MXPA02009393A

MXPA02009393A - Polipeptido y heterodimero de hormona glucoproteica similar a beta.

Info

Publication number: MXPA02009393A
Application number: MXPA02009393A
Authority: MX
Inventors: Christopher J R Paszty
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2000-03-28
Filing date: 2001-03-28
Publication date: 2003-02-12
Also published as: US20080166768A1; AU2001247858B2; US20080057515A1; JP5049440B2; US8278422B2; EP1268802A2; US7358341B2; ES2328334T3; EP2130920A2; AU4785801A; US7883868B2; WO2001073034A2; US7514239B2; US20080188417A1; US20020015981A1; DE60139248D1; EP2130920A3; WO2001073034A3; CA2403800A1; US20030207403A1

Abstract

La presente invencion se refiere a nuevos polipeptidos °10 y heterodimeros de los mismos y a moleculas de acido nucleico que los codifican. La presente invencion tambien proporciona vectores, celulas huesped, agentes de union selectiva y metodos para producir polipeptidos °10 y formas heterodimericas de los mismos, especificamente a2/ °10. Tambien se proporcionan metodos para el tratamiento, diagnosticos, mejoria o prevencion de enfermedades con los polipeptidos °10 y heterodimeros a2/ °10 o sus respectivos agentes de union.

Description

PO IPEPTIDO Y HETERODIMERO. DE HORMONA GLUCOPROTEICA SIMILAR A BETA CAMPO DE LA INV?NCIÓN La presente invención se refiere a un nuevo miembro similar a beta (referido en la presente como *beta-10" ó wßl0") de la familia de hormonas glucoproteicas y a moléculas de ácido nucleico que lo codifican. La presente invención también se refiere a una nueva hormona gluproteica heterodimérica que comprende beta-10 y alfa-2 como subunidades. La presente invención también se refiere a ^rectores, células huésped, agentes de unión selectiva tales como anticuerpos y a métodos para producir -? polipéptidos beta-10 y el heterodimero beta-10 descrito. También se proporcionan métodos para el uso de beta-10 y el heterodimero beta-10 y agentes de unión selectiva a beta-10 y al heterodimero beta-10, incluyendo métodos para el diagnóstico y tratamiento de trastornos asociados con beta-10 ó el heterodimero beta-10. ANTECEDENTES DE LA INV?NCIÓN Co o se acepta generalmente en la técnica, en la actualidad existen cinco polipéptidos de hormona glucoproteica conocidos que se producen en seres humanos: la subunidad alfa, la subumdad-ß de la TSH (hormona REF: 142239 - estimulante de la tiroides), la subumdad-ß de la FSH (hormona estimulante del folículo) , la subunidad-ß de la LH (hormona luteinizante) y la subunidad ß de la CG (gonadotropina coriónica) ; Thotakura y Blithe, Glycobiology, Volumen 5, páginas 3-10 (1995) ; ondisford et al . , en el Volumen 1, Endocrinology (editado por L.

DeGroot) , páginas 208-217, W. B. Saunders Company, Filadelfia, PA (1995); Moyle y Campbell, en el Volumen 1, Endocrinology (editado por L. DeGroot) , páginas 230-241, . B. Saunders Company, Filadelfia, PA (1995) . Estos polipéptidos son producidos por genes únicos, con la excepción de la _subunidad ß de la CG, la cual es codificada por un grupo multigénico compuesto de seis secuencias homologas ligadas al gen único de la subunidad ß de la LH en el cromosoma 19; Bo y Boime, Journal of Biological Chemistiry, Vol. 267, páginas 3179-3184 (1992) . La subunidad alfa monomérica (SAL o subunidad-alfa libre) tiene actividad hormonal y es secretada por la glándula pituitaria y la placenta. Se ha encontrado que la SAL desempeña una función en la diferenciación de las células productoras de prolactina en la glándula pituitaria y la placenta; véase Begeot et al . , Science, Vol. 226, páginas 566-568 (1984) ; Van-Bael y Denef, Journal of Neuroendocrinology, Vol. 8, páginas 99-102 (1996) ;y Moy et - - al . , Endocrinology, Vol. 137, páginas 1332-1339 (1996); y también estimula la secreción de prolactina placentaria; vérase Blitche et al . , Endocrinology,._ Vol- 129, páginas 2257-2259 (1991) . La subunidad alfa también se heterodimepza con cada una de las cuatro subunidades beta, para formar cuatro hormonas ¿íeterodiméricas (TSH, FSH, LH y CG) . La TSH, FSE y LH son producidas en la pituitaria, almacenadas en granulos de secreción y secretadas _ cuando la hormona liberadora apropiada es producida por el hipotálamo. La CG es producida en la placenta y parece ser secretada de manera constitutiva (no es almacenada en granulos de secreción; véase Wondisford et al . , en el Volumen 1, Endocrinology (editado por L. DeGroot), páginas 208-217, . B. Saunders Company, Filadelfia, PA (1995) . La TSH influencia el metabolismo basal al regular la producción de hormonas tiroideas y se utiliza clínicamente para mejorar la detección^ el tratamiento del carcinoma de tiroides; véase McEvoy G. (ed.), AHFS Drug Information, páginas 2041-2042, American Society of Health-System Pharmacists, Inc., Bethesda, MD (1998). En adición, comúnmente se utilizan pruebas de diagnóstico para medir los niveles de TSH en la sangre, para determinar el estado funcional de la glándula tiroides cuando se sospecha de un trastorno de la misma.

La FSH y LH desempeñan funciones importantes en el mantenimiento de la función reproductiva en machos y hembras (i.e., maduración gonadal y producción gonadal de esteroides) . La CG está involucrada en el mantenimiento del embarazo al estimular el cuerpo lúteo para producir hormonas esteroides durante el primer trimestre. La FSH, LH y CG se utilizan clinicamente para el tratamiento de ia infertilidad y también como reactivos en el procedimientos de reproducción asistida, tales como la fertilización in vit-ro (FIV) ; véase McEvoy, G. (ed.), AHFS Drug Information, páginas 2564-2567, American Society of Health-System Pharmacists, Inc., Bethesda, MD (1998). Las pruebas de diagnóstico para medir la FSH, LH y CG se utilizan para el diagnóstico de trastornos de la fertilidad, asi como para probar el embarazo. Se han descrito metabolitos de origen natural de los anteriores polipéptidos de hormona glucoproteica, tales como el fragmento ß-core que se deriva de la subunidad beta de la CG, pero a estos metabolitos todavía no se les asigna ninguna función; Moyle y Campbell en el Volumen 1 Endocrinology (ed. L. DeGroot) páginas 230-241, anterior. En 1994, los cinco polipéptidos de hormona glucoproteica conocidos fueron colocados en la superfamilia estructural del factor de crecimiento que posee un nudo de cistina, basándose en la estructura cristalina de la CG J. - humana; Lapthorn et al . , Nature, Vol. 369, páginas 455-61 (1994) . Esta superfamilia incluye a las familias de genes FTC-ß (factor transformador del crecimiento beta) , FCN (factor de crecimiento nervioso) y FCDP (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) . El nudo de cistina está formado por tres puentes de disulfuro intramoleculares, tiene una estructura muy caracteristica y es el responsable de la estructura tridimensional global de los miembros de la superfamilia; Isaacs, Current Opinión in Structural Biology, Vol. 5, páginas 391-395 (1995) . Una solicitud de patente recientemente publicada describe un nuevo miembro de la familia que posee un nudo de cistina (zsig51); Sheppard y Lok (1999), Solicitud Internacional de Patente WIPO WO 99/41377. El zsig51 de hecho se ha determinado que es un nuevo miembro similar a alfa de la familia de hormonas glucoproteicas, por lo que será referido en la presente como *a2" ó * alfa-2" [Paszty et al . (2000), Solicitud Internacional de Patente WIPO WO 00/78964] . SUMARIO DE LA INV?NCIÓN La presente invención proporciona, en parte, un polipéptido humano secretable aislado (SEQ ID NO: 1) que es un nuevo miembro similar a beta de la^familia de hormonas glucoproteicas y en la presente se designa como *beta-10" ó *ßlO" . La secuencia de aminoácidos de longitud completa del ßlO humano de conformidad con la presente invención, se muestra en la Figura 1. El péptido de señal N-termmal predicho para el polipéptido ßlO se muestra subrayado. La asparagina (N) en la posición 87 de la SEQ ID NO: 1 está localizada dentro de una porción^ clásica NxT de glucosilación (en donde x denota cualquier aminoácido excepto prolina y T denota treonina) y es probable que esté glucosilada. El sitio de rompimiento del péptido de señal en la secuencia de aminoácidos ßlO se espera que esté dentro de la región de ocho aminoácidos encerrada en una caja en la Figura 1. El rompimiento del péptido de señal en el sitio que es muy probable que sea el sitio de rompimiento auténtico in vivo, se refleja en la secuencia del polipéptido ßlO "maduro" (SEQ ID NO: 3) . La forma "madura" más probable (i.e., procesada in si tu para remover el péptido de señal) del polipéptido ßlO se aplicó en la base de datos de Proteínas NonRedundant utilizando el programa de análisis por ^computadora conocido como BLAST, para examinar las homologías (específicamente aquellas que ocurren comúnmente o residuos de aminoácidos conservados" ) con proteinas conocidas. Se encontró que los 112 "hits" principales eran varias subunidades ß de hormonas glucoproteicas de varias especies de mamíferos, peces y aves. Estas homologías indicaron claramente que el ßlO es un nuevo miembro similar a ß de la familia de hormonas glucoproteicas. Además, el análisis GAP indicó que la homología de ßlO con las cuatro subunidades ß de la hormona glucoproteica humana (anteriormente mejicionadas) tenia de 31% a 37% de identidad y de 42% a 48% de similitud (véanse las Figuras 2A-D, que se refieren miás adelante en la presente) . Las formas maduras de los cuatro polipéptidos de hormona glucoproteica beta humana conocidos, contienen doce residuos cisteina, los cuales forman seis puentes de disulfuro intramoleculares. La forma madura del polipéptido ßlO humano de la presente invención, contiene diez residuos cisteina, los cuales es probable que formen cinco puentes de disulfuro intramoleculares. Utilizando el apareamiento de cisteinas mediante puentes de disulfuro de la hormona CG-ß como modelo, el apareamiento de cisteinas mediante enlaces de disulfuro más probable para los cinco puentes de disulfuro putativos del polipéptido ßlO de la presente invención, es el siguiente: C12-C60, C26-C75, C36-C91, C40-C93 y C96-C103 de la SEQ ID NO: 3 (véase también la Figura 3) . La secuencia de aminoácidos de longitud completa del polipéptido ßlO murino, se establece en la SEQ ID NO: 11 y la secuencia de nucleótidos de la región codificadora completa del ADNc ßlO murmo se establece en la SEQ ID NO: 12. El' rompimiento del péptido de señal en el sitio que es más probable que sea el sitio de rompimiento auténtico in vivo, está reflejado en la secuencia de la forma "madura" del polipéptido ßlO murino (SEQ ID NO: 13) . El análisis por el método BestFit indicó que la homología de aminoácidos de la forma madura del polipéptido ßlO humano, en comparación con la forma madura del polipéptido ßlO murino fue de 93.4% de identidad y 97.2% de similitud (véase la Figura 4, la cual es referida más adelante en la presente) . Con base en la inclusión lógica del polipéptido ßlO de la presente invención en la familia de hormonas glucoproteicas, este polipéptido podria ser un monómero (análogo a SAL y al fragmento ß-core) y/o podria formar un heterodimero con uno o más polipéptidos de la familia de hormonas glucoproteicas (por ejemplo heterodimeros O/ßlO, ßlO/TSH-ß, ßlO/LH-ß) . El polipéptido ßlO también podria formar heterodimeros con polipéptidos que son distintos a los polipéptidos de hormonas glucoproteicas conocidos. Con base en estas diversas posibilidades, el polipéptido ßlO podria formar más de una hormona (i.e., las hormonas ßlO) .

- - Se utilizó un ensayo de heterodi erización para determinar que el ßlO humano forma un heterodimero con el polipéptido a2 humano, que se describe en las Solicitudes Internacionales de Patente anteriormente mencionadas WO 99/41377 y WO 00/78964, descubriendo y definiendo de esta manera una nueva hormona glucoproteica heterodimérica, a2/ßl0. El fundamento general del ensayo de heterodimerización para proteinas secretadas, tales como las hormonas glucoproteicas, es la cotransfección de los dos distintos genes en células de mamífero, la colección de los medios condicionados, la inmunoprecipitación con un anticuerpo que se una específicamente a uno de los productos génicos y una inmunoelectrotransferencia tipo Western del inmunoprecipitado con un anticuerpo que se una específicamente al otro producto génico. Con los experimentos de control apropiados en su lugar, la presencia de una banda del tamaño correcto en la inmunoelectrotransferencia tipo Western, indicarla la heterodimerización de los dos productos génicos bajo las condiciones experimentales del ensayo, mientras que la ausencia de una banda del tamaño correcto en el ensayo de inmunoelectrotransferencia, indicarla que los dos productos génicos no se heterodimerizan bajo las condiciones - experimentales del mismo. Debido a que las hormonas glucoproteicas heterodiméricas conocidas (LH, FSH, TSH y CG) se pueden producir fácilmente por cotransfección de células de mamífero con los genes apropiados, este tipo de ensayo de heterodimerización por cotransfección basado en células de mamífero es relevante para los miembros de esta familia de hormonas glucoproteicas. Un vector de expresión de mamífero humano a.2- poliHis marcado y un vector de expresión de mamífero humano ßlO-FLAG marcado fueron cotransfectados en células 293 y el medio condicionado sin suero fue cosechado después de 72 horas. La inmunoprecipitación se realizó utilizando cuentas de afinidad de M2-Agarosa anti-FLAG (Catálogo #A1205, Sigma, St. Louis, MO) . Se realizó una inmunoelectrotransferencia tipo Western de este inmunoprecipitado con anticuerpos policlonales de conejo anti-a2 purificados por afinidad (Ejemplo 4) que fueron conjugados con peroxidasa de rábano (Linx HRP Rapid Protein Conjugation Kit, catálogo # K8050-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) . Se observó una fuerte banda -a2-poliHis marcada utilizando un paquete de detección Western Blot ECL (catálogo # RPN 2106, Amersham Pharmacia Biotech, - Piscataway, NJ) . Los experimentos de control mostraron que la presencia de la fuerte banda a2-poliHis marcada en la inmunoelectrotransferencia tipo Western, dependía completamente de la cotransfección con e.l vector de expresión de mamífero humano ßlO-FLAG marcado _ del uso de cuentas de afinidad de M2-Agarosa anti^FLAG. No se observó ninguna banda a2-poliHis marcada si cualquiera de estos dos componentes se excluía del experimento o si se utilizaban cuentas de agarosa desnudas (i.e., sin los anticuerpos anti-FLAG) para la etapa de inmunoprecipitación . De manera similar a las hormonas glucoproteicas heterodiméricas (TSH, FSH, LH y CG) , el polipéptido a2/ßl0 es un heterodimero de un .polipéptido de hormona glucoproteica similar a alfa y un polipéptido de hormona glucoproteica similar a beta. Estos datos también indican el heterodimero a2/ß!0 secretado recombinante (sin marcas de afinidad poliHis y FLAG) puede ser producido en células de mamífero para varias utilidades terapéuticas y de diagnóstico, de la manera que se describirá más adelante. Las hormonas glucoproteicas heterodiméricas tales como la CG también se pueden ensamblar in vi tro mediante la coincubación de, por ejemplo, la subunidad alfa aislada y la subunidad ß de CG aislada, bajo condiciones adecuadas [véase Blithe e lies, Endocrinology, Volumen 136, páginas - 903-910 (1995)]. El heterodimero a2/ßl0, de manera similar, se podria ensamblar in vi tro mediante la coincubación del polipéptido a2 aislado y el polipéptido ßlO aislado. Tal heterodimero a2/ß!0 ensamblado se podria ensamblar para varias aplicaciones ^terapéuticas y de diagnóstico, tal como se describirá más_ adelante . Se prepararon ratones transgénicos que sobreexpresaban el polipéptido a2 murino solo, el polipéptido ßlO murino solo o el heteroxümero a2/ßl0 murino (véase el Ejemplo 6) . Sólo aquellos transgénicos que sobxeexpresaban el heterodimero a2/ßl0 mostraron diferencias fenotipicas distinguibles en comparación con los ratones control. Los ratones transgénicos que sobreexpresaban el a2/ßl0 exhibieron un fenotipo caracterizado por un agrandamiento tiroideo bilateral con múltiples adenomas papilares foliculares, dando como resultado hipertiroidismo, tal como lo indicaba una elevada concentración de T4 sérica. Se piensa que otros cambios fenotipicos están relacionados con el estado hipertiroideo sistémico e incluyen hepatomegalia moderada, hiperplasia hepatocelular y concentración de colesterol sérico ligeramente disminuida, hipertrofia renal bilateral y una leucocitosis de leve a moderada con predominio de linfocitos (véase el Ejemplo 6) . Asi pues, en un ratón - - normal la combinación a2/ßl0 claramente tiene una actividad similar a la hormona estimulante de la tiroides (TSH) . Debido al alto nivel de conservación de aminoácidos entre los polipéptidos a.2 murino y a2 humano [88.5% de identidad y 90.4% de similitud para las formas maduras predichas (i.e., sin el péptido de señal)], el alto nivel de conservación de aminoácidos entre el ßlO murino y el ßlO humano [93.4% de identidad y 97.2% de similitud para las formas maduras predichas (i.e., sin el péptido de señal)], y el muy alto nivel de similitud entre la biología de la glándula tiroides murina . y la humana, se- anticipa que el heterodimero a2/ßl0 tenga la misma actividad similar a hormona estimulante de la tiroides (TSH) que la encontrada en el heterodimero a2/ßl0 murino. Además de la actividad similar a TSH, el a2/ßl0 puede tener otros efectos biológicos distintos en diferentes estados fisiológicos (i.e., condiciones de enfermedad), tal como se describe en detalle más adelante en la presente. La TSH influencia el metabolismo basal al regular la producción de hormonas tiroideas y se utiliza clínicamente para mejorar la detección y el tratamiento del carcinoma tiroideo; véase McEvoy, G. (ed.), AHFS Drug Information, páginas 20-41-2042, American Society of Health-System Phar acists, Inc., Bethesda, MD (1998).

Además, las pruebas de diagnóstico para medir los niveles de TSH en la sangre se utilizan comúnmente para determinar el estado funcional de la glándula tiroides cuando se sospecha de un trastorno de esta glándula. Es probable que el a2/ßl0 humano tendrá utilidades clínicas similares a la TSH y será útil para el tratamiento y diagnóstico de enfermedades y trastornos relacionados con la glándula tiroides. En adición. El a2/ßl0 humano puede tener otros usos terapéuticos y de diagnóstico que se describen en la presente. Es razonable suponer que agentes de unión selectiva al a2/ßl0 humano, por ejemplo anticuerpos, tendrán utilidades clínicas similares a los agentes de unión selectiva a la TSH y por lo tanto serán útiles para el tratamiento y diagnóstico de enfermedades y trastornos relacionados con la glándula tiroides. Además, los agentes de unión selectiva al a2/ßl0 humano pueden tener otros usos terapéuticos y de diagnóstico tal como se describe en la presente. La presente invención también proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de nucleótidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 2; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1; (c) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de las secuencias de los incisos (a) o (b) , en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2, tiene una actividad del heterodimero a2/ßlO humano; y (d) una secuencia de nucleótidos complementaria a cualquiera de los incisos (a) -Je) . La presente invención también proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido que tiene cuando menos aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento de identidad con el polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para una variante alélica o variante por empalmamiento de la secuencia de nucleótidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 2, en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (c) una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2, del inciso (a) o del inciso (b) que codifica para un fragmento polipeptidico de cuando menos aproximadamente 25 residuos de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (d) una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2 ó de los incisos (a)-(c), que comprende un fragmento de cuando menos aproximadamente 16 nucleótidos; (e) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de cualquiera de los incisos (a)-(d), en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; y (f) una secuencia de nucleótidos complementaria a cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(d). La presente invención además proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1 con cuando menos una substitución de aminoácido conservadora, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero 2/ßl0 humano; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1 con cuando menos una inserción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1 con cuando menos una deleción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (d) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1 que tiene un truncamiento C-terminal y/o N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero 2/ßl0 humane- Ce) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1 con cuando menos una modificación que se selecciona del grupo que consiste de substituciones de aminoácidos, inserciones de aminoácidos, deleciones de aminoácidos, truncamiento C-terminal y truncamiento N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido 2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (f) una secuencia de nucleótidos de los incisos (a) -J e) que comprende un fragmento de cuando menos aproximadamente 16 nucleótidos; (g) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(f), en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero 2/ßl0 humano; y (h) una secuencia de nucleótidos complementaria con cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(e). La presente invención también proporciona un polipéptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo . que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos madura tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 y opcionalmente además comprende una metionina amino-terminal; (b) una secuencia de aminoácidos que codifica para un ortólogo de la SEQ ID NO: 3, en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (c) una secuencia de aminoácidos que tiene cuando menos aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (d) un fragmento de la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 que comprende cuando menos aproximadamente 25 residuos de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (e) una secuencia de aminoácidos de una variante alélica o variante por empalmamiento ya sea de la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 ó bien de cuando menos una de las secuencias de los incisos (a)- (c) , en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el _ polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano.

La presente invención además proporciona un polipéptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una substitución de aminoácido conservadora, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido et2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (b) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una inserción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humane; te) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una deleción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (d) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 que tiene un truncamiento C-ter inal y/o N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; y (e) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una modificación que se selecciona del grupo que consiste de substituciones de aminoácidos, inserciones de aminoácidos, . deleciones de aminoácidos, truncamiento C-terminal y truncamiento N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano. También se proporcionan polipéptidos de fusión que comprenden las secuencias de aminoácidos de los incisos (a)-(e) anteriores. La presente invención también proporciona un vector de expresión que comprende las moléculas de ácido nucleico aisladas tal como se exponen en la presente, células huésped recombinantes que comprenden las moléculas de ácido nucleico recombinantes tal como se exponen en la presente y un método para la producción de un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 de la presente invención, que comprende cultivar las células huésped y opcionalmente aislar el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 producido de esta manera. La presente invención también abarca un animal transgénico no humano que comprende una molécula o moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Las moléculas de ácido nucleico son introducidas en el animal de una manera que se permita la expresión y se incremente la concentración del polipéptido ßlO ó del heterodimero o-2/ßlO, lo cual puede incluir un incremento en la concentración circulante. El animal transgénico no humano de preferencia es un mamífero. También se proporcionan derivados del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Adicionalmente, se proporcionan agentes de unión selectiva tales como anticuerpos y péptidos capaces de unirse específicamente al polipéptido ßlO ó al heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Tales anticuerpos y péptidos pueden ser agonistas o antagonistas a una actividad del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0. Las composiciones farmacéuticas que comprenden los nucleótidos, el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 ó agentes de unión selectiva de la presente invención y uno o . más agentes de formulación farmacéuticamente aceptables, también están abarcados por la presente invención. Las composiciones farmacéuticas se utilizan para proporcionar cantidades terapéuticamente efectivas de los nucleótidos o polipéptidos de la presente invención. La invención también se refiere a métodos para utilizar las moléculas de ácido nucleico, el polipéptido ßlO, el heterodimero a2/ßl0 y los agentes de unión selectiva. Las moléculas de ácido nucleico, el polipéptido, el heterodimero a2/ßl0 y los agentes de unión selectiva de la presente invención, se pueden utilizar para el tratamiento, prevención, mejoramiento y/o detección de enfermedades y trastornos, incluyendo aquellos enunciados en la presente. La presente invención también proporciona un método para ensayar moléculas de prueba para identificar una molécula de prueba que se una a un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0. El método comprende poner en contacto el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 con una molécula de prueba y determinar el grado de unión de la molécula de prueba con el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0. El método además comprende determinar si tales moléculas de prueba son agonistas o antagonistas del polipéptido ßlO ó del heterodimero a.2/ßlO. La presente invención además proporciona un método para probar el impacto de moléculas sobre la expresión del polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 ó sobre la actividad del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0. Los métodos para regular la expresión y modular - (i.e., incrementar o disminuir) la concentración de un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 de la presente invención, también están incluidos en la presente invención. Un método comprende administrarle a un animal una molécula o moléculas de ácido nucleico que codifican para tal polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. En otro método, se puede administrar una molécula de ácido nucleico que comprende elementos que regulan o modulan la expresión del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Ejemplos de estos^ métodos incluyen la terapia de genes, terapia celular y terapia antisentido, tal como se describirán más adelante en la presente. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra un arreglo lineal de la región codificadora completa del polipéptido ßlO humano de conformidad con la presente invención (SEQ ID NO: 1) . La región del péptido de señal predicho está subrayada y la región que contiene el sitio de rompimiento del péptido de señal predicho está encerrada en una caja. El residuo asparagina (N) que está localizado en la porción de glucosilación clásica NxT y que es muy probable que esté glucosilado, se muestra con letras más grandes. La correspondiente secuencia de ácido nucleico que codifica para este polipéptido (SEQ ID NO: 2) comprende los - - nucleótidos del 1 al 390, inclusive, de la secuencia de ácido nucleico mostrada en esta Figura. Las Figuras 2A-2D ilustran la relación de los polipéptidos subunidad ß de hormona glucoproteica humana conocidos (técnica anterior) y el polipéptido ßlO de la presente invención. La forma madura del ßlO utilizada para estas comparaciones (SEQ ID NO: 3) es muy probable que represente la forma auténtica in vivo del polipéptido ßlO. Las Figuras 2A-D comprenden el resultado del análisis GAP que muestra homología de aminoácidos entre la forma madura de ßlO y, respectivamente, la subunidad ß de la TSH (hormona estimulante de la tiroides), la subunidad ß de la FSH (hormona estimulante del folículo) , la subunidad ß de la LH (hormona luteinizante) y la subunidad ß de la CG (gonadotropina coriónica) . La Figura 3 muestra los pares probables de puentes de disulfuro de cisteina (C) de los cinco puentes de disulfuro putativos en la forma madura más probable del ßlO (SEQ ID NO: 3) . Los diez residuos cisteina se muestran en letras más grandes y los puentes de disulfuro están ilustrados como lineas continuas. Los tres diferentes puentes de disulfuro (C12-C60, C36-C91, C40-C93) que forman el nudo de cisteina están ilustrados por arriba de la secuencia de aminoácidos y los dos puentes de disulfuro - adicionales (C26-C75, C96-C103) están dibujados por abajo de la secuencia de aminoácidos. La Figura 4 es el resultado "de la prueba BestFit que muestra la homología de aminoácidos entre la forma madura del ßlO humano y la forma madura del ßlO murino. La forma madura del ßlO humano utilizado para esta comparación (SEQ ID NO: 3) es muy probable que represente la forma auténtica in vivo del polipéptido ßlO humano. La forma madura del ßlO murino utilizada para esta comparación (SEQ ID NO: 13) es muy probable que represente la forma auténtica in vivo del polipéptido ßlO murino. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INV?NCIÓN Los encabezados de sección utilizados en la presente tienen sólo propósitos de organización y no se deben considerar como limitantes de la materia objeto descrita. Todas las referencias citadas en esta solicitud se incorporan expresamente como referencia. Definiciones Los términos ""gen ßlO" ó "molécula de ácido nucleico ßlO" ó "polinucleótido" se refieren a una molécula de ácido nucleico que comprende o consiste de una secuencia de nucleótidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 2, una secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, un nucleótido del - - inserto de ADN en el depósito de la ATCC NO: PTA-1210 y moléculas de ácido nucleico tales como las definidas en la presente. El término "polipéptido ßlO" se refiere a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 y polipéptidos relacionados. Los polipéptidos relacionados incluyen: variantes alélicas del polipéptido ßlO, ortólogos del polipéptido ßlO, variantes por empalmamiento del polipéptido ßlO, variantes del polipéptido ßlO y derivados del polipéptido ßlO. Los polipéptidos ßlO pueden ser polipéptidos maduros, tal como se define en la presente, y pueden o no tener un residuo metionina amino-terminal, dependiendo del método por el cual fueron preparados. El término "variante alélica del polipéptido ßlO" se refiere a una de varias formas alternativas de origen natural posibles de un gen que ocupa un locus dado en un cromosoma de un organismo o de una población de organismos. El término "derivados del polipéptido ßlO" se refiere al polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, variantes alélicas del polipéptido, ortólogos del polipéptido, variantes por empalmamiento del polipéptido o variantes del polipéptido, tal como se describen en la presente, que han sido quimicamente modificados.

- El término 'fragmento del polipéptido ßlO" se refiere a un polipéptido que comprende un truncamiento en el extremo amino-terminal (con o sin secuencia lider) y/o un truncamiento en el extremo carboxilo-terminal del polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, variantes alélicas del polipéptido, ortólogos del polipéptido variantes por empalmamiento del polipéptido y/o una variante del polipéptido que tenga una o más adiciones o substituciones o deleciones internas de aminoácidos (en donde el polipéptido resultante tiene cuando menos 6 aminoácidos o más de longitud) , en comparación con la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO que se expone en la SEQ ID NO: 3. Los fragmentos del polipéptido pueden ser el resultado de empalmamiento de ARN alternativo o por una actividad de proteasa in vivo. En modalidades preferidas, los truncamientos comprenden aproximadamente 10 aminoácidos, o aproximadamente 20 aminoácidos, o aproximadamente 50 aminoácidos, o aproximadamente 75 aminoácidos, o más de aproximadamente 100 aminoácidos. Los fragmentos polipeptidicos producidos de esta manera comprenderán aproximadamente 25 aminoácidos contiguos, o aproximadamente 50 aminoácidos, o aproximadamente 75 aminoácidos, o aproximadamente 100 aminoácidos, o aproximadamente 150 aminoácidos, o aproximadamente 200 aminoácidos. Tales fragmentos polipeptidicos opcionalmente - pueden comprender un residuo metionina amino-terminal. Se observará que tales fragmentos se pueden utilizar, por ejemplo, para generar anticuerpos contra el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0. _ El término "polipéptido de fusión ßlO" se refiere a una fusión de uno o más aminoácidos (tal como un péptido o polipéptido heterólogo) en el extremo amino-terminal o carboxilo-terminal del polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, variantes alélicas del polipéptido, ortólogos del polipéptido, variantes por empalmamiento del polipéptido o variantes del polipéptido que tengan una o más deleciones, substituciones o adiciones internas de aminoácidos, en comparación con la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO que se expone en la SEQ ID NO: 3. El término "ortólogo del polipéptido ßlO" se refiere a un polipéptido proveniente Je otra especie que corresponde a la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO tal como se expone en la SEQ ID NO: 3. Por ejemplo, los polipéptidos ßlO murino y humano se consideran como ortólogos. El término "variante por empalmamiento del polipéptido ßlO" se refiere a una molécula de ácido nucleico, normalmente ARN, que es generada por un procesamiento alternativo de secuencias de intrón en una - - transcripción de ARN de la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO tal como se expone en la SEQ ID NO: 3. El término "variantes del polipéptido ßlO" se refiere a polipéptidos similares a ßlO que comprenden secuencias de aminoácidos que tienen una o más substituciones, deleciones (tales como deleciones internas y/o fragmentos polipeptidicos) y/o adiciones (tales como adiciones internas y/o polipéptidos de fusión) en la secuencia de aminoácidos, en comparación con la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO tal como se expone en la SEQ ID NO: 3. Las variantes pueden ser de origen natural (e.g., variantes alélicas del polipéptido similar a ßlO, ortólogos del polipéptido y variantes por empalmamiento del polipéptido) o pueden ser construidas artificialmente. Tales variantes del polipéptido se pueden preparar a partir de las correspondientes moléculas de ácido nucleico que tienen" una secuencia de ADN que varia respecto a la secuencia de ADN expuesta en la SEQ ID NO: 2. En modalidades preferidas, las variantes tienen de 1 a 3, ó de l a 5, ó de 1 a 10, ó de 1 a 15, ó de 1 a 20, ó de l a 25, ó de l a 50, ó de 1 a 75, ó de 1 a 100, ó más de 100 substituciones, inserciones, adiciones y/o deleciones de aminoácidos, en donde las substituciones pueden ser conservadoras o no conservadoras, o cualquier combinación de los mismos. El término "heterodimero a2/ßl0" se refiere a un heterodimero del polipéptido ßlO y el polipéptido a£ . El término "antigeno" se refiere a una molécula o a una porción de una molécula capaz de ser fijada por un agente de unión selectiva, tal como un anticuerpo, y adicionalmente capaz de ser utilizada en un animal para producir anticuerpos capaces de unirse a un epitopo de ese antigeno. Un antigeno puede tener uno o más epitopos. El término "polipéptidos ßlO biológicamente activos" se refiere a polipéptidos similares a ßlO que, cuando se heterodimerizan con el polipéptido a2 humano, tienen una actividad del heterodimero a-2/ßlO humano. Los términos "cantidad efectiva" y "cantidad terapéuticamente efectiva" se refieren a la cantidad de una molécula de ácido nucleico ßlO ó un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 de la presente invención, utilizada para soportar un nivel observable de una o más actividades biológicas del heterodimero a2/ßl0 descrito en la presente. El término "vector de expresión" se refiere a un vector que es adecuado para utilizarse en una célula huésped y que contiene secuencias de ácido nucleico que dirigen y/o controlan la expresión de secuencias de ácido nucleico heterólogas. La expresión incluye, pero no se limita a, procesos tales como la transcripción, traducción y empalman..lento de ARN, si hay presentes intrones. El término "célula huésped" se utiliza para referirse a una célula que ha sido transformada o que es capaz de ser transformada con una secuencia de ácido nucleico y luego expresar un gen seleccionado de interés. El término incluye la progenie de la célula progenitora, independientemente de si la progenie es idéntica o no en morfología o en construcción genética al progenitor original, siempre y cuando el gen seleccionado esté presente. El término "identidad" tal como se conoce en la técnica, se refiere a una relación entre las secuencias de dos o más moléculas polipeptidicas o dos o más moléculas de ácido nucleico, determinada al comparar las secuencias. En la técnica, el término "identidad" también significa un grado de relación de secuencia entre -moléculas de ácido nucleico o polipéptidos, tal como puede ser el caso determinado por el apareamiento entre cadenas de dos o más secuencias de nucleótidos o dos o más secuencias de aminoácidos. La "identidad" mide el porcentaje de apareamientos idénticos entre la más pequeña de las dos o más secuencias con alineaciones de huecos (si los hay) , lo cual es manejado por un modelo matemático particular o algún programa de computadora (i.e., "algoritmos").

