MXPA06012070A

MXPA06012070A - Sistema de surtido terapeutico que comprende un compuesto de tipo peg de peso molecular alto.

Info

Publication number: MXPA06012070A
Application number: MXPA06012070A
Authority: MX
Inventors: John C Alverdy; Eugene B Chang; Elaine O Petrof
Original assignee: Univ Chicago
Priority date: 2004-04-20
Filing date: 2005-04-20
Publication date: 2007-04-24
Also published as: CA2563511A1; JP2007533755A; WO2006073430A9; KR20070062945A; RU2006140784A; EP1744767A2; CN1964725A; ZA200608710B; EP1744767A4; IL178659A0; WO2006073430A3; AU2005323502A1; BRPI0510004A; WO2006073430A2; US20080206188A1

Abstract

La presente invencion provee un sistema para surtir una amplia escala de terapeuticos quimicos y biologico, incluyendo terapeuticos de proteina, via rutas transepiteliales. El sistema comprende un compuesto de tipo polietilenglicol de peso molecular alto para usarse con un compuesto terapeutico. Opcionalmente, el sistema comprende una composicion que contienen uno o mas compuestos de tipo PEG de peso molecular alto y uno o mas terapeuticos, complementados con un polimero protector tal como dextran y/o nutrientes patogenos esenciales tal como L-glutamina. Los compuestos de tipo PEG de peso molecular alto administrados solos tambien proveen beneficios terapeuticos. Tambien se proveen metodos para prevenir o tratar enfermedades, trastornos o condiciones epiteliales, tales como un epitelio en riesgo de desarrollar sepsis derivada del intestino atribuible a un patogeno intestinal, asi como metodos para monitorear la administracion de compuestos de tipo PEG de peso molecular alto.

Description

SISTEMA DE SURTIDO TERAP ÉUTICO QUE COMP RENDE U N COMPUESTO DE TtPO PEG DE PESO MOLECULAR ALTO El gobierno federal puede tener los derechos en la presente invención de acuerdo a los números DK47722, DK42086, T32 GM07019, y G08 DK064840-01 de los I nstitutos Nacionales de Salud .

CAMPO DE LA INVEN CIÓN La presente invención se refiere a materiales y métodos para surtir, o adm inistrar, compuestos y composiciones terapéuticos a un mam ífero, tal cómo un h umano.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La asistencia sanitaria sin duda alg una es uno de los asuntos fundamentales de las sociedades e individ uos modernos, con dinero y esfuerzo considerables dedicado a valorar progreso continuo. El resultado ha sido progreso estable, con países desarrollados que conducen a la manera de proveer una variedad en aumento de compuestos terapéuticos para tratar el número de enfermedades, trastornos y condiciones crecientes identificados como aflicciones de u na forma de vida u otra, incl uyendo hombres. Sin embargo, ya q ue nuestro entendimiento sobre la salud ha crecido , la profes ión sobre la asistencia sanitaria se ha hecho cada vez más consciente de las limitaciones impuestas por las formas de vida en necesidad de asistencia sanitaria. Por ejemplo, los mamíferos tienen sistemas de órganos internos, órganos y tejidos, cada uno de un tamaño característico, ubicación y organización. Esta anatom ía interna compleja impone límites en la habilidad de surtir cantidades efectivas de terapéuticos activos a las células en necesidad. Los efectos dañ inos en células sanas y en la economía típicamente descartan el surtido sistémico de cantidades grandes de terapéuticos. Por consiguiente, se ha dedicado mucho esfuerzo ai desarrollo de propuestas dirigidas al surtido de terapéuticos. En la actualidad , estas propuestas aún tienen que conducir a! reconocimiento efectiyo en costo y versátil de compuestos terapéuticos. Además, muchas propuestas para el surtido dirigido de fármacos no dirigen los peligros impuestos por el recorrido interno que dichos fármacos deben hacer para alcanzar sus objetivos dentro del volumen del organismo siendo tratado. Aún los fármacos volubles, propiamente dirigidos, pierden eficacia dentro del torrente sanguíneo, el tracto gastrointestinal, el sistema linfático y en los espacios extracelulares del cuerpo. Para muchos terapéuticos, en particular los terapéuticos a base de proteína , una forma fundamental de protección ha sido proveer protección, ya sea at surtir un compuesto pro-fármaco más estable que se activa in vivo o al ' estabilizar el pH de sol uciones q ue contienen terapéuticos. La propuesta de pro-fármaco supone investigaciones costosas e im predecibles para identificar compuestos candidatos en una base de caso-por-caso. Estabilizar el terapéutica real, por ejemplo, mediante estabilización de pH , ha conducido al desarrollo de una amplia variedad de sistemas reguladores, con un número de aquellos reguladores compatibles con el ambiente in vivo de organismos tratados. La estabilización también ha sido facilitada por la inclusión de compuestos estabilizadores, tales como albúmina de suero bovino, caseína, y similares. Sin embargo, estas propuestas requieren el desarrollo de un regulador que sea compatible y efectivo con un terapéutico dado, m ientras que la adición de estabilizadores agrega al costo y requiere exploración para evaluar que los estabilizadores no interfieran con la actividad terapéutica deseada o tengan otras consecuencias dañinas (por ejemplo, inmunogenicidad).

Otro tipo de estabilizador se agrega covalentemente a u n terapéutico, tal como un terapéutico de proteína . Por ejemplo, se ha reportado que la PEGilación de proteínas a través de la adición covalente de moléculas de polietilen glicol (por ejem plo, 1 -20 kD, típicamente 3-5 kD) a proteínas mejora la estabilidad de aquellos terapéuticos. Cantin y otros, Am . J . 27 659-665 (2002); "Specialty Chemicals Mag azine," artículo de periódico I D 7430 (25 de marzo de 2004); Goldénberg , P & T 27(12) :619-621 (2002). Sin embargo, estas modificaciones requieren experiencia técnica, ag regar al costo de u n terapéutico, y requieren prueba cuidadosa para eval uar q ue 1a actividad terapéutica significativa se retiene sin introducir efectos secundarios dañ inos in vivo. También se han usado compuestos estabilizadores tal como P EG (3-5 kD, por ejemplo, Go Lytely®) e n soluciones que contienen terapéuticos. GoLytely© (3, 340 kD) también se ha usado por sí mismo, por ejemplo, como un laxante. La adición de PEG de peso molecular bajo (por ejemplo, 3-12 kD) no siempre ha logrado los resultados por los cuales la comunidad médica ha estado buscando. De esta manera, la adición de PEGs de peso molecular bajo a soluciones q ue contienen terapéuticos involucra un costo adicional, se debe probar para evaluar su eficacia y no toxicidad, y carece de la versatilidad requerida para fomentar confianza en expandir su uso a terapéuticos nuevos. En términos de composiciones de PEG de peso molecular superior (por ejemplo, 20 kD) , H auet y otros, "Kidney Int. 62(2):654-667 (2002) ha reportado el uso de una solución que contiene PEG de 20 kD para almacenar riñones donadores antes del trasplante, resultando en una reducción reportada en isquemia/daño por reperfusión . No obstante, lá solución de PEG de 20 kD no se administró in vivo. PEG de peso molecular alto también se ha agregado de manera covalente a cualquiera de un puñado de compuestos biocompatibles para sintetizar polímeros de d i-bloque para usarse en la formación de nanoesferas biodegradables . Gref y otros, "Science" 263: 1600- 1603 ( 1 994). Las nanoesferas se contemplan para uso in vivo, pero dichas nanoesferas sólo contienen PEG de peso molecular alto unidas a un com puesto biocompatible que se requiere para evalu ar q ue las esferas sean biodegrad ables. Las nanoesferas, como otros portadores moleculares potenciales in vivo (por ejemplo , liposom as , plásticos pegajosos, hidrogeles de polisacárido), proveen una medida de estabilidad y protección a un terapéutico al secuestrar típicamente ei terapéutico en el interior del portador, de alguna manera elim inado del ambiente in vivo del organismo siendo tratado. Las propuestas a base de portador para estabilizar terapéuticos, no obstante, involucran costo por desarrollo considerable, que se debe recuperar, así como g asto apreciable en la preparación y surtido de un portador que contiene terapéutico. Las propuestas a base de portador también sacrifican cualquier función dirigida del terapéutico en sí y el tema de objetivo dirigido no ha sido resuelto por estas tecnolog ías. Además, el uso de portadores agrega el problema adicional de desecho de portador, que se debe designar para ser eliminado o degradado, pero no hasta que se ha surtido la carga terapéutica. De esta manera, se sigue necesitando en la técnica una propuesta versátil ai surtido de terapéuticos que conserva la eficacia, o estabiliza, fármacos todavía vol ubles, permitiendo que dichos com puestos alcancen su sitio de acción destinado antes de perder su valor terapéutico. En la mayoría de los casos, si no es que en todos, el surtido de terapéuticos activos está destinado a tratar, mejorar o prevenir una disfunción (por ejemplo, enfermedad , trastorno o condición) dentro de un organism o. Cáncer, enfermedades degenerativas de célula {por ej emplo, enfermedad de Alzheimer), y sepsis bacteriana son representativos de estos tipos de disfunciones, que pueden, y a menudo de hecho, s uben hasta el nivel de preocupaciones de sa lud principales . Sin querer apega rse a la teoría , es posible q ue ia estabilización de un ambiente inmediato de una célula en un momento antes de una disfunción pueda tener un efecto terapéutico positivo en retrasar, mejorar o prevenir la elaboración de dicha enfermedad, trastorno o condición. De esta manera , además de la necesidad antes mencionada en la técnica por un sistema versátil para surtir terapéuticos activos , se sigue necesitando en la técnica composiciones, métodos y sistemas que estabilizarán el ambiente in vivo de células en riesgo de disfunción. Las enfermedades epiteliales mediadas por microbio, o condiciones anormales , presentan una amenaza significativa a la salud de hombres y animales, im poniendo una carga en los sistemas de asistencia sanitaria a nivel mundial. Un ejemplo de dichos trastornos, sepsis derivada de gota, es una causa principal de mortalidad entre organism os, tales como pacientes humanos, que sufren de cualquiera de una variedad de enfermedades, trastornos o aflicciones, tales como heridas, enterocolitis neonatal, neutropenia severa, enfermedad del intestino inflamatorio, y rechazo de órgano después de un trasplante. El depósito del tracto intestinal ha sido muy reconocido por ser un foco potencialmente letal de sepsis mediada por bacteria en, por ejemplo, pacientes hospitalizados críticamente enfermos . La habilidad de patógenos m icrobianos tal como Pseudomonads (por ejempl o, Pseudomonas aeruginosa) de perturbar la función regul adora de la barrera epitelial intestinal puede ser una característica que define entre organismos oportu n istas capaces de provocar sepsis derivada de gota. En muchas de estas infecciones, Pseudomonas aeruginosa se ha identificado como el patógeno causante. De manera significativa, el tracto intestinal ha mostrado ser el sitio primario de colonización de patógenos oportunistas tales como P. aeruginosa. Las propuestas terapéuticas convencionales a la prevención o tratam iento de trastornos epiteliales mediados por microbio tal como sepsis derivada de gota se han cumplido con éxito incompleto. Las propuestas a base de antibiótico están compuestas por la dificultad de adaptar antibióticos al patógeno intestinal en una manera que no impacta el resto de la flora intestinal. Además, muchos de los patógenos intestinales, como se tipifican por P. aeruginosa, a menudo se hacen resistentes a retos de antibióticos, resultando en una propuesta costosa, actual e incompletamente exitosa para la prevención o tratamiento. Los problemas también acosan las propuestas inmunoterapéuticas. En particular, muchos patógenos intestinales tal como P. aeruginosa, son inmunoevasivos, haciendo a esas propuestas efectivas al m ínim o. Otra propuesta a los trastornos de prevención o tratamiento tal como sepsis derivada de gota es lavado intestinal. En los últimos varios años, se ha intentado el lavado intestinal usando soluciones de polietilen g licol (PEG) , con algunos reportes de anécdota que sugieren que PEG puede mostrar alguna promesa en tratar sepsis derivada de gota sobre u na variedad de circunstancias clínicas y experimentales. El PEG en estas soluciones tiene un peso molecu lar promedio de 3, 500 da ltons y las soluciones están comercialmente disponibles (por ejemplo, Golytely). Se desconocen los mecanismos por los que estas soluciones de peso molecular relativamente bajo (LMW) de PEG proveen un beneficio terapéutico en tratar o prevenir sepsis derivada de gota. Típicamente, estas soluciones se usan para lavar o nivelar el tracto intestinal de organismos en riesgo de desarrollar, o sufrir de, sepsis derivada dé gota. Como un resultado de administrar estas soluciones de PEG de peso molecular bajo al tracto intestinal, hay un cambio variable en la composición floral del intestino tratado dependiendo del método de concentración y el peso molecular de los compuestos usados. Por ejemplo, las soluciones que tienen conceníraciones de PEG mayores de aproximadamente 20% pueden resultar en una acción microbicida que resulta en ia eliminación de microorganismos potencialmente protectores en el tracto intestinal de un huésped estresado. También , las soluciones de PEG de peso molecular bajo pueden perder su eficacia en aten uar la capacidad - de virulencia de ciertos organismos, a pesar de conservarlos. Por lo tanto, se necesita en la técnica una solución que inhiba la expresión de virulencia m icrobiana (las propiedades perjudiciales de un microbio) sin matar el microbio o microbios vecinos, así proveyendo el beneficio de conservar el ecosistema n atural de la microfiora intestinal . Por ejem plo, la conservación de la composición floral nativa proveería competencia para patógenos oportunistas q ue puedan de lo contrario colonizar el intestino. Concomitante con un cambio en la composición floral es un cambio en la fisiolog ía del organism o . Estos cam bios fisiológicos se pueden monitorear al probar cualquier número de actividades enzimáticas características, tales como los niveles de deshidrogenasa de lactato. Por consig uiente, los tratam ientos de PEG de peso molecular bajo del intestino producen cambios significativos en la fisiología de los organismos tratados, con consecuencias impredecibles, y así potencialmente dañinas, a plazo más largo para la salud y bienestar del organismo tratado. Además, dichos tratamientos provocan reacciones físicamente demandantes en la forma de vacío intestinal masivo en organismos críticamente enfermos tales como pacientes humanos hospitalizados. De esta manera , tam bién se sigue necesitando en la técnica proveer una composición efectiva en prevenir, o tratar, un trastorno epitelial mediado por microbio (por ejem plo, sepsis derivada de gota) y/o un síntoma asociado con dicho trastorno, junto con métodos para lograr dichos beneficios, sin crear el potencial de más complicaciones a través de la alteración significativa de la fisiolog ía del organismo tratadc BREVE DESC RI PCIÓN DE LA I NVENC IÓN La presente invención satisface por lo menos una de las necesidades antes mencionadas en la técnica al proveer una composición del tipo de polietilen gl ico! de peso molecu lar alto (HMW) que provea un ambiente estabilizador para el surtido de terapéuticos activos o , por sí m isma , provea protección efectiva contra una condición anormal caracterizada por una superficie epitelial en riesgo de desarrollar un trastorno mediado por microbio. Terapéuticos ejemplares adecuados para el surtido estabilizado en compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto incluyen terapéuticos de proteína y péptido así como terapéuticos de molécula pequeña. Las condiciones anormales ejemplares de las que los compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto proveen beneficio terapéutico incluyen sepsis derivada de gota, otros trastornos/enfermedades intestinales asociados con ia flora intestinal , debido a patógenos intestinales incluyendo, pero sin limitación a, P. aeruginosa, y una variedad de enfermeda'des, trastornos y condiciones de una célula epitelial de u n mam ífero tal como un hombre. Un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto ejem plar es PEG de peso molecular alto. PEG de peso molecular alto inhibe o previene el contacto de dichos patógenos como P. aeruginosa con ta superficie epitelial intestinal. Además, el PEG de peso molecular alto su prime la expresión de virulencia en estos patógenos (por ejemplo, P. aeruginosa) responsivos a una variedad de señales que pueden involucrar redes de señalamiento de detección de quorum. La habilidad de compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto (por ejemplo , PEG de peso molecular alto) de destruirse en el punto de contacto infeccioso entre el patógeno i ntestinal y el epitelio intesti na! provee una propuesta alternativa para prevenir o tratar sepsis derivada de gota , por ejemplo , después de estrés catabólico. De m anera importante , los tratamientos con compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto serían efectivos en costo y relativamente simples de realizar en pacientes humanos así com o una variedad de otros organismos tales como ganado de manera agrícola sign ificativo (por ejemplo, ganado, cerdos, ovejas, cabras , caballos, pollos, pavos, patos, gansos, y similares), mascotas, y animales de zoológico. Un aspecto de la invención provee un artículo de fabricación que com prenda un material de empaquetam iento con etiqueta y una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de polietilen glicol de peso molecular alto (tipo PEG de HMW) contenido deníro del material de em paquetam iento, en donde el material de em paquetamiento comprende una etiqueta o inserto de empaque que indica que el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto se puede usar para tratar, mejorar, o prevenir una condición caracterizada por una célula epitelial anormal , tal como un epitelio inflamado o un epitelio que comprende una disfunción de barrera . El compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto puede ser cualquiera de una variedad de com puestos de peso molecular alto, tal como un polímero catión ico, u n polialcano, glicol de polialcano o polialquileno (por ejemplo, propilen glicoi de peso molecu lar alto, polietilen g licol de peso molecular alto (PEG de HMW), o mezclas de los mismos), derivados de P EG de peso molecular alto tal como PEG de polimetoxi de peso molecular alto , PEG de monometoxi de peso molecular alto , polipropilen glicol de peso molecular a lto, o mezclas de los mismos. Adem ás , el co m puesto del tipo de PEG de peso molecular alto puede ser cualquiera de fos compuestos antes mencionados que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido, tal como un grupo alcoxi de C1 -C 10 de cadena recta (por ejemplo, un grupo metoxi) , un grupo alcoxi de C1 -C 10 de cadena ramificada, un grupo ariloxi de C1 -C 10, o mezclas de los mismos. Los compuestos de los artículos de fabricación pueden comprender además un enlazador tal como un grupo alquilo de C1 -C 10 de cadena recta, un grupo alquilo de C 1 -C10 cíe cadena ramificada, un grupo arilo (por ejemplo, un grupo fenilo), o mezclas de los mismos. Un artículo de fabricación también puede com prender un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto en solución, tal como una solución acuosa, con el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto presente a una concentración de por lo menos 5% (peso/volumen), o entre 10% y 20% (peso/volumen) . El peso molecular promedio del compuesto de! tipo de PEG de peso molecular alto de conformidad con la invención es mayor de 12, 000 daltons, o es por lo menos 15,000 daltons, o es mayor de 1 5, 000 daltons y menos de 20,000 daltons. El material de empaquetamiento con etiqueta de un artículo de fabricación de la invención de conformidad con la reivindicación 1 en donde la etiqueta provea una instrucción de administrar el compuesto para tratar, mejorar o prevenir una condición caracterizada por una célula epitelial anormal , tal como una inflamación de un epitel io o una disfunción de barrera de un epitelio . Más específicamente, la invención contempla dichas condiciones como sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemada a un epitelio, una herida por contacto qu ímico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inm une, neutropenia severa , colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera , inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas de los mismos. Además, la condición puede ser un trastorno inmune tal co o una leucemia, un linfoma , SIDA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, esclerodermia, artritis reumatoide, un trastorno inmune inducido por quimioterapia, un trastorno inmune inducido por radiación, y mezclas o combinaciones de los mismos. Los artículos de fabricación para el tratamiento, mejora o prevención de una enfermedad dei intestino inflamatorio será útil en tratar, mejorar o prevenir colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y mezclas de los mismos . En otro aspecto, la invención provee un artículo de fabricación como se describió antes que comprende además una cantidad terapéuticamente efectiva de un terapéutico. Más específicamente, la invención comprende cualquier terapéutico útil en tratar, mejorar o prevenir u na enfermedad, trastorno o condición de una cél ula epitelial , dichos terapéuticos incluyendo , pero sin limitación a, una formulación de microorganismo probiótico, una composición derivada de por io menos un microorga nismo probiótico, un compuesto analgésico, un com puesto anti-i nflamatorio, un mod ulador de u n sistema inm une, un antibiótico, u n agente anti-cáncer, un agente anti-úlcera , un factor de crecimiento, una citoquina, una hormona de proteína, una proteína de deformación y mezclas de los mismos. Los terapéuticos ejemplares incluyen un 5-amino salicilato, un compuesto que com prende una porción de 5-amino salicilato, un corticoesteroide, metotrexato, 6-mercaptopurina, ciclosporina, vancom icina , metronidazol , una cefalosporina, taxano, un compuesto que comprende una porción de taxano, camptotecina, un compuesto que comprende una porción de camptotecina, 5-fluorouracil , un compuesto que comprende una porción de 5-fluorou racil , un compuesto anti-andrógeno, un compuesto anti-estrógeno, un factor de crecimiento epidérmico, factor de deformación intestinal, insulina, somatostatina, un interferón y mezclas de los mismos. En algunas modalidades, el terapéutico es una bacteria de ácido láctico prebiótica, por ejemplo, Lactobacillus GG (LGG) , estreptococo salivario susp. termófilo , lactobacilos casei , lactobacilos plantarum, lactobacilos acidófilo, lactobacilos delbrueckii subsp. bulg aricus, bifidobacteria longum , bifidobacteria infantis, o bifidobacteria breve, y mezclas o com binaciones (por ejemplo, VSL#3) de los m ismos, o u n compuesto o composición derivada de cualq u iera de dichas bacterias. Otro aspecto de la invención está dirigido a un método para administrar una composición terapéutica a un epitelio en un sujeto en necesidad que comprende administrar una composición que comprende un compuesto del tipo de P EG de peso molecular alto y una cantidad efectiva de un terapéutico. En cuanto a los artículos de fabricación de conformidad con la i nvención, los terapéuticos adecuados para usarse en el método incluyen, pero no se limitan a, una formulación de microorganismo probiótico, una composición derivada de por lo menos un microorganismo probiótico, un compuesto analgésico, un compuesto anti-inflamatorio, un modulador de un sistema inmune, un antibiótico, un agente anti-cáncer, un agente anti-úlcera, un factor de crecimiento, una citoquina , una hormona de proteína, una proteína de deformación y mezclas de los mismos. Los terapéuticos ejemplares incluyen un 5-amino salicilato, un compuesto que comprende una porción de 5-amino saliciiato, un corticoesteroide, metotrexato, 6-mercaptopurina, ciclosporina, vancomicina, metronidazol, una cefalosforina, taxano, un com puesto que comprende una porción de taxano, camptotecina, un compuesto que comprende una porción de camptotecina, 5-fluorouracil, un compuesto que comprende una porción de 5-fIuorouracil, un compuesto anti-andrógeno, un compuesto anti-estrógeno, un factor de crecimiento epidérmico, factor de deformación intestinal, insulina, somatostatina, un interferón y mezclas de los mismos. En una modalidad del método de conformidad con la invención , el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto (por ejemplo, PEG de HWM 15-20 kD) . Los epitelios a los que se puede administrar el terapéutico incluyen, pero no se limitan a, mucosa intestinal , mucosa pulmonar, mucosa nasal , m ucosa u retral, m ucosa del esófago, m ucosa bucal y piel . En algunas modalidades , el sujeto al que se administra un terapéutico es un mam ífero, tal como un h umano. Este aspecto de la invención contem pla cua lquier método de administración conocido en la técnica, incluyendo administración oral, administración rectal, lavado intestinal, administración tópica, inyección intravenosa, inyección intraperitoneal, administración intrauretral, administración vaginal , colocación de cánula y respiración asistida y no asistida. En varias modalidades de este aspecto de la invención, el terapéutico es un compuesto proteínico. El método también puede involucrar la administración de una cantidad efectiva de PA- 1 lectina/adhesina, por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa PA-1 lectina/adhesina; adm inistración de PA- 1 lectina/adhesina se contempla en particular para métodos que involucran la administración de un terapéutico proteínico. Otro aspecto de la invención está dirigido a un método para tratar una condición mediada por microbio de un epitelio de un sujeto que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente un ido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificada , un grupo ariloxi de C 1 -C 1 0 y mezclas de los mismos. El com puesto del tipo de PEG de peso molecular .alto puede estar en u na sol ución acuosa que com prende por lo menos 10% y menos de 20% de compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto (peso/vol umen) . El sujeto puede ser un mam ífero, tal com o un humano. El epitelio puede ser una mucosa intestinal, una mucosa pulmonar, una mucosa nasal, una mucosa uretral, una mucosa vaginal, una mucosa del esófago, una mucosa bucal o piel. En practicar este aspecto de la invención, ei compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto se puede administrar por cualquier ruta conocida en la técnica , incluyendo administración oral , administración rectal, administración vaginal, administración al intestino, administración tópica, inyección intravenosa, inyección intraperitoneal, colocación de cánula o respiración asistida o no asistida. Las condiciones adecuadas para el • tratamiento por este aspecto de la invención incluyen, pero no se limitan a, sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemadura a un epitelio, una herida por contacto qu ímico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica, enteropatía , rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo , cólera , inflamación m ucosa, inflamación de la piel y mezclas de los mismos. En un aspecto relacionado, la invención comprende un método para administrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad para tratar dichas condiciones tales como una leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis , una enfermedad del intestino inflamatorio, lupas eritematoso, esclerodermia, artritis reumatoide, un trastorno inm une inducido por quim ioterapia, u n trastorno inmune inducido por radiación, y mezclas o combinaciones de ios mismos. En am bos de estos aspectos de ia invención, el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto puede ser PEG de peso molecular alto que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido tal como un grupo alcoxi de C 1 -C10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificada , un grupo ariloxi de C 1 -C 1 0 y mezclas de los mismos. Condiciones susceptibles al tratamiento, ya sea inducido por un microorganismo o no, incluyen sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemadura a un epitelio, una herida por contacto químico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inm une, neutropenia severa , colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas o combinaciones de los mismos. Se contemplan expresamente los tratamientos de condiciones tales como una leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, esclerodermia, artritis reumatoide, un trastorno inm une inducido por quimioterapia , un trastorno inm une inducido por radiación , y mezclas de los mismos. En otro aspecto, la invención provee un método para mejorar un s íntoma de cualquiera de las condiciones señaladas antes q ue com prende admi nistrar un a cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto que com prende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C1 -C10 de cadena ramificada, un grupo ariloxi de C1 -C10 y mezclas de los mismos. Otro aspecto de la invención está dirigido a un método de prevenir una condición que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificada , un grupo ariloxi de C 1 -C 10 y mezclas de los mismos. La invención contempla métodos para prevenir dichas condiciones tales como sepsis derivada de gota, enfermedad dei intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemadura a un epitelio, una herida por contacto químico a un epitelio, enterocolitis necrotizaníe neonatal , un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica , enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa , panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas o combinaciones de los mismos. Todavía otro aspecto de ia invención está dirigido a u n uso de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto como se describió antes en la preparación de un medicamento para tratar una condición tal com o sepsis derivada de gota, enfermedad de! intestin o inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemadura a un epitelio, una herida por contacto qu ímico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas o combinaciones de los mismos. Se contemplan específicamente compuestos útiles para preparar medicamentos para tratar condiciones asociadas con un trastorno inmune, tales como leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, escleroderm ia, artritis réumatoide, un trastorno inm une ind ucido por quimioterapia, un trastorno inmune inducido por radiación , y mezclas o combi naciones de los mismos. Otro aspecto de la invención provee un método para reducir la probabilidad de mortalidad en un animal con una condición an ormal , incluyendo una condición de enfermedad, que comprende una superficie epitelial en riesgo de desarrollar un trastorno mediado por microbio seleccionado a partir de! grupo que consiste de sepsis derivada de gota, enfermedad del intesti no inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemadura a un epitelio, una herida por contacto quím ico a un epitelio, enterocolitis pecrotizante neonatal , un trastorno inm une, neutropenia severa, colitis tóxica , enteropatía , rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa y panza de cerdo, q ue comprende administrar una dosis efectiva de polietilen g licoi (PEG) a un animal en necesidad del mismo, en donde el P EG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons. Animales adecuados incluyen, pero no se limitan a, perro, gato, oveja, cabra, vaca, cerdo y humano. En el método antes mencionado, el PEG tiene de preferencia un peso molecular promedio de por lo menos 15,000 daltons, y está de preferencia entre 5, 000 y 20, 000 daltons, o entre 15, 000 y 20,000 daltons. También se prefiere PEG teniendo un peso molecular promedio de 6, 000, de 7,000, de 8, 000, de 9, 000, de 1 0,000, de 1 1 ,000, de 12, 000, de 13, 000, de 14, 000 y de 25,000 daltops. Además, el PEG puede estar en una solución acuosa que com prende 5-20% de PEG, y de preferencia 10-20% de PEG (por ejemplo, 10% de PEG) . En una modalidad del método, la condición se asocia con la presencia de un organismo de Pseudomonas aeruginosa en el intestino y la integridad de la membrana celular de dicho P. aeruginosa no se altera de manera detectable. En otra modalidad del método, el patrón de crecimiento de Pseudomonas aeruginosa no se altera de manera detectable. Otro aspecto de la invención es un método para inhibir sepsis derivada de gota que comprende contactar un epitelio de mam ífero, tal como un intestino, con polietilen glicol (PEG), en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons, y de preferencia por lo menos 1 5, 000 daltons. En una modalidad de este método, el intestino del mamífero hace contacto con el PEG durante al menos 30 mi nutos . Otros aspectos de la invención incluyen un método de inhibir expresión de lectina PA-1 /adhesina en u n patógeno del epitelio, por ejemplo, un patógeno intestinal, que comprende ad *ministrar una dosis efectiva de polietilen glicol a un animal en necesidad del mismo; un método de inhibir activación inducida por epitelio (por ejemplo, i nducida por epitelio intestinal) de lectina PA-1 /adhesina que comprende administrar una dosis efectiva de polietilen glicol a un animal en necesidad del mismo; un método de inhibir cambio morfológico inducido por C4-HSL de un patógeno del epitelio (por ejemplo, un patógeno intestinal) que comprende administrar una dosis efectiva de polietilen glicol a un animal en necesidad del mismo; un método de reducir la expresión de virulencia en un patógeno del epitelio (por ejemplo, un patógeno intestinal) que comprende administrar una dosis efectiva de poüetiien glicol a un animal en necesidad de! mismo; un método de reducir o prevenir la interacción de una superficie epitelial con un factor de virulencia microbiano que comprende administrar una dosis efectiva de polietilen g lico! a un animal en necesidad del mismo; un método de mejorar la patogénesis epitelial (por ejemplo, intestinal) al prevenir la formación de activación con sentido de q uorum patogénico que comprende administrar una dosis efectiva de polietilen glicol a un animal en necesidad del mismo; y un método de inh ibir la interacción entre epitelio (por ejemplo, epitelio intestinal) de un vertebrado y una bacteria, tal como Pseudomonad (por ejem plo, Pseudomonas aeruginosa) , que comprende contactar el epitelio con polietilen glicol . En todos estos aspectos de la invención, el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons, y de preferen cia por lo menos 1 5, 000 daltons.

