MXPA02002136A

MXPA02002136A - Metodos y composiciones para tratar una enfermedad autoinmune.

Info

Publication number: MXPA02002136A
Application number: MXPA02002136A
Authority: MX
Inventors: Donald J Souza
Original assignee: Boehringer Ingelheim Pharma
Priority date: 1999-09-01
Filing date: 2000-08-31
Publication date: 2002-09-18
Also published as: ATE296668T1; WO2001015733A3; DE60020580T2; EP1218064B1; JP2003508448A; CA2383773A1; WO2001015733A2; ES2243301T3; AU7338500A; EP1218064A2; DE60020580D1

Abstract

La presente invencion proporciona metodos y composiciones para tratar una enfermedad autoinmune. Los metodos de la presente invencion comprenden administrar a un mamifero diagnosticado con una enfermedad autoinmune una relacion sinergistica de (i) un agente que regula la interaccion ICAM-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interaccion CD40- ligando CD40. Las composiciones de la presente invencion comprenden una relacion sinergistica de (i) un agente que regula la interacci6n ICAM-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interaccion CD40-ligando CD40.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA TRATAR UNA ENFERMEDAD AUTOINMUNE Antecedente de la Invención Campo de la Invención La presente invención se relaciona generalmente a tratar una enfermedad autoinmune, y a composiciones útiles en el tratamiento de la enfermedad autoinmune.

Técnica relacionada Las enfermedades autoinmunes ocurren cuando la reactividad inmune al antígeno se incrementa a través de la pérdida de control en los mecanismos los cuales controlan la tolerancia. La artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico (SLE) son dos ejemplos de la enfermedad autoinmune. La artritis reumatoide es un síndrome clínico de causa desconocida caracterizada por la inflamación simétrica, poliarticular de las articulaciones sinoviales alineadas. Esta inflamación implica comúnmente los tejidos extraarticulares, los cuales incluyen el pulmón pericardio, y los vasos sanguíneos (Harris, E.D., New Engl.

• J. Med. 322: 1277-1289 (1990)). El lupus eritematoso sistémico (SLE) es una enfermedad inflamatoria caracterizada por la formación de anticuerpos antinucleares y la deposición de complejos No. de referencia 136429 inmunes, y se manifiesta por las lesiones inflamatorias de la piel, mucositis, serositis, vasculitis y glomerulonefritis (Mills, J.A., New Engl. J. Med. 330:1871- 1879 (1994)). SLE es un trastorno autoinmune inflamatorio 5 crónico el cual implica las articulaciones, piel, riñon, y otros órganos. El lupus nefritis o lupus glomerulonefritis es el componente renal observado comúnmente en los pacientes con SLE. La producción de los anticuerpos, deposición de complejos inmunes, y la activación del 10 sistema complemento son todos los casi eventos que llevan a la nefritis en pacientes con lupus. La infiltración de las células inflamatorias y su interacción con las células renales residentes están implicadas en la progresión del daño renal y la amplificación de respuestas inflamatorias 15 en el lupus nefritis. Las moléculas de adhesión celular pueden estar implicadas en la patogénesis de la artritis reumatoide (Cronstein, B.N. Curr. Opinión Rheum. 6:300-34 (1994)). ICAM-1 es una molécula de adhesión celular, y es una 20' glicoproteína de superficie celular importante la cual regula las interacciones entre las células autoinmunes y entre las células accesorias y los linfocitos T ( uthrich, R.P. et al., Am. J. Pathol. 136:441-450 (1990)). La ICAM-1 se enlaza al antígeno-1 asociado a la función de linfocitos (LFA-1) (Kakimoto, K. et al., Cellular Immunol. 142:326-337 (1992) ) . Las interacciones de ICAM-l/LFA-1 juegan un papel principal en la activación del linfocito T por las células que presentan antígenos, y median las funciones de adhesión homotípicas y heterotípicas del leucocito. (Davis et al., Structure, Function and Regulation of Molecules in Leukocyte Adhesión, Lipsky et al., Eds. Springer-Verlag, New York, pág. 256 (1993); Kuhlman et al., J. Immunol. 146: 1773 (1991) . El enlace de la molécula ligando CD40 (también conocido como gp39, CD154, CD40L, TRAP, o TBAM) en la superficie celular auxiliadora T a la superficie celular B CD40 es el evento molecular que media la ayuda de la células T directa para la activación de las células B (Koshy, M. Et al., J. Clin. Invest. 98: 826-837 (1996)). La interacción CD40/CD40L es crítica para la producción de anticuerpos contra los antígenos dependientes a T, formación central germinal, proliferación y diferenciación de células B, cambio de isótopos y la generación de la memoria de células B (Durie et al., Immunol. Today 15: 406 (1994)). CD40 es un miembro de la familia de receptores TNF y se expresa en una variedad de tipos celulares, los cuales incluyen las células B y otras células que presentan ,^t >¿ antígenos, células endoteliales y queratinocitos (Grewal et al., Ann. Rev. Immunol. 16: 111-135 (1998)). ICAM-I y CD40 pueden estar implicados en la patogénesis de la artritis reumatoide (Koshy, M. Et al., J. Clin. Invest. 98: 826-837 (1996); Wuthrich, R.P. et al., Am. J. Pathol. 136: 441-450 (1990)). CD40 puede estar implicado en la patogénesis del lupus eritematoso sistémico (Kalled, S.L. et al., J. Immunology 160: 2158 (1990)). No son conocidos los efectos terapéuticos de los tratamientos con la molécula antiadhesión o el ligando anti-CD40 en la severidad de la enfermedad en los pacientes con lupus eritematoso sistémico (McMurray, R.W., Semin. Arthritis Rheum. 25:2151-234 (1996)). Antes a esta invención, los remedios terapéuticos para las enfermedades autoinmunes, y particularmente la artritis reumatoic'e y SLE, permanecieron difíciles de alcanzar. Por consiguiente, hay una necesidad en la técnica para las composiciones y métodos terapéuticos para tratar efectivamente las enfermedades autoinmunes, y particularmente la artritis reumatoide y SLE. Sumario de la Invención La presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad autoinmune, el método comprende administrar a un mamífero diagnosticado con la enfermedad autoinmune una relación sinergística de (i) un agente el cual regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) un agente el cual regula la interacción de CD40-ligando CD40. La presente invención también proporciona un método para tratar la artritis reumatoide, el método comprende administrar a un mamífero diagnosticado con la artritis reumatoide una relación sinergística de (i) un anticuerpo el cual regula la interacción ICAM-LFA-1, o un fragmento activo del mismo, y (ii) un anticuerpo el cual regula la interacción CD40-ligando CD40 o un fragmento activo del mismo. La presente invención también proporciona un método para tratar el lupus eritematoso sistémico, particularmente el lupus eritematoso sistémico de etapa final, el método comprende administrar a un mamífero diagnosticada con el lupus eritematoso sistémico una relación sinergística de (i) un anticuerpo que regula la interacción ICAM-LFA-1, o un fragmento activo del mismo, y (ii) un anticuerpo el cual regula la interacción CD40-ligando CD40, o un fragmento activo del mismo. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para tratar una enfermedad autoinmune, la composición comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una relación sinergística de (i) un agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y un agente el cual regula la interacción CD40-ligando CD40. La presente invención también proporciona un método para tratar una enfermedad autoinmune, el método comprende administrar a un mamífero diagnosticado con la enfermedad autoinmune una relación sinergística de (i) un primer agente el cual regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) un segundo agente, en donde el segundo agente es inmunosupresor y no citotóxico. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para tratar una enfermedad autoinmune, la composición la cual comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una relación sinergística de (i) un primer agente el cual regula la interacción ICAM- LFA-1, y (ii) un segundo agente, en donde el segundo agente es inmunosupresor y nc citotóxico. Se ha descubierto que la coadministración de un agente el cual regula la interacción ICAM-LFA-1 y un agente el cual regula la interacción CD40-ligando CD40 proporciona un efecto terapéutico sinergístico. La presente invención proporciona composiciones y métodos para tratar una enfermedad autoinmune, particularmente la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico. Al usar las composiciones y métodos de 3a presente invención, pueden ser tratadas las enfermedades autoinmunes, y particularmente la artritis reumatoide y SLE. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura ÍA representa la inhibición similar a esteroides de la artritis inducida por colágeno establecida (CÍA) a través de la terapia de combinación del anticuerpo del ligando anti-CD40 y del anticuerpo anti-ICAM-1. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. ( M ) : IgG de rata (250 µg i.p. 3 veces/semana); (T) :anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (A): beta-metasona (5 mg/kg/i-p. cada día); (•) solución salina amortiguada con fosfato (0.2 ml i.p. cada día) ; (^) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (*) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana) /anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana). * p<0.05 contra controles de IgG de rata y de PBS. La Figura IB es una gráfica de barras la cual representa el nivel del IgG del colágeno tipo II 5 semanas después de los tratamientos indicados. Se ensaya el IgG anti-CII en un ensayo ELISA, y se muestra como las unidades medias de la actividad de la peroxidasa (OD=492 nm) por ml •X 10"3 + error estándar. * p<0.05 contra control de IgG de rata. ** p<0.05 contra los controles de IgG de rata y de solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . La Figura 2A representa el efecto de una dosis del anticuerpo anti-CD40L y del anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (I) : IgG de rata (250 µg i.p. 3 veces/semana); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (A) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM- (125 µg i.p. 3 veces/semana); ( ) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p. 3 veces/semana). La Figura 2B representa el efecto sinergístico de una dosis de un anticuerpo anti-CD40L y de un anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media para la terapia de combinación anti-CD40L y anti-ICAM-1. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. ( M ) : IgG de rata (500 µg i.p. 3 veces/semana) ; (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (A): anticuerpo MR-1 anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (V) : anticuerpo MR-1 anti- . « ¿& * *S. A .

CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (125 µg i.p. 3 veces/semana); ( ) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p. 3 veces/semana). 5 La Figura 2C representa el efecto sinergístico de una dosis del anticuerpo anti-CD40L y de un anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media para la terapia de combinación anti-CD40L y anti- ICAM-1. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (I): IgG de rata (500 µg i.p. "Q.I.D., MWF por 5 semanas); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 dosis); (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas); (Y ) : anticuerpo MK-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas); ( ): anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (50 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas). La Figura 2D representa el efecto del anticuerpo anti-ICAM-1 o el anticuerpo anti-CD40L en el desplazamiento medio de mercurio (Hg) en un ensayo de inflamación basado aa?iaBiiÍlÉÍ tai¿Éa ÍÍBaH¿,í ..!.».. it i»j _. ___ ¿ ... .;__-.-.... -.. . .... . -..- . j . Í ^H . &.I.... J. ^.^ ^. J» J. _ 1. 1. ^.A. , „ «i«aci>i. j en el volumen de la pata. (B) : IgG de rata (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (A) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. Q.I.D., MWF); (*) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (50 µg i.p. Q.I.D., MWF) . La Figura 2E representa el efecto sinergístico del anticuerpo anti-ICAM-1 y el anticuerpo anti-CD40L en el desplazamiento de mercurio medio (Hg) en un ensayo de inflamación a base del volumen de pata. (I) : IgG de rata (500 µg i.p.); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.); y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p.) por 5 dosis; (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (250 µg i.p.) por 5 semanas; (T) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (125 µg i.p.) por 5 semanas; (^): anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p.) por 5 semanas) . La Figura 2F es una gráfica de barras que representa la inhibición sinergística de la artritis establecida a través de la terapia de combinación de anti- ICAM-1 y anti-CD40L. Se muestra la clasificación artrítica media en el enrolamiento y la semana 5 (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. * p <0.05 contra los controles IgG de rata. Los enteros en paréntesis se correlacionan a los tratamientos respectivos listados en la leyenda de la Figura con las clasificaciones de la artritis media respectiva en la gráfica de barras. La Figura 2G es una gráfica de barras la cual repr3senta la inhibición smergística del edema establecido a través de la terapia de combinación anti-ICAM-1 y anti- CD40L. Se muestra el desplazamiento medio de Hg en el enrolamiento y la semana 5 (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. * p<0.05 contra los controles de IgG de rata. Los enteros en paréntesis se correlacionan a los tratamientos respectivos listados en la leyenda de la Figura con las clasificaciones de la artritis media respectivas en la gráfica de barras. La Figura A representa el efecto de la terapia de combinación del anticuerpo anti-CD40L y el antagonista LFA-1 en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (A): control de aceite de oliva (100 µl P.O. b.i.d.); (•) : antagonista LFA-1 "A" (LFA-1 "A") (30 mg/kg ' P'.O. b.i.d); (B) : antagonista LFA-1 "A" (30 mg/kg P.O. b.i.d.) y anticuerpo MR-1 ant?-CD40L (250 µg i.p. 3X/semana) . La Figura 3B es una gráfica de barras que representa el nivel del IgG de colágeno tipo II 5 semanas después de los tratamientos indicados. Se ensaya el IgG 5 anti-CII en un ensayo de ELISA, y se muestra como las unidades medias de la actividad de la peroxidasa (OD=492 nm) por ml x 10"3 + error estándar. La Figura 4 representa la inhibición sinergística de la artritis establecida a través de la terapia de 10 combinación anti-LFA-1 y anti-CD40L. Se muestra la clasificación artrítica media (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. (A):LFA-1 antiratón de rata mAb MI7/4.4 (250 µg i.p. 3X/semana) ; (•) anticuerpo ligando anti-CD40 de hámster mAb MR-1 (250 µg i.p. 3X/semana) ; (T): 15 combinación M17/4.4 + MR-1 (250 µg + 250 µg i.p. 3X/semana) . Los ratones de control reciben: (B) : IgG de rata (250 µg i.p. 3X/semana) ; * p< 0.05 contra los controles de IgG de rata. La Figura 5 representa el efecto del anticuerpo anti-ICAM-1 y la ciclosporina en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (B) : IgG de rata - (50 µg i.p., Q.I.D., MWF); (•): aceite de oliva (100 µg *.-*-. Ai* J i. J P.O., B.I.D.); (*) ciclosporina 30 mg/kg P.O., B.I.D.); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p., Q.I.D., MWF); (A): ciclosporina 30 mg/kg P.O., B.I.D.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p., Q.I.D., MWF). La Figura 6 representa el efecto de la terapia de combinación inmunosupresora no citotóxica y del antagonista LFA-1 en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (A): control del aceite de oliva (100 µl P.O. b.i.d); (B) : antagonista LFA-1 "B" (LFA-1 "B") (50 mg/kg P.O. b.i.d); (•) :ciclosporina (30 mg/kg P.O. b.i.d.); (T) : antagonista LFA-1 "B" (50 mg/kg P.O. b.i.d.) y ciclosporina (30 mg/kg P.O. b.i.d. ) . La Figura 7 representa el efecto de varios tratamientos en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW)F! con SLE. (B): IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=8); (•) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10); (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10); (F): anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y el anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll); (T) : etapa tardía: anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, ¡,t .

N=10) . La Figura 8 representa el efecto de varios tratamientos en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana. (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=8); (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10); (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; ( ) :anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll). Se terminan los tratamientos dos meses después de que se inician. La Figura 9 representa el efecto de varios tratamientos en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana. (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=10); (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10); (A): anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10); ( ) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll). Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 10 representa el efecto de varios tratamientos con anticuerpos en el nivel medio de IgG de anti-dsDNA en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=10); (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, n=10); (V) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (A) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll). La Figura 11 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa tardía, (fl) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10). Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 12 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa tardía, (fl): anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 13 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 CD40L ligando en el nivel medio del IgG anti-dsDNA en ratones (NZW/NZW) Fi con SLE en la etapa tardía de la enfermedad, (fl) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 14 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=ß) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 15 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=ß); (•) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=ß) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 16 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el «*> fe l nivel medio de IgG anti-dsDNA en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=ß) ; (•) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 17 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fx con SLE en la enfermedad en una etapa final (la proteinuria es 2,000-4,000 mg/dl). (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=ß) . ( ) :anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=7) . La Figura 18 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final. (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=ß) . ( ) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=6-7). La Figura 19 representa el efecto de la terapia de combinación del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L, contra el tratamiento MR-1 solo, en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final (la proteinuria es 4,000-10,000 mg/dl). (A) anticuerpo MR-1 ligando anti- CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . ( ) : anticuerpo YN1/1 anti- ICAM1 y anticuerpo M -1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=7). La Figura 20 representa el efecto del nivel medio de IgG de rata de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final. (D) : anticuerpo • IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. La Figura 21 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa final. (0) anticuerpo YN/1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. La Figura 22 representa el efecto del anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa final. (O) anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=ß) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando se termina el tratamiento, dos de los seis animales están vivos, y uno de los seis animales exhibe la proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. La Figura 23 representa el efecto sinergístico del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti- 5 CD40L en combinación con el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final. (?) anticuerpo YN1/1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=7). El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando termina el tratamiento, 10 seis de los siete animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. La Figura 24 representa el efecto del anticuerpo •' " MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final, que tienen un nivel de proteinuria de más de 4,000 mg/dl por muestra de orina de 24 horas. (O): anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando termina el tratamiento, uno de los seis animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. La Figura 25 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en combinación con el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final, que MÍ^^MÉWM^^ÍÜaL.ÍA»Í. .&~fai¿«*^^ .*-- *<?? ¡&* - » ^.-. — . -. . - « .». ...... ^- - •&-» <—- - -««JttlJ» ¿«A.* J-J tiene un nivel de proteinuria de más de 4,000 mg/dl por muestra de orina de 24 horas. (?) anticuerpo YN1/1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cµando termina el tratamiento, cuatro de los siete animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. La Figura 26 representa la comparación del efecto de la monoterapia con anti-CD40L con el efecto de la terapia de combinación del anti-ICAM-l/MR-1 anti-CD40L. El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8.

