MXPA06010587A - Tratamiento de neumonia severa adquirida en comunidad por administracion del inhibidor de la via del factor tisular (tfpi). - Google Patents

Abstract

Metodos para tratar de forma profilactica o terapeutica neumonia severa que comprenden la administracion del inhibidor de la la via del factor tisular (TFPI) o un analogo de TFPI a pacientes que sufren o estan en riesgo de desarrollar esta condicion. Los metodos comprenden el uso de infusion intravenosa continua de TFPI o un analogo de TFPI, de manera preferente a bajas dosis para evitar efectos secundarios adversos.

Description

TRATAMIENTO DE NEUMONÍA SEVERA ADQUIRIDA EN COMUNIDAD POR ADMINISTRACIÓN DEL INHIBIDOR DE LA VIA DEL FACTOR TISULAR (TFP ) Campo de la Invención La presente invención se refiere a un método para tratar de forma terapéutica neumonía severa adquirida en comunidad. De manera más específica, se refiere a la administración de una proteína inhibidora de la ruta del factor de tejido para atenuar las rutas fisiológicas exuberantes o amplificadas asociadas con neumonía severa. - Antecedentes de la Invención La neumonía resulta de una infección aguda de uno o más elementos funcionales del pulmón, incluyendo los espacios alveolares y tejido intersticial. En los Estados Unidos, cerca de 2 millones de personas desarrollan cada año neumonía, y de 40000 a 70000 de estas personas mueren. La neumonía se encuentra en el sexto lugar de entre todas las categorías de enfermedades como una causa de muerte y es la infección nosocomial (adquirida en hospital) , letal, más común. La neumonía adquirida en comunidad (CAP) tiene un impacto significativo en los costos de cuidado de la salud en los Estados Unidos, dando cuenta de $14 mil millones estimados por año en costos directos y $9 mil millones en salarios Ref.: 175868 perdidos. (Lynch J P, Martinez F J. Community-acquired pneumonía. Curr Opin Pulm Med. 1998; 4:162-172). En los países en desarrollo, las infecciones del tracto respiratorio inferior típicamente son ya sea la causa principal de muerte o se clasifican segundo sólo después de la diarrea infecciosa. (The Merck Manual, Sec. 6, Ch. 73, Pneumonía, 2000) . La condición conocida como "neumonía severa" se caracteriza de acuerdo a las guías expuestas por varias organizaciones, incluyendo la Sociedad Torácica Americana (ATS). (Am J Respir Crit Care Med 2001; 163:1730-1754). Por ejemplo, la ATS requiere al menos un criterio principal, tal como una necesidad de ventilación mecánica o choque séptico, además de otros criterios para una diagnosis de neumonía severa. En general, la neumonía severa puede resultar de enfermedad pulmonar aguda, enfermedad pulmonar inflamatoria o cualquier perturbación en la función pulmonar debida a factores tal como inflamación o coagulación. Una diagnosis de CAP severa se basa en un paciente que se admite a una ICU específicamente por neumonía. De manera epidemiológica, esta población de pacientes comprende aproximadamente 10 % de todas las admisiones a la ICU. Los pacientes en la ICU con neumonía tienen la más alta mortalidad de todos los pacientes de CAP (30 % a 40 %) en comparación con menos de 15 % para pacientes hospitalizados, generales con CAP.

Cada año en los Estados Unidos, la neumonía adquirida en comunidad (CAP) se diagnostica en aproximadamente 4 millones de adultos, con tanto como 600000 que requieren hospitalización. Fine et al., N. Engl . J. Med. 336, 243-50, 1997. En conjunto, la incidencia de la CAP se incrementa con la edad, con la prevalencia más grande encontrada en aquellos con una edad de 65 años y mayores. Marston et al., Arch Intern Med. 1997; 157:1709-1718. La incidencia también se incrementa en pacientes con co- morbilidad, tal como enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, diabetes mellitus, alcoholismo, inmunosupresión, insuficiencia renal, enfermedad hepática crónica, y enfermedad cardiaca. Marrie, Curr Opin Pulm Med. 1996;2:192-197; Niedermann et al., Am Rev Respir Dis. 1993; 148:1418-1426. La neumonía es la causa principal de muerte de infección en los Estados Unidos y la sexta causa principal de muerte en total . La tasa de mortalidad relacionada a la neumonía se incrementó por 22 % de 1979 a 1992, con pacientes de edad (65 años y mayores) que dan cuenta de 89 % de todas las muertes relacionadas a neumonía en 1992. Ver Pneumonía and influenza death rates--United States, 1979-1994 [corrección publicada aparece en MMWR. 1995; 44:782]. MMWR. 1995; 44:535-537. Fine y colegas (1997) reportaron que ciertas enfermedades co-existentes (enfermedad neoplástica, falla cardiaca congestiva (CHF) , enfermedad cerebrovascular, enfermedad renal, y enfermedad hepática) y ciertos hallazgos de examen físico (estado mental alterado, frecuencia cardiaca incrementada, frecuencia respiratoria incrementada, presión sanguínea sistólica disminuida, y temperaturas anormalmente bajas o elevadas) también se asocian con mortalidad incrementada relacionada a CAP. Además, la CAP tiene un impacto significativo en los costos de cuidado de la salud en los Estados Unidos, dando cuenta de un estimado de $14 mil millones por año en costo directo y $9 mil millones en salarios perdidos. Lynch & Martínez, Curr Opin Pul Med. 1998;4:162-172. El inhibidor de la ruta del factor de tejido (TFPl) es una proteína y un inhibidor de serina-proteasa presente en el plasma sanguíneo de mamíferos. Thomas, Bull.

Johns Hopkins Hosp. 81, 26 (1947); Schneider, Am. J.

Physiol. 149, 123 (1947); Broze & Miletich, Proc. Nati.

Acad. Sci. USA 84, 1886 (1987). El TFPl también se conoce como inhibidor de factor de tejido, inhibidor de tromboplastina de tejido, inhibidor de Factor III, inhibidor de ruta extrínseca (EPI) , e inhibidor de coagulación asociado con lipoproteína (LACI) . El nombre "inhibidor de la vía del factor tisular" (TFPl) se aceptó por la Sociedad Internacional de Trombosis y Hemostasis el 30 de junio de 1991.

La activación de la coagulación sanguínea es la conversión de sangre fluida a un gel o coágulo sólido.

Además, el consumo de las proteasas de coagulación conduce a sangrado excesivo. El evento principal es la conversión de fibrínógeno soluble a hebras insolubles de fibrina, aunque la fibrina misma forma por sí misma sólo 0.15 % del coágulo sanguíneo total . Esta conversión es el último paso en la cascada enzimática compleja. Los componentes (factores) están presentes como zimógenos, precursores inactivos de enzimas proteolíticas, que se convierten en enzimas activas por escisión proteolítica en sitios específicos. La activación de una pequeña cantidad de un factor cataliza la formación de grandes cantidades del siguiente, y así sucesivamente, dando por resultado una amplificación que da por resultado una formación extremadamente rápida de fibrina. Se cree que la coagulación se inicia por daño -del vaso que expone el factor Vlla al factor de tejido (TF) , que se expresa en células por debajo del endotelio. El complejo factor VIIa-TF escinde el factor X al factor Xa y escinde el factor IX al factor IXa. El TFPl se une tanto al factor Vlla como al factor Xa. El complejo formado entre TFPl, factor Vlla (con su TF unido) , y factor Xa inhibe la formación adicional de los factores Xa y IXa, requeridos para hemostasis sostenida. Broze, Jr. , Ann. Rev. Med. 46:103 (1995) . La activación de la cascada de coagulación por productos bacterianos, incluyendo endotoxinas, introducidos directamente en la corriente sanguínea puede dar por resultado depósito excesivo de fibrina en las superficies arteriales, así como agotamiento de fibrinógenp, pro-trombina, factores V y VIII, y plaquetas. Además, el sistema fibrinolítico se estimula, dando por resultado formación adicional de productos de degradación de fibrina. Al. mismo tiempo conforme se inicia aparentemente la activación de la coagulación por productos bacterianos (por ejemplo, endotoxina), los mecanismos contraventores también parecen ser activados por la coagulación, específicamente la activación del sistema fibrinolítico. El Factor XIII activado convierte el pro-activador de plasminógeno, a activador de plasminógeno que convierte de manera subsiguiente plasminógeno a plasmina, mediando de esta manera la lisis del coágulo. La activación del sistema fibrinolítico de plasma por lo tanto también puede contribuir a tendencias de sangrado. La endotoxemia se asocia con un incremento en los niveles en circulación del inhibidor de activador de plasminógeno de tejido (PAI) . Este inhibidor inactiva rápidamente el activador de plasminógeno de tejido (TPA) , dificultando de esta manera su capacidad para promover fibrinólisis a través de la activación de plasminógeno a plasmina. El deterioro de la fibrinólisis puede provocar depósito de fibrina en los vasos sanguíneos , contribuyendo de este modo a la DIC asociada con choque séptico. Están en curso esfuerzos para identificar las intervenciones satisfactorias para la prevención o tratamiento de neumonía severa y coágulopatías asociadas. Un agente que interrumpa la ruta de coagulación no necesariamente es efectivo como un producto terapéutico o como un tratamiento profiláctico de neumonía severa. Por ejemplo, la heparina es un anticoagulante comúnmente usado. Sin embargo, el manejo del uso de heparina ha sido difícil debido a que la heparina puede inducir sangrado excesivo y se ha encontrado que atenúa las anormalidades de coagulación, pero no ofrece un beneficio de supervivencia. Ver, por ejemplo, Aoki et al.," A Comparative Double-BLIND randomized Trial of Activated Protein C and Unfractionated Heparin in the Treatment of Disseminated Intravascular Coagulation, " Int. J. Hematol. 75, 540-47 (2002). Varios ensayos clínicos, principalmente en la endotoxemia meningococal donde la DIC fulminante es una característica prominente, han fallado en demostrar la reducción de mortalidad en la sepsis por tratamiento con heparina. Ver, por ejemplo, Corrigan et al., "Heparin Therapy in Septace ia with Disseminated Intravascular Coagulation. Effect on Mortality and on Correction of Hemostatic Defects, " N. Engl . J. Med., 283:778-782 (1970); Lasch et al., Heparin Therapy of Diffuse Intravascular Coagulation (DIC) " , Thrombos . Diathes. Haemorrh. , 33:105 (1974); Straub, "A Case Against Heparin Therapy of Intravascular Coagulation", Thrombos. Diathes. Haemorrh., 33:107 (1974). Los pacientes propensos a neumonía severa adquirida en comunidad son aquellos pacientes con neumonía adquirida en comunidad que requieren admisión en una Unidad de Cuidados Intensivos (ICU) . Los pacientes con neumonía adquirida en comunidad se identifican clínicamente como que tienen una infección del parénquima de pulmón y/o se confirman mediante signos radiográficos y clínicos. La neumonía severa incluye neumonía severa adquirida por comunidad, típicamente tiene patógenos bien definidos, incluyendo S. pneumonae, legionella, H. influenae o varios bacilos gram-negati os . La mayoría de los pacientes con neumonía severa adquirida en comunidad viven en la comunidad antes del episodio de CAP, con sólo cerca de 20 % admitidos como una transferencia de un hospital, asilo o unidad de cuidado a largo plazo. Los pacientes en los Estados Unidos con CAP severa son aproximadamente 50 % varones y aproximadamente 50 % mujeres, pero tienden a ser más grandes de edad. Cerca de 17 % de los pacientes con CAP severa en los Estados Unidos son menores de 50; cerca de 24 % están entre la edad de 50 y 64; y cerca de 21 % 'están entre la edad de 65 y 74 y aproximadamente 38 % son de más de 75 años de edad. La mayoría de los pacientes con CAP severa tienen una o más co-morbilidades significativas. De los pacientes con CAP de los Estados Unidos que reciben tratamiento de cuidado en ICU en el 2003, estos pacientes tienen típicamente enfermedad cardiaca correspondiente, COPD/fibrosis cística, diabetes, enfermedad de riñon, cáncer, alcoholismo y/o abuso de drogas. Se ha mostrado que la administración de ala-TFPI humano (un análogo de TFPl) mejora los índices de supervivencia en modelos de animales de sepsis. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos número 6,063,764. Como una proteína endógena, el TFPl es bien tolerado. La administración de TFPl por infusión intravenosa o inyección subcutánea se ha mostrado que reduce la capacidad de coagulación, que se manifiesta como tiempo incrementado de pro-trombina (PT) . En estudios de animales y humanos, las prolongaciones de PT se relacionaron linealmente al incremento • de TFPl en plasma. A. A. Creasey, Sepsis 3:173 (1999) . Permanece la necesidad en la técnica por planteamientos de tratamiento que inhibirán los efectos letales de neumonía severa y reducirán simultáneamente al mínimo los efectos secundarios potencialmente serios.

