MXPA05010620A - Compuestos de pirrolo[1,2-b]piridazina y sus usos. - Google Patents

Abstract

Se describen nuevos antagonistas del receptor de CRF y su uso como tratamiento de una diversidad de trastornos, incluyendo los trastornos que manifiestan hipersecrecion de CRF, o asociados con CRF o receptores de CRF, como ansiedad y depresion; los antagonistas del receptor de CRF de la invencion tienen la estructura de la formula (I): (ver formula (I)), incluyendo los estereoisomeros o mezcla de estereoisomeros, profarmacos farmaceuticamente aceptables, o sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde en la formula (I), R es H o Me.

Description

COMPUESTOS DE PIRROLOri,2-B1PIRIDAZINA Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere, en general, a compuestos que se unen a receptores de CRF y, en particular, a derivados de pirrolo[1 ,2-b]piridazina sustituidos como antagonistas del receptor CRFi y a sus usos como tratamiento para trastornos que están asociados con receptores de CRF o CRFL ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El factor de liberación de corticotropina (CRF) es un péptido de 41 aminoácidos que es el principal regulador fisiológico de la secreción de péptidos derivados de propiomelanocortina (POMC) de la glándula pituitaria anterior [J. Rivier et al., Proc. Nati. Acad. Sci (USA) 80:4851 (1983); W. Vale et al., Science 213:1394 (1981)]. Además de su papel endocrino en la glándula pituitaria, se sabe que el CRF tiene una amplia distribución extrahipotalámica en el SNC, contribuyendo en él a un amplio espectro de efectos fisiológicos y de conducta autónomos coherentes con un papel neurotransmisor o neuromodulador en el cerebro [W. Vale et al., Rec. Prog. Horm. Res. 39:245 (1983); G.F. Koob, Persp. Behav. Med. 2:39 (1985); E.B. De Souza et al., J. Neurosci., 5:3189 (1985)]. Existen pruebas de que el CRF desempeña un papel importante en la integración de la respuesta en el sistema inmunológico a estresantes fisiológicos, psicológicos e inmunológicos, en trastornos psiquiátricos y enfermedades neurológicas, incluyendo depresión, trastornos relacionados con la ansiedad y trastornos de la alimentación, y en la etiología y fisiopatología de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la parálisis supranuclear progresiva y la esclerosis lateral amiotrófica, puesto que están relacionadas con la disfunción de las neuronas que producen CRF en el sistema nervioso central [J.E. Blalock, Physiological Revlews 69:1 (1989); J.E. Morley, Life Sci. 41 :527 (1987); E.B. De Souze, Hosp. Practice 23:59 (1988)]. El CRF se ha implicado en la etiología del trastorno del estado de ánimo, también denominado trastorno afectivo. Se ha demostrado que en individuos que padecen un trastorno afectivo, o una depresión mayor, la concentración de CRF en el líquido cefalorraquídeo (LCR) es significativamente mayor [C.B. Nemeroff et al., Science 226:1342 (1984); C.M. Banki et ai., Am. J. Psychiatry 144:873 (1987); R.D. France et al., Biol. Psychiatry 28:86 (1988); M. Arato et al., Biol. Psychiatry 25:355 (1989)]. Además, la densidad de receptores de CRF es significativamente menor en la corteza frontal de víctimas de suicidio, lo cual resulta coherente con una hipersecreción de CRF [C.B. Memeroff et al., Arch. Gen. Psychiatry, 45:577 (1988)]. Además, en pacientes deprimidos se observa una respuesta mitigada de la adrenocorticotropina (ACTH) al CRF (administrado por vía intravenosa) [P.W. Gold et al., Am. J. Psychiatry, 141 :619 (1984); F. Holsboer et al., Psychoneuroendocrínology 9:147 (1984); P.W. Gold et al., New Engl. J. Med. 314:1129 (1986)]. Estudios preclínicos en ratas y primates no humanos proporcionan más apoyos a la hipótesis de que la hipersecreción del CRF puede estar implicada en los síntomas que se observan en la depresión humana [R.M. Sapolsky, Aren. Gen. Psychiatry, 46:1047 (1989)]. También existen pruebas preliminares de que los antidepresivos tricíclicos pueden alterar los niveles de CRF y, por tanto, modular el número de receptores en el cerebro [Grigoriadis et al., Neuropsychopharmacology, 2:53 (1989)]. El CRF también se ha implicado en la etiología de los trastornos relacionados con la ansiedad. Los trastornos de ansiedad son un grupo de enfermedades, reconocidas en la técnica, que incluye trastornos fóbicos, estados de ansiedad, trastorno por estrés postraumático y trastornos de ansiedad atípicos [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 6a edición (1992)]. El estrés emocional es, a menudo, un factor precipitante en los trastornos de ansiedad, y estos trastornos responden, en general, a medicaciones que disminuyen la respuesta al estrés. Se sabe que niveles excesivos de CRF producen efectos ansiogénicos en modelos animales [véase, por ejemplo, Britton et al., 1982; Berridge y Dunn, 1986 y 1987]. Se han demostrado interacciones entre ansiolíticos benzodiazepínicos/no benzodiazepínicos y el CRF en diversos modelos de ansiedad por la conducta [D.R. Britton et al., Life Sci, 31 :363 (1982); C.W. Berridge y AJ. Dunn, Regul. Peptides 6:83 (1986)]. Los estudios que usan el antagonista del receptor del CRF putativo CRF -helicoidal ovino (9-41) en una variedad de paradigmas conductuales, demuestran que los agonistas producen efectos de "tipo ansiolítico" que son cualitativamente similares a los de las benzodiazepinas [C.W. Berridge and A.J. Dunn, Horm. Behav. 21 :393 (1987), Brain Research Reviews 15:71 (1990); G.F. Koob and K.T. Britton, In: Corticotropin-Releasing Factor: Basic and Clinical Studies of a Neuropeptide, E.B. De Souza and C.B. Nemeroff eds., CRC Press p.221 (1990)]. Estudios neuroquímicos, endocrinos y de unión a receptores han demostrado interacciones entre el CRF y los ansiolíticos de benzodiazepina, proporcionando aún más pruebas de la implicación del CRF en estos trastornos. El clordiazepóxido atenúa los efectos "ansiogénicos" del CRF tanto en la prueba de conflicto [K.T. Britton et al., Psychopharmacology 86:170 (1985); K.T. Britton et al., Psychopharmacology 94:306 (1988)] como en la prueba de sobresalto acústico [N.R. Swerdlow et al., Psychopharmacology 88:147 (1986)] en ratas. El antagonista del receptor de benzodiazepinas Ro 15-1788, que en el ensayo de conflicto operante no producía actividad de conducta por sí solo, invertía los efectos del CRF de una manera dependiente de la dosis, mientras que el agonista inverso de benzodiazepinas FG 7142 potenciaba las acciones del CRF [K.T. Britton et al., Psychopharmacology, 94:396 (1988)]. El uso de antagonistas de CRFi para el tratamiento del síndrome X también se ha descrito en la solicitud de patente de EE.UU. n° 09/696.822, presentada el 26 de octubre, 2000, y en la solicitud de patente europea n° 003094414, presentada el 26 de octubre, 2000. Se describen métodos para utilizar antagonistas de CRFi para tratar la insuficiencia cardíaca congestiva en el documento de EE.UU. n° de serie 09/248.073, presentado el 10 de febrero, 1999, ahora patente de EE.UU. 6.043.260 (28 de marzo, 2000). También se ha sugerido que los antagonistas de CRFi son útiles para tratar los trastornos de artritis e inflamación [Webster EL, et al., J. Rheumatol 29(6):1252 (2002); Murphy EP, et al., Arthrítis Rheum 44(4):782 (2001)]; trastornos gastrointestinales relacionados con el estrés [Gabry, K. E. et al., Molecular Psychiatry 7(5): 474 (2002)]; y trastornos de la piel [Zouboulis, C. C. et al., Proc. Nati. Acad. Scí. 99: 7148 (2002)]. En fechas recientes se ha indicado que, en un modelo animal, la exacerbación inducida por estrés de la dermatitis por contacto crónica es bloqueada por un antagonista de CRFRi selectivo, lo cual sugiere que el CRFRi está implicado en la exacerbación inducida por estrés de la dermatitis por contacto crónica, y que el antagonista de CRFRi puede ser útil para tratar este trastorno [Kaneko K., Kawana S., Arai K., Shibasaki T., Exp Dermatol 12(1 ): 47 (2003)]. El documento EP 1085021 describe compuestos de pirrolo[1 ,2-b]piridazina como inhibidores de sPLA2. Las siguientes publicaciones describen cada una compuestos antagonistas de CRFi; sin embargo, no describen los compuestos específicos proporcionados en esta memoria: WO 98/08847 (Fecha de publicación internacional 5 de marzo, 1998); WO 02/072101 (Fecha de publicación internacional 19 de septiembre, 2002); WO 02/072202 (Fecha de publicación internacional 19 de septiembre, 2002). La presente invención es una invención de selección a partir del documento WO 98/08847.

