MXPA01005885A - Administracion oral de lactobacilos para el tratamiento y prevencion de infeccion urogenital - Google Patents
Administracion oral de lactobacilos para el tratamiento y prevencion de infeccion urogenitalInfo
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Abstract
La presente invención se refiere a uso de por lo menos un organismo prebiótico que se selecciona a partir del grupo que consiste de Lactobacillus rhamnosus GR-1 (ATCC 55826), L. rhamnosus GR-2 (ATCC 55915), L. rhamnosus GR-3 (ATCC 55917), L. rhamnosus GR-4 (ATCC 55916), L. rhamnosus RC-17 (ATCC 55825), L. rhamnosus RC-12 (ATCC 55895), L. jensenii RC-11 (ATCC 55920), L. acidophilus ATCC 4357, L. acidophilus RC-14 (ATCC 55845), L. plantarum RC-20 (ATCC 55883), L. rhamnosus RC-6 (ATCC 55894), L. rhamnosus A-60 (ATCC 55896), L. fermentum B-54 (ATCC 55884), y un vehículo farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para administración por vía oral para establecer una flora gastrointestinal y urogenital saludable en individuos de género femenino durante toda la vida. El uso en el cual dicho segundo organismo prebiótico es Bifidobacterium.
Description
ADMINISTRACIÓN ORAL DE LACTOBACILOS PARA EL TRATAMIENTO Y PREVENCIÓN ߣ INFECCIÓN UROGENITAL
Campo de la Invención La presente invención proporciona métodos y composiciones para la administración oral de lactobacilos u otros organismos probióticos tales como Bifidobacterium, para la reducción del riesgo de infección urogenital y restauración y/o mantenimiento concomitantes de la flora urogenital deseada.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las infecciones urogenitales, incluyendo las infecciones en el tracto urinario (UTI), la vaginosis bacteriana (BV) y la vaginitis de fermento, afligen aproximadamente a mil millones de mujeres en el mundo, anualmente. Aunque los agentes antimicrobianos son eficaces en la proporción de remedio clínico, la incidencia de infecciones por bacterias cocáceas positivas de Gram, resistentes a múltiples fármacos, parece elevarse y existe una gran preocupación acerca de que Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) y enterococos resistentes a vancomicina (VRE) pueden resistir incluso los agentes antimicrobianos más potentes. El modo de acción de los patógenos urogenitales se entiende mejor ahora e involucra la formación de biopelículas en el intestino. Las biopelículas intestinales se vuelven entonces un recipiente patógenos urogenitales que invaden el tracto urogenital, donde se forman más
biopelículas. Las biopelículas del tracto urogenital se vuelven entonces el recipiente de infección de la vagina (por ejemplo, mediante fermento y bacterias que originan la vaginosis) y del tracto urinario (por ejemplo, mediante organismos que originan infecciones en el tracto urinario). 5 Estudios previos han demostrado que los lactobacilos probióticos especialmente seleccionados, proporcionados en un pesario insertado en la vagina, pueden colonizar (Reid eí al. , 1994) y competir contra la colonización de enterococos y otros uropatógenos (Bruce & Reid, 1998). La técnica también describe el uso de Lactobacillus para prevenir y 10 tratar infecciones urinarias y urogenitales.
• BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención demuestra que lactobacilos especialmente seleccionados con propiedades antagonísticas contra
patógenos urogenitales pueden colonizar la vagina y proporcionar protección contra infección después del consumo oral. Por vez primera, la presente invención establece el consumo oral de Lactobacillus que pueden suministrar exitosamente terapia probiótica a mujeres que la necesitan.
• La presente invención proporciona métodos y composiciones
para el tratamiento e inhibición de infección urogenital originada por organismos patogénicos. La administración oral de Lactobacillus, otros compuestos probióticos en un vehículos farmacéuticamente aceptable, tal como leche o porciones de la misma, incluyendo el yogurt, proporcionan un medio seguro y eficaz para colonizar el intestino, el tracto urinario y la
vagina y tratar, inhibir o reducir la ocurrencia de infecciones urogenitales.
En la práctica de las composiciones y métodos de la presente invención, los Lactobacillus pueden administrarse como células completas viables. Las especies de Lactobacillus pueden desarrollarse de manera ^^ aeróbica o desarrollarse de manera microaerofílica y seleccionarse a partir
de L. rhamnosus, L. acidophilus, L. crispatus, L. fermentum, L. plantarum, L. casei, L. paracasei, L. jensenii, L. gasseri, L. cellobiosis, L. brevis, L. delbrueckii, L. rogosae y L. bifidum. La presente invención proporciona un método para prevenir, tratar o reducir la ocurrencia de infecciones urogenitales en un mamífero 10 que necesita tal tratamiento, mediante la administración oral de Lactobacillus. En una modalidad de la presente invención, se proporciona un método para establecer una flora gastrointestinal y urogenital saludable en hembras a través de toda su vida, que comprende la administración oral 15 de una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un organismo probiótico y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad adicional del método, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de un segundo organismo probiótico. El Lactobacillus es el organismo
• probiótico preferido. La Bifidobacteria es el segundo organismo probiótico 20 preferido. La Bifidobacteria se selecciona preferentemente a partir del grupo que consiste en B. bifidum, B. breve, B. adolescentis, o B. longum. En otra modalidad, la presente invención describe un método para mejorar el microambiente intestinal, urogenital y vaginal mediante la administración oral de Lactobacillus. 25 En todavía otra modalidad, la presente invención proporciona
ÉM?MÉSÉ t?mlßffl*'-' »-** -..~*-..-~ ..-, * ^.-M^ ^ T M r'nrffiÉTflitlBí' un método para inhibir, tratar o reducir la ocurrencia de infecciones urogenitales en un mamífero "que necesita tal tratamiento, mediante la administración oral de Lactobacillus y otros organismos probióticos. En una modalidad preferida, ©1 organismo probiótico es Bifidobacterium. 5 En todavía otra modalidad, la presente invención describe un método para inhibir la colonización patógena urogenital del tracto gastrointestinal y urogenital en mamíferos. En una modalidad preferida, los mamíferos son humanos. En otra modalidad, los patógenos urogenitales son Escherichia coli, Klebsiella spp., Pseudomonas spp., 10 Proteus spp., Providencia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacteroides spp., Mobiluncus spp., Trichomonas spp., Fusobacterium spp.,
Enterococcus spp., Gardnerella spp. y/o fermento. En una modalidad adicional, la presente invención describe un método para mantener flora urogenital saludable mediante el consumo oral 15 de Lactobacillus. En una modalidad más preferida, las especies de Lactobacillus son L. rhamnosus GR-1 (ATCC 55826), L. fermentum RC-14 (ATCC 55845) y L. fermentum B-54 (ATCC 55884). En otra modalidad, la presente invención proporciona un
método para prevenir o reducir la carga de biopelícula de patógenos urogenitales en el intestino, vagina, perineo y vejiga en un mamífero que necesita tal tratamiento mediante la administración oral de Lactobacillus, probióticos patógenos anti-urogenitales junto con un vehículo adecuado. En todavía otra modalidad, la presente invención proporciona 25 una prueba para la detección de lactobacilos en una muestra biológica.