El término "similitud" es un concepto relacionado, pero en contraste a la "identidad", se refiere a la medición de la similitud que incluye tanto apareamientos idénticos como apareamientos por substitución conservadora. Si dos secuencias polipeptidicas tienen, por ejemplo, 10/20 aminoácidos idénticos y el resto son substituciones no conservadoras, entonces tanto el porcentaje de identidad como el de similitud serán 50%. Si en el mismo ejemplo, existen 5 posiciones más en donde hay substituciones conservadoras, entonces el porcentaje de identidad permanecerá en 50%, pero el porcentaje de similitud será 75% (15/20) . Por lo tanto, en casos en donde hay substituciones conservadoras, el grado de similitud entre dos polipéptidos será mayor que el porcentaje de identidad entre los mismos. El término "molécula de ácido nucleico aislada" se refiere a una molécula de ácido nucleico de la presente invención que está libre de cuando menos una molécula de ácido nucleico contaminante con la cual está asociada en la naturaleza. De preferencia, la molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención está substancialmente libre de cualquier otra molécula o moléculas de ácido nucleico contaminantes o de cualquier otro contaminante que se encuentre en su ambiente natural y que pudiera interferir con su uso en la producción de polipéptidos o en su uso terapéutico, diagnóstico, profiláctico o de investigación. El término "polipéptido aislado" se refiere a un polipéptido de la presente invención que está libre de cuando menos un polipéptido contaminante o cualquier otro contaminante que se encuentre en su ambiente natural. De preferencia, el polipéptido aislado está substancialmente libre de cualquier otro polipéptido o cualquier otro contaminante que se encuentre en su ambiente natural que pudiera interferir con su uso terapéutico, diagnóstico, profiláctico o de investigación. El término "polipéptido ßlO maduro" se refiere a un polipéptido ßlO que carece de la secuencia lider. Un polipéptido ßlO maduro también puede incluir otras modificaciones, tales como el procesamiento proteolitico del extremo amino-terminal (con o sin secuencia lider) y/o el extremo carboxilo-terminal, el rompimiento de un polipéptido más pequeño a partir de un precursor más grande, una glucosilación N-ligada y/u O-ligada y similares. El término "secuencia de ácido nucleico" o "molécula de ácido nucleico" se refiere a una secuencia de ADN o ARN. El término abarca moléculas formadas a partir de cualquiera de los análogos de bases conocidas de ADN y ARN, tales como, pero no limitándose a 4-acetilcitosina, 8-hidroxi-N6-metHádenosina, aziridini1-citosina, pseudoisocitosina, 5- (carboxihidroxilmetil.) -uracilo, 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouracilo, 5-carboximetilaminometiluracilo, dihidrouracilo, inosina, N6-iso-penteniladenina, 1-metiladenina, 1-metilpseudouracilo, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2, 2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6-metiladenina, 7-metilguanina, 5-metilaminommetiluracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouracilo, beta-D-manosilqueosina, 5'-metoxicarbonil-metiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-Nd-isopenteniladenina, metiléster del ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético, oxibutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, metiléster del ácido N-uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina y 2, 6-diaminopurina . El término "de origen natural" o "nativo" cuando se utiliza en relación con materiales biológicos tales como moléculas de ácido nucleico, polipéptidos, células huésped y similares, se refiere a materiales que se encuentran en la naturaleza y que no son manipulados por el hombre. De manera similar, los términos "de origen no natural" o "no nativo", tal como se utiliza en la presente, se refieren a un material que no se encuentra en la naturaleza o que ha sido estructuralmente modificado o sintetizado por el hombre . El término "operablemente ligado" se utiliza en la presente para referirse a un arreglo de secuencias de flanqueo en donde las secuencias de flanqueo descritas están configuradas o ensambladas de tal manera que realicen su función normal. Asi pues, una secuencia de flanqueo operablemente ligada a una secuencia codificadora, puede ser capaz de efectuar la replicación, transcripción y/o traducción de la secuencia codificadora. Por ejemplo, una secuencia codificadora está operablemente ligada a un promotor, cuando el promotor es capaz de dirigir la transcripción de esa secuencia codificadora. Una secuencia de flanqueo no necesita ser contigua a la secuencia codificadora, siempre y cuando funcione correctamente. Asi pues, por ejemplo, puede haber presentes secuencias intervinientes que están transcritas pero todavía no traducidas entre una secuencia promotora y la secuencia codificadora y sin embargo la secuencia promotora todavía se puede considerar como "operablemente ligada" a la secuencia codificadora. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "vehículo fisiológicamente aceptable" tal como se utiliza en la presente, se refiere a uno o más materiales de formulación adecuados para lograr o mejorar la distribución de una molécula de ácido nucleico -ßlO, polipéptido ßlO, heterodimero a2/ßl0 ó agente de unión selectiva de la presente invención, como composición farmacéutica. El término "agente de unión selectiva" se refiere a una molécula o moléculas que tienen especificidad por el polipéptido ßlO y/o el heterodimero _a2/ßl0 de la presente invención. Tal como se utilizan en la presente, los términos "especifico" y "especificidad" se refieren a la capacidad de los agentes de unión selectiva de unirse al polipéptido ßlO humano y/o al heterodimero a2/ßl0 humano y no unirse a polipéptidos no ßlO humanos y/o a heterodimeros no a2/ßl0. Sin embargo, se observará que los agentes de unión selectiva también se pueden unir a ortólogos del polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 y/u ortólogos del heterodimero a2/ßl0; es decir, versiones interespecie de los mismos, tales como polipéptidos de ratón y de rata. El término "transducción" se utiliza para referirse a la transferencia de genes de una bacteria a otra, normalmente por medio de un fago. La "transducción" también se refiere a la adquisición y transferencia de secuencias celulares eucarióticas a través de retrovirus.

El término "transfección" se utiliza para referirse a la incorporación de ADN extraño o exógeno por una célula, y se considera que una célula ha sido "transfectada" cuando el ADN exógeno ha sido introducido al interior de la membrana celular. En la técnica se conoce un número de técnicas de transfección y se describen en la presente. Véanse, por ejemplo, Graham et al . , Virology, 52: 456 (1973); Sambrook et al . , Molecular Cloning, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories (Nueva York, 1989); Davis et al . , Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier, 1986; y Chu et al . , Gene, 13: 197 (1981) . Tales técnicas se pueden utilizar para introducir una o más porciones de ADN exógeno en células huésped adecuadas . El término "transformación" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un cambio en las caracteristicas genéticas de una célula y se considera que una célula ha sido transformada cuando ha sido modificada para contener un nuevo ADN. Por ejemplo, una célula es transformada cuando su estado nativo es modificado genéticamente. Después de la transfección o traducción, el ADN transformante se puede combinar con el de la célula mediante la integración fisica a un cromosoma de dicha célula, puede ser mantenido transitoriamente como elemento episomal sin ser replicado, o puede replicarse - independientemente en forma de un plásmido. Se considera que una célula ha sido transformada de manera estable cuando el ADN es replicado con la división celular. El término "vector" se utiliza para referirse a cualquier molécula (e.g., ácido nucleico, plásmido o virus) utilizada para transferir información codificante a una célula huésped. Relación de Moléculas de Ácido Nucleico y/o Polipéptidos Se entiende que las moléculas de ácido nucleico relacionadas incluyen variantes alélicas o por empalmamiento de las moléculas de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 2 e incluyen secuencias que son complementarias a cualquiera de las secuencias de nucleótidos anteriores. Las moléculas de ácido nucleico relacionadas también incluyen una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido que comprende o consiste esencialmente de una substitución, modificación, adición y/o deleción de uno o más residuos de aminoácido, en comparación con el polipéptido de la SEQ ID NO: 1. Los fragmentos incluyen moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido de cuando menos aproximadamente 25 residuos de aminoácido, o aproximadamente 50, ó aproximadamente 75, ó aproximadamente 100, ó más de 100 residuos de aminoácido del polipéptido de la SEQ ID NO: 1.

- - Además, las moléculas de ácido nucleico ßlO relacionadas incluyen aquellas moléculas que comprenden secuencias de nucleótidos que se hibridizan, bajo condiciones moderada o altamente estrictas tal como se define en la presente, con la secuencia totalmente complementaria de la molécula de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 2 ó de una molécula que codifica para un polipéptido, en donde el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, ó de un fragmento de ácido nucleico tal como se define en la presente, o de un fragmento de ácido nucleico que codifica para un polipéptido tal como se define en la presente. Se pueden preparar sondas de hibridación utilizando las secuencias ßlO proporcionadas en la presente, para seleccionar bibliotecas de ADNc, ADN genómico o ADN sintético en busca de secuencias relacionadas. Las regiones del ADN y/o la secuencia de aminoácidos del polipéptido ßlO que exhiben una identidad significativa con secuencias conocidas, se determinan fácilmente utilizando algoritmos de alineación de secuencias tal como se describen en la presente y estas regiones se pueden utilizar para diseñar sondas de selección. El término "condiciones altamente estrictas" se refiere a aquellas condiciones que están diseñadas para - permitir la hibridación de cadenas de ADN cuyas secuencias son altamente complementarias y excluir la hibridación de ADN que no se aparea significativamente. El rigor de la hibridación está determinado principalmente por la temperatura, fuerza iónica y concentración de agentes desnaturalizantes, tales como formamida. Ejemplos de "condiciones altamente estrictas" para la hibridación y lavado son cloruro de sodio 0.015 M, citrato de sodio 0.0015 M a 65-68°C o cloruro de sodio 0.015 M, citrato de sodio 0.0015 M y formamida al 50%, a 42°C. Véase Sambrook, Fritsch y Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edición, Cold Spring Harbor Laboratory, (Cold Spring Harbor, N.Y. 1989); Anderson et al . , Nucleic Acid Hybridisation: A Practical Approach, Capitulo 4, IRL Press Limited (Oxford, Inglaterra) . También se pueden utilizar condiciones más estrictas (tales como mayor temperatura, fuerza iónica más baja, mayor concentración de formamida o algún otro agente desnaturalizante) , sin embargo, la velocidad de hibridación se verá afectada. Es posible incluir otros agentes en la hibridación y la solución reguladora de lavado para el propósito de reducir la hibridación no especifica y/o hibridación de fondo. Algunos ejemplos son 0.1% de albúmina sérica bovina, polivinilpirrolidona al 0.1%, pirofosfato de sodio al 0.1%, dodeciisulfato de sodio al - 0.1% (NaDodSO^ ó SDS), Ficoll, soiución de Denhardt, ADN de esperma de salmón sonicado (u otro ADN no complementario) y sulfato de dextrán, aunque también se pueden emplear otros agentes adecuados. La concentración y tipo de estos aditivos pueden cambiar sin afectar substancialmente el rigor de las condiciones de hibridación. Los experimentos de hibridación normalmente se llevan a cabo a pH 6.8-7.4; sin embargo, en condiciones de fuerza iónica típicas, la velocidad de hibridación es casi independiente del pH. Véase Anderson et al . , Nucleic Acid Hybridisation: A Practical Approach, Capitulo 4, IRL Press Limited (Oxford, Inglaterra) . Los factores que afectan la estabilidad de un dúplex de ADN incluyen la composición de bases, la longitud y el grado de no apareamientos de bases. Las condiciones de hibridación pueden ser ajustadas por un técnico en la materia con el fin de acomodar estas variables y permitir que ADNs de diferentes relaciones de secuencia formen híbridos. La temperatura de fusión_ de dúplex de ADN perfectamente apareado puede ser estimada por la siguiente ecuación: Tn(°C) = 81.5 + 16.6(log[Na+] ) + 0.41(»G+C) - 600/N - 0.72 ( %formamida) en donde JSf es la longitud del dúplex formado, [Na+] es la concentración molar del ion sodio en la solución de hibridación o de lavado, %G+C es el porcentaje de bases (guanosina + citosina) en el híbrido. Para híbridos imperfectamente apareados, la temperatura de fusión se reduce en aproximadamente 1°C por cada l i de no apareamiento. El término "condiciones moderadamente estrictas" se refiere a condiciones bajo las cuales se puede formar un dúplex de ADN con un mayor grado de desapareamiento de bases que lo que podria ocurrir bajo "condiciones altamente estrictas". Ejemplos de "condiciones moderadamente estrictas" típicas son cloruro de sodio 0.015 M, citrato de sodio 0.0015 M a 50-65°C o cloruro de sodio 0.015 M, citrato de sodio 0.0015 M y formamida al 20% a 37-50°C. A manera de ejemplo, una condición "moderadamente estricta" de 50 °C en ion sodio 0.015 M, permitirá aproximadamente un 21% de desapareamiento. Los técnicos en la materia observarán que no hay una distinción absoluta entre condiciones "altamente" y "moderadamente" estrictas. Por - ejemplo, a una concentración del ion sodio 0.015 M (sin formamida), la temperatura de fusión de ADN largo perfectamente apareado es de aproximadamente 71°C. Con un lavado a 65°C (a la misma fuerza iónica) , esto podria permitir aproximadamente un 6% de desapareamiento. Para capturar secuencias más distantemente relacionadas, un técnico en la materia podria simplemente disminuir la temperatura o elevar la fuerza - - iónica . Una buena estimación de la temperatura de fusión en NaCl 1 M* para sondas oligonucleotidicas de hasta 20 nucleótidos, está dada por la siguiente ecuación: Tm = 2°C por par de bases A-T + 4°C por par de bases G-C *La concentración del ion sodio en citrato sódico 6X (SSC) es 1 M. Véase Suggs et al . , Developmental Biology Using Purified Genes, página 683, Brown y Fox (eds.) (1981) . Las condiciones de lavado altamente estrictas para oligonucleótidos normalmente son a una temperatura de 0-5°C por abajo de la Tm del oligonucleótido en 6X SSC, 0.1% SDS. En otra modalidad, las moléculas de ácido nucleico relacionadas comprenden o consisten de una secuencia de nucleótidos que tiene aproximadamente 70% de identidad con la secuencia de rrucleótidos de la SEQ ID NO: 2, ó comprenden o consisten esencialmente de una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido que tiene aproximadamente 70% de identidad con el polipéptido de la SEQ ID NO: 1. En modalidades preferidas, las secuencias de nucleótidos tienen aproximadamente 70, 75^ 80, ó aproximadamente 85, ó aproximadamente 90, ó aproximadamente 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento de identidad con la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en la SEQ ID - - NO: 2, ó las secuencias de nucleótidos codifican para un polipéptido que tiene aproximadamente 70, 75, 80, ó aproximadamente 85, ó aproximadamente 90, ó aproximadamente 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento de identidad con la secuencia del polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO : 1. Las diferencias en la secuencia de ácido nucleico pueden dar como resultado modificaciones conservadoras y/o no conservadoras de la secuencia de aminoácidos con relación a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1. Las modificaciones conservadoras de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 (y las correspondientes modificaciones a los nucleótidos codificados), producirán polipéptidos similares a ßlO de conformidad con la presente invención, que tienen características funcionales y químicas similares a las del polipéptido ßlO de origen natural. En contraste, modificaciones substanciales en las caracteristicas funcionales y/o químicas del polipéptido ßlO se pueden llevar a cabo seleccionando substituciones en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que difieran significativamente en su efecto sobre mantener (a) la estructura del armazón molecular en el área de la substitución, por ejemplo una conformación en hoja o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en - el sitio blanco, o (c) el bulto de la cadena lateral. Por ejemplo, una "substitución de aminoácido conservadora" puede incluir una substitución de un residuo de aminoácido nativo por un residuo no nativo de tal manera que haya poco o ningún efecto sobre la polaridad o la carga del residuo de aminoácido en esa posición. Además, cualquier residuo nativo en el polipéptido también puede ser substituido por alanina, tal como se ha descrito previamente para la "mutagénesis por exploración de alanina". Las substituciones de aminoácidos conservadoras también abarcan residuos de aminoácido de origen no natural que son incorporados tipicamente por síntesis química de péptidos, en vez de síntesis en sistemas biológicos. Estos incluyen peptidomiméticos y otras formas revertidas o invertidas de porciones aminoácido. Los residuos de origen natural se pueden dividir en clases, con base en las propiedades comunes de la cadena lateral : 1) hidrofóbicos: norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; 2) hidrofilicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) ácidos: Asp, Glu; 4) básicos: His, Lys, Arg; 5) residuos que influencian la orientación de la cadena: Gly, Pro; y - - 6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe. Por ejemplo, las substituciones no conservadoras pueden involucrar el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. Tales residuos substituidos se pueden introducir en regiones del polipéptido ßlO humano que son homologas a ortólogos del polipéptido ßlO no humano o en regiones no homologas de la molécula . Al efectuar tales cambios, se puede tomar en cuenta el Índice hidropático de los aminoácidos. A cada aminoácido se le ha asignado un índice -hidropático con base en sus características de hidrofobicidad y de carga, en donde estos son: isoleucina (+4.5); valina (+4.2); leucina (+3.8); fenilalanina (+2.8); cisteína/cistina (+2.5); metionina (+1.9); alanina (+1.8); glicina (-0.4); treonina (-0.7); serina (-0.8); triptofano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); histidina (-3.2); glutamato (-3.5); glutamina (-3.5); aspartato (-3.5); asparagina (-3.5); usina (-3.9); y arginina (-4.5). La importancia del Índice hidropático de los aminoácidos en conferir una función biológica interactiva en una proteína, es entendida en la técnica. Kyte et al . , J. Mol. Biol., 157: 105-131 (1982). Se sabe que ciertos aminoácidos pueden ser substituidos por otros aminoácidos que tengan un índice hidropático similar y todavía retienen - una actividad biológica similar. Al hacer cambios basándose en el Índice hidropático, la substitución de aminoácidos cuyos Índices hidropáticos están dentro de ± 2 es preferida, en donde se prefiere particularmente aquellos que están dentro de ± 1 e incluso se prefieren más particularmente aquellos que están dentro de ± 0.5. También se entiende en la técnica que la substitución de aminoácidos similares se puede realizar efectivamente con base en la hidrofobicidad, particularmente cuando la proteína o péptido funcional y biológicamente equivalente creado se pretende utilizar en modalidades inmunológicas, como en el presente caso. La hidrofobicidad promedio local más grande de una proteína, la cual es gobernada por la hidrofobicidad de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con su inmunogenicidad y antigenícidad; i.e., con una propiedad biológica de la proteína. Los siguientes valores de hidrofobicidad han sido asignados a los residuos de aminoácido: arginina (+3.0); lisina (+3.0); aspartato (+3.0 ± 1); glutamato (+3.0 ± 1) ; serina (+0.3); asparagina (+0.2); glutamina (+0.2); glicina (0); treonina _ (-0.4) ; prolina (-0.5 ± 1); alanina (-0.5); histidina (-0.5); cisteina (-1.0); metionina (-1.3); valina (-1.5); leucina (-1.8); isoleucina (-1.8); tirosina (-2.3); fenilalanina (-2.5); triptofano (-3.4). Al hacer cambios con base en valores de hidrofobicidad similares, la substitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofobicidad están dentro de ± 2 es preferida, en donde se prefieren particularmente aquellos que están dentro de ± 1 y se prefieren incluso más particularmente aquellos que están dentro de ± 0.5. Uno también puede identificar epítopos de las secuencias de aminoácido primarias con base en la hidrofobicídad. Estas regiones también son referidas como "regiones de núcleo epitópico". Las substituciones de aminoácidos deseadas (ya sea conservadoras o no conservadoras) pueden ser determinadas por los técnicos en la materia en el momento en que tales substituciones se deseen. Por ejemplo, se pueden utilizar substituciones de aminoácidos para identificar residuos importantes del polipéptido ßlO ó para incrementar o disminuir la afinidad de los polipéptidos ßlO ó los heterodimeros a2/ßl0 descritos en la presente. Algunas substituciones de aminoácidos de ejemplo se presentan en la Tabla I. Tabla I Substituciones de Aminoácidos - - Un técnico en la materia será capaz de determinar variantes adecuadas de los polipéptidos de las SEQ ID Nos: 1 ó 3, mediante el empleo de técnicas conocidas. Para identificar áreas adecuadas de la molécula que pueden ser cambiadas sin destruir la actividad, un técnico en la materia puede hacer blanco en áreas que no se piensa que sean importantes para la actividad. Por ejemplo, cuando polipéptidos similares que tienen actividades similares de la misma especie o de otra especie son conocidos, un técnico en la materia puede comparar la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO con tales polipéptidos similares. Con tal comparación, un técnico puede identificar residuos y porciones de las moléculas que son conservadas entre polipéptidos similares. Se observará que los cambios en áreas de un polipéptido ßlO que no son conservadas con relación a tales polipéptidos similares, sería menos probable que afectaran de manera adversa la actividad biológica y/o la estructura del polipéptido ßlO o el heterodimero a2/ßl0. Un técnico en la materia también sabría que, incluso en regiones relativamente conservadas, se pueden substituir químicamente aminoácidos similares en el lugar de los residuos de origen natural y todavía se sigue reteniendo la actividad (substituciones de residuos de aminoácidos conservadoras) . Por lo tanto, incluso áreas - que puedan ser importantes para la actividad biológica o la estructura, pueden ser sometidas a substituciones conservadoras de aminoácidos sin destruir la actividad biológica o sin afectar de manera adversa la estructura del polipéptido. Adicionalmente, un técnico en la materia puede revisar estudios de estructura-función identificando residuos en polipéptidos similares que sean importantes para la actividad o la estructura. En vista de tal comparación, se puede predecir la importancia de residuos de aminoácido en un polipéptido ßlO que correspondan a residuos de aminoácido que sean importantes para la actividad o estructura en polipéptidos similares. Un técnico en la materia podria optar por substituciones de aminoácidos químicamente similares para tales residuos de aminoácido que se predice que son importantes en el polipéptido ßlO. Un técnico en la materia también puede analizar la estructura tridimensional y la secuencia de aminoácidos en relación con esa estructura en polipéptidos similares. En vista de esa información, un técnico en la materia podría predecir el alineamiento de residuos de aminoácido de un polipéptido ßlO con respecto a su estructura tridimensional. Un técnico en la materia podría elegir no hacer cambios radicales a los residuos de aminoácido que se predice que estarán en la superficie de la proteina, puesto que tales residuos podrían estar involucrados en interacciones importantes con otras moléculas. Además, un técnico en la materia podría generar variantes de prueba que contienen una sola substitución de aminoácido en cada residuo de aminoácido deseado. Después, las variantes se pueden seleccionar utilizando ensayos de actividad conocidos por los técnicos en la materia. Tales variantes se podrían utilizar para reunir información acerca de variantes adecuadas. Por ejemplo, si se descubre que un cambio en un residuo de aminoácido particular da como resultado la destrucción, una reducción indeseable o una actividad no adecuada, se evitaría la producción de variables con tal cambio. En otras palabras, con base en información reunida a partir de experimentos de rutina, un técnico en la materia podria determinar fácilmente los aminoácidos en los que se deberían evitar substituciones ya sea solas o en combinación con otras mutaciones. Un numero de publicaciones científicas se ha dedicado a la predicción de la estructura secundaria.

Véase Moult J., Curr. Op. in Biotech., 7 (4): 422-427 (1996), Chou et al . , Biochemistry, 13 (2): 222-245 (1974); Chou et al . , Biochemistry, 13 (2): 211-222 (1974); Chou et al . , Adv. Enzymol. Relat. Áreas Mol. Biol., 47: 45-148 (1978); Chou et al . , , Ann. Rev. Biochem., 47: 251-276 y Chou et al . , Biophys. J., 26: 367-384 (1979). Además, actualmente se dispone de programas de computadora para ayudar a predecir la estructura secundaria. Un método para predecir la estructura secundaria se basa en el modelaje de homología. Por ejemplo, dos polipéptidos o proteínas que tienen una identidad de secuencia mayor del 30% ó una similitud mayor del 40%, a menudo tienen topologías estructurales similares. El reciente crecimiento de la base de datos de estructura de proteínas (Protein Data Base, PDB) ha proporcionado una mayor predecibilidad sobre la estructura secundaria, incluyendo el numero potencial de pliegues en la estructura de un polipéptido o una proteina. Véase Holm et al . , Nucí. Acid. Res., 27 (1): 244-247 (1999) . Se ha sugerido (Brenner et al . , Curr. Op. Struct. Biol., 7 (3): 369-376 (1997)) que existe un número limitado de pliegues en un polipéptido o proteína dado y que una vez que se haya resuelto un número de estructuras, la predicción estructural aumentará drásticamente de exactitud. Métodos adicionales para predecir la estructura secundaria incluyen el "enroscamiento" (Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7 (3): 377-87 (1997); Sippl et al . , Structure, 4 (1): 15-9 (1996)), el "análisis de perfil" (Bowie et al . , Science, 253: 164-170 (1991); Gribskov et al . , Meth. Enzym., 183: 146-159 (1990); Gribskov et al . , Proc. Nat. Acad. Sci., 84 (13): 4355-4358 (1987)) y el "ligamiento evolutivo" (Véase Home, supra, y Brenner, supra) . Las variantes del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0 preferidas de conformidad con la presente invención, incluyen variantes por glucosilación en donde el número y/o tipo de sitios de glucosilación ha sido alterado en comparación con la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 1. En una modalidad, las variantes del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de conformidad con la presente invención, comprenden un número mayor o menor de sitios de glucosilación N-ligados que la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 1. Un sitio de glucosilación N-ligado está caracterizado por la secuencia: Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, en donde el residuo de aminoácido designado como X puede ser cualquier aminoácido excepto prolina. La substitución o substituciones de residuos de aminoácido para crear esta secuencia, proporcionan un nuevo sitio potencial para la adición de una cadena de carbohidrato N-ligada. Alternativamente, las substituciones que eliminan esta secuencia removerán una cadena de carbohidrato N-ligada existente. También se proporciona un rearreglo de cadenas de carbohidrato N-ligadas, en donde uno o más sitios de glucosilación N-ligada (típicamente aquellos de origen natural) son eliminados y se crea uno o más sitios N-ligados nuevos. Variantes del -polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 preferidas adicionales, incluyen variantes de cisteína, en donde uno o más residuos cisteína son eliminados o substituidos por otro aminoácido (e.g., serina) en comparación con la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 1. Las variantes de cisteína son útiles cuando el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 deben ser reconformados en una conformación biológicamente activa, por ejemplo después del aislamiento de cuerpos de inclusión insolubles. Las variantes de cisteína generalmente tienen menos residuos cisteína que la proteína nativa y típicamente tienen un número para minimizar interacciones que den como resultado cisteínas no apareadas. En adición, el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 ó una variante polipeptídica del mismo, se puede fusionar con un polipéptido heterólogo, tal como pero no limitándose al polipéptido a2, para formar un heterodímero. Los péptidos y polipéptidos heterólogos incluyen, pero_ no se limitan a: un epítopo para permitir la detección y/o el aislamiento de - un polipéptido de fusión ßlO ó un heterodimero a2/ßl0; una proteína receptora transmembranal o una porción de la misma, tal como un dominio extracelular o un dominic transmembranal e intracelular; un ligando o una porción del mismo que sea una proteína receptora transmembranal; una enzima o porción de la misma que sea catalíticamente activa; un polipéptido o péptido que promueva la oligomerización, tal como un dominio de cremallera de leucina; un polipéptido con el cual el ßlO normalmente se dimeriza, tal como el a2; un polipéptido o péptido que incremente la estabilidad, tal como una región constante de inmunoglobulina; y un polipéptido que tenga una actividad terapéutica diferente al polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 ó una variante polipeptidica del mismo. Las fusiones se pueden realizar en el extremo amino-terminal o en el extremo carboxilo-terminal del polipéptido que comprende la secuencia' de aminoácidos tal como se expone en la " SEQ ID NO: 3 ó un polipéptido variante. Las fusiones pueden ser directas sin ligador o molécula adaptadora, o indirectas utilizando un ligador o molécula adaptadora. Un ligador o molécula adaptadora puede ser uno o más residuos de aminoácido, tipicamente de aproximadamente 20 hasta aproximadamente 50 residuos de aminoácido. Una molécula ligadora o adaptadora también se puede diseñar con un sitio de rompimiento para una endonucleasa de restricción de ADN o para una proteasa, para permitir la separación de las porciones fusionadas. Será evidente que una vez construidos, los polipéptidos de fusión pueden ser derivados de conformidad con los métodos descritos en la presente. En otra modalidad de la presente invención, el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3 ó un polipéptido variante, se fusiona con uno o más dominios de una región Fc de la IgG humana. Los anticuerpos comprenden dos partes funcionalmente independientes, un dominio variable conocido como "Fab", el cual se une al antígeno, y un dominio constante conocido como "Fc", el cual está involucrado en funciones efectoras tales como la activación del complemento y el ataque por células fagocíticas. Una región Fc tiene una larga vida media sérica, mientras que una región Fab es de corta vida. Capón et al . , Nature, 337: 525-31 (1989). Cuando se construye junto con una proteína terapéutica, un dominio Fc puede proporcionar una vida media más larga o incorporar funciones tales como la unión al receptor de Fc, la unión a la proteina A, la fijación del complemento y posiblemente incluso transferencia placentaria. Id. La Tabla II resume el uso de ciertas fusiones Fc conocidas en la técnica.

Tabla II Fusión de la Región Fc con Proteinas Terapéuticas - - En un ejemplo, la totalidad o una porción de la región de bisagra de la IgG humana y las regiones CH2 y CH3 se pueden fusionar en el extremo N-terminal o C-terminal de un polipéptido ßlO de la presente invención, utilizando los métodos conocidos por los técnicos en la materia. El polipéptido de fusión-ßlO resultante o el polipéptido de fusión-a2/ßl0 puede ser purificado mediante el uso de una columna de afinidad con proteína A. Los péptidos y proteínas fusionados con una región Fc, se ha encontrado que exhiben una vida media substancialmente mayor in vivo, en comparación con sus contrapartes no fusionadas. Así mismo, una fusión con una región Fc permite la dimerización/multimerización del polipéptido de fusión. La región Fc puede ser una región Fc de origen natural o puede ser alterada para mejorar ciertas cualidad, tales como cualidades terapéuticas, tiempo en circulación, reducir la agregación, etc. La identidad y similitud de moléculas de ácido nucleico relacionadas y polipéptidos se pueden calcular fácilmente mediante métodos conocidos. Tales métodos incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Parte 1, Griffin, A.M., Griffin, H.G., eds., Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M. Stockton Press, Nueva York, 1991; y Carillo et al . , SIAM J. - ß Applied Math., 48: 1073 (1988). Los métodos preferidos para determinar la identidad y/o similitud están diseñados para dar el apareamiento más grande entre las secuencias probadas. Los métodos para determinar la identidad y similitud se describen en programas de computadora disponibles al público. Los métodos de programa de computadora preferido para determinar la identidad y similitud entre dos secuencias incluyen, pero no se limitan a, el paquete programa GCG, incluyendo GAP (Devereux et al . , Nucí. Acid.