Todavía otro aspecto de la invención es un método para inhibir una reducción inducida por Pseudomonas aeruginosa en la resistencia eléctrica transepiteüal de una capa epitelial de m am ífero, tal como una capa epitelial intestinal, que comprende contactar la capa epitelial (intestinal) con polietilen glicol, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons, y de preferencia por lo menos 15, 000 daltons. Preferiblemente, e! PEG tiene un peso molecular promedio de 1 5, 000 a 20, 000 daltons. En una modalidad preferida, la integridad de la membrana del microbio (por ejemplo, P. aeruginosa) no se altera de manera detectable. Todavía otro aspecto de la invención es un método de inhibir la adherencia de una célula bacteriana a un epitelio de mamífero, tal como un intestino de mamífero, que comprende contactar ei intestino con polietilen glicol, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons, y de preferencia por lo menos 15, 000 daltons. Con este método tam bién se prefiere q ue el PEG tenga un peso molecu lar promedio de 1 5, 000 a 20,000 daltons. El PEG puede estar en una solución acuosa que comprende 5-20% de PEG , y de preferencia 5-10% de PEG. Una célula bacteriana ejemplar contemplada como susceptible a la inh ibición de adherencia por este método es una Pseudomonad , tal como P. aeruginosa. Otro aspecto de la invención es un método de reducir la expresión de PA-1 lecti na/adhesina en una célula bacteriana que com prende contactar la ' Célu la bacteriana con polietilen g licol , en donde el PEG tiene u n peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons, y de preferencia 1 5,000 daltons, y está de preferencia entre 15, 000 y 20,000 daltons. Una vez más, el PEG puede estar en una solución acuosa que comprende 5-20% de PEG, y de preferencia 5-10% de PEG. En otro aspecto, la invención provee un método de reducir la probabilidad de mortalidad en un animal que exhibe un trastorno epitelial mediado por microbio seleccionado a partir del grupo que consiste de sepsis derivada de gota, una quemadura, enterocolitis necrotizante neonatal (NEC), neutropenia severa, colitis tóxica, enfermedad del intestino inflamatorio, enteropatía (por ejemplo, en los críticamente enfermos), rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto (por ejemplo, PEG) que se adhiere a una célula seleccionada a partir del grupo que consiste de una célula epitelial intestinal de mam ífero y una célula bacteriana intestinal , en donde eí compuesto se adhiere a la célula en una manera topográficamente asimétrica, as í inhibiendo la interacción de la célula epitelial intestinal de mamífero y la célula bacteriana. Un compuesto preferido es un agente tensioactivo. En una modalidad de este método, el compuesto es PEG, de preferencia teniendo un peso molecular promedio de por lo menos 15, 000 daltons. En otra modalidad de este método, la inhibición se determ ina por microscopio de fuerza atóm ica. Todavía en otra mod alidad de este método, la célula bacteriana es un patógeno intestinal y no hay modificación detectable de sus características de crecimiento . - En aspectos relacionados, este método com prende además introducir una cantidad efectiva de L-glutam¡na\ L-glutamina revestida de dextrana, inulina revestida de dextrana, ácido butírico revestido de dextrana, uno o más fructo-oligosacáridos, N-acetil-D-galactosamina , mañosa y galactosa revestidas de dextrana, lactosa y reguladores de equilibrio y agentes estabilizadores, conocidos en la técnica, en el intestino del animal . Cuando se administran juntos como una sola composición, esta administración de una sola solución de múltiples componentes tratará y preparará el tracto intestinal en anticipación de una disrupción en la flora intestinal y función de barrera del intestino, tal como ocurre después de tensiones de tipo catabóüca, quirúrgica y traumática severas. Otro aspecto de la invención es un método para mejorar un síntoma asociado con cualquier enfermedad o condición q ue surge de, o característica de, una condición anormal del epitelio, ta! como sepsis derivada de gota, que comprende administrar polietilen g licol al intestino, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons, de preferencia por lo menos 15,000 daltons, y está de preferencia entre 15, 000 y 20, 000 daltons. El PEG puede estar en una solución acuosa que comprende 5-20% de PEG, y de preferencia de 5-10% de PEG. La invención comprende mejorar un síntoma asociado con cualq uier enfermedad o condición descrita en i a presente. Todavía otro aspecto de la invención es un 'método para preven ir pérdida de capacidad lactante en un anima! q ue exh i be una condición anormal en la forma de una superficie epitelial de una glándula mamaria en riesgo de desarrollar un trastorno mediado por microbio afectando salida de leche, que comprende administrar, por ejemplo, tópicamente, una dosis efectiva de un polietilen glicol de por lo menos 5, 000 daltons, y de preferencia por lo menos 15,000 daltons, a la superficie epitelial de una glándula mamaria. Animales ejemplares incluyen mam íferos, tales como ovejas, cabras, vacas, cerdos, caballos y humanos. En un aspecto relacionado, la invención provee un método para tratar una pérdida de capacidad lactante en un animal caracterizado por un trastorno mediado por microbio de una superficie epitelial de una glá ndula mamaria que afecta la salida de leche, que comprende administrar, por ejemplo, tópicamente, una dosis efectiva de un polietilen glicol de por lo menos 5, 000 daltons y, de preferencia, por lo menos 1 5, 000 daltons a una g lándula mamaria . En otro aspecto relacion ado, la invención provee un método para preven ir el desarrollo de un trastorno epitelial mediado por microbio en un animal de edad lactante que comprende administrar una dosis efectiva de polietilen glicol de por lo menos 5, 000 daltons, y de preferencia por io menos 1 5, 000 daltons, a! animal . Animales adecuados incluyen mamíferos, tales como humanos, g anado, mascotas domesticadas, y animales de zoológico. En una modalidad, el PEG se mezcla con cualquier fórmula infantil conocida en la técn ica. U n aspecto relacionado de la invención es una com posición que com prende fórm ula infantil y polietilen glicol (PEG) , en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons. Una vez más, se puede usar cualquier fórm ula infantil conocida en la técnica, incluyendo fórm ulas basadas en la leche de un mamífero, tal como leche de vaca, leche de cabra, y similares, así como fórmulas basadas en leche de soya. La fórmula también se puede enriquecer con cualquier vitamina y/o elemento, incluyendo fortificación con hierro. El PEG de preferencia tiene un peso molecular promedio de por lo menos 15, 000 daltons, y de preferencia está presente en la escala de 5-20% al momento de la reconstitución o hidratación de la fórmula infantil o de bebé. La invención provee además un método para proveer nutrición a un animal, de preferencia de edad lactante, que comprende administrar una dosis efectiva de la composición que comprende fórm ula infantil y PEG al an imal. Todavía otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende polietilen gücol de por lo menos 5, 000 daltons, y de preferencia 1 5, 000 daltons, peso molecular promedio y un adyuvante, portador o diluyente adecuado. En u n aspecto relacionado, la composición com prende además un compuesto seleccionado a partir del grupo que consiste de L-glutamina revestida de dextrana, inulina revestida de dextrana , ácido butírico revestido de dextrana , uno o más fructo-oligosacáridos, N-aceti!-D-galactosamina, mañosa y galactosa revestidas de dextrana , lactosa y reguladores de equilibrio y agentes estabilizadores conocidos en la técnica .

Un aspecto adicional de la invención es un equipo para el tratamiento terapéutico o prevención de una condición anormal caracterizada por una superficie epitelial en riesgo de desarrollar un trastorno mediado por microbio, tal como sepsis derivada de gota, que comprende una de las composiciones farmacéuticas descrítas antes y un protocolo que describe el uso de la composición en tratam iento o prevención terapéutica de la condición anormal. Los protocolos adecuados para la inclusión en el equipo describen cualquiera de uno de los métodos terapéuticos o preventivos descritos en la presente. Todavía otros aspectos de la invención están dirigidos a métodos de prevenir una condición anormal caracterizada por una superficie epitelial en riesgo de un trastorno mediado por m icrobio, incluyendo enfermedades. Por ejemplo, la invención comprende el método de prevenir una enfermedad ^o una condición anormal que comprende administrar una composición que comprende una dosis efectiva de polietilen güco! (PEG) a un animal, en donde el P EG tiene un peso molecular promedio de por io menos 5, 000 daltons. Una enfermedad adecuada o condición anormal, susceptible a los métodos preventivos de la invención , se selecciona a partir del grupo que consiste de otitis de! nadador, otitis media aguda, otitis med ia crón ica, neumonía asociada con ventilador, sepsis derivada de gota, enterocolitis necrotizante, diarrea inducida por antibiótico, colitis seudomembranosa , una enfermedad del intestino inflamatorio , enfermedad de intestino irritable, enterocol itis neutropénica, pancreatitis, síndrome de fatiga crónica, síndrome de disbiosis, colitis microscópica, una infección de las vías urinarias crónica, una enfermedad por transmisión sexual, e infección . Un animal adecuado como un sujeto para dichos métodos preventivos se selecciona a partir del grupo que consiste de perro, gato, oveja, cabra, vaca , cerdo, pollo, caballo y humano. El PEG tiene de preferencia un peso molecular promedio de por lo menos 1 5, 000 daltons; también se prefiere PEG teniendo un peso molecular promedio entre 15,000 y 20, 000 daitons. Además, el PEG puede estar en una solución acuosa que comprende 10-20% de PEG, y de preferencia 10% de PEG . La composición siendo administrada puede comprender además un veh ículo seleccionado a partir del grupo que consiste de una solución liquida , un gel tópico, y una solución adecuada para nebulizar. Además, ia composición puede comprender un compuesto seleccionado a partir del grupo q ue consiste de L-g lutamina revestida de dextrana , inulina revestida de dextrana, ácido butírico revestido de dextrana, un fructo-oligosacárido, N-aceti!-D-galacíosamina, mañosa revestida de dextrana, galactosa y lactulosa . En una modalidad, la composición comprende PEG, L-glutamina revestida de dextrana, in ulina revestida de dextrana, ácido butírico revestido de dextrana, un fructo-oligosacárido, N-acetil-D-galactosam ina, mañosa revestida de dextrana, galactosa y lactu losa .

