MXPA01002955A - Composiciones para el cuidado personal que contienen enzimas subtilisina unidas a substratos insolubles en agua - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones para el cuidado personal que comprenden un substrato insoluble en agua, una diversidad de enzimás de proteasa G, y un medio de unión, para unir de manera permanente cada una de las enzimás a un substrato, en donde las composiciones para el cuidado personal comprenden de alrededor de 0.01µg/cm2 a aproximadamente 1000µg/cm2 de la enzima sobre el substrato.

Description

COMPOSICIONES PARA EL CUIDADO PERSONAL QUE CONTIENEN ENZIMAS SUBTILISINA UNIDAS A SUBSTRATOS INSOLUBLES EN AGUA CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a composiciones para el cuidado personal que comprenden enzimas de subtilisina sustituidas de forma singular unidas al substrato de paño. Las modalidades de las composiciones para el cuidado personal incluyen un paño para el cuidado personal y una mascarilla para la piel para el cuidado personal. Las composiciones proveen una limpieza y un acondicionamiento de la piel mejorados debido a la actividad de las proteínas activas, con un riesgo reducido al mínimo para el usuario de tener una reacción alérgica a la proteína activa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Actualmente se han hecho disponibles un número incrementado de productos comerciales que contienen proteínas activas. La mayoría de estos productos utilizan una enzima, como en la proteína activa. Las enzimas son proteínas que reaccionan con un compuesto, o substrato, para degradar ese compuesto. Las enzimas se dividen en diversas clases que se basan en la clase de substrato con el cual reaccionan. Cada clase de enzima generalmente cataliza la separación de diferentes enlaces químicos originando la selección de actividad específica. Se conoce la clase de enzimas de lipasa por su capacidad para hidrolizar uniones de éster creadas entre ellas, más no limitándose a, substratos con estructura a base de hidrocarburo y polialcohol. Ejemplos de estos substratos son los esteres poliglicerólicos de monoglicéridos, diglicéridos y triglicéridos. Se conoce la clase de enzimas de proteasa por su capacidad para hidrolizar proteínas. Las enzimas proteasa de origen natural y aquéllas que son manipuladas genéticamente se incorporan en detergentes para limpieza doméstica para hidrolizar suciedades y manchas de base proteínica, en productos para el cuidado personal para remover suciedades y residuos de piel muerta, en productos de limpieza oral para facilitar la remoción de la placa en las cavidades bucales, y en medicinas para afectar las proteínas no deseadas en el cuerpo. Se sabe que los productos actuales de limpieza comerciales se hacen más efectivos mediante la incorporación de enzimas proteasa en los mismos. La patente E.U.A. No. 4,262,868 (Hora et al), la patente E.U.A. No. 4,404,115 (Tai), la patente E.U.A. 4,318,818 (Letton et al.), la solicitud de patente europea 130,756 (publicada el 9 de enero de 1985) y la patente E.U.A. No. 5,030,378 (Venegas) todas ellas describen el uso de enzimas proteasa en productos detergentes o para limpieza. Sin embargo, también se ha observado que muchas proteínas activas, incluyendo las enzimas, son antígenos potenciales, y podrían causar reacciones alérgicas en los seres humanos bajo ciertas condiciones. El sistema inmune del ser humano puede producir anticuerpos específicos bajo la exposición a proteínas activas. Este proceso de producir anticuerpos específicos se conoce como "inmunización" cuando se obtiene una respuesta clínicamente benéfica. Sin embargo, cuando la respuesta conduce a la hipersensibilidad, se conoce como "sensibilización". La sensibilización alergénica hacia las proteínas activas se ha observado en entornos en donde los humanos están regularmente expuestos a la proteína. Dichos entornos incluyen las instalaciones de fabricación, en donde los trabajadores pueden estar expuestos al polvo o aerosol no controlados que contengan una proteína activa, o en el mercado, en donde el uso repetido por parte de los consumidores de aquellos productos que contienen proteínas activas ha provocado en algunas ocasiones una reacción alérgica. Actualmente, se pueden reducir al mínimo las respuestas alérgicas a las proteínas activas limitando la selección de esas proteínas utilizadas en productos a aquéllas de origen humano. Aunque este enfoque reduce al mínimo los problemas de respuesta alérgica, no es una solución completa, ya que con frecuencia no es posible encontrar dicha proteína activa que también tenga las propiedades de actividad deseadas. Otra forma de disminuir la respuesta alérgica ha sido reducir el tamaño de las moléculas de proteína (véase la publicación de patente JP No. 4,112,753). Sin embargo, la reducción de tamaño también puede provocar una reducción significativa en la actividad enzimática.

Una tercera propuesta para reducir la respuesta alérgica es a través del mapeo y la alteración de epítopes de la secuencia de aminoácidos de la proteína para suministrar una proteína con una capacidad de respuesta alérgica reducida. Este enfoque generalmente requiere una gran inversión de tiempo y costo para el desarrollo. En el campo médico, se han hecho sugerencias para reducir el carácter inmunogénico de las proteínas a través de otro método, incluso. Este método implica unir polímeros no reactivos a la proteína. La patente E.U.A. No. 4,179,337 (Davis, et al.) se refiere a enzimas acopladas a porciones poliméricas de polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicol (PG) de cadena sustancialmente recta. Aunque se ha descubierto que el acoplamiento de PEG/PPG mitiga la capacidad de crear una respuesta alérgica de la enzima, solamente se mantiene el 15% de la actividad fisiológica. La solicitud PCT WO 96/17929 (Olsen, et al., publicada el 13 de junio, 1996) se refiere a la modificación de enzimas conjugándolas con polímeros adecuados. La solicitud de Olsen describe enzimas modificadas que demuestran una reducción en la capacidad de crear respuesta alérgica desde 25% hasta 66% comparado con la enzima progenitora, mientras que mantiene desde 39% hasta 100% de la actividad de la proteína progenitora. La solicitud de patente E.U.A., No. de serie 08/903,298, describe el uso de enzimas modificadas por la adición de porciones dobles de polímero de poiietienglicol para reducir la capacidad de crear respuesta mientras que suministra una actividad enzimática elevada. La enzima modificada en dicha invención, se utiliza en combinación con un substrato fibroso en una aplicación para limpieza. Las enzimas modificadas no se unen al substrato. Se logra la reducción de la capacidad de crear respuesta alérgica mediante la modificación de la enzima. La solicitud de patente E.U.A, No. de serie 09/088,912 describe la modificación química polimérica de enzimas subtilisinas en una o más de las tres regiones de epítope específicas, que se ha descubierto que enmascaran los determinantes inmunogénicos de la enzima. Otro enfoque para reducir la capacidad de crear respuesta alérgica de las proteínas activas ha sido mediante granulación, revestimiento o disolución de las proteínas activas para evitar que sean transportadas por el aire. La patente E.U.A. No. 4,556,554 (Calvo) describe composiciones cosméticas que comprenden enzimas las cuales han sido inmovilizadas mediante adhesión a partículas de soporte polimérico. Las partículas con enzimas adheridas se dispersan en el vehículo cosmético. Después de la aplicación del vehículo a la piel, la enzima es liberada desde el soporte y por lo tanto se vuelve a activar. Métodos tales como éste solucionan la exposición a proteínas transportadas en aire por parte del consumidor, sin embargo estos todavía dejan el riesgo sustancial asociado con el contacto prolongado al tejido a la enzima liberada que se deposita sobre la piel. La patente canadiense 1 ,229,808, expedida el 1o de diciembre de 1987 enseña la inmovilización de enzimas, específicamente ß-galactosidasa y ß-glucosidasa, sobre substratos celulósicos en los cuales la enzima se inmoviliza mediante absorción en un gel de agarosa que recubre al substrato. La solicitud de patente del Reino Unido GB 2,240,040, publicada el 24 de julio de 1991 también describe enzimas inmovilizadas sobre substratos. Las enzimas, en ese documento, se unen covalentemente a los substratos para proveer un acabado medicado. La actividad de las enzimas utilizadas en equipo biológicos tales como biosensores, bioseparadores, y bioreactores ha sido mejorada por la utilización de la unión, específica de sitio, de enzimas a la superficie del equipo. Véase Huang et al., "Improving the Activity of Inmobilized Subtilisin by Sitespecific Attachment to Surface", Analytical Chemistry, 69(22), noviembre 15 de 1997. Huang enseña la inmovilización de enzima subtilisina mediante mutación de serina 249 o serina 145 a cisteína, y la unión a esferas de sílice funcionaiizada con grupos amino. Sería sumamente deseable desarrollar una composición que provea niveles mejorados de actividad de proteína y que al mismo tiempo conserve respuestas alergénicas bajas provenientes de la exposición a las proteínas activas. Si esto se pudiera lograr, se podrían proveer a los consumidores formas más seguras para utilizar los beneficios de la tecnología de proteínas. Es un objetivo de la presente invención proveer una composición para limpieza que suministre esta actividad y al mismo tiempo mantenga una estimulación reducida y la activación resultante del sistema inmunológico.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones para cuidado personal que comprenden un substrato insoluble en agua, una pluralidad de proteínas activas, y medios de unión, que comprenden un enlazador polimérico, que enlace de manera permanente cada una de las proteínas al substrato en el cual la composición para cuidado personal comprende desde aproximadamente 0.01 µg/cm2 hasta aproximadamente 1000 µg/cm2 de la enzima sobre el substrato.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Las composiciones de cuidado personal de la presente invención comprenden enzimas y derivados de BPN' y subtilisina modificados mediante una sola sustitución de un grupo de aminoácido de cisteína permanentemente unido a un substrato ¡nsoluble en agua. Las composiciones proveen los medios convenientes para utilizar la actividad especializada de la enzima BPN' de subtilisina y sus derivados, en donde las enzimas están unidas al substrato, reduciendo al mínimo de esa manera cualquier riesgo a la reacción alérgica. Las modalidades preferidas de las composiciones son sumamente eficaces para limpiar sudor, sebo, células muertas de la piel, grasas y aceites de la piel así como para humectar dicha piel.

