de ultrasonido de EIT o de escintigrafía, de al menos una parte de dicho cuerpo. Esta invención es además ilustrada por los siguientes ejemplos específicos pero no limitantes. Las temperaturas se dan en grados Celsius y las concentraciones como porcentajes en peso, a no ser que se especifique de otro modo.

EJEMPLO 1 Extracto modificado proveniente de LaJolla Blue ZZ (LJBII) a. Síntesis (i) Sulfonilación: Ftalocianina de silicio (5000 mg) se disuelve en ácido sulfúrico fumante (15 ml) y se calienta a 75°C por una hora. La mezcla de reacción se vacía sobre hielo. El producto se recolecta, se lava con ácido clorhídrico 1 M, y se vuelve a disolver en hidróxido de sodio 1 M (20 ml) . Las impurezas insolubles se eliminan mediante filtración y el filtrado se neutraliza con ácido clorhídrico 1 N. El producto se aisla y se seca a vacío . (ii) PEGilación: Uno de los sulfonatos anteriores es modificado mediante cloración usando S0C12 (32 ml a temperatura ambiente) . La mezcla se calienta por 3 horas a 80°C y se enfría. Aproximadamente 4 ml de la mezcla se agregan gota a gota a hielo y se filtra, luego se seca a vacío. Se disuelve PEG-etanolamina (Avanti, promedio PEG = 2000; ver también HN-PEG-OH. Huang y colaboradores Polym. Sci., Polym. Chem. De., 73_: 795 (1985)) en 10 ml de diclorometano y se agrega al sólido anterior en diisopropiletilamina (0.5 ml ) . Después de agitar por 20 horas, la solución se evapora parcialmente y se agregan 2 ml de tolueno. La mezcla se seca y se purifica como se describe enseguida. b. Purificación del producto crudo 10 LJBII crudo fue primeramente filtrado a través de un filtro de membrana en agua (MWCO = 10 KD) : el retenido se evaporó y se volvió a disolver en diclorometano y se eluyó a partir de una columna de gel de silice con un gradiente de metanol de 2.5% hasta 50%, en diclorometano. El pico principal fue """ recolectado y se analizó para pureza mediante cromatografía líquida de alta presión (producto 95.5% puro, columna PKB-100, metanol/agua, ácido acético (0.48%) en proporciones de 62.5/0.5/37, pH 7.1, 1.2 ml/min.). Análisis elemental: proporción N/S = 9.75 a 10.5, indicando mono-sulfato, ftalocianina de silicio monoamino-PEGilada . Espectro de masa (M+Na) + a 2187.5 - 2980.4, correspondiente a cadenas de óxido de etileno de 31 a 49 unidades, confirmando la estructura predicha . c. Agregación 5 A concentraciones mayores de 0.15 mg/ml en agua, LJBII purificado no pasó a través de un filtro de membrana de MWCO de 30 KD, pero sí pasó a través de r un filtro de 0.2 mieras. Esto indicó una estructura 10 más grande que la unidad monomérica (peso molecular = 2500) . d. Biodistribución La biodistribución y excreción de La Jolla - Blue II purificado se determinó en el ratón macho "*" adulto Swiss Webster, después de la administración intravenosa. El compuesto se administró a una dosis de 0.05 mmol/kg a 24 ratones asignados en grupos de 3.

Los animales se sacrificaron a tiempos preseleccionados (3, 9, 15, 30 y 60 minutos, 4 y 24 horas y 7 dias; grupos 1 al 8, respectivamente) después de la administración. Se recolectaron muestras de orina y de heces de los animales en los grupos 6, 7 y 8. Las muestras se tomaron de sangre y de fluido peritoneal y se extirparon los ' órganos mayores (higado, bazo, riñones, corazón, pulmones, cerebro y vesícula biliar) , se pesaron y se homogeneizaron en detergente (Tween 20 al 0.01%): Las alícuotas de estas suspensiones semi-solubilizadas se midieron para la presencia de ftalocianina de silicio ya sea con un fluorímetro o mediante espectroscopia de absorción UV-visible. La concentración del compuesto se determinó a partir de curvas estándares para cada uno de los tejidos, preparados bajo condiciones idénticas, de un animal no tratado. Los niveles sanguíneos promediaron 15.7% ± 2.43 (desviación estándar) de la dosis administrada a 3 minutos después de la administración, 12.64% ± 3.39 a las 4 horas, 2.79% ± 0.14 a las 24 horas, y menos de 1% (0.05% ± 0.00) a los 7 dias. El higado promedió 2.41% ± 0.82 de la dosis administrada a los 3 minutos, y no cambió significativamente durante los 7 dias del estudio. El pulmón y los riñones promediaron 1.09% ± 0.20 (a los 60 minutos) y 1.37% ± 0.11 (a los 3 minutos), respectivamente, pero fueron reducidos aproximadamente a 1% o menos a los 15 minutos. La recuperación acumulativa de La Jolla Blue II en la orina a las 2 horas promedió 45.52% ± 4.92 (n = 8) y aproximadamente 76% (n = 6) a las 24 horas. Después de 7 días, 78.01% ± 10.10 (n = 3) de La Jolla Blue II administrada fue recuperada en la orina, con menos del 1% representado en las heces. La Jolla Blue II purificado mostró un patrón de biodistribución y de excreción más consistente con aquel de un agente de combinado sanguíneo que un agente de fluido extracelular. Debido a que el compuesto fue detectable mediante fluorescencia por hasta 7 días, esto sugiere que no existió metabolismo in vivo significativo de la estructura de anillo del compuesto .