Res., 12: 387 (1984); Genetics Computer Group, Universidad de Wisconsin, Madison, Wl), BLASTP, BLASTN, y FASTA (Altschul et al . , J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990)). El programa BALSTX está disponible al público en el Centro Nacional de Información Sobre Biotecnología (NCBI por sus siglas en inglés) y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul et al . , NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894; Altschul et al . , supra) . También se puede usar el conocido algoritmo de Smith-Waterman para determinar la identidad. Ciertos esquemas de alineación para alinear dos secuencias de aminoácidos, pueden dar como resultado el apareamiento de sólo una corta región de las dos secuencias y esta pequeña región alineada podría tener una muy alta identidad de secuencia incluso cuando no haya una relación significativa entre las dos secuencias de longitud - - completa. De conformidad con ello, en una modalidad preferida, el método de alineación seleccionado (programa GAP) dará como resultado una alineación que se extienda cuando menos cincuenta (50) aminoácidos contiguos del polipéptido blanco. Por ejemplo, utilizando el algoritmo de computadora GAP (Genetics Computer Group, Universidad de Wisconsin, Madison, Wl) , dos polipéptidos para los cuales el porcentaje de identidad se va a determinar, se alinean para un apareamiento óptimo de sus respectivos aminoácidos (la "extensión apareada", tal como es determinado por el algoritmo) . Se utilizan en conjunto con el algoritmo una penalidad por huecos abiertos (la cual se calcula como 3X la diagonal promedio; la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se está usando; la "diagonal" es la calificación o número asignado a cada apareamiento de aminoácidos perfecto por la matriz de comparación particular) y una penalidad por extensión del hueco (la cual normalmente es 1/10 veces la penalidad por hueco abierto) , asi como una matriz de comparación tal como PAM 250 ó BLOSUM 62. Una matriz de comparación estándar (véase Dayhoff et al . , Atlas of Protein Sequence and Structure, Volumen 5, sup. 3 (1978) para la matriz de comparación PAM 250; Henikoff et al . , Proc. Nati. Acad. Sci USA, 89: 10915-10919 (1992) para la matriz de comparación - BLOSUM 62) también es utilizada por el algoritmo. Los parámetros preferidos para una comparación de secuencia polipeptídica incluyen los siguientes: • Algoritmo: Needleman et al . , J. Mol. Biol., 48: 443- 453 (1970); • Matriz de comparación: BLOSUM 62 de Henikoff et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 89: 10915-10919 (1992); • Penalidad por hueco: 12 • Penalidad por longitud del hueco: 4 • Umbral de similitud: 0 El programa GAP es útil con los parámetros anteriores. Ellos son los parámetros estándar para comparar polipéptidos (sin penalidad por huecos en extremos) utilizando el algoritmo GAP. Los parámetros preferidos para la comparación de secuencias de ácidos nucleicos incluyen_ los siguientes: • Algoritmo: Needleman et al . , J. Mol. Biol., 48: 443- 453 (1970); • Matriz de comparación: apareamientos +10, desapareamientos = 0 • Penalidad por hueco: 50 _ • Penalidad por longitud del hueco: 3 El programa GAP es útil con los parámetros anteriores. Ellos son los parámetros estándar para las comparaciones de moléculas de ácido nucleico. Se pueden usar otros algoritmos de ejemplo, penalidades por huecos abiertos, penalidades por extensión de huecos, matrices de comparación, umbrales de similitud, etc., incluyendo aquellos establecidos en el Manual del Programa del Paquete Wisconsin, Versión 9, septiembre de 1997. Las elecciones particulares serán evidentes para los técnicos en la materia y dependerán de la comparación específica que se va a realizar, tal como ADN con ADN, proteína con proteína, proteína con ADN; y adicionalmente, si la comparación es entre pares dados de secuencias (en cuyo caso generalmente se prefieren los programas GAP o BestFit) o entre una secuencia y una gran base de datos de datos de secuencias (en cuyo caso ~ se prefieren los programas FASTA o BLASTA) . Síntesis Los técnicos en la materia ^observarán que las moléculas de ácido nucleico y polipéptido descritas en la presente pueden ser producidas por medios recombinantes y otros medios . Moléculas de Ácido Nucleico Las moléculas de ácido nucleico que codifican para un poHpéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO de la presente invención, se pueden obtener fácilmente de una variedad de formas, incluyendo pero no limitándose a la síntesis química, selección en bibliotecas de ADNc o bibliotecas genómicas, selección en bibliotecas de expresión y/o amplificación por Reacción en cadena catalizada por polimerasa (RCP) de ADNc. Los métodos de ADN recombinante utilizados en la presente, generalmente son aquellos establecidos en Sambrook et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1983) y/o en Ausubel et al . , eds., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc. y Wiley y Sons, N. YJ (1994) . La presente invención proporciona moléculas de ácido nucleico tal como las descritas en la presente y métodos para obtenerlas. Cuando un gen que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO ha sido identificado en una especie, la totalidad o una porción de ese gen se puede usar como sonda para identificar ortólogos o genes relacionados provenientes de la misma especie. Las sondas o cebadores se pueden utilizar para seleccionar bibliotecas de ADNc de varias fuentes de tejidos que se piensa que expresan el polipéptido ßlO. En adición, una parte o la totalidad de una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia tal como se expone en la SEQ ID NO: 2, se puede usar para seleccionar una biblioteca genómica para - identificar y aislar un gen que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO. Tipicamente, se emplearán condiciones moderada o altamente estrictas para la selección, con el objeto de minimizar el número de falsos positivos obtenidos en la selección. También se pueden identificar moléculas de ácido nucleico que codifican para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO, por clonación de expresión, la cual emplea la detección de clonas positivas basándose en una propiedad de la proteina expresada. Tipicamente, las bibliotecas de ácido nucleico son seleccionadas uniendo un anticuerpo o algún otro socio de unión (e.g., un receptor o ligando) a proteinas clonadas que son expresadas y desplegadas en la superficie de una célula huésped. El anticuerpo o socio de unión es modificado con una marca detectable para identificar aquellas células que expresan la clona deseada. Las técnicas de expresión recombinante realizadas de conformidad con las descripciones que se establecen más adelante, se pueden aplicar posteriormente para producir estos polinucleótidos y expresar los polipéptidos codificados. Por ejemplo, al insertar una secuencia de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO en un vector apropiado, - - un técnico en la materia podria fácilmente producir grandes cantidades de la secuencia de nucleótidos deseada. Entonces, las secuencias se pueden usar para generar sondas de detección o cebadores de amplificación. Alternativamente, se puede insertar un polinucleótido que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO en un vector de expresión. Al introducir el vector de expresión en un huésped apropiado, el polipéptido ßlO codificado se puede producir en grandes cantidades. Otro método para obtener una secuencia de ácido nucleico adecuada, es la reacción en cadena catalizada por polimerasa (RCP) . En este método, se prepara ADNc a partir un poli (A) +ARN o ARN total, utilizando la enzima transcriptasa reversa. Después se agregan dos cebadores, típicamente complementarios a las dos regiones separadas del ADNc (oligonucleótidos) que codifican para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO, junto con una polimerasa tal como la polimerasa Taq y la polimerasa amplifica la región del ADNc entre los dos cebadores. Otro medio para preparar una molécula de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO, es la síntesis química empleando métodos conocidos para los técnicos en la materia, tales como aquellos descritos por Engels et ai., Angew. Chem.

- - Intl. Ed., 28: 716-734 (1989). Estos métodos incluyen, inter alia , el método de fosfotriéster, fosforamidita y H-fosfonato para la síntesis de ácidos nucleicos. Un método preferido para tal síntesis química, es la síntesis soportada por polímeros, utilizando la química de fosforamidita estándar. Típicamente, el ADN que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlQ tendrá varios cientos de nucleótidos de longitud. Los ácidos nucleicos mayores de aproximadamente 100 nucleótidos se pueden sintetizar en forma de varios fragmentos, empleando estos métodos. Después estos fragmentos se pueden ligar para formar la secuencia de nucleótidos de longitud completa de un polipéptido ßlO. Normalmente, el fragmento de ADN que codifica para el extremo amino-terminal del polipéptido, tendrá un ATG, el cual codifica para un residuo metionina. Esta metionina puede estar o no presente en la forma madura del polipéptido ßlO, dependiendo de si el polipéptido producido en la célula huésped está diseñado para ser secretado de esa célula. También se pueden utilizar otros métodos conocidos por los técnicos en la materia. En ciertas modalidades, las variantes de ácido nucleico contienen codones que han sido alterados para la expresión óptima del polipéptido ßlO ó el heterodímero - a2/ßl0 en una célula huésped dada. Las alteraciones de codones particulares dependerán del polipéptido o polipéptidos ßlO y de la célula o células huésped seleccionadas para la expresión. Tal "optimización de codón" se puede llevar a cabo por una variedad de métodos, por ejemplo seleccionando codones que son preferidos para utilizarse en genes altamente expresados en una célula huésped dada. Se pueden utilizar algoritmos de computadora que incorporan tablas de frecuencia de codones tales como "Ecohigh. cod" para la preferencia de codones de genes bacterianos altamente expresados, y estos algoritmos son proporcionados por el Paquete de la Universidad de Wisconsin, Versión 9.0, Genetics Computer Group, Madison, Wl . Otras tablas de frecuencia de codones útiles incluyen "Celegans_high.cod" , "Celegans_low. cod" , "Drosophila_high.cod" , "Human_high. cod" ,, "Maize_high.cod" y "Yeast_high.cod" . Vectores y Células Huésped Cuando se contempla la expresión de un heterodímero a2/ßl0, debe entenderse que el vector de expresión del polipéptido ßlO, así como un vector de expresión que codifica para el polipéptido a2, pueden ser introducidos (por ejemplo, transformados, cotransformados, transfectados, cotransfectados, transducidos, - 7; cotransducidos) en una célula huésped, linea celular, tejido, órgano, animal o planta. También debe entenderse que la introducción de un vector de expresión del polipéptido ßlO solo en una célula huésped, linea celular, tejido, órgano, animal o planta que ya produce el polipéptido a2, puede dar como resultado la producción de novo o una intensificación de la producción del heterodimero a2/ßl0. Como se describió anteriormente en el ensayo de heterodimerización, se produjo el heterodímero a2/ßl0 recombinante marcado con poliHis y marcado con FLAG mediante una cotransfección de células de mamífero. Las hormonas glucoproteicas heterodiméricas tales como la CG, también se pueden ensamblar in vi tro mediante la coincubación, por ejemplo, de la subunidad alfa aislada con la subunidad ß de CG aislada, bajo condiciones adecuadas [véase Blithe e lies, Endocrinology, Volumen 136, páginas 903-910 (1995) ] . De manera similar, el heterodímero a2/ßl0 se podría ensamblar in vi tro mediante la incubación del polipéptido a2 aislado y el polipéptido ßlO aislado. El resultado podría ser una mezcla de polipéptido a2, polipéptido ßlO y heterodímero a2/ßl0. Cada uno de estos productos se podría aislar en forma purificada utilizando los métodos convencionales, tales como la cromatografía de exclusión de tamaño y/o la cromatografía de inmunoafinidad.

A este respecto, el polipéptido a2 solo y el polipéptido ßlO solo se pueden producir separadamente y secretar en células de mamífero de la manera _ que se describe máe adelante. Un vector de expresión de mamífero a2 humano marcado con poliHis fue transfectado en células 293 y el medio condicionado sin suero fue cosechado después de 72 horas. La inmunoelectrotransferencia tipo Western de este medio condicionado fue sondeada con anticuerpos policlonales de conejo anti-a2 purificados por afinidad (Ejemplo 4) que habían sido conjugados con peroxidasa de rábano (Linx HRP Rapid Protein Conjugation Kit, catálogo # K8050-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) . Se observó una fuerte banda utilizando el paquete de detección de inmunoelectrotransferencia tipo Western ECL Western Blot Detection Kit (catálogo # RPN 2106, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) , lo cual demostró que un polipéptido a2 humano podía ser secretado en ausencia del polipéptido ßlO. Un vector de expresión de mamífero ßlO humano marcado con FLAG fue transfectado en células 293 y el medio condicionado sin suero fue cosechado después de 72 horas. El producto de la inmunoelectrotransferencia tipo Western de este medio condicionado fue sondeado con un anticuerpo monoclonal M2 anti-FLAG biotinado (catálogo # F9291, Sigma, St. Louis, MO) y después fue sondeado con - estreptavidina ligada a peroxidasa de rábano (RPN 1231, Amersham Life Sciences) . Se observó una fuerte banda utilizando el paquete de detección ECL . Western Blot Detection Kit (catálogo # RPN 2106, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) , lo cual demostró que un polipéptido ßlO humano podia ser secretado en ausencia del polipéptido a2. Una molécula de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO, se puede insertar en un vector de expresión apropiado utilizando las técnicas de ligamiento estándar. El vector típicamente se selecciona para ser funcional en la célula huésped particular empleada (i.e., el vector es compatible con la maquinaria de la célula huésped de tal modo que puedan ocurrir la amplificación del gen y/o la expresión del gen) . Una molécula de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de un polipéptido ßlO de conformidad con la presente invención, se puede amplificar/expresar en células huésped procarióticas, levaduras, de insecto (sistemas baculovirus) y/o eucarióticas. La selección de la célula huésped dependerá en parte de si el polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 va a ser modificado posteriormente a la traducción (e.g., glucosilado y/o fosforilado) . Si es así, se prefieren las células huésped de levadura, insecto o de mamífero. Para una revisión de los vectores de expresión, véase Meth. Enz., Volumen 185, D.V. Goedel, ed. Academic Press Inc., San Diego, CA (1990) . Tipicamente, los vectores de expresión utilizados en cualquiera de las células huésped contendrán secuencias para el mantenimiento de plásmidos y para la clonación y expresión de secuencias de nucleótidos exógenas. Tales secuencias, colectivamente referidas como "secuencias de flanqueo" en ciertas modalidades típicamente incluirán una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos: un promotor, una o más secuencias intensificadoras, un origen de replicación, una secuencia de terminación de la transcripción, una secuencia de intrón completa que contiene un sitio de empalmamiento donador y uno receptor, una secuencia que codifica para una secuencia lider para la secreción del polipéptido, un sitio de unión al ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región poliligadora para insertar el ácido nucleico que codifica para el polipéptido por ser expresado y un elemento marcador seleccionable. Cada una de estas secuencias se describe más adelante. Opcíonalmente, el vector puede contener una secuencia codificadora de una "marca" ; es decir, una molécula de oligonucleótido localizada en el extremo 5' ó 3' de la secuencia codificadora del polipéptido ßlO; en donde la secuencia de oligonucleótido codifica para una "marca" poliHis (tal como hexaHis) o alguna otra "marca" tal como FLAG, HA (hemaglutinina del virus de la influenza) o mic, para las cuales existen anticuerpos en el comercio. Esta marca típicamente se fusiona con el polipéptido en el momento de la expresión del mismo y puede servir como un mecanismo para la purificación de afinidad del polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0 de la célula huésped. La purificación por afinidad se puede llevar a cabo, por ejemplo, por cromatografía en columna, empleando anticuerpos contra la marca como matriz de afinidad. Opcionalmente, la marca subsecuentemente puede ser removida del polipéptido ßlO ó del heterodimero a_2/ßl0 purificado, por varios medios tales como utilizando ciertas peptidasas para su rompimiento. Las secuencias de flanqueo pieden ser homologas (i.e., de la misma especie y/o cepa que la célula huésped), heterólogas (i.e., de una especie diferente a la especie de la célula huésped o cepa), híbridas (í.e., una combinación de secuencias de flanqueo provenientes de más de una fuente) o sintéticas, o las secuencias de flanqueo pueden ser secuencias nativas que normalmente funcionan para regular la expresión del polipéptido ßlO. Como tal, la - fuente de una secuencia de flanqueo puede ser cualquier organismo procariótico o eucariótico, cualquier organismo vertebrado o invertebrado o cualquier planta, siempre y cuando la secuencia de flanqueo sea funcional en y pueda ser activada por la maquinaria de la célula huésped. Las secuencias de flanqueo útiles en los vectores de la presente invención, se pueden obtener por cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica. Típicamente, secuencias de flanqueo útiles en la presente, diferentes a las secuencias de flanqueo del gen ßlO, ya habrán sido previamente identificadas por mapeo y/o por digestión con endonucleasas de restricción y por lo tanto se pueden aislar a partir un tejido apropiado, empleando las endonucleasas de restricción adecuadas. En algunos casos, la secuencia de nucleótidos completa de una secuencia de flanqueo puede ser conocida. Aquí, la secuencia de flanqueo puede ser sintetizada utilizando los métodos descritos en la presente para la síntesis o clonación de ácidos nucleicos. Cuando la totalidad o sólo -una porción de la secuencia de flanqueo es conocida, ésta se puede obtener utilizando la técnica de RCP y/o seleccionando una biblioteca genómica con oligonucleótidos y/o fragmentos de secuencia de flanqueo provenientes de la misma o de otra especie. Cuando la secuencia de flanqueo se desconoce, se - - puede aislar un fragmento de ADN que contiene una secuencia de flanqueo de un segmento grande de ADN que pudiera contener, por ejemplo, una secuencia codificadora o incluso otro gen o genes. El aislamiento se puede llevar a cabo por digestión con endonucleasas de restricción para producir el fragmento de ADN apropiado, seguido por el aislamiento utilizando una purificación en gel de agarosa, una cromatografía en columna Qiagen© (Chatsworth, CA) o algún otro método conocidos por los técnicos en la materia. La selección de las enzimas adecuadas para lograr este propósito, será fácilmente para un técnico en la materia. Un origen de replicación típicamente es parte de aquellos vectores de expresión procarióticos que se obtienen en el comercio y el origen ayuda en la amplificación del vector en una célula huésped. La amplificación del vector hasta un cierto número de copias, en algunos casos puede ser importante para la expresión óptima del polipéptido ßlO ó del heterodimero a-2/ßlO. Si el vector elegido no contiene un sitio de origen de replicación, se puede sintetizar uno químicamente basándose en una secuencia conocida y después se liga al vector. Por ejemplo, el origen de replicación del plásmido pBR322 (Producto No. 303-3s, New England Biolabs, Beverly, MA) es adecuado para la mayoría de las bacterias Gram negativas y varios orígenes (e.g., SV40, polioma, adenovirus, virus de la estomatitis vesicular (VSV) o papilomavirus tales como HPV o BPV) son útiles para vectores de clonación en células de mamífero. Generalmente, el origen de replicación no es necesario para vectores de expresión de mamífero (por ejemplo, el origen SV40 a menudo se utiliza sólo porque contiene el promotor temprano) . Una secuencia de terminación de la transcripción típicamente está ubicada hacia 3' del extremo de una región codificadora de polipéptido y sirve para terminar la transcripción. Normalmente, una secuencia de terminación de la transcripción en células procarióticas es un fragmento rico en G-C, seguido por una secuencia poli T. Mientras que la secuencia es fácilmente clonada a partir de una biblioteca o incluso comprada en el comercio como parte de un vector, también se puede sintetizar --fácilmente utilizando los métodos de síntesis de ácidos nucleicos tales como los descritos en la presente. Un gen marcador seleccionable es un elemento que codifica para una proteína necesaria para la supervivencia y el crecimiento de una célula huésped cultivada en un medio de cultivo selectivo. Los genes marcadores seleccionables típicos codifican para' proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo ampicilina, tetraciclina o kanamicina para células huésped procarióticas; (b) complementan deficiencias auxotróficas de la célula; o (c) suministran nutrientes críticos que no están disponibles en los medios complejos. Los marcadores seleccionables preferidos son el gen de resistencia a la kanamicina, el gen de resistencia a la ampicilina y el gen de resistencia a la tetraciclina. También se puede usar un gen de resistencia a la neomicina para la selección en células huésped procarióticas y eucarióticas . Se pueden otros genes de selección para amplificar el gen que será expresado. La amplificación es el proceso por el cual los genes que están en mayor demanda para la producción de una proteína crítica para el crecimiento son reiterados en tándem dentro de los cromosomas de las generaciones sucesivas de células recombinantes. Algunos ejemplos de marcadores seleccionables adecuados para células de mamífero incluyen la dihidrofolato reductasa (DHFR) y la timidina cinasa. Las células de mamífero transformantes se colocan bajo una presión de selección en la cual sólo las transformantes están adaptadas para sobrevivir en virtud del gen de selección presente en el vector. La presión de selección o presión selectiva es impuesta al cultivar las células transformadas bajo condiciones en las cuales la concentración del agente de selección en el medio de cultivo cambia sucesivamente, conduciendo de esta manera a la amplificación tanto del gen de selección como del ADN que codifica para un polipéptido ßlO de ia presente invención. Como resultado, se sintetizan ^cantidades crecientes del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0 a partir del ADN amplificado. Un sitio de unión al ribosoma normalmente es necesario para iniciar la traducción del ARNm y está caracterizado por una secuencia de Shine-Delgarno (en procariotes) o una secuencia de Kozak ien eucariotes) . El elemento típicamente está ubicado hacia 3' del promotor y hacia 5' de la secuencia codificadora del polipéptido ßlO por ser expresado. La secuencia de Shine-Delgarno varia, pero tipicamente es una polipurina (i.e., que tiene un alto contenido de A-G) . Se han identificado numerosas secuencias de Shine-Delgarno, cada una de las cuales puede ser fácilmente sintetizada utilizando los métodos establecidos en la presente y se puede emplear en un vector procariótico . Una secuencia líder o de señal se puede usar para dirigir al polipéptido ßlO ó al heterad.i ero a2/ßl0 fuera de la célula huésped. Típicamente, una secuencia de nucleótidos que codifica para la secuencia de señal está posicionada en la región codificadora de una molécula de ácido nucleico ßlO ó directamente en el extremo 5' de una - región codificadora del polipéptido ßlO. Se han identificado numerosas secuencias de señal y cualquiera de éstas que sea funcional en la célula huésped seleccionada, se puede emplear en conjunto con una molécula de ácido nucleico ßlO. Por lo tanto, una secuencia de señal puede ser homologa (de origen natural) o heteróloga a un gen o ADNc de ßlO. Adicionalmente, una secuencia de señal puede ser sintetizada químicamente empleando los métodos descritos en la presente. En la mayoría de los casos, la secreción de un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 de la célula huésped, a través de la presencia de un péptido de señal, dará como resultado la remoción del péptido de señal del polipéptido ßlO secretado o del heterodímero a2/ßl0 secretado. La secuencia de señal puede ser un componente del vector o puede ser una parte de una molécula de ácido nucleico ßlO que está insertada en el vector. Dentro de los alcances de la presente invención está incluido el uso de una secuencia de nucleótidos que codifica para una secuencia de señal del polipéptido ßlO nativo, unida a una región codificadora del polipéptido ßlO ó una secuencia de nucleótidos que codifica para una secuencia de señal heteróloga, unida a una región codificadora del polipéptido ßlO. La secuencia de señal heteróloga seleccionada deberá ser una que sea reconocida y - procesada, i.e., sometida a un rompimiento por parte de una peptidasa de señal, por la célula huésped. Para células huésped procarióticas que no reconocen ni procesan la secuencia de señal del polipéptido ßlO nativa, la secuencia de señal es substituida por una secuencia de señal procariótica que se selecciona, por ejemplo, del grupo que consiste de las secuencias líder de la fosfatasa alcalina, penicilinasa o enterotoxina II termoestable. Para secreción en levaduras, la secuencia de señal del polipéptido ßlO nativo puede ser substituida por las secuencias líder de la invertasa de levadura, factor alfa o fosfatasa acida. En la expresión en células de mamífero la secuencia de señal nativa es satisfactoria, aunque pueden ser adecuadas otras secuencias de señal de mamífero. En algunos casos, tales como cuando se desea la glucosilación en un sistema de expresión en célula huésped eucariótica, se pueden manipular las diversas presecuencias para mejorar la glucosilación o el rendimiento. Por ejemplo, uno puede alterar el sitio de rompimiento de la peptidasa de un péptido de señal particular, o se pueden agregar presecuencias, lo cual también puede afectar la glucosilación. El producto proteico final puede tener, en la posición -1 (con relación al primer aminoácido de la proteína madura) uno o más aminoácidos adicionales incidentes a la expresión, los cuales podrían no ser - on - removidos en su totalidad. Por ejemplo, el producto proteico final puede tener uno o dos residuos aminoácido en el sitio de rompimiento de la peptidasa, unidos en el extremo N-terminal. Alternativamente, el uso de algunos sitios de rompimiento enzimático puede dar como resultado una forma ligeramente truncada del polipéptido ßlO deseado o del heterodímero a2/ßl0, si la enzima corta en tal área del polipéptido maduro. En muchos casos, la transcripción de una molécula de ácido nucleico se incrementa- por la presencia de uno o más intrones en el vector; esto es particularmente cierto cuando se produce un polipéptido en células huésped eucarióticas, especialmente células huésped de mamífero. Los intrones utilizados pueden ser de origen natural dentro del gen ßlO, especialmente cuando el gen utilizado es una secuencia genómica de longitud completa o un fragmento de la misma. Cuando el intrón no es de origen natural dentro del gen (como para la mayoría de los ADNc) , el intrón o intrones se pueden obtener de otra fuente. La posición del intrón con respecto a las secuencias de flanqueo y al gen ßlO, generalmente es importante, ya que el intrón debe ser transcrito para ser efectivo. Así pues, cuando se está transcribiendo una molécula de ADNc ßlO, la posición preferida para el intrón es hacia 3' del sitio de inicio de la transcripción y hacia 5' de la secuencia poliA de terminación de la transcripción. De preferencia, el intrón o intrones estarán localizados en un lado o en el otro (i.e., 5' ó 3' ) del ADNc, de tal manera que no interrumpan a la secuencia codificadora. Cualquier intrón proveniente de cualquier fuente, incluyendo cualquier organismo viral, procariótico y eucariótico (planta o animal) , se puede utilizar para la práctica de la presente invención, siempre y cuando sea compatible con la célula o células huésped en las cuales se inserta. También se incluyen en la presente intrones sintéticos. Opcionalmente, se puede usar más de un intrón en el vector. Los vectores de expresión y clonación de la presente invención, cada uno típicamente contendré un promotor que es reconocido por el organismo huésped y estará operablemente ligado a la molécula que codifica para un polipéptido ßlO. Los promotores son secuencias no transcritas localizadas cadena arriba (hacia 5' ) del codón de inicio de un gen estructural (generalmente dentro de aproximadamente 100 a 1000 pares de bases) que controlan la transcripción del gen estructural. Por convención, los promotores están agrupados en dos clases: los promotores inducibles y los constitutivos. Los promotores inducibles inician niveles crecientes de transcripción del ADN bajo su control en respuesta a algún cambio de las condiciones de cultivo, tai como la presencia o ausencia de un nutriente o un cambio en la temperatura. Los promotores constitutivos, por otro lado, inician continuamente la producción del producto génico; es decir, hay poco o ningún control sobre la expresión del gen. Se conoce un gran número de promotores, reconocidos por una variedad de células huésped potenciales. Un promotor adecuado se liga operablemente al ADN que codifica para un polipéptido ßlO al remover el promotor del ADN fuente mediante una digestión con enzimas de restricción e insertando la secuencia promotora deseada en el vector. La secuencia del promotor del -gen ßlO nativo se puede utilizar para dirigir la amplificación y/o expresión de una molécula de ácido nucleico ßlO. Sin embargo, se prefiere un promotor heterólogo __ si éste permite una mayor transcripción y un más alto rendimiento de la proteína expresada, en comparación con el promotor nativo y si es compatible con la célula huésped que fue seleccionada para su uso. Los promotores adecuados para utilizarse con huéspedes procarióticos incluyen los sistemas promotores de la beta lactamasa y de la lactosa; el sistema promotor de la fosfatasa alcalina, un sistema promotor de triptofano (TRP) ; y promotores híbridos tales como el promotor tac. También son adecuados otros promotores bacterianos conocidos. Sus secuencias han sido publicadas, haciendo posible que un técnico en la materia las ligue a las secuencias de ADN deseadas, empleando ligadores o adaptadores conforme sea necesario para suministrar cualquier sitio de restricción útil. Los promotores adecuados para utilizarse con huéspedes de levadura también son conocidos en la técnica. Los intensificadores de levadura se utilizan ventajosamente con promotores de levadura. Los promotores adecuados para utilizarse con células huésped de mamífero son bien conocidos e incluyen, pero no se -limitan a, aquellos obtenidos del genoma de virus, tales como el virus del polioma, el virus de la viruela aviar, adenovirus (tal como Adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus (CMV) , un retrovirus, el virus de la hepatitis B y más preferiblemente el - virus de simios 40 (SV40) . Otros promotores de mamífero adecuados incluyen promotores de mamífero heterólogos, e.g., promotores de choque térmico y es promotor de la actina. Promotores adicionales que pueden ser de interés en el control de la transcripción del gen ßlO, incluyen pero no se limitan a: la región promotora temprana del SV40 (Bernoist y Chambón, Nature, 290: 304-310, 1981); el promotor de CMV; el promotor contenido en la repetición terminal larga 3' del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto et ai., Cell, 22: 787-797, 1980); el promotor de la timidina cinasa del herpes (Wagner et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. Usa, 78: 144-1445, 1981); las secuencias reguladoras del gen de la metalotionina (Brinster et al . , Nature, 296: 39-42, 1982) ; vectores de expresión procarióticos tales como el promotor de la beta lactamasa Villa-Kamaroff, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 75: 3727-3731, 1978); o el promotor tac (DeBoer, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 80: 21-25, 1983). También son de interés las siguientes regiones de control de transcripción animales, las cuales exhiben especificidad tisular y se han utilizado en animales transgénicos : la región de control del gen de la elastasa I, la cual es activa en células acinares pancreáticas (Swift et al . , Cell, 38: 639-646, 1984; Ornitz et al . , Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 50: 399-409 (1986); MacDonald, Hepatology, 7: 425-515, 1987) ; la región de control del gen de la insulina, que es activa en células beta pancreáticas (Hanahan, Nature, 315: 115-122, 1985) ; la región de control del gen de inmunoglobuiina que es ~ activa en células linfoides (Grosschedl et al . , _ Cell, 38: 647-658 (1984); Adames et al . , Nature, 318: 533-538 (1985); Alexander et al . , Mol.