La terapia de combinación resulta en una sobrevivencia prolongada y proteinuria disminuida. (A) : anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . ( ) : anticuerpo YN1/ 1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=7). Descripción Detallada de la Invención Se ha descubierto que la coadministración de un agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y un agente que regula la interacción del CD40-ligando CD40 proporciona un efecto terapéutico sinergístico. La presente invención proporciona las composiciones y métodos para tratar la enfermedad autoinmune, particularmente la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico. Al usar las composiciones y métodos de la presente invención, pueden Jaaaa tii A ?.±A&¡A A --*.. fc.&¡ a¿* ser tratadas las enfermedades autoinmunes, y particularmente la artritis reumatoide y SLE. Todos los términos científicos y técnicos usados en la presente tienen significados usados comúnmente en la técnica, a menos que se especifique otra cosa. "Administrar" se refiere a proporcionar uno o más agentes farmacéuticos a un sujeto. De esta forma, "administrar" incluye a la administración oral, administración como un supositorio, contacto tópico, intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, subcutáneamente, intranasalmente, a la implantación de un dispositivo de liberación lenta tal como una bomba miniosmótica, y a la administración por inhalación. Al proporcionar a un mamífero, y particularmente un humano, con agentes terapéuticos, la dosis variará dependiendo de tales factores como la edad del paciente, peso, altura, sexo, condición médica general, historia médica previa, etc. En general, es deseable proporcionar al receptor con una dosis en el intervalo de aproximadamente 1 pg/kg a 10 mg/kg (peso corporal del receptor) , aunque puede ser administrada una dosis inferior o superior. Las rutas de administración pueden ser intravenosa, intramuscular, subcutáneamente, intraperitoneal, enteral o parental. La frecuencia de dosis puede ser repetida en intervalos en el =¿A j.¿ Ají j*"-**^1— k**, i«a? ñk-í., »»j>Ata , . - . , .- ,— - n. >» _. « -js. ^ ... sai.. j,»a .«arfc i. rango de cada día a cada mes. Los agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1 para uso en la presente invención son agentes que interrumpen, modulan o perturban la interacción ICAM-LFA-1. 5 Preferentemente, el ICAM es ICAM-1, ICAM-2, o ICAM-3. Todavía más preferentemente, el ICAM es ICAM-1. v Los agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1 comprenden cualesquiera moléculas químicas y/o biológicas que no evitan el enlace entre sí de ICAM y LFA-1, pero sin 10 embargo evitan un efecto fisiológico subsecuente del enlace ICAM-LFA-1. Adicionalmente, los agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1 comprenden cualesquiera moléculas químicas y/o biológicas que evitan el enlace entre sí de ICAM-LFA-1, bloquea el enlace, inhibe el enlace. Más -/15 - particularmente, los agentes bloquean la interacción ICAM- LFA-1. Todavía más particularmente, los agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1 son anticuerpos policlonales o monoclonales que enlazan a ICAM y/o LFA-1 y evitan el enlace entre sí de ICAM y LFA-1. Alternativamente, los agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1 son compuestos que no son anticuerpos, tales como antagonistas de molécula pequeña, que enlazan a ICAM y/o LFA-1 y evitan el enlace entre sí de ICAM y LFA-1. Los derivados de ICAM-1 solubles están también comprendidos por la frase "agentes que regulan la interacción ICAM-LFA-1". Los derivados de ICAM-1 solubles son derivados los cuales no se enlazan a una membrana de una célula. Tales derivados pueden comprender las moléculas 5 truncadas las cuales carecen de un dominio transmembranal . Alternativamente, pueden comprender formas mutantes de las moléculas naturales las cuales carecen de la capacidad de enlace (o enlazadas establemente) a la membrana de una célula a pesar de que contienen un dominio transmembranal. 10 Se describen los derivados solubles de ICAM-1 y su preparación por Marlin, S.D. et al-, Nature 344:70-72 (1990), la referencia la cual se incorpora en la presente para referencia) . Entre los derivados funcionales preferidos de ICAM-1 están los fragmentos solubles de la molécula ICAM-1 la cual contiene los dominios 1, 2 y 3 de v " ICAM-1. Son más preferidos los fragmentos solubles de la molécula ICAM-1 la cual contiene los dominios 1 y 2 de ICAM-1. Son más preferidos los fragmentos solubles de la molécula ICAM-1 la cual contiene el dominio de ICAM-1. 20 Véase la Patente de los Estados Unidos No. 5,248,931. Ejemplos de los antagonistas de molécula pequeña de LFA-1 incluyen, pero no se limitan a, las moléculas descritas en la solicitud de patente internacional No. PCT/US98/04254 (WO 98/39303) y la solicitud de patente internacional no. PCT/EP98/05414 (WO 99/11258) . En los métodos y composiciones de la presente invención, se prefieren las moléculas que tienen la estructura (I) representada en la solicitud de patente internacional no. PCT/US98/04254 (WO 98/39303) . Son especialmente preferidas las moléculas representadas en el ejemplo 271 (en la página 221) , que tienen la estructura y la molécula del ejemplo 102 (en la página 125) de la solicitud de patente internacional no. PCT/US98/04254 (WO 98/39303), que tiene la estructura Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica pueden determinar si un agente regula la interacción ICAM- 1-LFA-l sin experimentación prolongada. Por ejemplo, se proporciona un ensayo in vitro de la interacción ICAM-LFA-1 en la Patente de los Estados Unidos No. 5,284,931. Los agentes que regulan la interacción del CD40- ligando CD40 para uso en la presente invención son agentes - que interrumpen, modulan o perturban la interacción CD40- ligando CD40. Los agentes que regulan la interacción CD40- ligando CD40 comprenden cualesquiera moléculas químicas y/o biológicas que no evitan el enlace entre si de CD40 y el ligando CD40, pero sin embargo evitan un efecto fisiológico subsecuente del enlace de CD40-ligando CD40. Adicionalmente, los agentes que regulan la interacción CD40-ligando CD40 comprenden cualesquiera moléculas químicas y/o biológicas que evitan el enlace entre si de CD40 y el ligando CD40, bloquean el enlace, o inhiben el enlace. Más particularmente, los agentes que bloquean la interacción CD40-ligando CD40. Todavía más particularmente, los agentes que regulan la interacción CD40-ligando CD40 son anticuerpos policlonales o monoclonales que se enlazan a CD40 y/o al ligando CD40 y evitan que se enlacen entre sí el CD40 y el ligando CD40. Alternativamente, los agentes que regulan la interacción CD40-ligando CD40 no son compuestos anticuerpos, tales como antagonistas de molécula pequeña, que enlazan a CD40 y/o al ligando CD40 y evitan el enlace entre sí de CD40 y el ligando CD40. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica 5 pueden determinar si un agente regula la interacción CD40- ligando CD40 sin experimentación prolongada usando ensayos in vitro. Tales ensayos se describen, por ejemplo, en la Patente de los Estados Unidos No. 5,683,693, 5,833,987, 5,869,049, las Patentes de los Estados Unidos No. 10 5,916,560, y la solicitud de patente internacional NO. PCT/US97/00668 (WO 97/26000) . "anticuerpo anti-ICAMl" se refiere a un anticuerpo que reconoce y se enlaza específicamente a ICAM. Preferentemente, el anticuerpo se enlaza a ICAM-1, ICAM-2 o ICAM-3. Más preferentemente, el anticuerpo se enlaza a ICAM-1. Los anticuerpos policlonales y/o monoclonales v . pueden ser usados en los métodos y composiciones de la presente invención. Los anticuerpos anti-ICAM-1 pueden ser hechos y usados por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación prolongada. Véase la Patente de los Estados Unidos No. 5,284,931. Los ejemplos de anticuerpos anti-ICAM-1 incluyen, pero no se limitan a, el anticuerpo monoclonal R6-5-D6 (ATCC 9580) , y el anticuerpo monoclonal YN/1 (ATCC CRL-1878) . Un fragmento de un anticuerpo anti-ICAM-1 completo, el cual retiene la actividad del anticuerpo anti-ICAM-1 completo, es también adecuado en los métodos y composiciones de la presente invención. Un fragmento activo de un anticuerpo anti-ICAM-1 completo retiene la actividad del anticuerpo completo si el fragmento regula la interacción ICAM-l-LFA-1. El "anticuerpo anti-LFA-1" se refiere a un anticuerpo el cual reconoce y se enlaza específicamente a LFA-1. Los anticuerpos policlonales y monoclonales pueden ser usados en los métodos y composiciones de la presente invención. Los anticuerpos anti-LFA-1 pueden ser hechos y usados por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación prolongada. Por ejemplo véase la Patente de los Estados Unidos NO. 5,284,931. Ejemplos de anticuerpos anti-LFA-1 incluyen, pero no se limitan al anticuerpo monoclonal M17/4.4 (ATCC TIB-217), anticuerpo monoclonal TS2/18.1.1 (ATCC HB-195) , anticuerpo monoclonal TSI/22.1.1.13 (ATCC HB-202), anticuerpo monoclonal TSI/18.1.2.11 (ATCC HB-203) , anticuerpo monoclonal LM2/1.6.11 (ATCC HB-204), anticuerpo monoclonal TS2/9.1.4.3 (ATCC HB-205), anticuerpo monoclonal 2E6 (ATCC HB-226) , anticuerpo monoclonal BE29-GI (ATCC HB-233) , anticuerpo monoclonal TS2/16.2.1 (ATCC HB-243) , anticuerpo monoclonal TS2/4.1.1 (ATCC HB-244), anticuerpo monoclonal TS2/7.1.1 (ATCC HB-245), anticuerpo monoclonal S6F1 (ATCC HB-9579) , anticuerpo monoclonal M5/114.15.2 (ATCC TIB-120) , anticuerpo monoclonal Ml/70.15.11.5 HL (ATCC TIB-128), anticuerpo monoclonal FD441.8 (ATCC TIB-213) , anticuerpo monoclonal MI7/4.4.11.9 (ATCC TIB-217), anticuerpo monoclonal M18/2.a.l2.7 (ATCC TIB-218), anticuerpo monoclonal M17/5.2 (ATCC TIB-237), y anticuerpo monoclonal M5/49.4.1 (ATCC TIB-238) . Un fragmento de un anticuerpo anti-LFA-1 completo, el cual retiene la actividad del anticuerpo anti-LFA-1 completo, es también adecuado en los métodos y composiciones de la presente invención. Un fragmento activo de un anticuerpo anti-LFA-1 completo retiene la actividad del anticuerpo completo si el fragmento regula ia interacción ICAM-l-LFA-1. "Anticuerpo anti-CD40" se refiere a un anticuerpo que reconoce y se enlaza específicamente a CD40. Los anticuerpos anti-CD40 pueden ser hechos y usados por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación prolongada. Véase la Patente de los Estados Unidos No. 5,801,227. Un fragmento de un anticuerpo anti-CD40 completo, el cual retiene la actividad del anticuerpo anti-CD40 completo, es también adecuado en los métodos y composiciones de la presente invención. Un fragmento activo átff^X de un anticuerpo anti-CD40 completo retiene la actividad del anticuerpo completo si el fragmento regula la interacción CD40-CD40. "Anticuerpo del ligando anti-CD40" (anticuerpo 5 anti-CD40L) se refiere a un anticuerpo que reconoce y se enlaza específicamente al ligando CD40. Los anticuerpos del ligando anti-CD40 pueden ser hechos y usados por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación prolongada. Véase la Patente de los Estados Unidos NO. 10 5,683,693, 5,833,987, 5,869,049, la Patente de los Estados Unidos No. 5,916,560, y la solicitud de patente • internacional No. PCT/US97/00668 (WO 97/26000). Ejemplos de anticuerpos del ligando anti-CD40 incluyen, pero no se limitan a, Genzyme (Cambridge, MA) ligando anti-CD40 15 (producto no. 80-3702-01), anticuerpos del ligando CD40 anti-humano de ratón 24-31, 89-79, 89-76, 24-43, 409-8, y 409-9 anticuerpo monoclonal 5c8 (ATCC no. HB 10916), anticuerpo monoclonal MR-1 (ATCC no. HB-11048), y anticuerpo monoclonal BG9588 (véase National Institutes of 20 Health Protocol Number: 99-AR-0133) , ligando CD40 antihumano monoclonal MK13A4 (Pullen et al., J. Biol. Chem. " (?999), de Alexis Biochemicals. En una modalidad preferida, el anticuerpo del ligando anti-CD40 es BG9588. Un fragmento de un anticuerpo ligando anti-CD40 completo, el cual retiene la actividad del anticuerpo del ligando anti-CD40 completo, es también adecuado en los métodos y composiciones de la presente invención. Un fragmento activo de un anticuerpo del ligando anti-CD40 completo retiene la actividad del anticuerpo completo si el fragmento regula la interacción de CD40-ligando CD40. Los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser hechos y practicados usando cualesquiera anticuerpos adecuados, los cuales incluyen anticuerpos policlonales, monoclonales, humanizados, quiméricos o primatizados . Un anticuerpo quimérico es un anticuerpo en el cual las cadenas ligeras y/o pesadas contienen regiones a partir de especies diferentes. Por ejemplo, uno o más segmentos de región variable (V) de una especie pueden ser unidos a uno o más segmentos de región constante (C) de otras especies. Típicamente, un anticuerpo quimérico contiene segmentos de región variable de un ratón unidos a segmentos de región constante humanos, aunque pueden ser usadas otras especies de mamíferos. Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo el cual comprende una o más regiones que determinan la complementariedad (CDR) de un anticuerpo no humano unido funcionalmente a los segmentos de regiones de estructura de trabajo humanos. Los residuos adicionales asociados con el anticuerpo no humano pueden ser presentados opcionalmente. Típicamente, por lo menos una cadena pesada o una cadena ligera comprende CDR no humanas. Típicamente, las CDR no '' 5 ' humanas son CDR de ratón. Un anticuerpo primatizado es un anticuerpo el cual comprende una o más CDR de un anticuerpo de una especie diferente al primate no humano, unido funcionalmente a los segmentos de región de la estructura de trabajo de un primate no humano. Los residuos adicionales asociados con las especies a partir de las cuales se deriva la CDR pueden opcionalmente estar presentes. Típicamente, por lo menos una cadena pesada o una cadena ligera comprende CDR de las especies las cuales no son un primate no humano. La producción de anticuerpo policlonal, monoclonal, humanizado, quimérico o primatizado es bien conocida por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. Por ejemplo, véase Antibodies: A Laboratory Manual, E. Harlow, Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998); Vaswani, S.K. et al., Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 81:105-115 (1998); Cuoto, .R et al., Cáncer Res.

(Suppl.) 55:5973s-5977s (1995); y la Patente de los Estados Unidos No . 5 , 714 , 350 .