Todavía otro aspecto de la invenci ón es u n método de prevenir i nfección en la piel que com prende el paso de aplicar una composición que com prende un a cantidad efectiva de polietilen glicol (PEG) a un animal, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons. La composición puede comprender adem ás un vehículo seleccionado a partir del grupo que consiste de un ungüento, una crema , un gel y una loción. La invención contempla que un agente que provoca la infección se seleccione a partir del grupo que consiste de Bacillus anthracis, viruela, E. coli enteropatogénico (EPEC) , £. coli enterohemorrágico (EH EC), E. coli enteroag regativo (EAEC), Clostridium difficile, rofavirus, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Klebsielta oxytocia, Enterobacteria cloacae, Candida albicans y Candida globrata . Otro aspecto de la invención es un método de prevenir infección respiratoria que comprende el paso de administrar una cantidad efectiva de polietilen glicol (PEG) a un anim al , en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons. Una infección respiratoria susceptible a los métodos preventivos de la invención puede surgir del contacto con un agente infeccioso vía cualquier ruta conocida en la técnica , incluyendo neumonías asociadas con ventiladores (por ejemplo, neumon ía asociada con ventilador) , agentes infecciosos nacidos en el aire, agentes infecciosos dispersos en un fluido nebulizado tal como a l estornudar, y similares. En algunas m odalidades, el método previene la i nfección respiratoria por un agente seleccionado a partir del grupo que consiste de Bacillus anthracis y viruela .

Todavía otro aspecto de la invención es un método de irrigar por lo menos una porción de las vías urinarias a fin de prevenir una infección de las vías urinarias crónica, que comprende el paso de-surtir una cantidad efectiva de una com posición que comprende PEG a una uretra, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons. En una modalidad, la composición se administra a una porción de las vías urinarias que incluye por lo menos la vejiga. Otro aspecto de la invención es un método de prevenir una enfermedad por transm isión sexual que comprende el paso de aplicar polietilen glicol (PEG) a un condón , en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons. Un aspecto relacionado de ia invención es un condón que comprende por lo menos u n revestimiento parcial con PEG teniendo un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons. Todavía otro aspecto relacionado es un equipo que comprende un condón y polietilen glico! (PEG) teniendo un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons. La invención también comprende un método de prevenir un trastorno del tracto digestivo que comprende administrar u na dosis efectiva de una composición q ue comprende polietilen glicol (PEG) a un animal en necesidad del m ismo, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5 , 000 daltons. Trastornos del tracto digestivo ejemplares susceptibles a los métodos preventivos de la inven ción se pueden seleccionar a partir de! grupo que consiste de enterocolitis necrotizapte neonatal, diarrea inducida por antibiótico, colitis seudomembranosa, una enfermedad del intestino inflamatorio, enfermedad de intestino irritable, enterocolitis neutropénica, pancreatitis, síndrome de disbiosis y colitis microscópica. Otro aspecto de la invención es un método para monitorear la administración de polietilen glicol (PEG) a un animal en necesidad del mismo, que comprende adm inistrar una cantidad efectiva de una composición que com prende PEG marcado, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons, a un animal en necesidad del mismo, y detectar el PEG marcado, por lo que la cantidad y/o ubicación- del PEG marcado (por ejemplo , asociado con un microbio) provee información útil en evaluar la eficacia de adm inistración. En una modalidad del método de mon itoreo, la marca es un fluoroforo (por ejemplo, fl uoresceína, rodamina, Cy3, Cy5) . En otra modalidad del método, detectar el PEG marcado comprende inspección endoscópica. El método de monitorea también contempla que el PEG marcado se detecte en una muestra fecal (es decir, el PEG marcado se asocia con un componente tal como un microbio , cuya fuente es ^na m uestra fecal). Además, el método de mon itoreo puede comprender administrar una segunda marca específica para un microbio y detectar la segunda marca . "Específica" como se usa en este contexto significa que la marca es asociable de m anera detectable con por lo menos un microbio .

Otro aspecto de la invención es un método para monitorear la adm inistración de polietilen glicol (PEG) a un animal en necesidad del mismo, que comprende obtener una muestra de un animal que recibe polietilen glicol, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5,000 daltons, contactar la muestra con una célula epitelial , y medir la adherencia de un microbio en la muestra a la célula epitelial, por lo que cantidad y/o ubicación del PEG provee información útil en evaluar la eficacia de administración. La medición se puede log rar por examinación microscópica. Otro método de monitoreo de conformidad con la invención es un método para monitorear la administración de polietilen glicol (PEG) a un anim al en necesidad del mismo, que com prende obtener una muestra de un animal que recibe polietilen glicol, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons, contactar la capa de célula epitelial con la m uestra, y medir u na resistencia eléctrica trans-epitelial de la capa epitelial, por lo que la administración efectiva se indica por una disminución reducida en resistencia eléctrica trans-epitelial relativa a un valor de control. El valor de control puede ser interno (es decir, medir el TEER antes de la administración de PEG) o externa (es decir, un valor desarrol lado en otros estudios q ue se usa confiablemente para comparación). Todavía otro método de m onitoreo de la invención es un método para mon itorear la adm inistración de polietilen glicol (P EG) a un animal en necesidad del m ismo, que comprende obtener u na muestra de un animal que recibe polietilen glicol, en donde el PEG tiene un peso molecular promedio de por lo menos 5, 000 daltons, aislando un microbio de la muestra, y medir la hidrofobicidad de la superficie celular del microbio, por lo que la hidrofobicidad de cualq uier m icrobio en la m uestra provee información útil en evaluar la eficacia de la adm inistración. "Aislar", como se usa en este contexto , significa separar de otros componentes de la muestra (por ejemplo, material sólida) lo suficiente para permitir medidas de hidrofobicidad, como se entendería en la técnica. Un aspecto relacionado de la invención es un equipo para monitorear la administración de polietilen glicol, que comprende un PEG marcado y un protocolo que describe usar el PEG marcado en administración de monitoreo dei mismo. Los protocolos adecuados incluyen cualquiera de los métodos descritos en la presente o conocidos en la técn ica que se refieren a la administración, surtido o aplicación de PEG . En alg unas modalidades de este aspecto de la invención, el equipo comprende además una marca libre. Tod avía otro método de monitoreo de ia invención es un método para monitorear la administración de polietilen glicol (PEG) a un animal en necesidad del mismo, que comprende obtener una muestra de un animal que recibe polietilen glicoi, en donde el PEG tiene un peso molecular prom edio de por lo menos 5,000 daltons, y detectar actividad de PA-1 lectina/adhesina en la muestra, por lo que la actividad de PA-1 lectina/adhesina provee información útil en eval uar la eficacia de admin istración . En u na modalidad de este método, la actividad de PA-1 lectina/adhesina se detecta al unir a una pareja de unión de lectina PA-1 /adhesina, tal como cualquier forma conocida de un anticuerpo específico anti-PA-l lectina/adhesina o _un carbohidrato al que se une específicamente la lectina/adhesina. Un aspecto relacionado de la invención es un equipo para monitorear la administración de polietilen giicol (PEG) q ue comprende una pareja de unión de PA-l lectina/adhesina y un protocolo que describe el uso de la pareja de unión para detectar PA-i lectina/adhesina en la muestra. Los protocolos adecuados incluyen cualquiera de los métodos descritos en la presente o conocidos en la técnica que se refieren al uso de PEG. . Otras características y ventajas de la presente invención se entenderán mejor por referencia a la siguiente descripción detallada, incluyendo el dibujo y los ejemplos .

BREVE DESCRIPCIÓN DEL DI BUJO La figura 1 provee velocidades de mortalidad en ratones a 48 horas sometidos a laparotom ía fingida o 30% de hepatectom ía quirúrgica seguido por inyección directa de P. aeruginosa PA27853 en el intestino ciego. Los ratones se sometieron a una hepatectom ía de! lóbulo izq uierdo en 30% sin sangre inmediatamente, seg uid o por inyección cecal directa de 1 x 1 07 cfu/m! de PA27853. Cada g rupo contuvo 7 ratones. Los ratones de control se sometieron a laparotomía fingida seguida por inyección de cantidades iguales de PA27853 en el intestino ciego. Para raíones en los grupos de PEG, se suspendió 1 x 107 cfu/ml de PA27853 en PEG 3.35 (PEG de peso molecular bajo de 3, 350) o PEG 1 5-20 (PEG de peso molecular alto de 1 5, 000 a 20,000 daltons) antes de inyección cecal. Las curvas de respuesía a dosis para PEG 15-20 se observan en el panel b. a. Un efecío protector estadísticamente significativo de PEG 15-20 se determinó por Fisher Exact Test (P<0.001 ). b. La concentración protectiva mínima de PEG 15-20 se determinó ser de 5% (P<0.05) . c. Los cultivos bacterianos cuantitativos de contenidos cecales (heces), mucosa cecal lavada , hígado y sangre 24 horas después de 30% de hepatectomía quirúrgica e inyección cecal, directa de 1 x 1 07 cfu/ml de PA27853. ANOVA unidireccional demostró un au mento estadísticamente significativo en conteos bacterianos en contenidos cecales, m ucosa, hígado y sangre en ratones después de hepatectom ía (P<0.001 ) . Una dism inución sig nificativa (P<0.05) en los conteos bacterianos de hígado y sangre se observó para PEG 3350, mientras que PEG 15-20 previno por completo PA27853 de diseminarse al hígado y sangre de los ratones. La fig ura 2 muestra el efecto protector de PEG 1 5-20 contra disfunción de barrera epitelial inducida por PA27853 según se evaluó por resistencia eléctrica transepiíelial (TE ER). a. Los datos represenían el promedio ± SEM % de caída m áxima en TEER de la línea base de culíivos por triplicado (n = 7) observados durante 8 horas de exposición apical a 1 x 1 07 cfu/mi de PA27853. Una disminución estadísticamente sign ificativa en TEE R se demostró (ANOVA unidireccional (P<0.001 )) en células Caco-2 expuestas a PA27853. Un efecto protector estadísticamente significativo en la caída en TEER inducido por PA27853 se demostró para PEG 15-20 (P<0.001 ). b. Imagen de células Caco-2 en presencia de PEG 3.35 y exposición apical de PA27853. Las imágenes tomadas después de 4 horas de co-cultivo demostraron perdida de integridad de monocapa con células que flotan 30-40 mieras sobre los andamiajes celulares exhibiendo adherencia de PA27853 a membranas celulares, c. Las células Caco-2 expuestas apicalmente a PA27853 después de 4 horas en presencia de PEG 15-20 mostraron ninguna evidencia de células flotantes en cualquiera de los planos examinados. La figura 3 ilustra el efecto inhibidor de PEGs en expresión PA-I en PA27853. a. Análisis de Western blot. Exposición de PA27853 a 1 mM de la molécula C4-HSL de señalamiento de detección de quorum resultó en un aumento estadíslicamente significativo (P<0.001 ANOVA unidireccional) en expresión de proteína PA-I q ue se inhibió parcialmente en presencia de 10% de PEG 3.35 y se inhibió mucho más con 10% de PEG 15-20. a\ La concentración inh ibidora mínima de PEG 1 5-20 en C4-HSL indujo expresión PA-i fue 5% (P<0.01 ). b. Microscopia electrónica de células bacíerianas individuales expuestas a C4-HS L en presencia y ausencia de PEGs, demostraron que C4-HSL provocó un cambio morfológico en la form a y expresión Pili de P. aeruginosa . El efecto m orfológico inducido con C4-HSL se eliminó por completo en presencia de PEG 1 5-20, pero no P EG 3.35. Se puede observar un efecío del tipo halo rodeando PA27853 expuesto a PEG 15-20. c. Hibridación Northern. Exposición de PA27853 a 0.1 mM de C4-HSL resultó en aumento estadísticamente significativo (P<0.001 ANOVA unidireccional) &n expresión de ARNm PA-I que se inhibió en gran manera con 10% de PEG 15-20. d. El aumento en ARNm de PA-I inducido por 4 horas de exposición a célula Caco-2 se inhibió en presencia de PEG 15-20 , pero no PEG 3.35 (P<0.001 ANOVA unidireccional). La figura 4 muestra el efecto de soluciones de PEG en patrones de crecimiento árido de integ ridad de membrana bacteriana de PA27853. a. El efecto de las dos soluciones de PEG en ia integridad de membrana bacteriana se valoró por un método de manchado que consiste de SYTO9 y yoduro de propidio. Ni la solución de PEG íuvo efécío alguno en la permeabilidad de la membrana bacíeriana. b. Los paírones de crecimienío de PA27853 parecieron idénlicos en las dos soluciones de PEG reialivas al medio de TSB libre de PEG (conlrol) .

La figura 5 presenía imágenes de Microscopio de Fuerza Atómica (AFM) de células Caco-2 y células bacterianas expuestas a PEGs. a-c. I mágenes de AFM de células Caco-2 en presencia de medio solo (a), medio con PEG 3.35 (b), y med io con PEG 1 5-20. PEG 3.35 se observó forma una alfombra lisa sobre las células Caco-2 (b), mientras q ue PEG 1 5-20 formó una cubierta más íopográfica-meníe definida (c) . d-f. I mágenes de AFM de PA27853 en PEG 3.35 y PEG 1 5-20. PEG 3.35 formó un sobre liso alrededor de células baclerianas individuales (e) mieníras que PEG 15-20 no só lo abrazó apretadamente las células individuales (f) , sino que también aumentó el polímero/diámelro bacíeriano (g ,h), así disianciando la bacteria individual una de la otra. La fig ura 6 m uestra el efecto de sol ución de PEG en ei patrón de dispersión/aglutinación de PA27853. El patrón de dispersión de células bacterianas en cápsulas dTC3 se observó directameníe con un microscopio inverfido de fluorescencia Axioverf 100 TV usando filtro de fluorescencia DI C y GFP , a una magnificación objetivo de 63 X. La temperaíura se ajustó con un sistema de control de temperaíura del fermoslaío Biopíechs. Se usaron lámparas de lungsíeno ( 100 V) íanío para exciíación DIC como G FP. El sofíware de imágenes en 3D (Slidebook) de innovaciones de imágenes iníeligeníes se usó para hacer imagen del paírón de dispersión de célula bacíeriana en el plano Z usando el filíro GFP. Las células P. aeruginosa plancíónicas dispersas de manera uniforme en el medio sin células Caco-2 se observaron en imagen DIC (ßa^ y reconstitución del plano Z (6a2). En presencia de células Caco-2 , las células bacterianas desarrollaron una apariencia aglutinada (db^ y se observaron adherentes a las células Caco-2 (6b2) . 1 0% de PEG 3350 disminuyó la motilidad de bacteria e indujo la formación inmediata de microcolonias bacterianas en forma de hongos (6c adhiriéndose al fondo de! pozo (6c2). En presencia de célu las Caco-2 , las microcolonias bacterianas estuvieron en el orden de 8 mieras sobre ei piano de las célu las epiteliales (6d1 ? 2) . 1 0% de PEG 1 5-20 dism inuyó en g ran medida la motilidad de células P. aeruginosa. No obstaníe , durante las primeras 0.5- 1 horas de incubación en medio conteniendo PEG 15-20, las microcolonias en forma de araña formadas células bacíerianas que esíuvieron cerca de! fondo del pozo (6e ? 2). En varias horas, las microcolonias en forma de paía de araña ocuparon lodo el espacio/volumen del medio (no mosfrado). En presencia de células Caco-2 , las células P. aeruginosa perdieron la configuración de tipo araña y fueron observadas elevadas en lo alto arriba del plano del epitelio (30-40 mieras) (6f1 ? 2) . La figura 7 muestra el efecto de tratar células epiteliales intestinales con un terapéutico probiótico (LGG) en una solución que comprende un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto (es decir, PEG de peso molecular alto de 1 5-20 kD), y una solución carente del compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto. Se sometieron células de Colon de Ratón Adulto Joven (YAMC) a varios tratam ienlos (ver idenlificaciones de carril de gel más adelanle) , y después se cultivaron y evaluaron para expresión de proteína de choque térm ico mediante análisis de Western blot. Carril 1 - células no traíadas (conírol negaíivo); Carril 2 - PEG de peso m olecular alto solo, 600ul agregado; Carril 3 - Medio condicionado de íactobacilos GG (LGG) solo, 600ul agregado; Carril 4 - 600 ut de PEG agregado a células primero, eníonces 600ul de LGG agregado 2 horas después; Carril 5 - LGG agregado primero, enlonces PEG ag regado 2 horas después (mismos volúmenes como en el carril 4); Carril 6 - mezcla de 300u! de LGG m ás 600 ul de PEG agregado; Carril 7 - mezcla de relación de 1 : 1 (600ul de LGG más 600u l de PEG) ; Carril 8 - mezcla de 900u l de LGG más 600u l de PEG; Carril 9 - mezcla de 600u ¡ de LGG más 300ul de PEG; Carril 1 0 - mezcla-de 600ul de LGG más 900ul de PEG; y Carril 1 1 - células sometidas a tensión térmica (HS = choque térmico, control positivo). Se realizaron transferencias Western blot para evaluar la inducción de las proteínas de choque térmico inducibles hsp72 (panel superior) y hsp25 (panel medio) por los varios tralamienlos listados antes . HSC73 (panel inferior) sirve como un control de lote para asegurar que se han cargado cantidades iguales de proteína en todos los carriles. La figura 8 m uestra el efecfo de tratar células epiteliales inteslinales con un lerapéutico probiótico (VSL#3) en una solución q ue comprende un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto (es decir, PEG de peso molecular alto de 15-20 kD) , y en una solución carente del compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto. U na vez más se sometieron células de Colon de Ratón Adulto Joven (YAMC) a varios tratamientos, como se enlista más adelante, y después se cultivaron después de 16 horas y se evaluaron para expresión de proteína de choque térmico por análisis de Wesíern blot. Carril 1 - lote A de medios acondicionados VSL#3, 600ul agregado a células y dejado d urante 16 horas; Carril 2 - lote A de medios acondicionados VSL#3, 1200ul agregado a células y dejado durante 16 horas; Carril 3 - lote A de medios VSL#3, 600ul mezclado con 600ui de PEG , agregado a células durante 16 horas; Carril 4 -mezcla de VSL#3 A/PEG dejada durante 1 0 minutos después q uitada (medios cam biados): Carril 5 - lote B de med ios acondicionados VSL#3, 600ul ag regado a células y dejado durante 16 horas; Carril 6 - lote B de medios acondicionados VSL#3, 1200ul agregado a células y dejado durante 16 horas; Carril 7 - lote B de medios VSL#3, 600ul mezclado con 600ul de PEG, agregado a células durante 16 horas; Carril 8 - mezcla de VSL#3 B/PEG dejada durante 10 minutos después quitada (medios cambiados); Carril 9 - lote H de medios acondicionados VSL#3, 600ul agregado a células y dejado durante 16 horas; Carril 10 - lole H de medios acondicionados VSL#3, 1200ul agregado a células y dejado durante 16 horas; Carril 1 1 - lote H de medios VSL#3, 600ul mezclado con 600ul de PEG, agregado a células durante 16 horas; Carril 12 - mezcla de VSL#3 H/PEG dejado durante 1 0 minutos después quitado (medios cambiados) ; Carril 13 -células no traladas .(control negativo) ; y Carril 14 - células sometidas a tensión térmica (HS = choque térmico, control positivo).

