MXPA02010324A - Derivados de peptidos apo-ai/aii. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a agentes terapeuticos que imitan la actividad del peptido de helice anfipatico Apo- AI. De conformidad con la presente invencion, los compuestos de la invencion comprenden: (a) un peptido de helice anfipatico Apo-AI o un dominio de peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI, preferiblemente la secuencia de aminoacido de la SEQ ID NO:7, o secuencias derivadas de la misma por despliegue de fagos, separacion por exclusion de peptido ARN, u otras tecnicas mencionadas arriba; y (b) un vehiculo, tal como un polimero (por ejemplo, PEG o dextrano) o un dominio Fc, que se prefiere; en donde el vehiculo, preferiblemente un dominio Fc, se enlaza covalentemente al peptido de helice anfipatico Apo-AI o un dominio de peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI. El vehiculo y el peptido de helice anfipatico Apo-AI o un dominio de peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI pueden enlazarse a traves de las teminaciones N o C del peptido de helice anfipatico Apo-AI o un dominio de peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI, como se describe abajo adicionalmente. El vehiculo preferido es un dominio Fc, y el dominio Fc preferido es un dominio Fc IgG. Los peptidos de helice anfipaticos Apo-AI o dominios del peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI preferido comprenden las secuencias de aminoacido descritas en la Tabla 1. Otros peptidos de helice anfipaticos Apo-AI o dominios de peptido mimetico de helice anfipatico Apo-AI, pueden generarse por despliegue de fagos, separacion por exclusion del peptido ARN y otras tecnicas mencionadas en la presente.

Description

DERIVADOS DE PÉPTIDOS APO-AI/AII Antecedentes de la Invención. Existe una necesidad de agentes terapéuticos recombinantes o modificados que tengan una actividad de péptidos anfipáticos de hélice Apo-AI. Las proteínas recombinantes y modificadas, son una clase emergente de agentes terapéuticos. Las modificaciones útiles de agentes terapéuticos de proteínas incluyen la combinación con el dominio "Fc" de un anticuerpo y la ligadura a polímeros tales como el polietilen glicol (PEG) y el dextrano. Tales modificaciones se discuten en detalle en una solicitud de patente titulada "Péptidos modificados como agentes terapéuticos", U.S. Ser. No. 09/428,082, solicitud PCT No. WO 99/25044, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Un enfoque muy diferente para el desarrollo de los agentes terapéuticos es la separación por exclusión de una colección de péptidos. La interacción de un ligando de proteína con su receptor, toma lugar a menudo en una interfaz relativamente grande. Sin embargo, como se demuestra para la hormona del crecimiento humano y su receptor, solamente unos cuantos residuos clave en la interfaz contribuyen a la mayoría de la energía de enlace. Clackson y colaboradores, (1995), Science 267:383-6. El grueso del ligando de proteína Ref: 142906 despliega solamente los epítopes de enlace en la topología correcta, o sirve las funciones no relacionadas con el enlace. Así, se pueden enlazar moléculas de una longitud solamente de "péptido" (2 a 40 aminoácidos) a la proteína del receptor dado de un ligando de proteína grande. Tales péptidos pueden imitar la bioactividad del ligando grande de proteínas ("agonistas de péptidos") o a través del enlace competitivo, inhibir la bioactividad de un ligando grande de proteínas ("antagonistas de péptidos"). Las colecciones de péptidos de despliegue de fagos han aparecido como un método poderoso para la identificación de tales agonistas y antagonistas de péptidos. Ver por ejemplo Scott y colaboradores, (1990), Science 249: 386; Devlin y colaboradores, (1990), Science 249: 404; Pat. E.U.A. No. 5,223,409, concedida el 29 de Junio 1993; patente de E.U.A No. 5,733,731, concedida el 31 Marzo 1998; patente de E.U.A No. 5,498,530, concedida el 12 Marzo 1996; patente de E.U.A No. 5,432,018, concedida 11 Julio 1995; patente de E.U.A No. 5,338,665, concedida 16 de Agosto 1994; patente E.U.A No. 5,922,545, concedida 13 Julio 1999; WO 96/40987, publicada el 19 de Diciembre 1996; y WO 98/15833, publicada el 16 Abril 1998 (cada una de las cuales se incorpora como referencia en su totalidad) . En tales colecciones, la secuencias aleatorias de péptidos se despliegan por fusión con proteínas de recubrimiento del fago filamentoso. Típicamente, los péptidos desplegados se eluyen por afinidad contra un dominio extracelular inmovilizado con anticuerpos de un receptor. Los fagos retenidos se pueden enriquecer por rondas sucesivas de purificación por afinidad y de repropagación. Los mejores péptidos de enlace pueden formar secuencias para identificar residuos clave dentro de una o más familias de péptidos estructuralmente relacionadas. Ver por ejemplo Cwirla y colaboradores, (1997), Science 276: 1696-9, en la cual se identifican dos familias diferentes. Las secuencias de péptidos también pueden sugerir cuales residuos se pueden reemplazar seguramente por el barrido de alanina o por mutagénesis al nivel del ADN. Las colecciones de mutagénesis se pueden crear y separar por exclusión para optimizar además la secuencia de los mejores enlazadores. Lowman (1997), Ann. Rev. Biophys. Biomol . Struct. 26:401-24. El análisis estructural de la interacción proteína-proteína, se puede también usar para sugerir péptidos que imiten la actividad de enlace de ligandos grandes de proteínas. En tal análisis, la estructura de cristal puede sugerir la identidad y orientación relativa de los residuos críticos del ligando grande de proteína, a partir del cual se puede diseñar el péptido. Ver por ejemplo Takasaki y colaboradores, (1997), Nature Biotech. 15:1266-70. Estos métodos analíticos se pueden también usar para investigar la interacción entre una proteína receptora y los péptidos seleccionados por despliegue de fagos, lo cual puede sugerir una modificación adicional de los péptidos para incrementar la afinidad de enlace. Otros métodos compiten con el despliegue de fagos en la investigación de péptidos. Se puede fusionar una colección de péptidos a la terminación carboxilo del represor lac y expresarse en E.coli. Otro método basado en E.coli, permite el despliegue en la membrana externa de la célula por fusión con una lipoproteína asociada con péptidoglicanos (PAL) . De aquí en adelante, estos y otros métodos relacionados se refieren colectivamente como "despliegue de E.coli". En otro método, la traducción del ARN aleatorio, se detiene previo a la liberación del ribosoma, resultando en una colección de polipéptidos con su ARN asociado todavía colocado. De allí en adelante, este y otros métodos relacionados se refieren colectivamente como el "despliegue de ribosoma" . Otros métodos emplean péptidos ligados al ARN; por ejemplo, la tecnología de PROfusión, Phylos, Inc. Ver por ejemplo, Roberts & Szostak (1997), Proc. Nati. Acad. Sci. USA., 94:12297-303. De aquí en adelante, este y los métodos relacionados se refieren colectivamente como "separación por exclusión de péptidos de ARN" . Las colecciones de péptidos químicamente derivadas, han sido desarrolladas en las cuales los péptidos se inmovilizan en materiales estables no biológicos, tales como varillas de polietileno o resinas permeables al solvente. Otra colección de péptidos químicamente derivada usa la fotolitografía para barrer péptidos inmovilizados en portaobjetos de vidrio. De aquí en adelante, estos y los métodos relacionados se refieren colectivamente como "separación por exclusión química de péptidos" . La separación por exclusión química de péptidos puede ser ventajosa en que permite el uso de D-aminoácidos y otros análogos no naturales, así como elementos que no son de péptidos. Ambos métodos biológicos y químicos se revisan en Wells & Lowman (1992), Curr. Opin. Biotechnol. 3:355-62. Conceptualmente, se pueden descubrir imitaciones de péptidos de cualquier proteína que use el despliegue de fagos, separación por exclusión de péptidos de ARN, y los otros métodos antes mencionados. Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a agentes terapéuticos que tienen una actividad similar al péptido de hélice anfipático Apo-AI, pero con mejores características farmacéuticas, (por ejemplo vida media) . De conformidad con la presente invención tales compuestos comprenden: a) un péptido de hélice anfipático Apo-AI o un dominio mimético de péptido de hélice anfipático Apo-AI que tiene preferiblemente la secuencia del péptido de hélice anfipático Apo-AI, o secuencias derivadas del mismo por despliegue de fagos, separación por exclusión de péptidos de ARN, o las otras técnicas antes mencionadas, y b) un vehículo tal como un polímero (por ejemplo PEG o dextrano) o un dominio Fc que se prefiere. En donde el vehículo se coloca covalentemente al péptido de hélice anfipático Apo-AI o al dominio mimético de péptido de hélice anfipático Apo-AI. El vehículo y el péptido de hélice anfipático Apo-AI o el dominio mimético del péptido de hélice anfipático Apo-AI se pueden ligar a través de la terminación N o C del péptido de hélice anfipático Apo-AI o del dominio mimético del péptido de hélice anfipático Apo-AI como se describe además a continuación. El vehículo preferido es un dominio Fc, y el dominio Fc preferido es un dominio Fc de IgG. Los dominios miméticos de péptidos de hélice antipáticos Apo-AI se pueden generar por despliegue de fagos, separación por exclusión de péptidos de ARN y las otras técnicas aquí mencionadas. Además de conformidad con la presente invención, está un proceso para la elaboración de agentes terapéuticos que tienen una actividad de péptidos de hélice anfipáticos Apo-AI que comprende : a. seleccionar al menos un péptido que tiene una actividad de péptido de hélice anfipático Apo-AI; y b. ligar covalentemente al péptido a un vehículo. El vehículo preferido es un dominio Fc . La etapa (a) se lleva a cabo preferiblemente por la selección SEQ ID NO: 7 o una secuencia aleatorizada de la misma a partir de un despliegue de fagos, separación por exclusión de péptidos de ARN o las otras técnicas aquí mencionadas. Los compuestos de esta invención se pueden preparar por métodos sintéticos estándar, técnicas recombinantes de ADN o cualesquiera de otros métodos para preparación de péptidos y proteínas de fusión. Los compuestos de esta invención que abarcan porciones que no son de péptidos, se pueden sintetizar por reacciones de química orgánica estándar, además de las reacciones estándar de química de péptidos cuando sea aplicable. El uso principal contemplado para los compuestos de esta invención es como agentes terapéuticos o profilácticos. El péptido ligado al vehículo puede tener una actividad comparable al -o aún superior a- ligando natural imitado por el péptido. Los compuestos de esta invención se pueden usar para propósitos terapéuticos o profilácticos, al formularlos con materiales portadores farmacéuticos apropiados, y administrarlos en una cantidad efectiva a un paciente tal como un humano (u otro mamífero) que necesite del mismo. Se incluyen también otros aspectos relacionados en la invención actual . Aspectos y ventajas adicionales diversas de la presente invención, serán evidentes con la consideración de las figuras y la descripción detallada de la invención. Breve Descripción de las Figuras . Las Figuras 1A-1F muestran dímeros Fc ejemplares que se pueden derivar de un anticuerpo IgGl. "Fe" en la figura, representa cualesquiera de las variantes Fc dentro del significado de "dominio Fc" en la presente. "X1" y "X2" representan péptidos o combinaciones de péptido-enlazador como se definen de aquí en adelante. Los dímeros específicos son como siguen: Figura ÍA, Figura ID: dímeros enlazados a un disulfuro simple. Los anticuerpos IgGl tienen típicamente dos enlaces de disulfuro en la región de articulación entre los dominios constante y variable. El dominio Fc en las figuras 2A y 2D se pueden formar por el truncamiento entre los dos sitios de enlace de disulfuro o por substitución de un residuo de cisteinilo con un residuo no reactivo (por ejemplo, alanilo) . En la figura 2A, el dominio Fc se liga a la terminación amino de los péptidos en 2D, en la terminación carboxilo. Figura IB, Figura ÍE: dímeros de enlace doble de disulfuro. Este dominio Fc se puede formar por el truncamiento del anticuerpo precursor, para mantener los residuos de cisteinilo en las cadenas del dominio Fc, o por la expresión a partir de un constructo que incluye una secuencia que codifica tal dominio Fc . En la figura 2B, el dominio Fc se liga en la terminación amino de los péptidos; en 2E en la terminación carboxilo. Figura ÍC, Figura 1F: dímeros no covalentes. Este dominio Fc se puede formar por la eliminación de los residuos de cisteinilo por truncamiento o sustitución. Se puede desear eliminar los residuos de cisteinilo para evitar impurezas formadas por la reacción del residuo de cisteinilo con residuos de cisteinilo de otras proteínas presentes en la célula hospedera. El enlace no covalente de los dominios Fc es suficiente para mantener unido al dímero. Se pueden formar otros dímeros al usar los dominios Fc derivados de diferentes tipos de anticuerpos (por ejemplo, IgG2, IgM) . Las figuras 2A-2C, muestran la estructura de los compuestos preferidos de la invención, que caracterizan las repeticiones en tándem del péptido farmacológicamente activo.

