MXPA05003159A - Derivados de 6-metilpiridina, metodo para su preparacion y composicion farmaceutica antiviral que lo contiene. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se relaciona con derivados de 6-metilpiridina, utiles como un agente antiviral, y mas particularmente, con un derivado novedoso de 6-metilpiridina, que tiene un excelente efecto inhibidor en la reproduccion del virus de la Hepatitis C (HCV), representado por la siguiente formula I: (ver formula (I)) o sales farmaceuticamente aceptables del mismo, con un metodo para preparar el mismo, y con una composicion farmaceutica antiviral que comprende el compuesto como un ingrediente activo. El derivado de 6-metilipiridina de la presente invencion tiene un excelente efecto inhibidor en la reproduccion del virus de la hepatitis C (HCV) y, por lo tanto, puede utilizarse de manera ventajosa como un agente terapeutico o profilactico de la hepatitis C.

Description

DERIVADO DE O-6-METILPIRIDINA, METODO PARA PREPARAR EL MISMO Y COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA ANTIVIRAL QUE COMPRENDE EL MISMO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un derivado de 6-metilpiridina útil como un agente antiviral, y más particularmente, con un derivado de 6-metilpiridina novedoso que tiene un excelente efecto inhibidor sobre la reproducción del virus de la Hepatitis C (HCV) , representado por la siguiente fórmula I: o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, con un método para preparar el mismo, y con una composición farmacéutica antiviral, que comprende el compuesto como un ingrediente activo.

DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA RELACIONADA El virus de la Hepatitis C (HCV) es el principal agente etiológico de la hepatitis viral que no es A ni B, que es adquirido principalmente por postransfusión y comunidad. Una vez infectadas con el HCV, aproximadamente 80% de las personas infectadas, dado que su síntoma está manifestado, progresa a la hepatitis crónica, y el restante 20% de las personas infectadas, progresan a hepatitis aguda que causa cirrosis hepática, la cual finalmente, se transfiere a cáncer del hígado. De acuerdo con un reporte publicado recientemente, más de 200 millones en todo el mundo, están infectados con HCV. Por ejemplo, más de 4.5 millones de norteamericanos, están infectados con el mismo virus (El número es probablemente de 15 millones como máximo) , y más de 5 millones de Europeos son pacientes con HCV. El HCV es un miembro de la familia Flaviviridae . Más específicamente, el HCV tiene aproximadamente un genoma de ( +)- ARN (ARN de sentido positivo con una sola hebra) con un tamaño de 9.5kb, dentro de su envoltura. El genoma del ARN consiste de una región que no es de traducción en los extremos 5' y 3' (ÜTR) , y un marco abierto de lectura (ORF) grande. Este ORF se expresa como una poliproteína que incluye de 3,010 a 3,040 aminoácidos, por enzimas " celulares hospederas y se divide en 3 proteínas estructurales y 6 proteínas no estructurales, por las enzimas celulares hospederas y su propia proteasa. También, existe una región conservada de manera uniforme en el extremo 5' y el extremo 3' del genoma, respectivamente. Se cree que esta región juega un papel importante para la expresión de la proteína y la reproducción del ARN del virus . El ORF grande se expresa como una poliproteína, y a través del procesamiento cotraduccional y postraduccional, se procesa en proteínas estructurales, es decir, proteína del antígeno del núcleo (núcleo) , y proteína del antígeno de la superficie (El, E2), y proteínas no estructurales, NS2 (proteasa) , NS3 (serina proteasa, helicasa) , NS4A (cofactor de la serina proteasa) , NS4B (cofactor de la proteasa, involucrado en la resistencia) , NS5A y NS5B (ARN polimerasa dependiente del ARN, RdRp) , cada una que contribuye a la reproducción del virus . las proteínas estructurales se dividen en el núcleo, El y E2 por la señal de la peptidasa de la célula hospedera. Mientras tanto, las proteínas no estructurales, se procesan por la serina proteasa (NS3) y el cofactor (NS2, NS4A y NS4B) del virus. La proteína del antígeno del núcleo, junto con la proteína del antígeno de la superficie de la proteína estructural componen la cápside del virus, y las proteínas no estructurales como NS3 y NS5B juegan un papel importante en la reproducción del ARN del virus (Referencia: Bartenschager, R., 1997, Molecular targets .in inhibition of hepatitis C virus replication, Antivir. Chem. Chemother. 8: 281-301). De manera similar a otros Flavi irus, los extremos 5' y 3' del ARN del virus, tienen una región que no es de traducción (UTR) conservada de manera uniforme. Generalmente, se sabe que esta región juega un papel muy importante en la reproducción del virus . El extremo 5' tiene una 5'-UTR compuesta de 341 nucleótidos, y esta parte tiene la estructura de 4 tallos y espiras (I, II, III y IV) . Actualmente, esto funciona como un sitio de entrada del ribosoma- interno (IRES) , necesario para el procesamiento de la traducción para expresar la proteina. Particularmente, se ha reportado que el tallo III, que tiene la estructura más grande y la más estable con la secuencia conservada, juega la parte más esencial para la unión del ribosoma. Además, un estudio reciente, dice que las proteínas del virus se expresan por el inicio del procesamiento de la traducción de AUG que existe en el ARN único del tallo IV (Referencia: Stanley, M. Lemon y Masao Honda, 1997, Infernal ribosome entry sites within the RNA genomes of hepatitis C virus and other Flaviviruses, seminars in Virology 8:274-288) . Además, el extremo 3' tiene una 3'-UTR compuesta de 318 nucleótidos. Se sabe que esta parte juega un papel muy importante en el paso de inicio de la unión de la NS5B, una enzima esencial de la reproducción del ARN. La 3'-UTR, de acuerdo con la secuencia y la estructura terciaria, está compuesta de tres diferentes partes: -X-cola-5', que inicia desde el extremo 5' al 98avo nucleótido (98nt), -poli (U)-que tiene ÜTP consecutivamente, y el resto de 3'-UTR- . Más específicamente, la parte X-cola-5' consiste de 98 nucleótidos que tienen una secuencia muy conservada, y tiene tres estructurales de tallo y espira, formando por lo tanto una estructura terciaria muy estable. Probablemente, esto es por lo que la ' parte X-cola-5', se considera bastante esencial para la unión de la NS5B. También, se reporta que la parte -poli (U)-, induce un rastro de pirimidina, facilitando el efecto de la ARN polimerasa. Finalmente, la parte restante de la parte 3'-üTR tiene la estructura terciaria de espiras, y juega un papel importante en la unión de la NS5B. Sin embargo, se sabe que esta estructura es algo inestable. En general, se sabe que la región del extremo 3' del ARN del HCV tiene una estructura esencial en la unión de la NS5B cuando empieza la reproducción del ARN (Referencia: Yamada et al., 1996, Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus genome, Virology 223:255-281). Entre otras enzimas del HCV, la NS5B es una que está involucrada directamente en la reproducción del ARN y por lo tanto es muy importante. La NS5B es una enzima que consiste de 591 aminoácidos, qué tiene un peso molecular de aproximadamente 68kDa. Existen dos dominios de unión al ARN (RBD) , es decir, RBDl y RBD2, en la enzima NS5B. el RBD1 existe entre los aminoácidos números 83 y 194, y el RBD2 existe entre los aminoácidos números 196 y 298. Mientras tanto, los motivos esenciales de aminoácidos para la unión de la actividad del ARN son "Asp" (aminoácido número 220), "Gly" (aminoácido número 283), "Gly" (aminoácido número 317), "Asp" (aminoácido número 318), "Asp" (aminoácido número 319) y "Lys" (aminoácido número 346). Además, con la condición de que exista una plantilla de ARN del virus mismo, esta enzima puede conducir a la reacción de polimerización sin otro cebador (Referencia: Lohmann, V. et al., 1997, Biochemical properties of hepatitis C virus NS5B RNA dependent RNA polymerase and identification of amino acid sequence motifs essential for enzymatic activity, J. viral. 