DESCRI PCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención provee productos, métodos y sistemas que presentan colectivamente propuestas simples y económ icas para lograr el surtido de terapéulicos estabilizados , y activos, as í como proveer para el íratamiento y/o prevención de una variedad de trastornos epiteliales (por ejemplo, traslornos epiteliales mediados por microbio), es decir, condiciones anormales y enfermedades que afligen a m uchos mam íferos, incluyendo animales. Al adm inistrar pol ímeros polares de peso molecular alto tales como compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto , por ejemplo, compuestos de l tipo de PEG de peso molecular alto tal como PEG de peso molecular alto a un animal en necesidad, incluyendo aquellos en riesgo, cualq uiera de un número de condiciones anormales que aten! i contra la salud o la vida, es decir, trasíornos o enfermedades epiteliales, incluyendo sepsis derivada de gota, se puede tratar con costo m ínimo y entrenamienlo de predicantes mínimo. El volumen de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto, típicamente administrado como una solución, depende del terapéutico siendo surtido y el objetivo destinado del terapéulico, por ejemplo, si ef terapéuíico fue aclivo en todo, o parte, del tracto intestinal , se desearía solución de! tipo de PEG de peso molecular alto suficiente para cubrir efectivameníe el íracto intesíinal, o parle relevaníe de la misma, con la solución. Si el íerapéutico tuvo un sitio remoto de acción desde el punto de surtido en, por ejemplo, el inteslino, y estaba simplemente destinado para absorción, la solución del tipo de PEG de peso molecular alto sólo necesitaría prevenir la dilución del terapéutico en el lumen intestinal, como se entendería en la técn ica. Sin querer limitarse a la teoría, los beneficios provistos por la invención son consisteníes con el principio de que se pueden prevenir, mejorar o tratar con éxito trastornos epiteliales mediados por microbio al establecer un ambiente conductivo a la supervivencia de dichos microbios. Un entendimienlo de la siguienle descripción deta llada de la invención se facilita estableciendo los siguientes significados para ios térm inos usados en esta descripción, y por una consideración de ia Solicitud de Paíenle de E . U .A. provisional co- propietaria No. 60/542,725, presentada el 6 de febrero de 2004; Solicitud de Pateníe de E . U .A. provisional No. (expedienle del abogado no. 27373/40027), presentada el 20 de abril de 2004, titulada "Cytoproleclive and Anti-lnflammatory Factors Derived From Probiotic And Comensal Flora Microorganisms," y nombrando a Eugene Chang y Elaine Petrof como inventores; y la Solicitud de Patente de E . U .A. provisional No. (expediente del abogado no. 27373/40049), presentada el 20 de abril de 2004, titulada "Cytoprolective Factors Derived From Probiotic And Commensal Flora Microorganisms," y nom brando a Eugene Chang y Elaine Petrof como inventores; cada una de esías íres solicitudes estando incorporada a la presente por referencia en su totalidad. Una "condición anormal" se define ampliamente para incluir enfermedades de mam ífero, trastornos de mamífero y cualq uier estado anormal de salud de mamífero que se caracterice por una superficie epitelial en riesgo de desarrollar un trastorno mediado por microbio. Las condiciones anormales caracterizadas por una superficie epitelial en riesgo de desarrollar un traslorno mediado por microbio incluyen condiciones en donde ia superficie epitelial ha desarrollado un írastorno mediado por microbio. Condiciones ejemplares incluyen enfermedades humanas y trastornos hum an os q ue requieren , o resultan de, intervención médica , tales como u na quemad ura , enterocol itis neonatal , neutropenia severa, enfermed ad del intestino inflamatorio, enteropatía (por ejemplo, de los críticamente enfermos) y rechazo de trasplante (por ejemplo, órganos). "Quemadura" significa daño al tejido de mamífero que resulta de la exposición del tejido a calor, por ejemplo, en la forma de una flama abierta, vapor, fluido caliente y una superficie caliente. U na herida por "contacto con químicos" se refiere a una herida causada por el contacto directo con un químico y puede involucrar una quemadura con químico u otra herida. Neutropenia "severa" es dada su significado ordinario y acostumbrado de una enfermedad marcada en el número de neutrófilos circulantes. "Rechazo de trasplante" se refiere a cualquier desarrollo de material trasplantado (por ejemplo, un órgano) reconocido como siendo asociado con el rechazo final de dicho materia! por ei organismo huésped. "Administrar" es dado su significado ordinario y acostum brado de surtir por cualquier medio adecuado reconocido en la técnica . Formas ejemplares de administrar incluyen surtido oral; surtido anal ; punción o inyección directa , incluyendo intravenosa , intraperitoneal, i ntramuscular, subcutánea, y otros formas de inyección, apl icación tópica, y aspersión (por ejemplo, aspersión nebulizadora), aplicación de gel o fl uido a un ojo, oreja, nariz, boca, ano o abertu ra ureíral , y colocación de cá n ula . U na "dosis efecliva" es aquella cantidad de una sustancia q ue provee un efecto benéfico en el organismo que recibe la dosis y puede variar dependiendo del propósito de administrar la dosis, el tamaño y condición del organismo que recibe la dosis, y oíros variables reconocidos en la lécnica como relevantes a una determinación de una dosis efecliva. El proceso de delerminar una dosis efecíiva involucra procedimieníos de opíimización de rutina que están dentro de ia experiencia en la técnica. Un "animal" es dado su significado convencional de un ser viviente no protista , no planta. Un animal preferido es un mamífero, tal como un ser humano. En el contexto de la presente descripción, una "necesidad" es un estado celular, del organismo, órgano o tejido que podría beneficiarse de la administración de una dosis efectiva para un organismo caracterizada por ese estado. Por ejemplo, un humano en riesgo de desarrollar sepsis derivado de gota, o presentar un síntoma de la misma, es un organismo en necesidad de una dosis efectiva de un producto, ta l como una composición farmacéutica, de conformidad con la presente invención . "Peso molecular promedio" es dado su sig nificado ordinario y acostumbrado de! significado aritmético de los pesos moleculares de los com ponentes (por ejemplo, moléculas) de una composición, sin importar de la precisión de la determinación de ese medio. Por ejemplo, polietilen glicol , o PEG, teniendo un peso molecular ' promed io de 3.5 kilodaltons puede contener moléculas de PEG de peso molecu lar varia nte, con la condición de q ue el medio aritmético de aq uellos pesos molecutares se determ ine ser 3.5 ki lodaltons a algún nivel de precisión, que puede reflejar un estimado del medio aritmético, como se entendería en ia técnica. De manera análoga, PEG de 1 5-20 significa PEG cuyos pesos moleculares dan un . medio aritmético entre 15 y 20 kilodaltons, con ese medio aritmético sujeto a las advertencias señaladas antes. Estas moléculas de PEG incluyen, pero no se limitan a, polímeros de PEG simples. Por ejemplo, una pluralidad de moléculas de PEG relativamente más pequeñas (por ejem plo, 7,000 a 1 0, 000 daltons) se pueden juntar, opcionalmeníe con una molécula enlazadora tal como un fenol, en una sola molécula leniendo un peso molecular promedio superior (por ejemplo, 15, 000 a 20,000 daltons) . "Integridad de membrana celular" significa la ausencia relativa de modificaciones funcionalmente significativas de una membrana celular como un componente funcional de una célula viviente, como se entendería en la técnica . "Alterado de manera detectable" es dado el significado ordinario y acostumbrado de un cambio que se puede percibir usando medios de detección adecuados bajo las circunstancias, como se entendería en la técnica. "Patrón de crecimiento" se refiere colectivamente a los valores de aquellas propiedades de una célula, o grupo de células (por ejemplo, una población de células) , que son reconocidos en la técnica como crecimiento cel ular característico, tal como la generación o tiem po duplicado de la célula, la apariencia de topografía de un grupo naciente de células , y otros variables reconocidos en la técnica como contribuyentes a un entendimiento del patrón de crecim iento de una célula o grupo de células. " I nhibir" es dado su significado ordinario y acostum brado de inhibir con reducir o prevenir. Por ejemplo, inhibir cambio morfológico significa que el cambio morfológico se hace más difícil o se previene por completo. "Expresión de PA-l , o PA-l lectina/adhesina," significa la producción o generación de una actividad caracterísíica de PA-l leclina/adhesina. Típicamenle, la expresión de PA-l lectina/adhesina involucra la traducción de un ARNm que codifica PA-l lectina/adhesina para dar un polipéptido de PA-l íectina/adhesina teniendo por lo menos una actividad característica de PA-l lectina/adhesina . Opcionalmente, PA-l leclina/adhesina incluye además la transcripción de un ADN que codifica PA-l lectina/adhesina para dar el ARNm antes mencionado. "Activación inducida por epitelio" se refiere a un aumento en la actividad de un objetivo dado (por ejemplo , PAs-l lectina/adhesina) a Iravés de influencia directa o indirecta de una, célula epitelial . En el contexto de la presente invención, por ejemplo, la activación inducida por epitelio de PA-l lectina/adhesina se refiere a un aumento en donde la actividad del polipéptido se puede atribuir a la infl uencia directa de un epitelio manifestado a través del contacto directo de u na célula o cél ulas epiteliales con un patógeno intestinal.

"Cambio morfológico" es dado su significado ordinario y acostumbrado de una a lteración en forma .

"Patógeno intestinal" significa un microbio patogénico capaz de provocar, en parte o por completo, sepsis derivada de gota en un animal tal como un humano. Los patógenos intestinales conocidos en la técnica son abarcados por esta definición, incluyendo bacilos gramo negativo tales como las Pseudomonads (por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa). "Mejorar" significa reducir el grado de severidad de, consistenle con su significado ordinario y acoslumbrado. "Quorum palogénico" significa la agregación o asociación de un número suficiente - de organismos patogénicos (por ejemplo, P. aeruginosa) para iniciar p mantener una señal de detección de quorum o comunicación que una concentración de umbral, o número, de organismos (por ejem plo, patógenos inlestinales) esté presente, como se conocería en la técnica . "Interacción" es dado su significado ordinario y acostum brado de interacción, como en la interacción entre dos o más productos biológicos, tales como moléculas, células y similares. "Resistencia Eléctrica Transepitelial ," o TEER, es dada el significado que esta frase ha adquirido en la técnica, que se refiere a una medición de resistencia eléctrica sobre tejido epitelial , q ue es útil no exclusivamente en evaluar el estado de uniones apretadas entre las células epiteliales en un tejido epitelial. "Ad herencia" es dada su s ig n ificado o rdinario y acostum brado de asociar físicamente por más tiempo que un periodo de tiempo transiíorio.

"Topográficamente asimétrico" se refiere a una imagen, mapa u otra representación de la superficie de un objeto tridimensional (por ejemplo, una célula) que no es simétrica. "Microscopia de fuerza atómica ," tam bién conocida como microscopia de fuerza de escaneo, es una técnica para adquirir un mapa topográfico de alta resolución de una sustancia al tener una sonda voladiza sobre ia superficie de una muestra en un barrido de trama y usando medios altamente sensibles para detectar las deflexiones de sonda , como se entendería en la técnica. "Composición farmacéutica" significa una formulación de compuestos adecuados, para la administración terapéuíica, a un animal viviente, tal como un paciente humano. Las composiciones farmacéuticas preferidas de conformidad con la invención comprenden una solución balanceada en viscosidad, perfil de electrolito y osmoiaiidad , que comprende un electrolilo, L-glulamina revestida de dextrana , inulina revestida de dextrana, D-ga!actosa, N-acetii-D-galactosamina y 5-20% PEG ( 15, 000-20, 000). "Adyuvantes, portadores o diluyentes" cada uno son dado los significados cuyos términos han adquirido en la técnica. U n adyuvante es una o más sustancias q ue sirven para prolongar la inmunogenicidad de un inmunogen co-adm i nistrado. U n portador es una o más sustancias que facilitan ia manipulación, tal com o por translocación de una suslancia siendo llevada. Un diluyente es una o más sustancias que red ucen la concentración de, o' diluyen, u na sustancia dada expuesta a! dil uyente.

"Compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto" se refiere a compuestos del tipo de PEG de peso molecular reíativamente alto, definidos como teniendo un peso molecular promedio mayor de 3.5 kilodaltons (kD). Preferiblemente, PEG de peso molecular alto tiene un peso molecular promedio mayor de 5 kilodaltons y, en modalidades particulares, PEG de peso molecular alto tiene un peso molecular promedio de por lo menos 8 kilodaltons, más de 12 kilodaltons, por lo menos 1 5 kilodaltons, y entre 15 y 20 kilodaltons. Además, "compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto" incluye derivados de PEG de peso molecular alto en donde cada dicho derivado es un PEG de peso molecular alto que contiene por lo menos un grupo funcional adicional. Los derivados de PEG de peso molecular alto preferidos son polímeros caiiónicos. Los g rupos funcionales ejemplares incluyen cualquiera de las series alcoxi, de preferencia de C 1 -C 10, cualquiera de las series ariloxi, grupos fenito y feniio suslituido. Dichos grupos funcionales se pueden ag regar en cualquier punto a una molécula de PEG de peso molecular alto, incluyendo en su terminal o en el medio; también se incluyen moléculas o derivados de las mismas en un solo compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto. Además, las moléculas del tipo de P EG de peso molecular alto que tienen un grupo funcional adiciona! pueden tener un dicho g rupo o más de dicho un grupo; cada m olécula también puede tener una mezcla de grupos funcionales adicionales, con la condición de que dichas moléculas sean útiles para estabilizar por lo menos un terapéuíico d ura nte el surtido del mismo o en tratar, mejorar o prevenir una enfermedad, trastorno o condición de una célula epitelial. "Medios" y "medio" se usan para referir a medio de cultivo celular y a medios de cultivo celular a lo largo de la aplicación. Ei número singular o plural de los sustantivos será evidente a partir del contexto en cada uso. En términos generales, un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alio, solo o en combinación con un terapéutico, se puede administrar por cualquier medio adecuado para la condición a ser tratada. El compuésto(s) se puede surtir oralmente, tal como en la forma de tabletas, cápsulas, granulos, polvos o con form ulaciones líquidas incluyendo .jarabes; por surtido sublingual, bucal o transdérmico; por inyección o infusión parenteral, subcutánea , intravenosa, intramuscular o intraesternal ente (por ejemplo, como soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas inyecíabtes esíériles); nasalmenle, lal como por aspersor de inhalación; rectalmente tal como en la forma de supositorios; vaginalmente o uretralmente vía supositorio o infusión, por ejemplo, vía colocación de cánula, o liposomalmente. Las formulaciones de dosis uniíaria que contienen vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables « no tóxicos se pueden administrar. Los compuestos se pueden adm in istrar en una forma adecu ada para liberación inmediata o liberación extendida. La liberación inmediata o liberación extend ida se puede lograr con composiciones farmacéuticas adecuadas conocidas en la técnica .

Las composiciones ejemplares para la administración oral incluyen suspensiones que pueden contener, por ejemplo, celulosa microcristalina para impartir volumen, ácido alg ínico o alginato de sodio como un agente de suspensión, metilcelulosa como un intensificador de viscosidad, edulcorantes o agentes saborizaníes tales como aquellos conocidos en la técnica; y tabletas de liberación inmediata que pueden contener, por ejemplo, celulosa microcristalina, fosfato de dicalcio, almidón, estearato de magnesio y/o lactosa y/u otros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluyentes y lubricantes, tales como aquellos conocidos en ia técnica. Los compuestos inventivos se pueden surtir oralmente por administración sublingual y/o bucal, por ejemplo, con tabletas moldeadas, comprimidas, o por criodesecación . Las composiciones ejemplares pueden incluir diluyentes de rápida disolución tales como manito! , lactosa, sacarosa y/o ciclodextrinas. También se pueden incluir en dichas formulaciones, excipientes tales como celulosa de peso molecular relativameníe alio (AVIC EL®) o un polielilen glicol (PEG; GoLytely®, 3.34 kD) ; un excipiente para ayudar a la adhesión mucosa tal como hidroxipropií celulosa (HPC) , hidroxipropilmetilceulosa (HPMC), carboximetilceulosa de sodio (SCMC) , y/o copolímero anh ídrido maleico (por ejemplo, GANTREZ®) . También se pueden agregar lubricantes, glidantes, sabores, agentes colorantes y estabilizadores para facil idad de fabricación y uso.

Las composiciones ejemplares para ta administración de aerosol nasal o inhalación incluyen soluciones que pueden contener, por ejem plo, alcohol bencílico u otros conservadores adecuados, promotores de absorción para realzar la absorción y/o biodisponibilidad , y/u otros agentes soiubiiizadores o dispersantes tales como aquellos conocidos en la técnica. Las composiciones ejemplares para la administración intestinal incluyen soluciones o suspensiones que pueden contener, por ejemplo, diluyentes o solventes no tóxicos adecuados, tales como manitol, 1 , 3-butanedisl, agua, solución de Ringer, una solución de cloruro de sodio isotónico, u otros agentes de dispersión o humid ificación y suspensión adecuados, incluyendo mono- o digiicéridos sintéticos y ácidos grasos, incluyendo ácido oleico. En este contexlo se conlem pla que pueden conlener, por ejemplo, excipientes no irritantes adecuados, tales como mantequilla de cacao, esteres de g licerida sintéticos o polietilen glicoles (por ejemplo, GoLytely®) . La cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención se puede determ inar por un experto en la técnica. El nivel de dosis específica y frecuencia de dosificación para cualquier sujeto en particular puede variar y dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad de! compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y long itud de acción de ese compuesto, la especie, edad , peso corporal , salud general , sexo y dieta del sujeto, el modo y tiempo de administración , velocidad de excreción , combinación de fármaco, y- severidad de la condición particular. Los sujetos preferidos para el tratamiento incluyen animales, muy preferible especie de mam ífero tales como humanos, y animales domésticos tales como perros, gatos, caballos, y similares, en riesgo de desarrollar una condición o enfermedad epitelial mediada por microbio, tal como sepsis derivada de gota . Los siguientes ejemplos ilustran las modalidades de la invención. El ejemplo 1 describe la protección contra sepsis derivada de gota provista a ratones hepatectomizados por PEG de peso molecular alto. El ejemplo 2 describe la manera en que PEG de peso molecular alto previene adherencia de patógeno a células epiteliales intestinales. El ejem plo 3 revela la manera en que PEG de peso molecular alto inhibe la expresión de virulencia patogénica por lo general, y la expresión de PA-l lectina/adhesina específicamente. El ejemplo 4 muestra que PEG no aféela el crecimiento, o integridad de membrana celular, de patógenos. El ejemplo 5 ilustra la conformación topográfica única de patógenos revestidos de PEG de peso molecular alto usando microscopia de fuerza atómica. El ejemplo 6 describe las interacciones de célula-célula afectadas por PEG de peso molecular alto. El ejemplo 7 describe métodos preventivos usando las com posiciones de la invención. El ejemplo 8 describe métodos para monitorear la adm inistración de PEG de peso molecular alto, tal como en los métodos de tratamiento de la invención, y equipos correspondientes. El ejemplo' 9 describe el efecto protector de un compuesto del tipo de PEG de peso molecu lar alto contra sepsis derivada de gota después de 30% de hepatectomía. Los ejemplos 10 y 1 1 describen el uso de compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto para estabilizar el surtido de los terapéuticos prebióticos Lactobacillus GG, o LGG (ejem plo 10) y VSL3 (ejemplo 1 1 ). El ejemplo 12 ilustra la administración de un terapéutico q uímico o biológico usando un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto.