Un objetivo de la invención es proporcionar nuevos derivados de pirrolo[1 ,2-b]piridazina, que son antagonistas del receptor de CRF-|. Otro objetivo de la invención es proporcionar nuevos compuestos como tratamiento de trastornos o afecciones que están asociados con CRF o receptores CRFi, tales como trastornos de ansiedad, depresión, y trastornos relacionados con el estrés. Otro objetivo de la invención es proporcionar un método para tratar trastornos y afecciones que están asociados con el CRF o receptores CRFi, tales como trastornos de ansiedad, depresión, y trastornos relacionados con el estrés. Todavía otro objetivo de la invención es proporcionar una composición farmacéutica útil para tratar trastornos o afecciones que están asociados con el CRF o CRFi, tales como trastornos de ansiedad, depresión, y trastornos relacionados con el estrés. Existen otros objetivos de la invención que serán evidentes o aparentes a partir de la descripción de la invención en la memoria descriptiva de la solicitud.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), o un estereoisómero, una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo, que es un potente antagonista del receptor CRF-|. En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (I), o un estereoisómero, una sal farmacéuticamente aceptable, o un profármaco del mismo, que es útil para tratar un trastorno en un animal de sangre caliente, cuyo trastorno manifiesta hipersecreción de CRF, o el tratamiento de dicho trastorno se puede realizar o facilitar mediante el antagonismo de los receptores CRF-). Los ejemplos de dichos trastornos incluyen trastornos relacionados con la ansiedad, tales como estados de ansiedad, trastorno de ansiedad generalizado.trastornos de fobia, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva co-mórbida, trastorno de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de estrés postraumático, y trastornos de ansiedad atípicos; trastornos del estado de ánimo, tales como la depresión, que abarca la depresión mayor, depresión de episodios aislados, depresión recurrente, depresión inducida por maltratos a menores, y depresión posparto; distemia; trastornos bipolares; y ciclotimia; parálisis supranuclear; supresión inmunitaria; trastornos inflamatorios tales como artritis reumatoide y osteoartritis; problemas de fertilidad, entre ellos la infertilidad; dolor; asma; alergias; trastornos del sueño inducidos por estrés; percepción de dolor tal como fibromialgia; síndrome de fatiga; cefalea inducida por estrés; cáncer; infecciones por virus de la inmunodeficiencia humana (VIH); enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington; enfermedades gastrointestinales tales como úlceras, síndrome del colon irritable, enfermedad de Crohn, colon espástico, diarrea, e hipersensibilidad ¡leal y colónica postoperatoria asociada con trastornos psicopatológicos o estrés; trastornos de la alimentación tales como anorexia y bulimia nerviosa; estrés hemorrágico; episodios psicóticos inducidos por estrés; síndrome eutiroideo enfermo; síndrome de hormona antidiurética (siglas inglesas ADH) inapropiada; obesidad; traumatismo craneoencefálico; traumatismo medular; lesión neuronal isquémica tal como isquemia cerebral hipocámpica; lesión neuronal excitotóxica; epilepsia; trastornos cardiovasculares y cardiorrelacionados tales como hipertensión, taquicardia e insuficiencia cardíaca congestiva; y apoplejía; disfunciones inmunitarias que incluyen las disfunciones inmunitarias inducidas por estrés tales como fiebres inducidas por estrés, síndrome del estrés porcino, fiebre del traslado de bovinos, fibrilación paroxísmica equina, y disfunciones inducidas por el confinamiento en pollos, estrés del esquileo en ovejas o estrés en perros relacionado con la interacción persona-animal; espasmos musculares; incontinencia urinaria; demencia senil del tipo Alzheimer; demencia multiinfarto; esclerosis lateral amiotrófica; dependencias y adicciones a sustancias químicas tales como dependencia del alcohol, cocaína, heroína, benzodiazepinas, u otras drogas; osteoporosis; enanismo psicosocial, hipoglucemia, y trastornos cutáneos tales como acné, psoriasis, dermatitis por contacto crónica, y trastornos cutáneos exacerbados por el estrés. También son útiles para estimular el abandono del tabaco y el crecimiento capilar, o para tratar la pérdida de cabello. Todavía en otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), y sus estereoisómeros, sales farmacéuticamente aceptables y profármacos, para el tratamiento de un trastorno descrito antes en esta memoria. Todavía en otro aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto de fórmula (1), y sus estereoisómeros, sales farmacéuticamente aceptables y profármacos del mismo, útil para el tratamiento de un trastorno descrito antes en esta memoria. Todavía en otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención en un ensayo de unión, en el que uno o más de los compuestos pueden unirse a un marcador, en el que el marcador puede proporcionar, directa o indirectamente, una señal detectable. Los diversos marcadores incluyen radioisótopos, fluorescentes, quimiolumi-niscentes, moléculas de unión específica, partículas, por ejemplo, partículas magnéticas, y similares. Todavía en otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de los compuestos de la invención (en particular, compuestos marcados de la invención) como sondas para la localización de receptores en células y tejidos, y como patrones y reactivos para su uso en la determinación de las características de unión al receptor de los compuestos de ensayo. Los compuestos marcados de la invención se pueden usar para estudios in vitro, tales como autorradiografía de secciones de tejidos, o para métodos in vivo, por ejemplo, barrido PET o SPECT. En particular, los compuestos de la invención son útiles como patrones y reactivos para determinar la capacidad que posee un producto farmacéutico potencial para unirse al receptor CRF-i .