La figura 2A muestra una molécula de cadena sencilla y también puede representar el constructo ADN para la molécula.

La figura 2B muestra un dímero en el cual la porción del péptido enlazador está presente sobre solamente una cadena del dímero. La figura 2C muestra un dímero que tiene la porción de péptido en ambas cadenas. El dímero de la figura 2C se formará espontáneamente en ciertas células hospederas con la expresión de un constructo de ADN que codifica la cadena sencilla mostrada en la figura 3A. En otras células hospederas, las células se pueden colocar en condiciones que favorezcan la formación de dímeros o se puedan formar los dímeros in vitro. Las Figuras 3A-3B muestran secuencias ejemplares de ácido nucleico y de aminoácidos (SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente) del Fc de IgGl humana, que se puede usar en esta invención. Descripción Detallada de la invención Definición de Términos . Los términos utilizados a través de esta descripción se definen como sigue, a menos que se limiten de otra manera en casos específicos. El término "comprende" significa que un compuesto puede incluir aminoácidos adicionales en alguna o ambas de las terminaciones N o C de una secuencia dada. Por supuesto, estos aminoácidos adicionales no interferirán significativamente con la actividad del compuesto. El término "residuo ácido" se refiere a residuos de aminoácidos en forma D o L que tienen cadenas laterales que comprenden grupos ácidos. Los residuos ácidos ejemplares incluyen D y E. El término "residuo aromático" se refiere a residuos de aminoácidos en la forma D o L que tienen cadenas laterales que contienen grupos aromáticos. Los residuos aromáticos ejemplares incluyen F, Y, y W.

El término "residuo básico" se refiere a residuos de aminoácidos en forma D o L que tiene cadenas laterales que comprenden grupos básicos. Los residuos básicos ejemplares incluyen H, K, y R. El término "residuo hidrofílico" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D o L que tiene cadenas laterales que comprenden grupos polares. Los residuos hidrofílicos ejemplares incluyen C, S, T, N, y Q. El término "residuo no funcional" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D o L, que tienen cadenas laterales que carecen de grupos ácidos, básicos o aromáticos. Los residuos neutrales de aminoácidos ejemplares incluyen M, G, A, V, I, L y norleucina (Nie) . El término "vehículo" se refiere a una molécula que evita la degradación y/o incrementa la vida media, reduce la toxicidad, reduce la inmunogenicidad, o incrementa la actividad biológica de una proteína terapéutica. Los vehículos ejemplares incluyen un dominio Fc (que se prefiere) así como un polímero lineal (por ejemplo, polietilen glicol (PEG), polilisina, dextrano, etc.); un polímero de cadena ramificado (ver por ejemplo patente de E.U.A No. 4,289,872 para Denkenwalter y colaboradores, concedida el 15 Septiembre 1981; 5,229,490 para Tam, concedida el 20 Julio 1993; WO 93/21259 por Frechet y colaboradores, publicada el 28 Octubre 1993) ; un lípido; un grupo colesterol (tal como un esteroide) un carbohidrato u oligosacárido (por ejemplo dextrano) o cualquier proteína natural o sintética, polipéptido o péptido que se enlaza a un receptor de rescate. Los vehículos se describen además posteriormente. El término "Fc de origen" se refiere a una molécula o secuencia que comprende la secuencia de un fragmento de enlace no antígeno, que resulta de la digestión del anticuerpo completo, ya sea en forma monomérica o multimérica. La fuente original de inmunoglobulina del Fc de origen es preferiblemente de origen humano, y puede ser cualquiera de las inmunoglobulinas, aunque se prefieren IgGl y IgG2. Las Fc de origen se hacen de polipéptidos monoméricos que se pueden ligar en formas diméricas o multiméricas por asociación covalente (esto es, enlaces disulfuro) y no covalentes. El número de enlaces disulfuro intermoleculares entre las subunidades monoméricas de las moléculas nativas Fc, va desde 1 hasta 4 dependiendo de la clase (por ejemplo, IgG, IgA, IgE) o subclase (por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgAl, IgGA2) . Un ejemplo de un Fc de origen es un dímero enlazado a disulfuro que resulta de la digestión de la papaína de un IgG (ver Ellison y colaboradores, (1982), Nucleic Acids Res. 10:4071-9). El término "Fc de origen" como se usa en la presente, es genérico para las formas monoméricas, diméricas y multiméricas. El término "variante Fc" se refiere a una molécula o secuencia que se modifica de un Fc de origen pero comprende todavía un sitio de enlace para el receptor de rescate, FcRn. Las solicitudes internacionales WO 97/34631 (publicada el 25 de Septiembre de 1997) y WO 96/32478 describen variantes ejemplares de Fc, así como la interacción con el receptor de rescate, y se incorporan por lo cual como referencia en su totalidad. Así, el término "variante Fc" comprende una molécula o una secuencia que está humanizada de un Fc de origen no humano. Adicionalmente, un Fc de origen comprende sitios que se pueden eliminar porque proporcionan características estructurales o actividad biológica que no se requiere para las moléculas de fusión de la presente invención. Así, el término "variante Fc" comprende una molécula o secuencia que carece de uno o más sitios o residuos de origen Fc, que afectan o están involucrados en (1) formación del enlace disulfuro, (2) incompatibilidad con una célula hospedera seleccionada (3) heterogeneidad en la terminal N con la expresión en una célula hospedera seleccionada, (4) glicosilación, (5) interacción con el complemento, (6) enlace a un receptor Fc diferente a un receptor de rescate, o (7) citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (DAC) . Se describen las variantes Fc en mayor detalle a continuación. El término "dominio Fc" abarca las moléculas variantes Fc y el Fc de origen y las secuencias como se definen arriba.

Como con las variantes Fc y los Fc de origen, el término "dominio Fc" incluye moléculas en forma " monomérica o multimérica, ya sea digerida de un anticuerpo entero o producidas por otros medios. El término "multímero" como se aplica a los dominios o moléculas Fc, que comprende dominios Fc se refiere a moléculas que tienen dos o más cadenas de polipéptidos asociadas covalentemente, no covalentemente o por interacciones covalentes y no covalentes. Las moléculas IgG forman típicamente dímeros; IgM, pentámeros; IgD, dímeros; e IgA, monómeros, dímeros, trímeros, o tetrámeros. Los multímeros se pueden formar al explotar la secuencia y la actividad resultante de la fuente de IgG de origen de Fc o al derivar (como se define abajo) tal Fc de origen. El término "dímero" cuando se aplica a dominios o moléculas Fc que comprenden dominios Fc, se refiere a moléculas que tienen dos cadenas de polipéptidos asociadas covalente o no covalentemente. Así, los dímeros ejemplares dentro del alcance de esta invención son como se muestran en la figura 2. Los términos "derivado" y "derivables" o "derivado" comprende procesos y compuestos resultantes respectivamente en los cuales (1) el compuesto tiene una porción cíclica; por ejemplo, reticulado entre residuos de cisteinilo dentro del compuesto; (2) el compuesto está reticulado o tiene un sitio de reticulación; por ejemplo, el compuesto tiene un residuo de cisteinilo y forma así dímeros reticulados n cultivo o in vivo; (3) una o más ligaduras de peptidilo de reemplazan por una ligadura que no es de peptidilo; (4) la terminación N se reemplaza por -NRR1, -NRCÍOJOR1, -NRS(0)2R1, NHC (0) NHR, un grupo succinimida, o un benciloxicarbonilo-NH-substituido o no substituido, en donde R y R1 y los substituyentes de anillo son como se definen hasta aquí; (5) la terminación C se reemplaza por -C(0)R2 o -NR3R4 en donde R2, R3 y R4 son como se definieron hasta aquí; y (6) compuestos en los cuales se modifican las porciones individuales de aminoácidos a través del tratamiento con agentes capaces de reaccionar con las cadenas laterales seleccionadas o los residuos terminales. Los derivados se describen además posteriormente. El término "péptido" se refiere a moléculas de 3 hasta 40 aminoácidos, con moléculas preferidas de 5 a 60 aminoácidos. Los péptidos ejemplares pueden comprender el péptido de hélice anfipático Apo-AI, péptidos que tienen uno o más residuos del péptido de hélice anfipático Apo-AI aleatorios, o péptidos que comprenden secuencias aleatorias.