** - * * -•..J__.._l__J ? í? l «L^. - ai^ * -. - — - • - - * . ->- .•* •*. ui i •-"* -* '» -* "Fragmento activo" se refiere a una porción de un anticuerpo completo el cual proporciona el mismo efecto fisiológico, y particularmente el mismo efecto terapéutico, como el anticuerpo completo. El efecto proporcionado por el fragmento activo puede ser mayor o menor que el efecto proporcionado por el anticuerpo completo. En una modalidad preferida, un primer agente el cual regula la interacción ICAM-LFA-1 se administra con un segundo agente, en donde el segundo agente es un agente inmunosupresor. Ejemplos de agentes inmunosupresores incluyen la ciclosporina y dexametasona. Más preferentemente, el segundo agente que es inmunosupresor es también no citotóxico. Las enfermedades de "enfermedades autoinmunes" ocurren cuando la reactividad inmune al antígeno se incrementa a través de la pérdida de control en los mecanismos los cuales controlan la tolerancia. Ejemplos no • limitantes de la enfermedad autoinmune son la artritis reumatoide, dermatitis atópica, cualquier forma de lupus (la cual incluye lupus cutánea y lupus eritematosis discoidea) , y cualquier tipo extracutáneo de lupus (el cual incluye el lupus eritematoso sistémico, lupus agudo, lupus anular, lupus discreto, lupus linfático, lupus papollamtis, lupus psoriasis, lupus vulgar, lupus s ¿...í. i, £,?iL í t,2. . -. ¿-¿.... esclerosis, lupus neonatal eritematoso y lupus inducido por fármacos), areata alopecia, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolípidos, Enfermedad autoinmune de Addison, anemia hemolítica autoinmune, hepatitis v5 .autoinmune, enfermedad de Bechet, penfigoide bullosa, cardiomiopatía, dermatitis esprue celiaco, síndrome de disfunción inmune de fatiga crónica, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, síndrome de Churg- Strauss, penfigiode circatricial, síndrome de CREST, enfermedad de aglutinina fría, lupus discoide, crioglobulinemia mixta esencial, fibromiositis fibromialgia, enfermedad de Grave, Guillain-Barré, anemia he olít-' ca, tiroiditis de Hashimoto, fibrosis pulmonar idiopática, trombocitopenia idiopática, púrpura trombocitopenia idiopática, nefropatía IgA, diabetes dependiente a insulina, artritis juvenil, liquen plano, lupus, enfermedad de Méniere, enfermedad del tejido conectivo mixto, esclerosis múltiple, miastenia gravis, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, policondritis, síndrome poliglandular, polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis, agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, v psoriasis, escleroderma, síndrome de Sjórgren, síndrome de hombre rígido, tiroiditis, enfermedad del intestino ?-' ^!"u m? ?» * " inflamatorio, enfermedad de Crohn, arteritis Takayasu, arteritis temporal, arteritis de células gigantes, colitis ulcerativa, uveitis, vasculitis, vitíligo, y granulomatosis de Wegener. Preferentemente, "enfermedad autoinmune" se selecciona del grupo que consiste de artritis reumatoide y lupus eritematoso sistémico. Más preferentemente, "enfermedad autoinmune" es tanto artritis reumatoide o lupus eritematoso sistémico. La "interacción CD40-ligando CD40" se refiere al enlace entre CD40 y el ligando CD40. Un ligando conocido para CD40 es CD154 (gp39) . Véase la Patente de los Estados Unidos No. 5,916,560. Los términos "ligando CD40", "CD154", "gp39", "CD40L", "T-BAM" y "TRAP" son sinónimos. El lupus eritematoso sistémico de "etapa final" se caracteriza en parte por nefritis, en la cual los pacientes exhiben proteinuria de orina persistente de más de 1 gramo/24 horas de muestra de orina. Más particularmente, el lupus eritematoso sistémico de etapa final se caracteriza por proteinuria de orina persistente de más de 1.5 gramos/24 horas en muestra de orina. Más particularmente, el lupus eritematoso sistémico de etapa final se caracteriza por la proteinuria de orina persistente de más de 2 gramos/24 horas de muestra de lA.¡ f.?.<í- *. ,á-taA?t .. ~Juaa** *.** —?bt**- - -— - . ..- - - "- -*»>J-^ .--i- -- * .. ____: > wr.- *¿s*+. t- ll orina. Más particularmente, el lupus eritematoso sistémico de etapa final se caracteriza por proteinuria de orina persistente de más de 2.5 gramos/hora en muestra de orina. La "interacción ICAM-l-LFA-1" se refiere al enlace entre ICAM-1 y LFA-1. Los términos "ICAM-1" y "molécula de adhesión intracelular-1" son sinónimos. Los términos "LFA-1" y "adhesión de factor de leucocitos -1" son sinónimos. La interacción ICAM-l-LFA-1 puede ser detectada y medida in vitro usando técnicas que son bien conocidas por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. Por ejemplo, véase la Patente de los Estados Unidos NO. 5,284, 931. El término "mamífero" incluye, perros, gatos, • vacas, caballos, ratones, ratas, jerbos, cobayos, cerdos, hurones y primates (humanos, simios, chimpancés, gorilas y monos). En una modalidad preferida, el mamífero es un humano. En los métodos de la presente invención, la relación sinergística de (i) un agente que regula la interacción ICAM-l-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interacción de CD40-ligando CD40 puede ser proporcionado al sujeto tanto individualmente, o juntos en la misma (es decir, unitaria) composición farmacéutica. Una composición unitaria es una composición farmacéutica que comprende (i) un agente que regula la interacción ICAM-l-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interacción de CD40-ligando CD40.