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En . un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I) (i) o una de sus formas estereoisómeras, una de sus mezclas de formas estereoisómeras, una de sus sales farmacéuticamente aceptable o uno de sus profármacos, en el que en la fórmula (I) R es H o Me. Los compuestos proporcionados en esta memoria pueden tener uno o más centros o planos asimétricos, y todas las formas quirales (enantiómeras y diastereoisómeras) y racémicas del compuesto están incluidas en la presente invención. Los compuestos de la invención se aislan en forma racémica, o en forma ópticamente pura, por ejemplo, mediante la resolución de la forma racémica mediante métodos convencionales, como cristalización en presencia de un agente de resolución, o cromatografía utilizando, por ejemplo, una columna de HPLC quiral, o pueden sintetizarse mediante una vía de síntesis asimétrica, permitiendo la preparación de un material enantioméricamente enriquecido. La presente invención incluye todos los posibles tautómeros de los compuestos representados por la fórmula (I). Los compuestos de la invención pueden prepararse en general usando las vías sintéticas ilustradas en el Esquema 1 que se indica a continuación. Los materiales de partida están disponibles en el comercio o bien se pueden preparar mediante procedimientos conocidos en la técnica. Esquema 1 La 2-metil-3-bromo-6-metoxipiridina (1) se puede tratar con una base fuerte tal como n-butil-litio o t-butil-litio y hacer reaccionar con -metil-?- butirolactona (2) para formar la cetona 3. La oxidación del alcohol 3 para producir el aldehido 4 puede realizarse mediante un método como la oxidación de Swern, pero no se limita a éste. El compuestos de dicarbonilo 4 generado puede reaccionar con N-aminoftalimida para proporcionar el compuesto de pirrol sustituido 5. El tratamiento de 5 con hidrazina produce, por tanto, el compuesto de 1-aminopirrol 6, que puede hacerse reaccionar con un ß-cetoéster o trans-3-etoxicrotonato de etilo, en un disolvente, tal como cloroformo, tolueno o tetrahidrofurano, pero no se limita a éstos, en presencia de una cantidad catalítica de un ácido, tal como ácido p-toluenosulfónico, en un recipiente de reacción equipado con un aparato Dean-Stark con tamices moleculares, para proporcionar el compuesto bicíclico 7. El grupo hidroxilo en el compuesto 7 se puede convertir en un grupo bromo haciéndolo reaccionar con tribromuro de fósforo en bromobenceno a reflujo. El compuesto de bromo 8 generado puede someterse a una reacción de aminación catalizada con paladio (por ejemplo, Pd(OAc)2, Pd2(dba)3, etc.) (véase, Wolfe, J. P. y Buchwald, S. L, J. Org. Chem., 2000, 65, 1144) con 1-etilpropilamina, o 2-butilamina, para formar el compuesto de fórmula (I). La presente invención también incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula (I). Las sales farmacéuticamente aceptables de la invención pueden prepararse a partir de ácidos inorgánicos o ácidos orgánicos adecuados. La naturaleza de la sal no es crítica, con la condición de que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de fórmula I pueden prepararse a partir de un ácido inorgánico o a partir de un ácido orgánico. Los ejemplos de esos ácidos inorgánicos son ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Los ejemplos de esos ácidos orgánicos incluyen ácidos orgánicos de tipo alifático, cicloalifático, aromático, aralifático, heterocíclico, carboxílico y sulfónico, cuyos ejemplos son el ácido fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucurónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoico), metansulfónico, etilsulfónico, bencensulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico y galacturónico. Pueden encontrarse listas de las sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edición, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, página 1418, cuya descripción se incorpora en esta memoria por referencia. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención pueden prepararse mediante métodos químicos convencionales. En general, dichas sales se pueden preparan haciendo reaccionar las formas de base libre de los compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado, en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de ambos; prefiriéndose en general medios no acuosos tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo. En otro aspecto, la presente invención proporciona un profármaco de un compuesto de fórmula (I). El profármaco se prepara con el(los) objetivo(s) de una mejor estabilidad química, una mejor aceptación y cumplimiento por parte del paciente, una mejor biodisponibilidad, una duración prolongada de la acción, una mejor selectividad de órganos, una mejor formulación (por ejemplo, mayor hidrosolubilidad), y/o una disminución de los efectos secundarios (por ejemplo, toxicidad). Véase, por ejemplo, T. Higuchi y V. Stella, "Prodrugs as Novel Delivery Systems", volumen 14 de la A. C.S. Symposium Series; Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press (1987). Los profármacos de la invención pueden prepararse con facilidad a partir de los compuestos de fórmula (I) utilizando métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Notari, R. E., "T eory and Practice of Prodrug Kinetics," Metods in Enzymology, 1 2:309-323 (1985); Bodor, N., "Novel Approaches in Prodrug Design," Drugs of the Future, 6(3):165-182 (1981); y Bundgaard, H., "Design of Prodrugs: Bioreversible-Derivatives for Various Functional Groups and Chemical Entities," in Design of Prodrugs (ed. H. Bundgaard), Elsevier, N.Y. (1985); Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 5a edición, volumen 1 , páginas 172-178, 949-982 (1995). Por ejemplo, los profármacos de los compuestos de fórmula (l) pueden prepararse modificando el grupo amina del compuesto, de tal manera que las modificaciones se retiran, mediante manipulación rutinaria o in vivo, para producir el compuesto de origen. Los ejemplos de formas de profármacos preparados de esta manera incluyen amidas biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables y tiocarbamatos.