Breve Descripción de la Invención Una modalidad de la presente invención es. un método para tratar o prevenir neumonía severa que comprende administrar TFPl o un análogo de TFPl a un paciente quien tiene o está en riesgo de desarrollar neumonía severa. En algunas modalidades, el paciente tiene una infección demostrable . Otra modalidad de la presente invención es un método para tratar neumonía severa, que comprende administrar a un paciente una infusión intravenosa continua de un agente seleccionado del grupo que consiste de TFPl o análogo de TFPl. En algunas modalidades, el paciente tiene una infección demostrable. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde TFPl o análogo de TFPl se administra por infusión intravenosa continua a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPl de referencia a una proporción de dosis de menos de aproximadamente 2.0 mg/kg/hr. En una modalidad preferida, la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.00025 a aproximadamente 2.0, de manera alternativa, de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 1.75 mg/kg/hr. En otra modalidad preferida, la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.005 a aproximadamente 1.50 mg/kg/hr. En una modalidad más preferida, la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.010 a aproximadamente 0.75 mg/kg/hr. En una modalidad aún más preferida, el TFPl o el análogo de TFPl se administra a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.2 mg/kg/hr a aproximadamente 0.8 mg/kg/hr. En otra modalidad preferida, la proporción de dosis se administra para proporcionar una dosis total equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una dosis total de aproximadamente 0.024 a aproximadamente 4.8 mg/kg. En otra modalidad preferida, la proporción de dosis se administra para proporcionar una dosis diaria equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una dosis diaria de al menos aproximadamente 0.006 mg/kg y menos de aproximadamente 1.2 mg/kg. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores, en donde el TFPl o análogo de TFPl se administra durante al menos 72 horas. En una modalidad preferida, el TFPl o análogo de TFPl se administra durante al menos 96 horas.

Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el análogo de TFPl es ala- TFPl no glicosilado. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el análogo de TFPl comprende un primer dominio Kunitz que consiste de los aminoácidos 19- 89 de SEQ ID NO : 1. En una modalidad preferida, el análogo de TFPl comprende además un segundo dominio de Kunitz que consisten de los aminoácidos 90-160 de SEQ ID NO: 1. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el análogo de TFPl comprende los aminoácidos 1-160 de SEQ ID NO : 1 o en donde el análogo de TFPl comprende un segundo dominio de Kunitz que consiste de los aminoácidos 90-160 de SEQ ID NO:l. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el TFPl o análogo de TFPl se prepara de una composición liofilizada que comprende TFPl o un análogo de TFPl . Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el TFPl o análogo de TFPl se administra como una formulación que comprende arginina. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el TFPl o análogo de TFPl se administra como una formulación que comprende citrato. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores en donde el TFPl o análogo de TFPl tiene una concentración de aproximadamente 0.15 mg/ml en una formulación que comprende aproximadamente 300 mM de clorhidrato de arginina y aproximadamente 20 mM de citrato de sodio y que tiene un pH de aproximadamente 5.5. Otras modalidades incluyen cualquiera de las modalidades anteriores, que comprenden adicionalmente administrar al mismo tiempo como, o dentro de las 24 horas de la administración del TFPl o análogo de TFPl, un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un antibiótico, un anticuerpo, un antagonista de endotoxina, un análogo de factor de tejido que tiene actividad anticoagulante, un inmunoestimulante, un bloqueador de adhesión celular, heparina, proteína de BPI, un antagonista de IL-1, pafasa (inhibidor de enzima PAF) , un inhibidor de TNF, un inhibidor de IL-6, y un inhibidor de complemento. En una modalidad preferida, el agente adicional es un anticuerpo que se une de forma específica a un antígeno seleccionado del grupo que consiste de TNF, IL-6, y M-CSF. Las modalidades adicionales de la presente invención son evidentes en vista de las figuras referenciadas más adelante en unión con la descripción detallada.

Descripción Detallada de la Invención La administración de TFPl o análogos de TFPl es efectiva en la profilaxis y tratamiento de neumonía severa. La administración continua a baja dosis de TFPl o análogos de TFPl (más adelante "administración de TFPl a baja dosis") también es efectiva en la profilaxis y tratamiento de neumonía severa. La administración de TFPl o análogo de TFPl, de manera particular administración a baja dosis, inhibe o atenúa la inflamación aguda o crónica, particularmente la neumonía severa. Cuando se continúa la administración de TFPl a baja dosis durante al menos tres días, se reduce el riesgo de muerte de neumonía severa, en tanto que se pueden reducir al mínimo los porcentajes de complicaciones de efectos secundarios adversos, particularmente trastornos de sangrado. Una ventaja adicional de la administración de TFPl a baja dosis es la evasión de los efectos de tolerancia que, a dosis suficientemente altas, pueden reducir la concentración en plasma de TFPl . Los efectos de tolerancia se estimulan en un máximo medio a una concentración en plasma de TFPl de aproximadamente 850 ng/ml, en tanto que con la administración de TFPl baja dosis los niveles en plasma permanecen en general por abajo de 500 ng/ml. La administración de TFPl a baja dosis se lleva a cabo en general por infusión intravenosa continua de TFPl o un análogo de TFPl .