Naturalmente, la composición unitaria puede ser administrada con frecuencia como se considere necesario para lograr el efecto terapéutico deseado. "Portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquier material el cual cuando se combina con un agente terapéutico, retiene la actividad del agente terapéutico y es no reactivo con el sistema inmune del mamífero. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de los portadores farmacéuticos estándar tales como una solución salina amortiguada con fosfato, agua, emulsiones tales como una emulsión de aceite /agua, y varios tipos de agentes humectantes. Otros portadores pueden incluir también soluciones estériles, tabletas, las cuales incluyen las tabletas recubiertas, y cápsulas. Típicamente, tales portadores contienen excipientes, tales como almidón, leche, azúcar, ciertos tipos de arcilla, gelatina, ácido esteárico, o sales de los mismos, estearato de magnesio o calcio, talco, grasas vegetales o aceites, gomas, glicoles, u otros excipientes conocidos. Tales portadores pueden incluir también aditivos saborizantes y colorantes u otros ingredientes. Las composiciones las cuales comprenden tales portadores son formuladas por métodos convencionales bien i¡l_.¿.x aA,?.?-t±.?.>.?. :. ¡aten»*,. ^at^ iA.. .. *. * ¿». c~j< »t * <-. --* - -*•--»* ' »a«-« At.tijliil conocidos . Las composiciones de la presente invención pueden ser formuladas de acuerdo a los métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, donde estos materiales, o sus derivados funcionales, son combinados en mezcla con un vehículo portador farmacéuticamente aceptable. Los vehículos adecuados y su formulación, están descritos, por ejemplo, en Remington's, Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. R. Gennaro, Ed. , Mack Publ., Easton, PA (1990). Pueden ser empleados métodos farmacéuticos adicionales para controlar la duración de acción. Las preparaciones de liberación controlada pueden ser alcanzadas a través del uso de polímeros para formar un complejo o absorber los agentes terapéuticos. El suministro controlado puede ser ejercido al seleccionar macromoléculas apropiadas (por ejemplo poliésteres, poliaminoácidos, polivinilo, pirrolidona, etilenvinilacetato, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o protamina, sulfato) y la concentración de macromoléculas así como también los métodos de incorporación con el fin de controlar la liberación. Otro método posible para controlar la duración de acción por las preparaciones de liberación controlada es incorporar el agente terapéutico en partículas de un tsL.E-im.itea..>«.-->». . jto.i..» . * i. *'' * . !* &. , .- ». «,o~~~-g = . «~<, ?t?ntti* material polimérico tal como poliésteres, poliaminoácidos, hidrogeles, poli (ácido láctico) o copolímeros de vinilacetato de etileno. Alternativamente, en lugar de incorporar estos agentes en las partículas poliméricas, el agente terapéutico puede ser atrapado en microcápsulas preparadas, por ejemplo, por técnicas de coacervación o por polimerizac ón interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa, o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli (metilmetacilato) , respectivamente, o en sistemas de suministro de fármaco coloidal, por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas, y nanocápsulas o en macroemulsiones . Tales técnicas están descritas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.R. Gennaro, Ed., Mack Publ., Easton, Pa (1990) ) . La "administración simultánea" comprende la coadministración de por lo menos dos agentes terapéuticos, independientemente de las frecuencias relativas o sincronización de la administración de los agentes respectivos. De esta forma, la administración simultánea comprende la coadministración de por lo menos dos agentes terapéuticos en el mismo tiempo y en las mismas frecuencias de administración. Además, la administración simultánea se refiere a la coadministración de por lo menos dos agentes ?i&.A Á ¿»tfe~_, terapéuticos, en la cual se administra un agente más frecuentemente que los otros. Además, la administración simultánea se refiere a la coadministración de por lo menos dos agentes terapéuticos, en los cuales se administra un agente solamente una vez durante la administración del otro agente. En los métodos y composiciones de la presente invención, pueden ser administrados otros agentes además de (i) el agente que regula la interacción ICAM-l-LFA-1, y (li) el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40. El "efecto sinergístico" se refiere, in vitro, un efecto sinergístico es uno que es mayor que el efecto aditivo que puede ser predicho al sumar los efectos reales de los agentes individuales in vitro. In vivo, un efecto sinergístico es un efecto fisiológico, y particularmente un efecto terapéutico, que es mayor que el efecto aditivo que puede ser predicho al sumar los efectos reales de los agentes individuales in vivo. De esta forma, si se administran dos agentes, juntos proporcionan un efecto fisiológico medible, y particularmente un efecto terapéutico, si el efecto real de los agentes juntos es mayor que el que puede ser predicho al sumar los efectos terapéuticos reales de los agentes individuales. Más particularmente, se proporciona un efecto sinergístico cuando un primer agente solo no proporciona un v - efecto medible, un segundo agente solo proporciona algún efecto medible, y juntos los dos agentes proporcionan un efecto medible mayor que el efecto proporcionado por el 5 segundo agente solo. Todavía más particularmente, se proporciona un efecto sinergístico cuando ni un primer agente solo ni un segundo agente solo proporcionan ningún efecto medible, pero juntos los dos agentes proporcionan un efecto medible. 10 La "relación sinergística" se refiere a una relación de dosis de los agentes terapéuticos que proporciona un efecto sinergístíco. Una relación sinergística de agentes terapéuticos puede ser determinada por una persona con experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación prolongada. Véase Chou, Sinergism and Antagonism in Chemotherapy, Acad. Press, San Diego, pág. 61-102 (1991) . Por ejemplo, puede ser determinada la eficacia, farmacocinéticas y farmacodinámicas para las ' 'varias relaciones. Pueden ser administradas varias relaciones de dosis a sujetos de prueba, hasta que una o más de las relaciones probadas se encuentra que proporciona un efecto sinergístico. Los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para disminuir la severidad de ? A.?:.«Í afc «jfrTJ s una enfermedad establecida. Por ejemplo, en la artritis reumatoide, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para disminuir el edema en una o más articulaciones afectadas, disminuir dolor en una o más articulaciones afectadas, o incrementar la movilidad en -una o más articulaciones afectadas. En el lupus eritematoso sistémico, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para disminuir la proteinuria (medida en un espécimen de orina e 24 horas), disminuir la progresión de la proteinuria de los pacientes, o detener la progresión de la proteinuria de los pacientes. El "efecto terapéutico" se refiere a un efecto medible y clínicamente benéfico proporcionado a pacientes a los cuales se administran agentes terapéuticos, con relación al efecto obtenido en un sujeto al cual no se proporcionan los agentes. De esta forma, un sujeto al cual se administran los agentes experimentarán mejora en su enfermedad autoinmune, o por lo menos la prevención de progresión adicional de la enfermedad. Por ejemplo, un sujeto con artritis reumatoide experimentará una o más de las disminuciones en dolor, un incremento en la movilidad y/o capacidad de soportar peso en una articulación afectada, una disminución en el edema de la articulación, o por lo menos sin empeoramiento adicional de la artritis. í??Á A?t.hdi?,^ Un sujeto con lupus eritematoso sistémico de etapa final experimentará una disminución en la proteinuria (medida en un espécimen de orina de 24 horas), o por lo menos sin empeoramiento adicional de la proteinuria, o una 5 disminución en el nivel de anticuerpos de ADN de doble cadena anti-IgG. En una modalidad preferida de la presente invención, el agente que regula la interacción ICAM-l-LFA-1 y el agente que regula la interacción de CD40-ligando CD40 se administran simultáneamente. Mientras los métodos y composiciones de la presente invención son adecuados para tratar la enfermedad autoinmune generalmente, son particularmente adecuados para tratar la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico. Los métodos y composiciones de la presente invención son todavía más adecuados para tratar el lupus eritematoso sistémico de etapa final. La terapia de combinación proporcionada por los métodos y la composición de la presente invención puede ser incrementada por la administración de uno o más agentes inmunosupresores, tales como la ciclosporina. Para una lista de agentes inmunosupresores, véase Gilman, A. G. Et al., Goodman and Gilman's the Pharmacologial Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill Book Company (1995) . =a¿aá Í6 £g6¿¿feai_.i.¿....t . ^.....i.j.t. ..:.....,.., ,-...»,.. -. _ ,*. , *> -^ ,M?. >«>*—,„ . .^^.¿AÜA Las composiciones de la presente invención pueden ser usadas también para tratar pacientes con transplante de órganos en una amplia variedad de situaciones de transplante de tejido y órganos. Hay ciertas situaciones, tales como con un transplante alogeneico o en la enfermedad de "injerto contra huésped", donde puede ser extremadamente útil para suprimir la respuesta inmune con el fin de evitar el rechazo de tejido u órganos extraños útiles. Los tejidos y órganos alogeneicos son tejidos y órganos a partir de un miembro genéticamente diferente de la misma especie. La enfermedad de "injerto contra huésped" ocurre donde el tejido transplantado, por ejemplo en un transplante de médula ósea, contiene células T alogeneicas del donador las cuales provocan una respuesta inmune contra los tejidos propios del receptor. Aunque las respuestas inmunes mediadas tanto humorales y celulares juegan un papel en el rechazo de tejidos y órganos alogeneicos, el mecanismo primario implicado es la respuesta inmune mediada por células. La supresión de la respuesta inmune, y en particular, la supresión de la respuesta inmune mediada por células, puede de esta forma ser útil en evitar tal rechazo de los tejidos y órganos de aloinjerto. Las composiciones de la presente invención pueden ser usadas para inducir la í Á- .? A. *+?XiM. I <«hn.j">. »*. - • - - * " - .*<»« H.j'Jt-^<^? 7ti .*r ,.* ^. ?, - - ,*»¿ «JalwfafaiJ tolerancia a las células T en un receptor de un injerto de • •/ -un tejido u órgano tal como las isletas pancreáticas, hígado, riñon, corazón, pulmón, piel, músculo, tejido neuronal, estómago e intestinos. 5 Habiendo descrito generalmente la invención, la misma será más fácilmente entendida por referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se proporcionan por la forma de ilustración y no se proponen como limitantes. Ejemplo 1 10 Artritis inducida por colágeno Modelo de artritis reumatoide Se ha descrito la artritis inducida por colágeno (CÍA) como un modelo animal para estudiar los fármacos potenciales o activos biológicos en la artritis reumatoide humana. (Nabozny, G.H. et al., Autoinmunity 20:39-49 (1995); Guidance for Industry, Clinical Development Programs for Drugs, Devices and Biological Products for the Treatment of Rheumatoid Arthritis (RA) , U.S. Dept. Health & Human Services (1999)). En los siguientes ejemplos, se estudian el papel de ICAM-l/LFA-1 y las trayectorias de regulación de CD40/CD40L en el modelo de CÍA establecida. A menos que se describa de otra forma, se realizan estudios que usan el modelo animal de CÍA como sigue. Se obtienen los ratones macho y hembra BIO. RUI a ím*í&. .2*, . I,,,,,»*...*.... Aaataam.^,. partir de Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) y tienen 10-12 semanas de edad en el inicio de los experimentos. Los animales se identifican por microchips subcutáneos y se mantienen de acuerdo con las pautas de BIACUC. Para inducir la artritis, se disuelve colágeno (CH) del tipo II porcino nativo liofilizado durante la noche en 4°C en ácido acético 0.01 N en una concentración de 2 mg/ml. Se emulsifica entonces la solución del colágeno en una relación 1:1 con adyuvante de Freund Completo (el cual contiene 2 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis cepa H37Ra) . Todos los animales reciben una sola inyección intradérmica de 100 µl (la cual contiene 100 µg de colágeno del tipo II) de emulsión fría en la base de la cola. Al iniciar 12-14 días después de la inmunización, todos los animales se monitorean diariamente para signos de artritis clínica, como se indica por eritema y edema de miembro. Los animales artríticos son enrollados aleatoriamente en grupos de estudio hasta que se obtiene un total de 7-10 animales/grupo. Después del enrolamiento, un animal recibe el tratamiento, como se indica posteriormente, por un periodo de 35 días (cinco semanas) . Los anticuerpos que se dan 3 veces por semana se dan en el día Lunes (L) , Miércoles (M) y Viernes (F) . Después del enrolamiento, todos los animales se ...Í.? ,i t. monitorean 3 veces por semana para severidad de la artritis. La extensión de la artritis por pata es graduada en una escala de 0-4 como sigue: 0=normal, l=eritema y edema en 1-3 dedos; 2= edema y eritema severos que comprenden las articulaciones del tarso y metatarso; 3= deformidad de la articulación junto con edema y eritema que comprende las articulaciones del tarso y metatarso; 4= anquilosis de articulación. La clasificación clínica por pata se suma para dar una clasificación posible máxima de 16 por animal. En el enrolamiento y/o cinco semanas post-tratamiento, todos los animales son sangrados y se determina el nivel de colágeno del tipo II porcino específico a IgG en el suero por ELISA. Se agregan 100 µl de solución de cubierta de colágeno (10 µg colágeno/ml en KP04 0.15 M (pH 7.6)) a cada pozo de placas preenfriadas en hielo. Se cubren las placas recubiertas, se incuban durante la noche en 4°C, y después se lavan con amortiguador de P/B/T frío (solución salina amortiguada con fosfato/Tween 20 al 0.05%/ NaCl 0.2 M) . Se agregan 300 µl de amortiguador de bloqueo frío (P/N/T/albúmina sérica bovina al 1%) a cada pozo mientras las placas están en el hielo. Se cubren las placas, se incuban durante la noche en 4°C, y se lavan con amortiguador P/N/T frío. Se agregan 100 µl de suero diluido y muestras de prueba de suero a pozos por duplicado. Se colocan los controles de suero negativo (no inmunizado) y positivo (conocido) en los pozos apropiados. Se cubren las placas, se incuban durante la noche en 4°C, y se lavan con amortiguador P/N/T frío. A temperatura ambiente, se agregan 100 µl de solución conjugada (fracción de IgG conjugado con peroxidasa de IgG CII de cabra anti ratón o ratón (específico a cadena pesada y ligera) (Organon Técnica, Durham, NC) a cada pozo, se cubren las placas, se incuban en oscuridad por una hora. Después de lavar tres veces con amortiguador P/N/T, se agregan 100 µl de solución substrato (O-fenilendiamina/citrato 0.C5 M, pH 5.0) a cada pozo, y se incuban las placas en la oscuridad por 15-20 minutos. Para detener las reacciones, se agregan 50 µl de H2S04 2.5 N a cada pozo. Se mide la absorbancia en 492 nm en un lector Titertek. Se mide el edema provocado por una respuesta inflamatoria por pletisometría. El desplazamiento medio del mercurio (Hg) en un ensayo de inflamación a base del volumen de la pata. La pata del animal vivo se sumerge, hasta el malleolus externo, en un vaso de precipitados lleno con mercurio, y se mide el desplazamiento de volumen más o menos el error estándar.

Se obtienen los clones de mieloma YN1/1, M17/4.4, y MR-1 a partir de American Type Tissue Collection, y se preparan los anticuerpos. Se determinan las diferencias en la severidad artrítica entre los grupos usando tanto la prueba Wilcoxon-Mann Whitney o la prueba de la t de student. Las diferencias en el nivel del IgG de colágeno tipo II y el grado de edema de la pata se determina usando la prueba de la t de student. Ejemplo 2 El efecto de la terapia de combinación del anticuerpo del ligando anti-CD40 (CD40L) y anticuerpo anti- ICAM-1 se compara con el efecto de la terapia con betametasona. En los estudios a partir de los cuales se obtienen los datos en las Figuras ÍA y IB, se usan ocho a diez animales macho con CÍA establecida para cada tratamiento respectivo. En la Figura ÍA, se muestra la clasificación de artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. 3 veces/semana); (T) .-anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (A): beta-metasona (5 mg/kg/i-p. cada día) ; (•) solución salina amortiguada con fosfato (0.2 ml i.p. cada día); ( ) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana); .J ak I ,.* .^* nA-?it é** (*) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana) /anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana). * p<0.05 contra controles de IgG de rata y de PBS. El tratamiento con anticuerpo anti-CD40L solo no altera la progresión de la CÍA, con relación a los _ tratamientos de control (PBS o IgG de rata) . En contraste, el tratamiento con el anticuerpo anti-ICAM-1 solo muestra una inhibición significativa de severidad de CÍA. La terapia de combinación del anticuerpo anti-CD40L y el anticuerpo anti-ICAM-1 proporciona un efecto sinergístico, en todos los puntos de tiempo. La Figura IB representa el nivel de IgG de colágeno tipo II 5 semanas después de los tratamientos indicados. Se ensaya el IgG anti-CH en un ensayo ELISA, y " sc muestra como las unidades media de la actividad de peroxidasa (OD=492 nm) por ml XlO"3 + error estándar. El tratamiento con el anticuerpo anti-CD40L modula significativamente la producción del anticuerpo, con relación al control de IgG de rata. *p<0.05 contra el control e IgG de rata. En contraste, el tratamiento con el anticuerpo anti-ICAM-1 solo no tiene efecto en los niveles de anticuerpo IgG de colágeno tipo II. La terapia de combinación inhibe significativamente los niveles de ¿> *^ anticuerpo de IgG de colágeno tipo II más efectivamente que cualquier monoterapia. ** p<0.05 contra los controles de - IgG de rata y solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . Ejemplo 3 Para la terapia de combinación, se determina el efecto de la dosis del anticuerpo anti-ICAM-1. En los estudios a partir de los cuales se obtienen los datos en las Figuras 2A-G, nueve a diez animales macho con CÍA establecida se usan para cada tratamiento respectivo. La Figura 2A representa el efecto de una dosis del anticuerpo anti-CD40L y del anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. 3 veces/semana); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (A) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. 3 veces/semana); (F): anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p. 3 veces/semana). El tratamiento con MT-1 solo produce un efecto que es significativamente diferente del control de IgG de rata solamente en la semana 3. El tratamiento YN-1/1 solo (250 µg) es significativamente diferente del control rlgG en todos los puntos el tratamiento YN-1/1 solo (125 µg) es significativamente diferente del control rlgG en todos los puntos no la semana 3. El tratamiento YN-1/1 solo (50 µg) es significativamente diferente del control rlgG en las semanas 2, 3, 4, pero no en las semanas 1 y 5. En este intervalo de dosis de YN1/1, no se obtiene una respuesta a la dosis. La Figura 2B representa el efecto sinergístico de una dosis de un anticuerpo anti-CD40L y de un anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media para la terapia de combinación anti-CD40L y anti- ICAM-1. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (fl) : IgG de rata (500 µg i.p. 3 veces/semana); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg í.p. 3 veces/semana); (A) : anticuerpo MR-1 anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. 3 veces/semana); (T) : anticuerpo MR-1 anti-CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. 3 veces/semana); ( ): anticuerpo MR-1 ligando anti- CD40 (250 µg i.p. 3 veces/semana) y anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (50 µg i.p. 3 veces/semana). La Figura 2C representa el efecto sinergístico de una dosis del anticuerpo anti-CD40L y de un anticuerpo anti-ICAM-1 en la clasificación de la severidad artrítica media para la terapia de combinación anti-CD40L y anti- ICAM-1. En la Figura 2C, mientras los datos (•) representan el efecto de la terapia de combinación para 5 dosis, los datos (A) , (T) y (F) representan el efecto de la terapia de combinación (diferente a las dosis del anticuerpo anti- ICAM-1) para 5 semanas. Los datos obtenidos después de cinco dosis revela un retraso en la progresión de la enfermedad, y no una respuesta inmune de larga duración. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (fl) : IgG de rata (500 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 1 semana); (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas); { ? ) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) ; (F) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas) y anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (50 µg i.p. Q.I.D., MWF por 5 semanas).