EJEMPLO 2 Complejo Gd-D03A Anfotérico Preparación de agente anfotérico basado en GdAE-D03A: a) 1, 4, 7-tri-terbutoxicarbonilmetil-10-metoxicarbonilmetil-1, 4,7, 10-tetraazaciclododecano (la): El bromhidrato de 1,4,7-tri-terbutoxicarbonilmetil-1, 4,7, 10-tetraazaciclododecano (25.0 g, 42 mmol) se suspendió en acetonitrilo y se trató con TMG (70 ml) . Se agregó bromoacetato de metilo (6.5 g, 42 mmol) en una porción, y la mezcla se calentó a reflujo por 3 horas. Después de agitar a temperatura ambiente por un periodo adicional de 18 horas, el solvente y el exceso de TMG se eliminaron. mediante evaporación rotatoria. El residuo se disolvió en cloroformo, se lavó con agua y se secó (sulfato de magnesio). La evaporación del solvente proporcionó el producto del titulo como un aceite pálido (23 g, 95%) .

RMN H (CDC13) : 1.4 (s, 27 H) , 2.8 (s, 16 H) , 3.2 (s, 6 H) , 3.4 (s, 2 H) , 3.6 (s, 3 H) . b) 1, 4, 7, tri-terbutoxicarbonilmetil-10- (N- (2-aminoetil) amidometil) -1,4,7, 10-tetraazaciclododecano (Ib): El éster metílico (la) (23.0 g, 40 mmol) se disolvió en metanol (500 ml) y se trató con etilendiamina (200 ml ) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 3 días. El solvente y el exceso de etilendiamina se eliminaron mediante evaporación rotatoria y el residuo se disolvió en cloroformo, se lavó con agua, y se secó (sulfato de sodio) . El solvente se evaporó para producir el producto del título como un aceite viscoso (18 g, 75%) .

RMN LH (CDC13) : 1.4 (s, 27 H) , 2.5-3.0 (m, 20 H) , 3.3 ( , 6 H) , 6.0 (s amplio, 1 H) . c) 1,4,7-tri- (carboximetil) -10- (N- (2-aminoetil) amidometil) -1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano (lc o AE-D03A) : El éster (Ib) (10.0 g, 16 mmol) se desprotegió mediante reacción con TFA puro (200 ml) a temperatura ambiente por 3 horas. Después de la eliminación del TFA, el residuo se disolvió en hidróxido de sodio 1 M y se cargó sobre una columna de intercambio iónico ([AG 1X8 (OH-)], 200 ml). La columna se lavó con agua y el producto se eluyó con ácido acético 1.5 M. La concentración de las fracciones que contienen el producto del título produjeron 7.0 g (93%) como un sólido blanco.

RMN ;H (D20) : 2.9-3.6 (amplio múltiple) Análisis Calculado para C-_3H34N60-7HOAc: C, 47.14; H, 8.11; N, 16.49. Encontrado: C, 47.40; H, 7.98; N, 16.48. d) 1,4,7-tri (carboximetil) -10- (N- (2-aminoetil ) amidometil) -1,4,7, 10-tetraazaciclododecano Gadolinio (III) (ld) : El ligando (lc o AE-D03A) (1 g) se disolvió en agua y el pH se ajustó a 5 con ácido clorhídrico.

A la solución se le agregó 1.0 equivalente de Gd- (acetato)3 con agitación. Después de varias horas, el pH se ajustó a 6 y la solución se calentó a 45°C por unas pocas horas. Se retiró una alícuota y se probó para el Gd4+ libre mediante la prueba de naranja de xilenol (negativo) . El sólido se aisló después de la eliminación de la solución acuosa. El material crudo se trituró con etanol a ebullición y se filtró en caliente para eliminar las sales. Rendimiento 95%. e) GdAE-D03A-N-octadecilo El complejo del inciso (ld) se disuelve en dimetilformamida y se trata con bromuro de octadecilo (Aldrich, 1.0 equivalente). Después de agitación a temperatura ambiente por 24 horas, la dimetilformamida se evapora bajo presión reducida. El residuo se disuelve en cloroformo y se lava con agua. Los extractos orgánicos se secan (sulfato de sodio) y se evaporan para proporcionar el 1, 4, 7-tri (carboximetil ) -10- (N- (octadecil) -N- ( 2-aminoetil ) amidometil) -1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano Gadolinio (III) (le) f) GdAE-DO3A-N-octadecil-N-PEG5000 El compuesto del inciso (le) se disuelve en cloroformo y se trata con 1.1 equivalentes de trietilamina y 1.0 equivalente de metoxi-succinal-PEG5000 (Shearwater Corp.) . Después de agitar a temperatura ambiente por 24 horas, la mezcla de reacción se lava con agua, se seca y se concentra mediante evaporación rotatoria. El producto crudo se recristaliza a partir de etanol/isopropanol/agua .