Sin estar limitados por teoría, se considera que uniendo de manera permanente las enzimas al substrato, se puede provocar que entren en contacto con la piel para su uso, permitiéndoles actuar sobre la superficie. Posteriormente, como se remueve la composición de paño o mascarilla, todas las enzimas se levantan de la superficie de la piel, se remueven y se desechan con la toalla, eliminando de esa manera el riesgo de exceso de aerosol y la exposición térmica prolongada. La proteína activa reacciona con los compuestos que tienen capacidad de reacción específica para que mientras estén en contacto con la piel no quede ningún residuo sobre la piel después del uso, para estimular el sistema inmune y subsecuentemente formar anticuerpos responsables de la reacción alérgica. Como se utiliza en la presente invención, la frase "secuencia de aminoácidos" se refiere a la configuración específica de los aminoácidos que comprenden una proteína. La siguiente lista es una lista de abreviaturas que se utilizan en la presente invención para describir los aminoácidos: Aminoácido Abreviatura d< Símbolo de una letra Alanina Ala A Arginina Arg R Asparagina Asn N Acido aspártico Asp D Cisteína Cys C Glutamina Gln Q Acido glutámico Glu Q Glicina Gly G Histidina His H Isoleucina He Leucina Leu L Lisina Lys K Metionina Met M Fenilalanina Phe F Prolina Pro P Serina Ser S Treonina Thr T Triptofano Trp W Tirosina Tyr Y Valina Val V No aminoácido en Xaa posición Tal como se utiliza en la presente invención, el término "mutación" se refiere a la alteración genética de un organismo, la cual a su vez altera la secuencia de aminoácidos de la enzima producida por ese organismo. Se ha descubierto que con frecuencia la mutación de un organismo altera las propiedades de la enzima. Tal como se utiliza en la presente invención el término "de tipo silvestre" se refiere a una enzima producida por un hospedero que no tiene mutación. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "variante", significa una enzima que tiene una secuencia de aminoácidos que es diferente a la de la enzima de tipo silvestre debido a la mutación genética del hospedero que produce esa enzima.

Todos los porcentajes y relaciones utilizados en la presente invención, a menos que se indique de otra manera, son en peso y todas las medidas son a 25°C, a menos que se designe de otra manera. La presente invención puede comprender, consistir de o consistir esencialmente de, las partes importantes así como los ingredientes opcionales y componentes descritos en la misma. Los componentes esenciales de las composiciones para el cuidado personal de la presente invención, así como la lista que no es exclusiva de ingredientes preferidos y opcionales, se describen en detalle a continuación.