s En una modalidad preferida, el vehículo adecuado es leche o porciones de la misma, incluyendo yogurt y otros alimentos tales, incluyendo, pero sin limitarse, productos de leche en polvo y batidos de leche; productos no lácteos y productos que no contienen lactosa,
incluyendo carbonato de calcio.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 es un diagrama sectorial que demuestra la sobrevivencia y colonización de L. rhamnosus GR-1 , L. fermentum RC-14 y 0 L. fermentum B-54 después del consumo oral en el tracto intestinal, según se midió en una muestra de evacuación el Día 7, de un paciente con infecciones urogenitales recurrentes. Esto demuestra el paso seguro de
Lactobacillus probióticos a través del estómago e intestino. La figura 2 es un diagrama sectorial que demuestra la 5 sobrevivencia y colonización por L. fermentum RC-14 después del consumo oral en el tracto intestinal, según se midió en una muestra de herramienta el Día 14, de un paciente con infecciones urogenitales recurrentes. Esto demuestra el paso seguro a través del estómago e intestino y la habilidad de los lactobacilos para ascender hacia el tracto 0 urogenital. La figura 3 es un esquema que ilustra el proceso del tracto urinario y la infección vaginal. La figura 4 es un esquema que ilustra el efecto de la ingestión de lactobacilos en patógenos urogenitales en el intestino y vagina. 5 La figura 5 es un esquema que ilustra el efecto del tratamiento
J-A^-Háb „«on lactobacilos para infección del tracto urinario. La figura 6 es unaíülectroforesis de gel de poliacrilamida que muestra productos de PCR identificados. Hilera 1 - . rham A TCC 7469; Hilera 2-L . rham GR-1; Hilera 3- . rham C3-A; Hilera 4-L. casei ssp. casei A TCC 393; Hilera 5- . Para. ssp. para. A TCC 25302; Hilera 6-L. plant. A TCC 1491 7; Hilera 7-L. ferm. A TCC 14931; Hilera 8- . ferm. A TCC 23271; Hilera 9- . ferm. A TCC 8289; Hilera 10-L. ferm. A TCC 1 1739; Hilera 1 1 -L. ferm. A TCC 14932; Hilera 1 2- . ferm RC14 (1 banda); Hilera 13- . ferm. B54 tiene el mismo ribotipo que RC14) (1 banda); Hilera 14- . acid. A TCC 4356; Hilera 15- . jensenii A TCC 25258.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a métodos y composiciones para mantener las salud del tracto urogenital y para tratar, inhibir o reducir la ocurrencia de infecciones urogenitales en mamíferos, mediante la administración oral de una o más cepas de Lactobacillus solas o en combinación con otros organismos probióticos junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se define por la presente invención, un compuesto "probiótico" es un cultivo mono- o mezclado de microorganismos que, cuando se ingieren por un mamífero, por ejemplo un humano, afectan al huésped benéficamente. Un compuesto probiótico preferido es Bifidobacterium. Los lactobacilos que pueden administrarse de manera oral mediante el uso del método descrito en la presente invención, pueden administrarse como células completas viables. Los lactobacilos pueden
desarrollarse de manera aeróbtca o microaerofílica y seleccionarse a partir de L. rhamnosus, L. acidophilus, L. crispatus, L. fermentum, L. plantarum, L. casei, L. paracasei, L. jensenii, L. gasseri, L. cellobiosis, L. brevis, L. delbrueckii, L. rogosae y L. bifidum. En una modalidad preferida, las
• 5 especies de Lactobacillus son L. rhamnosus GR-1 (ATCC 55826), L. fermentum RC-14 (ATCC 55845) y L. fermentum B-54 (ATCC 55884). De acuerdo con la presente invención, las especies de Lactobacillus oralmente administradas pueden colonizar el intestino humano, los tractos genital y urinario, inhibiendo así de manera
competitiva e interrumpir o interferir de otro modo con la colonización de
|M patógenos urogenitales en biopelículas. La especie de Lactobacillus oralmente administrada también puede estimular la flora normal indígena del tracto urogenital, previniendo, tratando y/o reduciendo de este modo, la ocurrencia de infecciones originadas por patógenos urogenitales. Los
patógenos urogenitales inhibidos y eliminados de otro modo por los Lactobacillus de la presente invención incluyen, pero sin limitarse, Escherichia coli, Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Proteus spp., Providencia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacteroides spp., Mobiluncus spp., Trichomonas spp., Fusobacterium spp.,
Enterococcus spp., Gardnerella spp. y fermento. De acuerdo con la presente invención, después de la disminución de las biopelículas patogénicas en el intestino, tractos genitales y urinarios, los Lactobacillus oralmente administrados de la presente invención pueden mantener flora urogenital saludable. Por "flora
urogenital saludable" se entiende un conteo total de lactobacilos mayor de
0,000 unidades formadoras de colonias de Lactobacillus más que bastoncitos negativos de Gram, fermento y bacterias cocáceas positivas de Gram. Por "disminución de biopelículas patogénicas" se entiende flora dominada por lactobacilos sin microorganismos patogénicos adherentes (por ejemplo, Enterococcus faecalis) en células uroepiteliales de la vejiga, según se mide por análisis de orina convencionales o el número agotado de microorganismos patogénicos (hasta menos de 10 por célula) en células vaginales. Dentro de la presente invención también se definen composiciones adecuadas para el establecimiento, mantenimiento o restauración de una flora gastrointestinal y urogenital saludables, en mujeres a través de toda la vida, las cuales comprenden células completas viables de Lactobacillus, células completas no viables o fragmentos de pared celular y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Por "a través de toda la vida" se entiende en el periodo neonatal, durante la infancia y en los periodos pre-menopáusicos y post-menopáusicos. Por "flora gastrointestinal y urogenital saludables" se entiende flora que se encuentra predominantemente colonizada por organismos no patogénicos y donde no existen señales ni síntomas de infección o enfermedad. En un aspecto preferido, los Lactobacillus se desarrollan de manera aeróbica, microaerofílica o anaeróbica y pueden seleccionarse a partir del grupo que consiste en Lactobacillus casei, L. acidophilus, L. plantarum, L. fermentum, L. brevis, L. jensenii, L. crispatus, L. rhamnosus, L. reuteri, L. paracasei, L. gasserí, L. cellobiosis, L. delbrueckii, L. helveticus, L. salivarius, L. collinoides, L. buchneri, L. rogosae y L.