TFPl y Análogos de TFPl "TFPl" como se usa en la presente se refiere a la glicoproteína madura en suero que tiene la secuencia de 276 residuos de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO : 1 y un peso molecular de aproximadamente 38000 Daltons. Es un inhibidor natural de la actividad del factor de tejido y de esta manera de la activación de coagulación. La patente de los Estados Unidos número 5,110,730 describe el factor de tejido (TF) , y la patente de los Estados Unidos número 5,106,833 describe el TFPl . La clonación del ADNc de TFPl se describe en Wun et al . , patente de los Estados Unidos número 4,966,852. El TFPl es un inhibidor de proteasa y tiene 3 dominios Kunitz, dos de los cuales se conoce que interactúan con los factores VII y Xa, respectivamente. La función del tercer dominio permanece desconocida, se cree que el TFPl funciona in vivo para limitar el inicio de la coagulación al formar un complejo inerte cuaternario de factor Xa : TFPl : factor VIIa: factor de tejido. Ver, reviews by Rapaport, Blood 73:359-365 (1989) y Broze et al., Biochemistry 29:7539-7546 (1990). Muchas de las características estructurales de TFPl se pueden deducir de su homología con otros inhibidores de * proteasa bien estudiados. El TFPl no es una enzima, probablemente inhibe su objetivo de proteasa de una manera estequiométrica, es decir, uno de los dominios Kunitz del TFPl inhibe una molécula de proteasa. De manera preferente, los dominios 1 y/o 2 de Kunitz estarán presentes en las moléculas de TFPl de la presente invención. La función de dominio 3 de Kunitz es desconocida. Un "análogo de TFPl" es un derivado de TFPl modificado con una o más adiciones o sustituciones de aminoácidos (en general en naturaleza conservadora) , una o más supresiones de aminoácidos (por ejemplo, fragmentos de TFPl) , o la adición de una o más porciones químicas a uno o más aminoácidos, en tanto que las modificaciones no destruyen la actividad biológica de TFPl . Los métodos para hacer análogos de polipéptidos se conocen en' la técnica y se describen de manera adicional más adelante. Un análogo de TFPl preferido es N-L-alanil-TFPI (ala-TFPI) , cuya secuencia de aminoácidos se muestra en SEQ ID NO : 2. Los análogos de TFPl poseen alguna medida de la actividad de TFPl como se determina por un ensayo biológico como se describe más adelante. Un ensayo de bioactividad, preferido para TFPl y análogos es el ensayo de tiempo de pro-trombina (PT) (ver más adelante) . El TFPl y análogos de TFPl se pueden ya sea glicosilar o no glicosilar. Los análogos de TFPl se describen en la patente de los Estados Unidos número 5,106,833. Ala-TFPI es un análogo de TFPl que también se conoce bajo el nombre de fármaco internacional "tifacogin" . Ala-TFPI incluye la secuencia completa de aminoácidos del TFPl maduro, humano de longitud completa más un residuo adicional de alanina en el término amino. El residuo de alanina amino-terminal de ala-TFPI se manejó en la secuencia de TFPl para mejorar la expresión en E. coli y efectuar la escisión de lo que de otro modo sería un residuo de metionina amino-terminal . Ver, patente 'de los Estados Unidos número 5,212,091. Los análogos de TFPl particularmente preferidos incluyen sustituciones que son de naturaleza conservadora, es decir, aquellas sustituciones que toman lugar dentro de una familia de aminoácidos que se relacionan en sus cadenas laterales. De manera específica, los aminoácidos se dividen en general en cuatro familias: (1) acida - aspartato y glutamato; (2) básica - lisina, arginina, histidina; (3) no polar - alanina, valína, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano; y (4) polar sin cambio - glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina y tirosina. La fenilalanina, triptofano, y tirosina se clasifican algunas veces como aminoácidos aromáticos . Por ejemplo, es predecible de forma razonable que un reemplazo aislado de leucina con isoleucina o valina, un aspartato con un glutamato, una treonina con una serina, o un reemplazo conservador similar de un aminoácido con un aminoácido estructuralmente relacionado, no tendrá un efecto mayor en la actividad biológica. . Por ejemplo, el polipéptido de interés puede incluir hasta aproximadamente 1-70 sustituciones conservadoras o no conservadoras de aminoácidos, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6-50, 15-25, 5-10, o cualquier número entero de 1 a 70, en tanto que permanezca intacta la función deseada de la molécula. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente las regiones de la molécula de interés que se pueden modificar con una probabilidad razonable de retención de actividad biológica como se define en la presente. "Homología" se refiere al por ciento de similitud entre dos porciones de polinucleótido o polipéptido. Dos secuencias de polipéptido son "sustancialmente homologas" entre sí cuando las secuencias exhiben cuando menos 50 %, de manera preferente al menos aproximadamente 75 %, de manera más preferente al menos aproximadamente 80 %-85 %, de manera preferente al menos 90 %, y de manera más preferente al menos aproximadamente 95 %-9 8% de homología de secuencia, o cualquier por ciento de homología entre los intervalos especificados, sobre una longitud definida de las moléculas. Como se usa en la presente, "sustancialmente homologas" también se refiere a secuencias que muestran identidad completa a la secuencia de polipéptido especificada.

En general, "identidad" se refiere a una correspondencia exacta de aminoácido a aminoácido de las dos secuencias de polipéptido, respectivamente. El por ciento de identidad se puede determinar por una comparación directa de la información de secuencia entre dos moléculas al alinear las secuencias, contando el número exacto de correspondencias entre las dos secuencias alineadas, dividiendo la longitud de la secuencia más corta, y multiplicando el resultado por 100. De manera preferente, los análogos de TFPl que se presentan de forma natural o de manera no natural tienen secuencias de aminoácidos que son al menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 % ó 95 % o más homologas al TFPl derivado de SEQ ID NO:l. De manera más preferente, las moléculas son 98 % ó 99 % homologas. El por ciento de homología se determina usando el algoritmo de búsqueda de homología de Smith- aterman usando una búsqueda de separación similar con una penalidad de abertura de separación de 12 y una penalidad de extensión de separación de 2 , y una matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman se enseña en Smith y Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482-489 (1981) . La actividad biológica de TFPl y análogos de TFPl se puede determinar por el ensayo de pro-trombina. Los ensayos de pro-trombina adecuados se describen en la patente de los Estados Unidos número 5,888,968 y en la WO 96/40784. De forma concisa, se puede determinar el tiempo de pro- trombina usando un medidor de coagulación (por ejemplo, Coag-A-Mate MTX II de Organon Teknika) . Un amortiguador de ensayo adecuado es NaCl 100 mM, Tris 50 mM ajustado a pH 7.5, que contiene 1 mg/ml de albúmina de suero bovino. Los reactivos adicionales requeridos son plasma humano normal (por ejemplo, "Verify 1" por Organon Teknika), reactivo de tromboplastina (por ejemplo, "Simplastin Excel" por Organon Teknika) , la solución estándar de TFPl (por ejemplo, 20 mg de ala-TFPI 100 % puro (o equivalente del mismo) por ml de amortiguador de ensayo) . Se obtiene una curva normal al analizar el tiempo de coagulación en una serie de diluciones de la solución normal de TFPl, por ejemplo, a concentraciones finales que varían de 1 a 5 mg/ml. Para la determinación del tiempo de coagulación, la muestra o norma de TFPl se diluye primero en el amortiguador de ensayo. Luego se adiciona plasma humano normal . La reacción de coagulación se inicia por la adición de reactivo de tromboplastina. El instrumento entonces registra el tiempo de coagulación. Se obtiene una curva lineal de norma de TFPl de una gráfica de logaritmo de tiempo de coagulación vs . logaritmo de concentración de TFPl. La curva de norma se ajusta en base a la pureza de la norma de TFPl para corresponder a la concentración equivalente de TFPl de una norma 100 % pura. Por ejemplo, si la norma es una preparación de ala-TFPI que es 97 % bioquímicamente pura (es decir, contiene 3 % en peso de especies moleculares sin actividad biológica de TFPl) , entonces la concentración de cada dilución de la norma se multiplica por 0.97 para dar la concentración real de TFPl. De esta manera, una norma de TFPl que es 1.0 mg/ml en base al peso real por ml de una preparación que es 97 % pura será equivalente a, y se trata como, una concentración de 1.0.veces .0.97, ó 0.97 mg/ml.