Substrato insoluble en agua Los productos de la presente invención comprenden un substrato insoluble en agua. Con "insoluble en agua" se quiere decir que el substrato no se disuelve en, o no se desintegra fácilmente después de sumergirlo en agua. El substrato insoluble en agua es el implemento o vehículo para suministrar las proteínas activas de la presente invención a la piel que se va a limpiar y humectar, y para eliminar sustancialmente todas las proteínas provenientes de la piel. Se puede utilizar una amplia variedad de materiales como el substrato. Son deseables las siguientes características no limitativas: (i) suficiente resistencia en húmedo para el uso, (¡i) suficiente capacidad de abrasión, (iii) suficiente firmeza y porosidad, (iv) suficiente espesor y (v) tamaño apropiado. Los ejemplos no limitativos de substratos insolubles apropiados que cumplen con los criterios anteriores incluyen substratos no tejidos, substratos tejidos, substratos hidroenmarañados, substratos aeroenmarañados, esponjas naturales, esponjas sintéticas, mallas reticuladas poliméricas, y similares. Las modalidades preferidas utilizan substratos no tejidos debido a que éstos son económicos y se pueden conseguir fácilmente en una variedad de materiales. Con "no tejidos" se quiere decir que la capa está constituida de fibras que no están tejidas como una tela sino más bien se forman como lámina, estera o capa de almohadilla. Las fibras pueden ser aleatorias (alineadas en forma aleatoria) o estás pueden ser cardadas (es decir peinadas para que se orienten principalmente en una dirección). Además, el substrato no tejido puede estar compuesto de una combinación de capas de fibras aleatorias y cardadas. Los substratos no tejidos pueden estar constituidos de una variedad de materiales tanto naturales como sintéticos. Con "naturales" se quiere decir que los materiales se obtienen a partir de plantas, animales, o insectos o de subproductos de plantas, animales e insectos. Con "sintéticos" se quiere decir que los materiales se obtienen principalmente a partir de varios materiales hechos por el hombre o de materiales naturales que han sido sometidos a alteraciones adicionales. El material de partida base convencional normalmente es una malla fibrosa que comprende cualquiera de las fibras de longitud textil sintéticas o naturales comunes, o mezclas de las mismas. Los ejemplos no limitativos de materiales naturales utilizan la presente invención son las fibras de seda, las fibras de queratina y las fibras de celulosa. Los ejemplos no limitativos de fibras de queratina incluyen aquellas que se seleccionan del grupo que consiste de fibras de lana, fibras de pelo de camello y similares. Los ejemplos no limitativos de fibras celulósicas incluyen aquellas que se seleccionan del grupo que consiste de fibras de pulpa de madera, fibras de algodón, fibras de cáñamo, fibras de yute, fibras de lino y mezclas de los mismos. Los ejemplos no limitativos de materiales sintéticos que se utilizan en la presente invención incluyen aquellos que se seleccionan del grupo que consiste de fibras de acetato, fibras de acrílico, fibras de éster de celulosa, fibras modacrílicas, fibras de poliamida, fibras de poliéster, fibras de poliolefina, fibras de alcohol polivinílíco, fibras de rayón, espuma de poliuretano, y mezcla de las mismas. Los ejemplos de algunos de estos materiales sintéticos incluyen acrílicos tales como acrilán, creslán, y la fibra con base de acrilonitrilo, orlón; las fibras de esteres de celulosa tales como acetato de celulosa, arnel, y acele; poliamidas tales como nylon (por ejemplo nylon 6, nylon 66, nylon 610, y similares); poliésteres tales como fortrel, kodel, y la fibra de tereftalato de polietileno, dacrón; poliolefinas tales como polipropileno, polietileno; fibras de acetato de polivinilo; espumas de poliuretano y mezclas de las mismas. Estás y otras fibras apropiadas y los materiales no tejidos preparadas a partir de las mismas se describen en forma general en Riedel, "Nonwoven Bonding Methods and Materials," Nonwoven World (1987); The Encyclopedia Americana, vol. 11 , pp.147-153, y vol. 26, pp. 566-581 (1984); patente E.U.A No. 4,891 ,227, para Tharman et al., expedida el 2 de enero de 1990; y patente E.U.A. No. 4,891 ,228 las cuales se incorporan en la presente invención para referencia en su totalidad. Los substratos no tejidos elaborados a partir de materiales naturales consisten de mallas u láminas que por lo general se forman sobre una malla de alambre fino a partir de una suspensión líquida de las fibras. Véase C.A. Hampel et al., The Encyclopedia of Chemistry, tercera edición, 1973, páginas 793-795 (1973); The Encyclopedia Americana, vol. 21 , pp. 376-383 (1984); y G.a. Smook, Handbook of Pulp and Paper Technologies, Technical Association for the Pulp and Paper Industry (1986); las cuales se incoforan en la presente invención para referencia en su totalidad. Los substratos elaborados a partir de materiales naturales que se utilizan en la presente invención se pueden obtener a partir de una amplia variedad de fuentes comerciales. Ejemplos no limitativos de capas de papel disponibles comercialmente, apropiadas y útiles en la presente invención incluyen Airtex®, una capa celulósica realzada, tendida al aire, que tiene un peso base de aproximadamente 84.52 g/m2, disponible de James River, Green Bay, Wl; y Walkisoft®, un material celulósico realzado, tendido al aire, que tiene un peso base de aproximadamente 93.75 g/m2, disponible de Walkisoft U.S.A., Mount Holly, NC.

Los métodos para elaborar substratos no tejidos son bien conocidos en la técnica. En general, estos substratos no tejidos se pueden elaborar mediante tendido al aire, tendido en agua, soplado en estado fundido, co-formación, unido por hilatura, o procesos de cardado en los cuales las fibras o filamentos se cortan primero a las longitudes deseadas a partir de hilos largos, se pasan a una corriente de agua o de aire, y después se depositan sobre una malla a través de la cual se pasa el agua o el aire cargados con la fibra. La capa resultante, sin tomar en cuenta su método de producción o composición, posteriormente se somete a por lo menos uno de todos los tipos de operaciones de unión para anclar las fibras individuales para formar una malla que se sostenga por sí misma. En la presente invención la capa no tejida puede prepararse por medio de una variedad de procedimientos incluyendo hidroenmarañado, térmicamente unido o termounión, y combinaciones de estos procedimientos. Además, los substratos de la presente invención pueden consistir de una capa individual o capas múltiples. Además, un substrato de capas múltiples puede incluir películas y otros materiales no fibrosos. Los substratos no tejidos elaborados a partir de materiales sintéticos útiles en la presente invención también pueden obtenerse a partir de una gran variedad de fuentes comerciales. Ejemplos no limitativos de materiales de capa no tejida adecuados útiles en la presente incluyen HEF 40-047, un material hidroenmarañado con abertura que contiene alrededor de 50% de rayón y 50% de poliéster, tiene un peso base de alrededor de 51.60 gr/m2 (gsy), disponible en Veratec, Inc., Walpole, MA; HEF 140-102, un material hidroenmarañado con abertura que contiene alrededor de 50% de rayón y 50% de poliéster, y que tiene un peso base de alrededor de 67.20 gr/m2, disponibles en Veratec, Inc. Walpole, MA; Novonet® 149-616 un material en patrón de rejilla termoligado que contiene alrededor de 100% de polipropileno, y tiene un peso base de alrededor de 60 gr/m2, disponibles en Veratec, Inc. Walpole, MA; Novonet® 149-801 , un material en patrón de rejilla termoligado que contiene alrededor de 69% de rayón, aproximadamente 25% de polipropileno y alrededor de 6% de algodón, y tiene un peso base de alrededor de 90 gr/m2, disponibles en Veratec, Inc. Walpole, MA; Novonet® 149-191 , un material en patrón de rejilla termoligado que contiene alrededor de 69% de rayón, aproximadamente 25% de polipropileno, y alrededor de 6% de algodón, y tiene un peso base de alrededor de 120 gr/m2, disponibles en Veratec, Inc. Walpole, MA; HEF Nubtex® 149-801 , un material hidroenmarañado con aberturas arracimado, que contiene alrededor de 100% de poliéster, y tiene un peso base de alrededor de 84 gr/m2, disponible en Veratec, Inc. Walpole, MA; Keybak® 951 V, un material con aberturas formado en seco, que contiene alrededor de 75% de rayón, alrededor de 25% de fibras acrílicas, y que tiene un peso base de alrededor de 51.6 gr/m2, disponible en Chicopee, New Brunswick, NJ; Keybak® 1368, un material con aberturas, que contiene alrededor de 75% de rayón, alrededor de 25% de poliéster, y tiene un peso base de alrededor de 46.8 gr/m2, disponibles en Chicopee, New Brunswick, NJ; Duralace® 1236, un material hidroenmarañado con aberturas, que contiene alrededor de 100% de rayón, y que tiene un peso base de alrededor de 48 gr/m2 a alrededor de 138 gr/m2, disponibles en Chicopee, New Brunswick, NJ; Duralace® 5904, un materia! hidroenmarañado con aberturas que contiene alrededor de 100% de poliéster, y que tiene un peso base de alrededor de 48 gr/m2 a alrededor de 138 gr/m2, disponibles en Chicopee, New Brunswick, NJ; Sontaro 8868, un material hidroenmarañado que contiene alrededor de 50% de celulosa y alrededor de 50% de poliéster, y que tiene un peso base de alrededor de 72 gr/m2, disponible en Dupont Chemical Corp. De manera alternativa, el substrato ¡nsoluble en agua puede ser una esponja de malla polimérica como la descrita en la patente europea No. EP 702550 A1 publicada el 27 de marzo de 1996 incorporada para referencia en la presente invención en su totalidad. Esta esponja polimérica comprende una pluralidad de capas de una malla de red tubular extruida preparada a partir de un polímero flexible fuerte, como los polímeros de adición de monómeros de olefina y poliamidas de ácidos policarboxíiicos. Aunque estas esponjas poliméricas se diseñan para utilizarse en conjunto con un limpiador líquido, este tipo de esponjas puede utilizarse como el substrato ¡nsoluble en agua en la presente invención. El substrato puede elaborarse en una gran variedad de formas, que incluyen almohadillas planas, almohadillas gruesas, láminas delgadas, implementos en forma de esfera, implementos irregulares, y tienen tamaños que oscilan desde un área de superficie de alrededor de 2.54 centímetros cuadrados a alrededor de cientos de centímetros cuadrados. El tamaño exacto dependerá del uso deseado y características del producto. Son especialmente convenientes las almohadillas cuadradas, circulares, rectangulares o en forma de óvalos que tienen un área de superficie de alrededor de 6.45 cm2 a alrededor de 928.8 cm2, preferiblemente alrededor de 64.5 cm2 a alrededor de 774 cm2, y muy preferiblemente alrededor de 193.5 cm2 a alrededor de 516 cm2, y un espesor de alrededor de 25.40 mieras a alrededor de 12700 mieras, preferiblemente de alrededor de 127 mieras a alrededor de 6350 mieras, y muy preferiblemente de alrededor de 254 mieras a alrededor de 2540 mieras. Los substratos insolubles en agua de la presente invención pueden comprender dos o más capas, teniendo cada una diferentes texturas y capacidades abrasivas. Las texturas que difieren pueden ser el resultado del uso de diferentes combinaciones de materiales o del uso de diferentes procedimientos de fabricación o una combinación de estos. Se puede hacer un substrato doblemente texturizado para proveer la ventaja de tener un lado más abrasivo para exfoliación y un lado suave, absorbente para la limpieza suave. Además, capas separadas del substrato pueden fabricarse para tener diferentes colores, de este modo ayudando al usuario a distinguir además las superficies.