A¿ ^í.^^.^^^^&^t^?^^áßSia&^^&Ét^B^^i^^^ bifidium. Los Lactobacíllus pueden desarrollarse de manera microaerofílica o anaeróbica y seleccionarse a partir del grupo que consiste en Lactobacillus rhamnosus (GR-1 (ATCC 55826), L. rhamnosus GR-2 (ATCC 55915), L. rhamnosus GR-3 (ATCC 55917), L. rhamnosus GR- 4 (ATCC 55916), L. rhamnosus RC-9, L. rhamnosus RC-17 (ATCC 55825), L. casei var alactosus RC-21 , L. casei NRC 430, L. casei ATCC 7469, L. rhamnosus 81 , L. rhamnosus 76, L. rhamnosus 36W, L. rhamnosus 36g,L. casei RC-65, L. casei RC-1 5, L. casei 558, L. casei RC-21 , L. casei 55, L. casei 8, L. casei 43, L. plantarum RC-12 (ATCC 55895), L. acidophilus RC- 25, L. plantarum RC-19, L. jensenii RC-1 1 (ATCC 55901 ), L. acidophilus ATCC 4357, L. acidophilus 2099 B, L. acidophilus 2155C, L. acidophilus T- 1 3, L. acidophilus 1807B, L. acidophilus RC-16, L. acidophilus RC-26, L. acidophilus RC-1 0, L. acidophilus RC-24, L. acidophilus RC-13, L. acidophilus RC-14, L. acidophilus RC-12, L. acidophilus RC-22, L. acidophilus 2099B, L. acidophilus 2155C, L. acidophilus T-13, L. plantarum ATCC 8014, L. plantarum UH 2153, L. plantarum 260, L. plantarum RC-20, L. plantarum 75, L. plantarum RC-6, L. fermentum A-60, L. fermentum B-54 (ATCC 55920), L. cellobiosis RC-2, L. crispatus 1350B y L. crispatus 2142B. En una modalidad adicional, la presente invención describe un método para administrar organismos probióticos de manera oral, para restaurar una flora urogenital e intestinal saludables sobre las diversas etapas del ciclo de vida de las mujeres, incluyendo el embarazo y la post- menopausia, en donde la flora patogénica se domina por Mobiluncus,
f- t.— ~.,-i1 r-f. «-.- -»r*>trf rtrt'- -* " wtrtt irT J?T"lfnrr-"f*t - iococcus, Porphyromonas, Mycoplasma o un grupo de estreptococos B, o
Escherichia coli, Enterococcus sp., Klebsiella sp., Pseudomonas sp.,
Streptococcus sp., Proteus sp., y otros patógenos que originan infecciones del tracto urinario y fermento que incluye Candida albicans, por ejemplo. Los Lactobacillus útiles de acuerdo con la práctica de la presente invención preferentemente se unen a células epiteliales humanas a un nivel de aproximadamente 10 hasta 165 organismos por célula mediante interacciones hidrofóbicas, hidrofílicas u otras de adhesión. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar lactobacilos y bifidobacterias útiles en la mejora de la salud urogenital. Se proporcionan criterios en la presente para caracterizar a un Lactobacillus o Bifidobacterium seleccionado como candidato para los métodos y composiciones contemplados de la presente invención. Los organismos probióticos exhibirán algunos o todos los criterios siguientes: una habilidad para: adherirse a células vaginales y uroepiteliales mediante adhesiones electroestáticas, hidrofóbicas o específicas que incluyen, pero sin limitarse, una proteína de vinculación de colágeno, pasar a través del estómago y alcanzar el intestino delgado y grueso y el tracto urogenital; desarrollarse y persistir en los tractos gastrointestinal y urogenital; inhibir la adhesión de patógenos urogenitales incluyendo organismos que originan la infección del tracto urinario, la vaginosis bacteriana y/o la vaginitis por fermento; coagregarse para formar una flora equilibrada; producir ácido y otras substancias tales como peróxido de hidrógeno y/o bacteriocinas y compuestos similares a la
bacteriocina que inhiben el desarrollo patógeno; producir biosurfactante* o sub-productos de desarrollo relacionados que interfieran con la adhesión de patógenos a las células y materiales; resistir agentes antimicrobianos, tales como espermicida de nonoxinol-9; y/o mejorar la función inmune del huésped para mantener aún más una flora urogenital saludable. Los lactobacilos oralmente administrados de la presente invención pueden detectarse en una muestra biológica desde uno hasta aproximadamente veinte días después del consumo con una sonda molecular. En una modalidad preferida, la muestra biológica es una evacuación. Aunque esta invención no intenta limitarse a ningún modo de aplicación en particular, se prefiere la administración oral de las composiciones. Un organismo probiótico puede administrarse solo o en conjunto con un segundo organismo probiótico diferente. Por "en conjunto con" se entiende junto, substancialmente de manera simultánea o secuencial. Las composiciones pueden administrarse en la forma de tableta , pildora o cápsula, por ejemplo. Una forma de aplicación preferida involucra la preparación de una cápsula liofilizada que comprende la composición de la presente invención. Otra forma de aplicación preferida involucra la preparación de una cápsula liofilizada de la presente invención . Todavía otra forma de aplicación preferida involucra la preparación de una cápsula termoseca de la presente invención. Se ha encontrado que es adecuada una cápsula que comprende aproximadamente 1 09 organismos probióticos. De acuerdo con la presente invención, una cápsula puede contener una sola o dos o más especies diferentes de organismo(s) probiótico(s).
