MXPA06013191A - Metodos de tratamiento que utilizan proteinas que enlazan albumina como objetivos. - Google Patents

Metodos de tratamiento que utilizan proteinas que enlazan albumina como objetivos.

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MXPA06013191A
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Neil P Desai
Patrick Soon-Shiong
Vuong Trieu
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Abstract

La presente invencion proporciona un metodo para determinar la respuesta de un tumor de mamifero a un agente quimioterapeutico que comprende detectar y cuantificar la proteina SPARC en una muestra aislada a partir de un humano. La invencion tambien proporciona un metodo para suministrar un agente quimioterapeutico a un tumor en un humano que expresa SPARC que comprende administrar una composicion farmaceutica que comprende el agente quimioterapeutico acoplado a un compuesto que enlaza proteina SPARC. La invencion proporciona ademas una composicion que comprende un agente quimioterapeutico acoplado a un compuesto capaz de enlazar proteina SPARC y un portador farmaceuticamente aceptable.

Description

MÉTODOS DE TRATAMIENTO QUE UTILIZAN PROTEÍNAS QUE ENLAZAN ALBÚMINA COMO OBJETIVOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con los métodos de tratamiento de cáncer; así como otras enfermedades que involucran proliferación anormal, hiperplasia, remodelación, actividad inflamatoria en tejidos y órganos. La invención se refiere además a métodos para elegir un objetivo, formar una imagen, y determinar la respuesta de tumores de mamíferos a un agente quimioterapéutico usando ligandos adecuados que reconocen proteínas que enlazan albúmina. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se ha demostrado que las formulaciones de nanopartículas de albúmina reducen la toxicidad de los agentes terapéuticos escasamente solubles. Por ejemplo la Patente Estadounidense No. 6,537,579 describe una formulación de paclitaxel con albúmina en nanopartículas la cual está libre de emulsionantes tóxicos. El agente anti-cáncer paclitaxel, comercializado bajo la marca comercial Taxol® por Bristol Myers Squibb, está actualmente aprobado para el tratamiento de varios cánceres que incluyen cáncer de ovario, pulmón, y mama. La principal limitación para usar paclitaxel es su muy baja solubilidad. Consecuentemente, la formulación de Taxol® contiene Cremophor® EL como vehiculo solubilizante, pero la presencia de Cremophor® en esta formulación ha sido ligada a varias reacciones de hípersensibilidad en animales (Lorenz et al . , Agents Actions 7, 63-67, 1987), y humanos (Weiss et al . , J. Clin . Oncol . 8, 1263-1268, 1990). De conformidad, los pacientes que reciben Taxol® requieren premedicación con corticoesteroides (dexametasona) y antihista inas para reducir la hipersensibilidad y anafilaxis que ocurre debido a la presencia de Cremophor®. En contraste, el Abraxane® también conocido como ABI-007 es una formulación de paclitaxel con albúmina en nanopartículas libre de Cremophor®, comercializado por Abraxis Oncology. El uso de una nanopartícula de albúmina como vehículo da por resultado la formación de un coloide cuando esta reconstituido con solución salina. En base a estudios clínicos, se ha mostrado que el uso de Abraxane® se caracteriza por reacciones de hipersensibilidad reducidas comparado con Taxol®. De conformidad, no es necesaria la premedicación para pacientes que reciben Abraxane®. Otra ventaja de la formulación de albúmina en nanopartículas es que excluyendo emulsionantes tóxicos es posible administrar altas dosis de paclitaxel en intervalos más frecuentes que los actualmente posibles con Taxol. El potencial es que la eficacia aumentada podría ser vista en tumores sólidos como una consecuencia de (i) dosis mucho más tolerables (300 mg/m2) , (ii) vida media más larga, (iii) disponibilidad de tumor local prolongada y/o (iv) liberación sostenida in vivo . El Abraxane® reduce las reacciones de hipersensibilidad mientras mantiene o mejora el efecto quimoterapéutico del fármaco. Se sabe que las nanopartículas coloidales o partículas menores de 200 nm en tamaño tienden a concentrarse en el sitio del tumor debido a vasculaturas permeables. Este efecto ha sido descrito para varias formulaciones liposo ales (Papahadjopoulos, et al . , Proc. Nati . Acad. Sci . U.S.A. 88, 11460, 1991); (Gabizon, A., Cáncer Res . , 52, 891, 1992); (Dvorak, et al . , Am. J. Pathol . 133, 95, 1988); (Dunn, et al . , Pharm, Res . , 11, 1016-1022, 1994); y (Gref, et al, Science 263, 1600-1603, 1994) . Es posible que las nanopartículas localizadas de paclitaxel en el sitio del tumor puedan resultar en la liberación lenta del fármaco en el sitio de tumor resultando en mayor eficacia cuando se compara con la administración del fármaco en su forma solubilizada (conteniendo Cremophor®) . Tales formulaciones de nanopartículas comprenden por lo menos aproximadamente 50% del agente activo en forma de nanopartículas. Además, tales formulaciones de nanopartículas comprenden por lo menos aproximadamente 60%, por lo menos aproximadamente 70%, por lo menos aproximadamente 80%, o por lo menos aproximadamente 90% del agente activo en forma de nanopartículas. Además, tales formulaciones de nanopartículas comprenden por lo menos aproximadamente 95% o por lo menos aproximadamente 98% del agente activo en forma de nanopartículas. Proteína acida, rica en cisteínas, secretada (SPARC) , también conocida como osteonectina, es una glicoproteína de 281 aminoácidos. La SPARC tiene afinidad por una amplia variedad de ligandos que incluyen cationes (e.g., Ca2+, Cu2+, Fe2+) , factores de crecimiento (e.g., factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF)), proteínas (e.g., colágeno I-V y colágeno IX, vitronectina, y trombospondina-1) de matriz extracelular (ECM) , células endoteliales, plaquetas, albúmina, e hidroxiapatita. La expresión de SPARC es desarrolladamente regulada, y se expresa predominantemente en tejidos que sufren remodelación durante el desarrollo normal o en respuesta a un daño (ver, e.g., Lañe et al . , FASEB J. , 8, 163-173 (1994)). Los altos niveles de la proteína SPARC se expresan en huesos y dientes en desarrollo. La SPARC es una proteína matricelular sobre-regulada en varios cánceres agresivos, pero está ausente en tejidos normales (Porter et al . , J. Hístochem . Cytochem . , 43, 791 (1995) ) . De hecho, la expresión de SPARC es inducida entre una variedad de tumores (e.g., vejiga, hígado, ovario, riñon, intestino, y mama). En cáncer de vejiga, por ejemplo, la expresión de SPARC ha estado asociada con carcinoma avanzado. Los tumores de vejiga invasivos de la etapa T2 o mayor han mostrado expresar niveles de SPARC mayores que los tumores de vejiga de la etapa TI (o tumores menos superficiales) , y tienen una prognosis más pobre (ver, e.g., Yamanaka et al., J. Urology, 166, 2495-2499 (2001) ) . En meningiomas, la expresión de SPARC ha estado asociada con tumores invasivos solamente (ver, e.g., Re pel et al., Clincal Cáncer Res., 5, 237-241 (1999)). La expresión de SPARC también ha sido detectada en el 74.5% de las lesiones de carcinoma de mama invasivo in situ {ver, e.g., Bellahcene, et al, Am. J. Pathol, 146, 95-100 (1995)), y 54.2% de carcinoma ductal infiltrante de mama (ver, e.g., Ki et al., J. Korean Med. Sci.r 13, 652-657 (1998)). La expresión de SPARC también ha estado asociada con la microcalcificación frecuente en cáncer de mama. (ver, e.g., Bellahcene et al., supra), sugiriendo que la expresión de SPARC puede ser responsable de la afinidad de metástasis de mama por los huesos. La SPARC también es conocida por enlazar albúmina (ver, e.g., Schnitzer, J.