Cell. Biol., 7: 1436-1444, 1987); la región de control del virus del tumor mamario murino, que es activa en células testiculares, de mama, linfoides y mastocitos (Leder et - - al . , Cell, 45: 485-495, 1966); la región de control del gen de la albúmina que es activa en el higado (Pinkert et al . , Genes and Devel., 1: 268-276, 1987); la región de control del gen de la alfa-fetoproteina que es activa en el higado (Krumlauf et al . , Mol. Cell. Biol., 5: 1639-1648, 1985; Hammer et ai., Science, 235: 53-58, 1987); la región de control del gen de la alfa-1-antitripsina, que es activa en el higado (Kelsey et al . , Genes and Devel., 1: 161-171, 1987); la región de control del gen de la beta-globina, que es activa en células mieloides (Mogram et al . , Nature, 315: 338-340, 1985; Kollias et al . , Cell, 46: 89-94, 1986); la región de control del gen de la proteina básica de mielina, que es activa en células oligodendrocíticas del cerebro (Readhead et ai., Cell, 48: 703-712, 1987); la región de control del gen de la cadena ligera-2 de la miosina, que es activa en músculo esquelético (Sani, Nature, 314: 283-286, 1985) ; y la región de control del - gen de la hormona liberadora gonadotrópica, que es activa en el hipotálamo (Masón et al . , Science, 234: 1372-137 BJ 1986)." Una secuencia intensificadora puede ser insertada en el vector por eucariotes superiores, para incrementar la transcripción de un ADN que codifica para un polipéptido ßlO de la presente invención. Los intensificadores son elementos de ADN que actúan en cis, que tienen por lo general aproximadamente 10-300 pb de longitud y actúan - - sobre el promotor para incrementar la transcripción. Los intensificadores son relativamente independientes de la orientación y posición. Se han encontrado hacia 5' y 3' de la unidad de transcripción. Se conocen y se dispone de varias secuencias intensificadoras provenientes de genes de mamífero (e.g., globina, elastasa, albúmina, alfa-fetoproteína e insulina) . Sin embargo, típicamente se utilizará un intensificador de origen viral. El intensificador SV40, el intensificador del promotor temprano de citomegalovirus, el intensificador del polioma e intensificadores de adenovirus son ejemplos de intensificadores para la activación de promotores eucaridticos . Mientras que un intensificador puede ser empalmado en el vector en una posición hacia 5' ó 3' de una molécula de ácido nucleico ßlO, típicamente se localiza en un sitio hacia 5' del promotor. Los vectores de expresión de la presente invención se pueden construir a partir de un vector inicial, tal como un vector disponible en el comercio. Tales vectores pueden o no contener la totalidad de las secuencias de flanqueo deseadas. Cuando una o "más de las secuencias de flanqueo deseadas no está presente en el vector, ésta se puede obtener individualmente y ligar en el vector. Los métodos utilizados para obtener cada una de la secuencias de flanqueo son conocidos para los técnicos en 0 la materia. Los vectores preferidos para practicar la presente invención son aquellos que son compatibles con células bacterianas, de insecto y de mamífero. Tales vectores incluyen, inter alia, los vectores pCRII, pCR3 y pcDNA3.1 (Invitrogen Company, Carlsbad, CA) ; pBSII (Stratagene Company, La Jolla, CA) ; pETISZ (Novagen, Madison, Wl) , pGEX (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) ; pEGFP-N2 (Clontech, Palo Alto, CA) ; pETL (BlueBacII; Invitrogen); pDSR-alfa (Publicación Internacional PCT No. WO 90/14363) y pFastBacDual (Gibco/BRL, Grand Island, NY) . Algunos vectores adecuados adicionales incluyen, pero no se limitan a, cósmidos, plásmidos o virus modificados, pero se observaré que el sistema vector debe ser compatible con la célula huésped seleccionada. Tales vectores incluyen, pero no se limitan a, plásmidos tales como derivados del plásmido Bluescript© (un fagemid basado en ColEl de alto número de copias Stratagene Cloning Systems, Inc., La Jolla, CA) , plásmidos de clonación de RCP diseñados para clonar productos de RCP amplificados por taq (e.g., TOPO™ TA Cloning© Kit, derivados del plásmido PCR2.1©, Invitrogen, Carlsbad, CA) y vectores de mamífero, levadura o virus tales como el sistema de expresión de baculovirus (derivados del plásmido pBacPAK, Clontech, Palo Alto, CA) .

- Después de que el vector ha sido construido y se insertó una molécula de ácido nucleico que codifica para un polipéptido ßlO en el sitio apropiado del vector, el vector concluido puede ser insertado en una célula huésped adecuada para la amplificación y/o expresión del polipéptido. La transformación de un vector de expresión para un polipéptido ßlO en una célula huésped seleccionada, se puede llevar a cabo por métodos conocidos incluyendo métodos tales como la transfección, infección, cloruro de calcio, electroporación, microinyección, lipofección o el método de DEAE-dextrán o cualquier otra técnica conocida. El método seleccionado será en parte una función del tipo de célula huésped por utilizar. Estos métodos y otros métodos adecuados son conocidos para los técnicos en la materia y se presentan, por ejemplo, en Sambrsok et al . , s upra . Las células huésped pueden ser procarióticas (tales como E. coll) o eucaríóticas (tales como una célula de levadura, una célula de insecto o una célula de vertebrado) . La célula huésped cuando se cultiva bajo condiciones apropiadas, sintetiza un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 el cual, subsecuentemente, puede ser cosechado del medio de cultivo (si la célula huésped lo secreta al medio) o directamente de la célula huésped que lo produce (si no es secretado) . La selección de una célula huésped apropiada dependerá de varios factores, tales como los niveles de expresión deseados, modificaciones del polipéptido que sean deseables o necesarias para la actividad, tales como glucosilación o fosforilación, y ía facilidad de plegamiento para obtener una molécula biológicamente activa. Se conoce un número de células huésped adecuadas y muchas de ellas están disponibles en la Colección Norteamericana de Cultivos Tipo (American Type Culture Collection, ATCC) , 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209. Algunos ejemplos incluyen, pero no se limitan a células de mamífero tales como células de ovario de hámster chino (CHO) (ATCC No. CCL61), células CHO DHFR (Urlaub et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 97: 4216-4220 (1980)), células de riñon embrionario humano (human embryionic kidney, HEK) 293 ó células 293 T (ATCC No. CRL1573) ó células 3T3 (ATCC No. CCL92) . La selección de las células huésped de mamífero adecuadas y los métodos para la transformación, cultivo, amplificación, selección y producción y purificación del producto, son conocidos en la técnica. Otras líneas celulares de mamífero adecuadas son la línea de mono COS-1 (ATCC No. CRL1650) y COS-7 (ATCC No. CRL1651) y la línea celular CV-1 (ATCC No. CCL70) . Otras células huésped de mamífero ejemplares incluyen las líneas - celulares de primate y lineas celulares de roedor, incluyendo líneas celulares transformadas. También son adecuadas células diploides normales, cepas celulares derivadas de cultivo in vi tro de tejido primario, asi como explantes primarios. Las células candidatas pueden ser genotipicamente deficientes del gen de selección o pueden contener un gen de selección que actúa de manera dominante. Otras lineas celulares de mamífero adecuadas incluyen pero no se limitan a las células N2A de neuroblastoma murino, células HeLa, células L-929 de ratón, líneas 3T3 derivadas de ratones suizos Balb-c o NIH, líneas de células BHK o HaK de hámster, las cuales están disponibles en la ATCC. Cada una de estas líneas celulares es conocida y está disponible para los técnicos en la materia de expresión de proteinas. Algunas células huésped similarmente útiles y adecuadas para la presente invención, son células bacterianas. Por ejemplo, las diversas cepas de E. coli { e. g. , HB101 (ATCC No. 33694), DH5J, DH10 y MC1061 (ATCC No. 53338)) son conocidas como células" huésped en el campo de la biotecnología. También se pueden emplear en este método varias cepas de B. subtilis, Psudomonas spp. , otros Bacill us spp. , Streptomyces spp. y similares. Muchas cepas de levadura - conocidas por los técnicos en la materia también están disponibles como células huésped para la expresión de los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 de la presente invención. Las células de levadura preferidas incluyen, por ejemplo, Saccharomyces cerivisae y Pichia pastoris. Adicionalmente, cuando sea deseado, se pueden utilizar sistemas de células de insecto en los métodos de la presente invención. Tales sistemas se describen, por ejemplo, en Kitts et al . , Biotechniques, 14: 810-817 (1993); Lucklow et al . , J. Virol., 67: 4566-4579 (1993).

Las células de insecto preferidas son las células Sf-9 y Hi5 (Invitrogen, Carlsbad, CA) . También se pueden utilizar animales transgénicos para expresar el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 glucosilado. Por ejemplo, se puede utilizar un animal transgénico productor de leche (una vaca o cabra, por ejemplo) y obtener el polipéptido ßlO glucosilado ó el heterodí ero a2/ßl0 glucosilado en la leche del animal. También se pueden utilizar plantas para producir el polipéptido ßlO ó el heterodímero a2/ßl0; sin embargo, en general la glucosilación que ocurre -en las plantas es diferente a la producida en células de mamífero y puede dar como resultado un producto glucosilado que no sea adecuado para uso terapéutico en seres humanos. Producción de Polipéptidos Las células huésped que comprenden un vector de - expresión del polipéptido ßlO ó del heterodímero a2/ßl0 se pueden cultivar utilizando los medios estándar conocidos por los técnicos en la materia. Los medios normalmente contendrán todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y supervivencia de las células . Los medios adecuados para cultivar células de E. coli incluyen, por ejemplo, el Caldo Luria (LB) y/o el Caldo Terrific (TB) . Los medios adecuados para cultivar células eucarióticas incluyen el medio del Instituto Memorial Roswell Park 1640 (RPMI 1640), el Medio Esencial Minimo (MEM) y/o el medio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) , todos los cuales pueden estar suplementados con suero y/o factores de crecimiento tal como lo indique la linea celular particular que se e"stá cultivando. Un medio adecuado para cultivos de células de insecto es el medio de Grace suplementado con yeastolate, hidrolizado de lactalbúmina y/o suero fetal de ternera, conforme sea necesario. Típicamente, se agrega un antibiótico u otro compuesto útil para el crecimiento selectivo de las células transformadas, como suplemento para el medio. El compuesto por ser utilizado dependerá del elemento marcador seleccionable presente en el plásmido con el fue transformada la célula huésped. Por ejemplo, cuando el elemento marcador seleccionable es la resistencia a la kanamicina, el compuesto agregado al medio de cultivo será - kanamicina. Otros compuestos para el crecimiento selectivo incluyen ampicilina, tetraciclina y neomicina. La cantidad del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 producida por una célula huésped, se puede evaluar utilizando los métodos estándar conocidos en la técnica. Tales métodos incluyen, sin limitaciones, el análisis por inmunoelectrotransferencia tipo Western, la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfats de sodio, la electroforesis en gel no desnaturalizante, la separación por cromatografía liquida "de alto rendimiento, la inmunoprecipitación y/o ensayos de actividad tales como ensayos de cambio en gel fijador de ADN. Si un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 ha sido diseñado para ser secretado de la célula huésped, la mayoría del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se puede encontrar en el medio de cultivo celular. Sin embargo, si el polipéptldo ßlO ó heterodímero a2/ßl0 no es secretado de las células huésped, estará presente en el citoplasma y/o el núcleo - (para células huésped eucarióticas) o en el citosol (para células huésped bacterianas) . Para el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 situado en el citoplasma y/o de la célula huésped (para células huésped eucarióticas) o en el citosol (para células huésped bacterianas) , el material intracelular (incluyendo - - los cuerpos de inclusión para bacterias Gram negativas) puede ser extraído de la célula huésped utilizando cualquier técnica estándar conocida por los .técnicos en la materia. Por ejemplo, las células huésped pueden ser Usadas para liberar el contenido del periplasma/citoplasma mediante una prensa francesa, por homogeneización y/o por sonicación, seguido por una centrifugación. Si el polipéptido ßlO ó heterodímers a2/ßl0 ha formado cuerpos de inclusión en el citosol, estos cuerpos a menudo pueden estar fijados en la membrana celular interna y/o externa y por lo tanto se encontrarán principalmente en la pella después de una centrifugación. El material de la pella, entonces, puede ser tratado a pH extremo o con un agente caotrópico tal como un detergente, guanidina, derivados de guanidina, urea o derivados de urea, en presencia de un agente reductor tal como ditiotreitol a pH alcalino o tris-carboxietilfosfina a pH ácido, para liberar, romper y solubilizar los cuerpos de inclusión. El polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en su forma ahora soluble, puede ser analizado utilizando electroforesis en gel, inmunoprecipitación o técnicas similares. Si se desea aislar el polipéptido ßlO ó heterodímero 2/ßl0, el aislamiento se puede llevar a cabo utilizando los métodos estándar tal como aquellos descritos en la presente y en - - Marston et al . , Meth. Enz., 182: 264-275 (1990). En algunos casos, el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 podría no ser biológicamente active después de su aislamiento. Se pueden utilizar varios métodos para "reconformar" o convertir al polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 a su estructura terciaria y generar los puentes de disulfuro, para restaurar la actividad biológica. Tales métodos incluyen la exposición del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 solubilizado a un pH normalmente por arriba de 7 y en presencia de una concentración particular de un caótropo. La selección del caótropo es muy similar a las selecciones utilizadas para solubilizar los cuerpos de inclusión, pero normalmente el caótropo se utiliza a una concentración más baja y no necesariamente es el mismo que el utilizado para la solubilización. En gran parte de los casos, la solución de reconformación/oxidación también contendré un agente reductor o el agente reductor más su forma oxidada en una relación especírica para generar un potencial rédox particular, permitiendo que ocurra una mezcla de disulfuros para la formación de los puentes de cisteína de la proteína. Algunos de los pares rédox comúnmente utilizados incluyen los pares cisteína/cista ina, glutation (GSH) /ditiobis GSH, cloruro cúprico, ditiotreitol (DTT) /ditiano DTT y 2, 2-mercaptoetanol (bME) /ditio-b (ME). Se puede emplear un cosolvente para incrementar la eficiencia de la reconformación y los reactivos más comúnmente utilizados para este propósito incluyen el glicerol, polietilenglicol de varios pesos moleculares, arginina y similares. Si no se forman cuerpos de inclusión en un grado significativo después de la expresión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, entonces el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 se encontrará principalmente en el sobrenadante después de la centrifugación del homogeneizado celular. El polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se podrían aislar del sobrenadante utilizando los métodos descritos en la presente. La purificación del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de la solución, se puede llevar a cabo utilizando una variedad de técnicas. Si el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 ha sido sintetizado de tal modo que contiene una marca, tal como hexahistidina (polipéptido ßlO-hexaHis, heterodimero a2/ßlO-hexaHis) u otro péptido pequeño tal como FLAG (Eastman Kodak, Co . , New Haven, CT) o myc (Invitrogen, Carlsbad, CA) en cualquiera de sus extremos carboxilo-terminal o amino-terminal, se podría purificar en un proceso de una sola etapa haciendo pasar la - solución a través de una columna de afinidad, en donde la matriz de la columna tiene una alta afinidad por la marca. Por ejemplo, la polihistidina se une con gran afinidad y especificidad al níquel, por lo tanto se podría utilizar una columna de afinidad de niquel (tal como las columnas de niquel Qiagen©) para la purificación del polipéptido ßlO-hexaHis o el heterodimero a2/ßl0-hexaHis . Véase por ejemplo Ausubel et al . , eds., Current Protocols in Molecular Biology, Sección 10.11.8, John Wiley & Sons, Nueva York (1993) . Adicionalmente, el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 se puede purificar mediante el uso de un anticuerpo monoclonal, el cual es capaz de reconocer y unirse específicamente al polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Así pues, los procedimientos; adecuados para la purificación incluyen, sin limitaciones, la cromatografía de afinidad, cromatografía de inmunoafinidad, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de tamiz molecular, cromatografía liquida de alto rendimiento (HPLC) , electroforesis (incluyendo electroforesis en gel nativo) seguido por una elusión del gel y enfoque isoeléctrico preparativo (aparato/técnica "Isoprime", Hoefer Scientific, San Francisco, CA) . En algunos casos" se pueden combinar dos o más técnicas de purificación para incrementar la - - pureza. Los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 también se pueden preparar por métodos de síntesis química (tales como síntesis peptídica en fase" sólida) utilizando las técnicas conocidas en este campo, tales como aquellas establecidas en Merrifield et al . , J. Am. Chem. Soc., 85: 2149 (1963); Houghten et al . , Proc Nati Acad. Sci. USA, 82: 5132 (1985) ; y Stewart y Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co . , Rockford, IL (1984). Tales polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 se pueden sintetizar con o sin una metionina en el extremo amino-terminal. Los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a.2/ßl0 químicamente sintetizados se pueden oxidar utilizando los métodos establecidos en estas referencias para formar puentes de disulfuro. Los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 quimicamente sintetizados se. espera que tengan una actividad biológica comparable con los correspondientes polipéptidos ßlO (cuando se heterodimerizan con a2) ó heterodímeros a2/ßl0 producidos de manera recombinante o purificados a partir de fuentes naturales y por lo tanto se pueden utilizar de manera intercambiable con un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 natural o recombinante. Otro medio para obtener un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de conformidad con la presente invención, es a través de la purificación de muestras biológicas tales como tejidos y/o fluidos en los cuales se encuentra naturalmente el polipéptido ßlO ó el heterodímero a2/ßl0. Tal purificación se puede llevar a cabo empleando los métodos de purificación de proteínas descritos en la presente. La presencia del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 durante la purificación se puede supervisar utilizando, por ejemplo, un anticuerpo correspondiente preparado contra el polipéptido ßlO ó un fragmento del mismo producido de manera recombinante o un anticuerpo preparado contra el heterodímero a2/ßl0 ó un fragmento del mismo producido de manera recombinante. En la técnica se conoce un número de métodos adicionales para producir ácidos nucleicos y polipéptidos y se pueden utilizar para producir polipéptidos que tengan especificidad por los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 de la presente invención. Véase, por ejemplo, Roberts, et al . , Proc. Nati. Acad. Sci., 94: 12297-12303 (1997), quienes describen la producción de proteínas de fusión entre un ARNm y su péptido codificado. Véase también la Patente Norteamericana No. US 5,824,469, la cual describe métodos para obtener oligonucleótidos capaces de desempeñar una función biológica específica. El procedimiento incluye generar una mezcla heterogénea de 105 oligonucleótidos, cada uno teniendo una secuencia 5' aleatorizada, una secuencia preseleccionada central y una secuencia 3' aleatorizada. La mezcla heterogénea resultante se introduce en una población de células que no exhiben la función biológica deseada. Después se seleccionan subpoblaciones de las células en busca de aquellas que exhiban una función biológica predeterminada. A partir de esa subpoblación, se aislan los oligonucleótidos capaces de desempeñar la función biológica deseada. Las Patentes Norteamericanas 'Nos. US 5,763,192; 5,814,476; 5,723,323 y 5,817,483 describen procesos para producir péptidos o polipéptidos . Esto se lleva a cabo produciendo genes estocásticos o fragmentos de los mismos y después introduciendo estos genes- en células huésped que produzcan una o más proteínas codificadas por los genes estocásticos. Las células huésped, entonces, son seleccionadas para identificar aquellas clonas que producen péptidos o polipéptidos que tengan la actividad deseada. Derivados Químicos Los derivados químicamente modificados de los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 de la presente invención, pueden ser preparados por un técnico en la materia dadas las descripciones expuestas en la presente. Tales derivados del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 son modificados de una manera que es diferente, ya sea en tipo o en ubicación, de las moléculas normalmente unidas al polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Los derivados pueden incluir moléculas formadas por la deleción de uno o más grupos químicos naturalmente unidos. El polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, una variante del polipéptido similar a ßlO del mismo o un heterodimero a2/ßl0 se pueden modificar mediante la unión covalente de uno o más polímeros. Por ejemplo, el polímero seleccionado típicamente es hidrosoluble, de manera que la proteina a la cual se une no se precipita en un ambiente acuoso, tal como un ambiente fisiológico. Dentro de los alcances de polimeros adecuados está incluida una mezcla de polímeros, de preferencia, para uso terapéutico de la preparación final, el polimero será farmacéuticamente aceptable. Cada uno de los polimeros puede tener cualquier peso molecular y puede estar ramificado o no ramificado. Los polímeros típicamente tienen un peso molecular promedio de entre aproximadamente 2 a aproximadamente 100 kDa (el término "aproximadamente" indica que en preparaciones de un polimero hidrosoluble, algunas moléculas pesarán más, algunas menos, que el peso molecular establecido) . El peso molecular promedio de cada polímero de preferencia está entre aproximadamente 5 kDa y aproximadamente 50 kDa, más preferiblemente entre aproximadamente 12 kDa y aproximadamente 40 kDa y todavía más preferiblemente entre aproximadamente 20 kDa y aproximadamente 35 kDa. Los polímeros hidrosolubles adecuados o mezclas de los mismos incluyen, pero no se limitan a, carbohidratos N-ligados u O-ligados, azúcares, fosfatos, polietilenglicol (PEG) (incluyendo las formas de PEG que han sido utilizadas para derivar proteínas, incluyendo mono- (C?-C: ) -alcoxi- o ariloxi-polietilenglicol) , monometoxipolietilenglicol, dextrén, (tal como dextrán de bajo peso molecular de, por ejemplo aproximadamente 6 kD) , celulosa u otros polímeros basados en carbohidrato, poli- (vinilpirrolidona) -polietilenglicol, homopolímeros de propilenglicol, un copolimero de óxido de propileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (e.g., glicerol) y alcohol polivinílico. También están abarcadas en la presente invención las moléculas reticulantes bifuncionales que se pueden utilizar para preparar multímeros con enlaces covalentes del polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, un polipéptido variante del mismo o un heterodímero a2/ßl0. En general, la derivación - química se puede realizar bajo cualquier condición adecuada para hacer reaccionar una proteina con una molécula polimérica - activada. Los métodos para preparar derivados químicos de polipéptidos o heterodimeros, generalmente comprenderán los pasos (a) hacer reaccionar el polipéptido o heterodímero con la molécula polimérica activada J tal como un éster reactivo o un derivado aldehido de la molécula polimérica) , bajo condiciones por las cuales el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, ó un polipéptido variante del mismo o un heterodimero a2/ßl0, se una a una o más moléculas poliméricas y (b) obtener el producto o los productos de la reacción. Las condiciones de reacción óptimas se determinarán con base en parámetros conocidos y el resultado deseado. Por ejemplo, mientras más grande sea la relación molécula polimérica:proteína, mayor será el porcentaje de molécula polimérica enlazada. En una modalidad, el derivado de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßlQ puede tener una sola porción de molécula polimérica en el extremo amino-terminal. Véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. US 5,234,784. La pegilación del polipéptido o heterodimero específicamente se puede llevar a cabo por cualquier reacción de pegilación conocida en la técnica, tal como se describe, por ejemplo, en la siguientes referencias: Francis et al . , Focus on Growth Factors, 3: 4-10 (1992); Patente Europea EP 0154316; Patente Europea EP 0401384 y Patente Norteamericana No. US 4,179,337. Por ejemplo, la pegilación se puede llevar a cabo mediante una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula de polietilenglicol reactiva (o un polimero hidrosoluble análogo reactivo), tal como se describe en la presente. Para las reacciones de acilación, el polímero o polímeros seleccionados deben tener un solo grupo éster reactive. Para la alquilación reductiva, el polímero o polímeros seleccionados deben tener un solo grupo aldehido reactivo. Un aldehido reactivo es, por ejemplo, el propionaldehido de polietilenglicol, el cual es hidrosoluble, o derivados alcoxi o ariloxi de 1 a 10 átomos de carbono del mismo (véase la Patente Norteamericana No. US 5,252,714). En otra modalidad, un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 puede ser quimicamente acoplado a la biotina y el polipéptido ßlO-biotina o heterodímero a2/ßl0-biotina que se conjugaron, posteriormente se hacen reaccionar con la avidina, dando como resultado moléculas tetravalentes avidina/biotina/polipéptido ßlO ó avidina/biotina/heterodímero a2/ßl0. Los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 también se pueden acoplar covalentemente al dinitrofenol (DNP) o al trinitrofenol (TNP) y los conjugados resultantes se precipitan con IgM anti-DNP o anti-TNP, para formar conjugados decaméricos con - una valencia de 10. Generalmente, los trastornos que pueden ser aliviados o modulados mediante la administración de los presentes derivados del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0, incluyen aquellos descritos en la presente para los polipéptidos ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Sin embargo, los derivados de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 descritos en la presente, pueden tener actividades adicionales, una aumentada o reducida actividad biológica, u otras caracteristicas tales como una incrementada o disminuida vida media, en comparación con las moléculas no derivadas. Animales No Humanos Manipulados Por Ingeniería Genética Dentro de los alcances de la presente invención se incluyen adicionalmente animales no humanos, tales como ratones, ratas u otros roedores, conejos, cabras u ovejas, u otros animales de granja, en los cuales el gen (o genes) que codifica para el polipéptido ßlO nativo ha sido alterado ("noqueado") de tal modo que el nivel de expresión de este gen o genes disminuyan significativamente o se eliminen por completo. Tales animales pueden ser preparados utilizando las técnicas y métodos tales como descritos en la Patente Norteamericana No. US 5,557,032. La presente invención además incluye animales no - humanos tales como ratones, ratas u otros roedores, conejos, cabras, ovejas u otros animales de granja, en los cuales la forma nativa del gen o genes ßlO para ese animal o un heterólogo del gen o genes ßlO son sobreexpresados por el animal, creando de esta manera un animal "transgénico". Tales animales transgénicos se pueden preparar utilizando métodos conocidos, tales como aquellos descritos en la Patente Norteamericana No. US 5,489,743 y en la Solicitud Internacional de Patente PCT WO 94/28122. La presente invención además incluye animales no humanos en los cuales el promotor para uno o más de los polipéptidos ßlO es activado o inactivado (e.g., utilizando métodos de recombinación homologa) para alterar el nivel de expresión del polipéptido ßlO nativo. Estos animales no humanos se pueden usar para la búsqueda de fármacos candidatos. En tal búsqueda, se medirá el impacto del fármaco candidato en el animal. Por ejemplo, los fármacos candidatos pueden disminuir o incrementar la expresión- del gen ßlO. En ciertas modalidades, la cantidad de polipéptido ßlO que es producida se puede medir después de exponer al animal al fármaco candidato. Adicionalmente, en ciertas modalidades se puede detectar el impacto real del fármaco candidato en el animal. Por ejemplo, la sobreexpresión de un gen - - particular puede dar como resultado, o puede estar asociada con, una enfermedad o trastorno patológico. En tales casos, se puede probar la capacidad de un fármaco candidato para disminuir la expresión del gen o su capacidad para prevenir o inhibir un trastorno patológico. En otras modalidades, la producción de un producto metabólico particular tal como un fragmento de un polipéptido, puede dar como resultado o estar asociada con una enfermedad o trastorno patológico. En tales casos, se puede probar la capacidad de un fármaco candidato para disminuir la producción de tal producto metabólico o su capacidad para prevenir o inhibir un trastorno patológico. Microarreglo Se observará que la tecnología de microarreglo de ADN se puede utilizar de conformidad con la presente invención. Los microarreglos de ADN son arreglos de alta densidad en miniatura de ácidos nucleicos posicionados en un soporte sólido, tal como un vidrio. Cada célula o elemento dentro del arreglo tiene numerosas copias de una sola especie de ADN que actúa como blanco para la hibridación de su ARNm cognado. En los perfiles de expresión utilizando la tecnología de microarreglo de ADN, primero se extrae ARNin de una célula o tejido y después se convierte enzimáticamente en ADNc con marca fluorescente. Este material es hibridizado con el microarreglo y el ADNc no unido es removido mediante lavados. La expresión de genes discretos representados en el arreglo, luego se visualiza al cuantificar la cantidad de ADNc marcado que se une específicamente a cada ADN blanco. De esta manera, la expresión de miles de genes se puede cuantificar de una manera paralela y de alto rendimiento a partir de una sola muestra de material biológico. Este perfil de expresión de alto rendimiento tiene ?n amplio rango de aplicaciones con respecto a las moléculas ßlO de la presente invención, incluyendo pero no limitándose a: la identificación y validación de genes ßlO relacionados con enfermedades como blancos para procedimientos terapéuticos; la toxicología molecular de moléculas ßlO e inhibidores de las mismas; la estratificación de poblaciones y - la generación de marcadores substitutos para estudios clínicos; e incrementar el descubrimiento de fármacos de molécula pequeña relacionados con ßlO mediante la ayuda en la identificación de compuestos selectivos en métodos de selección de alto rendimiento (SAR) . Agentes de Unión Selectiva Tal como se en la presente, el término "agente de unión selectiva" se refiere a una molécula que tiene especificidad por uno o más polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0. Los agentes de unión selectiva adecuados incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos y derivados de los mismos, polipéptidos y moléculas pequeñas. Tales agentes de unión selectiva se pueden preparar utilizando los métodos conocidos en la técnica. Un agente de unión selectiva al polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 de ejemplo de la presente invención, es capaz de unirse a cierta porción del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, inhibiendo de esta manera la unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 al receptor o receptores del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. Los agentes de unión selectiva tales como anticuerpos y fragmentos de anticuerpo que se unen a los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0, están dentro de los alcances de la presente invención. Los anticuerpos pueden ser policlonales incluyendo policlonales monoespecífieos, monoclonales (MAbs) , recombinantes, quiméricos, humanizados tales como aquellos con injerto CDR, humanos, de una sola cadena y/o biespecíficos, así como fragmentos, variantes o derivados de los mismos. Los fragmentos de anticuerpo incluyen aquellas porciones del anticuerpo que se unen a un epítopo en el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Ejemplos de tales fragmentos incluyen los fragmentos Fab y F(ab') generados mediante el - rompimiento enzimático de los anticuerpos de longitud completa. Otros fragmentos de unión incluyen aquellos generados por técnicas de ADN recombinante, tales como la expresión de plásmidos recombinantes que contienen secuencias de ácido nucleico que codifican para regiones variables de anticuerpos. Los anticuerpos policlonales dirigidos contra el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, generalmente son producidos en animales (e.g., conejos o ratones) por medio de múltiples inyecciones subcutáneas o intraperitoneales del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, y un adyuvante. Puede ser útil conjugar un polipéptids_ ßlO ó heterodímero a2/ßl0 con una proteína de vehículo que sea inmunogénica en la especie por ser inmunizada, tal como hemocianina de lapa, suero, albúmina, tiroglobulina bovina o inhibidor de tripsina de soya. También se utilizan agentes agregantes tales como el alumbre para intensificar la respuesta inmunitaria. Después de la inmunización, los animales son sangrados y el suero se analiza para establecer el título de anticuerpos antipolipéptido ßlO ó antiheterodi ero a2/ßl0. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0, son producidos utilizando cualquier método que proporcione la producción - de moléculas de anticuerpo por lineas celulares continuas en un cultivo. Ejemplos de métodos adecuados para preparar anticuerpos monoclonales incluyen los métodos de hibridoma de Kohler et al . , Nature, 256: 495-497 (1975) y el método de hibridoma de células B humanas de Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al . , Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, páginas 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1987) . La presente invención también proporciona lineas celulares de hibridoma que producen anticuerpos monoclonales que reaccionan con el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención se pueden modificar para utilizarse como compuestos terapéuticos. Una modalidad es un anticuerpo "quimérico" en el cual una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homologa una secuencia correspondiente en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la cadena o cadenas es "idéntico u homólogo a una secuencia correspondiente de anticuerpos derivados de otra especie o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo. También se incluyen fragmentos de tales anticuerpos, siempre y cuando exhiban la actividad biológica deseada. Véase la Patente Norteamericana No. US - 4,816,567; Morrison et al . , Proc. Nati. Acad. Sci., 81: 6851-6855 (1985) . En" otra modalidad, un anticuerpo manoclonal de la presente invención es un anticuerpo "humanizado" . Los métodos para humanizar anticuerpos no humanos son conocidos en la técnica. Véanse las Patentes Norteamericanas Nos. US 5,585,089 y 5,693,762. Generalmente, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácido introducidos provenientes de una fuente que no es humana. La humanización se puede realizar, por ejemplo, utilizando los métodos descritos en la técnica (Jones et al . , Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al . , Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al . , Science 239: 1534-1536 (1988)), substituyendo cuando menos una porción de una región determinante de complementariedad (CDR) de roedor por las correspondientes regiones de un anticuerpo humano. La presente invención también abarca anticuerpos humanos que se unen al .polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. Mediante el uso de animales transgénicos (e.g., ratones) que son capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena, tales anticuerpos son producidos mediante una inmunización con un antígeno polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 (i.e., que tiene cuando menos 6 - - aminoácidos contiguos) , opcionalmente conjugado con un vehículo. Véase por ejemplo Jakobovits et al . , Proc. Nati. Acad. Sci., 90: 2551-2555 (1993); Jacobovits et al . , Nature 362: 255-258 (1993); Bruggermann et al . , Year in Immuno., 7: 33 (1993). En un método, tales animales transgénicos son producidos al incapacitar los loci endógenos que codifican para las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina en insertando loci que codifican para proteínas de cadena ligera y pesada humanas en el genoma de los mismos. Los animales parcialmente modificados; es decir, aquellos que tienen menos de todo el complemento de modificaciones, son cruzados para obtener un animal que tenga la totalidad de las modificaciones deseadas en el sistema inmune. Cuando se administra un inmunógeno, estos animales transgénicos producen anticuerpos con secuencias de aminoácidos humanas (en vez de, e.g., murinas), incluyendo regiones variables que son inmunoespecificas para estos antigenos. Véanse las Solicitudes Internacionales de Patente PCT Nos. PCT/US 96/05928 y PCT/US 93/06926. Métodos adicionales se describen en la Patente Norteamericana No. US 5,545,807; en las Solicitudes Internacionales de Patente PCT Nos. PCT/US 91/245, PCT/GB 89/01207 y las Patentes Europeas EP 546073B1 y EP 546073A1. Los anticuerpos humanos también pueden ser producidos por la expresión de ADN recombinante en células huésped o mediante una expresión en células de hibridoma, tal como se describe en la presente. En una modalidad alternativa, los anticuerpos humanos pueden ser producidos por bibliotecas de despliegue en fagos (Hoogenboom et al . , J. Mol. Biol. 227: 381 (1991); Marks et al . , J. Mol. Biol. 222: 581 (1991)). Estos procesos imitan la selección inmune a través del despliegue de repertorios de anticuerpos en la superficie de bacteriófagos filamentosos y la subsecuente selección de los fagos por su unión a un antígeno de elección. Tal técnica se describe en la Solicitud Internacional de Patente PCT/US 98/17364, la cual describe el aislamiento de anticuerpos agonistas de alta afinidad y funcionales para receptores MPL- y msk-, utilizando este enfoque. Los anticuerpos quiméricos, con injerto de CDR y humanizados, típicamente son producidos por métodos recombinantes. Los ácidos nucleicos que codifican para los anticuerpos son introducidos en células huésped y expresados utilizando los materiales y procedimientos descritos en la presente. En una modalidad preferida, los anticuerpos son producidos en células huésped de mamífero, tales como células CHO. Se pueden producir anticuerpos monoclonales (e.g., humanos) mediante la expresión de ADN recombinante en células huésped o mediante la expresión en células de hibridoma, tal como se describe en la presente.