EJEMPLO 3 Agente basado en dendrímero con núcleo de amina A) Preparación de dendrímero de generación 4 Se siguió el mismo procedimiento que en Watson (WO-93/06868) para generar un dendrímero de Generación 4.0. Se disolvió G4 (0.56 g) en agua d.i. (20 ml) y en un matraz separado, se disolvió D03A-bz- NCS (2.31 g, 20% en exceso preparado como se describe en la Patente Británica GB 9407812.8) en agua (80 ml) y el pH se ajustó con hidróxido de sodio 5 N hasta 8.5. La última solución se agregó lentamente (alícuotas pequeñas) a la solución dendrimérica con agitación vigorosa. La adición se completó en el lapso de 10 minutos. Después de la agitación por cuatro dias, la solución se hizo pasar a través de una frita de porosidad media y las substancias volátiles se eliminaron mediante evaporación rotatoria (ajuste de calor 60) . 0.48 g del sólido naranja claro se tomaron y se filtraron usando el filtro Centriprep C-10. Esto fue mostrado mediante GPC para separar de manera efectiva las impurezas de bajo peso molecular del producto deseado. El resto de la mezcla cruda se filtró de esta manera, y se aisló un total de 2.1 g del producto. La integración del espectro de RMN 1E dio una carga promedio aproximada de 30 quelatos por dendrimero (y = 30) para una eficiencia de carga de 63%. El producto fue también caracterizado mediante RMN 13C y análisis CZE.

B. Incorporación de Gadolinio El producto del paso A (551 mg) se disolvió en H0 d.i. (11 ml ) mientras que se disolvió Gd (OAc) j.H0 (0.90 g) en 8 ml de agua. La solución, del dendrímero se agregó a esta última ya que no todo el acetato de gadolinio se había solubilizado . Se agregó agua adicional (10 ml) y se verificó el pH (5.0) . Después de 24 horas a temperatura ambiente, la solución se calentó a 45°C por 3.5 horas. La solución resultante se filtró (2 x 45 minutos) usando los filtros Centriprep C-10 para eliminar la mayor parte de las sales de gadolinio sin reaccionar. El pH de la solución resultante se elevó hasta 9 para precipitar cualquier gadolinio sin reaccionar, como Gd(OH)3 y se filtró a través de un filtro de 0.45 mieras. La prueba de naranja de xilenol fue negativa para el gadolinio libre. La eliminación de sales de cloruro fue mediante ultrafiltración, y se verificó periódicamente mediante GPC. Esto dio como resultado la formación de un producto puro (aproximadamente 300 mg) .

C) Pegilación El producto del paso B, G4 (N[CS]N-bz-D03A) 30 (160 mg, 5.3 x 10"5 mol), y PEG-NPC (nitrofenilcarba ato) 5000 (480 mg, 9.6 x 10"s mol, Shearwater Chemical SPA) se colocan en matraces separados a los cuales se agrega agua desionizada (10 ml, respectivamente) . La solución de PEG ligeramente turbia se agrega rápidamente al G4 (N[CS]N-bz-D03A) 3o y la solución resultante (pH 7.8) se agita a temperatura ambiente por 24 horas. La solución se purifica usando ultrafiltración (Centriprep C-10 y C-30) . La cromatografía en capa delgada (metanol/cloroformo, 1:1) muestra que la eliminación de las especies PEG es eficiente. El producto es caracterizado mediante métodos convencionales de espectroscopia (RMN, IR, UV) y dispersión de luz (LALLS, PCS) . Alternativamente, el producto se purifica usando cromatografia en Sephadex G-50) .

EJEMPLO 4 AGENTE BASADO EN DENDRIMERO (a) Síntesis de P32(D03A)?0 P-l2(NH )24 (250 mg, 0.05 mmol) (preparado como se describe en la Patente Británica GB 9407812.8) se disolvió en agua (15 ml) y el pH fue registrado (10.1) . En un matraz separado se colocó D03A-bz-NCS (750 mg, 1.18 mmol, 23.6 equivalentes) disuelto en agua (40 ml). El pH se elevó desde 2.1 hasta 7.0 con hidróxido de sodio 1 N. La solución de P,2 se agregó al quelato rápidamente, y el pH se registró (8.0) . La solución amarilla ligeramente turbia se agitó por seis horas, tiempo en el cual ésta se filtró (0.2 mieras) y la solución amarilla clara resultante se concentró hasta 30 ml . El concentrado se colocó luego en cuatro unidades Centriprep C-3 y se ultrafiltró (3 x 60 min.) . Los retenidos se combinaron y se purificaron para dar el producto del título como un sólido amarillo claro (610 mg) . El análisis elemental indicó la presencia de algo de quelato sin reaccionar. La resonancia magnética nuclear y el ensayo de fluorescencia de amina indicaron que 10 de los 24 sitios habían sido modificados. (b) Síntesis de PG2 (GdD03A) 10 P2(D03A)?o (560 mg, 0.333 mmol) y Gd(0Ac)3 (410 mg, 1.22 mmol) se colocaron en matraces separados y se disolvieron cada uno en agua (20 y 10 ml, respectivamente) . El Gd se agregó al dendrímero y el pH se ajustó a 5.5 con hidróxido de sodio 1 N. El pH se verificó periódicamente cada 2 horas. Después de la agitación, la solución se concentró y el exceso de Gd se eliminó mediante ultrafiltración exhaustiva (unidades C-3, 7 x 0 minutos) . A este tiempo, una prueba de naranja de xilenol fue negativa. El producto del título se aisló como un sólido amarillo claro (270 mg) . La dispersión de luz láser de ángulo bajo (LALLS) y la espectroscopia de fluorescencia determinaron que la carga del quelato era de 10. El producto se tomó para el siguiente paso, PEGilación. !c) Síntesis de PG2 (GdD03A) 10 (PEG200 CW 1 4 Se di so lvió PG2 ( GdD03A) ?o ( 270 mg, 2 . 35 x 10~5 mo l ) en amort iguador de borato de pH 8 . 7 , 80 ml ) .