En otro aspecto, la invención proporciona compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los compuestos de fórmula (I), excepto por el hecho de que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o un número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno y cloro, como 3H, 1C y 1 C. Los compuestos de fórmula (I) que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/o otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de la invención. Los compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo, aquellos en los que se han incorporado isótopos radiactivos, como 3H o 1 C, son útiles en ensayos de distribución tisular del sustrato y/o fármaco. Los isótopos tritiados, es decir, 3H, y de carbono-14, es decir, 4C, son particularmente útiles en PET (tomografía de emisión de positrones). Además, la sustitución con isótopos más pesados, tal como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, el aumento de la semivida in vivo o la reducción de los requisitos de dosificación y, por tanto, pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Los compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente de esta invención pueden prepararse, en general, realizando los procedimientos sintéticos mediante la sustitución de un reactivo marcado isotópicamente por un reactivo no marcado isotópicamente.

Los compuestos de fórmula (I) son antagonistas en el receptor CRFL capaces de inhibir la unión específica del CRF al receptor CRFi, y pueden antagonizar las actividades asociadas con el CRF. La eficacia de un compuesto como antagonista del receptor de CRF puede determinarse mediante diversos métodos de ensayo. Un compuesto de fórmula (I) puede evaluarse para determinar su actividad como antagonista de CRF mediante uno o más ensayos generalmente aceptados para este fin, incluyendo (pero sin limitarse a éstos) los ensayos descritos por DeSouza et al. (J. Neuroscience 7:88, 1987) y Battaglia et al. (Synapse 1 :572, 1987). La afinidad por el receptor de CRF puede determinarse mediante estudios de unión que miden la capacidad de un compuesto para inhibir la unión de un CRF radiomarcado (por ejemplo [125 l]tirosina-CFR) a su receptor (por ejemplo receptores preparados a partir de membranas de corteza cerebral de rata). El ensayo de unión de radioligando descrito por DeSouza et al. (véase antes, 987) proporciona un ensayo para determinar la afinidad de un compuesto por el receptor del CRF. Esta actividad se calcula, de forma típica, a partir de la CI50, como la concentración de un compuesto necesaria para desplazar 50% del ligando radiomarcado del receptor, y se indica como un valor "Ki " calculado mediante la siguiente ecuación: en la que L = radioligando, y KD = afinidad del radioligando por el receptor (Cheng y Prusoff, Biochem. Pharmacol., 22:3099, 1973). En el ejemplo A, a continuación, se proporciona un ejemplo del ensayo de unión al receptor. Además de inhibir la unión al receptor de CRF, puede establecerse la actividad antagonista del receptor de CRF de un compuesto mediante la capacidad que tiene el compuesto de antagonizar una actividad asociada con CRF. Por ejemplo, se sabe que el CRF estimula diversos procesos bioquímicos, incluyendo la actividad de la adenilato-ciclasa. Por tanto, los compuestos se pueden evaluar como antagonistas del CRF por su capacidad para antagonizar la actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF, midiendo, por ejemplo, los niveles de cAMP. El ensayo de actividad de la adenilato-ciclasa estimulada por CRF descrito por Battaglia et al. (véase antes, 1987) proporciona un ensayo para determinar la capacidad de un compuesto para antagonizar la actividad de CRF. Por consiguiente, la actividad antagonista de receptor de CRF puede determinarse mediante técnicas de ensayo que incluyen, en general, un ensayo de unión inicial (como el descrito por DeSouza (véase antes, 1987)), seguido de un protocolo de selección de cAMP (como el descrito por Battaglia (véase antes, 1987)). En el ejemplo C, que se ofrece a continuación, se proporciona un ejemplo de un ensayo de actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF. Por tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para antagonizar receptores CRFi en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal un compuesto de la invención en una cantidad eficaz para antagonizar receptores CRF-|. El animal de sangre caliente es preferiblemente un mamífero, y más preferiblemente un ser humano. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para seleccionar ligandos para receptores CRFi, cuyo método comprende: a) llevar a cabo un ensayo de unión competitiva con receptores CRFi, un compuesto de fórmula (I) que esté marcado con una marca detectable, y un ligando candidato; y b) determinar la capacidad de dicho ligando candidato para desplazar dicho compuesto marcado. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para detectar receptores de CRF en un tejido, que comprende: a) poner en contacto un compuesto de fórmula (I), que está marcado con una marca detectable, con un tejido, en condiciones que permitan la unión del compuesto al tejido; y b) detectar el compuesto marcado unido al tejido. El procedimiento de ensayo para detectar receptores en tejidos es muy conocido en la técnica. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para inhibir la fijación de CRF a receptores CRF^ que comprende poner en contacto un compuesto de la invención con una solución que comprende células que expresan el receptor CRFi, en donde el compuesto está presente en la solución a una concentración suficiente para inhibir la fijación de CRF al receptor CRF-i. Un ejemplo de la línea celular que expresa el receptor CRFi y que puede ser utilizada en el ensayo in vitro son las células IMR32, conocidas en la técnica.