- Los anticuerpos antipolipéptido ßlO ó antiheterodímero a2/ßl0 de la presente invención, se pueden emplear en cualquier método de ensayo conocido, tal como ensayos de unión competitiva, ensayos en emparedado directos e indirectos y ensayos de. inmunoprecipitación (Sola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, páginas 147-158, CRC Press, Inc., 1987) para la detección y cuantificación del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0.

Los anticuerpos se unirán al polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 con una afinidad que es apropiada para el método de ensayo que se esté empleando. Para aplicaciones de diagnóstico, en ciertas modalidades los anticuerpos antipolipéptido ßlO ó antiheterodímero a2/ßl0 se pueden marcar con una porción detectable. La porción o fragmento detectable puede ser cualquiera que sea capaz de producir, ya sea de manera directa o indirecta, una señal detectable. Por ejemplo, la fracción detectable puede ser un radioisótopo, tal como 3H, iC, 3"P, ~DS, ó 125I, un compuesto fluorescente o quimioluminiscente tal como isotiocianato de fluoresceina, rodamina o luciferina; o una enzima tal como la fosfatasa alcalina, or-galactosidasa o peroxidasa de rábano (Bayer et al . , Meth. Enz., 184: 138-163 (1990)). Los ensayos de unión competitiva se basan en la capacidad de un estándar marcado { e. g. , un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 ó una porción inmunológicamente reactiva de los mismos) para competir con la substancia de prueba por analizar (un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0) para unirse con una cantidad limitada de anticuerpos antipolipéptido ßlO ó antiheterodímero a2/ßl0. La cantidad de polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 en la muestra de prueba, es inversamente proporcional a la cantidad de estándar que se unió a los anticuerpos. Para facilitar la determinación de la cantidad de estándar que se une, los anticuerpos típicamente son insolubilizados antes o después de la competencia, de manera que el estándar y la substancia por analizar que se unen a los anticuerpos, convenientemente puedan ser separados del estándar y la substancia por analizar que no se unieron a ningún anticuerpo. Los ensayos en emparedado típicamente incluyen el uso de dos anticuerpos-, cada uno capaz de unirse a una porción inmunogénica diferente, o epítopo, de la proteína por ser detectada y/o cuantificada. En un ensayo en emparedado, la muestra de la substancia por analizar típicamente se une a un primer anticuerpo que está inmovilizado en un soporte sólido y después un segundo anticuerpo se une a la substancia por analizar, formando de - esta manera un complejo insoluble de tres partes. Véase, e . g. , la Patente Norteamericana No. US 4,376,110. El segundo anticuerpo puede estar marcado con una porción detectable (ensayos en emparedado directos) o se puede medir utilizando un anticuerpo antiinmunoglobulina que esté marcado con una porción detectable (ensayos en emparedado indirectos) . Por ejemplo, un tipo de ensayo en emparedado es un ensayo inmunosorbente de enzima ligada (ELISA) , en cuyo caso la porción detectable es una enzima. Los agentes de unión selectiva, incluyendo anticuerpos antipolipéptido ßlO o antiheterodímero a2/ßl0, también son útiles para producir imágenes in vivo. Un anticuerpo marcado con una porción detectable puede ser administrado a un animal, de preferencia en el torrente sanguíneo, y se ensaya la presencia y ubicación del anticuerpo marcado en el huésped. El anticuerpo puede estar marcado con cualquier fragmento que sea detectable en un animal, ya sea por resonancia magnética nuclear, radiología u otro medio de detección conocido en la técnica. Los agentes de unión selectiva de la presente invención, incluyendo anticuerpos, se pueden usar como agentes terapéuticos. Estos agentes terapéuticos generalmente son agonistas o antagonistas porque ya sea incrementan, o bien reducen, respectivamente, cuando menos una de las actividades biológicas de un polipéptido ßlO ó heterodimero ,a2/ßl0 de conformidad con la presente invención. En una modalidad, los anticuerpos antagonistas de la presente invención son anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos que son capaces de unirse específicamente a un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 y que son capaces de inhibir o eliminar la actividad funcional de un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 in vivo o in vi tro . En modalidades preferidas, el agente de unión selectiva, e.g., un anticuerpo antagonista, inhibirá la actividad funcional de un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 en cuando menos aproximadamente 50% y de preferencia en cuando menos aproximadamente 80%. En otra modalidad, el agente de unión selectiva puede ser un anticuerpo que es capaz de interactuar con un socio de unión del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0 (un ligando o receptor) , inhibiendo de esta manera o eliminando la actividad del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 in vitro o in vivo. Los agentes de unión selectiva, incluyendo anticuerpos antipolipéptido ßlO ó antiheterodimero a2/ßl0 agonistas y antagonistas, son identificados mediante ensayos de selección que son conocidos en la técnica. La presente invención también se refiere a un - 1 2 - paquete que comprende agentes de unión selectiva al polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 (tales como anticuerpos) y otros reactivos útiles para detectar la concentración del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en muestras biológicas. Tales reactivos pueden incluir una marca detectable, un suero bloqueador, muestras de control positivo y negativo y reactivos de detección. El polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de la presente invención, también se puede utilizar para clonar receptores del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, empleando una estrategia de "clonación de expresión". El polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 radiomarcado (125-Yodo) ó el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 "con marca de afinidad/actividad" (tal como una fusión con un fragmento Fc o una fusión con fosfatasa alcalina) , se pueden utilizar en ensayos de unión para identificar un tipo de célula o linea celular o tejido que exprese receptores de polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. El ARN aislado de tales células o tejidos" será convertido en ADNc, clonado en un vector de expresión de mamífero y transfectado a células de mamífero (por ejemplo, células COS o células 293) para crear una biblioteca de expresión. Posteriormente, el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 marcado o radiomarcado, se utilizarían como Hgando de - afinidad para identificar y aislar la subpoblación de células, en esta biblioteca, que expresan receptores del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 en su superficie. Se aislaría el ADN de estas células y sería transfectado a células de mamífero para crear una biblioteca de expresión secundaria, en la cual la fracción de células que expresan receptores del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 sería muchas veces mayor que en la biblioteca original. Este proceso de enriquecimiento sería repetido hasta que se aislara una sola clona recombinante que tuviera receptores del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. El aislamiento de los receptores del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 sería muy útil en términos de la capacidad de identificar o desarrollar nuevos agonistas y antagonistas de la ruta o rutas de señalización del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Tales agonistas y antagonistas incluirían receptores solubles del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, anticuerpos contra receptores del polipéptido ßlO ó anticuerpos contra receptores del heterodímero a2/ßl0, moléculas pequeñas u oligonucleótidos antisentido, y estos se podrían utilizar en el diagnóstico y/o tratamiento de una o más de las enfermedades/trastornos que se listan más adelante. Ensayo de Otros Moduladores de la Actividad del Polipéptido - ßlO o Heterodímero a2/ßl0 En algunas situaciones, sería deseable identificar moléculas que sean moduladores, i.e., agonistas o antagonistas, de la actividad de un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de la presente invención. Las moléculas naturales o sintéticas que modulan al polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se pueden identificar utilizando uno o más ensayos de selección, tales como aquellos descritos en la presente. Tales moléculas pueden ser administradas ya sea de manera ex vivo, o bien, de una manera in vivo por inyección o por administración oral, un dispositivo de implantación o similares. El término "moléculas de prueba" se refiere a la molécula o moléculas que están en evaluación con respecto a su capacidad de modular (i.e., incrementar o disminuir) la actividad de un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 de la presente invención. Más comúnmente, una molécula de prueba interactuará directamente con el polipéptido o heterodímero. Sin embargo, también se contempla que una molécula de prueba también podría modular indirectamente la actividad del polipéptido ßlO ó heterodimero cc2/ßl0, por ejemplo afectando la expresión del gen ßlO ó uniéndose a un socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 (e.g., un receptor o ligando) . En una modalidad, una molécula de prueba se unirá a un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 con una afinidad constante de cuando menos aproximadamente 10~ M, de preferencia de aproximadamente 10~8 M, más preferiblemente de aproximadamente 10"u M, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 10""'-' M. Los métodos para identificar compuestos que interactúan con los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 de la presente invención, están abarcados por la presente invención. En ciertas modalidades, un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 se incuba con una molécula de prueba bajo condiciones que permitan la interacción de la molécula de prueba con el polipéptido y se puede medir el grado de interacción. La molécula o moléculas de prueba se pueden analizar en una forma sustancialmente purificada o en una mezcla cruda. En ciertas modalidades, un agonista o antagonista del polipéptido ßlO ó del heterodímero a2/ßl0 puede ser una proteína, péptido, carbohidrato, lipido o molécula de peso molecular pequeño que interactúe con el polipéptido ßlO ó el heterodímero a2/ßl0 para regular su actividad. Las moléculas que regulan la expresión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 incluyen ácidos nucleicos que son complementarios a los ácidos nucleicos que codifican para un polipéptido ßlO de la presente invención o que son complementarios a secuencias de ácidos nucleicos que dirigen, controlan o influencian la expresión dei polipéptido ßlO ó el heterodímero a2/ßl0 y que actúan como reguladores antisentido de la expresión. Una vez que se ha identificado un conjunto de moléculas de prueba que interactúan con un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, las moléculas pueden ser evaluadas adicionalmente con respecto a su capacidad de incrementar o disminuir la actividad del polipéptido ßlO ó del heterodímero a2/ßl0. La medición de la interacción de las moléculas de prueba con los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0, se puede llevar a cabo de varias maneras, incluyendo ensayos de unión basados en células, ensayos de unión a la membrana, ensayos en fase solución e inmunoensayos. En general, las moléculas de prueba se incuban con un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 por un periodo de tiempo especificado y se determina la actividad del polipéptido ßlO ó del heterodímero a2/ßl0 mediante uno o más ensayos para medir la actividad biológica. La interacción de las moléculas de prueba con los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 de conformidad con la presente invención, también se puede ensayar directamente utilizando anticuerpos policlonales o monoclonales en un inmunoensayo. Alternativamente, formas modificadas de los polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 que contienen marcas epitópicas tal como se describe en la presente, se pueden utilizar en inmunoensayos. En el caso en que los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 desplieguen una actividad biológica a través de una interacción con un socio de unión (e.g., un receptor o un ligando) , se puede emplear una variedad de ensayos in vi tro para medir la unión de un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 al correspondiente socio de unión (tal como un agente de unión selectiva, receptor o ligando) . Estos ensayos se pueden utilizar para seleccionar moléculas de prueba con respecto a su capacidad de incrementar o disminuir la velocidad y/o el grado de unión de un polipéptido ßlO ó-- heterodímero a2/ßl0 a su socio de unión. En un ensayo, un polipéptido ßlO ó eterodímero a2/ßl0 se inmoviliza en las paredes de una microplaca. Después, el socio de unión de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 radiomarcado (por ejemplo, el socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 yodado) y la molécula o moléculas de prueba se pueden agregar uno a la vez (en cualquier orden) o de manera simultánea a las placas. Después de incubar, los pozos se pueden lavar y someter a un conteo utilizando un contador de centelleo para la radiactividad, para determinar el grado en el cual el socio de unión se unió al polipéptido ßlO ó al heterodímero a2/ßl0. Típicamente, las moléculas se probarán en un rango de concentraciones y se puede usar una serie de pozos control que carezcan de uno o más elementos de los ensayos de prueba para tener exactitud en la evaluación de los resultados. Una alternativa a este método incluye revertir las "posiciones" de las proteinas; es decir, inmovilizar el socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 en los pozos de una microplaca, incubar con la molécula de prueba y el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 radiomarcado y determinar el grado de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Véase por ejemplo, el capítulo 18 de Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al . , eds., John Wiley & Sons, Nueva York, NY (1995) . Como alternativa al radiomarcado, un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 ó su re-spectivo socio de unión, se puede conjugar con biotina y después se puede detectar la presencia de la proteína biotinada utilizando estreptavidina ligada a una enzima, tal como la peroxidasa de rábano (HRP) o la fosfatasa alcalina (AP) , las cuales se pueden detectar colorimétricamente o por una marca fluorescente de la estreptavidina. También se puede usar un anticuerpo dirigido contra un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 ó contra un socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 y conjugarlo con biotina y luego detectarlo después de una incubación con estreptavidina ligada a una enzima, por ejemplo ligada a AP ó HRP. También un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 ó un socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se puede inmovilizar uniéndolo a cuentas de agarosa, a cuentas acrílicas o algún otro tipo de fase sólida inerte. El complejo proteína-sustrato se puede colocar en una solución que contiene la proteina complementaria y el compuesto de prueba. Después de una incubación, las cuentas se pueden precipitar por centrifugación y se puede medir la unión entre el polipéptido J310 ó heterodimero a2/ßl0 y su respectivo socio de unión utilizando los métodos descritos en la presente. Alternativamente, el complejo sustrato-proteína se puede inmovilizar en una columna y se hace pasar la molécula de prueba y la proteina complementaria a través de la columna. La formación de un complejo entre un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 y su respectivo socio de unión, se puede ensayar utilizando cualquiera de las técnicas establecidas en la presente, i.e., radiomarcado, unión de anticuerpos o similares. Otro ensayo in vi tro que es útil para identificar una molécula de prueba que incrementa o disminuye la formación de un complejo entre un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 y un correspondiente socio de unión dei polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0, es un sistema detector de resonancia de plasmón de superficie, tal como el sistema de ensayo BIAcore (Pharmacia, Piscataway, NJ) . El sistema BIAcore se puede llevar a cabo siguiendo el protocolo del fabricante. Este ensayo esencialmente incluye la unión covalente del polipéptido ßlO, heterodímero a2/ßl0, socio de unión del polipéptido ßlO ó socio de unión del heterodimero a2/ßl0, a un chip sensor revestido de dextrán que está localizado en un detector. Después, el compuesto de prueba y la otra proteína complementaria se pueden inyectar, ya sea de manera simultánea o secuencial, en la cámara que contiene el chip sensor. La cantidad de proteína complementaria que se une se puede evaluar basándose en el cambio de la masa molecular que se asocia físicamente con el lado revestido de dextrán del chip sensor; el cambio en la masa molecular puede ser medido por el sistema detector.