Esta solución se agregó rápidamente en un matraz separado, el cual contenia PEG200o-NPC sólido (0.89 g, 4.49 x 10"* mol, 20 equivalentes) . La solución se tornó amarillo brillante inmediatamente (presencia de p-nitrofenol) . Después de la agitación por 18 horas, la solución se concentró y se corrió en una columna de Sephadex G-25 para eliminar el nitrofenol y las sales. El PEG en exceso se eliminó mediante diálisis (tubería Sigma de 12 kD) contra amortiguador de borato (pH 9) . El análisis de LALLS indicó la presencia de una especie correspondiente a un peso molecular de 4,000, junto con el producto a PM 30 kD. La caracterización del producto fue llevada a cabo mediante un número de métodos. LALLS indicó un peso molecular de 31 kD en la carga de 10 u 11 moléculas PEG. La espectroscopia de fluorescencia indicó la carga completa de los grupos amino terminales, por ejemplo 14 moléculas PEG unidas. El análisis elemental sugirió también carga completa de PEG. El producto, el cual se aisló como un sólido amarillo (410 mg) se identificó como P; (GdD03A) ?o (PEG2CC.3) 10. Relajación (agua, 20 MHz) r: = 13.7 mM'^S"1.

EJEMPLO 5 Aumento progresivo de G3 (GdDQ3A) ?0 (PEG00n) 9 (a) Preparación de G3 (N[CS]N-bz-D03A) ?0.

El procedimiento previamente desarrollado fue empleado con los materiales iniciales G3 (400 mg, 7.97 x 10"5 mol) (ver Patente Británica GB9407812.8) y D03A-bz-NCS (1.48 g, 2.3 mmol). El producto se aisló como un sólido amarillo (1.44 g) . La integración por RMN "H mostró que la carga era de 10 quelatos de 24 sitios con grupo amino terminal. (b) Preparación de G3 (NfCSlN-bz-D03A) 10 Se usaron métodos sintéticos convencionales con G3 (N[CS]N-bz-D03A) 10 (1.33 g) y Gd (OAc) 3. H20. El producto del título fue aislado como un sólido amarillo pálido (760 mg) . La dispersión de luz y la fluorescencia indicaron la presencia de 10 quelatos, en concordancia con el resultado previo. El balance del material fue llevado a cabo para el siguiente paso . (c) Preparación de Aumento Progresivo de G-. (GdD03A) . (PEG. ^_) (i) La reacción se trató inicialmente a una pequeña escala con 100 mg de G3(GdDO3A)?0 y 220 mg de PEG?opn.;-NPC. El producto se trabajó de una manera similar como se describe anteriormente, para dar el producto como un sólido blanquecino (140 mg) . (ii) Se usó nuevamente el procedimiento descrito anteriormente para PG2 (GdD03A) ?0 (PEG2J ;) u con las cantidades: G3(GdD?3A)?0 (650 mg) y PEG2oon-NPC (2.1 g) . El producto se aisló como un sólido blanquecino (750 mg) y se caracterizó usando LALLS, fluorescencia, ICP (Gd) y análisis de agua. Todos estuvieron en concordancia con la estructura asignada. Se identificó una carga de PEG de 13.8 mediante el ensayo de fluorescencia de aminas terminales. Relajación (agua, 20 MHz) n = 13.7 M'V1.

EJEMPLO 6 Síntesis de G3 (GdDQ3A) lü (PEG500) G3(GdD03A)?o (100 mg) y PEG5000-NPC (0.615, aproximadamente 15 equivalentes) se combinaron como se describe anteriormente. El producto se aisló como un sólido blanquecino (530 mg) . La espectroscopia de fluorescencia indicó que la reacción fue altamente eficiente con PEG, ocupando los 14 sitios de amina restantes. El análisis de cromatografía en capa delgada indicó la presencia de PEG libre sin reaccionar, mientras que LALLS indicó que el PEG se habia dimerizado con un peso molecular de 10,000. Se identificó una carga de PEG de 11.3 mediante ensayo. Relajación (agua, 20 MHz) ri = 15.8 mM"1s-1.

EJEMPLO 7 1,4, 7-tri-terbutoxicarbonilmetil-10-metoxicarbonil-metil-1,4,7, 10-tetraazaciclododecano El bromhidrato de 1,4,7-tri-terbutoxicarbonilmetil-1 , 4, 7, 10-tetraazaciclododecano (25.0 g, 42 mmol) se suspendió en acetonitrilo y se trató con TMG (70 ml ) . Se agregó bromoacetato de metilo (6.5 g, 42 mmol) en una porción, y la mezcla se calentó a reflujo por 3 horas. Después de la agitación a temperatura ambiente por un periodo adicional de 18 horas, el solvente y el TMG en exceso fueron eliminados mediante evaporación rotatoria. El residuo se disolvió en cloroformo, se lavó con agua, y se secó (sulfato de magnesio) . La evaporación del solvente proporcionó el producto del título como un aceite pálido (23 g, 95%). RMN *LE (CDC13) : 1.4 (s, 27 H) , 2.8 (s, 16 H) , 3.2 (s, 6 H) , 3.4 (s, 2 H) , 3.6 (s, 3 H) .