Obtención de TFPl y Análogos de TFPl El TFPl y análogos de TFPl usados en los métodos de la invención se pueden aislar y purificar de células o tejidos, sintetizar de forma química, o producir de manera recombinante en ya sea células procarióticas o eucarióticas . El TFPl se puede aislar por varios métodos. Por ejemplo, las células que segregan TFPl incluyen células endoteliales envejecidas, células endoteliales jóvenes que se han tratado con TNF durante aproximadamente 3 a 4 días, hepatocitos, y células de hepatoma. Se puede purificar el TFPl por métodos convencionales, incluyendo los métodos cromatográficos de Pedersen et al., 1990, J. Biol. Chem. 265, 16786-93, Novotny et al., 1989, J. Biol. Chem. 264, 18832-37, Novotny et al., 1991, Blood 78, 394-400, Wun et al., 1990, J. Biol. Chem. 265, 16096-101, y Broze et al., 1987, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84, 1886-90. El TFPl aparece en la corriente sanguínea y se puede purificar de la sangre, ver Pedersen et al., 1990. Se puede producir un TFPl o una variante de TFPl usando métodos químicos para sintetizar su secuencia de aminoácidos, tal como por síntesis peptídica directa usando técnicas de fase sólida (Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154, 1963; Roberge et al., Science 269, 202-204, 1995) . La síntesis de proteína se puede realizar usando técnicas manuales o por automatización. Se puede lograr, por ejemplo, la síntesis automatizada usando el Sintetizador de Péptidos Applied Biosystems 431A (Perkin Elmer) . De forma opcional, se pueden sintetizar de manera separada fragmentos de TFPl o variantes de TFPl y combinar usando métodos químicos para producir una molécula de longitud completa. El TFPl y análogos de TFPl se pueden producir de manera recombinante como se muestra en la patente de los Estados Unidos número 4,966,852. Por ejemplo, el ADNc para la proteína deseada se puede incorporar en un plásmido para la expresión en procariotas o eucariotas. La patente de los Estados Unidos número 4,847,201 proporciona detalles para transformar microorganismos con secuencias específicas de ADN y para expresarlos . Hay muchas otras referencias conocidas por aquellos expertos en la técnica que proporcionan detalles de la expresión de proteínas usando microorganismos. Muchas de éstas se citan en la patente de los Estados Unidos número 4,847,201, tal como Maniatas et al., 1982, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Press . Está disponible una variedad de técnicas para transformar microorganismos y usarlos para expresar TFPl y análogos de TFPl. Los siguientes son sólo ejemplos de posibles planteamientos. Se deben aislar secuencias de ADN de TFPl y conectar a las secuencias de control apropiadas . Las secuencia de ADN de TFPl se muestran en la patente de los Estados Unidos número 4,966,852 y se pueden incorporar en un plásmido, tal como pUNC13 ó pBR3822, que están comercialmente disponibles de compañías tal como Boehringer-Mannheim. Una vez que el ADN de TFPl se inserta en un vector, se puede clonar en un hospedador adecuado. El ADN se puede amplificar por técnicas tal como aquellas mostradas en la patente de los Estados Unidos número 4,683,202 de Mullís y la patente de los Estados Unidos número 4,683,195 de Mullís et al. El ADNc de TFPl se puede obtener al inducir células, tal como células de hepatoma (tal como HepG2 y SKHep) para elaborar el ARNm de TFPl, luego identificar y aislar el ARNm y transcribirlo de forma invertida para obtener el ADNc para TFPl . Después que se transforma el vector de expresión en un hospedador tal como E. coli, las bacterias se pueden fermentar y la proteína se expresa. Las bacterias son microorganismos procarióticos preferidos y es especialmente preferido E. coli. Un microorganismo preferido útil en la presente invención es E. coli, K-12, cepa MM294 depositada con la ATCC el 14 de febrero de 1984 (Número de Acceso 39607) , bajo las provisiones del Tratado de Budapest. Por supuesto, también es posible expresar genes, que codifiquen para polipéptidos en cultivos de células hospedadoras eucarióticas derivados de organismos multicelulares. Ver, por ejemplo, Tissue Culture, 1973, Cruz y Patterson, eds., Academic Press. Las líneas de células de mamífero útiles incluyen mielomas murinas N51, VERO, células HeLa, células de ovario de hámster Chino (CHO), COS, C127, Hep G2, y SK Hep . El TFPl y análogos de TFPl se pueden expresar también en células de insecto infectadas con baculovirus (ver también patente de los Estados Unidos número 4,847,201, referida anteriormente) . Ver también Pedersen et al., 1990, J. of Biological Chemistry, 265:16786-16793. Los vectores de expresión para células eucarióticas incluyen ordinariamente promotores y secuencias de control compatibles con células de mamífero tal como por ejemplo, los promotores temprano y tardío comúnmente usados del Virus Simiesco 40 (SV40) (Fiers, et al., 1978, Nature, 273:113), u otros promotores virales tal como aquellos derivados de polioma, Adenovirus 2, virus de papiloma bovino, o virus de sarcoma aviar, o promotores de inmunoglobulina y promotores de choque séptico. Los aspectos generales de las transformaciones de sistemas hospedadores de células de mamífero se han descrito por Axel, patente de los Estados Unidos número 4,399,216. Ahora parece también que las regiones "intensificadoras" son importantes en la optimización de la expresión; éstas en general son secuencias encontradas en la dirección 5' de la región promotora. Se pueden obtener orígenes de replicación, si se necesitan, de fuentes virales. Sin embargo, la integración en el cromosoma es un mecanismo común para la replicación de ADN en eucariotas. Las células vegetales también ahora están disponibles como hospedadores, y están disponibles secuencias de control compatibles con células vegetales tal como el promotor de nopalina-sintasa y secuencias de señal de poliadenilación (Depicker, A., et al., 1982, J. Mol. Appl. Gen., 1:561). En la WO 85/04899 se han descritos métodos y vectores para transformación de células vegetales . Los métodos que se pueden usar para purificación de TFPl y análogos de TFPl expresadas en células de mamífero incluyen aplicación secuencial de heparina-Sefarosa, MonoQ, MonoS, y cromatografía de HPLC de fase invertida. Ver Pedersen et al., suprá; Novotny et al., 1989, J. Biol. Chem. 264:18832-18837; Novotny et al., 1991, Blood, 78:394-400; Wun et al., 1990, J. Biol. Chem. 265:16096-16101; Broze et al., 1987, PNAS (EUA), 84:1886-1890; patente de los Estados Unidos número 5,106,833; y patente de los Estados Unidos número 5,466,783. Estas referencias describen varios métodos para purificar TFPl producido en mamífero . El TFPl también se puede expresar como una proteína glicosilada recombinante usando hospedadores de células de mamífero tal como células C127 (Day et al., Blood 76, 1538-45, 1990), células de riñon de hámster neonato (Pedersen et al., 1990), células de ovario de hámster Chino, Y células de hepatoma SK humano. El TFPl de C127 se ha usado en estudios de animales y se ha mostrado que es efectivo en la inhibición de la coagulación intravascular inducida por factor en conejos (Day et al., supra), en la prevención de reoclusión arterial después de trombolisis en perros (Haskel et al., Circulation 84:821-827 (1991)), y en la reducción de mortalidad en el modelo de sepsis por E. coli en babuinos (Creasey et al., J. Clin. Invest. 91:2850 (1993) ) . Se puede expresar Ala-TFPI como una proteína no glícosilada, recombínante usando células hospedadores de E. coli. Se han descrito métodos que producen un ala-TFPI altamente activo por replegado ' in vitro de la proteína recombinante producida en E. coli. Ver por ejemplo WO 96/40784. El TFPl y análogos de TFPl también se pueden producir en bacterias o levadura y purificar de manera subsiguiente. En general, se pueden emplear los procedimientos mostrados en las patentes de los Estados Unidos números 5,212,091; 6,063,764; y 6,103,500 ó WO 96/40784. El ala-TFPI y otros análogos de TFPl se pueden purificar, solubilizar y replegar de acuerdo con la WO 96/40784 y Gustafson et al., Prot. Express. Pur . 5:233 (1994), que se incorporan en la presente como referencia. Por ejemplo, cuando se preparan de acuerdo al Ejemplo 9 de la WO 96/40784, se pueden obtener preparaciones de ala-TFPI que contienen de aproximadamente 85 % a 90 % de la proteína total en peso como ala-TFPI biológicamente activo, apropiadamente plegado, maduro, aproximadamente 10 % a 15 % del cual tiene uno o más residuos oxidados de metionina. Estas formas oxidadas tienen actividad biológica que es equivalente a la actividad biológica de ala-TFPI no derivatizado, como se determina por el ensayo de pro-trombina, y se espera que sean activos en la invención descrita en la presente. El material restante comprende varias formas modificadas de ala-TFPI, incluyendo formas dimerizadas, agregadas y acetiladas .

El TFPl y análogos de TFPl puede tener un número significativo de residuos de cisteína, y el procedimiento mostrado en la patente de los Estados Unidos número 4,929,700 es pertinente para el replegado de TFPl. El TFPl y análogos se pueden purificar de la solución amortiguadora por varios métodos cromatográficos, tal como aquellos mencionados anteriormente. Si se desea, se pueden emplear los métodos mostrados en la patente de los Estados Unidos número 4,929,700. Se puede emplear cualquier método para purificar TFPl y análogos de TFPl que den por resultado un grado de pureza y un nivel de actividad adecuado para la administración a humanos.

Métodos Terapéuticos y Composiciones Terapéuticas En general, el TFPl y análogos de TFPl son útiles para tratar o prevenir aquellas enfermedades que se presentan debido al favorecimiento de la expresión del factor de tejido y por lo tanto la actividad de TF provocada por TNF, IL-1 u otras citocinas. La administración de TFPl, y de manera particular la administración de TFPl a baja dosis, puede disminuir la concentración de citocinas tal como IL-6 en un paciente. La administración de TFPl a baja dosis es útil para tratar inflamación y anormalidades de coagulación en general, incluyendo condiciones inflamatorias tanto aguadas como crónicas, tal como neumonía severa.

"Neumonía severa" se define de acuerdo a las guías expuestas por la Sociedad Torácica Americana.

Específicamente, la neumonía severa requiere un diagnóstico de neumonía y existencia de ya sea a) uno de los dos criterios principales, b) dos de tres criterios menores, o c) dos de los cuatro criterios de la Sociedad Torácica Británica (Thorax 2001; 56 [suppl IV] .-1-64) . Los criterios principales son 1) necesidad de ventilación mecánica y 2) choque séptico o necesidad de compresores durante >4 horas . Los criterios menores son 1) presión sanguínea sistólica .ltoreq.90 mmHg, 2) neumonía multi-lobar, y 3) criterio de hipoxemia (Pa02/Fi02) <250. Los criterios de la Sociedad Torácica Británica son 1) frecuencia respiratoria. gtoreq.30 inhalaciones/minuto, 2) presión sanguínea diastólica. Itoreq.60 mmHg, 3) nitrógeno de urea en sangre (BUN)>7.0 mM (>19.6 mg/dL) y 4) confusión. Como se entiende en la técnica, el criterio de hipoxemia (Pa02/Fi02) se refiere a la presión parcial de oxígeno arterial a la fracción de oxígeno inspirado e indica el nivel de deterioro del intercambio de gases. De manera preferente, los pacientes con neumonía severa tienen una infección demostrable por cualquier medio conocido en la técnica. Estos métodos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, detección de un organismo patógeno en un cultivo de sangre u otro fluido o tejido corporal normalmente estéril, por ejemplo por cepa de GRAM, cultivo, tensión histoquímica, ensayo inmunoquímico, o ensayos de ácido nucleico. Una infección demostrable también se puede evidenciar por una radiografía del pecho consistente con un diagnóstico de neumonía que constituye la razón para terapia anti-infectiva sistémica, así como cualquier síntoma clínico de infección, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación, un incremento en la frecuencia respiratoria >/=30/min o PaCO2/FiO2<250, o una disminución en la presión sanguínea, y un incremento en la temperatura corporal .

Formulaciones de TFPl y Análogos de TFPl Las formulaciones de TFPl y análogos de TFPl se administran de manera preferente por infusiones intravenosas . Se prefiere esencialmente infusión intravenosa continua. Los métodos para lograr esta administración se conocen por aquellos expertos en la técnica. La infusión se puede realizar mediante una línea central o una línea periférica. En tanto que se van a evitar las grandes fluctuaciones en la velocidad de dosis, las desviaciones a corto plazo de las velocidades de dosis de la invención son aceptables con la condición que el nivel resultante en plasma del TFPl administrado esté dentro de 20 % de aquel esperado de una infusión continua a una velocidad constante de dosis de acuerdo a las modalidades preferidas de la invención. Antes de la administración a los pacientes, los formulantes se pueden adicionar a TFPl y análogos de TFPl . Se prefiere una formulación líquida. Se pueden formular TFPl y análogos de TFPl a diferentes concentraciones, usando diferentes formulantes, y a cualquier pH fisiológicamente adecuado compatible con la ruta de administración, solubilidad y estabilidad de la ponderación de TFPl . Una formulación preferida para infusión intravenosa incluye ala- TFPI hasta aproximadamente 0.6 mg/ml, clorhidrato de arginina hasta 300 mM, y amortiguador de citrato de sodio a pH 5.0-6.0. Ciertos solutos tal como arginina, NaCl , sacarosa y mannitol sirven para solubilizar. y/o estabilizar ala-TFPI . Ver WO 96/40784. Una formulación especialmente preferida para infusión intravenosa contiene aproximadamente 0.15 mg/ml de ala-TFPI, clorhidrato de arginina 300 mM, y citrato de sodio 20 mM a pH 5.5. También, TFPl y análogos de TFPl se pueden formular a concentraciones de hasta aproximadamente 0.15 mg/ml en NaCl 150 mM y fosfato de sodio 20 mM u otro amortiguador a pH 5.5-7.2, opcionalmente con 0.005 % o 0.01 % (p/v) de polisorbato 80 (Tween 80) . Otras formulaciones contienen hasta aproximadamente 0.5 mg/ml de TFPl, o análogo de TFPl en acetato de sodio 10 mM a pH 5.5 que contiene ya sea NaCl 150 mM, 8 % (p/v) de sacarosa, o 4.5 % (p/v) de mannitol . También el TFPl y análogos de TFPl se pueden formular a mayores concentraciones hasta varios mg/ml usando bastante sal. Por ejemplo una formulación contiene hasta aproximadamente 6.7 mg/ml de ala-TFPI en NaCl 500 mM y fosfato de sodio 20 mM a pH 7.0. Además, la formulación de TFPl puede contener metionina, de manera preferente en un intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mM de metionina. Una modalidad preferida de una formulación de TFPl es ala-TFPI a aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.7 mg/ml, L-arginina 200 a 500 mM, metionina 1 a 7 mM, amortiguador de citrato de sodio 5 a 50 mM a pH 5.0-6.0. Una modalidad preferida de una formulación de TFPl es ala-TFPl a aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 mg/ml, L-arginina 250 a 400 mM, metionina a 3 a 6.5 mM, amortiguador de citrato de sodio 15 a 30 mM a pH 5.0-6.0. En una modalidad preferida de una formulación de TFPl contiene ala-TFPI a aproximadamente 0.15 mg/ml, clorhidrato L-arginina a aproximadamente 300 mM, metionina 5 mM, amortiguador de citrato de sodio 20 mM a pH 5.5. Otra modalidad preferida de una formulación de TFPl contiene ala-TFPI a aproximadamente 0.45 mg/ml, clorhidrato L-arginina a aproximadamente 300 mM, metionina 5 mM, amortiguador de citrato de sodio 20 mM a pH 5.5.