Ejemplo 4 La Figura 2D representa el efecto del anticuerpo anti-ICAM-1 o el anticuerpo anti-CD40L en el desplazamiento medio de mercurio (Hg) en un ensayo de inflamación basado en el volumen de la pata. El edema provocado por una respuesta inflamatoria es medido por pletisometría. La pata del animal vivo se sumerge, hasta el malleolus externo, en • un vaso de precipitados lleno con mercurio, y se mide el desplazamiento medio en volumen más o menos el error estándar, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (A) :anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (250 µg i.p. Q.I.D., MWF); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (125 µg i.p. Q.I.D., MWF); (F): anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (50 µg i.p. Q.I.D., MWF). El anticuerpo MR-1 no es significativo en cualquier punto de tiempo. Mientras que todas las dosis YN1/1 producen un efecto significativo en la semana 1, solamente la dosis de 250 µ de YN1/1 produce un efecto significativo en la semana 3, y ninguna de las dosis YN1/1 produce un efecto significativo en la semana 5. La Figura 2E representa el efecto smergístico del anticuerpo anti-ICAM-1 y el anticuerpo anti-CD40L en el desplazamiento de mercurio medio (Hg) en un ensayo de inflamación a base del volumen de pata, (fl) : IgG de rata (500 µg i.p.); (•) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.); y anticuerpo YNl/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p.) por 5 dosis; (A) anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg 'i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (250 µg i.p.) por 5 semanas; (T) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (125 µg i.p.) por 5 semanas; (F) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl (50 µg i.p.) por 5 semanas) . Todas las combinaciones MR-1/YN1/1 producen un efecto sinergístico, comparadas con el efecto del anticuerpo MR-1 solo o el anticuerpo YN1/2 solo (véase la Figura 2D) . La Figura 2F representa la inhibición sinergística de la artritis establecida a través de la terapia de combinación de anti-ICAM-1 y anti-CD40L. Se muestra la clasificación artrítica media en los enrolamientos y la semana 5 (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. * p <0.05 contra los controles IgG de rata. La Figura 2G representa la inhibición . smergistica del edema establecido a través de la terapia de combinación anti-ICAM-1 y anti-CD40L. Se muestra el desplazamiento medio de Hg en el enrolamiento y la semana 5 (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. * p<0.05 contra los controles de IgG de rata. A diferencia del tratamiento profiláctico, el cual inhibe efectivamente la inducción de la artritis, el tratamiento terapéutico (tratamiento de la enfermedad establecida) con el anti-CD40L no altera la progresión de la enfermedad. El tratamiento con anti-CD40L no afecta, sin embargo, la respuesta humoral al disminuir los niveles del anticuerpo para el colágeno del tipo II en la semana ciño, comparado con los controles de IgG de rata. En contraste, los ratones tratados con el anti-ICAM-1 solo muestra una inhibición significativa de la severidad de Cia, pero sin afectar los niveles de IgG de colágeno del tipo II. Remarcablemente, los animales que reciben el tratamiento de combinación con anti-ICAM-1 y anti-CD40L no muestran progresión de CÍA sobre el periodo de 5 semanas, y, en algunos casos, muestra una inversión de la artritis -observada en el momento del enrolamiento. Sorpresivamente, el tratamiento de combinación (anti-ICAM-1 y anti-CD40L) inhibe los niveles de anticuerpo específicos al colágeno del tipo II más efectivamente que cualquier tratamiento solo. Ejemplo 5 En los estudios a partir de los cuales se obtienen los datos en las Figuras 3A-B, se usan diez animales machos con CÍA establecida para cada tratamiento respectivo. La Figura 3A representa el efecto de la terapia de combinación del anticuerpo anti-CD40L y el antagonista LFA-1 en la clasificación de la severidad artrítica media. LFA-1 "A" es un antagonista LFA-1 y es el compuesto sintetizado en el Ejemplo 271 en la página 221 de la solicitud de patente internacional No. PCT/US98/04254 (WO 98/39303) . La estructura del antagonista LFA-1 "A" es: Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (A): control de aceite de oliva (100 µl P.O. b.i.d.); (•) : antagonista LFA-1 "A" (30 mg/kg P.O. b.i.d); (fl) : antagonista LFA-1 "A" (30 mg/kg P.O. b.i.d.) y anticuerpo MR-1 anti-CD40L (250 µg i.p. 3X/semana) . El antagonista "A" LFA-1 solo no es efectivo. Sin embargo, en combinación, el tratamiento con el antagonista "A" LFA-1 y el anticuerpo del MR-1 ligando anti-CD40 es significativamente diferente que el control "de aceite de oliva. La Figura 3B es una gráfica de barras que representa el nivel del IgG de colágeno tipo II 5 semanas después de los tratamientos indicados. Se ensaya el IgG anti-CH en un ensayo de ELISA, y se muestra como las unidades medias de la actividad de la peroxidasa (OD=492 nm) por ml x 10"3 + error estándar. Después de cinco semanas de tratamiento con aceite de oliva (control) , los animales exhiben una disminución del 11.1% en IgG CII. Después de cinco semanas de tratamiento con el antagonista "A" LFA-1, los animales exhiben un incremento del 1.6% en IgG de CII.

Después de cinco semanas de terapia de combinación con tratamiento con el antagonista "A" LFA-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L, los animales exhiben una disminución del 65.2% en IgG de CU. El antagonista "A" LFA-1 solo no es efectivo. Sin embargo, en combinación, el tratamiento con el antagonista "A" LFA-1 y el anticuerpo MR-1 ligando anti-. CD40 es significativamente diferente del control de aceite de oliva. Ejemplo 6 La Figura 4 representa la inhibición sinergística de la artritis establecida a través de la terapia de ¿¡Ata combinación anti-LFA-1 y anti-CD40L. Se muestra la clasificación artrítica media (+ error estándar) para cada tratamiento respectivo. (A) :LFA-1 antiratón de rata mAb MI7/4.4 (250 µg i.p. 3X/semana) ; (•) : anticuerpo del ligando anti-CD40 de hámster mAb MR-1 (250 µg i.p. 3X/semana); (Y) : combinación M17/4.4 + MR-1 (250 µg + 250 µg i.p. 3X/semana) . Los ratones de control reciben: (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. 3X/semana) ; * p< 0.05 contra los controles de IgG de rata. Ni el tratamiento con MR-1 ligando anti-CD40 solo ni el tratamiento con el anticuerpo anti-LFA-1 M17/4.4 solo es efectivo. Sin embargo, la terapia de combinación proporciona un efecto sinergístico. Ejemplo 7 La Figura 5 representa el efecto sinergístico del anticuerpo anti-ICAM-1 y la ciclosporina en la clasificación de la severidad artrítica media. Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (fl) : IgG de rata (50 µg i.p., Q.I.D., MWF); (•) : aceite de oliva (100 µg P.O., B.I.D.); (*) ciclospopna 30 mg/kg P.O., B.I.D.); (T) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p., Q.I.D., MWF); (A): ciclosporina 30 mg/kg P.O., B.I.D.) y anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (50 µg i.p., Q.I.D., MWF). La ciclosporina proporciona un efecto .& Jt* S?ai* fr- . —-—•-- —*- . ... significativo en la semana 5. El efecto de YN1/1 (50 µg) solo es significativamente diferente del efecto de IgG de rata en las semanas 3, 4 y 5. Se observa un efecto sinergístico en todos los puntos de tiempo para la terapia de combinación. La Figura 6 representa el efecto de la terapia de combinación del antagonista LFA-1 y la ciclosporina en la clasificación de la severidad artrítica media. LFA-1 "B" es un antagonista LFA-1 y es el compuesto sintetizado en el Ejemplo 102 en la pagina 125 de la solicitud de patente internacional no. PCT/US98/04254 (WO 98/39303). La estructura del antagonista LFA-1 "B" es: Se muestra la clasificación de la severidad de la artritis media (+ error estándar) en el tiempo para cada tratamiento respectivo. (A): control del aceite de oliva (100 µl P.O. b.i.d); (fl) : antagonista LFA-1 "B" (50 mg/kg P.O. b.i.d); (•) :ciclosporina (30 mg/kg P.O. b.i.d.); (Y): llÍ«á«S. „á«„*.. antagonista LFA-1 "B" (50 mg/kg P.O. b.i.d.) y ciclosporina (30 mg/kg P.O. b.i.d.). Se observa un efecto sinergístico en las semanas 3, 4 y 5. Ejemplo 8 Modelo de ratón (NZB/NZW) Fi de lupus eritematoso sistémico La cepa de ratón (NZB/BZW) Fi desarrolla espontáneamente una enfermedad autoinmune con un curso que es similar al lupus eritematoso sistémico (SLE) , y se ha descrito la cepa como un modelo animal de SLE (Ye, Y.-L, y B.-L. Chiang, Clin. Exp. Rheum. 16: 33-37 (1998)). La cepa (NZB/BZW) Fi desarrolla espontáneamente los anticuerpos IgG anti-dsDNA, una característica de lupus, y desarrolla proteinuria, lo cual lleva a grados incrementados de nefritis. Los ratones (NZB/NZW) Fi usualmente mueren tempranamente de uremia o falla completa del riñon (Clin. Exp. Rheum. 16:33-37 (1998)). La producción de autoanticuerpos, la deposición de complejos inmunes y la activación del sistema complemento son todos eventos tempranos que llevan a la nefritis en pacientes con lupus. La infiltración de células inflamatorias y su interacción con las células renales residentes está implicada en la progresión del daño renal, y la amplificación de respuestas inflamatorias en lupus nefritis (Véase Belmont, H.M., "Lupus Nefritis: Treatment .¿..fej.i H?1MÍ1 Issues", http: //cerebel . com/lupus/nephritis . html (Agosto 28 de 1999) ) . La proteinuria es generalmente aceptada como un marcador de progresión de enfermedad (Artritis Advisory Committee, Design and Assessment of Clinical Triáis of Drugs, Biologics and Devices That Are Being Developed for Treatmen of Systemic Lupus Erythematosus, U.S. Dept. Health & Human Services (1999)). En los siguientes ejemplos, se estudia el papel de las trayectorias de regulación de ICAM-1 y CD40L durante la enfermedad en la etapa temprana, tardía y final en ratones (NZB/NZW) Fi con tendencia a lupus. La enfermedad en la cepa (NZB/NZW) Fi puede ser categorizada como etapa "temprana", "tardía" o "final", dependiendo de la cantidad del grado de proteinuria observada en el animal. La etapa temprana se refiere a los ratones (NZB/NZW) Fi en una edad de 4-5 meses. En esa edad, los ratones generalmente exhiben una proteinuria (24 horas) cuantitativa de menos de 300 mg/dl de proteína en una muestra de orina de 24 horas, y un nivel detectable de anticuerpos de ADN de anti doble cadena (intervalo aproximado de 50-300 IU/ml) . La etapa tardía se refiere a ratones (NZB/NZW) Fi en una edad de 6-7 meses. En esa edad, los ratones generalmente exhiben una proteinuria cuantitativa (24 horas) de más de 300 mg/dl de proteína en una muestra de orina de 24 horas, y niveles incrementados de anticuerpos de ADN antidoble cadena (intervalo aproximado de 300-1500 5 IU/ml) . La etapa final se refiere a ratones (NZB/NZW) Fi con proteinuria de más de 2,000 mg/dl de orina en una muestra de orina de 24 horas. Ejemplo 9 10 Materiales y Métodos En los siguientes ejemplos, se obtienen ratones (NZB/NZW) Fi hembra de 3-6 semanas de edad del Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) . Se identifican los animales por microchips subcutáneos y se mantienen de acuerdo con las pautas BIACUC hasta uso experimental. Para estudios en la enfermedad de la etapa temprana, se estudian animales en una edad de 4-5 meses. Se enrolan 51 animales al azar en grupos de diez a once por régimen de tratamiento. Los grupos 1-4 reciben tratamientos 20' por un periodo de dos meses, y los animales en el grupo 5 , no reciben tratamiento hasta la edad de 6-7 meses, la edad en la cual los animales entran a la enfermedad en una etapa tardía. Se tratan los animales como se indica en la Tabla 1. ¡¡.•. *.; ú¡j&k,,j¡ , .. i _. ^ i ...^w . - - --- -- . _. , *.M~-* •*. - . —«*- -' ** 0 Para estudios en la enfermedad en la etapa 5 tardía, se enrolan 20 animales hembra de 6 a 7 meses de edad al azar en grupos de seis animales por régimen de tratamiento. Los grupos 1-3 reciben tratamientos por un periodo de dos meses, como se indica en la Tabla 2. 0 ém?á.í.íÁ aataaia, ,» .^^. - - ;. ---¿~- ¿, , , ,„;_... .jtoá t ..Í»t: ,'.