Biol. Chem., 269, 6072 (1994)). La terapia de anticuerpos es un método efectivo para controlar la enfermedad en donde un marcador de proteína específico puede ser identificado. Los ejemplos incluyen Avastina - un anticuerpo anti-VEGF, Rituxan - un anticuerpo anti-CD20, y Remicade — un anticuerpo anti-TNF. Como tal, un anticuerpo en contra de SPARC podría representar un agente terapéutico importante para tratar tumores humanos y de otros mamíferos, así como otros trastornos proliferativos, hiperplásicos, remodelación e inflamatorios que expresan la proteína SPARC. Además, un anticuerpo en contra de SPARC conjugada con un agente de formación de imágenes o de contraste sería un medio de detección y diagnóstico de tales trastornos. Existe aún una necesidad de un método para tratar tumores de humanos y otros mamíferos, así como otros trastornos proliferativos, hiperplásicos, de remodelación e inflamatorios. Además, existe aún una necesidad para determinar la respuesta de un tumor humano o de otro mamífero a fin de evaluar la efectividad del agente quimioterapéutico. Además, se necesitan medios adecuados para detectar y diagnosticar tales trastornos. Estas y otras ventajas de la invención, así como aspectos inventivos adicionales, serán aparentes a partir de la descripción de la invención aquí provista. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para determinar la respuesta de un tumor mamífero a un agente quimioterapéutico, en donde el método comprende las etapas de: (a) aislar una muestra biológica a partir de un mamífero, (b) detectar la expresión de la proteína SPARC en la muestra biológica, y (c) cuantificar la cantidad de la proteína SPARC en la muestra biológica. La presente invención proporciona además un método para utilizar la proteína que enlaza albúmina como un agente terapéutico, para utilizar SPARC y anticuerpos contra SPARC o proteínas que enlazan SPARC como terapéuticos, para suministrar un agente quimioterapéutico a un sitio de enfermedad en un mamífero, en el cual el método comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende el agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto capaz de unir una proteína que enlaza albúmina y un portador farmacéuticamente aceptable. Además, la invención proporciona una composición que comprende un agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto capaz de enlazar una proteína SPARC y un portador farmacéuticamente aceptable. Además, la invención proporciona un agente de suministro que comprende un grupo que reconoce SPARC y un agente terapéutico, en donde el agente terapéutico está acoplado al grupo que reconoce SPARC. Adicíonalmente, la invención proporciona un método para suministrar un agente quimioterapéutico a un tumor en un mamífero, en donde el método comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende un agente quimioterapéutico acoplado a una proteína SPARC capaz de enlazar albúmina y un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones de la invención pueden ser una molécula pequeña, una molécula grande o proteínas. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra tinción de albúmina y SPARC en xenoinjertos de tumor MX-I. La figura 2 ilustra la transcitosis de paclitaxel a través de monocapas celulares endoteliales. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto ahora que un mecanismo adicional de localización existe para composiciones que comprenden que enlazan albúmina. Las proteínas que enlazan albúmina tales como SPARC, cubilina, y TGFß, pueden ser usadas como objetivo para un agente terapéutico en un sitio de enfermedad caracterizado por una sobre-expresión de una proteína que enlaza albúmina. La invención proporciona el uso de un grupo, acoplado a un agente, en donde el grupo es capaz de unir una proteína que enlaza albúmina, tal como SPARC, cubilina, o TGFß, y el agente es un agente terapéutico, de imagen o suministro para enfermedades en donde la proteína que enlaza albúmina juega un papel dominante y se sobre-expresa con respecto a los tejidos normales. Preferiblemente, la proteína que enlaza albúmina se selecciona a partir de SPARC, cubilina, o TGFß. Más preferiblemente, la proteína que enlaza albúmina es SPARC y el grupo que se une a la proteína que enlaza albúmina es un grupo de reconocimiento de SPARC. Los grupos de reconocimiento de SPARC adecuados incluyen, pero no se limitan a ligandos, moléculas pequeñas, anticuerpos. La invención también proporciona un método para determinar la respuesta de un tumor de humano u otro mamífero a un agente quimioterapéutico. El método comprende (a) aislar una muestra biológica de un humano, (b) detectar la expresión de la proteína SPARC en la muestra biológica, y (c) cuantificar la cantidad de la proteína SPARC en la muestra biológica. Una vez que es determinada la cantidad de SPARC expresada por el tumor, la efectividad del agente quimioterapéutico puede ser confirmada, por ejemplo, correlacionando la expresión de SPARC con la dosificación del agente terapéutico administrado. La invención también proporciona el uso del anticuerpo producido en contra de SPARC como un agente terapéutico, o un agente de imagen para enfermedades en donde la SPARC juega un papel dominante y se sobre-expresa con respecto a los tejidos normales.
De aquí en adelante, por simplicidad, todas las proteínas, incluyendo SPARC, que enlaza albúmina están referidas como SPARC. La proteína SPARC es responsable de la acumulación de albúmina en ciertos tumores humanos. Como la albúmina es el principal portador de los fármacos quimioterapéuticos, el nivel de expresión de SPARC es indicativo de la cantidad de fármaco quimioterapéutico que penetra y es retenido por el tumor. Por lo tanto, el nivel de expresión de SPARC predice la sensibilidad del tumor a la quimioterapia. Cualquier muestra biológica adecuada puede ser aislada a partir del mamífero de interés en el contexto del método de la invención. Preferiblemente, la muestra biológica es aislada del tumor, tal como mediante una biopsia del tumor. Alternativamente, la muestra biológica puede ser aislada a partir de un fluido corporal del mamífero, incluyendo, por ejemplo, fluido cerebroespinal, sangre, plasma, suero u orina. Las técnicas y los métodos para el aislamiento de las muestras biológicas son conocidos en el arte. Cualquier agente farmacéuticamente activo puede ser usado en el método de la invención ( e . g. , un agente quimioterapéutico acoplado a un grupo de reconocimiento de SPARC) , en la medida en que el transporte o enlace del agente activo requiere albúmina. Los agentes activos adecuados incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de tirosina cinasa (genisteina) , agentes biológicamente activos (TNF o tTF) , radionúclidos { e . g. , 131I, 90Y, a?lIn, 11At, 32P, y otros radionúclidos terapéuticos conocidos) , adriamícina, antibióticos de ansa icina, asparaginasa, bleomicina, busulfan, cisplatina, carboplatina, carmustina, capecitabina, clorambucil, citarabina, ciclofosfamida, camptotecina, dacarbazina, dactínomicina, daunorubicina, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, etoposida, epotilones, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, idarubicina, ifosfa ida, irinotecan, lomustina, mecloretamina, ercaptopurina, meplhalan, metotrexato, rapamicina (sirolimus) y derivados, mitoruicina, mitotano, mitoxantrona, nitrosurea, paclitaxel, pamidronato, pentostatina, plica icina, procarbazina, rituximab, estreptozocina, teniposida, tioguanina, tiotepa, taxanos, vinblastina, vincristina, vinorelbina, taxol, combretastatinas, discodermolida, transplatino, agentes de objetivo vascular, compuestos de factor de crecimiento endotelial anti-vascular ("anti-VEGFs") , compuestos del receptor del factor de crecimiento anti-epidérmico ("anti-EGFRs"), 5-fluorouracilo, y derivados de los mismos. Además, el agente farmacéuticamente activo puede ser toxinas tales como ricina A, radionúclidos, el fragmento Fe del anticuerpo mismo, anticuerpos de una sola cadena, fragmentos - Fab, diabodies y similares. Los agentes farmacéuticamente activos seleccionados por si mismos pueden reconocer y enlazar a SPARC o estar convenientemente unidos a un grupo de reconocimiento de SPARC que reconoce SPARC, incluyendo, por ejemplo, una proteína o no proteína, un anticuerpo, fragmento Fe del anticuerpo mismo, anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, diabodies, péptidos u otras moléculas pequeñas no proteínicas. Una o más dosis de agentes quimioterapéuticos pueden ser administradas de conformidad con el método de la invención. El tipo y número de agentes quimioterapéuticos usados en el método de la invención dependerán del régimen quimioterapéutico estándar para un tipo particular de tumor. En otras palabras, aunque un cáncer particular puede ser tratado de manera rutinaria con un solo agente quimioterapéutico, otro puede ser tratado de manera rutinaria con una combinación de agentes quimioterapéuticos . Los métodos para acoplar o conjugar terapéuticos, quimioterapéuticos, radionúclidos, etc. adecuados para anticuerpos o fragmentos de los mismos, están bien descritos en el arte. Las enfermedades para las cuales es útil la presente invención incluyen condiciones anormales de proliferación, remodelación del tejido, hperplasia, sanación de heridas exagerada en cualquier tejido corporal incluyendo tejido suave, tejido conectivo, hueso, órganos sólidos, vasos sanguíneos y similares. Ejemplos de enfermedades tratables o diagnosticadas por las composiciones de la invención incluyen cáncer, retinopatía diabética u otra, inflamación, artritis, restenosis en vasos sanguíneos o injertos artificiales de vasos sanguíneos o dispositivos intravasculares y los similares. Los tipos de tumor a ser detectados y tratados de conformidad con la invención son generalmente aquellos encontrados en humanos y otros mamíferos. Los tumores pueden ser el resultado de inoculación también, tales como en animales de laboratorio. Muchos tipos y formas de tumores se encuentran en humanos y otras condiciones animales, y no se pretende limitar la aplicación de los métodos de la presente a cualquier tipo particular o variedad de tumor. Los tumores, como se sabe, incluyen una masa anormal de tejido que resulta de la división celular no controlada y progresiva, y es también típicamente conocida como un "neoplasma". Los métodos de la invención son útiles para células tumorales y células de estroma asociadas, tumores sólidos y tumores asociados con tejido suave, tales como, sarcoma de tejido suave, por ejemplo, en un humano. El tumor o cáncer puede estar localizado en la cavidad oral y faringe, el sistema digestivo, el sistema respiratorio, huesos y articulaciones ( e. g. , metástasis ósea), tejido suave, piel, ( e . g. melanoma), mama, el sistema genital, el sistema urinario, ojo y órbita, el cerebro y sistema nervioso central ( e . g. glioma) , o el sistema endocrino (e.g., tiroides) y no está necesariamente limitado al tumor primario o cáncer. Los tejidos asociados con la cavidad oral incluyen, pero no se limitan a, la lengua y tejidos de la boca. El cáncer puede aparecer en tejidos del sistema digestivo incluyendo, por ejemplo, el esófago, estómago, intestino delgado, colon, recto, ano, hígado, vesícula biliar y páncreas. Los cánceres del sistema respiratorio pueden afectar la laringe, pulmón y bronquios e incluyen, por ejemplo carcinoma de pulmón de células no pequeñas. Los tumores pueden aparecer en el cerviz uterino, cuerpo uterino, vulva ovárica, vagina, próstata, testículos y pene, que conforman los sistemas genitales masculino y femenino, y la vejiga urinaria, riñon, pelvis renal y uréter, que comprenden el sistema urinario. El tumor o cáncer puede estar localizado en la cabeza y/o cuello (cáncer de laringe y cáncer de paratiroides) . El tumor o cáncer puede también ser localizado en el sistema hematopoyético o sistema linfoide, e incluyen, por ejemplo, linfoma (enfermedad de Hodgkin y linfoma no Hodgkin), mieloma múltiple, o leucemia ( e . g. leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica y similares) . Preferiblemente, el tumor está localizado en la vejiga, hígado, ovarios, riñon, intestino, cerebro o mama.