EJEMPLO 8 1,4, 7-tri-terbutoxicarbonilmetil-10- (N- (2-aminoetil) -amidometil-1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano El éster metílico del Ejemplo 7 (23.0 g, 40 mmol) se disolvió en metanol (500 ml) y se trató con etilendiamina (200 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 3 días. El solvente y la etilendiamina en exceso se eliminaron mediante evaporación rotatoria, y el residuo se disolvió en cloroformo, se lavó con agua, y se secó (sulfato de sodio) . El solvente se evaporó para producir el producto del título como un aceite viscoso (18 g, 75%). RMN :H (CDC13) : d 1.4 (s, 27 H) , 2.5-3.0 (m, 20 H) , 3.3 (m, 8 H) , 6.0 (s amplio, 1 H) .

EJEMPLO 9 1,4, 7-tri (carboximetil) -10- (N- (2-aminoetil) amido-metil) -1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano [GdAE-D03A) El éster del Ejemplo 8 (10.0 g, 16 mmol) se desprotegió mediante reacción con TFA puro (200 ml) a temperatura ambiente por 3 horas. Después de la eliminación del ácido trifluoroacético (TFA) , el residuo se disolvió en hidróxido de sodio 1 M y se cargó sobre una columna de intercambio iónico [AG 1 X 8 (OH-), 200 ml) . La columna se lavó con agua y el producto se eluyó con ácido acético 1.5 M. La concentración de las fracciones que contienen el producto del título produjeron 7.0 g (93%) como un sólido blanco. RMN lE (D0) : d 2.9-3.6 (amplio múlt.).

Análisis Calculado para C18H3N60- HOAc: C, 47.14; H, 8.11; N, 16.49. Encontrado: C, 47.40; H, 7.98; N, 16.48.

EJEMPLO 10 1,4, 7-tri (carboximetil) -10- (N- (2-aminoetil ) amido-metil) -1, 4, 7, 10-tetraazaciclododecano Gadolinio (III) El compuesto del Ejemplo 9 (1.0 g, 2.38 mmol) se disolvió en agua (37 ml) . El pH se ajustó a 5 mediante la adición de hidróxido de sodio 1 M. Se agregó acetato de gadolinio (III) en pequeñas porciones hasta que estuvo presente un ligero exceso de metal (mediante naranja de xilenol). Durante la adición, el pH fue mantenido a 5-6. La mezcla de reacción se agitó toda la noche a temperatura ambiente. El ligando (50 mg) se agregó y la agitación se continuó hasta que se obtuvo una prueba de naranja de xilenol negativa. El agua se eliminó a vacío. El residuo se sometió a cromatografía sobre Sephadex G-10 para eliminar las sales inorgánicas. Las fracciones se analizaron mediante MS (FAB): MH+ = 602.

EJEMPLO 11 1, , 7-tri- (carboximetil) -10- (N- ( 2-aminoetil ) amido-metil) -1,4,7, 10-tetraazaciclododecan-N-hemisuccinamida El compuesto del Ejemplo 9 (6.1 g, 13.6 mmol) en piridina (20 ml) se calentó hasta que la disolución fue completa. Se agregó anhídrido succínico (1.5 g, 15 mmol) y la mezcla se calentó por 1 hora. La solución se enfrió y la acetona se agregó para precipitar el producto. El sólido blanco se lavó perfectamente con acetona y se secó a vacío para proporcionar 5.0 g del producto del título (67%).

EJEMPLO 12 1, 4, 7-tri (carboximetil) -10- (N- (2-aminoetil) amido- etil) -1,4,7, 10-tetraazaciclododecan-N-hemisuccinamida Gadolinio (III) (A) El compuesto del Ejemplo 11 (1.9 g, 3 mmol) se disolvió en agua (30 ml ) . El pH se ajustó con hidróxido de sodio 1 N hasta 5.0. Se agregó gota a gota cloruro de gadolinio (III) (aproximadamente 1.4/10 ml) en agua hasta que un ligero exceso del metal permaneció por varias horas. Se agregó gadolinio adicional (50 mg) , y la mezcla de reacción se agitó hasta que se obtuvo una prueba negativa con naranja de xilenol. El agua se evaporó, y el residuo se lavó varias veces con etanol. El producto del título se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa (CXH) con metanol al 2% en agua, como la fase móvil .

(B) El compuesto del titulo se preparó también mediante un procedimiento alternativo: el compuesto del Ejemplo 9 (240 mg, 0.4 mmol) en DMSO (10 ml ) se calentó a 80°C hasta que la disolución fue completa. Se agregó anhídrido succinico (40 mg, 0.4 mmol) y la mezcla se calentó por 6 horas. Después del enfriamiento hasta la temperatura ambiente, se agregó acetona para precipitar el producto del titulo. El polvo blanco se lavó con acetona y se secó a vacío. MS (FAB): MH+ 683.2, MNa+ 705.1.