Los compuestos de fórmula (I), o un estereoisómero, una sal farmacéuticamente aceptable, o un profármaco del mismo, son útiles para el tratamiento de un trastorno en un animal de sangre caliente, manifestando dicho trastorno una hipersecreción de CRF, o bien el tratamiento de dicho trastorno puede realizarse o facilitarse mediante el antagonismo de los receptores CRF-]. En esta memoria se han descrito más arriba ejemplos de dichos trastornos. Por tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno descrito anteriormente en esta memoria, que comprende administrar a un animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. El animal de sangre caliente es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano. Los trastornos particulares que pueden ser tratados mediante el método de la invención incluyen preferiblemente trastornos relacionados con la ansiedad, tales como estados de ansiedad, trastorno de ansiedad generalizado, trastornos fóbicos, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva co-mórbida, trastorno de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de estrés postraumático, y trastornos de ansiedad atípicos; trastornos del estado de ánimo tales como distemia, trastornos bipolares, ciclotimia y depresión, que abarca la depresión mayor, depresión de episodios únicos, depresión recurrente, depresión inducida por maltratos a menores, y depresión posparto; dependencias y adicciones a productos químicos tales como dependencias al alcohol, cocaína, heroína, benzodiacepinas u otras drogas; trastornos inflamatorios tales como artritis reumatoide y osteoartritis; enfermedades gastrointestinales tales como úlceras, síndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, colon espástico, diarrea, e hipersensibilidad ileal y colónica postoperatoria asociada a trastornos psicopatológicos o estrés; y trastornos cutáneos tales como acné, psoriasis, dermatitis por contacto crónica, y trastornos cutáneos exacerbados por el estrés. Los trastornos concretos que pueden tratarse mediante el método de la invención incluyen, más preferiblemente, trastornos relacionados con la ansiedad, como estados de ansiedad, trastorno de ansiedad generalizada, trastornos fóbicos, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva comórbida, trastorno de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno por estrés postraumático, y trastornos de ansiedad atípicos, y trastornos del estado de ánimo, como distemia, trastornos bipolares, ciclotimia, y depresión, incluyendo depresión mayor, depresión de episodio único, depresión recurrente, depresión inducida por abusos en la infancia, y depresión postparto. Los trastornos concretos que pueden tratarse mediante el método de la invención Incluyen, aún más preferiblemente, trastorno de ansiedad generalizada y depresión mayor. Las cantidades de los compuestos de la invención terapéuticamente eficaces para tratar las enfermedades o trastornos antes descritos en un animal de sangre caliente pueden determinarse de diversas formas, conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo administrando diversas cantidades de un agente concreto a un animal que padece un trastorno concreto, y determinando después el efecto sobre el animal. De forma típica, pueden administrarse cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de esta invención por vía oral, con una dosificación del principio activo de 0,002 a 200 mg/kg de peso corporal. Normalmente será eficaz para obtener el efecto farmacológico deseado una dosis de 0,01 a 10 mg/kg en dosis divididas, de una a cuatro veces al día, o en una formulación de liberación sostenida. Sin embargo, se entenderá que los niveles de dosis específicos para cualquier paciente concreto dependerán de una diversidad de factores, que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, momento de la administración, vía de administración, y velocidad de excreción, combinación de fármacos y gravedad de la enfermedad concreta. La frecuencia de la dosificación también puede variar dependiendo del compuesto utilizado y de la enfermedad concreta tratada. Sin embargo, para el tratamiento de la mayoría de los trastornos del SNC, se prefiere un régimen de dosificación de cuatro o menos veces al día. Para el tratamiento del estrés y de la depresión, se prefiere particularmente un régimen de dosificación de una o dos veces al día. Se puede administrar un compuesto de esta invención para tratar los anteriores trastornos mediante un medio que ponga en contacto el agente activo con el lugar de acción del agente en el cuerpo de un mamífero, por ejemplo mediante administración por vía oral, tópica, dérmica, parenteral o rectal, o mediante inhalación o pulverización utilizando formas de dosificación apropiadas. El término "parenteral", tal como se utiliza en la presente memoria, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. El compuesto puede ser administrado solo, pero será administrado, en general, con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Por tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), uno de sus estereoisómeros, una de sus sales farmacéuticamente aceptable, o uno de sus profármacos, o una sal farmacéuticamente aceptable de su profármaco. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende además un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para la misma. Un "vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable" es un medio aceptado en general en la técnica para la administración de agentes biológicamente activos a animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos. Dichos vehículos se formulan generalmente según un número de factores bien conocidos dentro del alcance de los normalmente expertos en la técnica, para su determinación y justificación. Estos factores incluyen, sin limitación: el tipo y naturaleza del agente activo que se está formulando; el sujeto a quien se ha de administrar la composición que contiene el agente; la vía de administración pretendida para la composición; y la indicación terapéutica hacia la que está orientada. Se encuentran en una diversidad de fuentes fácilmente disponibles descripciones de vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados, y factores implicados en su selección, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, cuyo contenido se incorpora en esta memoria por referencia. Las composiciones previstas para un uso oral pueden estar en forma de comprimidos, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas u oleosas, gránulos o polvos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires, y pueden prepararse según métodos conocidos en la técnica. Estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y de sabor agradable. Los comprimidos contienen el principio activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables que sean adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser diluyentes inertes tales como carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, fosfato cálcico o fosfato sódico; agentes de granulación y disgregantes tales como almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes tales como almidón, gelatina o goma arábiga, y agentes lubricantes tales como estearato magnésico, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar sin revestir, o pueden revestirse mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal, y puede emplearse un material de retraso, como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso por vía oral también pueden presentarse cómo cápsulas de gelatina dura, en las cuales el principio activo está mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, en las cuales el principio activo está mezclado con agua o con un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva. Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Estos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga; los agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido presente en la naturaleza, por ejemplo lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexital, tales como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitán. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes edulcorantes, como sacarosa o sacarina. Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo los principios activos en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Pueden añadirse agentes edulcorantes como los indicados anteriormente, y agentes aromatizantes para proporcionar preparaciones orales de sabor agradable. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante, tal como el ácido ascórbico. Los polvos dispersables y los gránulos adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el principio activo mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por los mencionados anteriormente. Otros excipientes, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes, también pueden estar presentes. Los jarabes y elixires también pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Estas formulaciones también puede contener un demulcente, un conservante y agentes aromatizantes y colorantes.