Los ejemplos adicionales de formulantes para TFPl y análogos de TFPl incluyen aceites, polímeros, vitaminas, carbohidratos, aminoácidos, sales, amortiguadores, albúmina, agentes tensioactivos, o agentes de volumen. De manera preferente, los carbohidratos incluyen azúcar o alcoholes de azúcar tal como moni-, di-, o poli-sacáridos, o glucanos solubles en agua. Los sacáridos o glucanos pueden incluir sucrosa, dextrosa, lactosa, glucosa, mannosa, sorbosa, xilosa, maltosa, sacarosa, dextrosa, pululano, dextrina, alfa y beta-ciclodextrina, almidón soluble, hidroxietil- almidón y carboximetilcelulosa, o mezclas de los mismos. Es más preferida la sacarosa. El alcohol de azúcar se define como hidrocarburo C4 a C8 que tiene un grupo -OH incluye galactitol, inositol, mannitol, xilitol, sorbitol, glicerol y arabitol . Es más preferido mannitol . Estos azucares o alcoholes de azúcar mencionados anteriormente se pueden usar de manera individual o en combinación. No hay límite fijo a la cantidad usada en tanto que el azúcar o alcohol de azúcar sea soluble en la preparación acuosa. De manera preferente, la concentración del azúcar o alcohol de azúcar está entre 1.0 % p/v y 7.0 % p/v, de manera más preferente entre 2.0 y 6.0 % p/v. De manera preferente, los aminoácidos incluyen formas levorrotatorias (L) de carnitina, arginina, y betaína; sin embargo, se pueden adicionar otros aminoácidos.

Los polímeros preferidos incluyen polivinilpirrolidona (PVP) con un peso molecular promedio entre 2000 y 3000 o polietilenglicol (PEG) con un peso molecular promedio entre 3000 y 5000. También se prefiere usar un amortiguador en la composición para reducir al mínimo los cambios de pH en la solución antes de la liofilización o después de la reconstitución. En sumo grado, se puede usar cualquier amortiguador fisiológico, pero se prefieren amortiguadores de citrato, fosfato, succinato y glutanato o mezclas de los mismos. De manera preferente, la concentración del amortiguador es de 0.01 a 0.3 molar. Los agentes tensioactivos que se pueden adicionar a la formulación se muestran en EP Nos. 270,799 y 268,110. Adicionalmente, el TFPl y análogos de TFPl se pueden modificar químicamente, por ejemplo por conjugación covalente a un polímero para incrementar su vida media en circulación. Los polímeros preferidos y métodos preferidos para unirlos a péptidos se enseñan en las Patente de los Estados Unidos No. 4,766,106, 4,179,337, 4,495,285, y 4,609,546. Los polímeros preferidos son polioles polioxietilados y polietilenglicol (PEG) . PEG es soluble en agua a temperatura ambiente y tiene la fórmula general: R(0— CH2-CH2)n--0—R donde R puede ser hidrogeno o un grupo protector tal como grupo alquilo o alcanol . De manera preferente, el grupo protector tiene entre 1 y 8 carbonos, de manera preferente es metilo. El símbolo n es un número entero positivo, de manera preferente entre 1 y 1,000, de mezclas de los mismos entre 2 y 500. El PEG tiene un peso molecular promedio preferido entre 1000 y 40000, de manera preferente entre 2000 y 20000 y de manera más preferente entre 3000 y 12000. De manera preferente, PEG tiene al menos un grupo hidroxi, de manera más preferente es un grupo hidroxi terminal . Es este grupo hidroxi el que se activa de manera preferente para reaccionar con un grupo amino libre en el inhibidor. Sin embargo, se entenderá que el tipo y cantidad de los grupos reactivos se pueden variar para lograr un PEG/TFPI covalentemente conjugado de la presente invención. Los polioles polioxietilados solubles en agua también son útiles en la presente invención. Incluyen sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada, glicerol polioxietilado (POG), etc. Se prefiere POG. Una razón es que la estructura de glicerol polioxietilado es la misma estructura como se presenta de forma natural, por ejemplo, en animales y humanos en mono-, di-, tri-glicéridos . Por lo tanto, esta ramificación no se verá necesariamente como un agente extraño en el cuerpo. El POG tiene un peso molecular preferido en el mismo intervalo como PEG. La estructura para POG se muestra en Knauf et al., 1988, J. Bio. Chem. 263:15064-15070, y un análisis de los conjugados POG- proteína se encuentra en la Patente de los Estados Unidos No. 4,766,106. Después de que se prepara una composición farmacéutica líquida de TFPl o un análogo de TFPl, se puede liofilizar para impedir la degradación y conservar la esterilidad. Los métodos para liofilizar composiciones líquidas se conocen por aquellos expertos en la técnica. Justo antes del uso, la composición se puede reconstituir con un diluyente estéril (solución de Ringer, agua destilada, o solución salina estéril, a manera de ejemplo) que puede incluir ingredientes adicionales. En la reconstitución, la composición se administra de manera preferente a sujetos por infusión intravenosa continua .

Dosis de TFPl y Análogos de TFPl Se administran TFPl o análogos de TFPl a una concentración que es terapéuticamente efectiva para tratar y prevenir neumonía severa. Estas dosis también son efectivas para otras inflamaciones agudas o crónicas, y en general enfermedades en las cuales las citocinas favorezcan la expresión del factor de tejido. Para lograr este objetivo, el TFPl o análogos de TFPl se administran de manera preferente de forma intravenosa . Los métodos para lograr esta administración se conocen por aquellos expertos en la técnica. En general, el TFPl y análogos de TFPl se dan a una dosis de entre 1 mg/kg y 30 mg/kg, de manera preferente entre 20 mg/kg y 25 mg/kg, de manera más preferente entre 1 y 15 mg/kg. Las dosis anteriores se administran en general durante un periodo de al menos aproximadamente 150 horas, y de manera preferente durante un periodo de al menos aproximadamente 100 horas. En una modalidad, la administración de TFPl se continúa durante aproximadamente 99 a aproximadamente 90 horas, de manera preferente durante aproximadamente 97 a aproximadamente 94 horas, y de manera más preferente, durante aproximadamente 96 horas . La dosis diaria total administrada a un hospedador en una dosis individual o dividida puede estar en cantidades, por ejemplo, desde aproximadamente 2 a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal diariamente y de manera preferente desde aproximadamente 2 a aproximadamente 15 mg/kg de peso molecular diariamente de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 mg/kg. Las composiciones unitarias de dosis pueden contener estas cantidades o sub-múltiplos de las mismas para constituir la dosis diaria. Pueden ser útiles cantidades menores de dosis diaria para propósitos profilácticos u otros, por ejemplo, de 1 mg/kg a 2 mg/kg. La cantidad de ingrediente' ctivo que se puede combinar con los materiales portadores para producir una forma de dosis individual variará dependiendo del paciente tratado y de modo particular de administración. El régimen de dosis se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, incluyendo el tipo, edad, peso, sexo, dieta y condición médica del paciente, la . severidad de la condición, la ruta de administración, consideraciones farmacológicas tal como la actividad, eficiencia, perfiles farmacocinéticos y toxicológicos, ya sea que se utilice un sistema de distribución de fármacos y si el compuesto se administra como parte de una combinación de fármacos. De esta manera, el régimen de dosis empleado realmente puede variar ampliamente y por lo tanto puede desviarse del régimen de dosis preferido expuesto anteriormente. De manera preferente, las dosis de TFPl o análogos de TFPl no deben exceder una proporción de dosis equivalente a una proporción de dosis de ala-TFPI de aproximadamente 0.66 mg/kg/hr .