La proteína SPARC tiene afinidad para una amplia variedad de ligandos. Así, el método de la invención para suministrar un agente terapéutico a un sitio de enfermedad esta basado en el descubrimiento de que los compuestos o ligandos, incluyendo albúmina, los cuales tienen afinidad para SPARC pueden ser usados para suministrar fármacos terapéuticos al sitio de enfermedad, con poco o ningún suministro a tejido normales. La invención también proporciona un medio para transportar la composición terapéutica a través de la barrera endotelial desde los vasos sanguíneos hacia el intersticio tumoral. El principal obstáculo en la terapia de anticuerpos y quimioterapia es la translocación a través de la barrera endotelíal hacia el intersticio tumoral. La albúmina utiliza el mecanismo de transporte del receptor de albúmina para cruzar la barrera endotelial. Este mecanismo de transporte podría ser igual a aquellos reportados por la literatura (gp60 y albondin) o por otros mecanismos no descubiertos. Se ha reportado previamente que el agente terapéutico acarreado por la albúmina mostró una captación tumoral aumentada (Desai, N. et al . Increased endothelial transcytosis of nanoparticle albumin-bound paclitaxel (ABI-007) by endothelial gp60 receptors: a pathway inhibited by Taxol®, 27th Annual San Antonio Breast Cáncer Symposium (SABCS) (2004), Abstract #1071). Además la translocación aumentada a través de la barrera endotelial puede ser alcanzada utilizando el mecanismo de transporte fisiológico de albúmina (Schnítzer, J.E.; Oh, P. J. Biol . Chem . 269, 6072-6082 (1994) ) . Para moléculas pequeñas, se pueden hacer modificaciones tales que la afinidad del fármaco por la albúmina se incremente. Para formulaciones de moléculas pequeñas, se puede eliminar un solvente que evite la unión del fármaco a la albúmina. Alternativamente, la molécula pequeña puede estar enlazada a la albúmina, anticuerpo en contra de albúmina, fragmentos del mismo o ligandos para un receptor de albúmina tal como se describe más adelante. Para moléculas biológicas tales como proteínas, anticuerpos y fragmentos de los mismos, es posible diseñar moléculas biológicas con un péptido que enlaza albúmina de tal manera que exhiban una afinidad por la albúmina. El péptido puede ser ya sea una secuencia que enlaza albúmina, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo contra albúmina, anticuerpo o fragmento de anticuerpo contra portadores de albúmina (tales como gp60/albondin/receptor depurador/o receptor de TGF-ß) , o un anticuerpo para cualquiera de las proteínas encontradas en las caveolas, el transportador de albúmina. La invención también contempla un anticuerpo o fragmento adecuado del mismo preparado como una quimera con una valencia para SPARC y otra valencia para un efector de transporte transendotelial tal como gp60/albondin/receptor depurador/o receptor TGF-beta, o en contra de cualquiera de las proteínas encontradas en las caveolas de la célula endotelial. La invención también proporciona un método para la destrucción de los tejidos de expresión de SPARC tales como tejidos tumorales y restenóticos vía la fijación del complemento y/o agrupamiento de la respuesta inmune mediada por células por el anticuerpo de SPARC. En este caso, como el de Rituxan, un anticuerpo anti-CD-20, la porción del efector es el fragmento Fe que puede mediar ya sea la activación del complemento con destrucción directa de las células de expresión de SPARC o el agrupamiento de células inmunes al tejido de expresión de SPARC con la destrucción del tejido resultante vía una respuesta inmune mediada por células . La invención también proporciona un método para inhibir la actividad de SPARC usando un anticuerpo neutralizante contra SPARC. El anticuerpo neutralizante tiene la capacidad de bloquear la interacción de SPARC con sus efectores in vivo. Por ejemplo, el anticuerpo neutralizante puede bloquear la interacción de SPARC con un componente de superficie celular o la unión de SPARC a sus ligandos naturales tales como albúmina, factores de crecimiento y Ca2+. La invención también proporciona un método para determinar la respuesta de un tumor humano o de otro mamífero a la terapia anti-SPARC. El método comprende (a) aislar una muestra biológica de humano, (b) detectar la expresión de la proteína SPARC en la muestra biológica, y (c) cuantificar la cantidad de proteína SPARC en la muestra biológica. Como la terapia anti-SPARC depende de la unión del anticuerpo SPARC a la SPARC en el tejido enfermo, la presencia de la SPARC en el tejido enfermo es necesaria para que haya actividad. La invención proporciona además un método de uso de uno o más agentes de diagnóstico conjugados a los grupos de reconocimiento de SPARC, tales como los anticuerpos o fragmentos de los mismos, como se describió anteriormente. Los agentes de diagnóstico incluyen radioisótopos o radionúclidos, agentes- de contraste MRI, agentes de contraste de Rayos X, agentes de contraste de ultrasonido y agentes de contraste PET. Los métodos usados para la conjugación son conocidos en el arte. La expresión de la proteína SPARC en una muestra puede ser detectada y cuantificada por cualquier método adecuado conocido en el arte. Los métodos adecuados de detección y cuantificación de la proteína incluyen Western blot, ensayo inmunoabsorbente enzimático (ELISA) , tinción de plata, ensayo BCA (Smith et al . , Anal . Biochem . , 150, 76-85 (1985)), el ensayo proteínico Lowry (descrito en, e.g., Lowry et al . , J. Biol . Chem . , 193, 265-275 (1951)), el cual es un ensayo colori étrico basado en los complejos proteína-cobre, y el ensayo de proteína Bradford (descrito en, e.g., Bradford et al . , Anal . Biochem . , 72, 248 (1976)), el cual depende del cambio en la absorbancia en Azul de Coo assie G-250 en la unión de proteína. La biopsia del tumor pede ser analizada por cualquiera de los métodos anteriores o puede ser analizado mediante inmunohistoquímica usando un anticuerpo anti-SPARC (ya sea monoclonal o policlonal) en conjunción con un sistema de visualización apropiado (i.e., substrato HRP y anticuerpo secundario conjugado con HRP) . Cualquier anticuerpo adecuado contra SPARC puede ser usado en el método de la invención, tanto como el anticuerpo muestre unión específica a SPARC. El anticuerpo puede ser ya sea monoclonal o policlonal; y puede ser producido ya sea a través de inmunización de un animal o producido a través de tecnología de ADN recombinante tal como despliegue de fagos y mutagénesis in vitro o síntesis de regiones variables de genes de cadena ligera y pesada del anticuerpo. Los anticuerpos policlonales incluyen, pero no se limitan a anticuerpos humanos y anticuerpos humanizados derivados de animales tales como aves (e.g., pollo), roedores (e.g., rata, ratón, hámster, conejillo de indias), vaca, cabra, oveja, conejo y similares. Los anticuerpos monoclonales incluyen anticuerpos derivados de un solo clon células que producen anticuerpos, incluyendo, pero sin limitarse a, células humanas, y anticuerpos derivados de las células de otros tipos de animales, por ejemplo pollo, conejo, rata, ratón, hámster, conejillo de indias, vaca, cabra, oveja, y los similares. Los anticuerpos sintéticos incluyen anticuerpos producidos usando tecnología de ADN recombinante vía ingeniería genética de las regiones variables de genes de cadena pesada y ligera. Los anticuerpos sintéticos también incluyen fragmentos de anticuerpos químicamente sintetizados con actividad de unión SPARC o anticuerpos derivados del despliegue de fagos o tecnología similar. Para uso humano, a fin de evitar inmunogenicidad y respuesta inmune, es preferible usar anticuerpo anti-SPARC humanizado o fragmentos adecuados tales como Fab' , Fab, o Fab2. El anticuerpo humanizado o fragmentos del mismo puede ser producido, por ejemplo, usando uno de los siguientes métodos establecidos: 1) el anticuerpo humanizado puede ser construido usando una estructura IgG humana reemplazando la región CDR con la del anticuerpo contra SPARC, en donde las cadenas pesada y ligera son independientemente expresadas bajo promotores separados o co-expresados bajo un promotor con secuencia IRES; 2) el anticuerpo monoclonal humanizado puede ser producido contra SPARC usando un ratón diseñado para tener un sistema inmune humano; 3) el anticuerpo humanizado contra SPARC puede ser producido usando fagemidos (M13, colifago lambda, o cualquier sistema de fagos capaz de presentación superficial) . Para construir el anticuerpo entero, la región variable puede ser transferida a la CDR de ambas cadena Pesada y cadena Ligera. La coexpresión de la cadena Pesada y de la cadena Ligera en células de mamífero tales como CHO, 293, o células humanas mieloides humanas da por resultado el anticuerpo completo. De manera similar, los