En algunos casos, puede ser deseable evaluar dos o más compuestos de prueba juntos con respecto a su capacidad de incrementar o disminuir la formación de un complejo entre el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 y un correspondiente socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. En estos casos, los ensayos establecidos en la presente se pueden modificar fácilmente agregando tal compuesto o compuestos de prueba adicionales, ya sea de manera simultánea o subsecuente al primer compuesto de prueba. El resto de las etapas del ensayo queda como se establece en la presente. Se pueden usar ensayos in ví tro tales como los descritos en la presente ventajosamente para seleccionar grandes números de compuestos con respecto a sus efectos sobre la formación de complejos por el polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 y un correspondiente socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. Los ensayos pueden ser automatizados para seleccionar compuestos generados en bibliotecas de despliegue en fagos, péptidos sintéticos y bibliotecas de síntesis química. Los compuestos que incrementan o disminuyen la formación de un complejo entre un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 y un correspondiente socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, también se pueden 13- seleccionar en cultivo celular utilizando células y lineas celulares que expresan ya sea el polipéptido ßlO, o bien, el heterodímero a2/ßl0, y un correspondiente socio de unión del polipéptido ßlO ó del heterodimero a2/ßl0. Las células y lineas celulares se pueden obtener de cualquier animal, pero de preferencia serán de origen humano o de otros primates, caninos o roedores. La unión de un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 a las células que expresan el correspondiente socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en la superficie, se evalúa en presencia o ausencia de las moléculas de prueba y se puede determinar el grado de unión, por ejemplo, por citometria de flujo utilizando un anticuerpo biotinado contra el socio de unión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0. Los ensayos en cultivo celular se pueden usar ventajosamente para evaluar adicionalmente compuestos que dan un resultado positivo en los ensayos de unión a proteinas descritos en la presente. También se pueden usar cultivos celulares para evaluar el impacto de un fármaco candidato. Por ejemplo, los fármacos pueden disminuir o incrementar la expresión del gen ßlO. En ciertas modalidades, la cantidad de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 que es producida se puede medir después de exponer el cultivo celular al fármaco candidato. En ciertas modalidades, se puede detectar el impacto real del fármaco candidato sobre el cultivo celular. Por ejemplo, la sobreexpresión de un gen particular puede tener un impacto particular sobre el cultivo celular. En tales casos, se puede probar la capacidad de un fármaco candidato para incrementar o disminuir la expresión del gen o su capacidad para prevenir o inhibir un impacto particular sobre el cultivo celular. En otros ejemplos, la producción de un producto metabólico particular tal como un fragmento de un polipéptido, puede dar como resultado o estar asociado con una enfermedad o un trastorno patológico. En tales casos, se puede probar la capacidad de un fármaco candidato para disminuir la producción de tal producto metabólico en un cultivo celular. Aplicaciones Terapéuticas/Diagnósticas de los Polipéptido ßlO, Heterodímeros a2/ß!0 y Ácidos Nucleicos La función biológica es anticipada para un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 similar al de las hormonas glucoproteicas FAS, TSH, FSH, LH y CG, las cuales, entre otros casos, se sabe que actúan como factores de crecimiento, promoviendo el desarrollo (proliferación, diferenciación) de células productoras de prolactina, de la glándula tiroides y de las gónadas. Estas glucoproteinas también actúan como hormonas endocrinas en su función como reguladores de la función placentaria, tiroidea y gonadal. La FAS desempeña una función en la estimulación de la secreción de prolactina por_ parte de células deciduales en la placenta, la TSH desempeña una función principal en la regulación del metabolismo basal a través de la glándula tiroides y la FSH, LH y CG desempeñan funciones críticas en la fertilidad de hombres y mujeres, así como en el embarazo. Como tal, un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 también pueden desempeñar funciones en la regulación del metabolismo basal, en el desarroHo/función de las gónadas, en la fertilidad y el embarazo. Como se muestra en el ejemplo que se presenta más adelante, el polipéptido ßlO es expresado en el cerebro, hígado, hígado fetal, estómago, pituitaria, colon, intestino delgado, glándula tiroides, glándulas suprarrenales, páncreas, piel, leucocitos de sangre periférica, bazo, testículos y placenta. El hecho de que el ßlO sea expresado en muchos de los órganos y tejidos que conforman el sistema endocrino, sugiere una función importante del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en la regulación y coordinación de una o más funciones del sistema endocrino. El sistema endocrino se sabe que ejerce un control principal sobre el metabolismo, las - 13. respuestas fisiológicas al estrés y el desarrollo y función de los órganos reproductores. La expresión del ßlO en la pituitaria, páncreas, glándulas suprarrenales, glándula tiroides, estómago, intestino delgado, colon e higado, indica una posible función de un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 en la función común de estos órganos o. tejidos, es decir el metabolismo y la homeostasis de energía/nutricional (i.e., el balance de energía, el índice metabólico basal, la digestión, la hemostasis de la glucosa, la distribución de la grasa corporal, el crecimiento general) . La expresión del ßlO en la glándula pituitaria y en las glándulas suprarrenales, indica una posible función de un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 en una de las funciones criticas desempeñadas por estos dos importantes órganos, es decir, la capacidad del cuerpo para tratar con una variedad de tensiones ambientales y fisiológicas (por ejemplo, infecciones, fiebre, inflamación, ayuno, presión arterial alta y baja, ansiedad, choque) . De manera consistente con estas posibles funciones de un polipéptido ßlO ó un heterodimero o-2/ßlO, está la expresión del ßlO en células y órganos que se sabe que son componentes importantes del sistema inmunitario (leucocitos de sangre periférica, el bazo, el intestino delgado) . Además, la expresión del ßlO en la pituitaria, testículos y placenta, indica una posible función de un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 en la función compartida de estos órganos, específicamente, la fertilidad y el embarazo. El polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 también pueden actuar como factor de crecimiento involucrado en la regeneración (proliferación y diferenciación) de tejidos o tipos de células especializados presentes en el cerebro, higado, estómago, pituitaria, colon, intestino delgado, , glándula tiroides, glándulas suprarrenales, páncreas, piel, leucocitos de sangre periférica, bazo, testículos y placenta. - De manera consistente con las tres principales áreas de la función potencial del polipéptido ßlO ó el heterodímero a2/ßl0, es decir (1) metabolismo y homeostasis de energía/nutricional, (2) respuestas fisiológicas al estrés (incluyendo la función del sistema inmunitario) y (3) la fertilidad y el embarazo, está el hecho de que el a2, que forma un heterodímero con el ßlO, es expresado (véase el Ejemplo 2 que se presenta más adelante), en muchos, de estos mismos órganos/tejidos (pituitaria anterior, placenta, páncreas, corteza suprarrenal, criptas intestinales y mucosa de la vejiga) que desempeñan funciones importantes en estas 3 áreas principales. Con base en las funciones potenciales anteriormente descritas, un polípéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 puede ser útil para el tratamiento y/o diagnóstico de trastornos metabólicos u homeostáticos de energía/nutricionales. Ejemplos de tales trastornos incluyen, pero no se limitan a la obesidad, síndromes de emaciación (por ejemplo, caquexia asociada al cáncer), miopatías, trastornos gastrointestinales, diabetes, trastornos del crecimiento, hipercolesterolemia, aterosclerosis y envejecimiento. Otras enfermedades que incluyen trastornos metabólicos o de la homeostatis de energía/nutricional, quedan abarcados dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la presente invención. Con base en las funciones potenciales anteriormente descritas, un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 puede ser útil, para el tratamiento y/o diagnóstico de trastornos relacionados con respuestas fisiológicas al estrés (incluyendo funciones del sistema inmunitario). Ejemplos de tales trastornos incluyen, pero no se limitan a la hipertensión, disfunción del sistema inmunitario (por ejemplo, inflamación excesiva, enfermedad autoin unitaria, susceptibilidad a infecciones tales como SIDA, sanación deficiente de heridas, psoriasis, asma, artritis y alergias) , choque, ansiedad y presión arterial alta o baja. Otras enfermedades que involucran respuestas fisiológicas al estrés, incluyendo pero no limitándose a funciones del sistema inmunitario, también quedan abarcadas dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la presente invención. Con base en las funciones potenciales anteriormente descritas, el polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 puede ser útil para el tratamiento y/o diagnóstico de trastornos relacionados con el embarazo y/o con el desarrollo y función de los órganos reproductores. Ejemplos de tales trastornos incluyen, pero no se limitan a la infertilidad, fertilidad (anticoncepción) , impotencia, endometriosis, menopausia, aborto, parto pretérmino y parto. Otras enfermedades que involucran el embarazo y/o el desarrollo y la función de los órganos reproductores también quedan abarcados dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la presente invención. Con base en el hecho de que el polipéptido ßlO ó un heterodímero _a2/ßl0 es probable que tenga actividades de hormona/factor de crecimiento, un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 puede ser útil para el tratamiento y/o diagnóstico de trastornos que pudieran ser tratados al incrementar la proliferación celular y/o la • diferenciacior-celular. Ejemplos de tales trastornos incluyen, pero no se limitan a daño/degeneración tisular (tal como el causado por tratamientos contra el cáncer, infecciones, enfermedades autoinmunitarias) , envejecimiento y sanación de heridas. Otras enfermedades que podrían ser tratadas mediante el incremento de la proliferación y/o diferenciación celular, también quedan abarcadas dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la presente invención. Con base en el hecho de que un polipéptido ßlO ó un heterodimero a2/ßl0 es probable que tenga actividad hormonal/de factor de crecimiento, un polipéptido ßlO ó un heterodímero a2/ßl0 puede ser útil para el tratamiento y/o diagnóstico de trastornos que podrían ser tratados mediante la disminución de la proliferación y/o diferenciación celular. Ejemplos de tales trastornos incluyen, pero no se limitan a cánceres, hiperplasias e hipertrofias. Otras enfermedades que podrían ser tratadas mediante • la disminución de la proliferación y/o diferenciación celular, también quedan abarcadas dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la 14 presente invención. Otras enfermedades causadas o mediadas por concentraciones indeseables de un pojLipéptido ßlO ó un heterodímero 2/ßl0, quedan abarcadas dentro de los usos terapéuticos y de diagnóstico que son parte de la presente invención. A manera de ilustración, tales concentraciones indeseables incluyen concentraciones excesivamente elevadas y concentraciones subnormales. Se prepararon ratones transgénicos que sobreexpresaban el a2 murino solo, el ßlO murino solo o el heterodímero a-2/ßlO murino (véase el- Ejemplo 6) . Sólo aquellos transgénicos que sobreexpresaban el heterodímero a2/ßl0 mostraron diferencias fenotípicas distinguibles en comparación con los ratones control. Los ratones transgénicos que sobreexpresan a2/ßl0 exhibieron un fenotipo caracterizado por agrandamiento bilateral de la tiroides con adenomas papilares foliculares múltiples, dando como resultado hipertiroidismo, tal como lo indica la elevada concentración sérica de la T4. Otros cambios fenotípicos se piensa que "están relacionados con el estado hipertiroideo sistémico e incluyen una moderada hepatomegalia, hiperplasia hepatocelular y una concentración sérica de colesterol ligeramente disminuida, hipertrofia renal bilateral y leucocitosis de leve a moderada con predominancia de linfocitos (véase el Ejempio 6) . Así pues, en un cuadro de ratón normal, el a2/ßl0 claramente tiene una actividad similar a la hormona estimulante de la tiroides (TSH) . Debido al alto nivel de conservación de aminoácidos entre al a2 murino y a2 humano [88.5% y 90.4% de similitud para las formas maduras predichas (i.e., sin péptido de señal)], el alto nivel de conservación de aminoácidos entre el ßlO murino y el ßlO humano [93.4% de identidad y 97.2% de similitud para las formas maduras predichas (i.e., sin el péptido de señal)] y el muy alto nivel de similitud entre la biología de la glándula tiroides murina y la biología de la glándula tiroides humana, se anticipa que el heterodimero a2/ßl0 tenga la misma actividad similar a la hormona estimulante de la tiroides (TSH) que la encontrada en el heterodímero a2/ßl0 murino. Además de la actividad similar a TSH, el a2/ßl0 puede tener otros efectos biológicos distintos en diferentes cuadros fisiológicos (i.e., condiciones de enfermedad) , tal como se describe detalladamente más adelante en la presente. La TSH influencia el metabolismo basal al regular la producción de hormonas tiroideas y se utiliza clínicamente para mejorar la detección y tratamiento del carcinoma tiroideo; véase McEvoy, G. (ed.); AHFS Drug - Information, pp. 2041-2042, American Society of Health-Syste Pharmacists, Inc., Bethesda, MD (1998). Además, comúnmente se utilizan pruebas de diagnóstico para medir la concentración de TSH en, la sangre para determinar el estado funcional de la glándula tiroides cuando se sospecha de trastornos de esta glándula. Es probable que el a2/ßl0 humano tenga usos clínicos similares a la TSH y será útil para el tratamiento y diagnóstico de enfermedades y trastornos relacionados con la glándula tiroides. Además, el a2/ßl0 humano puede tener otros usos terapéuticos y de diagnóstico que se describen en la presente. Es razonable suponer que los agentes de unión selectiva al a2/ßl0, por ejemplo anticuerpos, tendrán utilidades clínicas similares a los" agentes de unión selectiva a la TSH y, por lo tanto, serán útiles para el tratamiento y diagnóstico de enfermedades y trastornos relacionados con la glándula tiroides. Además, los agentes de unión selectiva al a2/ßl0 humano pueden tener otros usos terapéuticos y de diagnóstico tal como se describe en la presente. Composiciones y Administración Las composiciones terapéuticas están dentro de los alcances de la presente invención. Tales composiciones farmacéuticas pueden comprender una cantidad - - terapéuticamente efectiva de un polipéptido ßlO, un heterodímero a2/ßl0 ó una molécula de ácido nucleico ßlO, mezclado con un agente de formulación farmacéutica c fisiológicamente aceptable que selecciona para ser adecuado según el modo de administración. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más agentes de unión selectiva al polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0, mezclados con un agente de formulación farmacéutica o fisiológicamente aceptable que se selecciona para ser adecuado según la via de administración. Los materiales de formulación aceptables de preferencia no son tóxicos para quien los recibe a las dosis y concentraciones empleadas. La composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, mantener o conservar, por ejemplo, el pH, la osmolaridad, viscosidad, claridad, color, isotonicidad, olor, esterilidad, estabilidad, velocidad de disolución o liberación, adsorción o penetración de la composición. Los .materiales de formulación adecuados incluyen, pero no se limitan a aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina) , agentes antimicrobianos, antioxidantes (tales como ácido ascórbico, sulfito de sodio o sulfito ácido de sodio) , soluciones reguladoras (tales como boratos, bicarbonatos, Tris-HCl, citratos, fosfatos, otros ácidos orgánicos) , agentes de bulto (tales como manitol o glicina) , agentes quelantes (tales como ácido etilendiamino tetraacético (AEDT) ) , agentes complej antes (tales como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-beta-ciclodextrina) , rellenos, monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos (tales como glucosa, mañosa o dextrinas) , proteinas (tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas) , agentes colorantes, saborizantes y diluyentes, agentes emulsificantes, polímeros hidrofílicos (tales como polivinilpirrolidona), polipéptidos de bajo peso molecular, contraiones formadores de sales (tales como sodio) , agentes conservadores (tales como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorohexidina, ácido sórbico o peróxido de hidrógeno) , disolventes (tales como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol) , alcoholes de azúcares (tales como manitol o sorbitol) , agentes suspensores, agentes tensoactivos o humectantes (tales como pluronics, PEG, esteres de sorbitán, polisorbatos tales como polisorbato 20, polisorbato 80, Tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal) , agentes mej oradores de la estabilidad (sacarosa o sorbitol) , agentes mejoradores d la tonicidad (tales como haluros de metales alcalinos (d preferencia cloruro de sodio o de potasio) , manitol, sorbitol) , vehículos, diluyentes, excipientes y/ adyuvantes farmacéuticos {Remingto ' s Pharmaceutica Sciences, 18!" Edition, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishin Company (1990) ) . La composición farmacéutica óptima ser determinada por un técnico en la materia dependiendo de, por ejemplo, la vía de administración pretendida, e formato de distribución y la dosis deseada. Véase po ejemplo, Remington 's Pharmaceutical Sciences, supra . Tales composiciones pueden influenciar el estado físico, la estabilidad, la velocidad de liberación in vivo y l velocidad de depuración in vivo del polipéptido ßlO heterodímero a2/ßl0. El vehículo o portador primario en un composición farmacéutica puede ser de naturaleza acuosa no acuosa. Por ejemplo, un vehículo o portador adecuad puede ser agua inyectable, solución salina fisiológica líquido cefalorraquídeo artificial, posiblement suplementado con otros materiales que son comunes en las composiciones para administración parenteral. La solució salina reguladora o solución salina mezclada con albúmin sérica, son otros ejemplos de vehículos. Otras composiciones farmacéuticas de ejemplo comprenden solución reguladora Tris de aproximadamente pH 7.0-8.5 ó solución reguladora de acetatos de aproximadamente pH 4.0-5.5, los cuales pueden además incluir sorbitol o un, sustituto adecuado del mismo. En una modalidad de la presente invención, las composiciones de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se pueden preparar para almacenarse mezclando la composición seleccionada que tiene el grado de pureza deseado con agentes de formulación opcionales {Remington ' s Pharmaceutical Sciences, supra) en forma de una pastilla liofilizada o una solución acuosa. Además, el producto polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 puede ser formulado en forma de un liofilizado utilizando los excipientes apropiados, tales como sacarosa. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden seleccionar para administración parenteral. Alternativamente, las composiciones se pueden seleccionar para inhalación o para administración a través del tracto digestivo, tal como la vía oral. La preparación de tales composiciones farmacéuticamente aceptables está dentro de las destrezas de un técnico en la materia. Los componentes de formulación estén presentes en concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. Por ejemplo, se utilizan soluciones reguladoras para mantener la composición a pH fisiológico o a pH ligeramente más bajo, típicamente dentro de un rango de pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8. Cuando se contempla la administración parenteral, las composiciones terapéuticas para utilizarse en la presente invención pueden estar en forma de una solución acuosa libre de pirógenos, parenteralmente aceptable, que comprende la molécula del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 en un vehículo farmacéutícamente aceptable. Un vehículo particularmente adecuado para inyección parenteral, es el agua destilada estéril en la cual el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0-se formula como una solución isotónica estéril, apropiadamente conservada. Todavía otra preparación puede incluir la formulación de la molécula deseada con un agente, tal como microesferas inyectables, partículas biodegradables, compuestos poliméricos (ácido poliláctico, ácido poliglicólico) o cuentas o liposomas, que proporcionan una liberación controlada o sostenida del producto, en donde estos agentes pueden ser administrados en forma de una inyección de depósito. También se puede usar ácido hialurónico y éste puede tener el efecto de promover la duración sostenida en circulación. Otros medios adecuados para la introducción de la molécula deseada, incluyen aparatos de distribución de fármacos implantables. En una modalidad, se puede formular una composición farmacéutica para inhalación. Por ejemplo, una molécula de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 se puede formular como un polvo seco para inhalación. También se pueden formular soluciones para inhalación del polipéptido ßlO, heterodímero a2/ßl0 ó molécula de ácido nucleico ßlO, con un propelente para administración en "aerosol. En otra modalidad, las soluciones se pueden nebulizar. La administración pulmonar se describe adicionalmente en la Solicitud Internacional de Patente PCT/US94/001875, la cual describe la administración pulmonar de proteínas químicamente modificadas. También se contempla que ciertas formulaciones se pueden administrar por vía oral. En una modalidad de la presente invención, las moléculas de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 que son administradas de esta manera, se pueden formular con o sin aquellos vehículos acostumbradamente utilizados en la preparación de formas farmacéuticas sólidas, tales como tabletas y cápsulas. Por ejemplo, se puede diseñar una cápsula para liberar la porción activa de la formulación en el punto del tracto gastrointestinal en el que la biodisponibilidad _ es máxima y se minimiza la degradación presistémica. Se pueden incluir agentes adicionales para facilitar la absorción del polipéptido ßlO ó heterodímero 2/ßl0. También se pueden emplear agentes diluyentes, saborizantes, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes suspensores, agentes desintegrantes de tabletas y aglutinantes . Otra composición farmacéutica puede involucrar una cantidad efectiva de polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 mezclada con excipientes no tóxicos que son adecuados para la manufactura de tabletas. Al disolver las tabletas en agua estéril u otro vehículo apropiado, se pueden preparar soluciones en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen pero no se limitan a diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio o bicarbonato, lactosa o fosfato de calcio; o agentes aglutinantes tales como almidón, gelatina o goma de acacia; o agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Composiciones farmacéuticas adicionales serán evidentes para los técnicos en la materia, incluyendo formulaciones que involucran a los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 en formulaciones de liberación sostenida o controlada. Las técnicas para formular una variedad de otros medios de liberación sostenida o controlada, tales como vehículos liposomas, micropartículas biodegradables o cuentas porosas e inyecciones de depósito, también son conocidos para los técnicos en la materia. Véase por ejemplo la Solicitud Internacional de Patente PCT/US93/00829, la cual describe la liberación controlada de micropartículas poliméricas porosas para la distribución de composiciones farmacéuticas. Ejemplos adicionales de preparaciones de liberación sostenida, incluyen matrices poliméricas semipermeables en forma de artículos conformados, e.g. películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida pueden incluir poliésteres, hidrogeles, polilactidas (Patente Norteamericana No. US 3,773,919, Patente Europea EP 58,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-L-glutamato (Sidman et al . , Biopolymers, 22:547-556 (1983)), poli- (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al . , J. Biomed. Mater. Res. , 15:167-277 (1981) y Langer, Chem. Tech. , 12:98-105 (1982)), acetato de etilenvinilo (Langer et al . , supra) o ácido poli-D (-) -3-hidrsxibutirico (Patente Europea EP 133.988). Las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, los cuales se pueden preparar por cualquiera de los diversos métodos conocidos en la técnica. Véase e.g., Eppstein et al . , Proc . Nat 'l Acad. Sci . USA, 82:3688-3692 (1985); Patente Europea EP 36,676; Patente Europea 88,046; Patente Europea EP 143,949. La composición farmacéutica por ser utilizada para la administración in vivo, típicamente debe ser estéril. Esto se puede llevar a cabo por filtración a través de membranas de filtración estériles. Cuando la composición se liofiliza, la esterilización utilizando estos métodos se puede llevar a cabo antes o después de la liofilización y reconstitución. La composición para administración parenteral se puede almacenar en forma liofilizada o en solución. Además, las composiciones parenterales generalmente se colocan en un recipiente que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo una bolsa de solución intravenosa o un frasco que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica. Una vez que la composición farmacéutica ha sido formulada, se puede almacenar en frascos estériles en forma óe solución, suspensión, gel, emulsión, sólida o polvo deshidratado o liofilizado. Tales formulaciones se pueden almacenar en forma lista para usarse o en una forma (e.g., liofilizada) que requiere reconstitución antes de su administración. En una modalidad especifica, la presente invención se refiere a paquetes para producir una unidad de administración de una sola dosis. Cada paquete puede contener un primer recipiente que tiene una proteína deseada y un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. También se incluyen dentro de los alcances de la presente invención los paquetes que contienen jeringas previamente llenadas únicas o con cámaras múltiples (e.g., jeringas liquidas y liojeringas) . Una cantidad efectiva de una composición farmacéutica por ser utilizada terapéuticamente, dependerá, por ejemplo, del contexto y los objetivos terapéuticos. Un técnico en la materia observará que los niveles de dosis apropiados para un tratamiento variarán dependiendo, en parte, de la molécula administrada, de la indicación para la cual se está usando la molécula de polipépfido ßlO ó heterodimero a-2/ßlO, la vía de administración y la talla (peso corporal, superficie corporal o tamaño del órgano) y condiciones (edad y salud general) del paciente. De conformidad con ello, el clínico puede titular la dosis y modificar la vía de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo. Una dosis típica puede variar en el rango de aproximadamente 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores anteriormente mencionados. En otras modalidades, la dosis puede variar dentro del rango de 0.1 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg; - 155 o de 1 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg; o de 5 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg. La frecuencia de dosificación dependerá de los parámetros farmacocinéticos de la molécula de polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 en la formulación utilizada. Tipicamente, un clínico administrará la composición hasta que se alcance una dosis que logre el -efecto deseado. Por lo tanto, la composición se puede administrar en forma de una sola dosis o en forma de dos o más dosis (las cuales pueden o no contener la misma cantidad de la molécula deseada) con respecto al tiempo., o en forma de una infusión continua a través de un dispositivo implantado o un catéter. El refinamiento adicional de la dosis apropiada rutinariamente es realizado por los técnicos en la materia y está dentro del ámbito de las tareas normalmente realizadas por ellos. Las dosis apropiadas se pueden lograr mediante el uso de datos de dosis-respuesta apropiados . La vía de administración , de la composición farmacéutica está de acuerdo con métodos conocidos, e.g. oral, inyección intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial, intraportal o intralesional, o sistemas de liberación sostenida o aparatos de implante. Cuando se desea, las composiciones - se pueden administrar por inyección de bolo o de manera continua por infusión, o mediante la implantación de un aparato. .Alternativa o adicionalmente, la composición se puede administrar localmente mediante la implantación de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el cual la molécula deseada ha sido absorbida o encapsulada. Cuando se utiliza un aparato de implante, éste puede ser implantado en cualquier tejido u órgano adecuado y la distribución de la molécula deseada puede ser a través de difusión, a través de un bolo de liberación programada o por administración continua. En algunos casos, podria ser deseable utilizar composiciones farmacéuticas de conformidad con la presente invención de manera ex vivo. En tales casos, se retiran células, tejidos u órganos del paciente y son expuestos a las composiciones farmacéuticas, después de lo cual las células, tejidos y/u órganos son implantados de regreso en el paciente. En otros casos, un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 de la presente invención se puede administrar implantando ciertas células que han sido manipuladas por ingeniería genética, utilizando métodos tales como los descritos en la presente, para ' expresar y secretar el polipéptido o heterodimero. Tales células pueden ser células de algún animal o humanas y pueden ser autólogas, heterólogas o xenogénicas. Opcionalmente, las células pueden ser inmortalizadas. Con el fin de disminuir la probabilidad de una respuesta inmunológica, las células se pueden encapsular para evitar la infiltración de los tejidos que las rodean. Los materiales de encapsulamiento tipicamente son envolturas o membranas poliméricas semipermeables, biocompatibles, que permiten la liberación del producto o productos proteicos, pero que previenen la destrucción de las células por el sistema inmunitario del paciente o por otros factores dañinos de los tejidos que las rodean. Modalidades adicionales de la presente invención se refieren a células y métodos (e.g., recombinación homologa y/u otros métodos de producción recombinante) para la producción in vi tro de polipéptidos terapéuticos y para la producción y distribución de polipéptidos terapéuticos por terapia de genes o terapia celular. Los métodos de recombinación homologa y otros métodos de recombinación se pueden usar para modificar una célula que contiene un gen ßlO que normalmente es silente a la transcripción o un gen subexpresado y producir de este modo una célula que exprese cantidades terapéuticamente eficaces del polipéptido ßlO ó el heterodimero a2/ßl0. La recombinación homologa es una técnica originalmente desarrollada para hacer blanco en genes para inducir o corregir mutaciones en genes transcripcionalmente activos (Kucherlapati, Prog. in Nucí . Acid Res . & Mol . Biol . , 36:301, 1989). La técnica básica fue desarrollada como un método para introducir mutaciones específicas en regiones específicas del genoma de mamíferos (Thomas et al . , Cell, 44:419-428, 1986; Thomas y Capecchi, Cell, 51:503-512, 1987; Doetschman et al . , Proc. Nat 'l Acad. Sci . USA, 85:8583-8587, 1988) o para corregir mutaciones específicas dentro de genes. defectuosos (Doetschman et al . , Nature 330:576-578, 1987). Algunas técnicas de recombinación homologa de ejemplo se describen en la Patente Norteamericana No. US 5,272,071 (Patente Europea EP 9193051, Publicación Europea No. 505500; Solicitud Internacional de Patente PCT/US90/07642, Publicación Internacional de Patente WO 91/09955) . A través de la recombinación homologa, la secuencia de ADN por ser insertada en el genoma se puede dirigir hacia una región específica "del gen de interés uniéndola a un ADN de blanco. El ADN de blanco es una secuencia de nucleótidos que es complementaria (homologa) a una región del ADN genómico. Pequeños fragmentos del ADN de blanco que son complementarios a " uña región específica del genoma son puestos en contacto con la cadena progenitora durante el proceso __de replicación del - ADN. Es una propiedad general del ADN que ha sido insertado en una célula, hibridizarse y, por lo tanto, recombinarse con otros fragmentos de ADN endógeno a través de regiones homologas compartidas. Si esta cadena complementaria se une a un oligonucleótido que contiene una mutación o una secuencia diferente o un nucleótido adicional, también se incorpora en la nueva cadena sintetizada como resultado de la recombinación. Como resultado de la función de comprobación de lectura, es posible que la nueva secuencia de ADN sirva como plantilla. Así pues, el ADN transferido se incorpora en el genoma . Unidas a estos fragmentos de ADN blanco, hay regiones de ADN que pueden interactuar con o controlar la expresión de un polipéptido ßlO, e.g. secuencias de flanqueo. Por ejemplo, se inserta un elemento promotor/intensificador, un supresor o"un elemento exógeno modulador de la transcripción en el genoma de la célula huésped pretendida, en proximidad y orientación suficientes para influenciar la transcripción del ADN que codifica para el polipéptido ßlO deseado. El elemento de control controla una porción del ADN presente en el genoma de la célula huésped. Asi pues, la expresión del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 deseado se puede - lograr no mediante la transfección de ADN que codifica para el gen ßlO mismo, sino que por el uso de ADN de blanco (que contiene regiones de homología con el gen endógeno de interés) acoplado con segmentos reguladores de ADN que proporciona la secuencia del gen endógeno con señales reconocibles para la transcripción del gen ßlO. En un método de ejemplo, la expresión de un gen blanco deseado en una célula (i.e., un gen celular endógeno deseado) es alterada mediante una recombinación homologa en el genoma celular, en un sitio preseleccionado, a través de la introducción de ADN que incluye cuando menos una secuencia reguladora, un exón y un sitio donador de empalmamiento. Estos componentes se introducen en el ADN cromosómico (genómico) de tal manera que esto, en efecto, da como resultado la producción de una nueva unidad de transcripción (en la cual la secuencia reguladora, el exón y el sitio donador de empalmamiento presentes en la construcción de ADN, están ligados operablemente al gen endógeno) . Como resultado de la introducción de estos componentes en "el ADN cromosómico, se altera la expresión del gen endógeno deseado. La expresión génica alterada, tal como se describe en la presente, abarca la activación (o causa que se exprese) de un gen que normalmente es silente (no expresado) en la célula tal como se obtiene, así como incrementar la expresión de un gen que no es expresado a nivele fisiológicamente significativos en la célula tal como se obtiene. La modalidad además incluye cambiar el patrón de regulación o inducción de tal modo que sea diferente del patrón de regulación o inducción que ocurre en la célula tal como se obtiene y reducir (incluyendo eliminar) la expresión de un gen que es expresado en la célula tal como se obtiene. Un método por el cual se puede usar la recombinación homologa para incrementar o causar la producción del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 por parte del gen ßlO endógeno de una célula, incluye primero utilizar la recombinación homologa para colocar una secuencia de recombinación de un sistema de recombinación especifico de sitie (e.g., Cre/loxP, FLP/FRT) (Sauer, Current Opinión In Bíoteclmology, 5:521-527, 1994; Sauer, methods In Enzymol ogy, 225:890-900, 1993) cadena arriba (es decir, hacia 5') de la región codificadora genómica endógena del polipéptido ßlO. Un plásmido que contenía un sitio de recombinación homólogo al sitio que fue colocado justo cadena arriba de la región codificadora del polipéptido ßlO genómica, se introduce en la línea celular modificada junto con la enzima recombinasa apropiada. Esta recombinasa causa que el plásmido se integre, a través del sitio de recombinación del mismo, al sitio de recombinación localizado justo cadena arriba de la región codificadora genómica del polipéptldo ßlO en la linea celular (Baubonis y Sauer, Nucl eic Acids Res . , 21:2025-2029, 1993; O'Gorman et al . , Science, 251:1351-1355, 1991) . Cualquier secuencia de flanqueo que se sepa que incrementa la transcripción (e.g., intensificador/promotor, intrón, intensificador de traducción) , si se coloca apropiadamente en este plásmido, se integraría de tal manera que se crearía una nueva unidad de transcripción o una modificada, dando como resultado la producción de novo o una producción incrementada del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 por parte del gen endógeno ßlO de la célula. Otro método para utilizar la línea celular en el cual la secuencia de recombinación específica de sitio ha sido colocada justo cadena arriba de la región codificadora genómica endógena del polipéptido ßlO, es utilizar la recombinación homologa para introducir un segundo sitio de recombinación en algún otro lado del genoma de la línea celular. Después se introduce la enzima recombinasa apropiada en la linea celular que tiene dos sitios de recombinación, causando un evento de recombinación (deleción, inversión, translocación) (Sauer, Current Opinión In Biotechnology, supra, 1994; Sauer, Methods In Enzymology, supra, 1993) que crearía una nueva unidad de transcripción o una modificada, dando como resultado la producción de novo o un incremento en la producción del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 por parte del gen ßlO endógeno de la célula. Un enfoque adicional para incrementar o causar la expresión del polipéptido ßlO por el gen ßlO endógeno de una célula, incluye incrementar o causar la expresión de un gen o genes (e.g., factores de transcripción) y/o disminuir la expresión de un gen o genes (e.g., represores de transcripción) de tal manera que se obtenga como resultado la producción de novo o un incremento de la producción del polipéptido ßlO por parte del gen ßlO endógeno de la célula. Este método incluye la introducción de un polipéptido de origen no natural (e.g., un polipéptido que comprende un dominio de unión al ADN especifico de sitio, fusionado con un dominio de factor transcripcional) en la célula, de tal manera que se obtenga como resultado la producción de novo o un incremento en la producción del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 por parte del gen ßlO endógeno de la célula. La presente invención además se refiere a construcciones de ADN útiles en el método de alterar la expresión de un gen blanco. En ciertas modalidades, las construcciones de ADN de ejemplo comprenden: (a) una o más secuencias de blanco; (b) una secuencia reguladora; (c) un exón; y (d) un sitio donador __de empalmamiento no apareado. La secuencia de blanco en la construcción de ADN dirige la integración de los elementos de los incisos (a) - (d) en el gen blanco de una célula, de tal manera que los elementos de los incisos (b) - (d) queden operablemente ligados a secuencias del gen blanco endógeno. En otra modalidad, las construcciones de ADN comprenden: (a) una o más secuencias de blanco, (b) una secuencia reguladora, (c) un exón, (d) un sitio donador de empalmamiento, (e) un intrón y (f) un sitio receptor de empalmamiento, en donde la secuencia de blanco dirige la integración de los elementos de los incisos (a)-(f) de tal modo que los elementos de los incisos (b)-(f) queden operablemente ligados al gen endógeno. La secuencia de blanco es homologa al sito preseleccionado en el ADN cromosómico celular con él cual va a ocurrir la recombinación homologa. En la construcción, el exón generalmente está hacia 3' de la secuencia reguladora y el sitio donador de empalmamiento está hacia _3 ' del exón. Si la secuencia de un gen particular se conoce, tal como la secuencia de ácido nucleico del gen ßlO que se - presenta aqui, un fragmento de ADN que es complementario a una región seleccionada del gen se_ .puede sintetizar u obtener de alguna otra manera, por ejemplo por el tratamiento de restricción apropiado del ADN nativo en sitios de reconocimiento específicos unidos a la región de interés. Este fragmento sirve como secuencia o secuencias blanco en la inserción en una célula y se hibridizará con su región homologa dentro del genoma. Si esta hibridación ocurre durante la replicación del ADN, este fragmento de ADN y cualquier secuencia adicional unida al mismo, actuará como un fragmento de Okazaki y será incorporada a la cadena hija de ADN sintetizada. La presente invención, por lo tanto, incluye nucleótidos que codifican para un polipéptido ßlO cuyos nucleótidos se pueden utilizar como secuencias blanco. La terapia celular con polipéptido ßlO ó heterodímero a.2/ßl0, e.g. el implante de células productoras de polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0, también esta contemplada por la presente. Esta modalidad incluye implantar células capaces de sintetizar y secretar una forma biológicamente activa del polipéptido ßlO ó heterodimero 2/ßl0. Tales células productoras del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 pueden ser células que son productoras naturales de polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0, o pueden ser células recombinantes cuya capacidad de producir polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 ha sido aumentada mediante una transformación con un gen que codifica para el polipéptido ßlO deseado o con un gen que aumenta la expresión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0. Tal modificación se puede lograr por medio de un vector adecuado para distribuir el gen, así como promoviendo su expresión y secreción. Con el fin de minimizar una reacción inmunológica potencial en pacientes a los que se les administra un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, como podría ocurrir con la administración de un polipéptido de una especie extraña, se prefiere que las células naturales productoras de polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 sean de origen humano y produzcan el polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 humanos. De manera similar, se prefiere que las células recombinantes productoras de polipéptído ßlO ó heterodímero a2/ßl0 sean transformadas con un vector de expresión que contiene un gen que codifica para un polipéptido ßlO humano . Las células implantadas pueden estar encapsuladas para evitar la infiltración del tejido que las rodea. Se pueden implantar células animales humanas o no humanas en pacientes en envolturas poliméricas semipermeables biocompatibles o membranas que permitan la liberación del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0, pero que prevengan la destrucción de las células por el sistema inmunitario del paciente o por otros factores dañinos del tejido que las rodea. Alternativamente, las células del propio paciente, transformadas para producir polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 ex vi vo, se pueden implantar directamente en el paciente sin tal encapsulamiento. Las técnicas para el encapsulamiento de células vivas son conocidas en este campo y la preparación de células encapsuladas y su implante en pacientes se puede llevar a cabo de manera rutinaria. Por ejemplo, Baetge et al . (WO95/05452; PCT/US94/09299) describe cápsulas membranales que contienen células manipuladas por ingeniería genética para distribuir -de manera efectiva moléculas biológicamente activas. Las cápsulas son biocompatibles y fácilmente recuperables. Las cápsulas encapsulan células transfectadas con moléculas de ADN recombinantes que comprenden secuencias de- ADN que codifican para moléculas biológicamente activas operablemente ligadas a promotores que no son sujetos a desregulación in vivo al implantarlos en un huésped mamífero. Los aparatos proporcionan la distribución de las moléculas a partir de células vivas hacia sitios específicos dentro de un receptor. Además, véanse las Patentes Norteamericanas Nos. US 4,892,538; 5,011,472; y 5,106,627. Un sistema para encapsular células vivas se describe en la Solicitud Internacional de Patente PCT/US91/00157 de Aebischer et al . Véase también la Solicitud Internacional de Patente PCT/US91/00155 de Aebischer et al . , Winn eta al, Exper. Neurol . , 113:322-329 (1991), Aebischer et al . , Exper. Neurol . , 111:269-275 (1991); y Tresco et al . , ASAIO, 38:17-23 (1992). La terapia de genes in vivo e in vi tro para la distribución de polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0 también está considerada. Un ejemplo de una técnica de terapia de genes es utilizar el gen ßlO (ya sea ADN genómico, ADNc y/o ADN sintético) que codifica para un polipéptido ßlO el cual puede estar operablemente ligado a un promotor constitutivo o inducible, para formar una "construcción de ADN de terapia génica". El promotor puede ser homólogo o heterólogo al gen endógeno, siempre y cuando sea activo en el tipo de célula o tejido en el cual se insertará la construcción. Otros componentes de la construcción de ADN para terapia de genes o terapia génica pueden incluir opcionalmente moléculas de ADN diseñadas para integración específica de sitio (e.g., secuencias endógenas útiles para recombinación homologa) , promotores específicos de tejido, intensificadores o silenciados, moléculas de ADN capaces de proporcionar una ventaja selectiva sobre la célula progenitora, moléculas de ADN útiles como marcas para identificar células transformadas, sistemas de selección negativa, agentes de unión específicos de célula (como por ejemplo para hacer blanco en células) , factores de internalización específicos de célula y factores de transcripción para intensificar la expresión por un vector, así como factores para hacer posible la manufactura de vectores. Una construcción de ADN para terapia génica, entonces, se puede introducir en células (ya sea ex vivo o in vivo) utilizando vectores virales o no virales. Un mecanismo para introducir la construcción de ADN para terapia de genes es por medio de vectores virales, tal como se describe en la presente. Ciertos vectores, tales como los vectores retrovirales, distribuirán la construcción de ADN hacia el ADN cromosómico de las células y el gen se puede integrar al ADN cromosómico. Otros vectores funcionarán como episomas y la construcción de ADN para terapia génica permanecerá en el citoplasma. En todavía otra modalidad, se pueden incluir elementos reguladores para la expresión controlada del gen ßlO en la célula blanco. Tales elementos son encendidos en - 16S respuesta a un efector apropiado. De esta manera, un polipéptido terapéutico puede ser expresado cuando se desee. Un elemento de control convencional incluye el uso de dimerizadores de molécula pequeña o rapalogs (tal como se describe en las Solicitudes Internacionales de Patente W09641865 (PCT/US96/099486) ; W09731898 (PCT/US97/03137) y W09731899 (PCT/US95J03157 ) utilizados para dimerizar proteínas quiméricas que contienen un dominio de unión a moléculas pequeñas y un dominio capaz de iniciar un proceso biológico, tal como una proteína de unión al ADN o una proteína de activación transcripcional. La dimerización de las proteinas se puede usar para iniciar la transcripción del transgén. Una tecnología de regulación alternativa utiliza un método para almacenar proteínas expresadas del gen de interés dentro de la célula, en forma de un agregado o grupo. El gen de interés es expresado como una proteína de fusión que incluye un dominio de agregación condicional que da como resultado la retención de la proteína agregada en el retículo endoplásmico. Las proteinas almacenas son estables e inactivas dentro de la célula. Sin embargo, las proteínas se pueden liberar administrando un fármaco (e.g., un ligando de molécula pequeña) que remueva el dominio de agregación condicional y de esta manera rompa específicamente los agregados para que las proteinas puedan ser secretadas de la célula. Véase Science 287:816-817 y 826-830 (2000). Otros mecanismos de control . adecuados o interruptores génicos incluyen, pero no se limitan a los siguientes sistemas. La mifeprisonta (RU486) se utiliza como antagonista de progesterona. La unión de un dominio de unión al ligando receptor de progesterona con el antagonista de progesterona, activa la transcripción formando un dímero de dos factores de transcripción el cual, posteriormente, pasa al núcleo para unirse al ADN. El dominio de unión al ligando es modificado para eliminar la capacidad del receptor de unirse al ligando natural. El sistema receptor de hormonas esteroides modificado se describe adicionalmente en la Patente Norteamericana No. US 5,364,791; y en las Publicaciones Internacionales de Patente WO9640911 y WO9710337. Todavía otro sistema de control utiliza la ecdisona (una hormona esteroide de la mosca de la fruta) , la cual se une y activa un receptor de ecdisona (receptor citoplasmático) . Después, el receptor se transloca hacia el núcleo para unirse a un elemento de respuesta específico de ADN (promotor del gen que responde a la ecdisona) . El receptor de ecdisona incluye un dominio de transactivación/dominio de unión al ADN/dominio de unión al ligando, para iniciar la transcripción. El sistema ecdisona se describe adicionalmente .en U.S. 5,514,578; W09738117; W09637609; y WO9303162. Otro elemento de control utiliza un transactivador controlable positivo a la tetraciclina. Este sistema incluye un dominio de unión al ADN de una proteina represora tet mutada (en la tet mutada el aminoácido R-4 cambia, lo cual da como resultado una proteina transactivadora reversa regulada por tetraciclina; es decir, se une a un operador tet en presencia de tetraciclina) ligado a un polipéptido que activa la transcripción. Tales sistemas se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. US 5,464,758; 5,650,298 y 5, 654, 168. Sistemas de control de expresión adicionales y construcciones de ácido nucleico adicionales se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,741,679 y 5,834,186 de Innovir Laboratories Inc. La terapia génica in vivo se puede llevar a cabo introduciendo el gen que codifica para un polipéptido ßlO en células, a través de una inyección local de una molécula de ácido nucleico ßlO o por otros vectores de distribución virales o no virales apropiados. Hefti, Neurobiology, 25:1418-1435 (1994). Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que codifica para un polipéptido ßlO de la presente invención, puede estar contenida en un vector de virus adenoasociado (VAA) para ser distribuida a las células blanco (e.g., Johnson, Publicación Internacional No. WO95/34670; Solicitud Internacional No. PCT/US95/07178) . . El genoma del VAA recombinante típicamente contiene repeticiones terminales invertidas de VAA que flanquean una secuencia de ADN que codifica para un polipéptido ßlO operablemente Hgadas a un promotor funcional y secuencias de poliadenilación. Algunos vectores virales adecuados alternativos incluyen, pero no se limitan a vectores de retrovirus, adenovirus, virus del herpes simple, lentivirus, virus de la hepatitis, parvovirus, papovavivurs, poxvirus, alfavirus, coronavirus, rabdovirus, paramixovirus y virus del papiloma. La Patente Norteamericana No. US 5,672,344 describe un sistema de transferencia génica in vivo mediado por virus que involucra un vector HSV-1 neurotrófico recombinante. La Patente Norteamericana No. US 5,399,346 proporciona ejemplos de u? proceso para proporcionarle a un paciente una proteína terapéutica mediante la administración de células humanas que han sido tratadas in vi tro para insertarles un -segmento de ADN que codifica para una proteína terapéutica. Métodos y materiales adicionales para la práctica de las técnicas de terapia génica, se describen en la Patente Norteamericana No. US 5,631,236 que incluye vectores adenovirales; la Patente Norteamericana No. US 5,672,510 que incluye vectores retrovirales y la Patente Norteamericana No. US 5, 635, 399 que incluye vectores retrovirales que expresan citscinas. Los métodos de distribución no virales incluyen, pero no se limitan a, transferencia mediada por liposomas, distribución o administración de ADN desnudo (inyección directa) , transferencia mediada por receptores (complejo ligando-ADN) , electroporación, precipitación con fosfato de calcio y bombardeo con microparticulas (e.g., pistola de genes) . Los materiales y métodos de la terapia génica también pueden incluir el uso de promotores inducibles, promotores-intensificadores específicos de tejido, secuencias de ADN diseñadas para una integración específica de sitio, secuencias de ADN capaces de proporcionar una ventaja selectiva sobre la célula progenitora, marcas para identificar células transformadas, sistemas de selección negativa y sistemas de control de expresión (medidas de seguridad) , agentes de unión específicos de célula (para hacer blanco en células) , factores de internalización específicos de célula y factores de transcripción para intensificar la expresión por un vector, así como métodos para la manufactura de vectores. Tales métodos y materiales adicionales para la práctica de las técnicas de la terapia génica, se describen en la Patente Norteamericana No. US 4,970,154 que incluye las técnicas de electroporación; Solicitud Internacional de Patente WO96/40958 que incluye ligandos nucleares, laPatente Norteamericana US 5,679,559 que describe un sistema que contiene lipoproteina para la distribución de genes; la Patente Norteamericana No. US 5,676,954 que incluye vehículos liposomales; la Patente Norteamericana No. US 5,593,875 que se refiere a métodos para la transfección con fosfato de calcio; y la Patente Norteamericana No. US 4,945,050 en donde partículas biológicamente activas son impulsadas en células a una velocidad tal que las partículas penetran la superficie de las células y se incorporan en el interior de las mismas. _ También se contempla que la terapia con el gen ßlO o la terapia celular pueda incluir adicionalmente la administración de uno o más polipéptidos adicionales en la misma célula o en células diferentes. Tales células se pueden introducir por separado en el paciente o las células pueden estar contenidas en un solo aparato implantable, tal como la membrana encapsulante anteriormente descrita o las células se pueden modificar por separado mediante vectores virales. Un mecanismo para incrementar la expresión del polipéptido ßlO endógeno en una célula a través de la terapia de genes, es insertar uno o más elementos intensificadores en el promotor del polipéptido ßlO, en donde el elemento o elementos intensificadores pueden servir para incrementar la actividad transcripcional del gen ßlO. El elemento o elementos intensificadores utilizados se seleccionarán con base en el tejido en el cual se desea activar al gen o genes; se seleccionarán elementos intensificadores que se sabe que confieren activación del promotor en ese tejido. Por ejemplo, si un gen que codifica para un polipéptido ßlO va a ser "encendido" en células T, se puede usar el elemento intensificador promotor Ick. Aquí, la porción funcional del elemento transcripcional por ser agregado se pueden insertar en un fragmento de ADN que contiene el promotor del polipéptido ßlO (y opcionalmente insertado en un vector y/o en secuencias de flanqueo 5' y/o secuencias de flanqueo 3T, etc.) utilizando las técnicas de clonación estándar. Esta construcción conocida como "construcción de recombinación homologa", posteriormente, se puede introducir a las células deseadas ya sea ex vivo, o bien, in vi vo . La terapia génica también se puede usar para disminuir la expresión del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 al modificar la secuencia de nucleótidos del promotor o promotores endógenos. Tal modificación típicamente se lleva a cabo por métodos de recombinación homologa. Por ejemplo, una molécula de ADN que contiene la totalidad o una porción del promotor del gen o genes ßlO seleccionados para la inactivación, se puede manipular por ingeniería genética para remover y/o reemplazar porciones del promotor que regulan la transcripción. Por ejemplo, la caja TATA y/o el sitio de unión de un activador transcripcional del promotor, se pueden eliminar utilizando las técnicas estándar de biología molecular; tal deleción puede inhibir la actividad del promotor, reprimiendo de esta manera la transcripción del correspondiente gen ßlO. La deleción de la caja TATA del sitio de unión del activador de transcripción en el promotor, se puede llevar a cabo generando una construcción de ADN que comprende la totalidad o la porción relevante del promotor o promotores del polipéptido ßlO (de la misma especie" o de una especie relacionada con el gen o genes ßlO por ser regulados) en la cual uno o más de los nucleótidos de la caja TATA y/o del sitio de unión del activador transcripcional son mutados por sustitución, deleción y/o inserción de uno o más nucleótidos. Como resultado, la caja TATA y/o el sitio de unión del activador presentan una actividad disminuida o 6 - se vuelven completamente inactivos. La construcción típicamente contendrá cuando menos aproximadamente 500 bases de ADN que corresponden a las secuencias de ADN 5' y 3' (endógena) nativas adyacentes al segmento promotor que ha sido modificado. La construcción se puede introducir en las células apropiadas (ya sea ex vivo, o bien in vivo) directamente o a través de un vector viral, tal como se describe en la presente. Tipicamente, la integración de la construcción en el ADN genómico de las células será a través de una recombinación homologa, en donde las secuencias de ADN 5' y 3' en la construcción del promotor pueden servir para ayudar a integrar la región promotora modificada mediante una hibridación con el ADN cromosómico endógeno . Otros Usos de los Ácidos Nucleicos j£ Polipéptidos de la Presente Invención Las moléculas de ácido nucleico de la presente invención (incluyendo aquellas que por si mismas no codifican para polipéptidos biológicamente activos) se pueden usar para mapear la ubicación del gen ßlO y genes relacionados en cromosomas. El mapeo se puede realizar por técnicas conocidas en este campo, tales como amplificación por Reacción en Cadena Catalizada por Polimerasa (RCP) e hibridación in si tu. Las moléculas de ácido nucleico ßlO (incluyendo aquellas que por si mismas no codifican para polipéptidos biológicamente activos) , pueden ser útiles como sondas de hibridación en ensayos de diagnóstico para probar, cuantitativa o cualitativamente, la presencia de un ADN ßlO ó el correspondiente ARN en muestras de tejidos o líquidos corporales de mamífero. Los polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 se pueden usar (de manera simultánea o secuencial) en combinación con una o más citocinas, factores de crecimiento, antibióticos, antiinflamatorios y/o agentes quimioterapéuticos, conforme sea apropiado, para la indicación que está siendo tratada. También se pueden emplear otros métodos en donde sea deseable inhibir la actividad de uno o más polipéptidos ßlO ó heterodímeros a2/ßl0 de la presente invención. Tal inhibición se puede efectuar por moléculas de ácido nucleico que son complementarias y que se hibridizan a secuencias de control de -expresión (formación de triple hélice) o al ARNm ßlO. Por ejemplo, se pueden introducir a una célula moléculas de ADN o ARN antisentido que tienen una secuencia que es complementaria a cuando menos una porción del gen o genes ßlO seleccionados. Se pueden diseñar sondas antisentido por técnicas disponibles, empleando la secuencia del polipéptido ßlO descrita en la presente. Tipicamente, cada molécula antisentido será complementaria al sitio de inicio (extremo 5') de cada gen ßlO seleccionado. Cuando la molécula antisentido se hibridiza al correspondiente ARNm ßlO, se evita o se reduce la traducción de este ARNm. Los inhibidores antisentido proporcionan información referente a la disminución o ausencia de un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en una célula u organismo. Alternativamente, la terapia génica se puede emplear para crear un inhibidor negativo dominante de uno o más polipéptidos ßlO ó heterodimeros a2/ßl0. En este caso, el ADN que codifica para una mutante del polipéptido ßlO seleccionado, se puede preparar e introducir en las células de un paciente utilizando métodos virales o no virales, tal como se describe en la presente. Cada una de estas mutantes típicamente está diseñada para competir con el polipéptído o heterodímero endógeno en su función biológica. Además, un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 de la presente invención, ya sea biológicamente activo o no, se puede usar como inmunógeno; es decir, el polipéptido contiene cuando menos un epítopo contra el cual se pueden inducir anticuerpos. Los agentes de unión selectiva que se unen a un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 (tal como se describe en la presente) , se pueden utilizar para propósitos de diagnóstico in vivo e in vi tro, incluyendo pero no limitándose al uso en forma marcada para detectar la presencia de un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0 en una muestra de líquido corporal o una muestra de células. Los anticuerpos también se pueden usar para prevenir, tratar o diagnosticar un número de enfermedades y trastornos, incluyendo aquellos mencionados en la presente. Los anticuerpos se pueden unir a un polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 para disminuir o bloquear cuando menos una actividad característica del polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0, o se pueden unir a un polipéptido para incrementar cuando menos una actividad característica del polipéptido ßlO ó heterodimero a2/ßl0 (incluyendo el incremento de la farmacocinética de un polipéptido ßlO ó heterodímero a2/ßl0) . El ADNc que codifica para el polipéptido ßlO humano en E. coll fue depositado en la Colección Norteamericana de Cultivos Tipo (American Type Culture Colection, ATCC) , 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209, el 28 de diciembre de 199, con el número de acceso PTA-1210. Los siguientes ejemplos sólo tienen propósitos de ilustración y no se deben considerar como limitantes de los alcances de la presente invención de ninguna manera. EJEMPLO 1: ADN QUE CODIFICA PARA EL ßlO HUMANO La secuencia de aminoácidos de la subunidad ß de la CG (gonadotropina coriónica) fue comparada con una base de datos doméstica derivada de las secuencias del genoma humano públicas presentes en GenBank. Se identificó una proteína virtual que contenía una región de 45 aminoácidos con una homología significativa a la mitad carboxilo de la CG-ß. La región corta (135 pares de bases) de la secuencia genómica humana que codificaba el segmento de 45 aminoácidos, provenia de una secuencia de ADN genómica humana de más de 160 kilopares de bases de GenBank (número de acceso # AL049871) . Al analizar un segmento de 8 kilopares de bases de la secuencia genómica justo hacia 5T de la secuencia de 135 pares de bases, se identificó una región que tenía una homología significativa (y contenía un cambio de marco) a la mitad N-terminal de la CG-ß. La secuencia de nucleótidos de este nuevo gen fue compilada a partir de las secuencias genómicas. La secuencia de aminoácidos de este gen compilado tuvo una homología significativa con los cuatro péptidos conocidos de subunidad ß de hormonas glucoproteicas humanas y tuvo un péptido de señal predicho N-terminal que concordaba con este nuevo gen humano como un nuevo miembro similar a ß de la familia de las hormonas glucoproteicas. Había un intrón de 4.5 kb localizado entre la mitad N-terminal y la mitad C-terminal putativas de los exones codificantes. La amplificación por RCP del intrón (véase la sección Expresión Tisular de Beta-10, más adelante) de ADNc de varios tejidos, reveló que el ßlO era expresado en numerosos tejidos, incluyendo la pituitaria. La región codificadora de longitud completa (de ATG al codón de paro TGA) y parte de la 3 'UTR (región no traducida del ßlO, fue clonada en forma de un fragmento por RCP utilizando la siguiente mezcla de reacción y las siguientes condiciones de RCP: Plantilla: diez microlitros de ADNc de Putuitaria Humana "Marathón Ready" (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; No. de catálogo 7424-1) . Cebador de avance: 5 ' -ATGAAGCTGGCATTCCTCTTCCTT-3' (SEQ ID NO: 4) . Cebador de reversa: 5' -GCATGTGCTGCTCACACAGGT-3 ' (SEQ ID NO: 5) . Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Concentración final de dNTPs : 200 micromolar. Cinco unidades de polimerasa Pfu (Stratagene, La Jolla, CA) . Diez microlitros de solución reguladora de - reacción lOx Pfu (Stratagene, la Jolla, CA) . Diez microlitros de GC fundido (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; paquete Advantage GC cDNA PCR; no. de catálogo K1907-1) . Volumen final de la mezcla de reacción: 100 microlitros . Condiciones de los ciclos: 94 °C por sesenta segundos seguidos por 45 ciclos de 94°C (diez segundos), 60°C (veinte segundos) , 72°C (noventa segundos) y después al final del ciclo 45, una incubación a 72 °C durante siete minutos, después 10 ciclos adicionales de 94 °C (diez segundos), 60°C (veinte segundos), 72°C (noventa segundos) y al final de los 10 ciclos adicionales, un periodo de incubación a 72 °C durante siete minutos. La reacción de RCP se realizó en un gel de agarosa y se observó una sola banda. Esta banda de ADN fue clonada en PCR-Script AMP (Stratagene) . La secuencia del inserto en una de las clonas resultantes es la de la SEQ ID NO: 2, la cual contiene la región codificadora completa (de ATG al codóñ de paro TGA) , y parte de la 3 'UTR (región no traducida) del ßlO. La siguiente es una lista y descripción de secuencias ßlO provenientes de bases de datos disponibles al público: GenBank, # de acceso A1049871: secuencia genómica humana de 170 kilopares de bases. No se identificaron exones, genes u homologías en este registro y la región codificadora de longitud completa del ßlO es interrumpida por una secuencia intrónica. GenBank # de acceso AL118555. secuencia genómica humana de 126 kilopares de bases. No se identificaron exones, genes ni homologías en este registro y la secuencia de la región codificadora completa del ßlO es interrumpida por una secuencia intrónica. EJEMPLO 2: EXPRESIÓN TISULAR DE ßlO Empleando un fragmento de RCP como sonda, no fue posible obtener una señal de hibridación en varias muestras de inmunoelectrotransferencia tipo Northern "Human Múltiple Tissue Northern Blots" (Clontech Inc., Palo Alto, CA) . El segmento RCP del intrón se utilizó para determinar el patrón de expresión del beta-10 tal como se describe a continuación. Para los paneles "Human Sure-RACE" (OriGene Technologies, Inc., Rockville, MD; catálogo no. HRAA-101) las muestras de ADNc representaban tejido de cerebro, corazón, riñon, bazo, hígado, colon, pulmón, intestino delgado, músculo, estómago, testículos, placenta, pituitaria, glándula tiroides, glándulas suprarrenales, páncreas, ovario, útero, próstata, leucocitos de sangre - - periférica, cerebro fetal, hígado fetal, grasa y glándula mamaria. Cada muestra de ADNc se encontraba en un tubo por separado en forma de una pella deshidratada de ADN. La mezcla de reacción estaba compuesta de la siguiente manera : Cebador de avance: 5' -CTGCAGGTGCCTTCGGATC-3 ' (SEQ TD NO: 6) ; cebador de reversa: 5 ' -GCATGTGCTGCTCACACAGGT-3 ' (SEQ ID NO: 5) ; cantidad de cada cebador: 0.5 picomoles; concentración final de dNTPs : 200 micromolar; 21.5 microlitros de GC fundido (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; paquete Advantage GC cDNA PCR; no. de catálogo K1907-1) ; 2.5 unidades de Taq (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN; PCR Core Kit; no. de catálogo 1578 553); 2.5 microlitros de solución reguladora de reacción de RCP lOx (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN; PCR Core Kit; no. de catálogo 1578 553) . Para cada muestra de ADNc, la mezcla de reacción anterior se preparó hasta un volumen de 25 microlitros y 20 microlitros de esta mezcla fueron agregados a la pella de ADN deshidratado. Las condiciones de la RCP fueron las siguientes: 94 °C por sesenta segundos, seguidos por 5 ciclos de 94°C (diez segundos) y 72°C (cuarenta segundos), seguidos por 5 ciclos de 94°C (diez segundos) y 70°C (cuarenta segundos), seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos) y 68°C (cuarenta segundos) y despuee seguidos por 68°C durante siete minutos. Los productos de la RCP fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa. El tamaño correcto del producto de RCP de 293 pares de bases, lo cual indicaba la expresión de ßlO, se encontró en colon, intestino delgado, testículos, pituitaria e hígado fetal. Para la base de datos "Human Rapid-Scan Píate" (OriGene Technologies, Inc., Rockville MD; no. de catálogo HSCA-101) las plantillas de ADNc representaban tejido de cerebro, corazón, riñon, bazo, hígado, colon, pulmón, intestino delgado, músculo, estómago, testículo, placenta, glándula salival, glándula tiroides, glándula suprarrenal, páncreas, ovario, útero, próstata, piel, leucocitos de sangre periférica, médula ósea, cerebro fetal e higado fetal. Cada muestra de ADNc estaba en un tubo por separado en forma de una pella de ADN deshidratada. La mezcla de reacción que " se utilizó fue la siguiente: Cebador de avance: 5 ' -CT-GCAGGTGCCTTCGGATC-3 ' (SEQ ID NO: 6) . Cebador de reversa: 5 ' -GCATGTGCTGCTCACACAGGT-3 ' (SEQ ID NO: 5) . ÍD - Cantidad de cada cebador: 0.5 picomoles; Concentración final de dNTPs : 200 micromolar. 2.5 microlitros de GC fundido (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; paquete Advantage GC cDNA PCR; no. de catálogo K1907-1) . 2.5 unidades de Taq (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN; PCR Core Kit; no. de catálogo 1578 553); 2.5 microlitros de solución reguladora de reacción RCP lOx (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN; PCR Core Kit; no. de catálogo 1578 553) . Para cada muestra de ADNc, la mezcla de reacción anterior se preparó a un volumen de 25 microlitros y después 20 microlitros de esta mezcla fueron agregados a la pella de ADNc deshidratado. Las condiciones de la RCP fueron las siguientes: 94 °C por sesenta segundos seguidos por 5 ciclos de 94°C (diez segundos) , 72°C (cuarenta segundos) y después seguidos por 5 ciclos de 94 °C (diez segundos), 70°C (cuarenta segundos) y después seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos) , 68°C (cuarenta segundos) y después seguidos por 68 °C durante siete minutos . Los productos de la RCP fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa. El producto de RCP de tamaño correcto de 293 pares de bases, que indicaba la expresión de ßlO, se encontró en cerebro, bazo, hígado, - colon, estómago, placenta, glándula tiroides, glándula suprarrenal, páncreas, piel y leucocitos de sangre periférica. Al combinar los datos de expresión de los paneles "Human Sure-RACE Panels" y "Human Rapid-Scan Píate", se encontró que el ßlO es expresado en cerebro, higado, higado fetal, estómago, pituitaria, colon, intestino delgado, glándula tiroides, glándula suprarrenal, páncreas, piel, leucocitos de sangre periférica, bazo, testículo y placenta. EJEMPLO 3: EXPRESIÓN TISULAR DE a2 Se llevó a cabo un análisis de inmunoelectrotransferencia tipo Northern para determinar el patrón de expresión del a2. La sonda para las inmunoeiectrotransferencias fue un producto de RCP de 390 pares de bases (que correspondía a los nucleótidos del 56 al 445 de la SEQ ID NO: 1 de la Solicitud Internacional de Patente W099/41377) . Este producto de RCP fue generado a través de un intermediario de RCP de 466 pares de bases, de la siguiente manera: El producto de la RCP primera se usó para clonar un fragmento de 466 pares de bases del alfa-2 proveniente de ADNc de testículo humano, empleando la siguiente mezcla de reacción y las siguientes condiciones de RCP: - Plantilla: diez microlitros de ADNc de testículo humano "Marathón Ready" (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; no. de catálogo 7414-1); Cebador de avance: 5 ' -GAGACATCTCCCCACTGTGTTT-3' (SEQ ID NO: 7) ; Cebador de reversa: 5' -GTTTCCCCCAACAGAATGTCAA-3 ' (SEQ ID NO: 8 ) ; Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar; Concentración final de dNTPs : 200 micromolar; Cinco unidades de polimerasa Pfu; Volumen de la mezcla de reacción final: 100 microlitros ; Condiciones de los ciclos: 94 °C durante sesenta segundos, seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos) , 60°C (treinta segundos) , 72°C (sesenta segundos) y después al final del ciclo número 35, un periodo de incubación a 72°C durante cinco minutos. El producto de la reacción de RCP se analizó en un gel de agarosa y se observaron cuatro bandas distintas. Las múltiples bandas surgieron de la amplificación de RCP de ADN genómico humano contaminante presente en el ADNc de testículo humano "Marathón Ready" . El producto de RCP de 466 pares de bases fue aislado del gel de agarosa y clonado. Se utilizó una clona plasmídica que contenía la - secuencia de 466 pares de bases como plantilla para generar el fragmento de RCP de 390 pares de bases, empleando la siguiente mezcla de reacción y las siguientes condiciones de RCP: Plantilla: diez picogramos de la clona plasmidica que contenía la secuencia de 466 pares de bases anteriormente mencionada; Cebador de avance: 5 ' -ATGCCTATGGCGTCCCCTCAAAC-3 ' (SEQ ID NO: 9) ; Cebador de reversa: 5'- CTAGT GCGAGAGAGGCGACACATGTCA-3, (SEQ ID NO: 10); Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar; concentración final de dNTPs : 200 micromolar; - Diez unidades de polimerasa Taq; Volumen final de la mezcla de reacción: 100 microlitros; Condiciones de los ciclos: 94 °C durante sesenta segundos, seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos), 68°C (sesenta segundos) , y después al final del ciclo número 35, un periodo de incubación a 68 °C durante seis minutos . El producto de RCP de 390 pares de bases, posteriormente fue purificado por electroforesis en gel de agarosa. Este fragmento de RCP se marcó con J~P y se hibridizó con varias inmunoelectrotransferencias tipo Northern "Human Múltiple Tissue" de Clontech (los tejidos/células representados fueron: páncreas, médula suprarrenal, tiroides, corteza suprarrenal, testículo, timo, intestino delgado, estómago, bazo, próstata, ovario, colon, leucocitos de sangre periférica, cerebro, corazón, músculo esquelético, riñon, higado, placenta y pulmón) y con una inmunoelectrotransferencia tipo Northern preparada con ARNm de pituitaria, empleando condiciones altamente estrictas, de la siguiente manera: La hibridación se realizó durante una hora a 68 °C empleando la "Solución de Hibridación ExpressHyb" de Clontech. Las manchas obtenidas se lavaron con 2x SSC, SDS al 0.1° a temperatura ambiente dos veces, durante 20 minutos cada vez. Después estas manchas fueron lavadas con O.lx SSC, SDS al 0.1o a 50°C durante 10 minutos y después se expusieron a una película. Se obtuvo una fuerte señal que representaba una sola banda en el carril de ARNm de páncreas y en el carril de ARNm de pituitaria. Se observó una señal significativamente más débil en el carril de ARNm de placenta. Se realizó una hibridación in si tu para determinar adicionalmente sitios de expresión del gen a2. Un panel de tejido embrionario normal (de E10.5 a E18.5) y - tejido de ratón adulto y tejidos de mono rhesus, se fijaron en paraformaldehído al 4%, se empaparon con parafina y se seccionaron en cortes de 5 micrómetros.