Para estudios en la enfermedad en la etapa tardía, se usan 100 animales hembra de 6-8 meses de edad. Se toma semanalmente una muestra de orina de 24 horas, y se cuantifica la proteína total en la orina usando un analizador de química automatizado. Después de exhibir un nivel de proteína de orina de más de o igual a 2,000 mg/dl para una muestra de 24 horas, se enrolan los animales al azar en grupos de seis a siete por grupos 1, 2, 3a y 4a. Después de exhibir un nivel de proteína en orina de más de o igual a 4,000 mg/dl por una muestra de 24 horas, se enrolan al azar los animales en grupos de seis a siete por para los grupos 3b y 4b. Los tratamientos con como se muestra en la Tabla 3. 1fr ~ : En toaos los estudios, se alojan los animales en jaulas de metabolismo. Se toma una muestra de suero y una de orina de 24 horas en el enrolamiento y aproximadamente cada dos semanas para monitorear la progresión de la enfermedad. Se usan muestras de orina fresca para determinar la proteína total en la orina que se cuantifica usando un analizador de química Hitachi 911 automatizado. Se determinan los anticuerpos para el ADN de doble cadena (ds) usando en ensayo de ELISA. Se recolectan las muestras de sangre por medio de la vena de la cola en tubos de suero, se permite coagular, y se separa el suero.

Se almacenan las muestras de suero sin diluir en -20°C hasta que se analiza. Se determinan los autoanticuerpos para ds-DNA en suero por ELISA (The Binding Site, Birmingham, England, catalogue #MK017). Se prerecubren los micropozos con antígeno dsDNA de timo de ternera. Se agregan los calibradores, y controles diluidos y muestras de ratón a los pozos y los anticuerpos que reconocen el antígeno dsDNA se enlazan durante la primera incubación. Después de lavar los pozos para eliminar la proteína no enlazada, se agrega el conjugado de IgG anti humano de conejo etiquetado con peroxidasa purificada a los pozos que contienen los calibradores y los controles diluidos. SE agrega el conjugado IgG antiratón de cabra etiquetado con peroxidasa purificada a los pozos de muestra de ratón. El conjugado enlazado al autoanticuerpo humano o de ratón capturado, y el exceso de conjugado no enlazado ee elimina por una etapa de lavado adicional. El conjugado enlazado se visualiza con el substrato tetrametilbencidina (TMB) , lo cual da un producto de reacción azul, la intensidad del cual es proporcional a la concentración del autoanticuerpo en la muestra. Se agrega el ácido fosfórico a cada pozo - para detener la reacción. Esto produce un color de punto final amarillo, el cual se cuantifica espectrofotométricamente en un lector de 96 pozos usando i i ü.).Jl .. ......&£— ,3^ . una absorbancia de 450 nm (Vmáx. Molecular Devices) . Ejemplo 10 La Figura 7 representa el efecto de varios tratamientos en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en una etapa temprana, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=8); (•) : anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y el anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll); (Y) : etapa tardía: anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=10) . La Figura 8 representa el efecto de varios tratamientos en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana. (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=8); (•) •anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10); (A) :anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10); (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll). Se terminan los tratamientos dos meses después de que se inician. La Figura 9 representa el efecto de varios tratamientos en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana. (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (•) anticuerpo YNl/anti- ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (A) : anticuerpo MR-1 '5 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. 10 La Figura 10 representa el efecto de varios tratamientos con anticuerpos en el nivel medio de IgG de anti-dsDNA en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa temprana, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=10); (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg 15 i.p. MWF, N=10); (Y): anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=10) ; (A): anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. MWF, N=ll). Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. 20 Como se muestra en las Figuras 7-10, YN1/1 retrasa significativamente la proteinuria e incrementa la - sobrevivencia, contra los controles de IgG de rata. Sin embargo, YN1/1 no tiene efecto en el nivel de los anticuerpos de ADN de doble cadena. En contraste, MR-1 solo bloquea la proteinuria y MR-1 solo incrementa la sobrevivencia, comparado con el grupo de tratamiento con YN1/1 solo y el grupo de control de IgG de rata. MR-1 también bloquea la producción de anticuerpos de ADN de doble cadena. Este efecto inhibitorio observado con MR-1 solo se sostiene bien después de que termina el tratamiento, a diferencia de los efectos observados en el grupo tratado con YN1/1 solo. Ejemplo 11 La Figura 11 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel de proteinuria media en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa tardía, (fl) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. Después de la examinación de los datos de proteinuria, hay una evidencia que la terapia de combinación es capaz de tratar efectivamente dos ratones con proteinuria >2,000 mg/dl. La Figura 12 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa tardía, (fl) : anticuerpo YN1/1 anti- ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. 5 La Figura 13 representa el efecto del anticuerpo • YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 ligando CD40L en el nivel medio del IgG anti-dsDNA en ratones (NZW/NZW) Fl con SLE en la etapa tardía de la enfermedad, (fl) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo administrado en 250 µg i.p. 3 veces/semana, N=10) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. Las Figuras 12 y 13 muestran que en la enfermedad tardía, se obtienen resultados similares como con MR-1 solo. -/ 15 La Figura 14 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 20 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti- CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. Hay un solo ratón en el grupo MR-1 con proteinuria > 2,000 mg/dl la cual no es tratable .