fragmentos, Fab' , Fab, o Fab2 y los anticuerpos de una sola cadena pueden ser preparados usando métodos bien establecidos. El anticuerpo contra SPARC no está limitado al anticuerpo completo o fragmento del anticuerpo que mantiene el sitio de unión para SPARC ( e . g. , Fab y Fab2) . El anticuerpo no está limitado a cualquier clase de anticuerpos, e.g., IgM, IgA, IgG, IgE, IgD, e IgY. El anticuerpo no está limitado a anticuerpo divalente, monovalente o quimera con una valencia para SPARC y otra para un efector tal como tTF o ricin A. El anticuerpo humanizado no está limitado a IgG. Las mismas tecnologías pueden ser usadas para generar todas las otras clases de anticuerpos tales como IgE, IgA, IgD, IgM, teniendo cada uno diferentes actividades de citotoxicídad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) y de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) apropiadas para una enfermedad objetivo en particular. Los fragmentos funcionales del anticuerpo pueden ser generados por proteólisis limitada. Estos fragmentos pueden ser monovalentes tales como Fab' o divalente, tal como Fab2. los fragmentos también pueden ser sintetizados como scfv de una sola cadena o diabodies en E. coli . La invención proporciona además una composición que comprende un agente farmacéuticamente activo directamente capaz de ejercer su efecto farmacológico o un agente farmacéuticamente activo acoplado a un compuesto capaz de enlazar SPARC, u otra porción de enlace a albúmina, y un portador farmacéuticamente aceptable. El agente de suministro, que puede ser una composición farmacéutica, comprende el agente farmacéuticamente activo acoplado a un grupo de reconocimiento de SPARC es administrado a un mamífero, tal como un humano, en una cantidad tal que una cantidad terapéuticamente efectiva del agente activo farmacéuticamente es suministrada al mamífero. La invención también proporciona un método para suministrar un agente quimioterapéutico a un tumor en un mamífero. El método comprende administrar a un humano u otro mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende el agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto o ligando capaz de enlazar una proteína SPARC y un portador farmacéuticamente aceptable. La descripción del agente quimioterapéutico, tumor, mamífero y componentes del mismo, expuesta aquí en relación con otras modalidades de la invención también son aplicables para los mismos aspectos del método antes mencionado para suministrar un agente terapéutico a un tumor. Preferiblemente, la composición farmacéutica no comprende más de 50% del agente terapéutico en forma de nanopartícula. Más preferiblemente, la composición farmacéutica no comprende más de 10% del agente terapéutico en forma de nanopartículas. Aún más preferiblemente, la composición farmacéutica no comprende más de 5%, o más del 4% o más de 3% del agente terapéutico en forma de nanopartículas. En una modalidad más preferida, la composición farmacéutica no comprende más del 2% o, más del 1% del agente terapéutico en forma de nanopartícula. Más preferiblemente, la composición farmacéutica no comprende ningún agente terapéutico en forma de nanopartícula. La invención también proporciona un método para suministrar un agente quimioterapéutico a un tumor en un mamífero u otro mamífero. El método comprende administrar a un humano u otro mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de suministro, tal como una composición farmacéutica, en donde el agente de suministro ( e . g. , composición farmacéutica) comprende el agente quimioterapéutico acoplado al grupo de reconocimiento de SPARC. Por ejemplo, el agente quimioterapéutico puede estar acoplado a un grupo de reconocimiento de SPARC tal como un anticuerpo que reconoce la proteína SPARC, o el anticuerpo de SPARC solo. Las composiciones farmacéuticas preferiblemente incluyen el agente quimioterapéutíco acoplado al grupo de reconocimiento de SPARC y un portador farmacéuticamente aceptable. Las descripciones del agente quimioterapéutico, tumor, mamífero y componentes del mismo, expuestas aquí en relación con otras modalidades de la invención también son aplicables para los mismos aspectos del método antes mencionado para suministrar un agente terapéutico a un tumor. En otras modalidades, la invención proporciona un método para suministrar un agente farmacéuticamente activo por medio de un grupo de reconocimiento de SPARC a un sitio de enfermedad que está caracterizado por la sobre-expresión de SPARC u otra proteína que enlaza albúmina o marcador en un humano, u otro animal que expresa tal proteína o marcador. Tales enfermedades incluyen condiciones anormales de proliferación, remodelación del tejido, hiperplasia y sanación exagerada de heridas en tejido corporal (e.g. tejido suave, tejido conectivo, hueso, órganos sólidos, vasos sanguíneos y similares) . Ejemplos de enfermedades que son tratables o pueden ser diagnosticadas mediante la administración de una composición farmacéutica que comprende un agente terapéutico acoplado a un compuesto o ligando capaz de enlazar una proteína SPARC, u otra proteína que enlaza albúmina, incluyen cáncer, retinopatía diabética u otra, inflamación, artritis, restenosis en vasos sanguíneos, injertos artificiales de vasos sanguíneos, o dispositivos intramusculares, y los similares. Las descripciones del agente farmacéuticamente activo, tumor, mamífero y componentes del mismo, mencionadas aquí en relación con otras modalidades de la invención también son aplicables para los mismos aspectos del método antes mencionado para suministrar un agente farmacéuticamente activo. En aún otras modalidades, la invención proporciona un método para suministrar un agente farmacéuticamente activo (por ejemplo, un anticuerpo SPARC solo o un agente quimioterapéutico conjugado al grupo de reconocimiento de SPARC tal como anticuerpo de SPARC, anticuerpo de SPARC radiomarcado y similares) a un sitio de enfermedad que está caracterizado por la sobre-expresión de SPARC en un humano, u otro animal que expresa tal proteína o marcador. Tales enfermedades incluyen condiciones anormales de proliferación, remodelación del tejido, hiperplasia y sanación exagerada de heridas en tejido corporal (e.g. tejido suave, tejido conectivo, hueso, órganos sólidos, vasos sanguíneos y similares) . Ejemplos de enfermedades que son tratables o diagnosticadas mediante la administración de una composición farmacéutica que comprende terapia anti-SPARC, incluyen cáncer, retinopatía diabética u otra, inflamación, artritis, restenosis en vasos sanguíneos, injertos artificiales de vasos sanguíneos, o dispositivos intravasculares, y los similares. Las descripciones del agente farmacéuticamente activo, tumor, mamífero y componentes del mismo, expuestas aquí en relación con otras modalidades de la invención también son aplicables para los mismos aspectos del método antes mencionado para suministrar un agente farmacéuticamente activo. En otras modalidades, el método de la invención comprende administrar a un mamífero una cantidad efectiva terapéuticamente de una composición farmacéutica que comprende un agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto o ligando capaz de unirse a la proteína SPARC. El agente quimioterapéutico puede estar acoplado al compuesto o ligando capaz de enlazar proteína SPARC usando cualquier método adecuado. Preferiblemente, el agente quimioterapéutico está químicamente acoplado al compuesto vía enlaces covalentes que incluyen por ejemplo, enlaces de bisulfuro.
La invención también proporciona un método que comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende un agente quimioterapéutico o elemento radioactivo acoplado a un grupo de reconocimiento de SPARC. El agente quimioterapéutico o radioactivo puede ser acoplado al anticuerpo que reconoce SPARC usando cualquier método adecuado. Preferiblemente, el agente quimioterapéutico puede ser químicamente acoplado al compuesto vía enlaces covalentes que incluyen, por ejemplo, enlaces bisulfuro. Preferiblemente, el compuesto o ligando útil en el método de la invención es capaz de enlazar la proteína SPARC. En una modalidad preferida de la invención, el compuesto es un ligando que enlaza una proteína SPARC. Ejemplos de ligandos adecuados incluyen catión de calcio (Ca2+) , catión de cobre (Cu2+) , catión de fierro (Fe2+) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), colágeno ( e. g. , colágeno I, colágeno II, colágeno III, colágeno IV, colágeno V, y colágeno IX), vitronectina, trombospondina-1, células endoteliales, plaquetas, albúmina, y cationes de hidroxiapatita. En otra modalidad preferida de la invención, el compuesto es una molécula pequeña. El término "molécula pequeña" se refiere a cualquier molécula que tiene un peso molecular menor de aproximadamente 600.