El término "aleatorio" como se usa para referirse a secuencias de péptidos, se refiere a secuencias completamente aleatorias (por ejemplo, seleccionadas por métodos de despliegue de fagos o separación por exclusión de péptidos de ARN) y secuencias en las cuales uno o más residuos de una molécula que se presenta naturalmente, se reemplazan por un residuo de aminoácido que no aparece en una posición en la molécula que se presenta naturalmente. Los métodos ejemplares para la identificación de secuencias de péptidos incluyen despliegue de fagos, despliegue de E.coli, despliegue de ribosomas, separación por exclusión de péptidos de ARN, separación por exclusión química y similares. El término "péptidomimético de hélice anfipático Apo-AI" se refiere a una molécula que incrementa o disminuye uno o más parámetros de ensayo de la actividad del péptido de hélice anfipático Apo-AI como lo hace el péptido de hélice anfipático Apo-AI . Un ensayo ejemplar de la actividad del péptido de hélice anfipático Apo-AI se detalla en el ejemplo 2. El término "antagonista del péptido de hélice anfipático Apo-AI" se refiere a una molécula que incrementa o disminuye uno o más parámetros de ensayo opuestos al efecto en aquellos parámetros por el péptido de hélice anfipático Apo-AI . Un ensayo de actividad del péptido de hélice ejemplar anfipático Apo-AI se detalla en el ejemplo 2. Adicionalmente, se abarcan también en la presente sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de esta invención. El término "sales fisiológicamente aceptables" se refiere a cualquier sal que se conoce o se descubre después para ser farmacéuticamente aceptable. Algunos ejemplos específicos son: acetato; trifluoroacetato; hidrohaluros, tal como- el clorohidrato y bromohidrato; sulfato; citrato; tartrato; glicolato; y oxalato. Estructura de los compuestos En general. Se describen secuencias de aminoácidos de enlace de péptidos de hélice antipáticos Apo-AI en Spinivas y colaboradores, 1990, Virology 176:48-57; Owens y colaboradores, (1990), J. Clin. Invest. 86:1142-1150; Méndez y colaboradores, (1994), J. Clin. Invest. 94 (4 ): 1698-1705; Sprinivas y colaboradores, (1991), J. Cell Biochem. 45 (2) : 224-237. Cada una de estas referencias se incorporan por lo cual en la presente en su totalidad. Los inventores actuales identificaron secuencias particularmente preferidas que se presentan naturalmente o que son conocidas. Estas secuencias se pueden hacer aleatorias a través de las técnicas antes mencionadas, por las cuales uno o más aminoácidos se pueden cambiar mientras se conservan o aún se mejora la afinidad de enlace del péptido. En las composiciones de materia preparadas de conformidad con esta invención, se puede colocar el péptido al vehículo a través de la terminación N o la terminación C del péptido. Así, las moléculas de péptido del vehículo de esta invención se pueden describir por la siguiente fórmula I en donde : F1 es un vehículo (preferiblemente un dominio Fc) ; A1 y A2 se seleccionan cada uno independientemente de - P1- (L2)d-P2-(L3)e-P3-(L4)f-P4 P1, P2, P3, y P4 son independientemente cada uno secuencias del péptido de hélice anfipático Apo-AI o de los dominios de imitación del péptido de hélice anfipático Apo-AI . L1, L2, L3, y L4 son cada uno independientemente enlazadores y a, b, c, d, e, y f son cada uno independientemente 0 o 1, con tal de que al menos uno de a y b sea 1. Así, el compuesto I comprende compuestos preferidos de las fórmulas II Ax-Fx y multímeros del mismo en donde F1 es un dominio Fc y se coloca en la terminación C de A1; III Fx-A2 y multímeros del mismo en donde F1 es un dominio Fc y se coloca en la terminación N de A2; IV y multímeros del mismo en donde F1 es un dominio Fc y se coloca en la terminación N de -(L1)c-P1; y V F1-(L1)c-P1-(L2)d-P2 y multímeros del mismo en donde F1 es un dominio Fc y se coloca en la terminación N de -L1-P1-L2-P2. Péptidos. Se pueden usar cualquier número de péptidos en conjunto con la presente invención. Los péptidos pueden comprender parte de la secuencia de las proteínas que se presentan naturalmente, pueden ser secuencias aleatorias derivadas de la secuencia de las proteínas que se presentan naturalmente, o pueden ser secuencias completamente aleatorias. El despliegue de fagos y la separación por exclusión de péptidos de ARN en particular, son útiles para la generación de péptidos para su uso en la presente invención. Una secuencia de péptidos particularmente de interés es de la fórmula Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu Ala Phe (SEQ ID NO: 7) Las moléculas de esta invención que incorporan estas secuencias de péptidos, se pueden preparar por métodos conocidos en el arte. Cualquiera de estos péptidos se pueden unir en tándem (esto es, secuencialmente) , con o sin enlazadores, y unos cuantos ejemplos ligados en tándem se suministran en la tabla 2. Cualquier péptido que contenga un residuo de cisteinilo puede reticularse con otro péptido que contenga Cys, uno o ambos de los cuales puede ligarse a un vehículo. Cualquier péptido que tenga más de un residuo Cys puede formar también un enlace disulfuro intrapéptido. Cualquiera de estos péptidos se puede derivar como se describe posteriormente. Las secuencias adicionales de péptidos útiles pueden resultar de modificaciones conservadoras y/o no conservadoras de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 7. Las modificaciones conservadoras producirán péptidos que tienen características químicas y funcionales similares a aquellas del péptido del cual se hacen tales modificaciones. En contraste, se pueden efectuar modificaciones substanciales en las características funcionales y/o químicas de los péptidos, al seleccionar substituciones en la secuencia de aminoácidos que difieran significativamente en su efecto al conservar (a) la estructura de la columna molecular en el área de substitución, por ejemplo, como una conformación de lámina o de hélice, (b) la carga o capacidad hidrofóbica de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el tamaño de la molécula.

Por ejemplo, una "substitución conservadora de aminoácidos" puede involucrar una substitución de un residuo natural de aminoácido con un residuo no natural, tal que haya poco o ningún efecto en la polaridad o en la carga del residuo de aminoácido en esa posición. Adicionalmente, cualquier residuo de origen en el polipéptido se puede también sustituir con alanina, como se ha descrito previamente para la "mutagénesis de barrido de alanina" (ver por ejemplo, MacLennan y colaboradores, 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67; Sasaki y colaboradores, 1998, Adv. Biophys. 35:1-24, que discute la mutagénesis de barrido de alanina) . La substituciones deseadas de aminoácido (ya sea conservadoras o no conservadoras) se pueden determinar por aquellos expertos en la técnica al momento de que se deseen tales substituciones. Por ejemplo, se pueden usar substituciones de aminoácidos para identificar residuos importantes de la secuencia de péptidos, o para incrementar o disminuir la afinidad del péptido o de moléculas de péptido del vehículo (ver las fórmulas precedentes) aquí descritas. Las substituciones ejemplares de aminoácidos se establecen en la Tabla 1.

Tabla 1 Substituciones de Aminoácidos En ciertas modalidades las substituciones conservadoras de aminoácidos también abarcan residuos de aminoácidos que no se presentan naturalmente, que se incorporan típicamente por síntesis química de péptidos más que por síntesis en sistemas biológicos. Como se observa en la sección anterior "Definición de Términos", los residuos que se presentan naturalmente se pueden dividir en clases con base en las propiedades comunes de la cadena lateral, que pueden ser útiles para modificaciones de las secuencias. Por ejemplo, las substituciones no conservadoras pueden involucrar el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. Tales residuos substituidos se pueden introducir en las regiones del péptido que son homologas con los ortólogos no humanos, o dentro de las regiones no homologas de la molécula. Además, se pueden hacer modificaciones usando P o G para el propósito de influenciar la orientación de la cadena. Al hacer tales modificaciones, el índice hidropático de los aminoácidos se puede considerar. A cada aminoácido se le ha asignado un índice hidropático sobre la base de su capacidad hidrofóbica y las características de carga, estos son: isoleucina (+4.5); valina (+4.2); leucina (+3.8); fenilalanina (+2.8); cisteina/cistina (+2.5); metionina (+1.9); alanina (+1.8); glicina (-0.4); treonina (-0.7); serina (-0.8); triptofano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); histidina (-3.2); glutamato (-3.5); glutamina (-3.5); aspartato (-3.5); asparagina (-3.5); lisina (-3.9); y arginina (-4.5) . La importancia del índice hidropático de aminoácido para otorgar la función biológica interactiva en una proteína se entiende en la técnica. Kyte y colaboradores, J. Mol. Biol.., 157: 105-131 (1982). Se sabe que ciertos aminoácidos se pueden sustituir por otros aminoácidos que tienen un índice o registro hidropático similar y mantienen todavía una actividad biológica similar. Al hacer los cambios con base en el índice hidropático, se prefiere la substitución de aminoácidos cuyos índices hidropáticos están dentro de +2, aquellos que están dentro de +1 son particularmente preferidos, y son aún más particularmente preferidos aquellos dentro de +0.5. También se entiende en la técnica, que la substitución de aminoácidos similares se puede hacer efectivamente sobre la base de la capacidad hidrofílica. La mayor capacidad hidrofílica promedio local de una proteína, cuando se gobierna por la capacidad hidrofílica de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con su inmunogenicidad y antigenicidad, esto es, con una propiedad biológica de la proteína. Se han asignado los siguientes valores de capacidad hidrofílica a los residuos de aminoácidos: arginina (+3.0); lisina (+3.0); aspartato (+3.0 + 1); glutamato (+3.0 + 1) ; serina (+3.0); asparagina (+0.2); glutamina (+0.2); glicina (0); treonina (-0.4); prolina (-0.5 + 1); alanina (-0.5); histidina (-0.5); cisteina (-1.0); metionina (-1.3); valina (-1.5); leucina (-1.8); isoleucina (-1.8); tirosina (-2.3); fenilalanina (-2.5); triptofano (-3.4). Al hacer los cambios con base en valores similares de capacidad hidrofílica, se prefíere la substitución de aminoácidos cuyos valores de capacidad hidrofílica están dentro de +2, son particularmente preferidos aquellos que están dentro de +1 y son aún más particularmente preferidos aquellos que están dentro de +0.5. Se pueden también identificar epítopes de secuencias primarias de aminoácidos sobre la base de la capacidad hidrofílica. Estas regiones se refieren también como "regiones de núcleo epitópico" . Un técnico experimentado podrá determinar variantes adecuadas del polipéptido como se establece en las secuencias anteriores usando técnicas bien conocidas. Para identificar las áreas adecuadas de la molécula que se pueden cambiar sin destruir la actividad, alguien experto en la técnica puede atender áreas que no se cree que son de actividad importante. Por ejemplo, cuando se conocen