Administración de Baja Dosis Cuando el TFPl o un análogo de TFPl se da a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI a una proporción de dosis de menos de aproximadamente 0.00025 mg/kg/hr (0.00417 mg/kg/min) y menos de aproximadamente 2.00 mg/kg/hr (0.833 mg/kg/min), la eficacia en el tratamiento de neumonía severa se retiene y se reducen al mínimo los efectos secundarios adversos, tal como sangrado. En una modalidad preferida, se administra ala- TFP1 a una proporción de dosis de al menos entre aproximadamente 0.02 mg/kg/hr a aproximadamente 1.0 mg/kg/hr, de manera más preferente entre aproximadamente 0.24 mg/kg/hr a aproximadamente 0.8 mg/kg/hr. Para eficiencia y seguridad combinadas, mejoradas, la proporción de dosis es de manera preferente equivalente a una proporción de dosis de ala-TFPI de al menos aproximadamente 0.010 mg/kg/hr (0.167 mg/kg/min) y menos de aproximadamente 0.045 mg/kg/hr (0.833 mg/kg/min), o equivalente a una proporción de dosis de ala-TFPI de al menos aproximadamente 0.020 mg/kg/hr y menos de aproximadamente 0.040 mg/kg/hr, y de manera más preferente equivalente a una proporción de dosis de ala-TFPI de aproximadamente 0.025 mg/kg/hr (0.417 mg/kg/min) ) . La ruta de administración en general es por administración intravenosa, con infusión intravenosa continua que es la preferida. La infusión se puede administrar durante al menos 72, 96 , 120 o 240 horas. De manera preferente, la infusión continua se administra durante 3 a 8 días, de manera más preferente 3 a 6 días, y de manera más preferente durante aproximadamente 4 días . Para administrar "por infusión continua" significa que la infusión se mantiene a aproximadamente la velocidad preescrita sin interrupción sustancial durante la mayoría de la duración prescrita. De manera alternativa, se puede usar infusión intravenosa intermitente. Si se usa infusión intermitente, entonces se debe usar una velocidad de dosis promediada en tiempo que es equivalente a las velocidades de dosis descritas anteriormente para infusión continua. Además, el programa de infusión intermitente debe dar por resultado una concentración en suero máxima de no más de aproximadamente 20 % por arriba de la concentración máxima obtenida usando infusión continua. Para, evitar reacciones adversas en el paciente, particularmente efectos secundarios que comprenden sangrado, la proporción de dosis debe ser menos que una proporción de dosis que es equivalente a infusión intravenosa continua de ala-TFPI a aproximadamente 0.050 mg/kg/hr. Todas las dosis descritas en la presente, incluyendo las proporciones de dosis y dosis totales, se someten a una variación de 10 % en la práctica debido a errores en la determinación de la concentración de la proteína y actividad biológica con el ensayo de protrombina. De esta manera, cualquier dosis realmente administrada hasta 10 % mayor o 10 % menor que una dosis señalada en la presente se considera que es equivalente a la dosis señalada. Por esta razón, todas las dosis se han declarado, "aproximadamente" una dosis específica. Por ejemplo, una dosis descrita como "aproximadamente 0.025 mg/kg/hr" se considera equivalente a cualquier dosis real que varía de 0.0225 a 0.0275 mg/kg/hr. Una inyección de bolo o una velocidad de infusión brevemente mayor de TFPl o un análogo de TFPl también se pueden emplear en la práctica de la presente invención si se sigue por administración de TFPl de baja dosis. Por ejemplo, una inyección de bolo o velocidad mayor de infusión se puede usar para reducir el tiempo de equilibrio del TFPl administrado o análogo de TFPl administrado, en la circulación de un paciente. Al hacerlo así, el nivel en plasma eventual de estado estable de TFPl se puede alcanzar más rápidamente y se puede saturar más rápidamente los receptores para TFPl . La administración de ala-TFPI a humanos a aproximadamente 0.025 mg/kg/hr durante 2 horas incrementa los niveles en plasma de TFPl (más ala-TFPI) desde aproximadamente 80 ng/ml a aproximadamente 125 ng/ml, o un incremento de aproximadamente 50 %. El mismo nivel se alcanzará más rápido si se incrementa la velocidad de difusión, o si se usa una inyección de bolo. Resultados de infusión mayores darán por resultado mayores niveles si la infusión se continuó hasta que se obtiene estado estable. El nivel de estado estable para la administración de ala-TFPI a aproximadamente 0.050 mg/kg/hr se encontró que es aproximadamente 300 ng/ml, y para administración de ala-TFPI a aproximadamente 0.33 o aproximadamente 0.66 mg/kg/hr se encontró que es aproximadamente 2 mg/ml en pacientes que sufren de sepsis. La dosis total diaria administrada • a un hospedador en una infusión continua individual o en dosis divididas de infusión puede estar en cantidades, por ejemplo, equivalentes a la administración de al menos aproximadamente 0.006 mg/kg/día o menos de aproximadamente 1.2 mg/kg/día de ala-TFPI, más usualmente equivalente a la administración de aproximadamente 0.24 mg/kg/día a menos de aproximadamente 1.2- mg/kg/día de ala-TFPI, y de manera preferente equivalente a aproximadamente 0.6 mg/kg/día de ala-TFPI . Cantidades menores dentro de este intervalo pueden ser útiles para propósitos profilácticos u otros. Dosis mayores por arriba de este intervalo pueden ser útiles para el tratamiento de CAP severa. Los protocolos de dosificación de la invención también se pueden expresar como la dosis total administrada al paciente. La dosis total es el producto matemático de la velocidad de infusión y el tiempo total de infusión. Por ejemplo, a la velocidad preferida de dosis de aproximadamente 0.025. mg/kg/hr para ala-TFPI y el tiempo preferido de infusión de 96 horas, la dosis total es aproximadamente 2.4 mg de ala-TFPI por kg de peso corporal . En una modalidad, la velocidad preferida de dosis de aproximadamente 0.25 mg/kg/hr para ala-TFPI y el tiempo preferido de infusión de 96 horas, la dosis total es de aproximadamente 24 mg de ala-TFPI por kg de peso corporal . En una modalidad, la velocidad preferida de dosis de aproximadamente 0.75 mg/kg/hr para ala-TFPI y el tiempo preferido de infusión de 96 horas, la dosis total es aproximadamente 72 mg de ala-TFPl por kg de peso corporal . En otra modalidad, la dosis total de TFPl administrada de acuerdo a la invención es equivalente a al menos aproximadamente 0.75 mg/kg y menos de aproximadamente 4.8 mg/kg de ala-TFPI . De manera preferente, la dosis total es equivalente a al menos aproximadamente 1 mg/kg y menos de aproximadamente 4.8 mg/kg de ala-TFPI . De manera más preferente, la dosis total es equivalente a aproximadamente 2.4 mg/kg de ala-TFPI . Un factor que se puede ajustar para usar el régimen de dosis es la función de coagulación del paciente individual, que se mide típicamente usando un ensayo de tiempo de protrombina (PT) , una Relación Normalizada Internacional (INR) . La INR es la estandarización del ensayo de PT en el cual el ensayo se calibra contra un reactivo de tromboplastina de referencia internacional . Ver, por ejemplo. R. S. Riley et al., J. Clin. Lab. Anal. 14:101-114 (2000). La respuesta de INR a ala-TFPI en voluntarios humanos saludables es aproximadamente lineal sobre el intervalo visto de concentraciones en plasma (Figura 3) . El cambio total en la INR es 1.2 unidades por 1 mg/ml de incremento de la concentración en plasma de ala- TFPI. En un modelo farmacodinámico, la respuesta de INR a ala-TFPI se describe mejor por un modelo logarítmico- lineal en el cual el logaritmo de INR se relacionó linealmente a la concentración en plasma de ala-TFPI . La naturaleza logarítmica-lineal de la respuesta significa que el sujeto con INR elevada en la línea base es probable que experimente mayores respuestas anticoagulantes que los sujetos con bajos niveles de línea base quienes tienen niveles similares de ala-TFPI en circulación. Los regímenes de dosis descritos anteriormente, incluyendo la velocidad de dosis en una base de mg/kg/hr y dosis diaria total, se expresan como una dosis "equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia" . Esto significa que se determinan de manera cuantitativa por normalización a una dosis de "ala-TFPI de referencia" que se define como ala-TFPI, no glicosilado, biológicamente activo, apropiadamente plegado, 100 % puro (en base a la proteína), maduro. El ala-TFPI es un análogo de TFPl cuya secuencia de aminoácidos se representa en SEQ ID No : 2.