Antes de la hibridación in si tu, los tejidos fueron permeabilizados con HCl 0.2M, seguido por una digestión con proteinasa K y una acetilación con trietanolamina y anhídrido acético. Las secciones se hibridizaron durante una noche a 55°C con una sonda de ARN antisentido marcada con 3jP, complementaria a la secuencia a2 murina o humana (para tejidos de mono rhesus) y con sondas de sentido (como control) . Las sondas de ARN antisentido y sentido marcadas con ""P se obtuvieron mediante una transcripción in vitro de ADN plasmidico que contenía el ADNc a2 murino (clona bacteriana no. 1224990 del proyecto público WashU-HHMI Mouse EST) o el ADNc a2 humano (clona plasmidica que contenía el fragmento de RCP anteriormente descrito, generado a partir de la secuencia de la región codificadora del a2 humano de 390 pares de bases) . Después de la hibridación, los cortes se lavaron con solución reguladora, se trataron con RNasa A para remover la sonda no hibridizada y después se sometieron a un lavado en condiciones altamente estrictas con 0. IX SSC a 55°C. Los cortes se introdujeron en una emulsión Kodak NTB2, se expusieron a 4°C durante dos a tres semanas, se 2 - revelaron y después se contratiñeron. Las secciones se examinaron en un campo oscuro con iluminación estándar para permitir la evaluación simultánea de la morfología tisular y la señal de hibridación. Entonces, se examinaron los siguientes tejidos: Tejidos de ratón: cerebro 1 corte sagital, 2 cortes coronales) ; tracto gastrointestinal (esófago, estómago, duodeno, yeyuno, íleon, colon proximal y distal) ; pituitaria; hígado; pulmón; corazón; bazo; timo; ganglios linfáticos; riñon; glándula suprarrenal; vejiga; páncreas; glándulas salivales; órganos reproductores masculinos y femeninos (ovario, oviducto y útero en los femeninos; testículo, epidídimo, próstata, vesícula seminal y vasos deferentes en el tejido masculino); BAT & WAT (subcutáneo, perirrenal) ; hueso (fémur); piel; mama; y músculo esquelético. Tejidos de monos rhesus: glándula suprarrenal, hígado, vesícula biliar; intestino, páncreas; y glándulas salivales. Las sondas antisentido murinas y humanas produjeron señales positivas detectables en un nivel muy bajo de fondo observado con los controles de las cadenas de sentido. En el ratón embrionario, no se observó ninguna señal en ningún órgano principal desde E8.5 hasta E18.5. En E15.5 y E18.5, hubo presente una señal sobre - - células dispersas adyacentes a algunos de los huesos en desarrollo de la cabeza y los dientes. En el ratón adulto, hubo presente una señal moderada en la corteza suprarrenal. Se detectó una señal de nivel bajo en los lóbulos anterior e intermedio de la glándula pituitaria, así como en el epitelio intestinal al nivel de las criptas. Además, la densidad del grano fue ligeramente superior al fondo en el esperma en desarrollo que habla en los túbulos seminíferos de los testículos y en células granulosas alrededor de folículos en desarrollo en el ovario . En tejidos de monos rhesus, se observó una señal moderada en la corteza suprarrenal, en el epitelio de la vesícula biliar y en el epitelio intestinal, principalmente a nivel de las criptas ._ La combinación de los resultados de expresión de las inmunoelectrotransferencias del a2 y los análisis in si tu de a2, indica que el a2 es expresado en la pituitaria anterior, placenta, páncreas, corteza "suprarrenal, criptas intestinales y mucosa de la vesícula biliar. EJEMPLO 4: ANTICUERPOS CONTRA a2 Se generaron anticuerpos policlonales de conejo contra a2, inmunizando conejos con el péptido CSPRYSVLVASGYRHN (SEQ ID NO: 28) que habla sido conjugado con hemocianina de lapa (# de catálogo 77605 Píerce Inc., Rockford, IL) . El péptido fue sintetizado con una amida C-terminal de manera que el extremo C-terminal en vez de ser COOH, fue CONH_'. La porción RYSVLVASGYRHN de la secuencia peptídica es totalmente conservada entre el a2 humano y el murino. Esta región se seleccionó para que los anticuerpos fueran capaces de unirse al a.2 humano y ai a2 murino. Los anticuerpos fueron purificados por afinidad del suero de conejo en una columna (SulfoLink Kit, # de catálogo 44895, Pierce Inc., Rockford, IL) a la cual se le habla unido ei antigeno peptídico (SEQ ID NO: 28) . El análisis por inmunoelectrotransferencia tipo Western (Western blot) de los medios condicionados cosechados de células 293 que fueron transfectadas con el vector de expresión a2 con marca polyHis de mamífero o un vector de expresión de la subunidad alfa con marca polyHis de mamífero, demostraron que estos anticuerpos policlonales purificados tenían una alta especificidad por el polipéptido a2 y no presentaban reacciones cruzadas con la subunidad alfa. EJEMPLO 5: ADN QUE CODIFICA PARA BETA-10 MURINO se utilizaron varias sondas de ADNc de beta-10 humano para probar una biblioteca genómica murina 129SvJ BAC, arreglada con filtros de alta densidad (# de catálogo FBAC-4431, Genome Systems, St. Louis, MO) . Se compró una clona BAC murina en la placa #218-pozo#P22 (# de catálogo FBAC-4432, Genome Systems, St. Louis, MO) . Un subfragmento Hindlll de 10 kb de esta clona BAC se hibridizó fuertemente a una sonda de ADNc beta-10 humano. Este fragmento Hindlll de 10 kb fue subclonado en el plásmido pBluescriptII-KS (-) y secuenciado en su totalidad. El análisis por computadora de esta secuencia genómica murina de 10 kb, se utilizó para identificar dos exones que codifican para el ortólogo murino del polipéptido beta-10 humano. Se diseñaron cebadores a partir de esta secuencia electrónica para clonar el ADNc de beta-10 murino de la siguiente manera: Plantilla: veinte microlitros de ADNc de testículo murino "Marathón Ready" (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA; no. de catálogo 7455-1); Cebador de avance: 5'-ATTACTAGTTCC-ACC-ATGAAGTT-GGTATACCTTGTCCTT-3' (SEQ ID NO: 14) ; Cebador de reversa: 5'-TTAATAATCGATCGTCAG GGTCTCACACTCAGT_G-3, (SEQ ID NO: 15); Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar.

Paquete de RCP: Sistema PCR "Expand" de alta fidelidad (# de catálogo 1732641, Boehringer Mannheim Corporation, Indianapolis, IN) . Volumen final de la mezcla de reacción: 50 microlitros; Condiciones de los ciclos: 94 °C durante sesenta segundos, seguidos por 55 ciclos de 94°C (diez segundos), 65°C (veinte segundos), 72°C (cuarenta segundos) y después al final del ciclo número 55, un periodo de incubación a 72 °C durante siete minutos. El producto de RCP de 0.4 kb, posteriormente, fue purificado por electroforesis en gel de agarosa y clonado en el plásmido pCR2.1 (Invitrogen Inc., Carlsbad, CA) . Se identificó una clona que contenía ADNc de la región codificadora completa del beta-10 muríno (SEQ ID NO: 12) mediante una secuenciacidn. EJEMPLO 6: PRODUCCIÓN Y ANÁLISIS DE RATONES TRANSGÉNICOS QUE SOBREEXPRESAN EL 0t2 SOLO, EL ßlO SOLO Y QUE COEXPRESAN EL a2 Y ßlO .- Se generaron ratones transgénicos que sobreexpresaban el polipéptido a2 solo, el ßlO solo y que coexpresaban los polipéptidos a2 y ßlO, a partir del promotor E apoliproteina humana, esencialmente de la manera previamente descrita (Simonet et al . , 1997, Cell - vol. 89 p 309-319) . Este promotor apoE humano dirige la expresión génica de alto nivel, específica en hígado, en ratones transgénicos y se ha utilizado previamente para generar ratones transgénicos que presenten altos niveles de proteinas secretadas codificadas por transgenes en su circulación sanguínea. Para todos los análisis fenotipicos que se describen más adelante, los controles no transgénicos fueron ratones que se produjeron durante la misma serie de microinyecciones que los ratones transgénicos en cuestión. Se utilizaron transgenes genómicos (i.e., que contenían exones e intrones a2 y ßlO) para generar transgénicos que maximizaran la expresión. Adicionalmente, en todos los casos se manipuló por ingeniería genética una sitio Kozak (CCACC) justo hacia 5' del sitio de inicio ATG. El vector de expresión promotor apoE humano contiene el HCR (elemento intensificador específico de hígado) seguido por el promotor apoE y un primer intrón (en apoE 5' UTR) y después seguido por la señal poliA/terminador del SV40. Hay sitios Spel y Sfil únicos (compatibles con Pvul) para la clonación direccional de genes entre el primer intrón del promotor apoE y la región de señal poliA/terminador del SV40 del vector. Se utilizó el siguiente procedimiento para - generar el "transgén a2 genómico murino vector de expresión apoE humano": Una mezcla del paquete de selección genómica BAC Mouse ES (129SVJ) (# de catálogo BDTW-7460, Genome Systems, St. Louis, MO) por RCP utilizando cebadores específicos de a2 murino. La clona BAC murina en la placa #44-pozo#H19 se obtuvo en el comercio (# de catálogo FBAC- 4432, Genome Systems, St. Louis, MMO) . Un subfragmento Xbal de 12 kb de esta clona BAC se hibridizó fuertemente con una sonda de ADNc de a2 murino. Este fragmento Xbal de 12 kb fue subclonado en el pBluescriptII-KS (-) (Stratagene Inc., La Jolla, CA) y se secuenció por completo. El análisis por computadora de esta secuencia genómica murina de 12 kg se utilizó para identificar los tres exones codificadores de a2. Se diseñaron cebadores para amplificar la secuencia codificadora de a2 genómico murino completa (desde el inicio ATG hasta el paso TAG; SEQ ID NO: 18) de la siguiente manera: Plantilla: 5 nanogramos del ADN de la clona pBluescript?I-KS(-) Xbal de 12 kb. Cebador de avance: 5 ' -CCGCACTAGTTCCACCATGCCCATGGCACCACGAGT-3 ' (SEQ ID NO: 16) ; Cebador de reversa: 5 ' -GCGGCGTCGATCGCTAGTAGCGGGAGAAACGGCACATATC-3 ' (SEQ ID NO: 17) ; Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Paquete de RCP: Paquete de ADN polimerasa Pfu (Stratagene, La Jolla, CA) . Volumen final de la mezcla de reacción: 50 microlitros; Condiciones de los ciclos: 94 °C durante sesenta segundos, seguidos por 40 ciclos de 94°C (diez segundos) , 60°C (veinte segundos), 72°C (180 segundos), y después al final del ciclo número 40, un periodo de incubación a 72 °C durante cuatro minutos . El producto de RCP de 0.8 kb se purificó por electroforesis en gel de agarosa, se cortó con las enzimas Spel y Pvul y se clonó en el vector de expresión apoE humano cortado con Spel-Sfil. Se identificó por secuenciación una clona que contenía la región codificadora genómica completa exacta del a2 murino. El ADN de este "transgén a2 genómico murino vector de expresión apoE humano" fue digerido con Clal y ApaLI; la banda de 4 kb fue purificada por electroforesis en gel y utilizada para generar ratones transgénicos de la manera previamente descrita (Simonet et al . , 1997, Cell Vol. 89, p. 309-319) . Se identificaron ratones transgénicos por RCP, de la siguiente manera: Plantilla: ADN de perforación de la oreja. Cebador de avance: 5'-GCCTCTAGAAAAGCTGGGAC-3' (SEQ ID NO: 19); Cebador de reversa: 5'-CGCCGTGTTCCATTTATGAGC-3' (SEQ ID NO: 20); Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Paquete de RCP: Cuentas de RCP "Ready-to-Go) (Amersham Pharmacia Biotech, Inc., Piscataway, NJ) . Volumen final de la mezcla de reacción: 25 microlitros; Condiciones de los ciclos: 30 ciclos a 94°C (sesenta segundos) , 62°C (veinte segundos) ; 72°C (treinta segundos) . Después de la electroforesis del producto RCP, la presencia de la banda de 0.37 kb indicaba que el ratón particular era transgénico. Los animales transgénicos que sobreexpresaban a2 se identificaron por inmunoelectrotransferencia tipo Western de muestras de plasma (utilizando un anticuerpo policlonal anti-a2 purificado por afinidad, anteriormente descrito en el Ejemplo 4) obtenido de los diversos 2o: animales transgénicos identificados por RCP. Seis animales que sobreexpresaban a2 (#s 7, 8, 26, 28, 156 y 186) así como seis ratones control no transgénicos (#s 10, 11, 12, 18, 20, 21) fueron analizados fenotípicamente. A todos los ratones se les inyectaron 50 mg/kg de BrdU una hora antes de la toma de muestras, las radiografías y de que fueran sacrificados. Los ratones fueron sacrificados a las 12 semanas de edad. No se encontraron hallazgos significativos durante la necropsia. Para todos los ratones, se tomaron los pesos corporales y de órganos seleccionados, se tomó sangre para la hematología y para química del suero y los órganos se extirparon para análisis histológico de las marcas BrdU. Se examinaron secciones teñidas con Hematoxilina y Eosina (H&E) de hígado, vesícula biliar, bazo, pulmón, cerebro, pituitaria, corazón, riñon, glándula suprarrenal, estómago, intestino delgado, páncreas, ceco, colon, ganglios linfáticos mesentéricos, piel, glándula mamaria, tráquea, esófago, tiroides, paratiroides, glándulas salivales, vejiga urinaria, ovario o. testículo, útero o próstata y vesícula seminal, hueso y médula ósea. No hubo diferencias biológicamente significativas en el peso promedio o de órganos individuales de animales, en los valores de hematología, en los valores de la química clínica ni en los resultados histológicos entre los ratones transgénic?s que sobreexpresaban a2 y los ratones control no transgénicos. En otras palabras, los ratones transgénicos que sobreexpresaban a2 no tuvieron un fenotipo . Se utilizó el siguiente procedimiento para generar el "transgén ßlO genómico murino vector de expresión apoE humano". Se diseñaron cebadores para amplificar la secuencia codificadora ßlO genómica murina completa (del inicio ATG al paro TGA; SEQ ID NO: 23) de la siguiente manera: Plantilla: 10 nanogramos de la clona de ADN pBluescriptII-KS (-) ííindHI de 10 kg de ßlO genómico murino descrita en el Ejemplo 5. Cebador de avance: 5 ' -ATTACTAGTTCCACCATGAAGTTGGTATACCTTGTCCTT-3 ' (SEQ ID NO: 21) , Cebador de reversa: 5'- TTAATAATCGATCGTCAGATGGTCTCACACTCAGTG-3' (SEQ ID NO: 22; Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Paquete de RCP: paquete de ADN polimerasa pfuTurbo (Stratagene, La Jolla; CA) . Volumen final de la mezcla de reacción: 50 microlitros. Condiciones de los ciclos: 92°C durante sesenta segundos, seguidos por 15 ciclos de 92°C (diez segundos) , 65°C (veinte segundos), 68°C (cuatro minutos). El producto de la RCP de 3 kb fue purificado por electroforesis en gel de agarosa, se cortó con las enzimas Spel y Pvul y se clonó en el vector de expresión apoE humano cortado con Spel-Sfil. Se identificó por secuenciación una clona de "transgén ßlO genómico murino vector de expresión apoE humano" que contenía la región codificadora genómica completa y exacta del ßlO murino. Después se utilizó el siguiente procedimiento para generar el combinado "transgén ßlO genómico murino a2 genó ica murino vector de expresión apoE humano". El ADN de la clona "transgén ßlO genómico murino vector de expresión apoE humano" se cortó con las enzimas de restricción J?indIII y SacII y los extremos se hicieron romos con un fragmento de ADN polimerasa I grande (fragmento de Klenow) (New England Biolabs, Beverly, MA) . El fragmento de 5.6 kb fue purificado en gel y clonado en el pBluescriptII KS(-) cortado con HindII. Se identificó una clona con el "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano" en la orientación que tenía la región de señal poliA/terminador del SV40 del cartucho junto al - sitio fLLndlII del poliligador pBluescriptH KS(-). Se cortó ADN de esta clona con ífindlll y SacII y se ligó al "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE humano" i?indlII-SaclI de 3.4 kb que había sido aislado del "transgén a2 genómico murino vector de expresión apoE humano" anteriormente descrito. El "transgén ßlO genómico murino a2 genómico murino vector de expresión apoE humano" final de 11.8 kb, consiste del "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano" y del "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE humano" clonados en tándem (i.e., ambos en la misma orientación transcripcional) en el pBluescript II KS(-). En esta construcción, el ßlO y el a.2 tienen su propio promotor HCR/apoE y señal poliA/terminador del SV40 para propósitos de expresión. ADN de esta clona "transgén ßlO genómico murino a2 genómico murino vector de expresión apoE humano" fue digerido con BsHII; la banda de 9 kb fue purificada por electroforesis en gel y utilizada para generar ratones transgénicos de la manera previamente descrita (Simonet et al . , 1997, Cell Vol. 89, p. 309-319). Se identificaron ratones transgénicos para el "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE humano" por RCP, de la siguiente manera: Plantilla: ADN de perforación de la oreja.