lá~ ,l?,áíJL<,k: jkíá íi¿s.: u.J&.¿j£. «, « faJ ? i^ jJH?^?iumsbít? tia Según se utiliza en la presente, por "cantidad eficaz" se entiende una cantidad de orgas o probiótico, por ejemplo, Lactobacillus, lo suficientemente elevada para modificar de manera significativamente positiva la condición a tratarse pero lo suficientemente baja para evitar efectos colaterales serios (en una proporción razonable de beneficio/riesgo), dentro del alcance del juicio médico escuchado. Una cantidad eficaz de Lactobacillus variará con el propósito particular a lograrse, la edad y la condición física del paciente a tratarse, la severidad de la enfermedad precedente, ía duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente y los Lactobacillus específicos empleados. Por lo tanto, la cantidad eficaz de Lactobacillus será la cantidad mínima que proporciona la sujeción deseada a células epiteliales. La presencia de 1 x 109 bacterias, como células completas viables o no viables, en 0.05 ml de solución de salina regulada con fosfato, o en 0.05 ml de suspensión de agar, o el peso seco equivalente de los fragmentos de pared celular, es eficaz cuando se administra en cantidades de desde aproximadamente 0.05 ml hasta aproximadamente 20 ml. Una ventaja práctica decidida es que el organismo probiótico, por ejemplo, Lactobacillus, puede administrarse en una manera conveniente tal como mediante las rutas oral, intravenosa (cuando no sea viable) o supositorio (vaginal o rectal). Dependiendo de la ruta de administración, los ingredientes activos que comprenden organismos probióticos pueden requerir cubrirse en un material para proteger dichos organismos de la acción de enzimas, ácidos y otras condiciones naturales que pueden inactivar dichos organismos. Con objeto de administrar
probióticos mediante una administración diferente a la deben cubrirse p , o administrarse con, un material para prevenir la inactivación. Por ejemplo, los organismos probióticos pueden I» co-administrarse con inhibidores de enzima o en liposomas. Los inhibidores de enzima incluyen inhibidor de tripsina pancreático, diisopropilfluorofosfato (DFP) y trasilol. Los liposomas incluyen emulsiones de agua-en-aceite-en-agua P40 así como también liposomas convencionales y específicamente diseñados que transportan lactobacilos o sus derivados hacia la superficie urogenital. Los organismos probióticos también pueden administrarse de manera parenteral o intraperitoneal. Las dispersiones también pueden prepararse, por ejemplo, en glicerol, glicoles de polietileno líquidos y mezclas de los mismos y en aceites. Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable, incluyen soluciones acuosas (cuando sean solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones inyectables estériles o dispersiones. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida hasta el grado en que exista una fácil capacidad de inyectarse. Debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento. El vehículo puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, glicol de propileno, glicol de polietileno líquido y lo similar), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de
partícula requerido en el caso de dispersión. En muchos casos será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse mediante el uso en las composiciones de agentes que retardan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Las soluciones inyectables estériles se preparan mediante la incorporación de los organismos probióticos en la cantidad requerida en el solvente apropiado de los otros ingredientes enumerados con anterioridad, si se requiere, seguidas por esterilización filtrada. En general, las dispersiones se preparan mediante la incorporación de los diversos organismos probióticos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio básico de dispersión y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados con anterioridad. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación preferidos son la técnica de secado al vacío y liofilización, las cuales producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución previamente filtrada-estéril de los mismos. Los métodos de preparación adicionales, preferidos, incluyen, pero sin limitarse, liofilización y termosecado. Cuando los organismos probióticos se protegen adecuadamente como se describe arriba, el compuesto activo puede administrarse de manera oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un vehículo comestible asimilable o puede encerrase en una cápsula de gelatina de cubierta dura o suave o puede comprimirse en tabletas diseñadas para pasar a través del estómago (es decir, con cubierta
entérica) o pueden incorporarse directamente con el alimento de la dieta. Para ia administración terapéutica oral, los organismos probióticos pueden incorporarse con excipientes y utilizarse en la forma de tabletas comestibles, tabletas bucales, pastillas, cápsulas, elíxires, suspensiones,
jarabes, obleas y lo similar. Las composiciones o preparaciones de i» acuerdo a la invención, se preparan a fin de que una forma de unidad de dosis oral contenga aproximadamente 1 x 109 de, por ejemplo, lactobacilos, viables o no viables, por ml. Las tabletas, pastillas, pildoras, cápsulas y lo similar, como se
describe con anterioridad, también pueden contener lo siguiente: un aglutinante tal como goma de tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato dicálcico; un agente desintegrador tal como almidón de maíz, almidón de papa, ácido algínico y lo similar; un lubricante tal como estearato de magnesio y un agente endulzante tal
como sucrosa , lactosa o sacarina, pueden agregarse o un agente saborizante tal como menta, aceite o gaulteria o saborizante de cereza. Cuando la forma de unidad de dosis es una cápsula, puede contener, además de materiales del tipo anterior, un vehículo líquido. Otros diversos F materiales pueden presentarse como recubrimientos o para modificar de
otro modo la forma física de la unidad de dosis. Por ejemplo, tabletas, pildoras o cápsulas o lactobacilos en suspensión pueden cubrirse con laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elíxir puede contener el compuesto activo, sucrosa como agente endulzante, metilo y propilparabeno como preservativos, una
pintura y un saborizante tal como sabor de cereza o naranja. Por
cualquier material utilizado en la preparación de cualquier forma de dosis debe ser farmacéuticamente puro y substancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, el organismo probiótico puede incorporarse en preparaciones y formulaciones de liberación
#? prolongada. Es especialmente ventajoso el formular composiciones parenterales en forma de unidad de dosis para facilidad de administración y uniformidad de la dosis. Según se utiliza en la presente, la forma de unidad de dosis se refiere a unidades físicamente discretas, adecuadas
como dosis unitarias para los sujetos mamíferos a tratarse; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de los organismos probióticos calculados para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas de unidad de dosis novedosas de la invención se dictan por y dependen
directamente de (a) las características únicas del organismo probiótico y el efecto terapéutico en particular a lograrse y (b) las limitaciones inherentes en la materia de composición de tal probiótico para el establecimiento y mantenimiento de una flora urogenital saludable.