71:8416-8428). El genoma del ARN del HCV se aisló en 1989 mediante clonación molecular (Referencia: Choo, Q-L, et al., 1989, Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 244:359-362) . Aunque ha habido varias investigaciones de biología molecular sobre el HCV desde ese punto, siempre hubo limitaciones debido a la falta de sistemas de cultivo celular y modelos animales más efectivos. Afortunadamente, el problema anterior se ha resuelto del alguna manera por la introducción de una linea celular de hepatoma que hizo posible reproducir el HCV de manera más estable (Referencia: Lohmann, V., F. Korner, J-0 Koch, ü. Herían, L. Theilmann, R. Bartenschlarger, 1999, Replication of subgenomic hepatitis c virus RNAs in a hepatoma cell line. Science 285 :110-113) . Hasta ahora, nadie ha encontrado realmente una vacuna o compuestos terapéuticos que sean muy efectivos para el HCV. Por lo tanto, muchas compañías e institutos farmacéuticos alrededor del mundo, están tratando ahora de desarrollar compuestos terapéuticos y la prevención de la hepatitis C. Los pacientes con HCV son frecuentes en el mundo, y su frecuencia para que progresen a cirrosis hepática y/o cáncer del hígado es mucho más alta que para el HBV. También, a pesar de su alta frecuencia para progresar a la hepatitis crónica,, la investigación sobre el mecanismo de infección del virus todavía está en progreso. Las personas se infectan con HCV a través de transfusión sanguínea o medicación vía fleboclisis o tatuajes, pero la mayoría de los casos de infección con HCV tiene lugar a través del contacto directo con la .sangre. Sin embargo, 40-50% de los pacientes con HCV todavía no saben exactamente como se infectaron. En vista de esta situación, es un asunto muy urgente desarrollar una nueva vacuna y compuestos terapéuticos para tratar las enfermedades. En general, el HCV existe como diversos genotipos entre las cepas y la mutación. Una vez que una persona progresa a la hepatitis crónica partir de HCV, no es difícil observar la reinfección o coinfección debido a variantes genéticas. Debido a esto, pocos han tenido éxito en desarrollar una vacuna efectiva para el HCV. Otro ejemplo de tratamientos para el HCV, es utilizar el -interferon alfa (interferon a) . Sin embargo, este procedimiento probó no ser tan bueno debido a que los efectos del interferon alfa en diferentes genotipos del HCV fueron muy diversos, y cuando se interrumpió su administración, los pacientes recayeron en la hepatitis C en la mayoría de los casos. Por lo tanto, sería importante desarrollar un inhibidor que se una únicamente a una proteína particular del HCV con el fin de controlar la reproducción del HCV. Los mejores objetivos de tal investigación son la proteasa/helicasa de NS3 y la ARN polimerasa de NS5B del HCV. Estas enzimas son muy útiles para desarrollar agentes anti-HCV, puesto que estos tipos de enzimas no son necesarias para la célula hospedera, pero son esenciales para su propia reproducción. En otras palabras, la NS5B del HCV (ARN polimerasa dependiente del ARN) es una enzima esencial para el HCV, y esto hace a la enzima un buen objetivo para suprimir la reproducción del HCV. Ahora que el HCV no es tratado fácilmente por una vacuna, se introdujo una nueva terapia utilizando el interferón y la Ribavirina. Pero esto, causó también efectos- laterales y no fue efectiva para tratar la hepatitis C. Por ejemplo, aproximadamente 25% de los pacientes con HCV no mostraron reacción a la terapia con interferón, y aproximadamente 25% reaccionaron a la misma sólo temporalmente y recayeron a hepatitis C. El restante 50% de los pacientes mantuvieron la ALT a un nivel normal después de que se terminó el tratamiento, y su ARN del HCV se volvió negativo. Sin embargo, 50% de ellos recayó a hepatitis C en 3-6 meses. En resumen, sólo 25% de los pacientes con HCV mostraron una respuesta sostenida durante más de 6 meses. Mientras tanto, el subtipo de HCV más encontrado en los pacientes en todo el mundo es el 1 (la, Ib) , que no es tratado fácilmente por el interferón, en comparación con los subtipos 2 y 3. En el caso de la terapia en combinación con interferón y ribavirina, el efecto del tratamiento se duplicó. Lo que sabe acerca de la ribavirina es que cuando se utilizó sola, mostró poco efecto en el HCV y en su lugar, causó efectos laterales como anemia eritoclástica . Asi, la ribavirina se prescribió sólo cuando la terapia con interferón no era buena o se recaía nuevamente en la hepatitis C. Hasta ahora, nadie ha desarrollado realmente un agente antiviral para tratar la hepatitis C, suprimiendo la reproducción del HCV. Por lo tanto, la presente invención está dirigida al desarrollo de una molécula pequeña que no sea de nucleósido, que tenga una toxicidad y efectos laterales bajos, pero que manifieste una excelente actividad antiviral contra el HCV, estudiando cualquier compuesto posible que inhiba la actividad de la ARN polimerasa del HCV recombinante (NS5B, ARN polimerasa) . Después de hacer tantos esfuerzos para desarrollar un compuesto con excelente actividad antiviral contra el HCV, como un intento para desarrollar nuevos compuestos terapéuticos para el HCV que tengan toxicidad y efectos laterales bajos, los inventores finalmente tuvieron éxito en sintetizar un nuevo derivado de 6-metilpiridina representado por la fórmula química I anterior, y probaron que este compuesto es en realidad, muy efectivo para inhibir la reproducción del HCV.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar un derivado de 6-metilpiridina, que sea efectivo para inhibir la reproducción del HCV, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y un método para preparar el compuesto. Otro objeto de la presente invención, es proporcionar una composición farmacéutica que comprenda el compuesto anterior como un componente .efectivo, que tenga bajos efectos laterales y que sea económico, para la prevención y el ¦ tratamiento de la hepatitis C. Para lograr los objetos anteriores, la presente invención proporciona un nuevo derivado de 6-metilpiridina, representado por la fórmula I mostrada a continuación, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Como se mencionó anteriormente, el compuesto anterior, puede utilizarse en la forma de las sales farmacéuticamente aceptables. Para ·. las sales, estén disponibles las sales de adición de ácido, que se preparan mediante ácidos libres farmacéuticamente aceptables. El compuesto con la fórmula química I, puede formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables siguiendo el método convencional en la técnica relacionada. Para los ácidos libres, pueden utilizarse tanto ácidos orgánicos como ácidos inorgánicos. Por ejemplo, los ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, acido bromhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos incluyen ácido cítrico, ácido acético, ácido láctico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido oxálico, ácido trifluoroacético, ácido benzoico, ácido glucónico, ácido metansulfónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido 4-toluensulfónico, ácido glutámico o ácido aspártico. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para preparar el derivado de 6-metilpiridina, representado por el siguiente esquema de reacción: Como se muestra en el esquema de reacción anterior, el derivado de 6-metilpiridina de la presente invención, representado por la fórmula química I, se prepara haciendo reaccionar el ácido 2-cloro-6-metilnicotínico de la fórmula química II con la 4- (4-morfolino) anilina de la fórmula química III. La materia prima, es decir, el ácido 2-cloro-6-metilnicotínico de la fórmula química II, y el reactivo, es decir la 4-(4-morfolino) anilina de la fórmula química III, son compuestos químicos disponibles comercialmente para que cualquiera los obtenga. Para dar más detalles sobre el método de preparación descrito anteriormente, las reacciones se realizan en solventes orgánicos tales como metanol, etanol, isopropanol, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, '?,?-dimetilformamida, acetona y lo similar, y en la presencia de bases orgánicas terciarias débiles, tales como piridina, 2 , 6-lutidina, 4-dimetilaminopiridina, N,iV-dimetilanilina y lo similar, durante un periodo de tiempo relativamente largo, a saber, de un día a 6 días, a una temperatura en el intervalo de 40-80°C. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas para el tratamiento y la prevención de la hepatitis C, que contienen el derivado de 6-metilpiridina representado por la fórmula química I y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, como un ingrediente activo.