EJEMPLO 13 13-colesteril-3, 6, 9, 12-tetraoxa-dodecan-l-ol Se disolvieron tosilato de colesterol (2.0 g, 3.7 mmol) y tetraetilenglicol (6.42 ml, 37 mmol) en dioxano (100 ml ) y se calentó a 70°C por 6 horas. El solvente se evaporó, y el residuo se disolvió en tolueno y se lavó perfectamente con agua. La capa orgánica se secó (sulfato de sodio), y se concentró hasta obtener un aceite. El material crudo se purificó mediante cromatografía sobre una columna corta de sílice, con elución en gradiente de 0-20% de metanol en cloroformo, para proporcionar 1.0 g (49%) del producto del titulo como un aceite pálido.

EJEMPLO 14 Acido 13-colesteril-3, 6, 9, 12-tetraoxa-dodecan-l-oico El compuesto del Ejemplo 13 (0.5 g) en acetona (20 ml) se oxidó mediante la adición gota a gota de reactivo de Jones, hasta que estuvo presente un ligero exceso. La mezcla de reacción se trató con isopropanol y se filtró a través de un tapón de gel de 7¡ silice. El producto del titulo, crudo, fue puro mediante análisis de cromatografia en capa delgada y resonancia magnética nuclear.

EJEMPLO 15 GdD03A-estearil-amida El compuesto del Ejemplo 9 (100 mg, 1.6 mmol) se disolvió en DMSO (10 ml ) y se trató con cloruro de estearoilo (51 mg, 1.6 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 60°C por 2 horas, y se agitó toda la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua (50 ml ) y el producto se extrajo en cloroformo (3 X 100 ml ) . Los extractos se secaron, y se concentraron para proporcionar el producto del título como un sólido blanco. MS (FAB) 868.5 MH* .

EJEMPLO 16 Carbamato de GdAE-D03A-colestearilo El compuesto del Ejemplo 9 (300 mg, 0.8 mmol) se disolvió en DMSO (20 ml) y se trató con cloroformiato de colesterol (225 mg, 0.5 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 80°C por 5 horas. La mezcla se dejó reposar a temperatura ambiente hasta que se depositaron cristales incoloros. MS (FAB): MH+ 1014.5, MNa^ 1036.5.

EJEMPLO 17 LaDQ3A-succinil-PE La LaD03A-succinamida (130 mg, 0.2 mmol) se disolvió en DMSO (3 ml ) . Se agregó diciclohexilcarbodiimida (39 mg, 0.2 mmol) seguido por N-hidroxisuccinimida (22 mg, 0.2 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 hora, y se agregó PE (130 mg, 0.2 mmol) en cloroformo (20 ml ) .

Después de 6 horas, la mezcla de reacción se filtró, se lavó con agua, se secó y se evaporó para producir el producto del título. Cromatografía en capa delgada (65 de cloroformo/25 de metanol/4 de agua/1 de ácido fórmico) Rf = 0.2. MS (FAB): MH+ 1400.7, Mna+ 1422.7.

EJEMPLO 18 GdAE-DQ3A-glutaril-PE El PE-glutarilo de huevo (100 mg, 0.11 mmol) en cloroformo (5 ml ) se trató con N-hidroxisuccinimida (25 mg, 0.21 mmol) y diciclohexilcarbodiimida (50 mg, 20.25 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche y se filtró para eliminar la urea. El compuesto del Ejemplo 10 (100 mg, 0.16 mmol) en metanol (1 ml) y 1 ml de trietilamina, fueron agregados. La reacción se agitó a temperatura ambiente por 6 horas, y se evaporó hasta sequedad. El residuo se disolvió en cloroformo (10 ml) y se colocó en un saco de diálisis. La reacción se dializó contra amortiguador de acetato de sodio (1 litro, 50 mM, pH 5.5, 12 horas), amortiguador Tris (1 litro, pH 8, 50 mM, 5 horas), y agua desionizada (1 litro, 5 horas) . Una pequeña cantidad del precipitado que se había formado en la capa de cloroformo se disolvió mediante la adición de metanol. La solución se secó (sulfato de sodio) y se evaporó para producir el producto del titulo como un sólido blanco ceroso (150 mg, 89%). CCD (65 de cloroformo/25 de metanol/4 de agua/1 de ácido fórmico) Rf = 0.2. MS (FAB): Mna* 1459.

EJEMPLO 19 Una mezcla de PC de huevo (52 µmol) y PE-glutarilo de huevo (48 µmol) en cloroformo, se evaporó hasta obtener una película delgada a vacío. La mezcla lipídica se disolvió en éter dietílico (3 ml) y se trató con 23 ml de amortiguador (MES 25 mM, cloruro de sodio 100 mM) . Se formó una emulsión mediante sonicación de la mezcla. El éter se evaporó para formar un gel. El gel se rompió mediante agitación en torbellino (vortex) y evaporación del solvente residual. Se agregó 1 ml adicional de amortiguador y la evaporación se continuó hasta que todas las trazas del solvente fueron eliminadas. Los liposomas se trataron con GdAE-D03A (140 mg) y EDAC (130 mg) toda la noche a temperatura ambiente con agitación rápida. Los reactivos sin reaccionar se eliminaron mediante el paso del producto a través de una columna de Sephadex G-75 (2.54 x 20.32 cm ( 1 x 8 pulgadas)). Los liposomas se extruyeron tres veces a través de dos membranas de 100 nm. El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 1.14 mM, [P] = 5.04 mM. Con base en la proporción de P/Gd, se derivatizó 47.1% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) rx = 18 ± 2 (mMseg) """ .