polipéptidos similares con actividades similares de la misma especie o de otra especie, alguien experto en la técnica puede comparar la secuencia de aminoácidos de un péptido con péptidos similares. Con tal comparación, se pueden identificar residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre los polipéptidos similares. Se apreciará que los cambios en las áreas de un péptido que no se conservan con relación a tales péptidos similares, sería menos probable que afecten adversamente la actividad biológica y/o estructura del péptido. Alguien experto en la técnica sabría también que aun en regiones relativamente conservadas, se pueden sustituir aminoácidos químicamente similares para los residuos que se presentan naturalmente mientras se conserva la actividad (substituciones conservadoras de residuos de aminoácidos) . Por lo tanto, aun las áreas que pueden ser importantes para la actividad biológica o para la estructura, pueden someterse a substituciones conservadoras de aminoácidos, sin destruir la actividad biológica o sin afectar adversamente la estructura del péptido. Adicionalmente, alguien experto en la técnica puede revisar los estudios de función de estructura identificando residuos en péptidos similares que son importantes para la actividad o la estructura. En vista de tal comparación, se puede predecir la importancia de los residuos de aminoácidos en un péptido, que corresponden a los residuos de aminoácidos que son importantes para la actividad o estructura en péptidos similares. Alguien experto en la técnica puede optar por substituciones de aminoácidos químicamente similares para tales residuos de aminoácidos importantes predichos de los péptidos. Alguien experto en la técnica puede también analizar la estructura tridimensional y la secuencia de aminoácidos con relación a esa estructura en polipéptidos similares. En vista de esa información, alguien experto en la técnica puede predecir la alineación de los residuos de aminoácidos de un péptido con respecto a su estructura tridimensional. Alguien experto en la técnica puede escoger no hacer cambios radicales a los residuos de aminoácidos predichos para estar en la superficie de la proteína, ya que tales residuos pueden involucrarse en interacciones importantes con otras moléculas. Adicionalmente, alguien experto en la técnica puede generar variantes de prueba que contienen una substitución simple de aminoácido en cada residuo deseado de aminoácido. Las variantes se pueden después separar por exclusión usando ensayos de actividad conocidos por aquellos expertos en la técnica. Tales datos se pueden usar para reunir información acerca de variantes adecuadas. Por ejemplo, si alguien descubre que un cambio en un residuo particular de aminoácido resulta en una actividad destruida, reducida indeseablemente, o inapropiada, se evitarían variantes con tal cambio. En otras palabras, con base en la información reunida de tales experimentos de rutina, alguien experto en la técnica puede fácilmente determinar los aminoácidos en donde se deban evitar substituciones adicionales ya sea solas o en combinación con otras mutaciones . Se han dedicado diversas publicaciones científicas a la predicción de la estructura secundaria. Ver Moult J., Curr. Op. in Biotech., 7(4): 422-427 (1996), Chou y colaboradores, Biochemistry, 13 (2) :222-245 (1974); Chou y colaboradores, Biochemistry, 113 (2) :211-222 (1974); Chou y colaboradores, Adv. Enzymol. Relat. Áreas Mol. Biol., 47:45-148 (1978); Chou y colaboradores, Ann. Rev. Biochem., 47: 251-276 and Chou y colaboradores, Biophys. J. , 26:367-384 (1979). Además, están actualmente disponibles programas de computadora para ayudar con la predicción de la estructura secundaria. Un método de predicción de la estructura secundaria se basa en el modelaje de la homología. Por ejemplo, dos polipéptidos o proteínas que tienen una identidad de secuencia superior al 30%, o una similitud superior al 40%, tienen a menudo topologías estructurales similares. El crecimiento reciente de la base de datos estructural de proteínas (PDB) ha suministrado una predicción enriquecida de la estructura secundaria, incluyendo el número potencial de pliegues dentro de la estructura de un polipéptido o de una proteína. Ver Holm y colaboradores, Nucí. Acid. Res., 27 (1) :244-247 (1999). Se ha sugerido (Brenner y colaboradores, Curr. Op. Struct. Biol., 7(3): 369-376 (1997)) que hay un número limitado de pliegues en una proteína o polipéptido dado, y que una vez que se ha resuelto un número crítico estructuras, la predicción estructural ganará precisión dramáticamente. Los métodos adicionales para predecir la estructura secundaria incluyen la "formación de hebras" (Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3): 377-87 (1997); Sippl y colaboradores, Structure, 4(l):15-9 (1996)), "análisis de perfil" (Bowie y colaboradores, Science, 253:164-170 (1991); Gribskov y colaboradores, Meth. Enzym. , 183: 146-159 (1990); Gribskov y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci., 84(13): 4355-8 (1987)), y "ligadura evolucional" (Ver Home, supra, y Brenner, supra) . Vehículos. Esta invención requiere de la presencia de al menos un vehículo (F1) colocado a un péptido a través de la terminación N, la terminación C o una cadena lateral de uno de los residuos de aminoácidos. Se pueden usar vehículos múltiples, por ejemplo, Fc en cada terminación o un Fc en una terminación y un grupo PEG en la otra terminación o en una cadena lateral. El vehículo preferido es un dominio Fc . El dominio Fc se puede fusionar a las terminaciones N o C de los péptidos o ambas terminaciones N y C. Se prefiere la fusión a la terminación N. Como se observa arriba, las variantes Fc son vehículos adecuados dentro del alcance de esta invención. Un Fc natural se puede modificar ampliamente para formar una variante Fc de conformidad con esta invención, proporcionando enlace para el receptor de rescate se mantenga, ver por ejemplo WO 97/34631 y WO 96/32478. En tales variantes Fc, se pueden separar uno o más sitios de un Fc natural que proporcione características estructurales o una actividad funcional no requerida por las moléculas de fusión de esta invención. Se pueden separar estos sitios mediante por ejemplo, la substitución o eliminación de residuos, la inserción de residuos dentro del sitio, o porciones de truncamiento que contienen el sitio. Los residuos insertados o substituidos, pueden también ser aminoácidos alterados, tales como péptidomiméticos o D-aminoácidos. Las variantes Fc pueden ser deseables por diversas razones, varias de las cuales se describen abajo. Las variantes ejemplares Fc incluyen moléculas y secuencias en las cuales: 1. Se eliminan los sitios involucrados en la formación del enlace disulfuro. Tal eliminación puede evitar la reacción con otras proteínas que contienen cisteina presentes en la célula hospedera usada para producir las moléculas de la invención. Para este propósito, el segmento que contiene cisteina en la terminación N se puede truncar o se pueden eliminar o sustituir los residuos de cisteina con otros aminoácidos (por ejemplo, alanilo, serilo) . En particular, se puede truncar el segmento en la terminal N de 20 aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o eliminar o sustituir los residuos de cisteina en las posiciones 7 y 10 de SEQ ID NO: 2. Aún cuando se separen los residuos de cisteina, los dominios Fc de cadena simple pueden formar todavía un dominio dimérico Fc que se mantiene de forma no covalente en conjunto. 2. Se modifica un Fc de origen para hacerlo más compatible con una célula hospedera seleccionada. Por ejemplo, se puede separar la secuencia PA cerca de la terminación N de un Fc de origen típico, que se puede reconocer por una enzima digestiva en E.coli tal como la iminopeptidasa de prolina. Se puede también agregar un residuo de metionina en la terminal N, especialmente cuando la molécula se expresa de forma recombinante en una célula bacteriana tal como E.coli. El dominio Fc de SEQ ID NO: 2 es una de tales variantes Fc . 3. Se elimina una porción de la terminación N de un Fc natural para evitar la heterogeneidad de la terminal N cuando se expresa en una célula hospedera seleccionada. Para este propósito, se pueden eliminar cualquiera de los primeros 20 residuos de aminoácidos en la terminación N particularmente aquellos en las posiciones 1, 2, 3, 4 y 5. 4. Se eliminan uno o más sitios de glicosilación. Los residuos que se glicosilan típicamente (por ejemplo asparagina) pueden otorgar una respuesta citolítica. Tales residuos se pueden eliminar o sustituir con residuos no glicosilados (por ejemplo alanina) . 5. Se eliminan los sitios involucrados en la interacción con el complemento, tal como el sitio de enlace Clq. Por ejemplo, se puede eliminar o sustituir la secuencia EKK del IgGl humano. El reclutamiento del complemento no puede ser ventajoso para las moléculas de esta invención y se puede así evitar con tal variante Fc . 6. Se eliminan los sitios que afectan el enlace a los receptores Fc diferentes a un receptor de rescate. Un Fc natural puede tener sitios para la interacción .con ciertas células de glóbulos blancos que no se requieren para las moléculas de fusión de la presente invención y se pueden entonces separar. 7. Se separa el sitio ADCC. Los sitios ADCC se conocen en la técnica; ver por ejemplo Molec. Immunol . 29 (5) : 633-9 (1992) con respecto a los sitios ADCC en IgGl . Estos sitios tampoco se requieren para las moléculas de fusión de la presente invención y entonces se pueden eliminar. 8. Cuando se deriva el Fc natural de un anticuerpo no humano, se puede humanizar el Fc natural. Típicamente, para humanizar un Fc natural, se substituirán los residuos seleccionados en el Fc natural no humano con residuos que se encuentran normalmente en el Fc natural humano. Son bien conocidas en la técnica las técnicas para la humanización de anticuerpos. Las variantes preferidas de Fc incluyen las siguientes. En la SEQ ID NO: 2 (figura 4) la leucina en la posición 15 se puede sustituir con glutamato; el glutamato en la posición 99 con alanina; y las lisinas en las posiciones 101 y 103, con alanina. Además, se pueden reemplazar uno o más residuos de tirosina por residuos de fenilalanina. Un vehículo alternativo sería una proteína, polipéptido, péptido, anticuerpo, fragmento de anticuerpo o molécula pequeña (por ejemplo un compuesto péptido mimético) capaz de enlazarse a un receptor de rescate. Por ejemplo, se puede usar como vehículo un polipéptido como se describe en la patente de E.U.A No. 5,739,277, concedida el 14 de abril de 1998 a Presta y colaboradores. Los péptidos se pueden también seleccionar por despliegue de fagos o una separación por exclusión de péptidos de ARN para enlazarse a un receptor de rescate FcRn. Tales compuestos de enlace del receptor de rescate también se incluyen dentro del significado de "vehículo" y están dentro del alcance de esta invención. Tales vehículos se deben seleccionar para vida media creciente (por ejemplo al evitar las secuencias reconocidas por la proteasas) e inmunogenicidad decreciente (por ejemplo, al favorecer las secuencias no inmunogénicas como se descubre en la humanización de anticuerpos) .