Los compuestos de la fórmula química I como los compuestos terapéuticos para la hepatitis C, pueden administrarse oralmente, así como a través de otras rutas en usos clínicos, y pueden utilizarse en forma de fármacos generales. Si necesita prepararse, puede emplearse un diluyente utilizado generalmente, incluyendo un relleno, constituyente, aglutinante, humectante, agente de desintegración o tensoactivo o excipiente. Mientras tanto, la preparación sólida para la administración oral incluye tabletas, pildoras, polvos, gránulos o cápsulas. Esta preparación sólida involucra el compuesto de la fórmula química I, y más de un excipiente, por ejemplo, almidón, carbonato de calcio, sucrosa o lactosa o gelatina. Para la preparación líquida para la administración oral, puede utilizarse una suspensión, solución, medicina oleosa o jarabe, pero también puede emplear un diluyente simple, a saber, agua, parafina líquida u otros tipos de excipientes, por ejemplo, un humectante, agente edulcorante, odorante o conservador. Para la preparación líquida para la administración no oral, puede utilizarse una solución acuosa esterilizada, un solvente no acuoso, suspensión o medicina oleosa. El solvente y la suspensión no acuosos utilizados de manera preferida son el propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal tal como aceite de oliva, y ésteres inyectables, tal como oleato de etilo.