EJEMPLO 1 PEG de peso molecu lar alto protege contra sepsis derivada de gota después de 30% de hepatectomía Se anestesiaron ratones Balb/c macho y se sometieron a hepatectomía usando un protocolo convencional. Se realizó una escisión de 30% sin sangre del hígado sobre al lóbulo izq uierdo blando. Los ratones de control se sometieron a manipulación dei h ígado sin hepatectomía. Los grupos experimentales y de contro l cada uno tuvieron siete ratones. En todos los ratones, un volumen de 200 µ l de 107 cfu/ml de Pseudomonas aeruginosa PA27853 se i nyectó en la base del intestino ciego por punción de aguja directa diluida en solución salina,' PEG 3.350 o PEG 1 5-20 (PEGs). Los PEGs de peso molecular relativamente bajo están comercialmente disponibles; P EG 1 5-20, teniendo un peso molecular promedio de 1 5, 000 a 20, 000 daltons, es u na combi nación de PEG 7-8 y PEG 8-10 unido covalentemente a u n aro de fenol . El PEG 7-8 tiene u n peso molecular promedio de 7, 000 a 8,000 daltons y el PEG 8-10 tiene un peso molecular promedio de 8, 000 a 10, 000 daltons. Un experto en la técnica se dará cuenta de que los PEGs de peso molecular alto incluyen compuestos que tienen cualquiera de una variedad de subunidades de PEG con cada subunidad teniendo cualquiera de una variedad de pesos moleculares promedio unidos, de preferencia de manera covalente, uno al otro o a uno o más moléculas enlazadoras, que son moléculas relativamente pequeñas teniendo grupos funcionales adecuados para acumulación de moléculas de PEG. Los enlazadores adecuados conservan sustanciaimente ia actividad biológ ica de PEG de peso m olecular alto (conservación de suficiente actividad biológica para realizar un efecto profiláctico o terapéutico benéfico como se describe en la presente). A fin de proveer una fuente constante de PEG durante la duración de 48 horas del experimento, la aguja se dirigió en el intestino delgado (íleo) y 1 ml de solución salina, PEG 3.35 o PEG 15-20 se inyectó retrógrado en el intestino próximo. El sitio de punción se sujetó con una sutura de seda y el intestino siego se em papó con alcohol. Los ratones reg resaron a sus jaulas y recibieron H2O sólo por las siguientes 48 horas. Las cu rvas de respuesta a dosis para P EG 1 5-20 se observan en el panel b de la fig ura 1 . a. U n efecto protector estadísticamente significativo de PEG 15-20 se determ inó por la Prueba Exacta de Fisher (P<0.001 ). b. La concentración protecíora m ínima de PEG 15-20 se delerm inó como 5% (P<0.05) . c. Los cultivos- bacterianos cuantitativos de contenidos cecales (heces), mucosa cecal lavada, hígado y sangre 24 horas después de 30% de hepatectomía quirúrg ica e inyección cecal directa de 1 x 107 cfu/ml de PA27853. ANOVA unidireccional demostró un aumento estadísticamente significativo en conteos bacterianos en contenidos cecales, mucosa, hígado y sangre en ratones después de hepatectom ía (P<0.001 ) . Una disminución sig nificativa (P<0.05) en los conteos bacterianos de hígado y sangre se observó para PEG 3350, mientras que PEG 15-20 previno por completo PA27853 de diseminarse al hígado y sangre de los ratones. La cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (PA27853) es un aislado cl ínico no mucoide de un cultivo de sang re. La inyección cecal directa de la cepa PA27853 en ratones sometidos previamente a una hepatectom ía quirúrgica de 30% sin sang re resultó en un estado de sepsis clínica y no hubo sobrevivientes a las 48 horas. Los ratones sometidos a laparotomía simulada sin hepateclomía (controles) , que son inyectados de manera similar con P. aeruginosa, sobreviven por completo sin ninguna señal clín ica de sepsis (figura 1 a). Para determinar la habilidad de las soluciones de PEG de prevenir o reduci r la mortalidad en este modelo, 200 µ l de PA27853 a una concentración de 1 x 107 cfu/ml , se sus pe nd ió en una de dos soluciones de 1 0% (peso/volumen) de polietilen g licol (PEG 3.35 contra PEG 15-20) . PEG 3.35 fue elegido ya que represenía el peso molecular de PEGs q ue han eslado disponibles para uso cl ínico duranle los úlíimos 25 años (Golytely®) . En com paración , las soluciones de PEG de conformidad con la invención que se usaron tuvieron pesos moleculares que varían entre 15-20 kD. Las cepas suspendidas se introdujeron en el inteslino ciego por punción directa. PEG 3.35 no tuvo efecto alguno en la mortalidad en ratones después de la hepatectomía, mientras que PEG 15-20 fue protecfor por com pleto. De hecho, PEG 15-20 tuvo un efecto protector estadísticamente significativo, como se determinó por la Prueba Exacta de Fisher (P<0.001 ). Los experimentos de respuesta a dosis demostraron una solución de 5% como la concentración mínima de PEG 1 5-20 que fue protectora por completo (P<0.05; ver figura 1 b), aunque un experto en la técnica reconocerá que las soluciones de PEG de peso molecular alto de menos de 5% se esperarían proveer alguna protección y, así, caer dentro del alcance de la presente invención . Con respecto a los conteos bacterianos en los ratones experimeníales y de conlrol, un análisis de variancia unidireccional (ANOVA) demosíró un aumenlo estadísticamente significativo en conteos bacterianos en los contenidos cecales, mucosa, h ígado, y sangre en ratones después de la hepatectom ía (P<0.001 ) . U na disminución significativa (P<0.05) en los conteos bacterianos de h ígado y sangre se observó para PEG 3350, mientras que PEG 15-20 previno por com pleto PA27853 de diseminarse al h ígado y sangre de los ratones. PEG 1 5-20 inhibió por completo la disem inación de PA27853 intesti nal al hígado y torrente sang uíneo (fig u ra 1 c) . Los datos indican que la acción de las soluciones de PEG i nvolucra mecanismos que no son m icrobiocidales . Dados a concentracion es de PEG no tóxicas a células de mam ífero (es decir, = aproximadamente 10%) , no se puede demostrar efecto alguno en los patrones de crecimiento bacteriano. El ejemplo demuestra que PEG de peso molecular alto reduce la velocidad de mortalidad atribuible a sepsis derivada de gota en ratones sometidos a intervención quirúrgica en la forma de una hepatectomía parcial. Este modelo de ratón indica que la terapia de PEG de peso molecular alto es úlil en reducir la velocidad de mortalidad de una especie animal (es decir, reducir la probabilidad de mortalidad en cualquier organismo dado), tal como un hom bre tipo mamífero, sometido a una tensión fisiológica tal como cirug ía invasiva (por ejemplo, hepatectomía parcial). Se espera que la terapia de PEG de peso molecular alto será efectiva en métodos de prevenir muerte o enfermedad seria asociada con sepsis cuando se implementa después de la tensión fisiológica (por ejemplo, durante el cuidado posterior al a operación) . Además, la terapia de PEG de peso molecular alto se puede usar antes de la tensión fisiológica (por ejemplo, cuidado antes de la operación) , bajo circunstancias en donde la introducción de la tensión es predecible, para dism inuir el riesgo de enfermedad seria o muerte. La terapia de PEG de peso molecular alto también es útil en mejorar un síntoma asociado con una enfermedad o condición anorm al asociada con sepsis derivada de gota.

EJEMPLO 2 PEG de peso molecular alto previene adherencia de patógeno a epitelio intestinal Las uniones apretadas son elementos dinámicos del citoesqueleto de célula epitelial que desempeñan un papel principal en la función de barrera de! tracto intestinal de mamífero. P. aeruginosa resulta en una alteración profunda en la permeabilidad de unión apretada como se mide por la resistencia eléctrica tr.ansepitelial (TEER) de células Caco-2 y células T-84. Las células Caco-2 son células epiteliales de colon humano bien caracterizadas que mantienen una TEE R estable en cultivo, y esta l ínea celular provee un modelo in vitro reconocido del comportamiento in vivo de patógenos intestinales. Para determinar el efecto protector de PEG en P. aeruginosa PA27853 inducido disminuye en TEER de monocapas de Caco-2 cultivadas, 1 x 1 07 cfu/ml de PA27853 se inoculó apicalmente en dos monocapas de célula Caco-2 en presencia de 10% de PEG 3.35 o 10% de PEG 15-20. TEER se midió en serie durante 8 horas y la caída máxima en TEER se registró. Sólo P EG 15-20 protegió significativamente contra la disminución inducida por P. aeruginosa en TEE R (figura 2a). Los datos presentados en la fig ura 2 representan el medio ± SEM % de caída máxima en TE ER de la línea base de cultivos e n triplicado (n=7) observados dura nte 8 horas de exposición apical a 1 x 1 07 cfu/ml de PA27853. U na dismin ución estadíslicamente sig nificativa en TEER, como se demuestra en células Caco-2 expuestas a PA27853, se reveló por ANOVA unidireccional (P<0.001 ). Un efecto protector estadíslicamente significativo en la caída en TEER inducido por PA27853 se demostró para PEG 15-20 (P<0.001 ). La figura 2b muestra' células Caco-2 en presencia de PEG 3.35 y con exposición apical a PA27853. Después de 4 horas de co-culíivo en presencia de PEG 3.35, la disrupción de ias monocapas de célula Caco-2 que exhiben bacleria focalmente adherente se observó con células flotando 30-40 mieras arriba de los andamiajes de monocapa (figura 2b). En contraste, la figura 2c, que m uestra imágenes de células Caco-2 expuestas apicalmente durante 4 horas a PA27853 en presencia de PEG 1 5-20 m uestra ninguna evidencia de células flotantes en ninguno de los planos examinados. El efecto protecíor de PEG 15-20 en la integridad de célula Caco-2 se asoció con menos adherencia bacteriana , reflejada por una recuperación superior de 15 veces de bacteria en los sobrenadantes celulares después de una exposición de 4 horas a 1 x 106 cfu/m l de PA27853. La resistencia de células epiteliales intestinales humanas cultivadas con PEG a los efectos de disrupción de barrera de P. aeruginosa, como se juzgó por el mantenimiento de TE ER, ofrece una propuesta práctica para estabilizar la función de barrera de u nión apretada en vista de un reto de invadir patógenos. Evidencia adicionai de! valor terapéutico de PEG 15-20 es que la función de transporíe epitelial (Na+/H+ intercambio, transporte de glucosa) no es afectada por este com puesto.

De esta manera, PEG de peso molecular alto es relativamente inerte a, y tiene un efecto estabilizador en, ia barrera epitelial intestinal. La invención comprende métodos de tratar anormalidades de barrera intestinal asociadas con patógenos intestinales tales como P. aeruginosa al administrar PEG de peso molecular alto a un animal tal como un mamífero y, de preferencia, un humano. Una anormalidad de barrera intestinal se puede revelar por cualquier técnica diagnóstica, u otros medios , conocidos en la técnica. No obstante, no se necesita identificar una anormalidad de barrera intestinal antes del tratamiento de PEG de peso molecular alto. El costo bajo y el grado de seguridad alto asociados con el tralamiento de PEG de peso molecular alto hacen a esta propuesta adecuada para aplicaciones profilácticas, de preferencia dirig idas hacia organismos en riesgo, as í como métodos de tratamiento aplicados a animales que exhiben por lo menos un síntoma característico de una anormalidad de barrera intestinal. Los métodos de traíamienío de PEG de peso molecular alio mejorarían un síntoma asociado con una anormalidad de barrera intestinal; de preferencia, los métodos reducirían o elim inarían los efectos de sepsis derivada de gota de un org anism o tratado.

EJ EMPLO 3 PEG de peso molecular alto inhibe la expresión de virulencia en patógenos La expresión de la PA-l leclina/adhesina en P. aeruginosa PA27853 fue aumentada en el intestino ciego de ratones después de hepatectom ía y desempeñó un papel clave en el efecto letal de P. aeruginosa en el intesíino del ralón . PA-1 funciona como un determ inante de virulencia significativo en el intestino del ratón al facilitar la adherencia de PA27853 al epitelio así como ai crear un defecto de barrera sig nificativo a ias citoíoxinas, exotoxina A y elastasa. La expresión de PA-f en P. aeruginosa se regula por el regulador de trascripción RhI R y su aclivador cognado C4-HSL. La expresión de PA-I en PA27853 no sólo aumentó por la exposición a C4-HSL, sino también por el contacto con células Caco-2, preparaciones de mem brana celular Caco-2, y sobrenadantes de cultivos de célula Caco-2. Se usó hibridación Northern para analizar la expresión de PA-l al nivel de trascripción. El ARN toíal de P. aeruginosa se aisló por el méíodo de íres detergentes modificado. Se generaron sondas por PCR usando cebadores de PA-l : F(ACCCTGGACATTATTGGGTG) (S EC I D NO: 1 ) , R(CGATGTCATTACCATCGTCG) (SEC I D NO: 2) y cebadores 1 6S: F(GGACGGGTGAGTAATGCCTA) (S EC I D NO: 3) , R(CGTAAGGGCCATGATGACTT) (SEC I D NO: 4) , y se clonaron en el vector pC R2.1 (I nvitrogen , I n c. ) . Las inserciones fueron secuencias que igualaron la secuencia de PA-l o 16S. Las sondas de ADNc específicas para PA-l y 16S se radiomarcaron con a32P-dCTP. La radioactividad específica se midió por un fosforeproductor de imágenes Slore 860 (Molecular Dynamics, CA), y cambios de porcentaje relativos en comparación con el control se calcularon con base en la relación de intensidad de PA-l y 16S . Se usó Western blot para análisis de proteína de PA-l , usando anticuerpos anti-PA-l policlonales purificados con afinidad de conejo. Un ml de células de P. aeruginosa se lavó con PBS y se calentó a 100°C en regulador de lisis (4% de SDS, 50 mM de Tris-HCl, pH 6.8) ; se realizó análisis inmunoblot por eleclrotransferencia de proteínas después de SDS-PAG E de Tricita. Se detectó la PA-I lectina por el reactivo ECL (Amersham, NJ) . La exposición a P. aeruginosa PA27853 a 1 mM de la molécula de señalamiento de detección de quorum C4-HSL resultó en un aumento estadísíicamente significativo . (P<0.001 , ANOVA unidireccional) en expresión de proteína de PA-l que se inhibió parcialmente en presencia de 10% de P EG 3.35 y se inhibió a un grado mucho mayor por 10% de PEG 15-20 (figura 3). La concentración completamente inhibidora m ínima de PEG 15-20 en expresión de PA-l i nducida por C4-HS L fue 5% (P<0.01 , ANOVA unidireccional) . La examinación m icroscópica electrónica de células bacteriana individ uales expuestas a C4-HSL en presencia y ausencia de PEG , demostró que C4-HS L provocó u n cambio morfológico en la forma y expresión Pili de P. aeruginosa (figura 3b). El efecto morfológico inducido por C4-HSL se eliminó por completo en presencia de PEG 15-20, pero no completamente eliminado en presencia de PEG 3.35. Se observó un efecto del tipo halo rodeando PA27853 expuesto a PEG 15-20 (figura 3b). La exposición de PA27853 a 0.1 mM de C4-HS L resultó en un aumento estadísticamente sig nificativo (P<0.001 , ANOVA unidireccional) en expresión de ARNm de PA-l evaluada usando transferencias Northern . La expresión de PA-l se inhibió en gran manera por 10% de PEG 15-20. La figura 3d m uestra que el aumento en ARNm de PA-l inducido por una exposición de 4 horas a células Caco-2 se inhibió por PEG 15-20, pero no por PEG 3.35 (P<0.001 , ANOVA unidireccional). Los datos presentados en la presente muestran que u na atenuación significativa (dismin ución de 3-4 veces) de expresión PA-I (proteína y ARNm) en PA27853 , inducida por 100 µM-1 mM de C4-HSL, se observó cuando se traló previamente bacteria con 1 0% de PEG 15-20. Este efecto no se observó con PEG 3.35 (figura 3a) . La atenuación de expresión de PA-l inducida por C4-HSL también se observó para 10% de PEG 3.35, aunque el grado de atenuación fue significativamente menor que aquel para 10% de PEG 1 5-20. La concentración mínima de PEG 15-20 que inhibió expresión inducida por C4-HS L de proteína PA-l fue 5% ( figura 3b) . La microscopia electrónica de célu las bacterianas ind ividuales expuestas a C4-H S L demostró que C4-HS L provocó un cam bio morfológico en la forma y expresión Pili de PA27853 (figura 3b). El efecto morfológico ind ucido por C4-HSL se eliminó por completo en presencia de PEG 15-20, pero no PEG 3.35 (figura 3b). La expresión de PA-! (ARNm) , inducida por exposición de 4 horas a células Caco-2, se inhibió en presencia de PEG 15-20, pero no PEG 3.35 (figura 3b). El efecto protector de expresión de PA-l inducida por célula Caco-2 con PEG 1 5-20 persistió en los experimentos de exposición durante la noche. PEG de peso molecular alto también afecta la expresión de virulencia de P. aeruginosa en respuesta a estímulos conocidos. La atenuación de expresión de PA-l inducida por C4-HSL en PA27853 puede ser un efecto protector principal de PEG 1 5-20, dado q ue el señalamiento de detección de quorum es un mecanismo bien establecido de expresión de virulencia para este patógeno. La interferencia inducida por PEG 15-20 con expresión inducida por célula Caco-2 de PA-1 se espera ser un aspecto importante del efecto protector de PEG 1 5-20. PEG^ 1 5-20 se encontró tener un efecto protector en animales huésped a través de la atenuación de expresión de PA-Í de P. aeruginosa (PA27853) en respuesta a contenidos cecales filtrados (heces) de ratones después de 30% de hepatectom ía. La habilidad de PEG 1 5-20 de proteger P. aeruginosa de factores huésped que aumentan su expresión de virulencia se espera ser todavía otro mecanismo por el cual se prolegen org an ismos de sepsis derivad de gota. Por consiguiente, la invención incluye materiales en la forma de equipos y métodos correspondientes de adm inistrar un PEG de peso molecular alto a un animal para prevenir o tratar una condición caracterizada por la expresión de un factor o determinante de virulencia por un patógeno intestinal tal como uno de las Pseudomonads. Un determinante de virulencia puede contribuir a virulencia directamente, o indirectamente. Un ejemplo de una contribución directa es el efecto de PA-l lectina/adhesina de P. aeruginosa en adhesión de patógeno intestinal a epitelio intestinal y/o la generación de un defecto de barrera a la c-itotoxinas, exotoxina A y elastasa.

EJ E M PLO 4 PEG no afecta el crecimiento cel ular, o integ ridad de mem brana celular, o patógenos El efecto de ias dos soluciones de PEG (PEG 3.35 y PEG 15-20) en la integridad de membrana bacteriana se evaluó por un método de manchado que consiste de SYTO 0 y yoduro de propidio.

Ninguna solución de PEG tuvo efecto alguno en la permeabilidad de la membrana bacteriana (figura 4a) . La integridad de membrana se determinó usando un equipo de viabilidad bacteriana viva/muerta L-3152 (Molecular Probes) . Se cuantificó la bacteria y los conteos expresados como cfu/ml al poner en placas diluciones de 10 veces de m uestras tomadas a diferentes tiempos de incubación . Las curvas de crecim iento para P. aeruginosa crecido durante la noche en medios de TS B conten iendo u na de ias dos soluciones de PEG demostró n i ngún efecto in hibidor por cualquier solución de PEG en cantidad bacteriana (figura 4b). De hecho, el patrón de crecimiento en cada uno de los medios que contienen PEG fue indistinguible de! patrón de crecimiento en medio de TSB libre de PEG. La actividad de una enzima doméstica involucrada en metabolismo de energía, deshidrogenasa de lactato (LDH), se midió a varios puntos de tiempo durante las fases exponenciales y estacionarias de crecimiento. La actividad de LDH se midió en una prueba enzimátiea de diaforasa en par usando una mezcla de sustrato de Cyto Tox 96 (Promega). La concentración de proteína se determinó, usando la Prueba de Proteína BCA (Pierce) . Ningún cambio se observó en actividad de LDH en sobrenadantes libres de célula de P. aeruginosa crecida en presencia de PEGs. Los resultados de este experimento indican que PEG de peso molecular alto tiene un efecto insignificante en patrones de crecimiento bacterianos. Los , métodos de la invención, y productos correspondientes (por ejemplo, equipos), proveen el beneficio de prevenir o tratar enfermedades o condiciones anormales asociadas con sepsis derivada de gota sin infl uir significativamenle en la composición de la flora intestinal. De manera similar, los métodos y productos de la invención se pueden usar para mejorar un síntoma asociado con dichas enfermedades o condiciones anormales sin cambio sig nificativo a la com posición m icrobiana (y eq u ipos) q ue no perturban la composición de la flora intestinal son deseables en cuanto a que dichos métodos no se esperaría que conduzcan a complicaciones de salud secundarias que surjan de dicha perturbación.

EJ EMPLO 5 Microscopia de fuerza atómica de patógeno revestido de PEG Alícuotas de uno por ciento de un' cultivo de PA27853 crecidas durante la noche se subcultivaron en caldo de soya tríptico (TSB), con o sin 10% de PEG de peso molecular alto, durante 4 horas a 37°C. Una gota de cada subcultivo se extrajo y las células de P. aeruginosa PA27853 se lavaron extensamente con PBS , se secaron en la superficie de micas en aire soplando durante 10 minutos, y se formaron imágenes de inmediato. La formación de imágenes de la bacteria secada con AFM de modo de compactación se realizó en aire con microscopio Multimode Nanoscope I I IA Scanning Probé Microscope (MMAFM, Digital I nstruments), Las células Caco-2 subh íbridas fueron tratadas con 10% de PEG de peso molecular alto duraníe 4 horas y se lavaron con P BS exíensamente. La formación de i mágenes de AFM de las células se realizó en PBS sin usar un aro O . Para microscopia electrónica , PA27853 se inoculó en TSB con o sin 1 m M de C4-HSL y 10% de PEG de peso molecular alto y se incubó dura nte la noche. U na g ota de 1 % de P. aeruginosa se manchó con acetaío de uranilo y se lavó con 0.5M de NaCi aníes de examinar bajo el microscopio elecírónico.