• El organismo probiótico se compone para su administración
conveniente y eficaz en cantidades eficaces con un vehículo farmacéuticamente adecuado o alimenticiamente aceptable en una forma de unidad de dosis, según se ha expuesto en la presente con anterioridad. Una forma de dosis de unidad puede contener, por ejemplo, el compuesto activo principal en una cantidad que se aproxima a 109, por ejemplo,
lactobacilos, viables o no viables, por ml. En el caso de composiciones
que contienen ingredientes complementarios tales como prebióticos, las dosis se determinan con relación a la dosis normal y a la manera de administración de dichos ingredientes. El vehículo farmacéuticamente aceptable puede encontrarse en la forma de leche o porciones de la misma, incluyendo yogurt. También pueden emplearse productos de leche descremada, leche descremada en polvo, productos sin leche o sin lactosa. El polvo de leche descremada se suspende convencionalmente en solución salina regulada con fosfato (PBS), pasa por autoclave o se filtra para erradicar contaminantes proteináceos y vivientes, después se liofiliza, termoseca, se seca al vacío o se seca por congelamiento. Algunos otros ejemplos de substancias que pueden servir como vehículos farmacéuticos son azúcares, tales como lactosa, glucosa y sucrosa; almidones tales como almidón de maíz y almidón de papa; celulosa y sus derivados tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetatos de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; ácidos esteáricos; estearato de magnesio; sulfato de calcio; carbonato de calcio; aceites vegetales, tales como aceites de coco, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de teobromo; polioles tales como glicol de propileno, glicerina, sorbitol, manitol y glicol de polietileno; agar; ácidos algínicos; agua libre de pirógeno; solución salina isotónica; extractos de arándano y solución reguladora de fosfato; polvo de leche descremada; así como también otras substancias no tóxicas, compatibles, utilizadas en formulaciones farmacéuticas tales como Vitamina C, estrógeno y equinácea, por ejemplo.
humectantes y lubricantes tales como sulfato de laurilo de sodio, así como también agentes colorantes, agentes saborizantes, lubricantes, excipientes, agentes formadores de tabletas, estabilizadores, anti-oxidantes y preservativos. 5 De acuerdo con lo anterior, en una forma preferida de establecimiento, mantenimiento o restauración de una flora gastrointestinal y urogenital saludable, se administra al paciente de manera oral una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un organismo probiótico y un vehículo farmacéuticamente aceptable de
acuerdo con la presente invención. Un organismo probiótico más preferido es un Lactobacillus. Preferentemente, el Lactobacillus se selecciona a partir del grupo que consiste en L. rhamnosus, L. casei ss alactosus, L. fermentum y L. brevis. Más preferentemente, los lactobacilos son ya sea
L. rhamnosus GR-1 , L. fermentum B-54 o L. acidophilus RC-14. 15 Con objeto de ilustrar aún más la presente invención, se llevaron a cabo los experimentos descritos en los siguientes ejemplos. Debe entenderse que la invención no se limita a los ejemplos específicos o los detalles descritos en la presente. Los resultados obtenidos de los experimentos descritos en los ejemplos se muestran en las figuras
acompañantes. EJEMPLO 1 Los lactobacilos oralmente ingeridos atravesaron el tracto gastrointestinal y alcanzaron y colonizaron la vagina. Cada mañana y antes de ir a dormir durante 14 días, diez 25 mujeres ingirieron una solución probiótíca que contenía >109 L. rhamnosus
6R-1 y L. fermentum RC-14 suspendidos en 3 ml de leche descremada
esterilizada (almacenada a -20°C). Estos organismos se seleccionaron sobre la base de su producción de diversos factores antagonísticos contra patógenos urogenitales (Reid (1999) Appl. Environ. Microbio!. , 65: 3763- 5 3766, incorporado en la presente para referencia), incluyendo biosurfactantes que inhiben la adhesión de bacterias cocáceas positivas de Gram incluyendo enterococos, estafilococos y estreptococos de Grupo
B, y bastoncitos negativos de Gram que incluyen coliformes y Gardnerella. Las pacientes proporcionaron torundas de orina y vaginales antes del c 10 tratamiento, y 1 , 2 , 3 y 4 semanas después del inicio de la terapia. Las cepas GR-1 y RC-14 se identificaron por colonia y morfología de teñido de
• Gram y tipo molecular (Zhang et al. (1998) Appl. Environ. Microbiol. , 64: 241 8-2423). Durante la terapia, los pacientes frenaron su consumo de cualquier otro probiótico o compuesto probiótico. 15 Se dio seguimiento a las pacientes hasta durante 3 meses. Las torundas vaginales tomadas antes de la terapia confirmaron que las pacientes se encontraban libres de infección actual pero habían agotado el número de lactobacilos. Después de la terapia, las cepas GR-1 y RC-14
• se recuperaron de la vagina en las primeras tres semanas después del
consumo oral, como se confirmó por cultivo y morfología así como también por impresión digital genómica mediante el uso de separadores de ARN ribosomales amplificados por PCR. Los resultados demostraron que GR-1 y/o RC-14 se recuperaron de la vagina dentro de una semana en las 10 pacientes (Tabla
1 ). La paciente AL no proporcionó muestras después de una semana y la
paciente SH recibió terapia antibiótica por bronquitis después de la semana 3. En tres de las pacientes que proporcionaron muestras vaginales en la semana 8 y 12, se recuperaron las cepas GR-1 y RC14. No se observaron efectos colaterales. Todas las pacientes reportaron un mayor bienestar con la té*rapia . Esto incluyó alivio de síntomas de infección urogenital y una necesidad nula de terapia de fermento mensual. En el caso de JA, los enterococos (presentes como 1 ,000 por ml de orina antes de la terapia) se erradicaron de su vejiga y vagina (desde 200,000 hasta 0 por ml) dentro de siete días (Ejemplo 3). A un año de seguimiento y continuando el consumo diario de GR-1 y RC-14, la paciente JA ha permanecido libre de infecciones. Se desarrolló una prueba que fue específica para la cepa RC-14 en base a la región separadora intergénica de genes de ARN 16S-23S. La prueba verificó y confirmó además la presencia de la cepa RC-14 en evacuaciones y especímenes vaginales. (Ver Ejemplo 2).
a¿-4 - *¿--tAfc Muy 1 11 ^*-f^-^'-*?^-'^« ^'j''**-^'*«a^"''— * TABLA 1
Leyenda: RYV = vaginitis de fermento recurrente; RBV = vaginosis bacteriana recurrente; UTI = infecciones del tracto urinario recurrentes el año pasado;
No Lacto = cultivo de placa de agar de MRS aislado sin lactobacilos; Lacto Baja = menos de 1 -colonias a dilución nula; +, ++, +++ = 1 , 2 o 3 Lactobacillus aislados por morfología de colonia y cepa de Gram; GR-1 , RC-14 = identificación de Gr-1 o RC-14 mediante morfología de colonia y de cepa de Gram; y/o tipo molecular; Ant = antibióticos prescritos a la
paciente para bronquitis. NS = no se recolectó muestra.
i JL¿ ?.?>.L*h?*M* ¡V* a « =. GR-1 y RC-14 se recuperan ambos en cada tiempo de muestreo.