Ejemplos de moléculas pequeñas adecuadas incluyen una proteína, un ácido nucleico, un carbohidrato, un lípido, una coenzima ( e . g. , una vitamina), un antígeno, una hormona, y un neurotrans isor . Preferiblemente, la molécula pequeña es un compuesto químico (e.g., un compuesto químico orgánico o inorgánico) un péptido, o un péptido mimético, una proteína o un carbohidrato. En aún otra modalidad preferida de la invención, el compuesto es un anticuerpo que está dirigido en contra de una proteína SPARC. Cualquier anticuerpo adecuado, o fragmento del mismo, que se enlaza a una proteína SPARC puede ser usado en el método de la invención. La expresión de SPARC en tejidos tumorales ha sido demostrada en casi todos los tipos de cáncer. Existe evidencia de que la elaboración de SPARC en tejidos tumorales puede ser ya sea derivada de la expresión tumoral de SPARC o mediante células de estroma. El fenotipo de SPARC del tumor puede ser convertido de SPARC negativo a SPARC positivo medíante la administración de SPARC exógeno. De conformidad, el tumor positivo SPARC llegaría entonces a ser sensible a agentes quimioterapéuticos. Alternativamente, SPARC podría ser radiomarcada o conjugada con varias toxinas para conferirle la capacidad de matar el tumor directa o indirectamente. SPARC puede ser sintetizada y purificada usando tecnologías conocidas. Las células que expresan SPARC exógeno pueden ser generadas colocando el ADNc/gen estructural de SPARC bajo el control de un promotor fuerte/inicio de translación y el vector transfectado en células de mamífero para dirigir la expresión de SPARC en estas células. Alternativamente, SPARC puede ser expresada usando báculo virus u otros virus tales como adenovirus. La SPARC expresada por estas células puede ser purificada por métodos de purificación tradicionales tales como cromatografía de intercambio iónico, por exclusión de tamaño o cromatografía C18. La SPARC purificada puede ser formulada en salina con conservadores y administrada intravenosamente, con aerosol, por inyección subcutánea, u otros métodos. La invención también proporciona un método para suministrar un agente qui íoterapéutico a un tumor en un mamífero. El método comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende el agente quimoterapéutico acoplado a una proteína SPARC capaz de enlazar albúmina y un portador farmacéuticamente aceptable. Las descripciones del agente quimioterapéutico, tumor, mamífero y componentes del mismo, referidas aquí en relación con otras modalidades de la invención también son aplicables para los mismos aspectos del método antes mencionado para suministrar un agente quimíoterapéutico a un tumor. Para uso in vivo, el agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto o ligando capaz de enlazar la proteína SPARC es formulado deseablemente en una composición farmacéutica que comprende un portador fisiológicamente aceptable. Cualquier portador fisiológicamente aceptable puede ser usado dentro del contexto de la invención, y tales portadores son bien conocidos en el arte. Para uso in vivo, el agente de terapia anti-SPARC es formulado deseablemente en una composición farmacéutica que comprende un portador fisiológicamente aceptable. Cualquier portador fisiológicamente aceptable puede ser usado dentro del contexto de la invención, y tales portadores son bien conocidos en el arte. El portador típicamente será líquido, pero también puede ser sólido, o una combinación de componentes líquidos y sólidos. El portador es deseablemente un portador ( e . g. , excipiente o diluyente) fisiológicamente aceptable ( e . g. , aceptable farmacéuticamente o farmacológicamente) . Los portadores' fisiológicamente aceptables son bien conocidos y son fácilmente disponibles. La selección del portador será determinada, por lo menos en parte, por la ubicación del tejido y/o células objetivo, y el método particular usado para administrar la composición.
Típicamente, tales composiciones pueden ser preparadas como inyectables, ya sea como soluciones líquidas o suspensiones; pueden también ser preparadas formas sólidas adecuadas para usarse en la preparación de soluciones o suspensiones con la adición de un liquido antes de la inyección; y las preparaciones también pueden estar emulsionadas. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones; formulaciones que contienen estabilizadores de proteína conocidos y lipoprotectores, formulaciones que incluyen aceite de ajonjolí, aceite de cacahuate, o propilénglicol acuoso, y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones inyectables o dispersiones. En todos los casos, la formulación debe ser estéril y debe ser fluida al grado de que sea fácil de jeringar. Debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento y debe ser preservada en contra de la acción contaminante de los microorganismos, tales como bacterias y hongos. Las soluciones de los compuestos activos como base libre o sales farmacológicamente aceptables pueden ser preparadas en agua mezclada convenientemente con un agente tensioactivo, tal como hidroxicelulosa. Las dispersiones también pueden ser preparadas en glicerol, polietilénglicoles líquidos, y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservador para prevenir el desarrollo de microorganismos . El agente quimioterapéutico (e.g., terapia anti-SPARC) acoplado a un compuesto o ligando que enlaza una proteína SPARC puede ser formulado en una composición en forma neutra o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición de ácido (formadas con los grupos amino libres de la proteína) y los cuales están formados con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico o fosfórico, o tales como ácidos orgánicos como acético, oxálico, tartárico, mandélico, y similares. Las sales formadas con los grupos carboxilo libres también pueden derivarse de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hídróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y tales bases orgánicas como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procaína y las similares. La composición puede además comprender cualquier otro componente adecuado, especialmente para aumentar la estabilidad de la composición y/o su uso final. De conformidad, existe una amplia variedad de formulaciones adecuadas de las composición de la invención. Las siguientes formulaciones y métodos son meramente ejemplos y de ninguna manera limitativos.
Las formulaciones adecuadas para administración vía inhalación incluyen formulaciones en aerosol. Las formulaciones en aerosol pueden ser colocadas en propelentes aceptables presurizados, tales como dicloro-difluorometano, propano, nitrógeno, y similares. También pueden ser formulados como preparaciones no presurizadas, para suministrarse a partir de un nebulizador o un atomizador. Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles isotónicas, acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos, y solutos que vuelven la formulación isotónica con la sangre del recipiente destinado, suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión, solubilizantes, agentes espesantes, estabilizadores y conservadores. Las formulaciones pueden ser presentadas en recipientes sellados de una sola dosis o de múltiples dosis, tales como ampollas y frascos viales, y pueden ser almacenados en una condición seca por congelamiento (liofilizada) que requiere solo la adición de un excipiente líquido estéril, por ejemplo agua, para inyecciones, inmediatamente antes de usarse. Las soluciones extemporáneas de inyección y suspensiones pueden ser preparadas a partir de polvos estériles, granulos y tabletas de la clase previamente descrita. En una modalidad preferida de la invención, el agente quimioterapéutico acoplado a un compuesto que enlaza una proteína SPARC ( e . g. , terapia anti-SPARC) es formulada para inyección (e.g., administración parenteral). En este aspecto, la formulación deseablemente es adecuada para administración intratumoral, pero también puede ser formulada para inyección intravenosa, inyección intraperitoneal, inyección subcutánea, y las similares. Las formulaciones adecuadas para administración anal pueden ser preparadas como supositorios mezclando el ingrediente activo con una variedad de bases tales como bases emulsionantes o bases solubles en agua. Las formulaciones adecuadas para administración vaginal pueden ser presentadas como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o fórmulas nebulizadas que contienen, además del ingrediente activo, tales portadores como son conocidos en el arte por ser apropiados. Además, la composición puede comprender agentes terapéuticos ó biológicamente activos adicionales. Por ejemplo, factores terapéuticos útiles en el tratamiento de una indicación particular pueden estar presentes. Los factores que controlan la inflamación, tales como ibuprofeno o esteroides, pueden ser parte de la composición para reducir el hinchamiento e inflamación asociada con la administración ín vivo de la composición farmacéutica y aflicción fisiológica. Los siguientes ejemplos ilustran además la invención pero no deben ser interpretados de ninguna manera para limitar su alcance. Ejemplo 1 Este ejemplo ilustra la colocalización de SPARC con albúmina en un xenoínjerto de tumor MX-I . Se ha demostrado que las nanopartículas de albúmina Paclitaxel (Abraxane, ABX o ABI-007) tienen una velocidad de respuesta mejorada con respecto al Taxol (TAX) en un ensayo de cáncer