La microscopia de fuerza atómica de células Caco-2 demostró una superficie no uniforme clásica con microvili de borde cepillado, mientras que las células Caco-2 expuestas a PEG 3.35 demostraron una apariencia plana lisa en la superficie de las células epiteliales (figuras 5a, c). PEG 15-20 parece alfombrar las . células Caco-2 al llenar las asimetrías sobre un plano topográficamente definido (figura 5e), dando una cubierta topográficamente definida más compleja. De alguna manera similar, las células de PA27853 expuestas a PEG 3.35 demuestran un patrón de revestimiento liso del polímero a las células bacterianas en un patrón plano difuso (figura 6d), mientras que PEG 15-20 parece rodear y abrazar la bacteria de manera circunferencial en un modo más topográficamenle asimétrico. El análisis en sección transversal de la medida de fuerza atómica del diámetro bacteriano en PEG 15-20 demuestra un aumento significativo en el sobre de bacteria/PEG denlro de la solución de PEG (figuras 5e, f). En oirás palabras, PEG 3.35 forma un sobre liso alrededor de las células baclerianas individuales (figura 5e), mientras que PEG 15-20 abraza apretadamente las células individuales (figura 5f) y aumenta el diámetro de polímero/bacteria (figuras 5g , 5h) , así distanciando las células bacterianas individuales entre sí. Sin querer limitarse a la leoría, PEG de peso molecular alto puede ejercer su efecto benéfico por el mero distanciam iento físico de P. aeruginosa lejos del epitelio bacteriano. Alternalivamente, PEG de peso molecular alto puede proveer beneficios al prevenir la formación de una señal de activación de detección de quorum patogénica de la interacción de célula-célula de las células patogénicas. Una vez más, sin querer limitarse a la teoría, es posible que el revestimiento de las superficies biológicas con PEG de peso molecular alto resulte en pérdida de libertad de conformación del revestimiento de cadenas de PEG y el repele de proteínas que se aproximan . Las interacciones polares-polares entre PEG de peso molecular alto y células Caco-2 podría afectar la elasticidad de las cadenas de PEG, restringiendo ciertas cadenas laterales de PEG de peso molecular alto a una construcción molecular que repela proteína. Los datos presentados en la presente soportan la conclusión de que las células Caco-2 revestidas de PEG de peso molecular alto son más repelentes a P. aeruginosa que las células Caco-2 no revestidas, quizá debido a una pérdida de "entropía de conformación" como un resultado de ajguna interacción dinámica de PEG de peso molecular alto con células Caco-2. Los resultados de este experimento establecen que el tratam iento con PEG de peso molecular alto tiene un efecto en células traladas, afectando notablemente la topolog ía superficial de dichas células. Además, el efecto de la exposición de PEG de peso molecular alto en dichas células es diferente del efecto que P EG 3.35 tiene en dichas células. Au nque no se quiere lim itar a la teoría , los resultados descritos en la presente proveen una correlación física para el efecto marcadamente diferente en célul as exhibidas por PEG de peso molecular alto relativos a PEGs de peso molecular menor, tal como PEG 3.35.

EJ EMPLO 6 PEG de peso molecular alto afecta las interacciones de célula- célula Para observar directamente el efecto de las soluciones de PEG en ia orientación espacial de P. aeruginosa, se realizaron experimentos con cepas vivas de P. aeruginosa PA27853/EGFP abrigando el gen egfp que codifica la proteína fluorescente verde. Se realizaron experimentos en presencia y ausencia de células Caco-2. A fin de formar imágenes, el efecto de PEGs tanto en bacteria como en su interacción con el epitelio cultivado, se usó microscopia de contraste de interferencia diferencial (DI C) y formación de imágenes GFP. El gen EGFP que codifica proteína fluorescente verde se am plificó usando el plásmido pBI-EGFP (Clontech) como un molde. Se introdujeron sitios de restricción de Xbal y Psfl usando cebadores TCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGGATG (S EC I D NO: 5) y GCAGACTAGGTCGACAAGCTTGATATC (S EC I D NO: 6). El producto de PCR se clonó directamente en el vector pCR 2.1 usando u n equipo de clonación TA (I nvitrogen) , seguido por transformación de ia construcción pCR2.1 /EG FP en E. coli DH 5a. El gen EGFP se extirpó de esta consírucción por digeslión con Xbal y Pstl y el fragmento que contiene el gen extirpado se clonó en el vector transbordador pUCP24 de E. coli-P. aeruginosa, que había sido digerido con las mismas enzimas de restricción. La construcción resultanle (es decir, pUCP24/EGFP), que contiene ei gen EGFP en el vector transbordador, se electroporó a 25 uF y 2500 V en células electrocompetentes de PA27853. Las células que contienen PA27853/EGFP se seleccionaron en placas de LB-agar que contienen 100 µg/ml de gentamicina (Gm). Las células que abrigan PA27853/EGFP fueron crecidas durante la noche en LB conteniendo 100 µg/lm de Gm , y 1 % del cultivo se usó para inocular LB fresco conteniendo 50 µg/ml de Gm . Después de 3 horas de crecimiento, se agregó isopropil-ß-D-tiogalacíopiranosida (I PTG) a una concentración final de 0.5 mM, y se incubaron cultivos durante 2 horas adicionales. Se mezcló 100 µ l del cultivo bacteriano con 1 ml de medios HDMEM (G ibco BRL) regulados con HEPES y conteniendo 10% de suero bovi no fetal (HDM EM H F) y 10% de PEG de peso molecular alto. Un ml de suspensión bacteriana se vertió en un plato dTC3 de 0.15 mm de grosor (Bioptech). Las células Caco-2 de cuatro d ías (p 1 0-p30) crecidas en platos dTC3 de 0.15 mm de grosor (Bioptech) en H DM EM H F se lavaron una vez en H DMEM H F con o sin PEG de peso molecular alto. Un ml de suspensión bacteriana preparada como antes se agregó a un plato dTC3 conteniendo células Caco-2. E l patrón de dispersión de células bacterianas en platos dTC3 se observó directamente con un microscopio invertido de fluorescencia Axiovert 100 TV usando filtros de fluorescencia de DIC y GFP, a una magnificación objetivo de 63 X. La temperatura se ajustó con un sistema de control de temperatura del termostato Bioptechs. Se usaron lámparas de tungsteno (100 V) para excitación DI C y GFP. El software de formación de imágenes en 3D (Slidebook) de innovaciones de formación de imágenes inteligentes se usó para formar imágenes del patrón de dispersión de célula bacteriana en el plano Z usando el filtro GFP. Las células de P. aeruginosa planctónicas uniformemente dispersas en el medio sin células Caco-2 se observaron en una imagen DIC (figura da^ y reconstrucción de plano Z (figura 6a2) . En presencia de células Caco-2, las células bacterianas desarrollaron una apariencia aglutinada (figura db^ y se observaron adherentes a las células Caco-2 (figura 6b2). Una solución de 10% de PEG 3350 disminuyó la motilidad bacteriana e indujo la formación inmediata de microcolonias bacterianas en forma de hongo (figura dCi ) adherentes al fondo del pozo (figura 6c2). En presencia de células Caco-2, las m icrocolonias bacterianas estuvieron aproximadamente 8 mieras sobre el plano de las células epiteliales (fig ura 6d1 ? 2). U na solución de 10% de PEG 15-20 dism inuyó en gran manera la molilidad de célu las P. aeruginosa. No obstante, durante la primera 0.5-1 hora de incubación en medio que contiene PEG 1 5-20 , las células bacterianas formaron microcoloni as en forma de pata de araña que estuvieron cerca del fondo del pozo (figura 6e1 ? 2). Dentro de varias horas, las microcolonias en forma de pata de araña ocuparon todo el espacio/volumen del medio. En presencia de células Caco-2, las células P. aeruginosa perdieron la configuración del tipo de pata de araña y se observaron elevadas muy arriba del plano del epitelio (30-40 m ieras) (figura 6f1 | 2). Para determinar la orientación espacial de las interacciones de célula bacteriana-epiíelial en tres dimensiones, se realizaron reconstrucciones de piano Z. Las imágenes demostraron que las dos soluciones de PEG tuvieron efectos diferentes en el comportamiento de aglutinación de P. aeruginosa y afectó de manera diferencial la orientación espacial de la bacteria dependiendo de la presencia o ausencia de células Caco-2. En experimentos con medio sólo, se observó que P. aeruginosa exhibe un patrón uniformemente disperso (figura 6a). Sin embargo, las células bacterianas examinadas en presencia de células Caco-2, desarrollaron una apariencia aglutinada y se observaron adyacentes al plano de ias células epiteliales en el fondo de los pozos (figura 6b) . Las células bacterianas examinadas en presencia de PEG 3.35 solas formaron agregados aglutinados grandes y permanecieron en el fondo del pozo de cultivo (figura 6c) , m ientras que las células bacterianas examinadas con células Caco-2 en medio que contiene PEG 3.35, permanecieron suspendidas sobre el plano de las células epiteliales (aproximadamente 8 mieras) , manteniendo su apariencia aglutinada (figura 6d). Las células baclerianas examin adas en presencia de PEG 15-20 solas exhibieron u n palrón uniforme de microaglutinación (figura 6e) , mientras las células bacteria nas exam inadas en presencia de Caco-2 en medio q ue contiene PEG 1 5-20 se s uspendieron arriba del plano del epitelio (~ 32 mieras) en formación aglutinada (figura df). En experimentos cronometrados, la motilidad bacteriana se observó disminuir por PEG 3.35 y, a un grado todavía m ayor, con PEG 15-20. En una manera análoga al experimento descrito en el ejemplo 5, este ejemplo provee una correlación física para el efecto observado de PEG de peso molecular alto en interacción de céiula-cétula, consistente con sus actividades profilácticas y terapéuticas benéficas como se describe en la presente. Se espera que el uso de PEG de peso molecular alto reduzca o elimine las interacciones de célula-célula dañinas en el intestino (por ejemplo, entre células epiteliales intestinales y patógenas intestinales tales como las Pseudomonads), reduciendo el riesgo . de enfermedades y/o condiciones anormales asociadas con sepsis derivada de gota.

EJEM PLO 7 Métodos de preveni r enfermedades/condiciones anormales La invención tam bién provee métodos de prevenir una variedad de enfermedades y/o condiciones anormales en humanos y otros animales, en particular otros mam íferos. En estos métodos, u na cantidad efectiva de PEG de peso molecular alto se administra a un paciente humano o u n sujeto animal en necesidad del mismo. El PEG se puede administrar usando un horario de administración que se determina usando procedimieníos de opíimización de rulina conocidos en la lécnica . Preferiblemente, el PEG tiene un peso molecular promedio de 5, 000-20,000 daltons, y más preferible entre 10,000-20,000 daltons. Se contempla que se administra por lo menos 5% de PEG de peso molecular alto. El PEG de peso molecular alto se puede administrar en cualquier forma adecuada, por ejemplo, como una solución, como un gel o crema, como una solución adecuada para nebulizar (por ejemplo, para uso de inhalación) , en una composición farmacéutica que comprende el PEG de peso molecular alto, y en una solución isotónica, estable adecuada para inyección en un animal. La administración se puede lograr usando cualquier ruta convencional; se contempla en particular que el PEG de peso molecular alto se administra oral o tópicamente (por ejemplo, transdérm icamente). En algunas modalidades, la composición de PEG de peso molecular alto siendo administrado compresión además un compuesto seleccionado a partir del grupo que consiste de L-glutamina revestida de dextrana, inulina revestida de dextrana, ácido butírico revestido de dexírana , un fructo-oligosacárido, N-acetil-D-galactosamina, mañosa revestida de dextrana , galactosa y lactulosa. En otra modalidad, la composición de PEG de peso molecular alto administrada comprende además L-glutamina revestida de dextrana, inulina revestida de dextrana, ácido butírico revestido de dextrana , uno o más fructo-oligosacáridos, N-acettl-D-galactosamina, mañosa revestida de dextrana, galactosa y lactuiosa . La invención prove.e métodos de preven ir una variedad de enfermedades y cond iciones anorm ales, tales como olitis del nadador, otitis media aguda o crónica , neumonía asociada con ventilador, sepsis derivada de gota, enterocolitis necrotizante, diarrea inducida por antibiótico, colitis seudomembranosa, una enfermedad del intestino inflamatorio, enfermedad de intestino irritable, enterocolitis neutropénica, pancreatitis, síndrome de fatiga crónica, síndrome de disbiosis, colitis microscópica, una infección de las vías urinarias crónica, una enfermedad por transmisión sexual, e infección (por ejemplo, exposición a un ambiente contaminado por un agente de bioterror íales como Bacillus anthracis, viruela, £. coli enleropaíogénico (EPEC), E. coli eníerohemorrágica (EHEC), E. coli enteroagregativa (EAEC), Clostridium difficile, rotavirus, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Klebsielia oxytocia, Enterobacteria cloacae, Candida albicans, Candida globrata, y similares). En una modalidad preferida del método de prevenir infección crónica de las vías urinarias, o tratar dicha una infección, el PEG de peso molecular alto se surte en la forma. de un irrigante de vejiga. Para la prevención de una enfermedad por transm isión sexual, una composición de la invención se usa de preferencia para lubricar un condón. En una modalidad preferida de un método de prevenir infección por un agente de bioterror, la composición de conformidad con la invención se provee en la forma de un gel o crema, adecuada para aplicación tópica. Se espera que dicha aplicación tópica sea útil en prevenir una variedad de enfermedades/condiciones anormales con cualquiera de los agentes de bioterror o asociados con una variedad de agentes qu ím icos o físico-qu ím icos que plantean u na amenaza al hombre o animal en términos de supervivencia, salud o comodidad. Dichos agentes químicos o físico-químicos incluyen aquellos agentes capaces de quemar o de lo contrario dañar la piel y que se hacen inactivos o son pobremente solubles en las com posiciones de la invención . En una modalidad de los métodos preventivos, se anestesiaron ratones Balb/c macho y se inyectó una solución acuosa de 5% de PEG 15-20 en la base del intesíino ciego por punción de aguja direcla. A fin de proveer una fuente constante de PEG durante la duración de 48 horas del experimento, la aguja se dirige en el intestino delgado (íleo) y 1 ml de PEG 1 5-20 se inyecta retrógrado en el inteslino próximo. El sitio de punción se ata con una sutura de seda y el intestino ciego se empapa con alcohol. Los ratones regresan a sus jaulas y son dados H2O sólo. Cuarenta y ocho horas después, los ratones se someten a un procedimiento de hepatectomía convencional que involucra una escisión de 30% sin sangre del hígado sobre el lóbulo izquierdo blando. Los ratones de control pasarán por manipulación del híg ado sin hepatecíom ía. El tratamiento preventivo que involucra la administración de PEG de peso molecular alto se espera reducir o eliminar la incidencia de sepsis derivada de gota asociada con cirug ía en ratones. Estos métodos son aplicables más allá del cuidado preventivo de dichas mascotas como ratones , conejillos de indias, perros y gatos a d ichos animales de manera agrícola significativos como ganado , caballos, cabras, ovejas, cerdos, pollos, pavos, patos , gansos y cualquier otro animal domesticado . Además, estos métodos preventivos se espera que sean aplicables a humanos, mejorando la salud, y expectativa de vida, de muchos pacientes o candidatos en riesgo de desarrollar una enfermedad y/o una condición anormal, tal como otitis dei nadador, otitis media aguda o crónica, neumonía asociada con ventilador, sepsis derivada de gota, enterocolitis necrotizante, diarrea inducida por antibiótico, colitis seudomembranosa, una enfermedad del intestino inflamatorio, enfermedad de intestino irritable, enterocolitis -neutropénica, pancreatitis, síndrome de fatiga crónica, síndrome de disbiosis, colitis microscópica, una infección de las vías urinarias crónica, una enfermedad por transmisión sexual, y agentes infecciosos (por ejemplo, composiciones de bioterror) que incluyen , pero no se limitan a, ántrax y viruela. Como se señaló antes, los métodos preventivos comprenden la adm inistración de una composición que comprende por lo menos 5% de PEG de peso molecular alto (5-20 kD), por cualquier ruta de administración conocida o convencional, al hombre u otro animal. Preferiblemente, los métodos preventivos son practicados en aquellos individuos en riesgo de desarrollar una o más de las enfermedades y/o condiciones anormales antes mencionadas, pero se contempla que las composiciones y métodos de la invención sean útiles en uh pape! profiláctico o lerapéutico para tratar o prevenir ampliamente dichas enfermedades o condiciones anormales en poblaciones enteras o sub-poblaciones de hombres u otros animales.

EJEMPLO 8 Métodos de monitorear la admi nistración de PEG de peso molecular alto La invención también contempla métodos para monitorear la administración de PEG de peso molecular alto, por ejemplo, en un método de tratamiento. En dichos métodos de monitoreo, se administra PEG de peso molecular alto marcado, solo o en combinación con PEG de peso molecular alto no marcado, y la marca se detecta durante el tratamiento en un horario continuo o intermitente, incluyendo determinaciones de punto final simples. El término PEG de peso molecular alto "marcado" significa que una marca, o compuesto detectable, se agregue directa o indirectamente a PEG de peso molecu lar alto, o el PEG de peso molecular alto se agreg ue a un compuesto reportero q ue sea capaz de asociar una marca con PEG de peso molecular alto (desde luego, las marcas no agregadas a PEG de peso molecular alto o diseñadas para estar asociadas con las mismas también se contemplan por la invención , como se señala más adelante). El PEG de peso molecular alto es marcado usando cualquier m arca detectable conocida en la técnica, y el PEG se marca a un nivel suficiente para detectarlo. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que el nivel variará dependiendo de la marca y el método de detección . U n experto en la técnica pod rá optimizar el grado de mareaje usando procedimientos de optimización de rutina. La marca se une quím icamente al PEG de peso molecular alto por una unión no covalente o una covalente que sea estable en uso y, de preferencia, en almacenamiento. Se prefiere la unión de marca de manera covalente a PEG de peso molecular alto. La densidad de fijación de marca se ajusta para conservar sustancialmente la actividad biológica de PEG de peso molecular alto (conservación de actividad biológ ica suficiente para realizar un efecto benéfico profiláctico o terapéutico como se describe en la presente) . Esto se logra típicamente al ajustar la relación de marca de PEG de peso molecular alto, como se conocería en la técnica. Dado ei tamaño relativo de la molécula promedio de PEG de peso molecular alto, se espera que una amplia variedad de marcas sea adecuada para fijación a PEG de peso molecular alto con conservación sustancial de la actividad biológica del mismo. Las marcas contempladas por la invención son aquellas marcas conocidas en la técnica, que incluyen una radiomarca, un cromoforo, un fluoroforo, y un reportero (incluyendo una enzima que cataliza la producción de un compuesto detectable y una pareja de unión tal como un anticuerpo que localiza un compuesto detecíable en ia vecindad de! reportero) . Los reporteros de enzima ejemplares i ncluyen un componente enzimático de un sistema de luminiscencia y u n catalizador de una reacción colorimétrica. Más eh particular, las moléculas reporteras ejemplares incluyen biotina, avid ita, streptavidina, y enzim as (por ejemplo, peroxid asa de rábano , luciferasa, fosfatasas alcalinas , incluyendo fosfatasa alca lina secretada (SEAP) , ß-galactosidasa; ß-glucoronidasa ; acetiitransferasa de cloramfenicol). El uso de dichos reporteros es bien conocido a aquellos expertos en la técnica y se describe en, por ejemplo, la Patente de E.U.A. No. 3,817,837, Patente de E.U.A. No. 3,850,752, Patente de E.U.A. No. 3,996,345, y Patente de E.U.A. No. 4,277,437. Los sustratos de enzima ejemplares, que se pueden convertir en compuestos deteclables por enzimas reporíeras, incluyen 5-bromo-4-cloro-indo!il-ß-D-galaclopiranosida o Xgal, y Bluo-gal. Los sustratos de enzima, como compuestos capaces de conversión a compuestos detectables, también pueden ser marcas en ciertas modalidades, como se entendería en ia técnica. Las patentes de E.U.A. que enseñan marcas, y sus usos, incluyen Patente de E.U.A. No. 3,817,837; -Patente de E.U.A. No. 3,850,752; Patente de E.U.A. No. 3,939,350 y Patente de E.U.A. No. 3,996,345. Las radiomarcas ejemplares son 3H, 14C, 32P, 33P, 35S y 125l; los fluoroforos ejemplares son fluoresceína (FITC), rodamina, Cy3, Cy5, aequorina, y proteína fluorescente verde. Una marca preferida es un fluoroforo tal como fluoresceína. Los mélodos de moniíoreo de la invención también pueden involucrar más de una marca. En una modalidad, una marca sirve para identificar Ja ubicación de! PEG de peso molecular alto después de o durante el tratamiento, mientras una segunda marca es específica para uno o más microbios en cuanto a que la marca se asocia de manera delecíable con por lo menos un microbio. Por ejemplo, un méíodo de moniloreo puede incluir fluoresceína agregada a PEG de peso molecular alio en una manera que conserva sustancialmente la actividad biológica de! PEG de peso molecular alto, y Xgal o bluo-tal libre (es decir, no agregado) para ia detección de actividad de ß-galactosidasa procariote específico. La fluoresceína localiza el PEG de peso molecular alto, mientras que un producto a color (azul) indica la presencia de un microbio procariótico que metaboliza con lactosa, tal como una Pseudomonad . La invención también incluye métodos de monitoreo en donde una marca individual provee esta información (es decir, la ubicación de PEG de peso molecular alto y una indicación de la presencia de un microbio). Cualquier técnica de detección conocida en la técnica se puede usar en los métodos de monitoreo de la invención. Varios factores influirán en la técnica de detección elegida, incluyendo el tipo de marca, el biomaterial sometido a monitoreo (por ejemplo, células epidérmicas de la piel, conducto auditivo, o inteslino; muestras de heces, moco o tejido) , el nivel de discriminación deseado, si se espera cuantificación , y similares. Las técnicas de detección adecuadas incluyen inspección visual simple con el ojo no ayudado, inspección visual con un instrumento tal como un endoscopio, equipado opcionalmente con una fuente de luz adecuada y/o cámara para recordar, el uso convencional de contadores Geiger, pelícu la de rayos X, contadores de centello, y similares, y cualquier otra técnica de detección conocida en la técnica. U n experto en la técnica reconocerá que los métodos de monitoreo de la invención son útiles en optimizar los métodos de tratamiento. Por ejemplo, un método de monitoreo se puede usar para optimizar la cantidad y/o concentración de PEG de peso molecular alto (por ejemplo, para lograr una viscosidad deseada para una solución o mezcla de PEG de peso molecular alto), que se surte a una célula epitelial, tal como las células epiteliales del conducto auditivo para prevenir o tratar otitis del nadador. Por medio de ejemplos adicionales, la optimización del intesíino o tratamienlos intestinales se puede facilitar por inspección endoscópica de un tracto intestinal expuesto a PEG de peso molecular alto marcado o al monitorear m uestras de heces. Los métodos de monitoreo de la invención incluyen una prueba de heces para un microbio capaz de adherir a una célula epitelial intestinal que comprende hacer contacto con un microbio y una célula epitelial intestinal y detectar la adherencia del microbio a la célula epitelial usando cualquier técnica conocida en la técnica. En una modalidad preferida, la célula epitelial intestinal se inmoviliza en una superficie adecuada , tal como el fondo y/o lados de un pozo de microtítulo. En otra modalidad preferida, una marca directa , o una marca indirecta tal como un reportero capaz de generar un producto deteclable, se agrega antes de , o durante, el paso de detección. Los métodos de monitoreo pueden com prender además adición de marca libre. Por ejem plo, se agrega Bluo-gal libre a una m uestra sospechosa de contener un m icrobio procariótico que metabpliza lactosa; si está presente, la enzima microbiana ß-galactos idasa corlará Bluo-gal para dar un produ cío azul deíectable.