Estos datos proporcionan pruebas conclusivas de que dos lactobacilos probióticos, específicamente seleccionados por su habilidad
• 5 para inhibir el desarrollo y la adhesión patógenos urogenitales, colonizaron la vagina después del consumo oral. Notablemente, en cada paciente, una o ambas cepas colonizaron la vagina y permanecieron varios r?eses después. EJEMPLO 2 10 Se detectaron rápidamente lactobacilos en la evacuación y especímenes vaginales a través de análisis de PCR separador ribosomal
• 16S-23S mediante el uso de carga de inicio específica de L. fermentum RC 14. Se empleó el siguiente método: Los aislados de lactobacilos se cultivaron a 37°C durante 48 15 horas en una placa de LBS en una cámara anaeróbica. Se recolectó un bucle de colonias de bacterias de la placa de LBS y se suspendió en 1 ml de d2H2O, después se centrifugó durante 1 minuto a 12,000 rpm. Se agregaron 200 µl de aglomerante InstaGene (Bio-Rad) al granulo y se incubó a 56°C en un baño de agua durante 30 minutos. El granulo se giró 20 a velocidad elevada durante 1 0 segundos, manteniendo la muestra en el baño de agua hirviendo durante 8 minutos. La muestra se giró a velocidad elevada nuevamente y se revolvió a 12,000 rpm durante 3 minutos. El ADN cromosómico se almacenó a -20°C hasta utilizarse. Las condiciones de PCR óptimas para diferentes cepas de 25 Lactobacillus se establecieron mediante el uso de dos cargas de inicio
universales de E. coli. El fragmento de ADN que contiene las regiones separadoras entre los genes df rARN 16S y rARN 23S de las cepas de RC-14, se amplificó mediante el uso de PCR con dos cargas de inicio universales A1 y B1 de E. coli. La carga de inicio 5'.
5?GTCGTAACAAGGTAAGCCG3' (SEO ID NO: 1 ) corresponde a un motivo de secuencia conservada del extremo 3' de rARNs 16S [Carga de inicio A1 , posición 1493 - 1 51 3 (numeración de Escherichia coli rARN 16S)] y la carga de inicio 3', 5'C T/C A/G T/C TGCCAGCATCCACT3' (SEQ ID NO: 2) se dedujo de una alineación de las secuencias 5' 13 23S [carga de inicio 10 B1 , posición 23-43 (numeración de Escherichia coli rARN 23S)], respectivamente. Los templados de ADN (1 .6 ug, 40 µl) se amplificaron en
• un volumen de reacción de 100 µl que contuvo 2.5 u polimerasa de Taq
(Boehringer Mannheim), 1 00 ng de cada una de las cargas de inicio, 4 mM f* de MgCI2, 0.2 mM de cada uno de los cuatro dNTPs (Pharmacia Biotech),
10 mM de Tris-CI (pH 8.0), 50 mM de KCI y 1 % (v/v) de Tritón X-100. Las mezclas de reacción se sobrepuso con 1 00 µl de mini aceite (parafina engrasada, VWR) y se precalentaron a 95°C durante dminutos. La amplificación se llevó a cabo en una Termolínea AMPLITRON II durante 40
• ciclos. Cada ciclo de amplificación fue como sigue: 30 segundos a 95°C
(desnaturalización), 1 minuto a 40°C, 45°C o 50°C. La temperatura de ablandamiento óptima fue de 40°C para RC-14, y 1 minuto a 72°C
(extensión). Se post-dilató 7 minutos a 72°C. Los controles se incluyeron en cada conjunto de amplificaciones. Los controles consistieron en una mezcla de reacción sin templado de ADN agregado. 25 El análisis del grado y la especificidad de productos de PCR se condujo mediante gel de agarosa al 2.5% en 1 x de regulador TAE, corriendo a 70 Voltios durante 2 V horas. El gel se tiñó con bromuro y se fotografió bajo luz UV. Los tamaños del fragmento de ADN se compararon con el Peso Molecular de ADN de 100 bp (Gibco-Life Tech). Existieron 5 dos bandas de PCR para RC14 (Banda 1 : 220 bp y Banda 2: 180 bp). Un Equipo de Extracción de Gel QLAquick (Qiagen, Misissauga, Ontario) para la extracción de fragmentos de ADN de 70 bp- 10kb de gel de agarosa estándar en regulador TAE o TBE, se utilizó para purificar bandas de PCR. 10 * Cada una de las bandas de fragmento ADN de PCR se ittk cortaron del gel de agarosa con un escalpelo y se pesó la rebanada de gel. El procedimiento del Equipo de Extracción de Gel QIAquick se siguió entonces. El sistema del Equipo se combinó con la columna de giro con la membrana de gel de sílice. La banda de ADN se disolvió completamente
con regulador de solubilización en 50°C por 10 min. El ADN se absorbió a la membrana de gel de sílice en las condiciones de rica en sal. El ADN puro se eluyó con regulador Tris (PH 8.0). Este producto de PCR puro se almacenó a -20°C para su uso posterior. j Cada producto de banda de PCR se ligó al vector pGEM- 20 T(Promega). Cada vector pGEM-T se transformó en células competentes de alta eficacia E. Coli JM 109 al utilizar la Ayuda de Transformación (MBI Fermentas Inc) en la placa LB con 50 µg/ml de ampicilina. Varias colonias blancas o colonias azul claro se seleccionaron como colonias positivas que contuvieron la inserción de PCR. Las colonias se cultivaron en la
placa de LB-ampicilina. Cada placa contuvo 32 diferentes colonias. Las
colonias se cultivar con caldo de LB-ampicilina. Una parte del cultivo se congeló rápidamente al utilizar nitrógeno líquido y se mantuvo a -80°C. Otra parte del cultivo se utilizó para miniprep adicional de ADN de plásmido. El resto del cultivo se mantuvo a 4°C. El Equipo de Miniprep de Giro QIAprep (Qiagen, Mississauga,