Enzima BPN' Subtilisina-"Proteasa G" sustituida de manera singular Un componente esencial de la presente invención es una pluralidad de proteínas activas. Las proteínas activas están presentes sobre la superficie del substrato insoluble en agua a un nivel que varía desde aproximadamente 0.01 µg/cm2 hasta aproximadamente 1000 µg/cm2, de preferencia desde aproximadamente 0.05 µg/cm2 hasta aproximadamente 100 µg/cm2, y más preferido desde aproximadamente 0.1 µg/cm2 hasta aproximadamente 10 µg/cm2. En general, las enzimas de proteasa se clasifican bajo el número de clasificación de enzima E.C. 3.4 (hidrolasa de éster carboxílico) de acuerdo con las Recomendaciones (1992) de la Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular ("International Union of Biochemistry and Molecular Biology" IUBMB). Las proteasas relacionadas también se describen en las publicaciones PCT: WO 95/30010 publicada el 9 de noviembre, 1995 por The Procter & Gamble Company; WO 95/30011 publicada el 9 de noviembre, 1995 por The Procter & Gamble Company; WO 95/29979 publicada el 9 de noviembre, 1995 por The Procter & Gamble Company. Las enzimas de subtilisina son enzimas de proteasa que son producidas de forma natural por medio de microorganismos de Bacillus alcalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus amylosaccharicus, Bacillus licheniformis, Bacillus lentus y Bacillus subtilis. Una enzima de subtilisina conocida es BPN'. La BPN' de tipo silvestre de Bacillus amyloliquefaciens se caracteriza por la secuencia de aminoácidos: , 10 20 Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln lie Lys Ala Pro Ala Leu His Ser Gln Gly 30 40 Tyr Thr Gly Ser Asn Va! Lys Val Ala Val lie Asp Ser Gly lie Asp Ser Ser Hts Pro 50 60 Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Aia Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe G!n Asp 70 80 Asn Asn Ser His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Aia Ala Leu Asn Asn S r lie Gly 90 100 Val Leu Giy Va! Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala Asp Gly 1 10 120 Ser Gly Glp Tyr Ser Trp lie He Asn Gly lie Glu Trp Ala lie Ala Asn Asn Mel Asp 130 ¡40 Val He Asn Met Ser Leu Gly Gly Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp 150 160 Lys Ala Va! Ala Ser Gly Va! Val Val Val Ala Ala Ala Giy Asn Glu Gly Thr Ser Gly 170 1 80 Ser Ser' Ser Thr Val Giy Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val ¡le Ala Va! Gly Ala Val 190 200 Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val Giy Pro Glu Leu Asp Val Met Ala 210 220 Pro Gly Va! Ser He Gin Ser Thr Leu Pro Gly Asp Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Tnr 230 240 Ser Met Ala Ser Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Fie Leu Ser Lys His Pro Asn 250 260 Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys Leu Gly Asp Ser 270 275 Phe Tyr Tyr Gly Lys Lys Gly Leu lie Asn Asn Va! Gln Ala Ala Ala GIn También se conocen diversas variantes de BPN'. Muchas variantes relacionadas, todas denominadas en lo sucesivo como "proteasa A", se describen en la patente E.U.A. No. 5,030,378 (expedida a Venegas, 9 de julio de 1991) tal como se caracterizan por la secuencia de aminoácidos de BPN' con las siguientes mutaciones: a) la Gly en la posición Gly166 se reemplaza con Asn, Ser, Lys, Arg, His, Gln, Ala, o Glu; la Gly en la posición Gly169 se reemplaza con Ser; la Met en la posición Met222 se reemplaza con Gln, Phe, Cys, His, Asn, Glu, Ala o Thr; o b) la Gly en la posición Gly166 se reemplaza con Lys y la Met en la posición Met222 se reemplaza con Cys; o c) la Gly en la posición Gly160 se reemplaza con Ala y la Met en la posición Met222 se reemplaza con Ala. Las variantes adicionales de BPN', en lo sucesivo conocidas como "proteasa B", las describe Genencor International, Inc. (San Francisco, California) en la patente europea EP-B-251 ,446 (concedida el 28 de diciembre de 1994 y publicada el 7 de enero de 1988) tal como es caracterizada por la secuencia de aminoácidos de BPN' de tipo silvestre con las mutaciones en uno o más de los siguientes aminoácidos: Tyr21 , Thr22, Ser24, Asp36, Ala45, Ala48, Ser49, MetdO, His67, Ser87, Lys94, Val95, Gly97, Ser101 , Gly102, Gly103, Ile107, Gly110, Met 124, Gly127, Gly128, Pro129, Leu135, Lys170, Tyr171 , Pro172, Asp197, Met 199, Ser 204, Lys213, Tyr214, Gly215, y Ser221 ; o dos o más de los aminoácidos listados anteriormente y Asp32, Ser33, Tyr104, Ala152, Asn155, Glu156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217, y Met222 en donde ambas mutaciones no se pueden hacer sobre los aminoácidos Asp32, Ser33, Tyr104, Alai 52, Asn 155, Glu 156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217, y Met222. Otra proteasa variante de BPN' preferida, que en lo sucesivo es referida como una "proteasa D", se describe en el documento WO 95/10615 publicado el 20 de abril de 1995 por Genencor International como caracterizada por la secuencia de aminoácidos de BPN' de tipo silvestre con mutaciones en la posición Asn76, en combinación con mutaciones en una o más de las posiciones de aminoácido que se seleccionan del grupo que consiste de Asp99, Ser101 , Gln103, Tyr104, Ser105, Ile107, Asn109, Asn123, Leu126, Gly127, Gly128, Leu135, Glu156, Gly166, Glu195, Asp197, Ser204, Gln206, Pro210, Ala216, Tyr217, Asn218, Met222, Ser260, Lys265, y/o Ala274. Otra proteasa variante de BPN' preferida, que en lo sucesivo es referida como "proteasa F", se describe en la patente E.U.A. No. 4,760,025, expedida a Estell, et al., el 26 de julio de 1988 como caracterizada por la secuencia de aminoácidos de BPN' de tipo silvestre con mutación en una o más posiciones de aminoácido que se seleccionan del grupo que consiste de Asp32, Ser33, His64, Tyr104, Asn155, Glu 156, Gly166, Gly169, Phe189, Tyr217, y Met222. La enzima utilizada en las composiciones para cuidado personal de la presente invención, proteasa G, comprende cualquiera de las enzimas BPN' y sus variantes que se listaron anteriormente, con una sustitución singular o inserción de un aminoácido de cisteína en la secuencia de aminoácidos. La cisteína es el aminoácido de sustitución más preferido para sustituir en la región epítope deseada ya que no ocurre en la BPN' de subtilisina de tipo silvestre o sus derivados. El aminoácido sustituido o insertado provee una porción adecuada para el enlace al substrato de la presente invención en un sitio específico dentro de la enzima. Preferiblemente, la sustitución o inserción deberá realizarse en la posición en una región epítope que cae en un punto de la proteína fuera del sitio activo de la proteína. En BPN' de subtilisina y sus derivados, este sitio activo está definido en espacios por la tríada Asn32, His64, y Ser221. En una enzima proteasa G, una cisteína es sustituida en un punto fuera de esta tríada. Las regiones de epítope preferibles para la sustitución son las regiones Asp140-Val150 y Ala230-Leu250. Los ejemplos no limitativos de posibles sustituciones de cisteína son ya sea en Ser145, Asn240 a Ser249. La cisteína es el aminoácido de sustitución más preferido para la sustitución en la región epítope deseada ya que no ocurre en BPN' de subtilisina de tipo silvestre o sus derivados.