Los supositorios para la administración rectal de un compuesto de la invención pueden prepararse mezclando el compuesto con un excipiente no irritante adecuado, que es sólido a temperatura normal, pero líquido a temperatura rectal y, por tanto, se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Los ejemplos de estos materiales son mantequilla de cacao y polietilenglicoles. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión oleaginosa o acuosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular según la técnica conocida, utilizando los agentes dispersantes o humectantes y de suspensión adecuados, que se han mencionado antes. La solución o suspensión inyectable estéril se puede formular en un diluyente o disolvente inocuo y aceptable por vía parenteral, por ejemplo en forma de una solución en 1 ,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran el agua, la disolución de Ringers, y una disolución isotónica de cloruro de sodio. Se emplean además, de modo convencional, aceites fijos estériles como medio disolvente o de suspensión. Para este fin puede emplearse cualquier aceite fijo suave, por ejemplo mono-o diglicéridos sintéticos. Para preparar productos inyectables se pueden utilizar, además, ácidos grasos tales como el ácido oleico. Las formas de dosificación adecuadas para la administración contienen, en general, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg de principio activo por unidad. En estas composiciones farmacéuticas, el principio activo estará presente, normalmente, en una cantidad de aproximadamente 0,5% a 95% en peso, basada en el peso total de la composición. Los ejemplos de formas de dosificación para la administración de los compuestos de esta invención incluyen los siguientes: (I) Cápsulas. Se prepara un gran número de unidades de cápsulas rellenando cápsulas de gelatina dura de dos piezas, convencionales, con 100 mg de principio activo en polvo, 150 mg de lactosa, 50 mg de celulosa y 6 mg de estearato de magnesio cada una; (2) Cápsulas de gelatina blanda. Se prepara una mezcla de principio activo en un aceite digerible, como soja, aceite de semilla de algodón o aceite de oliva, y se inyecta mediante un desplazamiento positivo, bombeándose en gelatina para formar cápsulas de gelatina blanda que contienen 100 mg del principio activo. Se lavan las cápsulas y se secan; (3) Comprimidos. Se prepara un gran número de comprimidos mediante procedimientos convencionales, de forma que la unidad de dosificación tiene 100 mg de principio activo, 0,2 mg de dióxido de silicio coloidal, 5 mg de estearato de magnesio, 275 mg de celulosa microcristalina, 11 mg de almidón y 98,8 mg de lactosa. Los revestimientos apropiados pueden aplicarse para aumentar la palatabilidad o la absorción retrasada. En otro aspecto, la presente invención proporciona un artículo manufacturado que comprende: a) un material de envasado; b) un agente farmacéutico que comprende un compuesto de la invención contenido dentro de dicho material de envasado; y c) una etiqueta o prospecto que indica que dicho agente farmacéutico puede ser utilizado para tratar uno de los trastornos descritos a continuación.

DEF1NIC10NES Se utilizan las siguientes definiciones a lo largo de la solicitud, a menos que se describa lo contrario. La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que dentro del alcance del juicio médico razonable, son adecuados para usar en contacto con los tejidos animales, incluyendo seres humanos, sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, en proporción a una relación beneficio/riesgo razonable . El término "estereoisómero" se refiere a compuestos formados por los mismos átomos unidos por los mismos enlaces, pero que tienen diferentes estructuras tridimensionales que no son intercambiables. Las estructuras tridimensionales se denominan configuraciones. Tal como se utiliza en esta memoria, el término "enantiómero" se refiere a dos estereoisómeros cuyas moléculas son imágenes especulares no superponibles entre sí. La expresión "centro quirai" se refiere a un átomo de carbono al cual están unidos cuatro grupos diferentes. Tal como se utiliza en esta memoria, el término "diastereómeros" se refiere a estereoisómeros que no son enantiómeros. Además, dos diastereómeros que tienen una configuración que sólo difiere en un centro quirai se denominan en esta memoria "epímeros". El término "racemato" o la expresión "mezcla racémica" se refieren a una mezcla de partes iguales de enantiómeros. El término "profármaco" significa un compuesto, distinto de un compuesto de fórmula (I), que se transforma in vivo para producir un compuesto de fórmula (I). La transformación puede tener lugar por diversos mecanismos tal como por hidrólisis en la sangre. Proporcionan una discusión del uso de profármacos por T. Higuchi y W. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," vol. 14 de la A.C.S. Symposium Serie, y en Bioreversible Carriers en Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987. Las expresiones "cantidad terapéuticamente eficaz," "cantidad eficaz," "cantidad terapéutica," o "dosis eficaz" significan una cantidad suficiente para provocar los efectos farmacológicos o terapéuticos deseados, produciendo, por tanto, una prevención o tratamiento eficaz de la enfermedad o afección. Las expresiones "un compuesto de la invención," "un compuesto de la presente invención," "compuestos de la presente invención," o "un compuesto según la fórmula (I)" y similares, por brevedad se refieren a los compuestos de fórmula (I), o sus estereoisómeros, sus sales farmacéuticamente aceptables, o sus profármacos, o las sales farmacéuticamente aceptables de un profármaco de los compuestos de fórmula (I). Los términos "tratamiento", "tratar", y similares pretenden incluir tanto la ralentización como la reversión del avance de un trastorno, así como la curación del trastorno. Estos términos también incluyen aliviar, mejorar, atenuar, eliminar o reducir uno o más síntomas de un trastorno o afección, incluso si el trastorno o afección no se elimina realmente, e incluso si el avance del trastorno o afección no se ralentiza o revierte en sí misma. El término "tratamiento" y términos similares también incluyen el tratamiento preventivo (por ejemplo, profiláctico) y paliativo. La prevención de la enfermedad se manifiesta mediante una prolongación o retraso de la aparición de los síntomas de la enfermedad.