Notario) se utilizó para preparar ADN de plásmido. Cada uno de los dos productos de PCR se secuenció automáticamente al utilizar las cargas de inicio T7 & SP6 con dos direcciones. El análisis de la secuencia se llevó a cabo utilizando el paquete de software de análisis de secuencias-programa Star ADN. Los templados de ADN (1 .6 ug, 40 µl) se amplificaron en un volumen de reacción de 100 µl que contiene 2.5 u de polimerasa Taq (Boehringer Mannheim), 100 ng de la carga de inicio, 4 mM de MgCI2, 0.2 mM de cada uno de los cuatro dNTPs (Pharmacia Biotech), 10 mM de Tris- Cl (PH 8.0), 50 mM de KCI, y 1 % (v/v) de Tritón X-1 00. Las mezclas de reacción se cubrieron con 1 00 µl de mini aceite y se precalentaron a 95°C por 5 min. La amplificación se llevó a cabo en una Termolínea AMPLITRON II durante 25 ciclos. Cada ciclo de amplificación fue como sigue: 30 segundos a 95°C (desnaturalización), 1 minuto a 60°C (templado), y 1 min a 72°C (extensión). Se post-dilató 7 minutos a 72°C. Los controles se incluyeron en cada conjunto de amplificaciones. Se identificó RC-14 L. acidophilus tanto en especímenes vaginales como de evacuación (ver Ejemplo 1 y Figura 7). La verificación y confirmación de la detección de RC-14 Lactobacillus fermentum se llevó a cabo utilizando una prueba de
atA ... a JL...A¿ ,- . -fc. ^^^j^^j^^^^É^j^ bioquímica comercial API 50, tradicional (Sistemas API, La Balme, Les Grottes, Francia) y la carga de inicio PCR. Los organismos se aislaron de la evacuación después de 1 0 días de la toma oral del organismo probiótico en la suspensión de leche descremada (TABLA 3) • TABLA 3 Paciente Día de aislam iento API 50 Prueba Molecular TO 7 RC- 14 RC- 14 TO 14 RC- 14 RC-14 DR 7 RC- 14 RC- 14 FH 7 RC- 14 RC- 14
EJEMPLO 3 Este ejemplo ilustra el grado al cual la formación de bfopelícula, no detectada por la mayoría de los sistemas de diagnóstico, pueden ocurrir en la vagina y así impregnar e infectar y la vejiga. Además, el ejemplo ilustra como la ingestión oral de lactobacilos,
seleccionados por su habilidad probada para interferir con la adhesión y crecimiento de patógenos, puede permitir que el huésped restaure una biopelícula urogenital normal, reduciendo así las señales y síntomas de infección y restaurando una flora saludable, que comprende los
• lactobacilos propios del paciente así como también aquellos ingeridos. 20 Una mujer de 48 años presentó una historia de cuatro años con UTI sintomático crónico que causó dolor suprapúbico con frecuencia severo y constante, frecuencia, urgencia y disuria. El cultivo de laboratorio convencional de su orina repetidamente se reportó como negativo, y varios especialistas clínicos propusieron tratamiento tan
variados como el retiro del útero, el retiro del colón sigmoideo y el
W ••fv. estiramiento uretral, todos de los cuales se rechazaron por el paciente, la urinálisis cuidadosa por el inventor mostró 1 ,000 unidades de formación de colonia de Enterococcus faecalis, y la examinación de las células de la vejiga transicional del paciente mostraron colonización pesada con un 5 promedio de 28 enterococos por cada de 50 células. El paciente recibió oralmente un frasco de probiótico que contiene >10° de L. rhamnosus GR-1 y L. fermentum RC-14 suspendido en 3 ml de leche descremada esterilizada (almacenada a -20°C) cada mañana y otra vez en la noche por 14 días. La paciente proporcionó
torundas vaginales y de orina los días 6, 15 y 21 , 28 y 39 para el cultivo e
• identificación de lactobacilos, uropatógenos y levadura. Las cepas GR-1 y RC-14 se identificaron por morfología en placa de agrá y bajo microscopía de color Gram, así como también se registró la tipificación molecular por la huella digital genómica de GR-1 y RC-14 utilizando espaciadores de ARN
ribosómico amplificado de PCR (es decir, prueba molecular) (ver Ejemplo 2). Versalovic et al., (1991 ) Nucí. Acids. Res. 19:6823-31 y Versalovic er al., (1993) J. Infect. Dis. 167:850-856 más Zhong, et al., (1998) Appl. Environ. Microbiol. 64:2418-2423, incorporadas en la presente para referencia. 20
i, _jJÁ--á_- í - - .*-Mf---fc»- ANÁLISIS DÍA 6 DÍA 6 DÍA 15 DÍA 21 Cultivo de 1 ,000 Sin muestra Sin bacterias recuperadas Sin bacterias orina enterococos/ml recuperadas Conteo 28 enterococos por Sin muestra Células insuficientes para 0 enterococo por célula celular célula probar uroepitelial* Cultuvo 200,000 0 enterococo/ml **la muestra no fue 10,000 enterococos/ml vaginal enterococos/ml 23,000/ml . confiable para su 50,000/ml lactobacilos 1 ,000,000 L. brßvis brßvis innato en enumeración debido al incluyendo GR-1/RC- innatos, fibrosos, forma de vara; problema de envío; pero, 14; células de levadura largos; células de Nada de algunos eterococos presentes levadura presentes levadura estuvieron presentes; presente innato y GR-1 /RC-14 aislado; células de levadura presentes Células >100 enterococos <10 enterococo <10 enterococos por <10 enterococos por vaginales en por campo de vista por campo de campo de vista campo de vista cantidad en en x1000 vista (puntuación 1) (puntuación 1) húmedo microscopía (puntuación 1) 10 (puntuación 4) Síntomas Dolor suprapúbico Varios días sin Varios días sin dolor y La mayoría de los días constante, dolor y notablemente menos sin dolor y
• frecuencia, urgencia, notablemente frecuencia, urgencia y notablemente menos fatiga por 4 años menos fatiga frecuencia, urgencia y (cada día) frecuencia, fatiga urgencia y fatiga * cél ulas uroepiteliales desechadas y presentes en la orina de corriente media se recolectaron . Se tiñeron de Gram y se examinaron bajo microscopía de luz. ** El conteo viable de Lactobacillus total del cultivo vaginal el día 28 fue 1 , 500,000 y el
día 39 fue de 30, 000 unidades de form ación de colonia por m l .
Se determinó que dos cepas probióticas sobrevivieron al ácido estomacal y bilis, y migraron a la mucosa vaginal en donde se colonizaron.