de mama metastásico Fase 3 (33% vs 19%, p<0.0001) (ver, e.g., O' Shaughnessy, SABCS) . El transporte transendotelial mediado por albúmina del paclitaxel (P) y la acumulación intratumoral incrementada de paclitaxel para ABX versus TAX fue demostrada recientemente (ver, e.g., Desai, SABCS 2003). La albúmina enlaza a SPARC (ver, e.g., Schnitzer, J. Biol . Chem . , 269, 6072-82 (1994)). La línea celular tumoral MX-1 se deriva de un cáncer de mama humano. Las criosecciones en serie del xenoinjerto de tumor MX-I humano, los tejidos tumorales de mama primario humano (n=141) , y tejidos normales de mama humano (n=115) se inmunotiñeron y se calificaron (0-4) para albúmina, SPARC (usando anticuerpo anti-SPARC) , y tinción de caveolin-1. Las células MX-I cultivadas también se inmunotiñeron para SPARC. Las nanopartículas de albúmina Paclitaxel (Abraxane, ABX o ABI-007) y el Taxol (TAX) se prepararon con paclitaxel radioactivo (P) (20 mg/kg IV) , y se usaron para determinar la biodistribución de paclitaxel en los tejidos normales de ratones atímicos. La tinción de albúmina en el tumor MX-I fue focal y se colocalizó con SPARC (Figura 1) . La tinción de caveolin-1 confirmó que la densidad de los vasos sanguíneos en áreas que contienen albúmina no fue diferente de las áreas libres de albúmina. La expresión de SPARC por las células cultivadas MX-I fue confirmada por la tinción positiva con anticuerpo anti-SPARC. La acumulación de paclitaxel en tejidos normales (SPARC negativo) fue significativamente inferior para ABX en comparación con TAX (p<0.004) para 7/10 tejidos. El 46% de los tumores de mama primarios humanos mostró una tinción fuerte de SPARC (calificación > 2), en comparación con el 1% para tejidos normales (p < 0.0001). En un subgrupo de 50 tejidos tumorales, la expresión de SPARC no se correlacionó con inactividad, estatus ER, o estatus PgR; sin embargo, hubo una tendencia a una expresión elevada de SPARC entre tumores p53-negativos . La colocalízación de albúmina y SPARC sugiere que SPARC, por su actividad de enlace a la albúmina, puede comportarse como un objetivo intratumoral para el enlace a la albúmina en tumores de mama. Como el transporte del paclitaxel en ABX es dependiente de la albúmina (ver, e.g., Desai SABCS, 2003) , esto puede explicar la acumulación mejorada en el tumor de ABX al compararse con TAX. La acumulación de ABX en tejidos normales fue inferior que para TAX, consistente con la falta de expresión de SPARC en tejidos normales. La selección de los pacientes para SPARC permite la identificación de pacientes más sensibles a ABX. La presencia de SPARC en estos tumores permite elegir el objetivo y la terapia usando anticuerpo anti-SPARC. Ejemplo 2 Este ejemplo ilustra la expresión de SPARC en células de tumor MX-I. Las células MX-I se cultivaron sobre un cubreobjetos y se tiñeron con un anticuerpo dirigido en contra de SPARC humano usando métodos conocidos en el arte. Se observó tinción del anticuerpo, lo cual demuestra que MX-I está expresando SPARC. Estos resultados sugieren que la expresión de SPARC detectada en las células de tumor MX-I es un resultado de la secreción de SPARC por las células de tumor MX-I. La tinción fue más intensa para las células de tumor MX-I que la de las células primarias normales tales como HUVEC (células endoteliales humanas de la vena umbilical) , HLMVEC (células endoteliales humanas del micro vaso del pulmón) , y HMEC (células epiteliales mamarias humanas) . Aunque la mayor parte de la tinción de SPARC fue SPARC interna, se detecto un nivel importante de SPARC superficial según se demostró mediante microscopía confocal y la tinción de células no permeabilizadas . Ejemplo 3 Este ejemplo ilustra la sobre-expresión de la proteína SPARC en células de carcinoma de mama humana. La expresión de SPARC en células de carcinoma de mama humana se determino usando un grupo de tumores de Cybrdi, Inc. (Gaithersburg, MD) . Los resultados de este análisis se muestran en la Tabal 1. La intensidad de la tinción fue calificada de "Negativo" a 4+, correspondiendo el número más alto a la mayor intensidad de sobre-expresión. El 49% del carcinoma de mama tiñó positivo (2+ y superior) para SPARC según se comparó con el 1% del tejido normal (p < 0.0001) .
Ejemplo 4 Este ejemplo ilustra la transcitosis caveolar mediada por el receptor endotelial (gp60) de las nanopartículas de albúmina paclitaxel (ABI-007).
Las nanopartículas de albúmina Paclitaxel (P) (Abraxane, ABX o ABI-007) mostraron una velocidad de respuesta mejorada con respecto al Taxol en un ensayo de cáncer de mama metastásico Fase 3 (33% vs 19%, p < 0.0001) (SABCS, O'Shaughnessy et al, 2003). El Cremophor en Taxol (TAX) atrapa P en las icelas en plasma, reduciendo el paclitaxel disponible para la división celular (véase, e.g., Sparreboo et al . , Cáncer. Res . , 59, 1454 (1999)).
Estudios en ratones atímicos han mostrado concentraciones de paclitaxel intratumoral 30-40% superiores con ABX al compararse con iguales dosis de TAX (SABCS, Desai et al, 2003) . La albúmina es transportada a través de las células endoteliales (EC) mediante transporte caveolar mediado por el receptor específico (gp60) (véase, e.g., John et al . , Am. J. Physiol , 284, L187 (2001)). Se considero como hipótesis que el paclitaxel unido a la albúmina en ABX puede ser transportado a través de microvasos tumorales EC por el gp60, y este mecanismo puede ser particularmente activo para ABX comparado con TAX. Se llevó a cabo una serie de experimentos para evaluar la unión y el transporte de paclitaxel por medio de células endoteliales humanas de la vena umbilical (HUVEC) y células endoteliales humanas del microvaso de pulmón (HLMVEC) para ABX y TAX. El paclitaxel fluorescente (FP) se utilizó como prueba y se formularon ABX y TAX fluorescentes con FP para probar la unión y el transporte del paclitaxel a través de las monocapas EC desarrolladas en un aparato Transwell. La unión del paclitaxel a las células (HUVEC) fue 10 veces mayor para ABX que para TAX. El transporte de paclitaxel de ABX a través de las monocapas EC fue mejorado por 2-3 veces y 2-4 veces para HUVEC y HMVEC, respectivamente, comparado con TAX. El transporte fue dependiente de la albúmina. El transporte de paclitaxel de ABX fue inihibido por la presencia del anticuerpo anti-SPARC, el cual se sabe enlaza gp60, el receptor requerido para la transcitosis caveolar de la albúmina. Los inhibidores conocidos de la transcitosis calveolar, NEM y ß-metil ciclodextrina (BMC) , también inhibieron el trasporte de paclitaxel del ABX a través de las monocapas endoteliales (Figura 2). La inhibición del transporte caveolar disminuyó el transporte de P de ABX al nivel del transporte de TAX. Estos resultados demuestran que el paclitaxel de ABX es transportado activamente a través de EC mediante la transcitosis caveolar mediada por gp60, mientras que P de TAX parece ser transportado a una velocidad 2 a 4 veces inferior primariamente mediante un mecanismo paracelular (no-caveolar) . Esta trayectoria puede en parte ser responsable de concentraciones intratumoral incrementadas de paclitaxel vista para ABX con respecto a TAX. El Cremophor en TAX inhibe la transcitosis de paclitaxel a través de las células endoteliales. Ejemplo 5 Este ejemplo muestra la correlación de la sobre-expresión de SPARC con altas velocidades de respuesta usando paclitaxel unido a albúmina en nanopartículas (ABI-007) en cánceres de cabeza y cuello escamosos. En estudios clínicos en fase I y II de pacientes con carcinoma celular escamoso (SCC) de cabeza y cuello (H&N) y canal anal, se observaron velocidades de respuesta 78% y 64%, respectivamente, para Paclitaxel enlazado a albúmina en nanopartículas suministrada intra-arterialmente (Abraxane, ABX o ABI-007) (ver, e.g., Damascelli et al . , Cáncer, 92(10), 2592-2602 (2001), y Damascelli et al . , AJR, 181, 253-260 (2003) ) . Al comparar la citotoxicidad in vitro de ABX y taxol (TAX) , observamos que una línea de cerviz escamoso (A431) mostró !C50s mejorados para ABX (0.004 µg/ml) vs TAX (0.012 µg/ml). El transporte caveolar transendotelial mediado por albúmina de paclitaxel (P) y la acumulación intratumoral incrementada de P para ABX vs TAX fue demostrada recientemente (ver, e . g. , Desai, SABCS 2003). Los tejidos tumorales H&N humanos (n=119) y los tejidos H&N normales humanos (n=15) se inmunotiñeron y se clasificaron (0-4) para la tinción de SPARC usando un grupo de tejido normal y tumoral. La inmunotinción se llevó a cabo usando anticuerpo policlonal de conejo anti-SPARC. En un nuevo estudio de escalación de dosis en fase I (ABX dado IV por 30 minutes q3w) , un subgrupo de pacientes con cáncer de cabeza y cuello (n=3) fueron analizados para determinar la respuesta a ABX.
SPARC se sobre-expresó (calificación > 2) en un 60% (72/119) de los tumores H&N versus 0% (0/15) en tejidos normales (p<0.0001). En el estudio en fase I, 2/3 pacientes H&N alcanzaron una respuesta parcial (PR) después de 2 ciclos de tratamiento en niveles de dosis de 135 mg/m2 (1 pt) y 225 mg/m2 (1 pt) . Un tercer paciente evolucionó en 260 mg/m2. Se encontró que SPARC se sobre-expresaba en 60% de los tumores H&N escamosos. Esto puede explicar la alta actividad de un solo agente de ABX visto previamente en cánceres H&N escamosos debido a la unión de paclitaxel enlazado a albúmina con SPARC expresada en estos tumores. 2/3 de los pacientes con tumores H&N escamosos lograron una PR en un nuevo estudio fase I.