Como se observa arriba, se pueden también usar vehículos de polímero para F1. Están actualmente disponibles diversos medios para colocar porciones químicas útiles como vehículos, ver por ejemplo, la publicación internacional del Tratado de Cooperación de Patentes "PCT" No. WO 96/11953, titulada "Composiciones y Métodos de Proteínas Químicamente Modificadas en la Terminal N" que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Esta publicación PCT detalla entre otras cosas, la colocación selectiva de polímeros solubles en agua a la terminación N de las proteínas. Un vehículo de polímero preferido es el polietilen glicol (PEG) . El grupo PEG puede ser de cualquier peso molecular conveniente y puede ser lineal o ramificado. El peso molecular promedio del PEG estará preferiblemente en el rango desde alrededor de 2 kilodaltones ("kD") hasta alrededor de 10 kD, más preferiblemente desde alrededor de 5 kD hasta alrededor de 50 kD, más preferiblemente de alrededor de 5 kD hasta alrededor de 10 kD. Los grupos PEG se colocarán generalmente a los compuestos de la invención por medio de una alquilación reductora o acilación a través de un grupo reactivo en la porción PEG (por ejemplo un aldehido, amino, tiol o grupo éster) a un grupo reactivo en el compuesto de la invención (por ejemplo un aldehido, amino o grupo éster) . Una estrategia útil para la pegilación de los péptidos sintéticos consiste en combinar, a través de la formación de una ligadura de conjugado en solución, un péptido y una porción PEG, cada una soportando una funcionalidad especial que es mutuamente reactiva hacia la otra. Los péptidos se pueden preparar fácilmente con síntesis convencional en fase sólida (ver por ejemplo figura 5 y 6 y el texto anexo en la presente) . Los péptidos se "reactivan" con un grupo funcional adecuado en el sitio específico. Se purifican los precursores y se caracterizan completamente previo a la reacción con la porción de PEG. La ligadura del péptido con el PEG toma lugar usualmente en fase acuosa y se puede monitorear fácilmente por CLAR analítica de fase inversa. Los péptidos pegilados se pueden purificar fácilmente por CLAR preparativa y se caracterizan por CLAR analítica, análisis de aminoácidos y espectrometría de masas por desorción láser. Los polímeros de polisacáridos son otro tipo de polímero soluble en agua que se puede usar para la modificación de proteínas. Los dextranos son polímeros de polisacáridos que comprenden subunidades individuales de glucosa predominantemente ligadas por ligaduras al-6. El dextrano mismo está disponible en muchos rangos de peso molecular, y está fácilmente disponible en pesos moleculares desde alrededor de 1 kD hasta alrededor de 70 kD. El dextrano es un polímero soluble en agua adecuado para su uso en la presente invención como un vehículo por sí mismo o en combinación con otro vehículo (por ejemplo, Fc) . Ver por ejemplo, WO 96/11953 y WO 96/05309. El uso de dextrano conjugado a inmunoglobulinas de diagnóstico o terapéuticas se ha reportado; ver por ejemplo, Publicación de Patente Europea No. 0 315 456, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Se prefiere el dextrano de alrededor de 1 kD a alrededor de 20 kD cuando se usa el dextrano como un vehículo de conformidad con la presente invención. Enlazadores. Cualquier grupo "enlazador" es opcional. Cuando se presenta, su estructura química no es crítica ya que sirve principalmente como un espaciador. El enlazador se hace preferiblemente de aminoácidos ligados en conjunto por enlaces péptido. Así en modalidades preferidas, el ligador se hace desde alrededor de 1 hasta 20 aminoácidos ligados por enlaces péptidos, en donde los aminoácidos se seleccionan de 20 aminoácidos que se presentan naturalmente. Algunos de estos aminoácidos pueden ser glicosilados como se entenderá mejor por aquellos en la técnica. En una modalidad más preferida, se seleccionan los 1 a 20 aminoácidos de glicina, alanina, prolina, asparagina, glutamina, y lisina. Aun más preferiblemente, se prepara un enlazador de una mayoría de aminoácidos que están estéricamente sin obstaculizar tal como glicina y alanina. Así, los enlazadores preferidos son poliglicinas (particularmente (Gly)4, (Gly)5), poli (Gly-Ala) , y polialaninas . Otros ejemplos específicos de enlazadores son: (Gly)3Lys(Gly)4(SEQ ID NO: 3); (Gly)3AsnGlySer(Gly)2(SEQ ID NO: 4) ; (Gly)3Cys(Gly)4(SEQ ID NO: 5); y GlyProAsnGlyGly(SEQ ID NO: 6) . Para explicar la nomenclatura anterior, por ejemplo, (Gly) 3Lys (Gly) 4 significa Gly-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 3) . Los enlazadores simples de aminoácidos (por ejemplo, -Ala- o -Gly-) son enlazadores preferidos, y también se prefieren combinaciones de Gly y Ala. Los enlazadores aquí mostrados son ejemplares; enlazadores dentro del alcance de esta invención pueden ser mucho más extensos y pueden incluir otros residuos. También son posibles enlazadores no de péptidos. Por ejemplo, los enlazadores de alquilo tal como -NH- (CH2) S-C (O) - , en donde s = 2-20 se pueden también usar. Estos enlazadores de alquilo pueden además substituirse por cualquier grupo no estéricamente obstaculizador tal como alquilo inferior (por ejemplo, C?-C6) acilo inferior, halógeno (por ejemplo, Cl, Br) , CN, NH2, fenil, etc. Un enlazador ejemplar que no es de péptido es un enlazador PEG VI en donde n es tal que el enlazador tiene un peso molecular de 100 a 5000 kD, preferiblemente 100 a 500 kD. Los enlazadores de péptidos se pueden alterar para formar derivados de la misma forma antes descrita. Derivados. Los inventores contemplan también la derivación de la porción del vehículo y/o péptido de los compuestos. Tales derivados pueden mejorar la solubilidad, absorción, vida media biológica y similares de los compuestos. Las porciones pueden eliminar o atenuar alternativamente cualquier efecto lateral indeseable de los compuestos y similares. Los derivados ejemplares incluyen compuestos en los cuales: 1. El compuesto o alguna porción del mismo es cíclica. Por ejemplo, la porción de péptidos se puede modificar para contener 2 o más residuos Cys (por ejemplo en el ligador) que puede ciclizarse por la formación de enlace disulfuro. 2. El compuesto se retícula o resulta capaz de reticulado entre moléculas. Por ejemplo, se puede modificar la porción de péptido para contener un residuo Cys con lo cual se puede formar un enlace disulfuro intermolecular con una molécula similar. El compuesto también puede reticularse a través de su terminación C como en la molécula que se muestra abajo. VII 3. Se reemplazan una o más ligaduras peptidilo [- C(0)NR-] (enlaces) por una ligadura no peptidilo. Las ligaduras no peptidilo ejemplares son -CH2- carbamato [-CH2- OC(0)NR-], fosfonato, -CH2- sulfonamida [-CH2-S (0) 2NR-] , urea [-NHC (O)NH-] , -CH2-amina secundaria, péptido alquilado [-C(0)NR6- en donde R6 es alquilo inferior] . 4. Se deriva la terminación N. Típicamente la terminación N se puede acilar o modificar hasta una amina substituida. Los grupos N terminal derivados ejemplares incluyen -NRR1 (diferente a -NH2) , -NRCÍOÍR1, -NRCÍOOR1, -NRS(0)2Rx, -NHC (0) NHR1, succinimida o benciloxicarbonilo -NH-(CBZ-NH-) , en donde R y R1 son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo inferior y en donde el anillo de fenilo se puede sustituir con 1 a 3 substituyentes seleccionados del grupo que consiste de C?-C4 alquilo, C?-C4 alcoxi, cloro y bromo . 5. Se deriva la terminación C libre. Típicamente, la terminación C se esterifica o se amida. Los grupos derivados ejemplares en la terminación C incluyen por ejemplo -C(0)R2 en donde R2 es alcoxi inferior o -NR3R4 en donde R3 y R4 son independientemente hidrógeno o C?-C8 alquilo (preferiblemente C?-C4 alquilo) . 6. Se reemplaza un enlace disulfuro con otro, preferiblemente una porción reticulante más estable (por ejemplo un alquileno) . Ver por ejemplo, Bhatnagar y colaboradores, (1996), J. Med. Chem. 39:3814-9; Alberts y colaboradores, (1993) Thirteenth Am. Pep. Symp., 357-9. 7. Se modifican uno o más residuos individuales de aminoácidos. Se conocen diversos agentes derivadores para reaccionar específicamente con cadenas laterales seleccionadas o residuos terminales como se describe abajo en detalle. Los residuos de lisinilo y los residuos en la terminal amino pueden reaccionar con anhídridos succínicos o de otros ácidos carboxílicos, que invierten la carga de los residuos de lisinilo. Otros reactivos adecuados para derivar los residuos que contienen alfa-amino incluyen imido esteres tales como metil picolinimidato; fosfato de piridoxal, piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico; O-metilisourea; 2,4 pentanodiona; y una reacción catalizada de transaminasa con glioxilato. Se pueden modificar los residuos de arginilo por reacción con alguna o una combinación de diversos reactivos convencionales incluyendo fenilglioxal, 2 , 3-butanodiona, 1,2-ciclohexanodiona, y ninhidrina. La derivación de los residuos de arginilo requieren que la reacción se lleve a cabo en condiciones alcalinas debido a elevado pKa del grupo funcional guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de lisina así como el grupo epsilon-amino arginina. La modificación específica de los residuos de tirosilo se ha estudiado ampliamente, con un interés particular en la introducción de etiquetas espectrales dentro de los residuos de tirosilo por reacción con compuestos aromáticos de diazonio o tetranitrometano. Más comúnmente, se usan N-acetilimidizol y tetranitrometano para formar especies de 0-acetil tirosilo y 3 -nitro derivados respectivamente. Los grupos carboxilo de cadena lateral (aspartilo o glutamilo) se pueden modificar selectivamente por la reacción con carbodiimidas (R' -N=C=N-R' ) tal como l-ciclohexil-3- (2-morfolinil- (4-etil) carbodiimida o l-etil-3- (4-azonia-4 , 4-dimetilpentil) carbodiimida. Además, se pueden convertir los residuos de aspartilo y glutamilo a residuos de asparaginilo y glutaminilo por la reacción con iones amonio. Los residuos de glutaminilo y asparaginilo se pueden desamidar a los residuos correspondientes de glutamilo y aspartilo. Alternativamente, se desamidan estos residuos bajo condiciones moderadamente acidas. Cualquier forma de estos residuos cae dentro del alcance de esta invención. Se pueden reemplazar los residuos de cisteinilo por residuos de aminoácidos u otras porciones, ya sea para eliminar el enlace de disulfuro o inversamente, para estabilizar el reticulado. Ver por ejemplo, Bhatnagar y colaboradores, (1996), J. Med. Chem. 39:3814-9. La derivación con agentes bifuncionales es útil para el reticulado de los péptidos o sus derivados funcionales a una matriz de soporte insoluble en agua o a otros vehículos macromoleculares. Los agentes de reticulado comúnmente usados incluyen por ejemplo 1, 1-bis (diazoacetil) -2-feniletano, glutaraldehído, esteres de N-hidroxisuccinimida, por ejemplo esteres con ácido 4-azidosalicílico, imidoésteres homobifuncionales, incluyendo esteres de disuccinimidilo tales como 3-3 ' -ditiobis (succinimidilpropionato) , y maleimidas bifuncionales tales como bis-N-maleimido-1, 8-octano. Los agentes de derivación tal como el metil-3- [ (p-azidofenil) ditio] propioimidato producen intermediarios fotoactivables que son capaces de formar reticulados en presencia de luz. Alternativamente, las matrices reactivas insolubles en agua, tales como los carbohidratos de cianógeno activados con bromuro y los substratos reactivos descritos en las patentes de E.U.A No. 3,969,287; 3,691,016; 4,195,128; 4,247,642; 4,229,537; y 4,330,440 se emplean para la inmovilización de proteínas. Los grupos de carbohidratos (oligosacáridos) se pueden colocar convenientemente a los sitios que se conocen por ser sitios de glicosilación en proteínas. Generalmente los oligosacáridos ligados en O se colocan a residuos de serina (Ser) o de treonina (Thr) mientras que los oligosacáridos ligados en N se colocan a residuos de asparagina (Asn) cuando son parte de la secuencia Asn-X-Ser/Thr, donde X puede ser cualquier aminoácido excepto prolina. X es