• Además, el enterococo, que impregnó a la vejiga de su presencia de
biopelícula pesada en el tracto urogenital, se borró después de solamente seis días de terapia probiótica y se erradicó subsecuentemente de la vejiga y se redujo significativamente en la vagina dentro de dos a tres semanas. El tratamiento probiótico oral alivió los síntomas del paciente, erradicó la infección del tracto urinario y restauró la flora urogenital
saludable dentro de tres semanas.
Estos experimentos muestra , por primera vez, que los lactobacilos probióticos pueden suministrarse a la vagina, colonizar y restaurar una flora saludable por toma oral. EJEMPLO 4 Las cepas de especies Lactobacillus encontradas en la vagina de mujeres saludables, principalmente, L. rhamnosus, L. acidophilus, L. crispatus, L. fermentum, L. plantarum, L. casei, L. paracasei, L. jensenii,
L. gasseri. L. cellobiosus, L. brevis, L. delbrueckii, L. rogosae, L. bifidum, con propiedades tales como aquellos poseídas por GR-1 , RC-14 y B-54 u otras cepas definidas con propiedades identificadas previamente (Reid &
Bruce, 1 998) pueden colonizar la vagina después de la ingestión oral. La evidencia de esto se encontró en una mujer de 37 años cuya evacuación y vagina contuvieron la misma cepa de L. paracasei spp. paracasei. Este resultado verifica además que el tracto intestinal es la fuente de Lactobacillus en el tracto urogenital y por lo tanto la ingestión oral puede conducir a las cepas de Lactobacillus que colonizan el tracto urogenital e intestinal, como se demostró en las Figuras 1 y 2 y Ejemplos 1 y 3. EJEMPLO 5 ^ Las cepas L. rhamnosus GR-1 , L. fermentum RC-14, L. fermentum B-54 y Bifidobacterium se ingirieron oralmente por diez días por tres mujeres voluntarias. Todas las cepas sobrevivieron al estómago y bilis y colonizaron el intestino, reduciendo así el riesgo de infección urogenital por uropatógenos (Figura 1 y 2).
a asfc*- .á-life.
Claims (24)
- REIVINDICACIONES 1 . Un método para establecer una flora gastrointestinal y urogenital saludables en hembras de por vida, caracterizado porque comprende la administración oral de una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un organismo probiótico y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 2. El método según la reivindicación 1 , caracterizado porque comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un segundo organismo probiótico.
- 3. El método según la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho organismo probiótico es un Lactobacillus.
- 4. El método según la reivindicación 2, caracterizado porque dicho segundo organismo probiótico es una Bifidobacterium.
- 5. El método según la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho organismo probiótico se selecciona a partir del grupo que consiste en : L. rhamnosus, L. acidophilus, L. fermentum, L. casei, L. reuten, L. crispatus, L. plantarum, L. paracasei, L. jensenii, L. gasseri, L. cellobiosis, L. brevis, L. delbrueckii, L. helveticus, L. salivarius, L. collinoides, L buchneri, L. rogosae o L. bifidum.
- 6. El método según la reivindicación 2, caracterizado porque dicho segundo organismo probiótico se selecciona a partir del grupo que consiste en B. bifidum, B. breve, B. adolescentis o B. longum.
- 7. Un método para mantener una flora urogenital saludable en hembras antes, durante y después del embarazo, caracterizado porque ^i^mS^á^ ^^^^e^Ls S^iUf^^^Á^^ i ^ ,^ comprende la administración oral de al menos un organismo probiótico y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 8. El método según la reivindicación 7, caracterizado porque comprende además la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un segundo organismo probiótico.
- 9. El método según la reivindicación 8, caracterizado porque dicho organismo probiótico es un Lactobacillus.
- 1 0. El método según la reivindicación 9, caracterizado porque dicho segundo organismo probiótico es una Bifidobacterium. 10
- 1 1 . Un método para tratar y prevenir infecciones urogenitales en mujeres, caracterizado porque comprende la administración oral de Lactobacillus y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 1 2. El método según la reivindicación 1 1 , caracterizado 15 porque comprende además la administración oral de organismos probióticos.
- 1 3. El método según la reivindicación 12, caracterizado porque dicho organismo probiótico es Bifidobacterium.
- 14. Un método para mejorar y restaurar el microambiente 20 intestinal y urogenital, caracterizado porque comprende la administración oral de Lactobacillus y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 1 5. Un método para inhibir la colonización patógena urogenital del tracto gastrointestinal y urogenital en humanos, caracterizado porque comprende la administración oral de Lactobacillus en 25 una cantidad eficaz para colonizar el tracto gastrointestinal y urogenital y un veh ículo farmacéuticamente aceptable.
- 16. Un método para reducir la carga de biopelícula de patógenos urogenitales, caracterizado porque comprende la administración oral de Lactobacillus en una cantidad eficaz para colonizar el intestino y la f vagina .
- 17 El método según la reivindicación 16, caracterizado porque dicho patógenos urogenitales se seleccionan a partir del grupo que consiste en Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Proteus spp. , Providencia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacteroides spp., 10 Mobiluncus spp., Trichomonas spp., Fusobacterium spp., Escherichia spp., Gardnerella spp. o fermento.
- 1 8. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 1 , 14, 1 5 o 16, caracterizado porque dicho Lactobacillus se selecciona a partir del grupo que consiste en L. rhamnosus GR-1 , L. fermentum RC-14, 15 y L. fermentum B-54.
- 1 9. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 1 , 14, 1 5 o 1 6, caracterizado porque dicho vehículo farmacéuticamente aceptable es leche o porciones de la misma.
- 20. El método según la reivindicación 1 9, caracterizado 20 porque dichas porciones de leche comprenden yogurt.
- 21 . Un método para suministrar un organismo probiótico a la vagina, caracterizado porque comprende la administración oral de Lactobacillus y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 22. El método según la reivindicación 21 , caracterizado 25 porque dicho Lactobacillus se selecciona a partir del grupo que consiste r - ^tMli.Hrf-ii*" -^""-s en L. rhamnosus GR-1 , L. fermentum RC-14, y L. fermentum B-54. f
- 23. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende Lactobacillus, un segundo organismo probiótico y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
- 24. Una prueba que comprende un fragmento de ADN que contiene un separador entre los genes rARN 16S y rARN 23S de Lactobacillus fermentum RC-14.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US60/111,965 | 1998-12-11 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
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MXPA01005885A true MXPA01005885A (es) | 2003-02-17 |
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