* Tinción de SPARC -/+ Grupo de Tumores H&N: - Carcinona 17 14 16 23 20 29 (14%) (12%) (|3%) (19%) (17%) (24%) - Normal 13 0 2 0 0 0 (87%) (0%) (13%) (0%) (0%) (0%) Tejidos tumorales H&N humanos (n=119) y tejidos normales H&N humanos (n=15) fueron inmunoteñidos y calificados (0-4) para la tinción de SPARC usando un grupo de tejido tumoral y normal. La inmunotinción se llevó a cabo usando anticuerpo policlonal de conejo anti-SPARC. La SPARC se sobre-expresó (calificación > 2) en un 60% (72/119) de los tumores H&N versus 0% (0/15) en tejidos normales (p<0.0001). Esto puede explicar la alta actividad de un solo agente de ABX visto previamente en cánceres H&N escamosos debido a la unión de paclitaxel enlazado a albúmina con SPARC expresada en estos tumores. En un nuevo estudio de escalación de dosis fase I (ABX dado IV por 30 minutos q3w) , un subgrupo de pacientes con cáncer de cabeza y cuello (n=3) fueron analizados para determinar la respuesta a ABX. En el estudio fase I, 2/3 pacientes H&N alcanzaron una respuesta parcial (PR) después de 2 ciclos de tratamiento en niveles de dosis de 135 mg/m2 (1 pt) y 225 mg/m2 (1 pt) . Un tercer paciente evolucionó en 260 mg/m2. Los tejidos tumorales de estos pacientes fueron teñidos por SPARC y 1 paciente con respuesta mostró una sobre-expresión fuerte para SPARC. En otro estudio clínico fase II de pacientes con carcinoma celular escamoso (SCC) de cabeza y cuello (H&N) tratados con Abraxane intra-arterial, se notó una velocidad de respuesta total del 68%. En 10 pacientes con respuesta cuyos tejidos se analizaron para tinción con SPARC, se encontró que el 70% sobre-expresaron fuertemente SPARC. Ejemplo 6 Este ejemplo ilustra la internalización de albúmina marcada en células de tumor MX-I y la co-localización dentro de la célula MX-I con expresión intracelular de SPARC. Las células MX-I se cultivaron en un cubreobjetos y se permeabilizaron con agentes adecuados. Las células se expusieron a albúmina fluorescente y después de lavarse se expusieron al anticuerpo SPARC. Esto fue seguido por la exposición a un anticuerpos secundario con una mancha fluorescente diferente de la albúmina. Sorprendentemente se observó que la albúmina marcada colocalizada con la presencia de SPARC dentro de la célula indicando que la albúmina se internalizó rápidamente y el SPARC intracelular de objetivo. Ejemplo 7 Este ejemplo demuestra un incremento un incremento en la transcitosis endotelial vía gp60 (receptor de albúmina) de composiciones farmacéuticas que comprenden paclitaxel y albúmina comparadas con taxol . Las células endoteliales humanas del microvaso del pulmón (HLMVEC) se desarrollaron para confluencia en un transwell. La composición farmacéutica de la invención que comprende paclitaxel y albúmina, o Taxol que contiene paclitaxel fluorescente (Flutax) a una concentración de 20 µg/mL, se agregó a la cámara superior del transwell. El transporte de paclitaxel por transcitosis de la cámara superior a la cámara inferior se verificó continuamente usando un fluorómetro. Se usó también un control que contenía solamente Flutax sin albúmina. El control con Flutax no mostró transporte, validando la integridad de la monocapa confluente HLMVEC. El transporte de paclitaxel de la composición de paclitaxel con albúmina fue mucho más rápido que el de paclitaxel del Taxol en la presencia de 5% HSA (concentración fisiológica) . Las constantes de velocidades de transporte (Kt) para la composición de albúmina-paclitaxel y taxol fueron de 1.396 h_1 y 0.03 h"1, respectivamente. La cantidad total de paclitaxel transportado a través de la monocapa fue tres veces mayor para la composición de albúmina-paclitaxel que la del Taxol. Así, el uso de albúmina u otro mimético adecuado que incluye anticuerpos o fragmentos en contra del receptor gp60 u otro receptor celular endotelial puede asistir en el transporte de un agente terapéutico deseado a través de la barrera endotelial hacia el intersticio del tumor . Ejemplo 8 Este ejemplo demuestra la unión específica del anticuerpo anti-SPARC con SPARC. Todo el extracto celular se preparó a partir de las células HUVEC mediante sonicación. La proteína fue separada en un 5-15% de SDS-PAGE, transferida a una membrana PVDF y visualizada con un anticuerpo policlonal en contra de SPARC y un anticuerpo monoclonal contra SPARC. Ambos anticuerpos reaccionaron a una sola banda en 38 kDa, el peso molecular correcto para SPARC. Cuando MX-I se analizó mediante el mismo método, SPARC se detectó tanto en el lisato celular clarificado como en la fracción de membrana rica en membrana. Ejemplo 9 Este ejemplo demuestra la ausencia de la expresión de SPARC en tejidos normales. Tejidos de humano y ratón normales se inmunotiñeron y calificaron (0-4) para la tinción de SPARC usando un grupo de tejido tumoral y normal. La inmunotinción se llevó a cabo usando anticuerpo policlonal de conejo anti-SPARC. La SPARC no se expresó en ninguno de los tejidos normales, con la excepción del esófago. Asimismo, la SPARC no se expresó en ninguno de los tejidos de ratón normales, excepto en el riñon del ratón hembra. Sin embargo, es posible que esta expresión fuera debida a la folistatina que es homologa a SPARC.
Expresión de SPARC en Tejidos Normales Humanos Estómago 0/8 Colon 0/9 Recto 0/15 Hígado 0/14 Bazo 0/10 Pulmón 0/14 Riñon 1/14 Cerebro 1/14 Testículos 0/8 Próstata 0/3 Corazón 0/9 Amígdala 0/10 Ganglios Linfáticos 0/10 Apéndice 0/10 Esófago 5/5 Páncreas 0/5 Globo ocular 0/5 Ovario 0/5 Tejidos Normales de Ratón Hígado 0/19 Riñon (M) 0/8 Riñon (H) 6/8 Pulmón 0/16 Músculo 0/20 Cerebro 0/20 Corazón 0/18 Estómago 0/20 Bazo 0/20 Todas las referencias, incluyendo publicaciones, solicitudes de patente, y patentes, aquí citadas están aquí incorporadas por referencia en la misma medida como si cada referencia estuviera indicada individual y específicamente para ser incorporada por referencia y estuviera descrita aquí en su totalidad. El uso de los términos "un" y "los" y referencias similares en el contexto de la descripción de la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) son para cubrir tanto el singular como el plural, a menos que se indique aquí de otra manera o se contradiga claramente por contexto. Los términos "comprende", "tiene", "incluye" y "contiene" son para referir términos abiertos (i.e., significan "que incluye, pero no se limita a,") a menos que se especifique de otra manera. La mención de los intervalos de valores pretenden solamente servir como un método abreviado para referir individualmente a cada valor separado que cae dentro del intervalo, a menos que se indique aquí de otra manera, y cada valor separado es incorporado en la especificación como si mencionaran aquí individualmente. Todos los métodos aquí descritos pueden ser llevados a cabo en cualquier orden adecuado a menos que se indique aquí de otra manera o se contradiga claramente en el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o del lenguaje de los ejemplos (e.g., "tal como") aquí provisto, es solo para iluminar mejor la invención y no pretende limitar el alcance de la invención a menos que se reclame de otra manera. Ningún lenguaje en la especificación debe ser interpretado para indicar algún elemento no reclamado como especial para la práctica de la invención. Las modalidades preferidas de esta invención están aquí descritas, incluyendo el mejor modo conocido para los inventores para llevar a cabo la invención. Las variaciones de esas modalidades preferidas pueden hacerse aparentes para aquellos expertos ordinarios en el arte a través de la Lectura de la descripción anterior. Los inventores esperan que los expertos utilicen tales variaciones apropiadamente, y los inventores pretenden que la invención sea practicada de otra manera a la descrita aquí específicamente. De conformidad, la invención incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia recitada en las reivindicaciones anexas permitidas por la ley aplicable. Además, cualquier combinación de los elementos descritos anteriormente en todas las variaciones posibles de los mismos está incluida por la invención a menos que se indique aquí de otra manera o se contradiga claramente por el contexto.

Claims (62)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES 1. Un método para determinar la respuesta de un tumor de mamífero a un agente quimioterapéutico, el método caracterizado porque comprende (a) aislar una muestra biológica del mamífero, (b) detectar la expresión de la proteína SPARC en la muestra biológica, y (c) cuantificar la cantidad de la proteína SPARC en la muestra biológica.
  2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra biológica se aisla del tumor .
  3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra biológica se aisla de un fluido corporal.
  4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el fluido corporal se selecciona a partir del grupo que consiste de fluido cerebroespinal, sangre, plasma, suero y orina.
  5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tumor se localiza en la vejiga, hígado, ovario, riñon, intestino, cerebro o mama.
  6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el mamífero es un humano.
  7. 7. Un método para suministrar un agente terapéutico a un sitio de enfermedad en un mamífero, el método comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, caracterizado porque la composición farmacéutica comprende el agente terapéutico acoplado a un compuesto capaz de unir una proteína que enlaza albúmina y un portador farmacéuticamente aceptable, con la condición de que la composición farmacéutica no comprenda más de 50% del agente terapéutico en forma de nanopartículas.