preferiblemente uno de los 19 aminoácidos que se presentan naturalmente diferentes a la prolina. Las estructuras de los oligosacáridos ligados en 0 y ligados en N y los residuos de azúcar que se encuentran en cada tipo son diferentes. Un tipo de azúcar que se encuentra comúnmente en ambos es el ácido N-acetilneuramínico (referido como ácido siálico) . El ácido siálico es usualmente el residuo terminal de los oligosacáridos ligados en N y ligados en 0, y, en virtud de su carga negativa, pueden otorgar propiedades acidas al compuesto glicosilado. Tales sitios se pueden incorporar en la ligadura de los compuestos de esta invención y son preferiblemente glicosilados por una célula durante la producción recombinante de los compuestos de polipéptidos (por ejemplo en células de mamíferos tales como CHO, BHK, COS) . Sin embargo, tales sitios se pueden además glicosilar por procedimientos sintéticos o semi-sintéticos conocidos en la técnica. Otras modificaciones posibles incluyen la hidroxilación de la prolina y la lisina, la fosforilación de grupos hidroxilo de residuos de serilo o treonilo, la oxidación del átomo de azufre en Cys, la metilación de los grupos alfa-amino de cadenas laterales de lisina, arginina e histidina. Creighton, Proteins: Structure and Molecule Properties (W. H. Freeman & Co., San Francisco), pp. 79-86 (1983). Los compuestos de la presente invención también se pueden cambiar al nivel del ADN. La secuencia de ADN de cualquier porción del compuesto se puede cambiar para codones más compatibles con la célula hospedera escogida. Para la E.coli, que es la célula hospedera preferida, se conocen en la técnica codones optimizados. Los codones se pueden sustituir para eliminar los sitios de restricción o para incluir sitios de restricción silentes, que pueden ayudar en el procesamiento del ADN en la célula hospedera seleccionada. El vehículo, ligador y la secuencias de ADN péptido se pueden modificar para incluir cualquiera de los cambios de secuencias anteriores. Métodos de Elaboración. Los compuestos de esta invención pueden mayormente elaborarse en células hospedadoras transformadas con el uso de técnicas de ADN recombinante. Al hacerlo así, se prepara una molécula de ADN recombinante que codifica para el péptido. Los métodos para preparar tales moléculas de ADN son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, las secuencias que codifican los péptidos podrían extirparse del ADN con el uso de enzimas de restricción apropiadas. Alternativamente, la molécula de ADN podría sintetizarse con el uso de técnicas de síntesis química, tales como el método de fosforamidato. También, podrá usarse una combinación de estas técnicas. La invención también incluye un vector capaz de expresar los péptidos en un hospedador apropiado. El vector comprende la molécula de ADN que codifica los péptidos enlazados operativamente a secuencias de control de expresión apropiadas. Los métodos para efectuar este enlace operativo, ya sea antes o después de que se inserte la molécula de ADN en el vector, son bien conocidos. Las secuencias de control de expresión incluyen promotores, activadores, aumentadores, operadores, sitios de enlace ribosomal, señales de inicio, señales de detención, señales de cubrimiento, señales de poliadenilación y otras señales involucradas con el control de la transcripción o traducción. El vector resultante que tiene la molécula de ADN en él, se usa para transformar un hospedador apropiado. Esta transformación puede realizarse con el uso de métodos bien conocidos en la técnica. Cualesquiera de un gran número de células hospedadoras bien conocidas y disponibles, puede usarse en la práctica de esta invención. La selección de un hospedador particular depende de un número de factores reconocidos por la técnica. Estos incluyen, por ejemplo, compatibilidad con el vector de expresión elegido, toxicidad de los péptidos codificados por la molécula de ADN, relación de transformación, facilidad de recuperación de los péptidos, características de expresión, bio-seguridad y costos. Un balance de estos factores deberá encontrarse con el entendimiento que no todos los hospedadores pueden ser igualmente efectivos para la expresión de una secuencia de ADN particular. Dentro de estas guías generales, los hospedadores microbianos útiles incluyen células de bacterias (tales como la especie E. coli) , levadura (tal como la especie Saccharomyces) y otros hongos, insectos, plantas, mamíferos (que incluye el humano) en cultivo, u otros hospedadores conocidos en la técnica. A continuación, el hospedador transformado se cultiva y purifica. Las células hospedadoras pueden cultivarse bajo condiciones de fermentación convencional para que se expresen los compuestos deseados. Tales condiciones de fermentación son bien conocidas en la técnica. Finalmente, los péptidos se purifican del cultivo por métodos bien conocidos en la técnica. Los compuestos pueden también elaborarse por métodos sintéticos. Por ejemplo, pueden usarse técnicas de síntesis de fase sólida. Las técnicas apropiadas son bien conocidas en la técnica, e incluyen aquellas descritas en Merrifield (1973) , Chem. Polypeptides, pp. 335-61 (Katsoyannis and Panayotis eds.); Merrifield (1963), J. Am. Chem. Soc. 85:2149; Davis y colaboradores, (1985), Biochem. Intl. 10:394-414; Stewart and Young (1969), Solid Phase Peptide Synthesis; Patente E.U.A. No. 3,941,763; Finn y colaboradores (1976), The Proteins (3era ed.) 2:105-253; y Erickson y colaboradores (1976), The Proteins (3era ed.) 2:257-527. La síntesis de fase sólida es la técnica preferida para elaborar péptidos individuales ya que es el método más efectivo en costo para elaborar péptidos pequeños. Los compuestos que contienen péptidos derivados o que contienen grupos no péptidos, pueden sintetizarse por técnicas de química orgánica bien conocidas. Usos de los Compuestos. Los compuestos de esta invención tienen una actividad farmacológica que resulta de su actividad de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI . Los agonistas o miméticos del péptido de hélice anfipático Apo-AI son útiles en el tratamiento de: hipercolesterolemia infección viral, particularmente infección por HSV y VIH; y similares. Composiciones Farmacéuticas En General . La presente invención también proporciona métodos para usar las composiciones farmacéuticas de los compuestos inventivos. Tales composiciones farmacéuticas pueden ser para administración por inyección, o para administración oral, pulmonar, nasal, transdermal u otras formas de administración. En general, la invención abarca composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades efectivas de un compuesto de la invención junto con diluyentes, conservadores, solubilizantes, emulsificadores, adyuvantes y/o portadores farmacéuticamente aceptables. Tales composiciones incluyen diluyentes de diferente contenido amortiguador (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato) , pH y resistencia iónica; aditivos tales como detergentes y agentes solubilizantes (por ejemplo, Tween 80, Polisorbato 80), antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfato de sodio), conservadores (por ejemplo, timersol, alcohol de bencilo) y substancias de volumen (por ejemplo, lactosa, manitol) ; la incorporación del material en las preparaciones en partículas de compuestos poliméricos tales como ácido poliláctico, ácido poliglicólico, etc, o en liposomas. Puede también usarse ácido hialurónico, y este puede tener el efecto de promover la duración sostenida en la circulación. Tales composiciones pueden influenciar el estado físico, estabilidad, relación de liberación in vivo, y relación de depuración in vivo de las presentes proteínas y derivados. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042) páginas 1435-1712 que se incorporan en la presente para referencia en su totalidad. Las composiciones pueden prepararse en forma líquida, o pueden estar en forma de polvo seco, tal como liofilizadas. Las formulaciones de liberación sostenida de implante también se contemplan, como son las formulaciones transdermales . Formas de dosis orales. Se contemplan para usarse en la presente formas de dosis sólidas orales, que se describen generalmente en el Capítulo 89 de Remington's Pharmaceutical Sciences (1990), 18a Ed. Mack Publishing Co. Easton PA 18042, que se incorpora en la presente para referencia completamente. Las formas de dosis sólidas incluyen tabletas, cápsulas, pildoras, trozos o pastillas, saquitos o peletizados. También, la encapsulación liposomal o proteinoide puede usarse para formular las presentes composiciones (como, por ejemplo, las microesferas proteinoides reportadas en la Patente E.U.A. No. 4,925,673). La encapsulación liposomal puede usarse y las liposomas pueden derivarse con varios polímeros (por ejemplo, Patente E.U.A. No. 5,013,556). Una descripción de posibles formas de dosis sólidas para el terapéutico se da en el Capítulo 10 de Marshall, K. , Modern Pharmaceutics (1979), editado por G. S. Banker y C. T. Rhodes, incorporada en la presente para referencia en su totalidad. En general, la formulación incluirá el compuesto inventivo, y los ingredientes inertes que permiten la protección contra el ambiente estomacal, y la liberación del material biológicamente activo en el intestino. También se contemplan específicamente las formas de dosis orales de los compuestos inventivos anteriores. Si es necesario, los compuestos pueden modificarse químicamente para que su liberación oral sea eficaz. Generalmente, la modificación química contemplada es el enlace de al menos una porción a la molécula del compuesto misma, donde la porción permite (a) la inhibición de la proteolisis; y (b) la reabsorción en el torrente sanguíneo desde el estómago o el intestino. También se desea el incremento en la estabilidad general del compuesto y el incremento en el tiempo de circulación en el cuerpo. Las porciones útiles como vehículos covalentemente enlazados en esta invención, también pueden ser útiles para este propósito. Los ejemplos de tales porciones incluyen: PEG, copolímeros de etilen glicol y propilen glicol, carboximetil celulosa, dextrano, alcohol de polivinilo, polivinil pirrolidona y poliprolina. Ver, por ejemplo, Abuchowski y Davis, Soluble Polymer-Enzyme Adducts, Enzymes as Drugs (1981), Hocenberg and Roberts, eds., Wiley-Interscience, Nueva York, NY, pp . 367-83; ?ewmark, y colaboradores (1982), J. Appl. Biochem. 