Medios de unión Las proteínas activas se unen al substrato ¡nsoluble en agua con cualquier medio de unión adecuado. Los medios de unión incluyen cualquier método físico o químico para unir de forma permanente una proteína activa a un substrato. Muchos de esos medios son conocidos en la técnica.

Atrapamiento físico Un medio de unión de la proteína activa de la presente invención al substrato es atrapar físicamente a la proteína dentro del cuerpo del substrato. Un medio preferido de atrapamiento es sellar la proteína en un revestimiento sobre una superficie del substrato. Se puede utilizar cualquier adhesivo o polimérico conocido en la técnica para sellar la proteína al substrato. Un revestimiento preferido es poli-2-hidroxietilacrilato que formado por la aplicación separada del monómero 2-hidroxietilacrilato y un iniciador heptahidratado de sulfato de hierro (II). Una solución tanto de a) proteína activa y adhesivo, como b) proteína activa y una combinación de monómero/iniciador se asperja de manera uniforme en la superficie del substrato. Se podría requerir un segundo revestimiento de adhesivo o monómero/iniciador o un iniciador separado para lograr la unión suficiente. Entonces se seca el substrato para permitir que se fije el polímero. El substrato se enjuaga completamente para remover cualquier proteína libre.

Proteína enlazada al revestimiento de gel polimérico sobre el substrato La proteína se puede unir al substrato mediante un enlazador químico unido a un revestimiento polimérico sobre el substrato. La proteína se une a un enlazador polimérico que está unido covalentemente a un revestimiento polimérico. Una modalidad de una adhesión polimérica es polietilenglicol (PEG)-Maleimida, que vende Shearwater Polymers, Inc. PEG-Maleimida se debe utilizar con un aminoácido de cisteína, por lo tanto se puede utilizar cuando la proteína activa es proteasa G. PEG-Maleimida se puede utilizar también junto con un revestimiento de poli-2-hidroxietilacrilato. La estructura genérica de una PEG-Maleimida de acrilato preferido de adhesión se puede representar por la fórmula: Todavía otra modalidad de una proteína que contiene cisteína enlazada a un revestimiento polimérico sobre el substrato de paño comprende PEG-Maleimida covalentemente unido a un revestimiento de polietilenimina por medio de N-hidroxisuccinimida, como el que se representa por la fórmula: Los medios de unión que comprenden proteínas enlazadas son más preferidos que el atrapamiento físico debido a que las proteínas enlazadas son más móviles y quedan menos cubiertas por el revestimiento polimérico, ambos de los cuales proveen mayor actividad a las proteínas.

Proteína enlazada covalentemente a una superficie activada del implemento Otro medio para unir la proteína de la presente invención es un enlace covalente a un sitio activado sobre la superficie. Para estos medios de unión, el substrato es de preferencia un material celulósico. El enlace químico puede ser cualquier compuesto di-funcional que reaccionará con el substrato y la proteína. El enlace químico preferido es éster de etilendiamina/N-?-maleimidobutiriloxisuccinimida (GMBS). Una estructura preferida del enlace etilendiamina/GMBS puede estar representado por la fórmula: SUBSTRATO DE CELULOSA Proteína enlazada covalentemente a una superficie activada del implemento a través de un enlazador polimérico. Incluso otro medio para unir la proteína activa al substrato del paño para cuidado personal de la presente invención es un enlazador polimérico unido covalentemente a un sitio activado sobre la superficie del substrato. El enlazador preferido es etilendiamina/polietilenglicol-maleimida. Una estructura genérica de un enlazador etilendiamina/PEG-maleimida unido directamente se puede representar por la fórmula: SUBSTRATO DE CELULOSA Ingredientes opcionales Las composiciones de paño de la presente invención pueden comprender una amplia variedad de ingredientes opcionales. El CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionarv. sexta edición, 1995, el cual se incorpora para referencia en la presente invención en su totalidad, describe una amplia variedad de ingredientes cosméticos y farmacéuticos no limitativos utilizados comúnmente en la industria para cuidado de la piel, los cuales son apropiados para ser utilizados en las composiciones de la presente invención. Los ejemplos no limitativos de clases funcionales de ingredientes se describen en la página 537 de esta referencia. Los ejemplos de estas clases funcionales incluyen: abrasivos, agentes antiacné, agentes antiformación de torta, agentes antimicrobianos, antioxidantes, aglutinantes, aditivos biológicos, agentes de volumen, agentes quelatadores, aditivos químicos, colorantes, astringentes cosméticos, biocidas cosméticos, desnaturalizantes, fármacos, astringentes, emuisificadores, analgésicos externos, formadores de película, componentes de fragancia, humectantes, mejoradores de suavidad (polímeros catiónicos y no ¡ónicos, coagentes tensioactivos, humectantes lípidos, aceites de hidrocarburo, aceites de silicón, ceras), agentes opacadores, plastificantes, conservadores, propelentes, agentes reductores, agentes blanqueadores de la piel, agentes acondicionares de la piel, (emolientes, humectantes, ingredientes diversos, y oclusivos), protectores de la piel, solventes, fomentadores de espuma, hidrótropos, agentes solubilizantes, estabilizadores, agentes suspensores, agentes de filtro solar, agentes tensioactivos (aniónico, catiónico, anfotérico, zwiteriónico), agentes absorbentes de luz ultravioleta, y agentes que incrementen la viscosidad (acuosos y no acuosos). Ejemplos de otras clases funcionales de materiales útiles en la presente invención que son bien conocidos por el experto en la técnica, incluyen agentes soiubilizantes, secuestrantes, agentes queratolíticos y similares.