La Figura 15 representa el efecto del anticuerpo • YÑ1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. La Figura 16 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de IgG anti-dsDNA en los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía, (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti- CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . Los tratamientos se terminan dos meses después de que se inician. Como se muestra en las Figuras 14-16, en la enfermedad tardía, YN1/1 no tiene efecto en la proteinuria, sobrevivencia o producción de anticuerpo. MR-1 bloquea la proteinuria incrementada, disminuye los anticuerpos a la línea base, junto con sobrevivencia grandemente mejorada. Otra vez, estos efectos inhibitorios son sostenidos en todo el estudio. En resumen, mientras que la trayectoria ICAM-1 juega un papel importante en la progresión de la enfermedad temprana, la trayectoria de CD40L juega un papel principal en tanto las etapas temprana y tardía de la enfermedad. La Figura 17 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa tardía (la proteinuria es 2,000- 4,000 mg/dl). (fl) : IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (•) anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) ; (A) :anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada ant cuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=7) . Se observa un efecto sinergístico para la terapia de combinación YN1/1-MR-1. La Figura 18 representa el efecto del anticuerpo _ YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fx con SLE en la enfermedad en la etapa tardía. (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=6-7). La Figura 19 representa el efecto de la terapia de combinación del anticuerpo YNl/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L, contra el tratamiento MR-1 - sólo, en el % de sobrevivencia de los ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en el estado final (la proteinuria es 4,000-10,000 mg/dl). (A) : anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (250 µg i.p. MWF, N=6) . (F) : anticuerpo YN1/1 anti-ICAMl y anticuerpo MR-1 ligando anti-CD40 (cada anticuerpo se administra en 250 µg i.p. MWF, N=7) . La Figura 20 representa el efecto del nivel medio de IgG de rata de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa final. (D) : anticuerpo IgG de rata (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. No hay animales vivos en la semana 8. La Figura 21 representa el efecto del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa final. (0) anticuerpo YN/1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. En la semana 8, uno de los seis animales está vivo, y el nivel de proteinuria está bajo de 2,000 mg/dl. La Figura 22 representa el efecto del anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en la etapa final. (O) anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando se termina el tratamiento, dos de los seis animales están .* ^n?&. » - fcj4ai .j, vivos, y uno de los seis animales exhibe la proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. La Figura 23 representa el efecto sinergístico del anticuerpo YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en combinación con el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final. (?) anticuerpo YN1/1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=7). El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando termina el tratamiento, seis de los siete animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. De esta forma, la terapia de combinación resulta en sobrevivencia prolongada y proteinuria disminuida, contra el anticuerpo YN1/1 solo o el anticuerpo MR-1 solo. La Figura 24 representa el efecto del anticuerpo MR-1 anti-CD40L en el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) F con SLE en la enfermedad en una etapa final, que tienen un nivel de proteinuria de más de 4,000 mg/dl por una muestra de orina de 24 hora. (O): anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando termina el tratamiento, uno de los seis animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. • La Figura 25 representa el efecto del anticuerpo ti*„lt¡a,t* u YN1/1 anti-ICAM-1 y el anticuerpo MR-1 anti-CD40L en combinación con el nivel medio de proteinuria en ratones (NZB/NZW) Fi con SLE en la enfermedad en una etapa final, que tiene un nivel de proteinuria de más de 4,000 mg/dl por muestra de orina de 24 horas. (?) anticuerpo YN1/1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=6) . El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. Cuando termina el tratamiento, cuatro de los siete animales están vivos, y exhiben proteinuria en un nivel debajo de 2,000 mg/dl. De esta forma, la terapia de combinación resulta en sobrevivencia prolongada y proteinuria disminuida . La Figura 26 representa la comparación del efecto de la monoterapia con anti-CD40L con el efecto de la terapia de combinación del anti-ICAM-l/MR-1 anti-CD40L. El tratamiento inicia en el tiempo 0 y termina en la semana 8. La terapia de combinación resulta en una sobrevivencia prolongada y proteinuria disminuida. (A) : anticuerpo MR-1 (250 µg i.p. MWF, N=6) . (F): anticuerpo YN1/ 1 y anticuerpo MR-1 (cada uno en 250 µg i.p. MWF, N=7). En la enfermedad en la etapa final, donde se establecen la implicación renal y nefritis, y es menos efectiva la terapia con anti-CD40L. Mientras se observa un ligero efecto en la sobrevivencia, comparada con los aMrfo.a .-.¡pA v ~ >.. >.»*.*» »» «ateJA^J ÍO»AA.<fc*aJ»fa*Í*llt I T - iWfaa'' - ** . ?S* a* ¿» ¡A~ t .fc . .<. M¿sa ni fctist controles de IgG de rata (33% contra 0%) en la semana 8, solamente uno de los animales sobrevivientes tiene proteinuria disminuida (<2000 mg/dl) en la semana 8. Se observan resultados similares con la terapia anti-ICAM-1. En contraste con la monoterapia, se observan efectos sinergísticos con la terapia de combinación de anli-ICAM-1 y anti-CD40L. Se observan resultados remarcables en la sobrevivencia, comparados con los controles de IgG de rata y monoterapias (85% contra 0% y 33%, respectivamente) en la semana 8. Todos los animales sobrevivientes exhiben proteinuria disminuida (<2000 mg/dl) en la semana 8. Se observan también efectos benéficos en la sobrevivencia en el grupo 4b, donde ia proteinuria es >4000 mg/dl en el enrolamiento, comparados con la terapia con anti-CD40L (66% contra 16%, respectivamente). Todos los animales sobrevivientes exhiben proteinuria disminuida (<2000 mg/dl) en la semana 8. Por lo tanto, la terapia de combinación con anti- ICAM-1 y anti-CD40L, dada después de que se ha establecido la nefritis, resulta en efectos sinergísticos en la sobreviviencia y proteinuria, comparados con cualquier monoterapia . Será claro que la invención puede ser practicada de otra forma como se describe particularmente en la descripción y ejemplos mencionados anteriormente en la presente. • ' Son posibles numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención en la luz de las enseñanzas anteriores y, por lo tanto, están dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. La descripción total de todas las publicaciones (las cuales incluyen patentes, solicitudes de patente, artículos de revistas, manuales de laboratorio, libros, u otros documentos) citadas en la presente son incorporadas para referencia en la presente. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un método para el tratamiento de la enfermedad autoinmune, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero diagnosticado con la enfermedad autoinmune una relación sinergística de (i) un agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interacción de CD40-ligando CD40.
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque se administran simultáneamente el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque el ICAM es ICAM-1.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide.
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque la enfermedad autoinmune es lupus eritematoso sistémico.
6. El método de conformidad con la reivindicación 5, está caracterizado porque el lupus eritematoso sistémico es una enfermedad de etapa final.
7. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
8. El método de conformidad con la reivindicación 7, está caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo anti-ICAM o un fragmento activo del mismo.
9. El método de conformidad con la reivindicación 7, está caracterizado porque el anticuerpo anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1.
10. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
11. El método de conformidad con la reivindicación 10, está caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo ligando anti-CD40 o un fragmento activo del mismo.
12. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y/o el agente que regula ÍÍMH.?.3 .? ¡.l la interacción CD40-ligando CD40 es un agente no anticuerpo.
13. Un método para tratar la artritis reumatoide, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero diagnosticado con artritis reumatoide una relación sinergística de (i) un anticuerpo que regula la interacción ICAM-LFA-1, o un fragmento activo del mismo, y (ii) un anticuerpo que regula la interacción CD40-ligando CD40, o un fragmento activo del mismo.
14. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque el ICAM es ICAM-1.
15. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque se administran simultáneamente el agente que regula la interacción ICAM- LFA-1 y el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
16. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque el anticuerpo que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo anti- ICAM, y en donde el anticuerpo que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo ligando anti-CD40.
17. El método de conformidad con la reivindicación 16, está caracterizado porque el anticuerpo á=St anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1.
18. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo anti-LFA- 1. o un fragmento activo del mismo, y en donde el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo ligando anti-CD40 o un fragmento activo del mismo.
19. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y/o el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un agente no anticuerpo.
20. Un método para tratar el lupus eritematoso sistémico, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero diagnosticado con el lupus eritematoso sistémico una relación sinergística de (i) un anticuerpo que regula la interacción ICAM-LFA-1, o un fragmento activo del mismo, y (ii) un anticuerpo que regula la interacción CD40-ligando CD40, o un fragmento activo del mismo.
21. El método de conformidad con la reivindicación 22, está caracterizado porque el ICAM es ICAM-1.
22. El método de conformidad con la „ . reivindicación 20, está caracterizado porque el lupus eritematoso sistémico es una enfermedad de etapa final.
23. El método de conformidad con ia reivindicación 20, está caracterizado porque se administran 5 simultáneamente el agente que regula la interacción ICAM- LF?-I y el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
24. El método de conformidad con la reivindicación 20, esté caracterizado porque el agente que ''10 ' regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo anti-ICAM o un fragmento activo ael mismo, y en donde el agente que reguío la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo ligando anti-CD40 o un fragmento activo del mismo.
25. El método de conformidad con la 15 reivindicación 6, está caracterizado porque ei anticuerpo anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1.
26. El método de conformidad con la reivindicación 20, está caracterizado porque el agente que regula la interacción JCAM-LFA-1 es un anticuerpo o un 20 fragmento activo del mismo, y en donde el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo ligando anti-CD40 o un fragmento activo del mismo.
27. El método de conformidad con la reivindicación 20, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y/o el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un agente no anticuerpo.
28. Una composición farmacéutica para tratar la enfermedad autoinmune, la composición está caracterizada porque comprende un portador aceptable farmacéuticamente y una relación sinergística de (i) un agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) un agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
29. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque el ICAM es ICAM-1.
30. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide.
31. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque la enfermedad autoinmune es lupus eritematoso sistémico.
32. La composición de conformidad con la reivindicación 31, está caracterizada porque el lupus eritematoso sistémico es una enfermedad de etapa final.
33. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
34. La composición de conformidad con la reivindicación 33, está caracterizada porque el anticuerpo es un anticuerpo anti-ICAM o un fragmento activo del mismo.
35. La composición de conformidad con la reivindicación 34, está caracterizada porque el anticuerpo anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1.
36. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un anticuerpo anti-CD40.
37. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque el anticuerpo es un anticuerpo ligando anti-CD40 o un fragmento activo del mismo.
38. La composición de conformidad con la reivindicación 28, está caracterizada porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y/o el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40 es un agente no anticuerpo.
39. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque la relación de los agentes se administra en la misma composición farmacéutica . lti*ílÍt?- Í~?iÍ¡iÍl¿?lt»i. liaH-***'- .*i > . i^aMr . ... . - . 1 . % i,— .¿^«^.,. Jt.-aiM&jJ, . .... a~ •— i . ..I..—yl Aáka¡ ii
40. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque la relación sinergística se administra como una composición.
41. El método de conformidad con la • reivindicación 20, está caracterizado porque la relación sinergística se administra como una composición.
42. El método de conformidad con la reivindicación 1, está caracterizado porque el método además comprende administrar agentes diferentes (i) al agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
43. El método de conformidad con la reivindicación 13, está caracterizado porque el método además comprende administrar agentes diferentes a (i) el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y (ii) el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
44. El método de conformidad con la reivindicación 20, está caracterizado porque el método además comprende administrar agentes diferentes a (i) el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 y (ii) el agente que regula la interacción CD40-ligando CD40.
45. Un método para tratar la enfermedad autoinmune, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero diagnosticado con la enfermedad fca-j, í.A¡ autoinmune una relación sinergística de (i) un primer agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y (ii) un segundo agente, en donde el segundo agente es inmunosupresor y no citotóxico.
46. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque el ICAM es ICAM-1.
47. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque el primer agente y el segundo agente se administran simultáneamente.
48. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque la enfermedad autoinmune es la artritis reumatoide.
49. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque la enfermedad autoinmune es el lupus eritematoso sistémico.
50. El método de conformidad con la reivindicación 49, está caracterizado porque el lupus eritematoso sistémico es una enfermedad de etapa final.
51. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
52. El método de conformidad con la .. í * k reivindicación 51, está caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo anti-ICAM o un fragmento activo del mismo.
53. El método de conformidad con la reivindicación 52, está caracterizado porque el anticuerpo anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1.
54. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque el segundo agente es ciclosporina.
55. El método de conformidad con la reivindicación 45, está caracterizado porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un agente no anticuerpo.
56. Una composición farmacéutica para tratar una enfermedad autoinmune, la composición está caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una relación sinergística de (i) un primer agente que regula la interacción ICAM-LFA-1, y un (ii) segundo agente, en donde el segundo agente es inmunosupresor y no citotóxico .
57. La composición de conformidad con la reivindicación 56, está caracterizada porque el ICAM es ICAM-1.
58. La composición de conformidad con la reivindicación 56, está caracterizada porque la enfermedad Ís*3 áÍ.*6 Á A afc rt . ?& ??*~« autoinmune es la artritis reumatoide.
59. La composición de conformidad con la reivindicación 56, está caracterizada porque la enfermedad autoinmune es el lupus eritematoso sistémico.
60. La composición de conformidad con la reivindicación 59, está caracterizada porque el lupus eritematoso sistémico es una enfermedad de etapa final.
61. La composición de conformidad con la reivindicación 56, está caracterizada porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
62. La composición de conformidad con la reivindicación 61, está caracterizada porque el anticuerpo es un anticuerpo anti-ICAM o un fragmento activo del mismo.
63. La composición de conformidad con la reiv ndicación 62, está caracterizada porque el anticuerpo anti-ICAM es un anticuerpo anti-ICAM-1. 6 . La composición de conformidad con la reivindicación 56, está caracterizada porque el agente que regula la interacción ICAM-LFA-1 es un agente no anticuerpo.