EJEMPLOS Sin elaboración adicional, se cree que un experto en la técnica puede, usando la descripción precedente, poner en práctica la presente invención en su mayor extensión. Los ejemplos A-D ilustran diversos ensayos biológicos que pueden utilizarse para determinar las propiedades biológicas de los compuestos de la invención. Estos ejemplos se presentan para describir la invención con más detalle. Pretenden ¡lustrar y no limitar la invención de ninguna manera. Los expertos en la técnica reconocerán con rapidez variaciones apropiadas de los procedimientos descritos en los ejemplos. EJEMPLO A: Ensayo de unión al receptor CRFi in vitro para la evaluación de la actividad biológica A continuación se ofrece una descripción de un ensayo de unión in vitro convencional para la evaluación de la actividad biológica de un compuesto de prueba en los receptores CRFi. Se basa en un protocolo modificado descrito por De Souza (De Souza, 1987). El ensayo de unión utiliza membranas cerebrales, normalmente de ratas. Para preparar membranas cerebrales para ensayos de unión, se homogeneiza corteza frontal de rata en 10 mi de tampón para tejidos enfriado con hielo (tampón de HEPES 50 mM pH 7,0, que contiene MgCI2 10 mM, EGTA 2 mM, aprotinina 1 g/ml1 leupeptina 1 µg/ml, y pepstatina 1 g ml). El homogeneizado se centrifuga a 48.000 x g durante 10 min, y el sedimento resultante se vuelve a homogeneizar en 10 mi de tampón para tejidos. Después de otra centrifugación a 48.000 x g durante 0 minutos, se vuelve a suspender el sedimento hasta una concentración de proteína de 300 //g/ml. Los ensayos de unión se llevan a cabo en placas de 96 pocilios, con un volumen final de 300 µ\. Se inician los ensayos añadiendo 150 µ\ de suspensión de membranas a 150 //I de tampón de ensayo que contiene 125l-CRF ovino (concentración final 150 pM) y distintas concentraciones de inhibidores. El tampón de ensayo es el mismo que se describió anteriormente para la preparación de membranas, con la adición de ovoalbúmina al 0,1% y bacitracina 0,15 mM. La unión del radioligando se termina después de 2 horas a temperatura ambiente mediante filtración a través de placas de un filtro único Packard GF/C (previamente empapadas con polietilenimina al 0,3%) utilizando un recolector de células Packard. Los filtros se lavan tres veces con disolución salina tamponada con fosfato enfriada en hielo, pH 7,0, que contiene Tritón X-100 al 0,01%. Los filtros se evalúan para determinar la radiactividad en un Packard TopCount.

De manera alternativa, se pueden emplear tejidos y células que expresan naturalmente receptores CRF, tales como las células de neuroblastoma humano IMR-32 (ATCC; Hogg et al., 1996), en ensayos de unión análogos a los arriba descritos. Se considera que un compuesto es activo si tiene un valor de Ki menor que aproximadamente 10 M para la inhibición de CRF. EJEMPLO B: Ensayo de unión al receptor CRFi ex vivo para la evaluación de la actividad biológica A continuación se ofrece una descripción de un ensayo de unión al receptor CRFi ex vivo convencional para evaluar la actividad biológica de un compuesto de prueba en los receptores CRFi. Se administró dosificadamente por vía oral a ratas Sprague-Dawley, de raza Harlen, macho y en ayunas (170-210 g), o bien compuesto de prueba o bien vehículo, a través de una sonda gástrica entre las 12:30 y 2:00 de la tarde. Los compuestos se prepararon en vehículo (normalmente aceite de soja al 10%, polisorbato 80 al 5%, en H20 destilada). Dos horas después de la administración del fármaco se sacrificaron las ratas por decapitación, se disecaron rápidamente las cortezas frontales, y se colocaron en hielo seco, y después se congelaron a -80°C hasta que se realizó el análisis; se recogió sangre del tronco en tubos heparinizados, se separó el plasma mediante centrifugación (2500 r.p.m. durante 20 minutos), y se congeló a -20°C.

El día del ensayo de unión, se pesaron las muestras de tejidos y se dejaron descongelar en tampón Hepes enfriado en hielo 50 mM (que contiene MgCI2 10 mM, EGTA 2 mM, aprotinina 1 ¿/g/ml, hemisulfato de leupeptina 1 g/ml, y pepstatina A 1 //g/ml, bacitracina 0,15 mM, y ovoalbúmina al 0,1 %, pH 7,0 a 23°C), y después se homogeneizaron durante 30 segundos, con el ajuste a 5 (Polytron de Kinematica). Los homogeneizados se incubaron (dos horas, 23 °C, en la oscuridad) con [125l]-CRF (0,15 nM, NEN) en presencia de tampón de ensayo (como se describió anteriormente) o DMP-904 (10 µ?). Se finalizó el ensayo mediante filtración (placas filtrantes Packard FilterMate, GF/C); las placas se sometieron a recuento en un aparato Packard TopCount LSC; y se calcularon los fmoles totales y no-específicos a partir de las d.p.m. Los datos se expresan como porcentaje respecto a los testigos con vehículo (fmoles específicos fijados). Se determinó la significancia estadística utilizando el ensayo de la t de Student. EJEMPLO C: Inhibición de la actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF La inhibición de la actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF puede realizarse como se describió previamente [G. Battaglia et al., Synapse, 1 :572 (1987)]. Brevemente, los ensayos se llevan a cabo a 37°C durante 10 min en 200 mi de tampón que contiene Tris-HC1 100 mM (pH 7,4 a 37°C), MgCI2 10 mM, EGTA 0,4 mM, BSA al 0,1%, isobutilmetilxantina (IBMX) 1 mM, fosfocreatina-quinasa 250 unidades/ml, fosfato de creatina 5 mM, 5'-trifosfato de guanosina 100 mM, o-CRF 100 mM, péptidos antagonistas (diversas concentraciones) y 0,8 mg del tejido en peso húmedo original (aproximadamente 40-60 mg de proteína). Las reacciones se inician mediante la adición de ATP/[32P]ATP 1 mM (aproximadamente 2-4 mCi por tubo) y se finalizan mediante la adición de 100 mi de Tns-HCI 50 mM, ATP 45 mM, y dodecilsulfato de sodio al 2%. Para controlar la recuperación de cAMP, se añaden 1 mi de [3H]cAMP (aproximadamente 40.000 dpm) a cada tubo antes de la separación. La separación de [32P]cAMP a partir de [32P]ATP se realiza mediante elución secuencial en columnas Dowex y de alúmina. Como alternativa, la actividad de la adenilato-ciclasa puede evaluarse en un formato de 96 pocilios utilizando el ensayo FlashPlate de activación de adenilil-ciclasa de NEN Life Sciences, según los protocolos proporcionados. En resumen, se añade una cantidad fija de cAMP radiomarcado a placas de 96 pocilios que están prerrevestidas con anticuerpo anti-AMP cíclico. Se añaden las células o tejidos, y se estimulan en presencia o ausencia de inhibidores. El cAMP sin marcar producido por las células desplazará al cAMP radiomarcado del anticuerpo. El cAMP radiomarcado unido produce una señal de luz que puede detectarse utilizando un contador de centelleo de microplacas, como Packard TopCount. Unas cantidades mayores de cAMP sin marcar producen una disminución de la señal detectable a lo largo de un tiempo de incubación fijado (2-24 horas).