4:185-9. Otros polímeros que pueden usarse son el poli-1 , 3 -dioxolano y poli-1, 3 , 6-tioxocano. Las porciones PEG son las preferidas para uso farmacéutico, como se indica arriba. Para formas de dosis de entrega oral, también es posible usar una sal de un aminoácido alifático modificado, tal como N- (8- [2-hidroxibenzoil] amino) caprilato de sodio (SNAC), como un portador para aumentar la absorción de los compuestos terapéuticos de esta invención. La eficacia clínica de una formulación de heparina que usa el SNAC se ha demostrado en un ensayo de Fase II conducido por Emisphere Technologies. Ver la Patente E.U.A. No. 5,792,451, "Oral drug delivery composition and methods" . Los compuestos de esta invención pueden incluirse en la formulación como multipartículas finas en la forma de granulos o peletizados de tamaño de partícula de alrededor de 1 mm. La formulación del material para la administración de cápsulas, deberá también ser como un polvo, tapones ligeramente comprimidos o aún tabletas. El terapéutico deberá prepararse por compresión. Pueden incluirse todos los agentes colorantes y saborizantes. Por ejemplo, la proteína (o derivado) puede formularse (tal como liposoma o microesferas de encapsulación) y después estar contenido además dentro de un producto comestible, tal como una bebida refrigerada que contiene agentes colorantes y saborizantes. Puede diluirse o incrementarse el volumen del compuesto de la invención con un material inerte. Estos diluyentes incluirán carbohidratos, especialmente manitol, -lactosa, lactosa anhidra, celulosa, sacarosa, dextranos modificados y almidón. Ciertas sales inorgánicas también pueden usarse como rellenos, incluyendo trifosfato de calcio, carbonato de magnesio y cloruro de sodio, algunos diluyentes comercialmente disponibles son Fast-Flo, Emdex, STA-Rx 1500, Emcompress y Avicell. Pueden incluirse desintegrantes en la formulación del terapéutico en una forma de dosis sólida. Los materiales usados como desintegrantes incluyen, pero no se limitan a, almidón, que incluye el desintegrante comercial con base almidón, Explotab. El glicolato de almidón de sodio, Amberlita, carboximetilcelulosa de sodio, ultramilopectina, alginato de sodio, gelatina, cascara de naranja, carboximetil celulosa acida, esponja natural y bentonita, todos pueden usarse. Otra forma de los desintegrantes son las resinas de intercambio catiónicas insolubles. Las gomas en polvo pueden usarse como desintegrantes y como aglutinantes, y estas pueden incluir gomas en polvo tales como agar, Karaya o tragacanto. El ácido algínico y su sal de sodio, también son útiles como desintegrantes. Los aglutinantes pueden usarse para mantener el agente terapéutico junto para formar una tableta dura, e incluye materiales de productos naturales tales como acacia, tragacanto, almidón y gelatina. Otros incluyen metil celulosa (MC) , etil celulosa (EC) y carboximetil celulosa (CMC) . La polivinil pirrolidona (PVP) y la hidroxipropilmetil celulosa (HPMC) ambas pueden usarse en soluciones alcohólicas para granular el terapéutico. Puede incluirse un agente anti-fricción en la formulación del terapéutico para prevenir la pegajosidad durante el proceso de formulación. Pueden usarse lubricantes como una capa entre el terapéutico y la pared del troquel, y estos pueden incluir, pero no se limitan a; ácido esteárico que incluye sus sales de magnesio y calcio, politetrafluoroetileno (PTFE) , parafina líquida, aceites y ceras vegetales. Los lubricantes solubles pueden también usarse, tales como lauril sulfato de sodio, lauril sulfato de magnesio, polietilen glicol de varios pesos moleculares, Carboxax 4000 y 6000. Los aditivos mejoradores del flujo que pueden mejorar las propiedades de flujo del fármaco durante la formulación y para ayudar a retomar durante la compresión, pueden agregarse. Los aditivos mejoradores del flujo pueden incluir almidón, talco, sílice pirogénico y aluminato de sílice hidratado. Para auxiliar a la disolución del compuesto de esta invención en el ambiente acuoso, puede agregarse un tensoactivo como un agente humectante. Los tensoactivos pueden incluir detergentes aniónicos tales como lauril sulfato de sodio, dioctil sulfosuccinato de sodio y dioctil sulfonato de sodio. Pueden usarse detergentes catiónicos y podrán incluir cloruro de benzalconio o cloruro de bencetonio. La lista de detergentes no iónicos potenciales que podrían incluirse en la formulación como tensoactivos son lauromacrogol 400, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino de polioxietileno hidrogenado 10, 50 y 60, monoestearato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 y 80, éster del ácido graso de sacarosa, metil celulosa y carboximetil celulosa. Estos tensoactivos podrían presentarse en la formulación de la proteína o derivados, ya sea solos o como una mezcla en diferentes relaciones. Los aditivos también pueden incluirse en la formulación para aumentar la absorción del compuesto. Los aditivos que potencialmente tienen esta propiedad son, por ejemplo, los ácidos grasos ácido oleico, ácido linoléico, y ácido linolénico. La formulación de liberación controlada puede ser deseable. El compuesto de esta invención deberá incorporarse en una matriz interna que permita la liberación ya sea por difusión o un mecanismo lixiviante por ejemplo, gomas. Las matrices lentamente degeneradas también pueden incorporarse en la formulación, por ejemplo, alginatos, polisacáridos. Otra forma de liberación controlada de los compuestos de esta invención es por un método con base en el sistema terapéutico Oros (Alza Corp.), esto es, el fármaco se encierra en una membrana semipermeable que permite que el agua entre y presiona al fármaco a través de una pequeña apertura sencilla debido a los efectos osmóticos. Algunos recubrimientos entéricos también tienen un efecto de liberación retardado. Otros recubrimientos pueden usarse para la formulación. Estos incluyen una variedad de azúcares que podrían aplicarse en una charola de recubrimiento. El agente terapéutico podría también darse en una tableta recubierta por una película y los materiales usados en esta instancia se dividen en 2 grupos. El primero son los materiales no entéricos e incluyen metil celulosa, etil celulosa, hidroxietil celulosa, metilhidroxi-etil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil-metil celulosa, carboxi-metil celulosa de sodio, providona y los polietilen glicoles. El segundo grupo consiste de los materiales entéricos que son comúnmente los esteres de ácido ftálico. Una mezcla de materiales puede usarse para proporcionar el recubrimiento de película óptimo. El recubrimiento de película puede llevarse a cabo en una charola de recubrimiento o en un lecho fluidizado o por recubrimiento de compresión. Formas de entrega pulmonar. También se contemplan en la presente la entrega pulmonar de la presente proteína (o derivados de la misma) . La proteína (o un derivado) se entrega a los pulmones de un mamífero mientras inhala y atraviesa cruzando el revestimiento interior epitelial del pulmón al torrente sanguíneo. (Otros reportes de esto incluyen Adjei y colaboradores, Pharma . Res . (1990) 7:565-9; Adjei y colaboradores, (1990) , Internatl. J. Pharmaceutics 63:135-44 (acetato de leuprolida) ; Branquet y colaboradores, (1989), J. Cardiovasc. Pharmacol. 13 (suplemento 5): s.143-146 (endotelina-1) ; Hubbard y colaboradores (1989) , Annals Int. Med. 3:206-12 (al-antitripsina) ; Smith y colaboradores (1989), J. Clin Invest. 84: 1145-6 (proteinasa al) ; Oswein y colaboradores (Marzo 1990), "Aerosolization of Proteins", Proc. Symp. Resp. Drug Delivery II, Keystone, Colorado (hormona del crecimiento humano recombinante) ; Debs y colaboradores (1989), J. Immunol . 140:3482-8 (interferon ? y factor a de necrosis de tumor) y Platz y colaboradores, Patente E.U.A. No. 5,284,656 (factor estimulante de la colonia de granulocitos) . Contemplados para su uso en la práctica de esta invención, están un amplio rango de dispositivos mecánicos diseñados para la entrega pulmonar de productos terapéuticos, que incluyen, pero no se limitan a nebulizadores, inhaladores de dosis medidas, e inhaladores de polvo, todos los cuales son familiares para aquellos expertos en la técnica. Algunos ejemplos específicos de dispositivos comercialmente disponibles apropiados para la práctica de esta invención son el nebulizador Ultravent, fabricado por Mallinckrodt , Inc., San Luis, Missouri; el nebulizador Acorn II, fabricado por Marquest Medical Products, Englewood, Colorado; el inhalador de dosis medida Ventolín, fabricado por Glaxo Inc., Research Triangle Park, North Carolina; y el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Massachusetts. Todos estos dispositivos requieren el uso de formulaciones apropiadas para entregar el compuesto inventivo. Típicamente, cada formulación es específica al tipo de dispositivo empleado y puede involucrar el uso de un material propelente apropiado, además de diluyentes, adyuvantes y/o portadores útiles en la terapia. El compuesto inventivo deberá prepararse más ventajosamente en forma de partículas con un tamaño de partícula promedio de menos de 10 µm (o micrones) , más preferiblemente 0.5 hasta 5 µm, para una entrega más efectiva al pulmón distal . Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen carbohidratos tales como trehalosa, manitol, xilitol, sacarosa, lactosa y sorbitol. Otros ingredientes para usarse en formulaciones pueden incluir DPPC, DOPE, DSPC y DOPC. Pueden usarse tensoactivos naturales o sintéticos. Puede usarse el PEG (aún aparte de si se usa en la derivación de la proteína o análogo) . Pueden usarse dextranos, tales como ciclodextrano. Pueden usarse sales biliares y otros aumentadores relacionados. Pueden usarse celulosa y derivados de celulosa. Pueden usarse aminoácidos, tales como los usados en una formulación amortiguadora. También, se contempla el uso de liposomas, microcápsulas o microesferas, complejos de inclusión, y otros tipos de portadores. Las formulaciones apropiadas para usarse con un nebulizador, ya sea de chorro o ultrasónico, típicamente comprenden el compuesto inventivo disuelto en agua a una concentración de alrededor de 0.1 hasta 25 mg de proteína biológicamente activa por mL de solución. La formulación también puede incluir un amortiguador y un azúcar simple (por ejemplo, para la estabilización de la proteína y la regulación de la presión osmótica) . La formulación de nebulizador puede también contener un tensoactivo, para reducir o prevenir la superficie que induce la agregación de la proteína, causada por la atomización de la solución en forma de aerosol . Las formulaciones para usarse con un dispositivo inhalador de dosis medida, comprenderán generalmente un polvo finamente dividido que contiene el compuesto inventivo suspendido en un propelente con la ayuda de un tensoactivo. El propelente puede ser cualquier material convencional empleado para este propósito, tal como un clorofluorocarbono, un clorohidrofluorocarbono, un hidrofluorocarbono, o un hidrocarburo, que incluye triclorofluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetanol, y 1,1,1,2-tetrafluoroetano, o combinaciones de los mismos. Los tensoactivos apropiados incluyen trioleato de sorbitán y lecitina de soya. También puede ser útil el ácido oleico como un tensoactivo. Las formulaciones para entregar desde un dispositivo inhalador de polvo, comprenderán un polvo seco finamente dividido que contiene el compuesto inventivo y puede también incluir un agente de volumen, tal como lactosa, sorbitol, sacarosa, manitol, trehalosa, o xilitol en cantidades que facilitan la dispersión del polvo desde el dispositivo, por ejemplo, 50 hasta 90% en peso de la formulación. Formas de entrega nasales. La entrega nasal del compuesto inventivo también se contempla. La entrega nasal permite el paso de la proteína al torrente sanguíneo directamente después de administrar el producto terapéutico a la nariz, sin la necesidad de depositar el producto en el pulmón. Las formulaciones para entrega nasal incluyen aquellas con dextrano o ciclodextrano. La entrega por medio del transporte a través de otras membranas de mucosa también se contempla. Dosis . El régimen de dosis involucrado en un método para tratar las condiciones arriba descritas, será determinado por el médico que atiende, considerando varios factores que modifican la acción de los fármacos, por ejemplo la edad, condición, peso corporal, sexo y dieta del paciente, la severidad de cualquier infección, tiempo de administración y otros factores clínicos. Generalmente, el régimen diario debería estar en el rango de 0.1-1000 microgramos del compuesto inventivo por kilogramo de peso corporal, preferiblemente 0.1-150 microgramos por kilogramo. Modalidades Especificas Preferidas. Los inventores han determinado estructuras preferidas para los péptidos preferidos enlistados en la Tabla 2 a continuación. El símbolo "?" puede ser cualesquiera de los enlazadores descritos en la presente o puede representar simplemente un enlace péptido normal (esto es, que no está presente ningún enlace) . Las repeticiones en tándem y los enlazadores se muestran separados por líneas para claridad. Tabla 2—Modalidades preferidas "F1" es un dominio Fc como se define previamente en la presente. Además de aquellos enlistados en la Tabla 2, los inventores contemplan además heterodímeros en los cuales cada hebra de dímero Fc se enlaza a una secuencia de péptido diferente; por ejemplo, en donde cada Fc se enlaza a una secuencia diferente seleccionada de la Tabla 1. Todos los compuestos de esta invención pueden prepararse por los métodos descritos en la solicitud PCT no. WO99/25044.