Métodos de uso Las composiciones para cuidado personal de la presente invención son útiles para la limpieza personal, tratamiento cosmético de la piel y/o acondicionamiento de la piel. La presente invención podría tomar la forma de un paño para cuidado personal o de una mascarilla para cuidado personal. Típicamente, el paño se utiliza para exponer el área que se va a limpiar a las enzimas activas durante un período relativamente corto. Para su uso, el paño se pone en contacto con, o se frota en, la piel que necesite tratamiento y después se retira. Las cantidades típicas de los paños presentes útiles para limpiar, varían desde aproximadamente uno hasta aproximadamente 4 paños por uso, de preferencia desde uno hasta aproximadamente 2 paños por uso. La mascarilla para la piel se utiliza para exponer el área que se va tratar durante un período relativamente más largo. Las cantidades típicas de la mascarilla de la presente invención útil para limpiar, varían desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 2 mascarillas por uso, de preferencia una mascarilla por uso.

EJEMPLOS Y MÉTODOS DE FABRICACIÓN Los siguientes ejemplos describen y demuestran adicionalmente las modalidades dentro del campo de la presente invención. En los siguientes ejemplos, todos los ingredientes se listan a un nivel de ingrediente activo. Los ejemplos se proporcionan únicamente con el propósito de ilustración y no se deben considerar como limitaciones de la presente invención, ya que son posibles muchas variaciones de la misma sin apartarse del alcance y campo de la invención. Los ingredientes están identificados mediante nombre químico o el nombre CTFA. Los siguientes ejemplos, son ejemplos no limitativos de los paños con proteínas activas unidas de la presente invención.

EJEMPLO 1 Proteasa G atrapada en gel de acrilato a un substrato de rayón/PET Se purifica y se concentra la proteasa G en solución reguladora de fosfato de monopotasio (KH2PO4)10 mM, pH 5.5, a una concentración de 3 mg/ml. Se agrega 2-hidroxietil acrilato (HEA) a una concentración molar final de 1.3.M. Se agrega peróxido de hidrógeno 50mM (H2O2) para lograr una concentración molar final de H202 2.5.mM. Se asperja de manera uniforme una solución de Proteasa F/HEA/ H202 sobre lámina de rayón/PET hasta que la lámina se sature. Se asperja de manera uniforme una solución de sulfato de hierro (II) heptahidratado (FeS0 -7H20) 50 mM sobre la lámina. Se deja reposar la lámina durante 5 minutos. Después la lámina se enjuaga a través de baños sucesivos de KH2P04 0.01 M hasta que toda la proteasa F libre sea eliminada. Se secan las láminas.

EJEMPLO 2 Proteasa G enlazada a un revestimiento polimérico Se purifica y se concentra la proteasa G aproximadamente hasta 2.5 mg/mL en solución reguladora de KH2P04 10 mM, pH 5.5. Se agrega acrilato-PEG34oo-maieinimida (Shearwater Polymers, Inc.) en un exceso molar de 15:1. Se eleva el pH de la solución hasta 7 con hidróxido de sodio diluido (NaOH). Se deja que la proteasa G y el compuesto acrilato-PGE-maleimida reaccionen durante 1-2 horas a temperatura ambiente. El pH de la solución se lleva a 5.5 con ácido fosfórico diluido (H3PO4). Se agrega 2-hidroxietil acrilato (HEA) a la solución de proteasa G-PEG-Maleimida para lograr una concentración molar final de 1.3 M. Se agrega solución de H202 50 mM a la solución de proteasa G-PEG/HEA de tal manera que esté presente una concentración final molar de H2022.5 mM. La solución se asperja sobre una lámina de rayón/PET hasta que la lámina se sature. Por separado se asperja solución de sulfato de hierro (II) heptahidratado (FeS0 -7H20) 50 mM sobre la lámina de tal manera que el área de superficie completa quede asperjada en forma uniforme. Se deja reposar la lámina durante 5 minutos. Después la lámina se enjuaga a través de baños sucesivos de KH2P04 0.01 M hasta que toda la proteasa F libre sea eliminada. Se secan las láminas.

EJEMPLO 3 Proteasa G unida covalentemente de manera directa a una superficie activada del implemento Se remojan láminas de rayón/PET en una solución acuosa al % (p/v) de NaOH durante 10-15 minutos con agitación en un agitador automatizado, utilizando 1 mL de solución por cada 1 cm2 de lámina. Las láminas se lavan tres veces con agua desionizada bajo succión con aproximadamente 1 ml de agua por cm2 de lámina cada lavado. Las láminas se lavan 5 veces con acetona bajo succión. Se deja que las láminas se remojen en acetona durante 1 minuto entre cada lavado. Se hacen reaccionar las láminas en una solución de cloruro de p-toluen sulfonilo en acetona al 10% (p/v) durante 25-30 minutos con agitación (~1 ml/cm2). Se enjuagan las láminas 3 veces con acetona con succión para eliminar el exceso de cloruro p-toluensulfonilo. Las láminas se hacen reaccionar en solución de etilendiamina 2.2 M en acetona, pH 13-14, durante 2 horas con agitación. Las láminas se enjuagan 3 veces con acetona con succión para eliminar el exceso de EDA. Las láminas se enjuagan 5 veces con N-N-dimetilformamida (DMF) con succión. Las láminas se dejan remojar durante 1 minuto en DMF entre los lavados. Las láminas se hacen reaccionar en éster de N-?-maleimidobutiriloxisuccinimida (GMBS) durante la noche con agitación (~1 ml/cm2). Las láminas se enjuagan 3 veces con DMF seco, con succión. Las láminas se enjuagan 3 veces con solución reguladora de KH2P04 0.01 M, pH 7 con succión. Las láminas se dejan reposar durante 1 minuto con solución reguladora entre los enjuagues. Las láminas se hacen reaccionar en una solución de 3 mg/ml de proteasa G en solución reguladora de KH2P04 10 mM, pH 7 (~1 ml/cm2) durante aproximadamente 1-2 horas. Las láminas se enjuagan 3 veces con solución reguladora de KH2P04 0.01 M, pH 5.5. Las láminas se secan.

EJEMPLO 4 Proteasa G unida covalentemente a una superficie activada del implemento a través de un enlazador polimérico Se remojan láminas de rayón/PET en una solución acuosa al 10% (p/v) de NaOH durante 10-15 minutos con agitación en un agitador automatizado, utilizando 1 mL de solución por cada cm2 de lámina. Las láminas se lavan tres veces con agua desionizada bajo succión (~1 ml/cm2/iavado). Las láminas se lavan 5 veces con acetona bajo succión. Se deja que las láminas se remojen en acetona durante 1 minuto entre cada lavado. Se hacen reaccionar las láminas en una solución de cloruro de p-toluen sulfonilo en acetona al 10% (p/v) durante 25-30 minutos con agitación (~1 ml/cm2). Se enjuagan las láminas 3 veces con acetona con succión para eliminar el exceso de cloruro p-toluensulfonilo. Las láminas se hacen reaccionar en solución de etilendiamina 2.2 M en acetona, pH 13-14, durante 2 horas con agitación. Las láminas se enjuagan 3 veces con acetona con succión para eliminar el exceso de EDA. Las láminas se enjuagan 5 veces con solución reguladora de borato de sodio 0.2 M, pH 8.5 con succión. Las láminas se dejan remojar durante 1 minuto en solución reguladora entre cada enjuague. Las láminas se hacen reaccionar en solución de maliemida-PEG3 0o-NHS (Shearwater Polymers, Inc.) al 3-5% (p/v) en solución reguladora de borato de sodio 0.2M , pH 8.5 durante 1-2 horas con agitación (~1 ml/cm2). Las láminas se enjuagan 5 veces con solución reguladora de KH2P04, 10 mM, pH 7, con succión para eliminar el exceso de PEG. Las láminas se hacen reaccionar en una solución de 3 mg/ml de proteasa G en solución reguladora de KH2P0 10 mM, pH 7 (~1 ml/cm2) durante aproximadamente 1-2 horas. Las láminas se enjuagan 3 veces con solución reguladora de KH2P04 0.01 M, pH 5.5. Las láminas se secan.