También se pueden usar otras formas de TFPl en la invención, incluyendo TFPl de longitud completa y análogos del mismo. Para determinar el intervalo apropiado de dosificación para la práctica de la invención con formas de TFPl diferentes de ala-TFPI y con preparaciones de ala-TFPI u otro análogo de TFPl que son menos de 100 % puros, los intervalos de dosificación descritos en la presente para ala-TFPl de referencia se pueden ajustar en base a la actividad biológica intrínseca de la forma particular de TFPl y se ajustan adicionalmente en base a la pureza bioquímica de la preparación. En una modalidad preferida, el paciente no ha recibido un anticoagulante dentro de los 10 días de haber recibido la primera administración de TFPl. En una modalidad preferida, el paciente no ha recibido un anticoagulante dentro de los 7 días de haber recibido la primera administración de TFPl. De manera preferente, el paciente no ha recibido una forma de heparina dentro de las 24 horas de haber recibido la primera administración de TFPl. En una modalidad, el paciente no ha recibido heparina no fraccionada dentro de las 10 horas, de manera preferente dentro de las 12 horas de haber recibido la primera administración de TFPl. En una modalidad, el paciente no ha recibido heparina de bajo peso molecular dentro de las 20 horas, de- manera preferente dentro de las 24 horas de haber recibido la primera administración de TFPl. En una modalidad, el paciente no ha recibido drotrecogin-alfa dentro de las 10 horas, de manera preferente dentro de las 12 horas de haber recibido la primera administración de TFPl . La actividad biológica intrínseca de TFPl o un análogo de TFPl se refiere a la actividad específica, como se define por el ensayo de protrombina, del TFPl apropiadamente plegado, 100 % puro, maduro, o análogo de TFPl. De esta manera, la dosis equivalente se calcula como (dosis de ala-TFPI de referencia) / ( (actividad intrínseca relativa) veces (pureza bioquímica)), donde la actividad intrínseca relativa se refiere a (actividad intrínseca, del análogo) / (actividad intrínseca de ala-TFPI de referencia) . Por ejemplo, si un análogo de TFPl particular tiene una actividad biológica intrínseca que es 80 % a aquella de ala-TFPI de referencia, entonces la dosis equivalente para el análogo de TFPl particular se obtiene al dividir los valores de dosis para ala-TFPI de referencia por 0.8. Adicionalmente, si la formulación administrada a un paciente es, por ejemplo, sólo 90 % biológicamente pura, es decir, que comprende 10 % de especies moleculares que carecen de actividad biológica de TFPl, entonces una corrección adicional de los valores de dosis de referencia para ala-TFPI se realiza al dividir los valores de dosis por 0.9. De esta manera, para un análogo hipotético de TFPl que tiene 80 % de la actividad intrínseca de ala-TFPI si es 90 % bioquímicamente puro como se administra, una velocidad o proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a 0.025 mg/kg/hr sería 0.347 mg/kg/hr (es decir, 0.025/(0.8 veces 0.9)) . También se pueden determinar las dosis equivalentes sin conocer ya sea la actividad intrínseca o la pureza bioquímica al determinar la actividad biológica relativa. Se puede determinar la actividad biológica relativa al comparar un análogo de TFPl particular a una norma de actividad biológica de TFPl usando el ensayo de tiempo de protrombina. Por ejemplo, el ala-TFPI producido de acuerdo al método del Ejemplo 9 de la WO 96/40784, que contiene aproximadamente 85 % de especies moleculares de TFPl biológicamente activas, se puede usar como una norma de actividad biológica de TFPl. El ala-TFPI producido de acuerdo al método del Ejemplo 9 de WO 96/40784 tiene aproximadamente 85 % de la actividad de ala-TFPI de referencia en el ensayo de protrombina. Al graficar una curva de norma-tiempo de protrombina, el logaritmo de tiempo de coagulación se gráfica contra el logaritmo de la concentración de TFPl . Si la norma de actividad biológica de TFPl posee 85 % de la actividad de ala-TFPI de referencia, entonces se puede preparar una curva de norma que es equivalente a aquella para ala-TFPI de referencia si las concentraciones de la norma de actividad biológica de TFPl se multiplican por 0.85 antes de graficar, de modo que la actividad graficada es equivalente a la actividad de ala-TFPI de referencia 100 % puro. Cuando el tiempo de coagulación para un análogo particular de TFPl se compara a la curva de norma, la concentración equivalente de ala-TFPI de referencia se puede leer de la curva. De manera alternativa, si la pendiente de la porción lineal de- la curva de norma se obtiene por análisis de regresión lineal, entonces la pendiente se puede corregir en base a la actividad de la norma de actividad biológica de TFPl con relación a ala-TFPI de referencia. La actividad biológica relativa de un análogo de TFPl particular de esta manera es igual a la relación de la actividad de ala-TFPI de referencia a la actividad del análogo. Por ejemplo, si un análogo particular requiere 1.43 mg para producir la misma actividad de tiempo de protrombina como 1.00 mg de ala-TFPI de referencia, entonces la actividad biológica relativa del análogo es 1.0/1.43, o 0.7. Para este análogo, la dosis equivalente a una dosis de ala-TFPI de referencia se obtiene al dividir la dosis de ala-TFPI de referencia por la actividad biológica relativa del análogo. Por ejemplo, una dosis de 0.025 mg/kg/hr para ala-TFPI de referencia será equivalente a 0.0357 mg/kg/hr del análogo (es decir, ' 0.025/0.7) . En tanto que TFPl o un análogo de TFPl se pueden administrar como el único agente farmacéutico de coagulación activo, estas moléculas también se pueden usar en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales para proporcionar una terapia de combinación para el tratamiento de neumonía severa. Estos agentes terapéuticos adicionales incluyen anticuerpos tal como por ejemplo, anti-endotoxina, anticuerpos monoclonales (por ejemplo, anticuerpos de unión a endotoxina) y productos anti-TNF tal como anticuerpo anti-TNF murino. El TFPl y análogos de TFPl también se pueden combinar con antagonistas del receptor de interleucina-1 , proteína de incremento de permeabilidad/bactericida (BPI) , inmunoestimulante, compuestos que tienen actividad antiinflamatoria tal como antagonistas de PAF, y bloqueadores de adhesión celular (por ejemplo, agentes' antiplaquetas tal como inhibidores de GPIIb/lIIa) . Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos se pueden formular como composiciones separadas que se dan al mismo tiempo o en diferentes tiempos. De manera preferente, los agentes terapéuticos adicionales se dan ya sea al mismo tiempo (es decir, durante el periodo de administración de TFPl o análogos de TFPl) o dentro de las 24 horas del periodo de administración de TFPl o análogos de TFPl (es decir, dentro de las 24 horas antes del inicio de, o dentro de las 24 horas después del final de, el periodo de administración de TFPl o análogos de TFPl) . También se pueden dar agentes terapéuticos adicionales como una composición individual junto con el TFPl o análogos de TFPl. El TFPl o un análogo de TFPl también se pueden dar en combinación con otros agentes que serán efectivos para tratar neumonía severa. Por ejemplo, lo siguiente se puede administrar en combinación con TFPl o un análogo de TFPl; los antibióticos que pueden tratar la infección bacteriana subyacente, anticuerpos monoclonales que se dirigen contra componentes de la pared celular bacteriana, receptores que pueden volverse complejos con citocinas que están comprendidas en la ruta de la neumonía severa, y en general cualquier agente o proteína que pueda interactuar con citocinas u otras rutas fisiológicas activadas o amplificadas incluyendo proteínas de complemento para atenuar neumonía severa y/o sus síntomas . Los antibióticos útiles incluyen aquellos en la categoría general de: anillos de beta-lactama (penicilina), amino-azucares en enlace glicosídico (aminoglicósidos) , anillos de lactona macrocíclicos (macrólidos) , derivados policíclicos de naftacenocarboxanido (tetraciclinas) , derivados de nitrobenceno de amortiguador dicloroacético, péptidos (bacitracina, gramicidina y polimixina) , anillos grandes con un sistema de doble enlace conjugado (polienos) , fármacos sulfa derivados de sulfanilamida (sulfonamidas) , grupos 5-nitro-2-furanilo (nitrofuranos) , ácidos quinolona-carboxílicos (ácido nalidíxico) y otros. Otros antibióticos y más versiones de los -anticuerpos específicos anteriores se pueden encontrar en Encyclopedia of Chemical Technology, 3rd Edition, Kirk-Othymer (ed.), Vol. 2, págs. 782-1036 (1978) y Vol. 3, págs. 1-78, Zinsser, MicroBiology, 17th Edition W. Joldik et al. (Eds.) págs. 235-277 (1980), or Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 27th Edition, W. B. Saunders Company (1988) . Otros agentes que se pueden combinar con TFPl o un análogo de TFPl incluyen antagonistas de endotoxinas tal como E5531 (un análogo de Lípido A, ver Asai et al., Biol.

Pharm. Bull . 22:432 (1999)), análogos de TF con actividad anticoagulante (ver, por ejemplo., Kelley et al., Blood 89:3219 (1997) y Lee & Kelley, J. Biol. Chem. 273:4149 (1998)), anticuerpos monoclonales dirigidos a citocinas, tal como aquellos anticuerpos monoclonales dirigidos a IL-6 o M- CSF, ver Solicitud de Patente de los Estados Unidos Número de Serie 07/451,218, presentada el 15 de diciembre de 1989, y anticuerpos monoclonales dirigidos a TNF (ver Cerami et al., Patente de los Estados Unidos 4,603,106), inhibidores de proteína que escinden la prohormona de TNF madura de la célula en la cual se produjo (ver Solicitud de Patente de los Estados Unidos Número de Serie 07/395,253, presentada el 16 de agosto de 1989) , antagonistas de IL-1 (ver Solicitud de Patente de los Estados Unidos Número de Serie 07/517,276, presentada el 1 de mayo de 1990) , inhibidores de la expresión de la citocina IL-6 tal como inhibinaa (ver Patente de los Estados Unidos Número 5,942,220), e inhibidores basados en receptor de varias citocinas tal como IL-1. También se pueden usar anticuerpos a complemento o inhibidores de proteína de complemento, tal como CR.sub.l, DAF, y MCP. Todas las patentes, solicitudes de patente, y referencias citadas en esta descripción se incorporan en la presente como referencia en sus totalidades. La presente invención ahora se ilustrará por referenci a los siguientes ejemplos que exponen modalidades particularmente ventajosas. Sin embargo, se debe señalar que estas modalidades son ilustrativas y no se van a considerar como que restringen la invención de ningún modo .

Ejemplos Ej emplo 1 Tratamiento con ala-TFPI de Pacientes con Neumonía severa Se valoran pacientes con neumonía severa para explorar el efecto potencial del tratamiento con ala-TFPI en un grupo relativamente homogéneo. Los pacientes con neumonía se identificaron si una fuente de sepsis documentada por el investigador se codificó como neumonía. También se pueden presentar otros sitios de infección. Debido a la dificultad en la diferenciación infecciosa de las secuelas químicas, no se incluyeron pacientes con neumonía por aspiración. Los pacientes identificados como que tienen neumonía entonces se clasificaron como que son positivos a cultivo (cualquier evidencia de infección tal como cultivo o cepa Gram) , o negativos a cultivo (cultivo negativo o cultivo no realizado) . Los pacientes se trataron por infusión intravenosa continua con una preparación de ala-TFPI no glicosilado expresado en E. coli a una dosis de 0.025 mg/kg/h formulado en un amortiguador que contiene L-arginina 300 mM, citrato de sodio 20 mM, pH 5.5, osmolaridad 560+/-110 mOsm. El placebo consistió del mismo amortiguador sin ala-TFPI y se dio por infusión a la misma proporción como el fármaco de estudio. Los resultados de estos análisis demuestran un efecto positivo del tratamiento con ala-TFPI en aquellos pacientes con neumonía positiva a cultivo (Tabla 1) . Aquellos pacientes sin evidencia de una fuente infecciosa demostraron efecto negativo.

Tabla 1. Mortalidad por Estado de Neumonía Tabla 2. Mortalidad por INR Bajo de Estado de Neumonía La mortalidad incrementada en el grupo negativo a cultivo de alta INR pareció estar presente en poblaciones de pacientes con o sin administración adicional de heparina, aunque se debe señalar que el número de sujetos en el grupo no de heparina, negativo a cultivo, de neumonía es relativamente pequeño (Tabla 3) . Se observó un fuerte efecto de tratamiento positivo en el conjunto de positivo a cultivo/sin heparina.

Tabla 3. Mortalidad por Estado de Neumonía y Heparina Ejemplo 2 Investigación de severidad de Línea Base de Variables de Enfermedad Se evaluaron varias variables de severidad de enfermedad de línea base para determinar si hubo desequilibrios en grupo que pudieran explicar el resultado observado. Estos datos indican que la diferencia de resultados asociada con el estado de cultivo no es debido a desequilibrios en la línea base. Por consiguiente, los resultados parecieron representar un efecto diferencial del tratamiento con TFPl debido a las diferencias biológicas entre los pacientes con y sin infección. A pesar del hecho que los indicadores de severidad (por ejemplo, puntuación de disfunción de órgano o puntuación APACHE II) fueron ya sea iguales al placebo o menores en el grupo negativo a cultivo con neumonía tratado con TFPl, el grupo negativo a cultivo demostró la mortalidad más alta en total (Tabla 4) .