La dosis efectiva del compuesto de la fórmula química I, se controla dependiendo del sexo, la edad y condición del paciente. En general, puede dosificarse a adultos con 10-1000 mg/día, de manera más preferida, 20-500 mg/día, o dividido de una a tres veces por día.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA MODALIDAD PREFERIDA Ahora, la presente invención se explica con detalle mediante los siguientes ejemplos. Sin embargo, los ejemplos se proporcionan para ilustración de la presente invención, no para limitación de la misma.

Ejemplo 1: Preparación del ácido 6-metil-2- [4- ( -moríolino) anilino]nicotínico 5 g del ácido 2-cloro-6-metilnicotínico, 5.45 g de la 4- ( -morfolino) anilina, y 7.2 mi de piridina, se agregaron a 100 mi de cloroformo. La mezcla se calentó a 60°C y se agitó durante cinco días a 60°C. Cuando la reacción termino, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y una pequeña cantidad del sólido precipitado se filtró y lavó con 10 mi de cloroformo para eliminar las impurezas . El solvente de cloroformo se concentró bajo presión reducida y el residuo se cristalizó con 60 mi de metanol, y se agitó durante 1 hora. El producto se filtró, se lavó dos veces con 10 mi de metanol y se secó in vacuo a 35-45°C, para dar 7.31 g del compuesto deseado (80% de rendimiento) . P. f.: 220-221°C 1H-RMN (DMSO-dg), ppm: d 2.39 (s, 3H) , 3.04 (t, 4H) , 3.73 (t, 4H), 6.61 (dd, 1H) , 6.89 (d, 2H) , 1.57 (dd, 2H) , 8.05 (dd, 1H) , 10.21 (s, 1H) .

Ejemplo experimental 1; prueba del efecto inhibidor sobre la actividad de la ARN Polimerasa del HCV (ARN polimerasa dependiente del ARN , NS5B) in vitro Los siguientes experimentos in vitro se realizaron para encontrar el efecto de la actividad de inhibición de los compuestos de la presente invención contra la ARN Polimerasa del HCV (ARN polimerasa dependiente del ARN, NS5B) .

Constructo de la ARN polimerasa del HCV recombinante El ARN polimerasa del HCV se preparó como sigue. El ADNc del HCV se obtuvo de la sangre de un paciente con HCV del tipo HCV-lb y la región NS5B (1773pb) se amplificó mediante PCR y se clonó en pVLHIS, un vector de transferencia del baculovirus, para preparar el vector de transferencia recombinante. El vector de transferencia preparado y el vector de AcNPV del tipo silvestre, se cotransfectaron en la linea celular Sf 9 para proporcionar un baculovirus recombinante con el . vector pVLHIS-NS5B recombinante, marcado con histidina. Se infectaron células de insecto cultivadas de manera suficiente con el baculovirus recombinante resultante, y se cultivaron en medio de Grace que contiene 10% de FBS durante 3-4 días. El caldo de cultivo se centrifugó para obtener únicamente las células infectadas. Las células se lavaron tres veces con PBS, y se resuspendieron en amortiguador de unión [fosfato de Na 50 m (pH 8.0), NaCl 30 mM, imidazol 10 mM, DTT 1 mM, 10% de glicerol, 1% de NP-40] , se sometieron a sonicación y se obtuvo el lisado aclarado. La NS5B recombinante se purificó mediante cromatografía en columna por afinidad utilizando resina de unión Ni-NTA His (Novagen) , para producir la proteína NS5B pura. La NS5B marcada con (His)6 se unió a la resina Ni-NTA y se lavó con el amortiguador de unión que contiene imidazol 50 mM. La NS5B unida, se eluyó con el amortiguador de unión que contiene imidazol de una manera con gradiente gradual (100-300 mM) . Las fracciones de la proteína NS5B se dializaron contra el amortiguador [Tris-HCl 50 mM, NaCl 50 mM, DTT 1 mM, 5 mg de MgCl2, 10% de glicerol] , seguido por a -70°C (sic) en una pequeña alícuota.

Constructo de la plantilla de ARN que contiene el extremo 3' del HCV (3'-UTR) La plantilla de ARN que contiene el extremo 3' del HCV (3'-UTR) , se preparó como sigue. El ADNc de la 3'UTR (220 pb) del HCV, se obtuvo del ARN del HCV Ib de la sangre de un paciente con hepatitis C mediante PCR, y se clonó en el vector pcDNA3. El fragmento de ADN linealizado que contiene la 3'-UTR, se preparó utilizando la enzima de restricción, EcoRI, y se utilizó para temperar la transcripción in vitro utilizando la ARN polimerasa T7 para preparar el fragmento de ARN que contiene la 3'-UTR.