EJEMPLO 5 Proteasa G unida covalentemente a una superficie revestida del implemento mediante enlazador polimérico Se remojan láminas de rayón/PET en un baño de 500 ppm de polietilenimina durante 1 hora con agitación a temperatura ambiente (-1-2 ml/cm2 de lámina). Se enjuagan las láminas de rayón/PET en dos baños sucesivos con solución reguladora de borato de sodio 0.2M, pH12, (-5-10 ml/cm2). Se enjuagan las láminas en 2 baños sucesivos con solución reguladora de borato de sodio 1.2 M, pH 8.5. Las láminas se hacen reaccionar en una solución de 5 mg/ml de NHS-PEG34oo-Maleimida en solución reguladora de borato de sodio 0.2M, pH 8.5 con agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Las láminas se enjuagan 4 veces con baño de agua desionizada ((-5-10 ml/cm2). Las láminas se enjuagan 2 veces con baños de solución reguladora de KH2P04 0.01 M, pH 7-7.5. Por separado, se purifica y concentra proteasa G hasta 1-2 mg/ml en solución reguladora de KH2P04 0.01 M, pH 7-7.5. Las láminas que reaccionaron con PEG se hacen reaccionar en una solución de proteasa G, pH 7-7.5, durante 1 hora a temperatura ambiente con agitación. Las láminas se enjuagan a través de 5 baños de KH2P04 0.01 M, pH 5.5, para eliminar la proteasa G no ligada que no reaccionó. Se dejan secar las láminas.

EJEMPLOS 6-9 Se prepara un producto de composición de paño para cuidado personal como sigue: Ingredientes Por ciento en peso Ejemplo 6 Ejemplo 7 Ejemplo 8 Ejemplo 9 Fase A Agua C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 Glicerina 10.00 10.00 10.00 10.00 Lauroanfodiacetato disódico (y) 4.00 4.00 — — Trideceth Sulfato de sodio Lauroanfoacetato de sodio — — 2.40 2.40 Lauroil sarcosinato de sodio 4.00 4.00 — — Laureth sulfato de amonio — — 4.20 4.20 Lauril sulfato de amonio — — 1.40 1.40 Policuatemio-10 0.25 0.25 0.25 0.25 EDTA disódico 0.10 0.10 0.10 0.10 Fase B Ester algodonato de ácido graso y 3 00 3.00 3.00 3.00 sacarosa Petrolato — 1.50 — — Cetil dimeticona — — — 2.00 Fase C Butilen glicol 2.00 2.00 2.00 2.00 DMDM Hidantoína (y) yodo propinil 0.20 0.20 0.20 0.20 carbamato Substrato insoluble en agua Un substrato no tejido, hidroperforado, que tiene un peso base de aproximadamente 71.4 gramos/m2 que comprende 50% de rayón y 50% de poliéster de aproximadamente 15.24 cm x 19.3 cm y un espesor de aproximadamente 508 micrómetros que tienen una proteína activa unida como se indica en los ejemplos 1-7. En un recipiente apropiado, los ingredientes de la fase A se mezclan a temperatura ambiente para formar una dispersión y se calientan con agitación a 65°C. Los ingredientes de la fase B se mezclan en un recipiente apropiado separado y se calientan a 65°C. Una vez que las temperaturas son iguales, los ingredientes de la fase B se mezclan en el recipiente que contiene a los ingredientes de la fase A y después se enfría a 45°C. Después se mezclan los ingredientes de la fase C juntos en un recipiente separado a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla de la fase C se agrega al recipiente que contiene la combinación de las fases A y B a temperatura ambiente. Se asperjan 1.5 gramos de la solución resultante sobre cada substrato. De manera alternativa, el substrato se puede sumergir en la solución resultante. El substrato tratado se seca después en un horno hasta peso constante. De manera alternativa, el substrato tratado se seca en un horno de convección a 45°C hasta peso constante. En las modalidades alternativas, se pueden utilizar otros substratos tales como substratos tejidos, substratos hidroenmarañados, esponjas naturales, esponjas sintéticas, o mallas reticuladas poliméricas. Las modalidades alternativas pueden ser en forma de una mascarilla para cuidado personal.

EJEMPLOS 10-13 Se prepara un paño para cuidado personal como sigue: Ingredientes Por cientc > en peso Ejemplo 10 Ejemplo 11 Ejemplo 12 Ejemplo 13 Fase A Agua C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 Glicerina 10.00 10.00 10.00 10.00 Pantenol 0.50 — 0.50 0.50 Lauroanfoacetato de sodio 2.40 2.40 2.40 2.40 Lauril sulfato de amonio 1.40 1.40 1.40 1.40 Policuatemio-10 0.25 0.25 0.25 0.25 EDTA disódico 0.10 0.10 0.10 0.10 Fase B Ester algodonato de ácido graso 3.00 3.00 3.00 3.00 y sacarosa Petrolato — — — 0.50 Cetil dimeticona — — — 0.50 Cetil ricinoleato — 2.00 2.00 1.00 Fase C Butilenglicol 2.00 2.00 2.00 2.00 DMDM Hidantoína (y) yodo 0.20 0.20 0.20 0.20 propinil carbamato Substrato ¡nsoluble en agua Un substrato no tejido, hidroperforado, que tiene un peso base de aproximadamente 71.4 gramos/m2 que comprende 50% de rayón y 50% de poliéster de aproximadamente 15.24 cm x 19.3 cm y un espesor de aproximadamente 508 micrómetros que tienen una proteína activa unida como se indica en los ejemplos 1-7. En un recipiente apropiado, los ingredientes de la fase A se mezclan a temperatura ambiente para formar una dispersión y se calientan con agitación a 65°C. Los ingredientes de la fase B se mezclan en un recipiente apropiado separado y se calientan a 65°C. Una vez que las temperaturas son iguales, los ingredientes de la fase B se mezclan en el recipiente que contiene a los ingredientes de la fase A y después se enfría a 45°C. Después se agrega la mezcla de la fase C en un recipiente que contenga la combinación de la Fase A y B a temperatura ambiente. Se asperjan 1.5 gramos de la solución resultante sobre cada substrato. De manera alternativa, el substrato se puede sumergir en la solución resultante. El substrato tratado se seca después en un horno hasta peso constante. De manera alternativa, el substrato tratado se seca en un horno de convección a 45°C hasta peso constante. En las modalidades alternativas, se pueden utilizar otros substratos tales como substratos tejidos, substratos hidroenmarañados, esponjas naturales, esponjas sintéticas, o mallas reticuladas poliméricas. Las modalidades alternativas pueden ser en forma de una mascarilla para el cuidado personal.