En una modalidad, células epiteliales intestinales comercialmente disponibles (por ejemplo , células Caco-2, ATCC HTB 37, y/o células I EC-6, ATCC CRL 1952) se fijan a los pozos de un plato de microtítulo usando una técnica convencional. Se recolecta una muestra de heces y se mezcla con un fluido tal como solución salina regulada con fosfato. La fase l íquida de la mezcla, que contiene microbios suspendidos, se obtiene (por ejemplo, por filtración adecuada (es decir, separación de sólidos burdos de bacteria en suspensión de fluido) , decanto, o similares) y diluida 1 : 100 en PBS. Se agrega Bluo-gal a la suspensión microbiana viva. La suspensión microbiana se agrega a pozos de microtítulo durante 1 hora a 24°C, seguido por lavar los pozos con un fluido adecuado (por ejemplo, PBS) para quitar microbios no unidos. Los microbios no unidos y/o unidos a las células epiteliales inmovilizadas se delectan, por ejemplo, al contar usando microscopia de luz polarizada. En modalidades alternativas, se usa inmunoprueba para detectar adherencia, con reactivos inmunológicos adecuados siendo un anticuerpo monoclonal o policlonal específico de microbio(s), opcionalmente agregado a una marca tal como una radiomarca , un fl uoroforo o un cromoforo. Un experto en la técnica reconocerá que la célula epitelial intestinal ni el microbio se requiere para inmovilizarse, aunque dicha inmovilización puede facilitar la detección precisa de microbios q ue se adhieren a células epiteliales. Por ejemplo, en una modalidad, un m icrobio de heces inm ovilizado hace contacto con una célula epitelial intestinal que se inmoviliza . Además, un experlo reconocería que cualquier fluido conocido en la técnica se puede usar para obtener la suspensión microbiana, con fluidos preferidos siendo cualquiera de los reguladores isotón?cos conocidos. También, como se señaló antes, cualquier marca conocida se puede usar para deteclar adherencia de célula. En un aspecto relacionado, la invención provee un equipo para probar la adherencia de célula microbiana que comprende una célula epitelial y un protocolo para probar la adherencia de célula m icrobiana. El protocolo describe un método conocido para detectar un microbio. U n eq uipo preferido incluye una cél ula epitelial intesiinal. Oíros equipos de la invención comprenden además una marca, íal como un fl.uoroforo o un reporíero. Otro método de monitoreo contemplado por la invención es una prueba para hidrofobicidad microbiana. En este método, la hidrofobicidad relativa o absoluta de una. célula microbiana se determina usando cualquier técnica convencional . Una técnica ejemplar involucra exposición de cualq uier microbio a cromatografía de interacción hidrofóbica , como se conocería en la técnica . Ukuku y otros, J . Food Prol. 65: 1093-1 099 (2002) , incorporado a la presente por referencia en su totalidad. Otra técnica ejemplar es división de fluido no poiap polar (por ejemplo, 1 -octanol : agua o xileno: ag ua) de cualq uier m icrobio. Ver Majtan y otros, Folia Microbiol (Praha) 47:445-449 (2002) , i ncorporado a la presente por referencia en su totalidad.

En una modalidad de. una prueba de hidrofobicidad para monitorear administración de PEG, una muestra de heces se suspende en 50 mM de regulador de fosfato de sodio (pH 7.4) que contiene 0.15 M de NaCl. Los microbios en la suspensión se recolectan mediante centrifugación y se vuelven a suspender en el mismo regulador, y se repite el ciclo de centrifugación-resuspensión. Si es posible, los microbios se vuelven a suspender en el mismo regulador a una absorción de 0.4 a 660 nm, lo que permitirá monitorear espectrofotométricamente, sin usar PEG marcado. La suspensión microbiana se trata con xileno (2.5: 1 , v/v, Merck), la suspensión se mezcla vigorosamente durante do.s minutos; y la suspensión se deja reposar durante 20 minutos a temperatura ambiente. La presencia de microbios en la fase acuosa después se determ ina, por ejemplo mediante determinación espectrofolométrica de absorción a 660 nm. Se usa un banco que contiene el regulador de fosfato de sodio para eliminar antecedentes. Para obtener células microbianas de muestras de heces para usarse en estos métodos, se prefiere que el PEG de peso molecular alto sea relativamenle insoluble en el fluido usado para obtener la suspensión microbiana y cualquier fluido usado para diluir la suspensión microbiana. La invención provee además un equipo para realizar el método de monitoreo que comprende una prueba para hidrofobicidad microbiana, que comprende u na célula epitelial inteslinal y un protocolo que describe la determinación de hidrofobicidad microbiana. Un equipo preferido incluye una célula epitelial intestinal. Los equipos relacionados comprenden además una marca, tal como un fluoroforo o un reportero. Todavía más, la invención provee un método de monitoreo que comprende obtener una muestra de flora intestinal y detectar actividad de PA-I lectina/adhesina. Se puede usar cualquier técnica para detectar actividad de PA-l lectina/adhesina conocida en la técnica. Por ejemplo, se puede detectar PA-l lectina/adhesina al usar un anticuerpo (monoclonal, policlonal , fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fab, cadena individual, quimera, humanizado o cualquier otra forma de anticuerpo conocida en la técnica) que reconozca específicamente PA-l lecíina/adhesina . La inmunoprueba toma la forma de cualquier formato de inmunoprueba conocida en la técnica, por ejemplo, ELI SA, Western, inm unoprecipitación, y similares. Alternativamente, uno puede detectar una capacidad de un ión a carbohidrato de PA-l lectina/adhesina o se puede medir la barrera epitelial intestinal que alcanza actividad de PA-l lectina/adhesina, por ejemplo, al monitorear la resistencia eléctrica transepiíelial o TEE R de una capa epitelial antes de, y/o durante, la exposición a una muestra. En equi pos relacionados, la invención provee una pareja de unión de PA-l lectina/adhesina y un protocolo para detectar actividad de PA-! lectina/adhesina (por ejemplo, actividad de unión) . Otros equipos de conformidad con la invención incluyen cualquier carbohidrato conocido para unir PA-l lectina/adhesina y un protocolo para detectar actividad de PA-l iectina/adhesina (por ejemplo, acíividad de unión).

EJEMPLO 9 Tratamiento de sepsis derivada de gota usando un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto Se anestesiaron ratones Balb/c macho, sometidos a 30% de hepatectomías quirúrgicas, y retadas con 200 µl de 107 cfu/ml de Pseudomonas aeruginosa PA27853 inyectada en la base del intestino ciego por punción de aguja directa diluida en solución salina, PEG 3.350 (10% p/v) de PEG de monometoxi 15-20 (mPEG) (1 0% p/v), todos como se describe en el ejemplo 1 . Las fuentes de control de solución salina, PEG de peso molecular bajo, y mPEG de peso molecular alto se proveen al dirigir las agujas relevantes en el intestino delgado (íleo) y 1 ml de solución salina, PEG 3.35 o m PEG de peso molecular alto se inyecta retrógrado en el intestino próximo . El sitio de punción se amarra con una sutura de seda y el intestino ciego se empapa con alcohol . Los ratones regresan a sus jaulas y reciben sólo H2O durante las próximas 48 horas, todo de conformidad con la metodología descrita antes en el ejemplo 1 . Se espera que los resultados se parezcan a los resultados obtenidos usando PEG de peso molecular alto ( 1 5-20 kD) , ver fig ura 1 y ejemplo 1 . La importa ncia estadísíica de cualquier efecto protector se determina usando la prueba exacta de Fishe r (P<0.001 ) .

Un experto en la técnica entendería que cualquier compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es susceptible a prueba para un efecto protector contra sepsis derivada de gota desarrollando después de intervención quirúrgica tal como un 30% de hepatectomía. Aquellos compuestos responsables por un efecto protector estadísticamente significativo, . como se revela por la prueba exacta de Fisher (P<0.0001 ), se identifican prontamente como compuestos de conform idad con la invención. Como un control, ANOVA unidireccional de conteos bacterianos en contenidos cecales, mucosa, h ígado y sangre, se puede realizar para asegurar que los conteos bacterianos . exhiben un aumento estadísticamente significativo (P<0.001 ) en contenidos cecales, mucosa, hígado y sangre de organismos sometidos a cirug ía y un reto de P. aeruginosa en ausencia de un com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto. Otro control que se puede incluir en las pruebas es someter algunos organismos a un procedimiento "sim ulado" , tal como una laparotom ía sim ulada en el caso de organismos de prueba sometidos a hepatectomías. Un com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto de conformidad con la invención se espera que produzca una disminución estadísticamente sig n ificativa (P<0.05) en conteos bacterianos del hígado y sangre, y de preferencia para prevenir cualq uier diseminación de n iveles deteclables del patógeno. Adem ás, cualquier organismo susceptible a sepsis derivada de gota se puede usar en dichas pruebas, y el caso de colocar un organis'mo en riesgo de desarrollar sepsis derivada de gota puede se cualq uier caso conocido por asociarse con un riesgo aumentado de sepsis derivada de gota, tales como hepatectom ías quirúrgicas que involucran una pérdida mayor o menos del hígado, otros procedimientos quirúrgicos, u otros casos por completo, con la condición de que dichos casos sean conocidos por estar asociados con un riesgo aumentado de sepsis derivada de gota . Se espera que la íerapia del tipo de PEG de peso molecular alto sea efectiva en métodos de prevenir muerte o enfermedad seria asociada con sepsis cuando se implementa después de tensión fisiológica (por ejemplo, durante cuidado posterior a la operación) . Además, se puede usar terapia del tipo de PEG de H I 9V antes de tensión fisiológica (por ejemplo, cuidado posterior a la operación), bajo circunstancias en donde la introducción de la tensión es predecible, para disminuir el riesgo de enfermedad seria o muerte. La terapia del tipo de PEG de peso molecular alto también es útil en mejorar un síntoma asociado con una enfermedad, trastorno o condición anormal asociada con sepsis derivada de gota.

EJ EM PLO 10 Compuesto dei tipo de PEG de peso molecular alto estabi liza el surtido de Lactobacillus GG, un terapéutico probiótico El medio acondicionado del microbio probiótico Lactobacillus GG (LGG) induce la expresi ón de proteínas de choque térm ico citoprotectoras hsp 25 y hsp 72 en célu las epiteliales intesiinales.

Ver la solicitud de patente de E . U .A. provisional número (expediente del abogado no. 27373/40049), presentada el 20 de abril de 2004, titulada "Cytoprotective Factors Derived from Probiotic and Commensal Flora Microorganisms," y nombrando a Eugene Chang y Elaine Petrof como inventores, que se incorpora a la presente por referencia en su totalidad. El surtido dei medio acondicionado de terapéutico fue investigado para deíerminar sí la administración en presencia de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto produciría cualquier mejora. Para los experimentos descritos en este ejemplo, PEG de peso molecular alto ( 15-20 kD) se usó como el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto y células del YAMC (colon de ratón adulto joven) fueron los sujetos de ta prueba. Las células de YAMC son una línea celular epitelial intestinal colónica de ratón condicionalmente inmortalizada derivada del ratón "Immortimouse" que expresa un transgen de un antígeno T grande SV40 sensible a la temperatura (tsA58) bajo control de una porción sensible a interferón-gama del promotor MHC clase I I . Las células fueron un regalo generoso del Dr. R. Whitehead (Vanderbilt University, Nashviíle, TN). Un experto en ¡a técnica reconocería que otras células inteslinales diferenciadas no terminalmente disponibles pronto se pueden usar en lugar de las célul as de YAMC . Las células de YAMC se mantuvieron bajo condiciones permisivas (33°C) en medio RPMl 1640 con 5% (v/v) de suero bovino fetal , 5 U/m l de interferón-? murino (I FN-?; GibcoB RL, Grand Isiand, NY), 50µg/m l de streptomicina, 50U/m l de penicilina, suplementada con ITS + Premix (BD Biosciences, Bedford, MA). Bajo condiciones no permisivas (no transformadas) a 37°C en ausencia de interferón-gama (I FN-?), estas células pasan por diferenciación y desarrollan funciones de célula epitelial madura y propiedades que incluyen formación de unión apretada, polaridad, membranas apicales microvüares, y funciones de transporte. Las células se colocaron en placas a una densidad de 2.5 x 105 por plato de cultivo de tejido de 60 mm. Después de 24 horas de crecimiento a 33°C para permitir adición celular, el medio se reemplazó con medios libres de I FN y las células se movieron a 37°C (condiciones no permisivas) durante 24 horas para permitir desarrollo del fenotipo de colonocito diferenciado. Las células fueron tratadas con medios acondicionados de LGG (1 : 10 dilución, o 600ul) durante la noche, u otras condiciones como se describe en la presente, y después se Usaron y sometieron a análisis de Western blot. Después del traíamienío, las células se lavaron dos veces y después se descariaron en H BS helado ( 150m M de NaCI, 5mM de KCl , 1 0 m M de H EPES pH 7.4) . Las células se granularon ( 14, 000 x g duraníe 20 segundos a íemperatura ambiente), después se volvieron a suspender en regulador de lisis helado [10mM de Tris pH 7.4, 5m M de Mg CI2, 50U/mi de ADNsa ARNsa , más cóctel inhibidor de proteasa completo (Roche Molecular Biochemicals, I ndianápolis, I N)}. Las concentraciones de proteína se determinaron usa ndo el procedimiento de ácido bicincon ín ico. Las muestras se calentaron a 75°C durante 5 minutos después de la adición de regulador 3X Laemmli Stop, después se almacenaron a -80°C y se usaron en una semana . Para análisis de Western blot, se resolvió veinte microgramos de proteína por carril en 12.5% de SPS-PAGE y se transfirieron en reguiador 1 X Towbin (composición de 25mM de Tris, 192m M de glicina, pH 8.8, 15% de vol/vol metanol) en membranas de PVDF (Polyscreen, Perkin-Elmer N EN, Boston, MA) como se conocería en la técnica . Las membranas se bloquearon en 5% (p/v) de leche sin grasa en TBS-Tween (solución salina regulada con Tris (1 50m M de NaCl, 5mM de KCl, 1 0mM de Tris, pH 7.4) con 0.05% (v/v) de Tween 20) durante una hora a temperatura ambiente. Se agregó anticuerpo primario a TBS-Tween y se incubó durante la noche a 4°C con un anticuerpo anli-hsp 25 específico (S PA801 , Stressgen, Victoria, BC, Canadá), anticuerpo anti-hsp 72 " (SPA 810, Stressgen), o anticuerpo anti-hsc 73 (SPA 81 5, Stressgen). Después se lavaron transferencias en TBS-Tween cinco veces durante 1 0 minutos cada una a temperatura ambiente anles de la incubación con anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa (Jackson Immunoresearch Labs, I nc. Fort Washington, PA) durante 1 hora a temperatura ambiente. Después se lavaron mem branas (cinco veces x 10 m inutos) en TBS-Tween seguido por un lavado final en TBS (no Twee n) . Se visualizaron transferencias con un reactivo EC L de sistem a de quemiluminiscencia realzada (Supersig nal , Pierce, Rockford , I L) y se desarrollaron de conform idad con las instrucciones del fabrica nte.

Los resultados iniciales demostraron que PEG de peso molecular alto solo no indujo expresión de proteína de choque térmico en células epiteliales intestinales (figura 7, carril 2) y tratamiento de PEG de peso molecular alto precediendo a tralamiento de LGG pareció bloquear la inducción de expresión hsp observada normalmente con tratamiento de LGG, si se administró antes del LGG (comparar carriles 3 y 4 de la figura 7). En contrasíe, la adminislración de LGG aníes de PEG de peso molecular alio resultó en expresión de hsp que no fue diferente de LGG solo (comparar carriles 3 y 5), indicando que PEG de peso molecular alto no inhibió inducción de expresión de hsp si se administró después del LGG ." Varias mezclas de LGG + PEG de peso molecular alto en relaciones diferentes se usaron después para traíar las células epiíeliales iníesíinales para deíerminar si la combinación resultaría en una respuesta a proíeína de choque íérmico más robusía y para delerminar la combinación ópíima que se requeriría. Los daíos indican que una relación de 1 : 1 de LGG: PEG de peso molecular alio (figura 7, carril 7) y una relación de 1 : 1 .5 (figura 7, carril 10) y las dos combinaciones que resulíaron en la expresión de proleína de choque íérmico más robusía. De hecho, ia úlíima combinación resu líó en una señal que fue lodavía más robusía que la lensión íérmica , el esfándar dorado usado normalmeníe para esiim u lar la producción de proleína de choque íérm ico (comparar carriles 9 y 1 0 de la figura 7) .

U n experío en la técnica reconocerá q ue la ' relación de terapéutico (por ejem plo, medio acondicionado de LGG) a com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto se puede variar y dichas variaciones se contemplan por la invención. Desde luego, el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto particular también se puede variar, con un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto siendo probado para eficacia antes de usarse. Aunque PEG de peso molecular alto y mPEG de peso molecular alto son compuestos preferidos en et presente, se contempla una amplia variedad de compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto para usarse en la invención. Además, habiendo revelado que el compuesto(s) citoprotector de LGG está presente eh medio acondicionado, un experío podría usar cualquiera de un número de iécnicas convencionales para lograr preparaciones más puras del compueslo(s) activo, y se contempla dentro del alcance de la invención que un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto será útil en la administración de dichas preparaciones. Por ejemplo, la invención contempla un terapéutico de proteína o péptido derivado de LGG que esa estable en el calor, estable de ácido y menos de 10 kD en tamaño para adminislración en presencia de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto . Más en general , un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto se espera ser útil en la admin istración de una am plia variedad de terapéuticos probióticos, i ncluyendo m icroorganismos enteros así como medios acondicionados, preparaciones parcialmente purificad as, preparaciones purificadas para homogeneidad , y productos qu ím icamente sintetizados. Los com puestos del tipo de PEG de peso molecular alto de conformidad con la invención también son útiles en surtir terapéuticos no probióticos teniendo una amplia escala de estructuras (por ejemplo, péptidos, proteínas, efectores de molécula pequeña y similares) y efectos terapéuticos.