Medición de la actividad inhibidora de los compuestos de la presente invención en la ARN Polimerasa del HCV recombinan e in vitro La actividad inhibidora in vitro de los compuestos de la presente invención contra la ARN polimerasa del HCV recombinante, se midió como sigue. Se preparó una placa con pozos de cubierta con estreptavidina, adecuada para que la muestra se examine. 25 µ? de amortiguador de ensayo 2X [Tris-Cl 50 mM (pH 7.5), NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, KC1 20 mM, EDTA 1 mM, DTT 1 mM] y 10 µ? de ARN polimerasa de HCV purificada, 200 ng y el ARN de la plantilla de la 3'-UTR se agregan a cada pozo. A continuación, se agregaron 5 µ? de la muestra a ser examinada para tener concentraciones finales de 10, 1, 0.1 y 0.01 µg/ml. Finalmente, se agregaron a cada pozo 10 mi de una solución de reactivo que contiene DIG-(digoxigenina) -ÜTP, biotina-ÜTP, ATP, CTP, GTP y UTP como un nucleótido para la reacción de la polimerasa con la plantilla del ARN del ARN de la 3'-UTR del HCV. La mezcla de reacción se incubó a 22 °C durante 60 minutos. Mediante la acción de la polimerasa del HCV, los ARN generados recientemente que incluyen el ÜTP conjugado con biotina y DIG, se copiaron y estos nuevos ARN se pudieron unir a la estreptavidina recubierta en el pozo por el ÜTP conjugado con biotina. Después de la terminación de la reacción, la placa se lavó tres veces con 200 µ? de un amortiguador de lavado (pH 7.0, Roche Co.), para eliminar las sustancias que no reaccionaron y las impurezas. A continuación, se agregaron 100 µ? del anticuerpo secundario anti-DIG-POD (peroxidasa, Roche Co.), a cada pozo, y se incubó a 37°C durante 1 hora. Nuevamente, la placa con pozos se lavó con el amortiguador de lavado. Finalmente, se agregaron 100 µ? de ABTSR (Roche Co.) como un sustrato POD a cada pozo, y se dejó reaccionar durante 15 a 30 minutos. Se midió la densidad óptica (OD) , utilizando un lector de ELISA (Bio-Tek instrument Co . ) a 405 nm. El efecto inhibidor de la actividad de la polimerasa del HCV se calculó sustrayendo la OD del control positivo sin la muestra. Los resultados se muestran en la Tabla 1 a continuación.

[Tabla 1] Como puede observarse de la tabla anterior, se probó que el compuesto de acuerdo con la presente invención, muestra excelentes efectos inhibidores sobre la actividad de la ARN polimerasa del HCV, que juega un papel importante en la reproducción del HCV, inhibiendo por lo tanto la reproducción del HCV mediante esta propiedad. También, los compuestos de acuerdo con ' la presente invención, pueden utilizarse de manera ventajosa como un agente terapéutico o profiláctico de la hepatitis C.

Ejemplo experimental 2 : ensayo de la cito oxicidad Para encontrar la citotoxicidad del derivado de 6-metilpiridina de la fórmula química I, se realizó un experimento in vitro basándose en el ensayo MTT conocido generalmente, utilizando una linea celular HepG 2. Como resultado, se probó que el valor de CC50 del compuesto empleado para el experimento fue mayor que 100 ]ig/mlr indicando que es un compuesto seguro con una citotoxicidad extremadamente baja.

Aplicabilidad industrial Como se describió anteriormente, el derivado novedoso de 6-metilpiridina de acuerdo con la presente invención, representado por la fórmula química I, tiene un excelente efecto inhibidor en la reproducción del virus de la hepatitis C y una baja citotoxicidad. Por lo tanto, puede utilizarse de manera ventajosa como un agente terapéutico o profiláctico de la hepatitis C.

Claims (3)

1. REIVINDICACIONES : 1. ün derivado de 6-metilpiridina, representado por la siguiente fórmula I: o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
2. 2. Un método para preparar el derivado de 6-metilpiridina, haciendo reaccionar el ácido 2-cloro-6-metilnicotinico de la fórmula química II con la 4- (4-morfolino) anilina de la fórmula química III, como se muestra en el siguiente esquema de reacción:
3. 3. Una composición farmacéutica para el tratamiento y la prevención de la hepatitis C, que comprende un derivado de 6-metilpiridina, representado por la siguiente fórmula I: o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, como un ingrediente activo.