EJEMPLOS 14-17 Ingredientes Por cientc i en peso Ejemplo 14 Ejemplo 15 Ejemplo 16 Ejemplo 17 Fase A Agua C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 Lauroanfodiacetato disódico (y) 4.00 4.00 — — Trideceth Sulfato de sodio Lauro anfoacetato de sodio — — 2.40 2.40 Lauroil sarcosinato de sodio 4.00 4.00 — — Laureth sulfato de amonio — — 4.20 4.20 Lauril sulfato de amonio — — 1.40 1.40 EDTA disódico 0.10 0.10 0.10 0.10 Fase B Ester algodonato de ácido graso 3.00 3.00 3.00 3.00 y sacarosa Petrolato — 1.50 — — Cetil dimeticona — — — 2.00 Fase C DMDM Hidantoína (y) yodo 0.20 0.20 0.20 0.20 propinil carbamato Substrato insol uble en agua Un substrato no tejido, hidroperforado, que tiene un peso base de aproximadamente 71.4 gramos/m2 que comprende 50% de rayón y 50% de poliéster de aproximadamente 15.24 cm x 19.3 cm y un espesor de aproximadamente 508 micrómetros que tiene una proteína activa unida como se indica en los ejemplos 1-7. En un recipiente apropiado, los ingredientes de la fase A se mezclan a temperatura ambiente para formar una dispersión y se calientan con agitación a 65°C. Los ingredientes de la fase B se mezclan en un recipiente apropiado separado y se calientan a 65°C. Una vez que las temperaturas son iguales, los ingredientes de la fase B se mezclan en el recipiente que contiene a los ingredientes de la fase A y después se enfrían a 45°C. Después se mezclan los ingredientes de la fase C juntos en un recipiente separado a temperatura ambiente. A continuación, se agrega la mezcla de la fase C al recipiente que contiene la combinación de las fases A y B a temperatura ambiente. Se asperjan 1.5 gramos de la solución resultante sobre cada substrato. De manera alternativa, el substrato se puede sumergir en la solución resultante. El substrato tratado se seca después en un horno hasta peso constante. De manera alternativa, el substrato tratado se seca en un horno de convección a 45°C hasta peso constante. En las modalidades alternativas, se pueden utilizar otros substratos tales como substratos tejidos, substratos hidroenmarañados, esponjas naturales, esponjas sintéticas, o mallas reticuladas poliméricas. Las modalidades alternativas pueden ser en forma de una mascarilla para el cuidado personal.

EJEMPLOS 18-21 Ingredientes Por cientc i en peso Ejemplo 18 Ejemplo 19 Ejemplo 20 Ejemplo 21 Fase A Agua C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 C.S. 100 Lauroanfoacetato de sodio 2.40 2.40 2.40 2.40 Laureth sulfato de amonio 4.20 4.20 4.20 4.20 Laurilsulfato de amonio 1.40 1.40 1.40 1.40 EDTA disódico 0.10 0.10 0.10 0.10 Fase B Ester algodonato de ácido graso 3.00 3.00 3.00 3.00 y sacarosa Petrolato — 0.50 1.00 — Cetil dimeticona — 0.50 — 1.00 Cetll ricinoleato 2.00 0.50 1.00 1.00 Fase C DMDM Hidantoína (y) yodo 0.20 0.20 0.20 0.20 propinil carbamato Substrato ¡nsoluble en agua Un substrato no tejido, hidroperforado, que tiene un peso base de aproximadamente 71.4 gramos/m2 que comprende 50% de rayón y 50% de poliéster de aproximadamente 15.24 cm x 19.3 cm y un espesor de aproximadamente 508 micrómetros que tienen una proteína activa unida como se indica en los ejemplos 1-7. En un recipiente apropiado, los ingredientes de la fase A se mezclan a temperatura ambiente para formar una dispersión y se calientan con agitación a 65°C. Los ingredientes de la fase B se mezclan en un recipiente apropiado separado y se calientan a 65°C. Una vez que las temperaturas son iguales, los ingredientes de la fase B se mezclan en el recipiente que contiene a los ingredientes de la fase A y después se enfrían a 45°C. A continuación, se agrega la mezcla de la fase C al recipiente que contiene la combinación de las fases A y B a temperatura ambiente. Se asperjan 1.5 gramos de la solución resultante sobre cada substrato. De manera alternativa, el substrato se puede sumergir en la solución resultante. El substrato tratado se seca después en un horno hasta peso constante. De manera alternativa, el substrato tratado se seca en un horno de convección a 45°C hasta peso constante. En las modalidades alternativas, se pueden utilizar otros substratos tales como substratos tejidos, substratos hidroenmarañados, esponjas naturales, esponjas sintéticas, o mallas reticuladas poliméricas. Las modalidades alternativas pueden ser en forma de una mascarilla para el cuidado personal.

Claims (16)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición de paño para cuidado personal que comprende: a) un substrato insoluble en agua, b) una pluralidad de enzimas de Proteasa G, y c) medios de unión, que comprenden unir de manera permanente cada una de las enzimas al substrato; y caracterizada además porque la composición de paño para cuidado personal comprende desde 0.01 µg/cm2 hasta 1 ,000 µg/cm2 de la enzima sobre el substrato.

2.- Una composición de mascarilla para la piel para el cuidado personal, que comprende: a) un substrato insoluble en agua, b) una pluralidad de enzimas de Proteasa G, y c) medios de unión, que unen de manera permanente cada una de las enzimas al substrato; y caracterizada además porque la composición de paño para cuidado personal comprende desde 0.01 µg/cm2 hasta 1 ,000 µg/cm2 de la enzima sobre el substrato.

3.- Una composición para cuidado personal de conformidad con cualquiera de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada además porque dicho substrato insoluble en agua comprende uno o más materiales que se seleccionan del grupo que consiste de sedas, queratinas, celulosas, acetatos, acrílicos, esteres de celulosa, modacrílicos, poliamidas, poliésteres, poliolefinas, alcoholes polivinílicos, pulpa de madera, algodón, cáñamo, yute, lino, acrílicos, nylons, poliésteres, polipropilenos, polietilenos, acetatos de polivinilo, poliuretanos, rayón y mezclas de los mismos.

4.- Una composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque dicho substrato insoluble comprende una lámina de fibras no tejidas que se seleccionan del grupo que consiste de fibras de rayón, fibras de celulosa, fibras de poliéster y mezclas de las mismas.

5.- Una composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque dicho substrato insoluble comprende dos o más láminas de fibras que cada una a su vez tiene diferentes texturas.

6.- Una composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque los medios de unión son seleccionados del grupo que consiste de atrapamiento físico, enlace a un gel polimérico, unión covalente a una superficie activada, enlace covalentemente unido a una superficie activada, y enlace covalentemente unido a una superficie revestida.

7.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el medio de unión es atrapamiento físico dentro de un revestimiento polimérico.

8.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el revestimiento polimérico es poli-2-hidroxietil acrilato.

9.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el medio de unión es un enlace a un revestimiento polimérico.

10.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el enlace es polietilenglicol-maleimida y el revestimiento polimérico comprende poli-2-hidroxietil acrilato.

11.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el enlace es polietilenglicol-maleimida y el revestimiento polimérico comprende polietilenimina.

12.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el medio de unión es un enlace covalente a un sitio activado sobre el substrato.

13.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el enlace covalente es éster de N-?-maleimidobutiriloxisuccinimida.

14.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el medio de unión es un enlace polimérico covalentemente unido a un sitio activado sobre la superficie del substrato.

15.- La composición de paño para cuidado personal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada además porque el enlace polimérico comprende polietilenglicol-maleimida.

16.- Un método para humectar la piel, que comprende hacer contacto entre la composición de cuidado personal de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, con la piel que requiere dicho tratamiento.