  8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la composición farmacéutica no comprende más del 10% del agente terapéutico en forma de nanopartículas .
  9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la composición farmacéutica no comprende más del 5% del agente terapéutico en forma de nanopartículas .
  10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la proteína que enlaza albúmina es una proteína SPARC.
  11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el sitio de enfermedad es un tumor.
  12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el agente terapéutico es un agente de diagnóstico.
  13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el agente de diagnóstico se selecciona a partir del grupo que consiste de agentes radioactivos, agentes de contraste MRI, agentes de contraste de rayos X, agentes de contraste de ultrasonido, y agentes de contraste PET.
  14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el compuesto es un ligando que enlaza la proteína SPARC.
  15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el ligando se selecciona a partir del grupo que consiste de un catión de calcio (Ca+) , catión de cobre (Cu2+) , catión de fierro (Fe2+) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , colágeno I, colágeno II, colágeno III, colágeno IV, colágeno V, y colágeno IX, vitronectina, trombospondina-1, células endoteliales, plaquetas, albúmina, e hidroxiapatita.
  16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el compuesto capaz de unir una proteína que enlaza albúmina es una molécula pequeña.
  17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la molécula pequeña se selecciona a partir del grupo que consiste de un compuesto químico, una proteína y un carbohidrato.
  18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el compuesto capaz de unir una proteína que enlaza albúmina es un anticuerpo para la proteína SPARC.
  19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el tumor se localiza en la vejiga, hígado, ovario, riñon, intestino, cerebro o mama.
  20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el mamífero es un humano.
  21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la ruta de administración se selecciona a partir del grupo que consiste de intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, e inhalación.
  22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo policlonal.
  23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el anticuerpo se manufactura en un animal seleccionado del grupo que consiste de un pollo, rata, ratón, conejo, conejillo de indias, hámster, oveja, vaca, y cabra.
  24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo es humanizado.
  25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo es monoclonal.
  26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el anticuerpo se manufactura mediante fusión de una sola línea celular que produce anticuerpo anti-SPARC con una línea de mieloma.
  27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo se prepara ín vitro mediante un método seleccionado del grupo que consiste de un sintetizador de péptidos, mediante conversión del despliegue de fago en anticuerpo, y mutagénesis o síntesis de regiones variables de los genes de cadena pesada y ligera para anticuerpo.
  28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste de monovalente; multivalente; onoespecífico; biespecífico; de cadena simple, y un fragmento Fab.
  29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el anticuerpo es una quimera.
  30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste de inhibidores de tirosina cinasa, inhibidores de cinasa, agentes biológicamente activos, moléculas biológicas, radionúclidos, adriamicina, antibióticos de ansamicina, asparaginasa, bleomicina, busulfan, cisplatina, carboplatina, carmustina, capecitabina, clorambucil, citarabina, ciclofosfamida, camptotecina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, etoposida, epotilones, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, idarubicina, ifosfamida, irinotecan, lomustina, mecloretamina, mercaptopurina, meplhalan, metotrexato, rapamicina (siroli us) , mito icina, itotano, mitoxantrona, nitrosurea, paclitaxel, pamidronato, pentostatina, plicamicina, procarbazina, rituximab, estreptozocina, teniposida, tioguanina, tíotepa, taxanos, vinblastina, vincristina, vinorelbina, taxol, combretastatinas, discodermolida, transplatino, compuestos del factor de crecimiento endotelial anti-vascular ("anti- VEGFs"), compuestos del receptor del factor de crecimiento antiepidérmico ("anti-EGFRs") , 5-fluorouracilo, y derivados y combinaciones de los mismos.
  31. 31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente terapéutico es un inhibidor de cinasa.
  32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el inhibidor de cinasa es genisteina.
  33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente terapéutico es una molécula biológica.
  34. 34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la molécula biológica se selecciona del grupo que consiste de tTF y TNF.
  35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente terapéutico es un radionúclido.
  36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente terapéutico es un anticuerpo que media la activación del complemento y la citotoxicidad mediada por células en contra del tumor.
  37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el tumor se localiza en la vejiga, hígado, ovario, riñon, intestino, cerebro, o mama.
  38. 38. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el mamífero es un humano.
  39. 39. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la ruta de administración es intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, o inhalación.
  40. 40. Una composición que comprende un agente terapéutico acoplado a un compuesto capaz de unir una proteína SPARC y un portador farmacéuticamente aceptable, con la condición de que la composición no comprenda más de 50% de agente terapéutico en forma de nanopartículas.
  41. 41. La composición de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada porque el compuesto capaz de unir la proteína SPARC es un anticuerpo o fragmento del mismo.
  42. 42. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el anticuerpo o fragmento del mismo es humanizado y se selecciona a partir del grupo que consiste de monovalente, multivalente, monoespecífico, biespecífico, de cadena simple, Fab' monovalente, Fab2 divalente, scfv, diabody y una quimera.
  43. 43. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico es quimioterapéutico, radionúclido o péptido.
  44. 44. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el anticuerpo es policlonal .
  45. 45. La composición de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el anticuerpo está manufacturado en un animal seleccionado del grupo que consiste de un pollo, rata, ratón, conejo, conejillo de indias, hámster, oveja, vaca, y cabra.
  46. 46. La composición de conformidad con la reivindicación 45, caracterizada porque el anticuerpo es humanizado.
  47. 47. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el anticuerpo es monoclonal.
  48. 48. La composición de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque el anticuerpo está manufacturado mediante fusión de una sola línea que produce anticuerpo anti-SPARC con una línea de mieloma.
  49. 49. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el anticuerpo se prepara ín vítro mediante un método seleccionado del grupo que consiste de un sintetizador de péptidos, mediante conversión del despliegue de fago en anticuerpo, y mutagénesis o síntesis de regiones variables de los genes de cadena pesada y ligera para anticuerpo.
  50. 50. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico se selecciona del grupo que consiste de inhibidores de tirosina cinasa, agentes biológicamente activos, radionúclidos, adriamicina, antibióticos de ansamicina, asparaginasa, bleomicina, busulfan, cisplatina, carboplatina, carmustina, capecitabina, clorambucil, citarabina, ciclofosfamida, camptotecina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, etoposida, epotilones, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, idarubicina, ifosfamida, irinotecan, lomustina, mecloretamina, ercaptopurina, eplhalan, metotrexato, rapamicina (siroli us) , mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nitrosurea, paclitaxel, pamidronato, pentostatina, plica icina, procarbazina, rituximab, estreptozocina, teniposida, tioguanina, tiotepa, taxanos, vinblastina, vincristina, vinorelbina, taxol, combretastatinas, discodermolida, transplatino, compuestos del factor de crecimiento endotelial anti-vascular ("anti- VEGFs"), compuestos del receptor del factor de crecimiento anti-epidérmico ("anti-EGFRs"), 5-fluorouracilo, y derivados y combinaciones de los mismos.
  51. 51. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico es un inhibidor de cinasa.
  52. 52. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico es una molécula biológica seleccionada del grupo que consiste de tTF y TNF.
  53. 53. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico es un radíonúclido.
  54. 54. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente terapéutico es un anticuerpo que media la activación del complemento y la citotoxicidad mediada por células en contra del tumor.
  55. 55. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque la ruta de administración se selecciona del grupo que consiste de intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, o inhalación.
  56. 56. Un agente de suministro que comprende un grupo de reconocimiento de SPARC y un agente terapéutico, caracterizado porque el agente terapéutico está acoplado al grupo de reconocimiento de SP?RC, con la condición de que el agente de suministro no comprenda más de 50% de agente terapéutico en forma de nanopartículas.
  57. 57. El agente de suministro de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el grupo de reconocimiento de SPARC comprende un anticuerpo o fragmentos del mismo seleccionados a partir del grupo que consiste de Fab' monovalente, Fab2 divalente, scfv, diabody, un anticuerpo de quimera o fragmentos del mismo, y en donde el agente terapéutico es quimioterapéutico, radionúclido, péptido, agente citotóxico, inhibidor de cinasa, molécula biológica, o agente de diagnóstico y combinaciones de los mismos.
  58. 58. El agente de suministro de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el grupo de reconocimiento SPARC es un anticuerpo humanizado o fragmento del mismo.
  59. 59. Un método para suministrar un agente quimioterapéutico a un tumor en un mamífero, caracterizado porque el método comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende un agente quimioterapéutico acoplado a una proteína de SPARC capaz de enlazar albúmina y un portador farmacéuticamente aceptable.
  60. 60. El método de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque la SPARC es expresada de un virus seleccionado de báculo virus o adenovirus.
  61. 61. El método de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque la SPARC se purifica usando cromatografía .
  62. 62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la cromatografía se selecciona a partir del grupo que consiste de cromatografía iónica, por exclusión de tamaño, o C-18.
MXPA06013191A 2004-05-14 2005-05-16 Metodos de tratamiento que utilizan proteinas que enlazan albumina como objetivos. MXPA06013191A (es)

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