EJEMPLQ D: Ensayo biológico in vivo La actividad in vivo de un compuesto de la presente invención puede evaluarse utilizando uno cualquiera de los ensayos biológicos disponibles y aceptados dentro de la técnica. Los ejemplos de estos ensayos incluyen el ensayo de sobresalto acústico, el ensayo de subir escaleras, y el ensayo de administración crónica. Estos y otros modelos útiles para ensayar los compuestos de la presente invención han sido descritos a grandes rasgos por C.W. Berridge y A.J. Dunn, Brain Research Reviews, 15:71 (1990). Un compuesto puede ensayarse en cualquier especie de roedor o micromamífero. Aunque la presente invención se ha descrito y ejemplificado en términos de ciertas modalidades preferidas, otras modalidades serán evidentes para los expertos en la técnica. Por tanto, la invención no se limita a las modalidades concretas descritas y ejemplificadas, sino que es capaz de modificarse o variarse sin apartarse del espíritu de la invención, cuyo alcance completo se indica en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula (I): o una de sus formas estereoisómeras, o una mezcla de sus formas estereoisómeras, uno de sus profármacos farmacéuticamente aceptable, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en donde en la fórmula (I), R es H o Me.

2.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 , que es la N-(1-etilpropil)-7-(6-meto> i-2-metilpiridin-3-il)-2,6-dimetilpirrolo[1 ,2-b]piridazin-4-amina.

3.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 , que es la 7-(6-metoxi-2-metilpiridin-3-il)-2,6-dimetil-N-[(1 S)-1 -metilpropil]pirrolo[1 ,2-b]pir¡dazin-4-amina.

4.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, comprende opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. - Un método para tratar un trastorno que manifiesta una hipersecreción de CRF en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

6. - Un método para el tratamiento de un trastorno en un mamífero, pudiéndose efectuar o facilitar el tratamiento de dicho trastorno mediante el antagonismo del CRF, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

7.- Un método para seleccionar ligados para receptores de CRF, cuyo método comprende: a) llevar a cabo un ensayo de unión competitiva con un receptor de CRF, un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que está marcado con una marca detectable, y un ligando candidato; y b) determinar la capacidad de dicho ligando candidato para desplazar dicho compuesto marcado.

8 - Un método para detectar receptores de CRF en un tejido, que comprende: a) poner en contacto un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que está marcado con una marca detectable, con un tejido, en condiciones que permitan la unión del compuesto al tejido; y b) detectar el compuesto marcado unido al tejido.

9. - Un método para inhibir la unión de CRF a un receptor CRF1 ; que comprende poner en contacto un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, con células que expresan el receptor CRF^ en el que el compuesto está presente en la disolución con una concentración suficiente para inhibir la unión del CRF al receptor CRF^

10. - El método de la reivindicación 9, en el que las células son células IMR32.

1 .- Un método para tratar un trastorno en un mamífero, que comprende administrar al mamífero que lo necesite, una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el trastorno se selecciona de trastornos relacionados con la ansiedad; trastornos del estado de ánimo; parálisis supranuclear; supresión inmunitaria; artritis reumatoide; osteoartritis; infertilidad; dolor; asma; alergias; trastornos del sueño inducidos por estrés; fibromialgia; síndrome de fatiga; cefalea inducida por estrés; cáncer; infecciones por virus de la inmunodeficiencia humana; enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Parkinson; enfermedad de Huntington; úlceras gastrointestinales; síndrome del intestino irritable; enfermedad de Crohn; colon espástico; diarrea, hipersensibilidad ileal y colónica postoperatoria asociada con trastornos psicopatológicos o estrés; anorexia; bulimia nerviosa; estrés hemorrágico; episodios psicóticos inducidos por estrés; síndrome eutiroideo enfermo; síndrome de hormona antidiurética inapropíada; obesidad; traumatismo craneoencefálico; traumatismo medular; isquemia cerebral hipocámpica; lesión neurona! excitotóxica; epilepsia; hipertensión; taquicardia; insuficiencia cardiaca congestiva; apoplejía; disfunción inmunitaria inducida por estrés; espasmos musculares; incontinencia urinaria; demencia senil del tipo Alzheimer; demencia multiinfarto; esclerosis lateral amiotrófica; dependencias y adicciones a sustancias químicas; osteoporosis; enanismo psicosocial; hipoglucemia; acné; psoriasis; dermatitis por contacto crónica, y pérdida de cabello.

12. - El método según la reivindicación 1 , en el que el trastorno se selecciona de trastorno relacionado con la ansiedad y trastorno del estado de ánimo.

3. - El método según la reivindicación 12, en el que el trastorno relacionado con la ansiedad es el trastorno de ansiedad generalizada, y el trastorno del estado de ánimo es depresión mayor.

14. - Un método para estimular el crecimiento del cabello en un ser humano, que comprende administrar al ser humano que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

15.- Un método para estimular el abandono del tabaco en un ser humano, que comprende administrar al ser humano que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.