EJ EMPLO 1 1 Com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto estabiliza el surtido de VSL#3. un terapéutico probiótico El medio acondicionado de la mezcla de microbio probiótica VSL#3 (VS L Pharmaceuticals, Inc. , Gaithersburg , MD) ha mostrado afectar células epiteliales intesíinales al inducir la expresión de proteínas de choque térmico hsp 25 y hsp 72, y al inhibir la degradación de l ?Ba, incluyendo l?Ba fosforílado, quizá a través de sus efectos selectivos en ciertas actividades de proteasoma (inhibición de actividad del tipo de quimotripsina, inhibición débil de actividad del tipo de caspasa, ninguna inhibición detectable de actividad del tipo de tripsina) dentro de células tales como células epiteliales. Por consiguiente, VSL#3 afectando ta expresión de genes sujeto a modulación de expresión de gen N F KB. Ver solicitud de patente de E. U .A. provisional número 60/542,725, presentada el 6 de febrero de 2004, y Solicitud de Patente de E. U .A. provisional No. _ (expediente del abogado no. 27373/40027), presentada el 20 de abril de 2004, tilulada "Cytoprotective and Anti-i nlammatory Factors Derived From Probiotik And Commensal Flora Microorganisms," y nombrando a Eugene Chang y Elaine Petrof como inventores, cada una de las cuales se incorpora a la presente por referencia en su totalidad . El surtido del medio acondicionado terapéutico se investigó para determinar si ta administración en presencia de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto produciría cualquier mejora. Los experimentos descritos en la presente se condujeron usando PEG de tipo molecular alto como el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto, medio acondicionado de VSL#3 y células de YAMC. Ei crecimienlo de células de YAMC, adición de I FNy, incubación a temperatura no permisiva, exposición a medio acondicionado de VSL#3 con, o sin, compuesto dei tipo de PEG de peso molecular alto , lisis celular y análisis de Western blot se realizaron como se describe en el ejemplo 1 1 , con la sustitución de cantidades equivalentes de medio acondicionado de VSL#3 para el medio acondicionado de LGG descrito en la presente. El medio acondicionado de VSL#3 pierde su bioactividad probiótica en una manera dependienle de tiempo q ue parece ser independiente de la temperatura a la que se almacena. Varios lotes de medios acondicionados de VSL#3 que habían comenzado a perder su bioactividad y habilidad para inducir proteínas de choq ue térmico se combinaron por separado con PEG de peso molecular alto en un intenío por restaurar sus potencias . Normalmente, dOOul de medios acondicionados es la cantidad óptima usada para * i nducir una í respuesta a choque térmico en células epiteliales de gota. Estos lotes atenuados de medios acondicionados de VSL#3 requirieron el doble de la cantidad necesitada normalmente para ver un efecto y sólo podría inducir débilmente una respuesta (ver carriles 2, 6 y 10 de la figura 8). Mantener las mismas relaciones determinadas previamente en los experimentos de LGG (ver ejemplo 10) como las relaciones óptimas para mezclas de PEG de peso molecular alto prebióticas, 600ul de medios de VSL#3 acondicionados alenuados se mezcló con 600ul de PEG de peso molecular alto y aplicado a la superficie de las células epiteliales. Aunque dOOul de VSL#3 solo fue incapaz de inducir cualquier respuesta a choque térmico (carriles 1 , 5 y 9 de la figura 8), además del PEG de peso molecular altó no sólo fue capaz de realzar la expresión de proteína de choque térm ico pero también para restaurar por completo las potencias de tres lotes separados de medios acondicionados de VSL#3 atenuados (comparar carriles 3, 7 y 1 1 de la figura 8). En el caso de el lote H , la adición de actividad restaurada de PEG de peso molecular alto se había perdido por completo (es decir, fue indetecíable; comparar carriles 9 y 1 0 a carril 1 1 en la figura 8). Se realizaron experimentos para determ inar si el efecto realzador de PEG de peso m olecular alto se podría eliminar al hacer esíudios de lavado, es decir, se apl icaron las mezclas de VSL-PEG de peso molecular alto y se dejaron en las cé lulas durante 10 minutos , después se aspiraron y los medios fueron reemplazados con un cambio de medios fresco. Se cultivaron células 16 horas después y se evaluaron para expresión de proteína de choque térmico. Dicho tratamiento con medios acondicionados atenuados de VSL#3 solos resultaron en ninguna señal, pero con las mezclas de VSL-PEG de peso molecular alto, se observó una inducción de proteína de choque térmico robusta para los tres lotes atenuados (carriles 4, 8 y 12 de la figura 8). Eslo indica que la adición de PEG de peso molecular alto a las mezclas probióticas no sólo realzan sus potencias, sino también extendieron sus vidas medias. Sin querer limiiarse por la teoría, la extensión de vida media se podría deber a la naturaleza adherente del PEG de peso molecular alto, que puede permitir los factores bioactivos probióticos permanezcan en contacto con las células epiteliales aún después de tratamiento de lavado. También se ofrece como una observación teórica no limitanie, es posible que PEG de peso molecular alio lambién estabilice la estruclura de los factores probióticos. Se muestran células de control positivo en choque térmico (figura 8, carril 14) y células de control negativo no tratadas (figura 8, carril 13). Como se señaló en el ejemplo 10, la relación de terapéuíico (por ejemplo, medio acondicionado de VSL#3) a compueslo del lipo de PEG de peso molecular alto se puede variar y dichas variaciones se contemplan por la invención , como son variaciones en el com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto particular usado. Además, las preparaciones más puras del compuesto('s) aclivo en medio acondicionado de VSL#3 se contemplan y están dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, el medio acondicionado de VSL#3 se puede someter a esfuerzos de purificación adicionales para dar una preparación más pura de una proteína o péptido teniendo un peso molecular promedio de menos de 10 kD, siendo estable en ácido, y extraíble con éter, y dichos terapéuticos se contemplan en los métodos y usos de la invención. Los compuestos del tipo de PEG de peso molecular alto de conformidad con la invención son útiles en surtir terapéuticos probióticos y/o no probióticos teniendo una escala amplia de estructuras (por ejemplo, péptidos, proteínas, efectores de molécula pequeña, y similares) y exhibiendo una escala amplia de efectos terapéuticos.

EJEMPLO 12 Uso de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto para estabilizar un terapéutico du rante el surtido in vivo Una escala amplia de terapéuticos y fármacos químicos y biológicos son adecuados para surtir una célula epitelial usando el sistema de surtido que comprende un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto. El aspecto protector o estabilizador de los compuestos de conformidad con la invención se espera ampliar el alcance de los terapéuticos adecuados para administración , por ejemplo, a una m ucosa epitelial tal como el intestino. U n ejemplo prominente es la insulina de prote ína terapéutica , que no ha sido susceptible al surtido oral , requiriendo inyecciones diarias para los muchos sufridores de diabetes. Otro ejemplo de un terapéutico de proteína adecuado involucra terapia hormonal. Con respecto a este aspecto de la invención dirigido al uso del sistema de surtido en administración de terapéuticos proteínicos (por ejemplo, proteínas, polipéptidos o péptidos), la invención contempla la adición adicional de PA-l lectina/adhesina en una cantidad efectiva para abrir las uniones apretadas de las células epiteliales de, por ejemplo, el intestino, para facilitar la absorción del terapéutico proteínico. Los terapéuticos de molécula pequeña son ilustrativos de la escala de terapéuticos a ser surtidos por el sistema inventivo, tales como los q uimioterapéuticos de molécula pequeña para usarse en el tratamiento de condiciones cancerosas. Cualquiera de la escala de terapéuticos químicos, incluyendo radioquím icos, y biológicos, incluyendo proteínicos, conocidos en ia técnica se pueden probar prontamente para estabilidad usando el sistema de surtido descrito en la presente. Se espera que un gran número de dichos terapéuticos sean administrables usando el sistema de surtido, ya sea abriendo nuevas posibilidades de surtido o realzando rutas de administración conocidas para los terapéuticos. Dichos terapéuticos se administran de conformidad con la instrucción provista en ta presente. Ver, por ejemplo, los ejemplos 1 , 9, 1 0 y 1 1 . Otras modalidades il ustrativas de este aspecto de la invención es la adm inistración de terapéuticos para prevenir, tratar o mej orar un síntoma de una enfermedad por transmisión sexual usando el sistema de surtido del tipo de PEG de peso molecular alto de la invención. Por ejemplo, un tratamiento de SIDA involucra la administración de una cantidad efectiva de un terapéutico anti-VI H en una sol ución de compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto, tal como PEG de peso molecular alto, por surtido vaginal, oral o rectal (por ejemplo, como un supositorio). En una modalidad, el terapéutico es un microbio probiótico o un componente activo derivado del mismo. En otras modalidades, el terapéutico es cualquier terapéutico apti-VI H conocido. Cantidades efectivas de dichos terapéuticos, y de hecho cualquiera de los terapéuticos descritos en la presente o conocidos en la técnica, se determinan prontamente por aquellos expertos en la técnica y son dependientes de variables tales como la edad, peso, salud general, y similares, como se entendería en la técnica. Estos sistemas de surtido terapéutico se espera que provean beneficios de salud significativos en vista de reportes que el desarrollo de vacunas anti-VI H puede ser diez años de proveer una vacuna en un contexto clínico. Son posibles numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención en vista de las enseñanzas anteriores y están dentro del alcance de la invención. Todas las descripciones de todas las publicaciones citadas en la presente se incorporan a la presente por referencia.

Claims

REIVINDICACIONES 1 .- Un artículo de fabricación que comprende un material de empaq uetamiento con etiqueta y una cantidad efectivo de . un compuesto del tipo de polietilen glicol de peso molecular alto (del tipo de PEG de peso molecular alto) contenido dentro de dicho material de empaquetam iento, en donde el material de empaquetamiento comprende una marca o inserción de empaque indicado que dicho compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto se puede usar para tratar, mejorar o prevenir una condición seleccionada a partir - del grupo que consiste de de un epitelio inflamado y un epitelio que comprende una disfunción de barrera. 2.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es un gticot de "peso molecular alto de polialca no, pof iaíqueno o polialq uileno. 3.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 2, en donde el glicol de peso molecular alto de polialcano, poiialqueno o polialquileno se selecciona a partir del grupo que consiste de polipropilen glicol de peso m olecular alto, polietilen glicol de peso molecular alto (PEG de peso molecu lar alto) y mezclas de los mismos. 4.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 3 , en donde el com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto. 5.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 2, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto se selecciona a partir del grupo que consiste de PEG de peso molecular alto, polimetoxi PEG de peso molecular alto, monometoxi PEG de peso molecular alto, polipropiien glico! de peso molecular alto y mezclas de ios mismos. 6.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 5, que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cad.ena ramificada, un grupo ariloxi de C1 -C1 0 y mezclas de los mismos. 7.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 6, en donde el grupo funciona! es un grupo metoxi. 8.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 2, que comprende además un enlazador seleccionado a partir del grupo q ue consiste de un grupo alquilo de C1 -C 10 de cadena recta, un grupo alquilo de C 1 -C 10 de cadena ramificada, un grupo arilo y mezclas de los mismos. 9.- El artículo de fabricación de conformidad con ia reivindicación 8, en donde el enlazador es un grupo fenilo. 10.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 2, en donde el com puesto del tipo de PEG de peso molecular alto es una solución acuosa . 1 1 .- El artículo de fabricación de conformidad con ia reivindicación 10, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto está presente en solución a una concentración de por lo menos 5% (p/v). 12.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 1 1 , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto está presente en solución a una concentración entre 1 0% y 20% (p/v). 13.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 2, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto tiene un peso molecular promedio mayor de 12,000 daltons. 14,- Ef artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 13, en donde el peso molecular promedio es por lo menos 1 5,000 daltons. 15.- El artículo de fabricación de . conformidad con la reivindicación 14, en donde el peso molecular promedio es mayor de 1 5,000 daltons y menos de 20,000 daltons. 16.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el material de empaquetamiento de marca provee un a instrucción para administrar el compuesto para tratar, mejorar o prevenir una condición seleccionada a partir del grupo que consiste de una inflamación de un epitelio y una disfunción de barrera de un epitelio. 17.- El artículo de fabricación de conformidad con ia reivindicación 16, en donde la condición se selecciona a partir del grupo que consiste de sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemada a un epitelio, una herida por contacto qu ímico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inmune, neutropenia severa,. colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas de los mismos. 18.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 17, en donde la condición es un trastorno inmune seleccionado a partir del grupo que consiste de una leucemia, un linfoma, SIDA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, escteroderma , artritis reumatoide, trastorno inmune inducido por quimioterapia, un trastorno inm une inducido por radiación y mezclas de los mismos. 1 9.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 1 8, en donde, la condición es una enfermedad del intestino inflamatorio seleccionado a partir del grupo que consiste de colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn y mezclas de los mismos. 20.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 1 , que com prende además una cantidad terapéuticamente efectiva de un terapéutico. 21 .- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 20, en donde el terapéutico se selecciona a partir del grupo que consiste de una formulación de microorganismo probiótico, una composición derivada de por lo menos un microorganismo probiótico, un compuesto analgésico, un compuesto anti-inflamatorio, un modulador de un sistema inmune, un antibiótico, un agente anti-cáncer, un agente anti-úlcera, un factor de crecimiento, una citoquina, una hormona de proteína, una proteína de deformación y mezclas de los mismos. 22.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 21 , en donde el terapéutico se selecciona a partir dei grupo que consiste de un 5-amino saliciiato, un compuesto que comprende u na porción de 5-amino salicilato, un corticoesteroide, metotrexato, 6-mercaptopurina, ciclosporina, vancomicina, metronidazol, un cefalosporina, taxano, un compuesto que comprende una porción de taxano, camptotecina, un compuesto que comprende una porción de camp otecina, 5-fluorouracil, un compuesto que comprende una porción de 5-fluorouracil, un compuesto anti-andrógeno, un com puesto anti-estrógeno, un factor de crecim iento epidérmico, factor de deformación intestinal , somatostatina , un interferón y mezclas de los mismos. 23.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 21 , en donde el terapéutico es una bacteria de ácido láctico probiótico. 24.- El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 23, en donde el terapéutico es una formulación de microorganismo seleccionado a partir del grupo que consiste de Lactobacillus GG (LGG) , VSL#3 y mezclas de los mismos. 25.- Un método de administrar una composición terapéuíica a un epitelio de un sujeto en necesidad que comprende administrar una composición que comprende un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto y una cantidad efectiva de un terapéutico. 26.- El método de conformidad con ia reivindicación 25, en donde el terapéutico se selecciona a partir del grupo que consiste de una formulación de microorganismo probiótico, una composición derivada de por lo menos un microorganismo probiótico, un compuesto analgésico, un compuesto anti-infiamatorio, un modulador de un sistema inmune, un antibiótico, un agente anti-cáncer, un agente anti-úlcera, un factor de crecimiento, una citoquina, una hormona de proteína, una proteína de deformación y mezclas de los mismos. 27.- El método de conformidad con la reivindicación 25, en donde el terapéutico se selecciona a partir del grupo que consiste de un 5-amino salicilato, un compuesto que comprende una porción de 5-amino salicilato, un corticoesteroide, metotrexato, 6-mercaptopurina, ciclosporina, vancomicina, metronidazol, un cefalosporina , taxano, un compuesío que comprende una porción de íaxano, cam ptotecina, un compuesto q ue comprende una porción de campíotecina, 5-fluorou racil , un compuesío q ue comprende u na porción de 5-fluorou raci! , un com pueslo anti-andrógeno, un compuesto anti-eslrógeno, u n factor de crecimiento epidérmico, factor de deformación intesíinal, somaíosíatina, un interferón y mezclas de los mismos. 28.- El método de conformidad con la reivindicación 25, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto. 29.- El método de conformidad con. la reivindicación 25, en donde el epitelio se selecciona a partir del grupo que consiste de mucosa intestinal, mucosa pulmonar, mucosa nasal, mucosa uretral, mucosa del esófago, mucosa bucal y piel. 30.- El método de conformidad con la reivindicación 25, en donde el sujeto es un mamífero. 31.- El método de conformidad con la reivindicación 30, en donde el sujeto es un humano. 32.- El método de conformidad con la reivindicación 25, en donde la composición se administra por una ruta seleccionada a partir del grupo que consiste de administración oral, administración rectal, lavado intestinal, administración tópica, inyección intravenosa , inyección intraperitonea!, administración intrauretral, administración vaginal , colocación de cánula y respiración asistida. 33.- El método de conformidad con la reivindicación 25, en donde el terapéutico es un compuesto proteínico. 34.- El método de conformidad con ia reivindicación 33, que comprende la administración de una cantidad efectiva de PA-l lectina/adhesina. 35.- Un método de tratar una condición mediada de microbio de un epitelio de un sujeto que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi C1 -C 1 0 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C10 de cadena ramificado, un grupo ariloxi C 1 -C 10 y mezclas de los mismos. 36.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es una solución acuosa que comprende por lo menos 10% y menos de 20% de compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto (p/v) . 37.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el sujeto es un mam ífero. 38.- El método de conformidad con la reivindicación 37, en donde el sujeto es un h umano. 39.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el epitelio se selecciona a partir del grupo que consiste de mucosa intestinal, mucosa pulmonar, mucosa nasal, m ucosa uretral, mucosa vaginal, mucosa del esófago, mucosa bucal y similares. 40.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el com puesto se adm inistra por una ruta seleccionada a partir del grupo que consiste de adm inistración oral, administración rectal, administración vaginal , administración al intestino, administración tópica, inyección intravenosa, inyección intraperitoneal, colocación de cánula y respiración. 41 .- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde ta condición se selecciona a partir del grupo que consiste de sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemada a un epitelio, una herida por contacto químico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas de los mismos. 42.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la condición se selecciona a partir del grupo que consiste de una leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, escléroderma, artritis reumatoide, un trastorno de inmune inducido por quimioterapia, un trastorno inmune inducido de radiación y mezclas de los mismos. 43.- El método de conformidad con la reivindicación 35 , en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular promedio que comprende por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi de C 1 -C 1 0 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificada, un grupo ariloxi de C 1 -C 1 0 y mezclas de los mismos, y en donde ia condición se selecciona a partir del grupo que consiste de sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemada a un epitelio, una herida por contacto químico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal, un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa, inflamación de la piel y mezclas de los mismos. 44.- El método de conformidad con la reivindicación 43, en donde 43, en donde la condición se selecciona a partir del grupo que consiste de una leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis, una enfermedad del intestino inflamatorio, lupus eritematoso, escleroderma, artritis reumatoide, un trastorno inmune inducido por quimioterapia, un trastorno inmune inducido por radiación y mezclas de los mismos. 45.- Un método de mejorar un síntoma de una condición de conformidad con la reivindicación 43, que comprende adm inistrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto que comprende además por lo menos un g rupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi C 1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificado, un g rupo ariloxi C 1 -C 10 y mezclas de los mismos. 46.- Un método de^ prevenir una condición dé conformidad con la reivindicación 43, q ue com prende administrar una cantidad efectiva de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto a un sujeto en necesidad, en donde el compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto es PEG de peso molecular alto que comprende además por lo menos un grupo funcional covalentemente unido seleccionado a partir del grupo que consiste de un grupo alcoxi C1 -C 10 de cadena recta, un grupo alcoxi de C 1 -C 10 de cadena ramificado, un grupo ariioxi C1 -C 10 y mezclas de los mismos. 47.- Un uso de un compuesto del tipo de PEG de peso molecular alto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 25-46 en la preparación de un medicamento para tratar una condición seleccionada a partir del grupo que consiste de sepsis derivada de gota, enfermedad del intestino inflamatorio, síndrome del intestino irritable, una quemada a un epitelio, una herida por contacto químico a un epitelio, enterocolitis necrotizante neonatal , un trastorno inmune, neutropenia severa, colitis tóxica, enteropatía, rechazo de trasplante, inflamación de la bolsa, panza de cerdo, cólera, inflamación mucosa , inflamación de la piel y mezclas de los mismos. 48.- El uso de conformidad con la reivindicación 47, en donde la condición es un trastorno inm une seleccionado a partir del g rupo que . consiste de una leucemia, un linfoma, SI DA, soriasis, una enfermedad def intestino inflamatorio, lupus eritemaíoso, escteroderma, artritis reumatoide, un trastorno inmune inducido por quim ioterapia, u n trastorno inmune inducido por radiación y mezclas de los mismos.