EJEMPLO 20 Se usó el mismo procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 19. PC de huevo (20 µmol) y dioleil-P-succinilo (17 µmol). El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.56 mM, [P] = 3.8 mM. Con base en la proporción P/Gd, se derivatizó 30% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) rx = 18 ± 2 (mMseg) -1.

EJEMPLO 21 Se usó el mismo procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 19. Se usaron PC de huevo (10 µmol) y dioleil-PE-dodecanoilo (8 µmol). Los liposomas se extruyeron (3 x 200 nm, 3 x 50 nm) . El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.66 mM, [P] = 3.49 mM. Con base en la proporción P/Gd, se derivatizó 43% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz,) ri = 17 ± 2 (mMseg)"1.

EJEMPLO 22 Se usó el mismo procedimiento usado para preparar el Ejemplo 19, para una mezcla de PC de huevo (56 µmol) y PE de huevo (53 µmol) . Los liposomas se trataron con EDAC (100 mg) y GdAE-D03A-succinamida (80 mg) toda la noche a temperatura ambiente con agitación rápida. Después de la eliminación del reactivo sin reaccionar, los liposomas se extruyeron (3 x 200 nm y 3 x 50 nm) . El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.39 mM, [P] = 5.87 mM. Con base en la proporción P/Gd, se derivatizó 14% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) ri = 27 ± 2 (mMseg)"1.

EJEMPLO 23 Se prepararon liposomas a partir de PC de huevo (13 µmol) y hemisuccinato de colesterol (16 µmol) mediante el mismo método usado para preparar el Ejemplo 19. Los liposomas se trataron con EDAC (25 mg) y GdAE-D03A (25 mg) . Después de la eliminación de los reactivos sin reaccionar, los liposomas se extruyeron (3 x 200 nm y 3 x 50 nm) . El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.26 mM, [P] = 2.93 mM . Con base en la proporción P/Gd, se derivarizó 7.2% del PE- glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) ri = 21 ± 2 (mMseg) ~L .

EJEMPLO 24 Se prepararon liposomas a partir de PC de huevo (80 µmol) y 6- (colesteril ) -7-oxaheptan-l-ol (80 µmol) mediante el método descrito para la preparación del Ejemplo 19. Los liposomas se trataron con EDAC (70 mg) y GdAE-D03A (40 mg) . Después de la eliminación de los reactivos sin reaccionar, los liposomas se extruyeron (3 x 200 nm y 3 x 50 nm) . El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.39 mM, [P] = 3.34 mM. Con base en la proporción P/Gd, se derivatizó 20% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) r: = 19 ± 2 (mMseg)"1.

EJEMPLO 25 Se prepararon liposomas a partir de PC de huevo (68 µmol), PE-glutarilo de huevo (55 µmol) y PS de cerebro (6 µmol) mediante el método descrito para la preparación del Ejemplo 19. Los liposomas se trataron con GdAE-D03A (40 mg) y EDAC (75 mg) . Después de la eliminación de los reactivos sin reaccionar, los liposomas se extruyeron (3 x 200 nm y 3 x 100 nm) . El análisis de la mezcla final dio [Gd] = 0.51 mM, [P] = 4.15 mM. Con base en la proporción P/Gd, se derivatizó 29% del PE-glutarilo. Relajación (agua, 20 MHz) ri = 18 ± 2 (mMseg)"1.

EJEMPLO 26 Se preparan liposomas mediante el método descrito para la síntesis del Ejemplo 19, a partir de hemisebacato de colesterol (130 µmol) y PC de huevo (130 µmol) . Los liposomas se tratan con GdAE-D03A (120 mg) y EDAC (120 mg) . Los reactivos sin reaccionar se eliminan mediante cromatografía en gel y los liposomas se extruyen.

EJEMPLO 27 El compuesto del Ejemplo 16 (71 mg, 6 µmol) se agregó a dioleil-PC (15 mg, 20 µmol) en cloroformo. El solvente se evaporó a vacío. El residuo se disolvió en éter (1 ml). Se agregó agua (1 ml), y la mezcla se sónico hasta que se formó una emulsión. El éter se evaporó lentamente a vacio. Se formó un gel espeso. Se agregó agua adicional (1 ml) y el gel se agitó por torbellino hasta que el gel se rompió para formar vesículas. El producto se extruyó (3 x 200 nm, 3 x 50 nm) .

EJEMPLO 28 El compuesto del Ejemplo 18 (25 mg, 17.4 µmol) y PC de huevo (13.7, 18 µmol) se disolvió en cloroformo (3 ml ) . La solución se evaporó hasta sequedad a vacio, el residuo se disolvió en éter (3 ml) y se filtró. Se agregó amortiguador MES (3 ml) y la mezcla se sónico hasta que se formó una emulsión. El éter se eliminó mediante evaporación a vacio con agitación por torbellino ocasional.

EJEMPLO 29 El compuesto del Ejemplo 15 (50 µmol) y PC de huevo hidrogenado (150 µmol) se disolvieron en una mezcla de cloroformo (10 ml ) y metanol (2 ml) . El solvente se evapora a 75°C. La película delgada residual se hidrata en amortiguador MES a 75°C mediante agitación. Después del congelamiento-descongelamiento cuatro veces, los liposomas se extruyen (3 x 100 nm) a 75°C.