Tabla 4. Severidad de Línea Base de Enfermedad por Estado en Neumonía La IL-6 es una citocina inflamatoria que se eleva de forma temprana en la sepsis, refleja la intensidad de la respuesta inflamatoria y se asocia con el resultado. En la línea base, los niveles de IL-6 son menores en pacientes clínicamente identificados como que tienen neumonía pero sin evidencia de infección (Tabla 5) . Esto sugiere que hay una diferencia lógica entre pacientes con una fuente infecciosa documentada de neumonía versus aquellos sin una fuente infecciosa evidente. De manera paradójica, el grupo de TFPl negativo a cultivo tiene los niveles más bajos de IL-6 de línea base para el más alto índice de mortalidad. En una población de sepsis, los niveles de IL-6 cayeron durante el tiempo. La velocidad de caída en IL-6 se reduce en sujetos negativos a cultivo, con neumonía, tratados con TFPl (Tabla 5) . Esto sugiere que el efecto biológico de TFPl puede diferir en aquellos pacientes con y sin infección.

Ejemplo 3 Análisis de Pacientes con Neumonía Severa por Tipo de Documentación de Infección Como se analiza anteriormente, se observó un beneficio en total del tratamiento con ala-TFPI en aquellos pacientes con la más alta certeza de infección, es decir, aquellos con un cultivo sanguíneo positivo. En un análisis de pacientes con neumonía severa por tipo de documentación de infección, se vio un beneficio del tratamiento con ala- TFPI en ambos sujetos con un cultivo sanguíneo positivo y aquellos con otra evidencia (Tabla 6) . El efecto fue más fuerte en el grupo de bacteremia, es decir, el grupo con la más alta probabilidad de infección o fuente de infección más demostrable .

Tabla 6. Mortalidad por Estado de Cultivo y Estado de Neumonía Como se muestra anteriormente, los pacientes con documentación de infección (sangre + "otro") se beneficiaron del tratamiento con TFPl en la ausencia de heparina. Este resultado es más probablemente debido al beneficio derivado del grupo de neumonía (Tabla 7) . Este hallazgo parece indicar que el beneficio de anticoagulantes endógenos es mayor en aquellos pacientes con infecciones pulmonares severas .

Tabla 7. Mortalidad por Estado de Infección, Estado de Neumonía y Uso de Heparina Para limitar adicionalmente la homogeneidad, los ensayos futuros se pueden enfocar en la neumonía adquirida en comunidad (CAP) . Los pacientes quienes desarrollaron neumonía en tanto están en el hospital (neumonía nosocomial) más probablemente se van a colonizar con organismos patógenos y tienen otros trastornos pulmonares que hacen más difícil la diagnosis de la neumonía infecciosa. Además, los pacientes con CAP es menos probable que se expongan a heparina que los pacientes con neumonía nosocomial. Cuando se analizaron los datos por la duración de permanencia en el hospital antes del tratamiento, se notó un beneficio similar para pacientes positivos a cultivo hospitalizados . ltoreq.2 días (adquirido en comunidad) versus aquellos hospitalizados más tiempo de dos días (nosocomial) . El efecto negativo En los pacientes negativos a cultivo se vio principalmente en el grupo nosocomial (Tabla 8) .

Tabla 8. Mortalidad por Estado en Neumonía y Tiempo de Hospitalización La presente invención se ha descrito con referencia a modalidades específicas. Sin embargo, esta solicitud se propone que cubra aquellos cambios y sustituciones que se puedan hacer por aquellos expertos en la técnica sin apartarse del espíritu y alcance de las reivindicaciones anexas .

Secuencia CWU 1 2 1 276 PRT Homo sapiens 1 Asp Ser Glu Glu Asp Ghi Glu His Thr lie lie Thr Asp Thr Glu Leu 1 5 10 15 Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp 20 25 30 Gly Pro Cys Lys Ala lie Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn lie Phe Thr 40 45 Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn 50 55 60 Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn 65 70 75 80 Ala Asn Arg lie He Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe 85 90 95 Cys Phe Leu Glu Glu Asp. Pro Gly He Cys Arg Gly Tyr He Thr Arg 100 105 110 Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly 115 120 125 Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys 130 135 140 Asn He Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr Gly 145 150 155 160 Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr Lys 165 170 175 Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr Pro 180 185 190 Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr Asn 195 200 205 Ser Val He Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly Gly 210215220 Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys Lys 225 230235 240 Lys Gly Phe He Gh Arg He Ser Lys Gly Gly Leu He Lys Thr Lys 245 250 255 Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys He Ala Tyr Glu Glu He Phe 260 265 270 Val Lys Asn Met 275 2277 PRT Homo sapiens 2 Ala Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr He He Thr Asp Thr Glu 1 5 10 15 Leu Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp 20 25 30 Asp Gly Pro Cys Lys Ala He Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn He Phe 3540 45 Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe He Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln 50 55 60 Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp 65 70 75 80 Asn Ala Asn Arg He He Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp 85 9095 Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly He Cys Arg Gly Tyr He Thr 100 105 110 Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr 115 120 125 Gly Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys 130 135 140 Lys Asn He Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr 145 150 155 160 Gly Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr 165 170 175 Lys Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr 180 185 190 Pro Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr 195200205 Asn Ser Val He Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly 210 215 220 Gly Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys 225 230235 240 Lys Lys Gly Phe He Gln Arg He Ser Lys Gly Gly Leu pe Lys Thr 245 250 255 Lys Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys He Ala Tyr Glu Glu He 260265 270 Phe Val Lys Asn Met 275 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (42)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Método para tratar o prevenir neumonía severa, caracterizado porque comprende: administrar TFPl o un análogo de TFPl a un paciente quién tiene o quien está en riesgo de tener neumonía severa por infusión intravenosa continua a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de menos de aproximadamente 1.0 mg/kg/hr y el paciente no ha recibido un anticoagulante dentro de las 24 horas de la administración de TFPl o análogo de TFPl.
2. 2. Método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glícosilado.
3. 3. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paciente tiene una infección demostrable .
4. 4. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra por infusión intravenosa continua a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de menos de aproximadamente 0.80 mg/kg/hr.
5. 5. Método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.025 a aproximadamente 0.10 mg/kg/hr y en donde el TFPl o análogo de TFPl se administra durante al menos aproximadamente 72 horas .
6. 6. Método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.010 a aproximadamente 0.10 mg/kg/hr .
7. 7. Método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado.
8. 8. Método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente al administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.020 mg/kg/hr a aproximadamente 0.08 mg/kg/hr.
9. 9. Método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosílado.
10. 10. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra durante al menos aproximadamente 96 horas.
11. 11. Método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
12. 12. Método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra por infusión intravenosa continua para proporcionar una dosis total equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una dosis total de aproximadamente 0.025 a aproximadamente 2.5 mg/kg.
13. 13. Método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
14. 14. Método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra por infusión intravenosa continua a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.02 mg/kg/hr a aproximadamente 0.09 m /kg/ r .
15. 15. Método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado.
16. 16. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra or infusión intravenosa continua para proporcionar una dosis diaria equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una dosis diaria de aproximadamente 0.06 mg/kg a aproximadamente 4 mg/kg.
17. 17. Método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
18. 18. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el análogo de TFPl comprende un primer dominio Kunitz que consiste de los aminoácidos 19-89 de SEQ ID N0:1.
19. 19. Método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el análogo de TFPl comprende además un segundo dominio Kunitz que consiste de los aminoácidos 9-160 de SEQ ID NO : 1.
20. 20. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el análogo de TFPl comprende los aminoácidos 1-160 de SEQ ID NO : 1.
21. 21. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el análogo de TFPl comprende un segundo dominio Kunitz que consiste de los aminoácidos 90-160 de SEO ID NO.-l.
22. 22. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado.
23. 23. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque TFPl o análogo de TFPl se prepara de una composición liofilizada que comprende TFPl o un análogo de TFPl.
24. 24. Método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
25. 25. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra como una formulación que comprende arginina.
26. 26. Método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
27. 27. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra como una formulación que comprende citrato.
28. 28. Método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado.
29. 29. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl tiene una concentración de aproximadamente 0.15 mg/ml de una formulación que comprende clorhidrato de arginina 300 mM y aproximadamente citrato de sodio '20 mM y que tiene un pH de aproximadamente 5.5.
30. 30. Método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
31. 31. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende administrar, al mismo tiempo como, o en el espacio de 24 horas de la administración de, TFPl o análogo de TFPl, un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un antibiótico, un anticuerpo, un antagonista de endotoxina, un análogo de factor de tejido que tiene actividad anticoagulante, un inmunoestimulante, un procreador de adhesión celular, heparina, proteína de BPI, un antagonista de IL-1, pafasa (inhibidor de enzima PAF) , un inhibidor de TNF, un inhibidor de IL-6, y un inhibidor de complemento.
32. 32. Método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
33. 33. Método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el agente adicional es un anticuerpo, en donde el anticuerpo se une de manera específica a un antígeno seleccionado del grupo que consiste de TNF, IL-6 y M-CSF.
34. 34. Método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosilado .
35. 35. Método para tratar neumonía severa, caracterizado porque comprende: administrar a un paciente (i) TFPl o un análogo de TFPl y (ii) un agente adicional seleccionado del grupo que consiste de un antibiótico, un anticuerpo monoclonal, un inhibidor de citocina, y un inhibidor de complemento.
36. 36. Método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el análogo de TFPl es ala-TFPI no glicosílado .
37. 37. Método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el paciente tiene una infección demostrable .
38. 38. Método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el TFPl o análogo de TFPl se administra por infusión intravenosa continua a una proporción de dosis equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de menos de aproximadamente 1.0 mg/kg/hr.
39. 39. Método de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 0.090 mg/kg/hr.
40. 40. Método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.002 a aproximadamente 0.050 mg/kg/hr.
41. 41. Método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.002 a aproximadamente 0.010 mg/kg/hr.
42. 42. Método de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque la proporción de dosis es equivalente a la administración de ala-TFPI de referencia a una proporción de dosis de aproximadamente 0.025 a aproximadamente 0.075 mg/kg/hr.