- Cebador de avance: 5 ' -CCAGTGTGATATGTGCCGTTTC-3 ' (SEQ ID NO: 24) ; Cebador de reversa: 5 ' -GAAGAGCCGCAGAGCTCGGTA-3 ' (SEQ ID NO: 25) ; Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Paquete de RCP: Cuentas de RCP "Ready-to-Go" (Amersham Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NJ) . Volumen final de la mezcla de reacción: 25 microlitros. Condiciones de los ciclos: 94 °C durante sesenta segundos, seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos), 60 °C (veinte segundos) , 72 °C (cuarenta segundos) y después al final del ciclo número 35, un periodo de incubación a 72 °C durante siete minutos. El cebador de avance [5 * -CCAGTGTGATATGTGCCGTTTC- 3' (SEQ ID NO: 24)] para esta RCP, está ubicado en el tercer exón codificador de a2 (este exón contiene el codón de paro) . El cebador de reversa [5 ' -GAAGAGCGCAGAGCTCGGTA-3 ' (SEQ ID NO: 25)] para esta RCP, está ubicado en la región de señal poliA/terminador del SV40. Después de la electroforesis del producto de RCP, la presencia de una banda de 0.31 kb indicó que el ratón particular era transgénico para el "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE humano". Los números de los ratones fueron: 25, 45, 53, 76, 94, 95 y 113. Los ratones transgénicos para el "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano" se identificaron por RCP de la siguiente manera: Plantilla: ADN de perforación de la oreja. Cebador de avance: S'-TGGAGTCGATCCTTTCTACACCTA-S' (SEQ ID NO: 26); Cebador de reversa: 5'-AGAGCCGCAGAGCTCGGTAC-3' (SEQ ID NO: 27); Concentración final de cada cebador: 1.0 micromolar. Paquete de RCP: cuentas de RCP "Ready-to-Go" (Amersham Pharmacia Biotech, Inc., Piscataway, NJ) . Volumen final de la mezcla de reacción: 25 microlitros. Condiciones de los ciclos: 94°C por sesenta segundos, seguidos por 35 ciclos de 94°C (diez segundos), 60°C (veinte segundos), 72°C (cuarenta segundos) y después al final del ciclo número 35, un periodo de incubación a 72 °C durante siete minutos. El cebador de avance [5 ' -TGGAGTCGATCCTTTCTACACCTA-3' (SEQ ID NO: 26)] para esta RCP, está ubicado en el segundo exón codificador de ßlO (este exón contiene el codón de paro) . El cebador de reversa [5 ' -AGAGCGCAGAGCTCGGTAC-3 ' (SEQ ID NO: 27)] para esta RCP, está ubicado en la región de señal poliA/terminador del SV40. Después de la electroforesis del producto de RCP, la presencia de una banda de 0.37 kb indicaba que el ratón particular era transgénico para el "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano". Los números de estos ratones fueron: 25, 31, 45, 53, 76, 94, 95 y 113. Es de notarse que el ratón #31 que fue positivo por RCP para el "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano" fue negativo por RCP para el "cásete de expresión a2 genómico murino apoE humano". Los ratones #76 y #113 murieron poco después de la genotipificación por RCP. Los seis ratones transgénicos restantes [#s 25 (hembra) , 31 (macho) , 45 (hembra) , 53 (macho) , 94 (macho) y 95 (macho) asi como cinco ratones control no transgénicos [#s 17 (macho) , 18 (Hembra), 19 (hembra), 20 (macho) y 21 (macho)] fueron sometidos a una necropsia a las 7 semanas de edad, para un subsecuente análisis fenotípico. A todos los ratones se les inyectaron 50 mg/kg de BrdU una hora antes de tomar las muestras, someter a radiografía y sacrificar a los animales. En la necropsia se encontraron glándulas tiroides anormalmente grandes en algunos de los ratones transgénicos. Como parte de la necropsia, los ratones fueron pesados, se les tomó sangre para pruebas de hematología y química del suero y se les extirpó el hígado, bazo, ríñones, corazón y timo, los cuales fueron pesados. SE prepararon para análisis histológico cortes de higado, vesícula biliar, bazo, pulmón, cerebro, pituitaria, corazón, riñon, glándula suprarrenal, timo, estómago, intestino delgado, páncreas, ceco, colon, ganglio linfático mesentérico, piel, glándula mamaria, tráquea, esófago, tiroides, paratiroides, glándula salival, vejiga urinaria, ovario o testículo, útero o próstata y vesícula seminal, hueso y médula ósea. - -Se utilizaron análisis de inmunoelectrotransferencia tipo Northern (Northern blot) para determinar los niveles de ARNm de a2 y ßlO en los hígados de todos los ratones transgénicos y los de control no transgénicos, de la manera que se describe a continuación. Se aisló ARN total de muestras de higado, se cuantificó y 10 microgramos de ARN total por cada ratón fueron sometidos a electroforesis en un gel de agarosa con desnaturalización mediante formaldehido y fueron transferidos a una membrana de nylon. Este se realizó por - duplicado para generar dos inmunoelectrotransferencias para sondeo. La tinción de los geles de agarosa con bromuro de etidio reveló una carga de ARN virtualmente igual en todos los pozos y entre ambos geles. Una inmunoelectrotransferencia se sondeó con una sonda marcada con P32 cebada aleatoriamente que abarcaba la región codificadora completa del ADNc de a2 (desde ATG hasta TGA), para evaluar la expresión del a2. La segunda inmunoelectrotransferencia fue sondeada con una sonda marcada con P32 cebada aleatoriamente que abarcaba la región codificadora completa del ADNc de ßlO (desde ATG hasta TGA), para evaluar la expresión de ßlO. La hibridación se realizó durante una hora a 65°C en "Solución de Hibridación ExpressHyb" (Clontech, Palo Alto, CA) . Las manchas formadas por la inmunoelectrotransferencia se lavaron en 2x SSC, SDS al 0.1 a temperatura ambiente dos veces, durante 20 minutos cada vez. Después las manchas se lavaron con O.lx SSC, SDS al 0.1o6 a 50°C durante diez minutos y posteriormente se expusieron a una película. Los resultados del análisis de inmunoelectrotransferencia tipo Northern fueron los siguientes : Para los ratones control no transgénicos, no se - - encontró ninguna señal de a2 ni de ßlO. Para el ratón transgénico #94 (macho) no se encontró ninguna señal para a2 ni ßlO. Para los ratones transgénicos #s 25 (hembra) y 45 (hembra) se encontró una fuerte señal para a2 y para ßlO. Para el ratón transgénico #95 (macho) se encontró una señal moderada tanto para a2 como para ßlO. Para el ratón transgénico #53 (macho) se encontró una señal moderada para a2 y una señal más débil para ßlO. Para el ratón transgénico #31 (macho) se encontró una señal moderada para ßlO, pero no se encontró ninguna señal para a2, lo cual indica que el ratón #31 sobreexpresaba sólo ßlO y no a2. El nivel de expresión de ßlO en el ratón #31 fue significativamente mayor que el encontrado en el ratón #53. Los resultados de la expresión del ratón transgénico #31 son concordantes con la genotipificación por RCP anteriormente descrita, la cual para el ratón #31 fue positiva para el "cartucho de expresión ßlO genómico murino apoE humano", pero negativa para el "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE murino". Los datos del ratón #31 indican que la región de ADN "cartucho de expresión a2 genómico murino apoE humano" del "transgén vector de expresión ßlO genómico murino a2 gendmico murino apoE humano" fue truncada en algún punto durante el proceso de microinyección, dando como resultado un ratón que sobreexpresaba ßlO pero no a.2. El corte/truncamiento del ADN transgénico durante el proceso de creación de ratones transgénicos, ha sido reportado previamente en la literatura científica. Se examinaron secciones teñidas con H&E y BrdU de hígado, vesícula biliar, bazo, pulmón, cerebro, pituitaria, corazón, riñon, glándula suprarrenal, timo, estómago, intestino delgado, páncreas, ceco, colon, ganglio linfático mesentérico, piel, glándula mamaria, tráquea, esófago, tiroides, paratiroides, glándula salival, vejiga urinaria, ovario o testículo, útero o próstata y vesícula seminal, hueso y médula ósea de los cuatro animales que sobreexpresaban a2/ßl0 (animales #s 25, 45, 53 y 95) , los 5 animales control no transgénicos (animales #s 17, 18, 19, 20 y 21) y el ratón transgénico #31, el cual sólo sobreexpresaba ßlO pero no a2. La tinción inmunohistoquímica para BrdU se realizó en cortes de 4 µm de espesor embebidos en parafina utilizando un Sistema de Tinción Histoquímica DPC Mark 5 (Diagnostic Products Corp, Randolph, NJ) . Secciones de tejido desparafinado se sometieron a digestión con proteasa al 0.1o y después se trataron con ácido clorhídrico 2N. Las secciones se bloquearon con CAS BLOCK (Zymed Laboratories, San Franciso, CA) , se incubaron con un anticuerpo monoclonal de rata anti-BrdU (Accurate Chemical and Scientific, Westbury, NY) . El anticuerpo primario se detectó con un anticuerpo policlonal de conejo contra inmunoglobulina de rata biotinado (Dako, Carpintería, CA) . Después las secciones fueron reprimidas con peróxido de hidrógeno al 3% y se hicieron reaccionar con un complejo avidina-biotina terciario (Vector Laboratories) . La reacción de tinción fue visualizada con diaminobenzidina (DAB, Dako Carpintería, CA) y las secciones se contratiñeron con hematoxilina. Los cuatro animales que sobreexpresaban a2/ßl0 exhibieron hepatomegalia (6.75 ± 0.68 %PC (Peso Corporal) versus 4.98 ± 0.29 oPC en los ratones control no transgénicos, p=0.0011) e hipertrofia renal (2.23 ± 0.21 %PC versus 1.75 ± 0.12 «PC en los ratones control no transgénicos, p=0.0033). Los ratones que sobreexpresaban a2/ßl0 también tuvieron un peso corporal promedio ligeramente más bajo que sus contrapartes control no transgénicos; esta diferencia no fue estadísticamente significativa. Los ratones que sobreexpresaban a2/ßl0 #s 45 y 53, también exhibieron una moderada esplenomegalia. El ratón transgénico #31, el cual sólo sobreexpresaba ßlO y - no a2, presentó un peso normal del higado, riñon y bazo. Los cuatro ratones que sobreexpresaban a2/ßl0 presentaron concentraciones elevadas de la T4 sérica (23.1 ± 5.4 microgramos/dl versus 5.0 ± 0.7 microgramos/dl en los ratones control no transgénicos, p=0.0001) y los ratones transgénicos #s 25 y 45 presentaron una leve linfocitosis circulatoria. El ratón transgénico #31, el cual sólo sobreexpresaba ßlO y no a2, presentó niveles normales de T4 sérica y cuentas normales de linfocitos. Los valores de T4 sérica individuales para cada ratón fueron los siguientes: #17 (5.0 microgramos/dl), #18 (4.8 microgramos/dl), #19 (6.3 microgramos/dl), #20 (4.4 microgramos/dl), #21 (4.7 microgramos/dl), #25 (28.5 microgramos/dl), #45 (26.9 microgramos/dl) , #53 (18.2 microgramos/dl), #95 (18.7 microgramos/dl) y #31 (3.2 microgramos/dl) . Se examinaron secciones teñidas con H&E y BrdU de higado, vesícula biliar, bazo, pulmón, cerebro, pituitaria, corazón, riñon, glándula suprarrenal, timo, estómago, intestino delgado, páncreas, ceco, colon, ganglios linfáticos mesentéricos, piel, glándula mamaria, tráquea, esófago, tiroides, paratiroides, glándulas salivales, vejiga urinaria, ovario o testículo, útero o próstata y vesícula seminal, hueso y médula ósea de los - cuatro ratones que sobreexpresaban a2/ßl0, los 5 ratones control no transgénicos y el ratón #31, el cual sólo sobreexpresaba ßlO y no a2. Histológicamente, los cuatro ratones que sobreexpresaban a2/ßl0 exhibieron glándula tiroides bilateralmente agrandada que contenia múltiples adenomas papilares foliculares. Los cuatro ratones que sobreexpresaban a2/ßl0 también exhibieron una hiperplasia hepatocelular de leve a moderada, con un incremento en la marca BrdU hepatocelular versus los ratones no trapsgénicos . El ratón transgénico #31 no presentó ninguna de estas características. En resumen, los cuatro ratones transgénicos que sobreexpresaban a2/ßl0 exhibieron un fenotipo caracterizado por agrandamiento tiroideo bilateral con múltiples adenomas papilares foliculares, dando como resultado hipertiroidismo, tal como lo indica la elevada concentración sérica de T4. Otros cambios fenotípicos se pensó que estuvieron relacionados con el estado hipertiroideo sistémico e incluyeron hepatomegalia moderada, hiperplasia hepatocelular y una ligera disminución de la concentración sérica de colesterol, hipertrofia renal bilateral y leucocitosis de leve a moderada, con predominio de linfocitos. Los ratones transgénicos que sobreexpresaban a.2 murino y no ßlO (animales #s 7, 8, 26, 28, 156 y 186) anteriormente descritos, no tuvieron ningún fenotipo y el ratón transgénico #31 que sobreexpresaba ßlO y no a2, tampoco tuvo fenotipo. Esto indica que el fenotipo hipertiroideo encontrado en los cuatro ratones transgénicos que sobreexpresaban a2/ßl0 (animales #s 25, 45, 53 y 95) puede ser atribuido a la hormona heterodimérica a2/ßl0 descrita en la presente invención. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: -1. Una molécula de ácido nucleico aislada, caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de nucleótidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 2; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido tal como se expone e la SEQ ID NO: 1; (c) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de las secuencias de los incisos (a) ó (b) , en donde el polipéptido codificado, cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0; y (d) una secuencia de nucleótidos complementaria a cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(c) .
2. Una molécula de ácido nucleico aislada, caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido que tiene cuando menos aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento de identidad con el polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a.2 humano, tiene- una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para una variante alélica o variante por empalmamiento de la secuencia de nucleótidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 2, en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad de heterodímero a2/ßl0 humano; (c) una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2, del inciso (a) o del inciso (b) que codifica para un fragmento polipeptidico de cuando menos aproximadamente 25 residuos de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (d) una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2 ó de los incisos (a)-(c) que comprende un fragmento de cuando menos aproximadamente 16 nucleótidos; (e) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(d), en donde el polipéptido - codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; y (f) una secuencia de nucleótidos complementaria a cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(c) .
3. Una molécula de ácido nucleico aislada, caracterizada porque comprende una secuencia de núcleótidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, con cuando menos una sustitución de aminoácido conservadora, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, con cuando menos una inserción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, con cµando menos una deleción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0; - (d) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, que tiene cuando menos un truncamiento C-terminal y/o N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad el heterodímero a2/ßl0; (e) una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido tal como se expone en la SEQ ID NO: 1, con cuando menos una modificación que se selecciona del grupo que consiste de sustituciones de aminoácidos, inserciones de - . --¿.ácidos, deleciones de aminoácidos, truncamiento -erminal y truncamiento N-terminal, en donde e" _ -.±ipéptido cuando se heterodimeriza con el polit tJ ,_.do a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (f) una secuencia de nucleótidos de los incisos (a)-(e) que comprende un fragmento de cuando menos aproximadamente 16 nucleótidos; (g) una secuencia de nucleótidos que se hibridiza, bajo condiciones moderada o altamente estrictas, con el complemento de cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(f), en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; Y (h) una secuencia de nucleótidos complementaria a cualquiera de las secuencias de los incisos (a)-(e) .
4. Un vector caracterizado porque comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
5. Una célula huésped caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 4.
6. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque es una célula eucariótica.
7. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque es una célula procariótica.
8. Un proceso para producir un polipéptido ßlO, caracterizado porque comprende cultivar la célula huésped de conformidad con la reivindicación 5 bajo condiciones adecuadas para expresar el polipéptido y opcionalmente aislar el polipéptido del cultivo.
9. Un polipéptido caracterizado porque es producido por el proceso de conformidad con la reivindicación 8.
10. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la molécula de - - ácido nucleico comprende ADN promotor diferente al ADN promotor del polipéptido ßlO nativo, ligado de manera operable con el ADN que codifica para el polipéptido ßlO.
11. La molécula de ácido nucleico aislada de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el porcentaje de identidad se determina utilizando un programa de computadora que se selecciona del grupo que consiste de GAP, BLASTP, BLASTN, FASTA, BLASTA, BLASTX, BestFit y el algoritmo de Smith-Waterman.
12. Un proceso para determinar si un compuesto modula la actividad o producción del polipéptido ßlO, caracterizado porque comprende exponer una célula que comprende el vector de conformidad con la reivindicación 4 al compuesto y medir la actividad o producción del polipéptido ßlO en esa célula.
13. Un polipéptido aislado, caracterizado porque comprende la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3.
14. Un polipéptido aislado caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos madura tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, que comprende un extremo amino-terminal maduro en el residuo 1, opcionalmente comprendiendo además una metionina amino-terminal; (b) una secuencia de aminoácidos de un ortólogo de la SEQ ID NO: 3, en donde el polipéptido codificado cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (c) una secuencia de aminoácidos que tiene cuando menos aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ó 99 por ciento "de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (d) un fragmento de la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, que comprende cuando menos aproximadamente 25 residuos de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptído a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (e) una secuencia de aminoácidos de una variante alélica o variante por empalmamients "de cualquiera de las secuencias de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 ó cuando menos una de las secuencias de los incisos (a) - (c) , en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano.
15. Un polipéptido aislado caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una sustitución de aminoácido conservadora, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (b) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3, con cuando menos una inserción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (c) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una deleción de aminoácido, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano; (d) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3 que tiene un truncamiento C-terminal y/o N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodimero a2/ßl0 humano; y (e) la secuencia de aminoácidos tal como se expone e la SEQ ID NO: 3 con cuando menos una modificación que se selecciona del grupo que consiste de sustituciones de aminoácidos, inserciones de aminoácidos, deleciones de aminoácidos, truncamiento C-terminal y truncamiento N-terminal, en donde el polipéptido cuando se heterodimeriza con el polipéptido a2 humano, tiene una actividad del heterodímero a2/ßl0 humano.
16. Un polipéptido aislado, caracterizado porque es codificado por la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
17. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el porcentaje de identidad se determina utilizando un programa de computadora que se selecciona del grupo que consiste de GAP, BLASTP, BLASTN, FASTA, BLASTA, BLASTX, BestFit y el algoritmo de Smith-Waterman.
18. Un anticuerpo caracterizado porque es producido mediante la inmunización de un animal con un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3.
19. Un anticuerpo o fragmento del mismo, caracterizado porque se une específicamente al polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15. -
20. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque es un anticuerpo monoclonal.
21. Un hibridoma caracterizado porque produce un anticuerpo monoclonal que se une a un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3.
22. Un método para detectar o cuantificar la cantidad de polipéptido ßlO, utilizando un anticuerpo anti-ßlO ó un fragmento del mismo que se une específicamente al polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15.
23. Un agente de unión selectiva o fragmento del mismo, caracterizado porque se une específicamente a cuando menos un polipéptido, en donde dicho polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste de: (a) la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3; y (b) un fragmento de la secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEQ ID NO: 3; y (c) una variante de origen natural de cualquiera de las secuencias de los incisos (a) ó (b) .
24. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo o un fragmento del mismo. -
25. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo humanizado.
26. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo humano o un fragmento del mismo.
27. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo.
28. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo.
29. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo quimérico o un fragmento del mismo.
30. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo con injerto CDR o un fragmento del mismo.
31. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un anticuerpo antiidiotípico o un fragmento de mismo.
32. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque es un fragmento de región variable.
33. El fragmento de región variable de - conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque es un ragmento Fab o Fab ' .
34. Un agente de unión selectiva o fragmento del mismo, caracterizado porque comprende cuando menos una región determinante de complementariedad con especificidad por un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3.
35. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque está unido a una marca detectable.
36. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque antagoniza la actividad biológica del polipéptido ßlO.
37. Un método de tratamiento, prevención o mejoramiento de una enfermedad, condición o trastorno, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad efectiva de un agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23.
38. Un método de tratamiento, prevención o mejoramiento de una enfermedad, condición o trastorno relacionada con la glándula tiroides, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad efectiva de un agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 23.
39. Un agente de unión selectiva caracterizado - 226 porque es producido inmunizando a un animal con un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3.
40. Un hibridoma caracterizado porque produce un agente de unión selectiva capaz de unirse a un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
41. Una composición caracterizada porque comprende el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 y un agente de formulación farmacéuticamente aceptable.
42. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el agente de formulación farmacéuticamente aceptable es un vehículo, adyuvante, solubilizante, estabilizante o antioxidante.
43. La composición de conformidad con la reivindicación 41, caracterizada porque el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos madura tal como se expone en la SEQ ID NO: 3.
44. Un polipéptido caracterizado porque comprende un derivado del polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15.
45. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque se modifica covalentemente con un polímero hidrosoluble.
46. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque el polimero hidrosoluble se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol, monometoxi-polietilenglicol, dextrán, celulosa, poli- (N-vinilpirrolidona) -polietilenglicol, homopolímeros de propilenglicol, copolimeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados y alcohol polivinilico.
47. Una composición caracterizada porque comprende una molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3 y un agente de formulación farmacéuticamente aceptable.
48. Una composición de conformidad con la reivindicación 47, caracterizada porque la molécula de ácido nucleico está contenida en un vector viral.
49. Un vector viral caracterizado porque comprende una molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
50. Un polipéptido de fusión caracterizado porque comprende el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 fusionado con una secuencia de aminoácidos heteróloga.
51. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos heteróloga es un dominio constante de IgG o un - - fragmento del mismo.
52. Un método para el tratamiento, prevención o mejoramiento de un trastorno médico, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 ó el polipéptido codificado por el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
53. Un método para el diagnóstico de un trastorno patológico o una susceptibilidad a un trastorno patológico en un sujeto, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) determinar la presencia o cantidad de expresión del polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 o del polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en una muestra; y (b) diagnosticar un trastorno patológico o una susceptibilidad a un trastorno patológico, con base en la presencia o cantidad de expresión del polipéptido.
54. Un método para diagnosticar un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides o una susceptibilidad a un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides en un sujeto, caracterizado porque - - comprende los pasos de: (a) determinar la presencia o cantidad de expresión del polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 - o del polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en una muestra; y (b) diagnosticar un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides o una susceptibilidad a un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides, con base en la presencia o cantidad de expresión del polipéptido.
55. Un aparato caracterizado porque comprende: (a) una membrana adecuada para ser implantada; y - (b) células encapsuladas dentro de dicha membrana, en donde las células secretan un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 ó en donde la membrana es permeable a proteinas e impermeable a materiales que dañan a las células.
56. Un método para identificar un compuesto que se une a un polipéptido, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) poner en contacto el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13, 14 ó 15 con un compuesto; y (b) determinar el grado de unión del polipéptido al compuesto.
57. Un método para modular los niveles de un polipéptido en un mamífero, caracterizado porque comprende administrarle al animal la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
58. Un mamífero no humano transgénico, caracterizado porque comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3. 59. Un heterodímero del polipéptido ßlO humano y el polipéptido a2 humano. 60. Una variante de origen natural del heterodimero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación
59. 61. Un vector caracterizado porque comprende moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido ßlO humano y un polipéptido a2 humano. 62. Una célula huésped caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 61. 63. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 62, caracterizada porque es una célula - procariótica. 64. La célula huésped de -conformidad con la reivindicación 62, caracterizada porque es una célula eucariótica. 65. Un proceso para la producción de un heterodímero o-2/ßlO, caracterizado porque comprende cultivar la célula huésped de conformidad con la reivindicación 62 bajo condiciones adecuadas para expresar el heterodímero a2/ßl0 y opcionalmente aislar el heterodlmero a2/ßl0 del cultivo. 66. Un heterodímero caracterizado porque es producido por el proceso de conformidad con la reivindicación 65. 67. Un proceso para determinar si un compuesto modula la actividad o producción del heterodímero a2/ßl0, caracterizado porque comprende exponer a una célula de conformidad con la reivindicación 62 al compuesto y medir la actividad o producción del heterodimero a2/ßl0 en la célula. 68. Un anticuerpo caracterizado porque es producido al inmunizar un animal con un heterodimero a2/ßl0 humano . 69. Un anticuerpo o fragmento del mismo, caracterizado porque se une específicamente al - heterodímero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59 ó a una variante de oriqen natural del mismo. 70. El anticuerpo de conformidad con ia reivindicación 69, caracterizado porque es un anticuerpo monoclonal. 71. Un hibridoma caracterizado porque produce el anticuerpo monoclonal de conformidad con la reivindicación 70, que es específico contra un heterodímero a2/ßl0. 72. Un método para detectar o cuantificar la cantidad de un heterodímero a2/ßl0, utilizando el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 69. 73. Un agente de unión selectiva o un fragmento del mismo, caracterizado porque se une específicamente a cuando menos uno de los siguientes: (a) el heterodímero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59; (b) un fragmento del heterodímero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59; y (c) una variante de origen natural de cualquiera de los incisos (a) ó (b) . 74. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo o un fragmento del mismo. 75. El agente de unión selectiva de conformidad - con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo humanizado. 76. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo humano o un fragmento del mismo. 77. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo. 78. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo. 79. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo quimérico o un fragmento del mismo. 80. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo con injerto CDR o un fragmento del mismo. 81. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un anticuerpo antiidiotípico o un fragmento del mismo. 82. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque es un fragmento de región variable. 83. El fragmento de región variable de conformidad con la reivindicación 82, caracterizado porque - 23? es un fragmento Fab o un fragmento Fab'. 84. Un agente de unión selectiva o fragmento del mismo, caracterizado porque comprende cuando menos una región determinante de complementariedad con especificidad por un heterodímero a2/ßl0 humano. 85. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque está unido a una marca detectable. 86. El agente de unión selectiva de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque antagoniza la actividad biológica de un heterodímero a2/ßl0. 87. Un método para el tratamiento, prevención o mejoramiento de una enfermedad, condición o trastorno, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad efectiva de un heterodimero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59 ? un agente de unión selectiva que se une específicamente al heterodimero o fragmento o variante de origen natural del mismo. 88. Un método para el tratamiento, prevención o mejoramiento de una enfermedad, condición o trastorno relacionado con la glándula tiroides, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad efectiva de un heterodímero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59 ó un agente de unión selectiva que se - une específicamente al heterodimero o fragmento o variante de origen natural del mismo. 89. Una composición caracterizada porque comprende el heterodímero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del heterodímero o un fragmento del heterodímero o un agente de unión selectiva a cualquiera de los anteriores, y un agente de formulación farmacéuticamente aceptable. 90. La composición de conformidad con la reivindicación 89, caracterizada porque el agente de formulación farmacéuticamente aceptable es un vehículo, adyuvante, solubilizante, estabilizante o antioxidante. 91. Un método para modular los niveles de un heterodímero a2/ßl0 en un animal, caracterizado porque comprende administrarle al animal una molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3. 92. El heterodímero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo, caracterizado porque se modifica covalentemente con un polímero hidrosoluble. 93. El heterodimero de conformidad con la reivindicación 92, caracterizado porque el polímero hidrosoluble se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol, monometoxi-polietilenglicol, dextrán, - - celulosa, poli- (N-vinilpirrolidona) -polietilenglicol, homopolímeros de propilenglicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados y alcohol polivinílico. 94. Un polipéptido de fusión caracterizado porque comprende el heterodimero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo, fusionado con una secuencia de aminoácidos heteróloga. 95. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 94, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos heteróloga es un dominio constante de IgG o un fragmento del mismo. 96. Un método para diagnosticar un trastorno patológico o una susceptibilidad a un trastorno patológico en un sujeto, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) determinar la presencia o cantidad de expresión del heterodímero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo; y (b) diagnosticar un trastorno patológico o una susceptibilidad a un trastorno patológico, con base en la presencia o cantidad de expresión del heterodímero. 97. Un método para diagnosticar un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides o una - susceptibilidad a un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides en un sujeto, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) determinar la presencia o cantidad de expresión del heterodimero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo; y (b) diagnosticar un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides o una susceptibilidad a un trastorno patológico relacionado con la glándula tiroides, con base en la presencia o cantidad de expresión del heterodimero. 98. Un aparato caracterizado porque comprende: (a) una membrana adecuada para ser implantada; y (b) células encapsuladas dentro de la membrana, en donde dichas células secretan un heterodimero a2/ßl0 de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo, y en donde la membrana es permeable al heterodimero e impermeable a materiales dañinos para las células. 99. Un método para identificar un compuesto que se une a un heterodímero, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) poner en contacto el heterodímero de conformidad con la reivindicación 59 ó una variante de origen natural del mismo, con un compuesto; y (b) determinar el grado de unión del heterodimero al compuesto.