EJEMPLO 30 Farmacocinética Se insertó un catéter en la vena yugular de una rata, dias antes del estudio. Se extrajo una muestra de 300 µl de sangre y se colocó en un tubo tarado que contenia heparina, antes de la inyección de la muestra. El compuesto de prueba se inyectó al tiempo cero. Se tomaron muestras sanguíneas (300 µl) a intervalos en un periodo de tiempo de 24 horas. A los 7 dias el animal se sacrificó, y se extirparon el hígado, el bazo y los riñones. Las muestras de sangre y de órganos se digirieron con ácido nítrico y peróxido de hidrógeno, y se analizaron para la concentración del gadolinio (µg/g) mediante ICP.

Producto del Retención en Órganos Ejem lD a los 7 dias Dosis t?, Higado Bazo Riñon µg Gd/ g min. % % % 19 831 98 9.9 1.3 0.7 19 1190 111 7.4 7.4 0.6 25 1764 69 24.0 11.8 0.5 26 1310 58 34.8 8.9 0.8 EJEMPLO 31 Biodistribución Se marcó (2-aminoetil ) -D03A con 153Gd. El quelato se acopló a liposomas de PC de huevo/glutarilo de huevo 1:1 (100 nm) como en el Ejemplo 13. Los liposomas radiomarcados se inyectaron en las venas de la cola de los ratones. Se usaron tres ratones para cada punto de tiempo. Las muestras de sangre, hígado, bazo, riñon y piel se contaron al primer día, a los 3 días y a los 7 días. El por ciento de dosis inyectada retenida en cada órgano se calculó y se presenta enseguida. La vida media de eliminación para el hígado fue de 32 días.

Retención en Órgano (dosis inyectada %) Día 1 Día 3 Día 7 Sangre 0.60 0.54 0.51 Hígado 18.22 9.91 4.88 Bazo 0.86 0.79 0.69 Riñon 1.03 0.74 0.64 Piel 1.68 1.19 0.80 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la. invención .

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un agente de contraste para combinado sanguíneo, caracterizado porque tiene un peso molecular total de al menos 10 KD, que comprende una macroestructura no liposomal la cual tiene unida a ésta una pluralidad ae porciones inhibidoras de la opsonización, y la cual, posee porciones paramagnéticas iónicas o de metal pesado. 0

2. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la porcjón inhibidora de la opsonización es una porción polimérica anfifílica. 15

3. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la porción inhibidora de la opsonización es de la fórmula I ?n -A- v'R-R;)--B (I) donde A es un grupo funcional que permite la unión a la macroestructura er.lazada a (R;R2)r mediante un 25 enlace o una porción ligadora, uno de Ri y Rr es una porción lipofílica, y el otro de R- y R, es una porción hidrofílica, n es un número entero que tiene un valor de 3 a 200, y B es un grupo terminal.

4. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la unidad que se repite R>R es un grupo alquilenoxi, alquilentío o alquilenimino .

5. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 4, caracterizado porque la porción inhibidora de la opsonizacion es una porción de polietilenglicol.

6. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 4, caracterizado porque la porción inhibidora de la opsonización es una porción de glucosaminoglucano .

7. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la porción inhibidora de la opsonización es una porción de condroitina.

8. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 7, caracterizado porque la macroestructura es un agregado molecular .

9. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la porción inhibidora de la opsonización comprende 15 a 85% del peso total.

10. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 y 9, caracterizado porque ¡os componentes individuales de dicho agregado molecular tienen pesos moleculares de menos de 15 KD.

11. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a la 10, caracterizado porque es un agregado de moléculas de la fórmula II. C-D-E (II) en donde C es una porción que contiene quelato de metal hidrcfílico, D es una porción inhibidora de la opsonización y E es una porción hidrofóbica.

12. Un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 7, caracterizado porque la macroestructura es una macromolécula.

13. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la macromolécula es un poliquelato dendrimérico que tiene dichas porciones inhibidoras de la opsonización unidas a ésta .

14. Un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la macromolécula comprende un dendrímero que tiene sitios de unión a quelante y al inhibidor de la opsonización, 2 a 50% de los mismos están cargados con porciones inhibidoras de la opsonización.

15. Una composición diagnóstica, caracterizada porque comprende un agente de contraste de conformidad con cualsuiera de las reivindicaciones 1 a la 14, junto con al menos un portador o excipiente fisiológicamente tolerable.

16. Un proceso para la preparación de un agente de contraste de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado el proceso porque comprende (i) la metalación de una estructura que tiene unida a ésta una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización y grupos quelantes; o (ií) el enlace de una pluralidad de porciones inhibidoras de la opsonización a una macroestructura, la cual posee porciones de metal paramagnético iónico o pesado, queladas; o (iii) la generación de una macroestructura a partir de una pluralidad de componentes moleculares, cuya pluralidad de componentes incluye las porciones inhibidoras de la opsonización y porciones de metal paramagnético iónico o pesado, quelado.

17. El uso de un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 14, caracterizado porque es para la fabricación de una composición para la formación de imagen diagnóstica .

18. Un método para la generación de una imagen de un cuerpo animal humano o no humano, cuyo método está caracterizado porque comprende la administración a la vasculatura sistémica de dicho cuerpo, de una cantidad mejoradora de la imagen de un agente de contraste de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones I a la 14, y después de esto la generación de una imagen de al menos una parte de dicho cuerpo.