La invención descrita ahora completamente, será evidente para alguien de experiencia ordinaria en la técnica que pueden hacerse muchos cambios y modificaciones a esta, sin salirse del espíritu y alcance de la invención como se establece en la presente. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> AMGEN INC . <120> DERIVADO DE PEPTIDOS APO-AI/AII <130> A-690 <140> PCT/US 01/13068 <141> 2001-04-23 <150> 60/198,920 <151> 2000-04-21 <160> 11 <170> Patentln versión 3.1 <210> 1 <211> 684 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (684) <223> <400> 1 atg gac aaa act cac aca tgt cca ect tgt cca gct ceg gaa ctc ctg 48 Met Asp Lys Thr Kis Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 5 10 15 999 gga ccg tea gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc 96 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 atg atc tcc cgg acc ect gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age 144 Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 cac gaa gac ect gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 192 Kis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac age acg 240 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 65 70 75 80 tac cgt gtg gtc age gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 288 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc 336 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 105 110 atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag 384 He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc 432 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac atc gcc gtg 480 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val 145 150 155 160 gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg ect 528 Glu Trc Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac age aag ctc acc 576 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 gtg gac aag age agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tea tgc tcc gtg 624 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glr. GÍy Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag age ctc tcc ctg 672 Met His Glu Ala Leu His Asp His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 tct ccg ggt aaa 684 Ser Pro Glv Lys 225 <210> 2 <211> 228 <212> PRT <213> Homo saoiens <400> Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 5 10 15 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 Ls Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 65 70 75 80 Tvr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 105 110 lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asp Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Glv Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val 145 150 " 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Vai Leu Aso Ser Asp Giy Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Vai Asp Lys Ser Ars Trp Gln Gin Giy Asn Vai Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tvr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 3 <211> 8 <212 > PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223 > Enlazador preferido <400> 3 Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 4 <2il> 7 <212> PRT <213 > Secuencia Artificial <220> <223 > Enlazador preferido <400> 4 Gly Gly Asn Glv Ser Gly Gly 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213 > Secuencia Artificial < 220> <223 > Enlazador preferido <400> 5 Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Enlazador preferido <400> 6 Gly Pro Asn Gly Gly 1 5 <210> 7 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu 1 5 ío 15 Ala Phe <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Modalidades preferidas <220> <221> Características diversas <222> ( 18 ) . . ( 18 ) <223 > Dominio Fc enlazado en la posición 18 a través de un enlazador opcional <400> 8 Asp Trp Leu Lys Aia Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu 1 5 ?o 15 Aia Phe <210> 9 <211> 18 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Modalidades preferidas <220> <221> Caracteristicas diversas <222> (1).. <1) <223> Dominio Fc enlazado a través de un enlazador opcional <400> 9 Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu 1 5 10 15 Aia Phe <210> 10 <211> 18 <212> PRT <2i3> Secuencia Artificial <220> <223> Modalidades preferidas <220> <221> Caracteristicas diversas <222> (18!.. (18) <223> Enlazado por un enlazador opcional a una secuencia idéntica, que se enlaza por un enlazador opcional a un dominio Fc <400> 10 Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu 1 5 10 15 Ala Phe <210> 11 <211> 18 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Modalidades preferidas <220> <221> Caracteristicas diversas <222> (1) ..(1) <223> Enlazado por un enlazador opcional a un dominio Fc en la terminación N <220> <221> Características diversas <222> (18).. (18) <223> Enlazado por un enlazador opcional a una secuencia idéntica <400> 11 Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Vai Ala Glu Lys Leu Lys Glu 1 5 10 15 Ala Phe

Claims (1)

1. Reivindicaciones . Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Una composición de materia de la fórmula (A1 ) a- F1 - (A2 ) b y multímeros de los mismos, caracterizado porque F1 es un vehículo; A1 y A2 son cada uno independientemente seleccionados de (L1) c-P1- (L2) d-P2- (L3) e-P3- (L4) f-P4 P1, P2, P3 y P4 son cada uno independientemente secuencias del péptido de hélice anfipático Apo-AI o dominios de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI; L\ L2, L3 y L4 son cada uno independientemente enlazadores; y a, b, c, d, e y f son cada uno independientemente 0 ó 1, con la condición de que al menos uno de a y b sea 1. 2. La composición de materia, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque tiene las fórmulas A^F1 o Fx-A2. 3. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es de la fórmula 4. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es de la fórmula F1-(L1)c-P1-(L2)d-P2. 5. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque F1 es un dominio Fc. 6. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque F1 es un dominio Fc de IgG. 7. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque F1 es un dominio Fc de IgGl. 8. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque F1 comprende la secuencia de la SEQ ID N0:2. 9. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el péptido de hélice anfipático Apo-AI o la secuencia de dominio de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI es de la fórmula Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu Ala Phe (SEQ ID NO: 7) 10. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque F1 es un dominio Fc . 11. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque F1 es un dominio Fc de IgG. 12. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque F1 es un dominio Fc de IgGl. 13. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque tiene una secuencia que se selecciona de la Tabla 2 (SEQ ID NOS: 8 hasta 11) . 14. Un ADN, caracterizado porque codifica una composición de materia de conformidad con la reivindicación 5. 15. Un ADN, caracterizado porque codifica una composición de materia de conformidad con la reivindicación 10. 16. Un vector de expresión, caracterizado porque comprende el ADN de conformidad con la reivindicación 14. 17. Un vector de expresión, caracterizado porque comprende el ADN de conformidad con la reivindicación 15. 18. Una célula hospedadora, caracterizada porque comprende el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 16. 19. Una célula hospedadora, caracterizada porque comprende el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 17. 20. La célula de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque la célula es una célula de E. coli. 21. La célula de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque la célula es una célula de E. coli. 22. Un proceso para preparar un compuesto de péptido mimético de hélice anfipática Apo-AI, caracterizado porque comprende : a) seleccionar el péptido de hélice anfipático Apo-AI o al menos un péptido mimético del péptido de hélice anfipático Apo-AI; y b) preparar un agente farmacológico que comprende al menos un dominio Fc enlazado covalentemente a al menos una secuencia de aminoácido del péptido o péptidos seleccionados de la etapa a) . 23. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el péptido se selecciona de la SEQ ID NO .- 7. 24. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el péptido se selecciona en un proceso que comprende separar por exclusión una colección de despliegue de fagos, una colección que despliega E. coli, una colección ribosomal, una colección de péptidos de ARN, o una colección química de péptidos. 25. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la preparación del agente farmacológico se lleva a cabo por: a) preparar un constructo de gen que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido seleccionado y una secuencia de ácido nucleico que codifica un dominio Fc; y b) expresar el constructo de gen. 26. El proceso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el constructo de gen se expresa en una célula de E. coli. 27. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la selección del péptido se lleva a cabo por un proceso que comprende : a) preparar un constructo de gen que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un primer péptido seleccionado y una secuencia de ácido nucleico que codifica un dominio Fc; b) conducir una reacción de cadena de polimerasa con el uso del constructo de gen y cebadores mutagénicos, en donde i) un primer cebador mutagénico comprende una secuencia de ácido nucleico complementaria a la secuencia en o cerca del extremo 5' de una hebra codificada el constructo de gen, y ii) un segundo cebador mutagénico que comprende una secuencia de ácido nucleico complementaria al extremo 3' de la hebra no codificada del constructo del gen. 28. Un método para el tratamiento de hipercolesterolemia, caracterizado porque comprende administrar una composición de materia de conformidad con la reivindicación 1. 29. Un método para el tratamiento de una infección viral, caracterizado porque comprende administrar una composición de materia de conformidad con la reivindicación 1. fi a Resumen de la Invención. La presente invención se refiere a agentes terapéuticos que imitan la actividad del péptido de hélice anfipático Apo-Al. De conformidad con la presente invención, los compuestos de la invención comprenden: (a) un péptido de hélice anfipático Apo-AI o un dominio de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI, preferiblemente la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO: 7, o secuencias derivadas de la misma por despliegue de fagos, separación por exclusión de péptido ARN, u otras técnicas mencionadas arriba; y (b) un vehículo, tal como un polímero (por ejemplo, PEG o dextrano) o un dominio Fc, que se prefiere; en donde el vehículo, preferiblemente un dominio Fc, se enlaza covalentemente al péptido de hélice anfipático Apo-AI o un dominio de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI . El vehículo y el péptido de hélice anfipático Apo-AI o un dominio de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI pueden enlazarse a través de las teminaciones N o C del péptido de hélice anfipático Apo-AI o un dominio de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI, como se describe abajo adicionalmente. El vehículo preferido es un dominio Fc, y el dominio Fc preferido es un dominio Fc IgG. Los péptidos de hélice antipáticos Apo-AI o dominios del péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI preferido comprenden las secuencias de aminoácido descritas en la Tabla 1. Otros péptidos de hélice antipáticos Apo-AI o dominios de péptido mimético de hélice anfipático Apo-AI, pueden generarse por despliegue de fagos, separación por exclusión del péptido ARN y otras técnicas mencionadas en la presente.