MXPA01002737A - Composiciones farmaceuticas para tratar la lesion de raiz nerviosa - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para el tratamiento de padecimientos espinales causados por la liberación del FNT-alfa, que comprende una cantidad efectiva de un inhibidor del FNT-alfa, asícomo a un método para el tratamiento de tales padecimientos, y el uso de inhibidores del FNT-alfa en la preparación de la composición farmacéutica para tal tratamiento.

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS PARA TRATAR LA LESIÓN DE RAÍZ NERVIOSA Campo técnico La presente invención se refiere al uso de un inhibidor de FNT-a en la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la lesión de raiz nerviosa, asi como a un método para tratar la lesión de raíz nerviosa.

El objetivo de la presente invención es obtener una posibilidad para tratar la lesión de raíz nerviosa inducida por herniación de disco, que podría aparecer como dolor irradiado al brazo o pierna (ciática), por bloqueo discal relacionado con citocinas.

Antecedentes de la Invención 20 La herniación de disco es un padecimiento problemático, que puede causar dolor pronunciado y dolor muscular y por esto pérdida de la capacidad para trabajar. Una herniación de disco puede presentarse en cualquier disco en la espina, pero las herniaciones en REF. NO. 127654 ^^^^fe^^^^^^^^^^^ la espina cervical y lumbar son las más comunes. Una herniación de disco en la espina cervical podría inducir dolor irradiado y disfunción muscular en el brazo y la herniación en la espina lumbar podría inducir dolor 5 irradiado y disfunción muscular en la pierna. El dolor irradiado en la pierna se refiere, en general, como "ciática". La herniación discal causará problemas a un grado de variación, y el dolor podría permanecer durante uno o dos meses o en los casos severos hasta 6 meses. El dolor de brazo o pierna que puede presentarse como resultado de una herniación de disco puede ser muy intenso y de esta manera, podría afectar la situación integral de vida del paciente durante el período de enfermedad . 15 La US-A-5, 703, 092 describe el uso de compuestos de ácido hidroxámico y ácidos carbocíclicos como inhibidores de metaloproteinasa y FNT, y en particular en el tratamiento de artritis y otras enfermedades inflamatorias relacionadas. No se describe o menciona el uso de estos compuestos para el tratamiento de las lesiones de raíz nerviosa.

La US-A-4 , 925, 833 describe el uso de tetraciclinas 25 para mejorar la síntesis de proteínas óseas, y el tratamiento de osteoporosis.

La US-A-4 , 666, 897 describe la inhibición de enzimas colagenolíticas de mamíferos por tetraciclinas. La actividad colagenolítica se manifiesta por la resorción ósea excesiva, enfermedad periodontal, artritis reumatoide, ulceración corneal, o resorción de la piel u otros tejidos conectivos de colágeno.

Ninguno de estos dos últimos documentos mencionan la lesión de raíz nerviosa o el tratamiento de ésta.

Breve descripción de la presente invención.

Se ha mostrado ahora sorprendentemente que es posible tratar las lesiones de raíces nerviosas, o al menos aliviar los síntomas de las lesiones de las raíces nerviosas usando una composición farmacéutica que comprenda una cantidad terapéuticamente activa de un inhibidor de FNT-a seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de metaloproteinasas excluyendo me t i lprednisolona , tetraciclinas, incluyendo tetraciclinas modificadas químicamente, quinolonas, corticosteroides, talidomida, lazaroides, pentoxifilina, derivados de ácido hidroxámico, naptopiranos, receptores de citocina soluble, anticuerpos monoclonales hacia FNT-a, amrinona, pimobendan, vesnarinona, inhibidores de fosfodiesterasa III, lactoferrina y derivados análogos de lactoferrina, 5 y melatonina, en la forma de bases o sales de adición junto con un transportador farmacéuticamente aceptable.

La cantidad terapéuticamente efectiva es una dosificación normalmente usada cuando se usan tales 10 compuestos para otros usos terapéuticos. Muchas de estos fármacos son fármacos registrados comercialmente conocidos .

Los compuestos que poseen esta actividad son 15 tetraciclinas, tales como tetraciclina, doxiciclina, limeciclina, oxi tet raciclina , minociclina, y tetraciclinas de dedimetilaminotetraciclina modificadas químicamente, compuestos de ácido hidroxámico, ácidos carbocíclicos y derivados, talidomida, lazaroides, 20 pentoxifilina, naptopiranos, receptores de citocina solubles, anticuerpos monoclonales hacia FNT-a, amrinona, pimobendan, vesnarinona, inhibidores de fosfodiesterasa III, lactoferrina y análogos derivados de lactoferrina, melatonina, norfloxacina, ofloxacina, 25 ciprof 1 oxacina , ga t i f 1 oxa c i na , pefloxacina, &!*** » »**. ^.^flj^'**^ - .-,. __^_...*_. , .... ^s^^^^^^^.^^^^^^^ ^j^^£Xz..i, lomefloxacina y temafloxacina . Estos pueden presentarse como bases o en la forma de sales de adición, cualquiera posee el mejor efecto farmacéutico y la mejor propiedad para presentarse en una composición farmacéutica 5 adecuada.

Ademas, el componente activo comprende una sustancia que inhibe un compuesto desencadenado por la liberación de FNT-a, tal como el interferon gama, 10 interleucina-1 , y óxido de nitrógeno (NO) en la forma de base o sales de adición.

La invención se refiere además a un método para inhibir los síntomas de la lesión de raíz nerviosa. 15 Los efectos de la doxiciclina, receptores de citocina solubles y anticuerpos monoclonales de citocina, se han estudiado y los métodos usados y los resultados obtenidos se describen posteriormente. 20 Ejemplo Diseño de estudio.

Los efectos del núcleo pulposo de varios tratamientos para bloquear la actividad de FNT-a se evaluaron en una preparación experimental usando inmunohistoquímica y registros de velocidad de conducción nerviosa. 5 Breve descripción de los resultados antecedentes: Un meta-análisis de los efectos observados inducidos por el núcleo pulposo revela que estos efectos 10 podrían referirse a una citocina específica, Factor de necrosis tumoral alfa (FNT(a)).

Objetivos .

Para evaluar la presencia de TNF(a) en células de núcleo pulposo en cerdos y observar si el bloqueo de FNT(a) también bloquea la reducción inducida por el núcleo pulposo de la velocidad de conducción de la raíz nerviosa . 20 Métodos Serie 1: Las células del núcleo pulposo cultivadas se tiñeron inmunohistológicamente con un anticuerpo monoclonal para FNT(a). __e____=__.^^.»^i:« -* -> M7i " j*$$i***. * >• «•_.*.. , -fcfia_ _a_a.í|ajB_«_?____í_aIáÉ_i_-_^»&B^. 'V _.

Serie 2: El núcleo pulposo se cosechó de discos lumbares y se aplicó a la cauda equina sacrococcígea en 13 cerdos autólogamente . Cuatro cerdos recibieron 100 mg de doxiciclina intravenosamente, 5 cerdos tuvieron un bloqueo del anticuerpo monoclonal hacia FNT(a) aplicado localmente en el núcleo pulposo, y 4 cerdos permanecieron sin tratar y formaron el control. Tres días después de la aplicación, se determinó la velocidad de conducción de la raíz nerviosa sobre la zona de aplicación por estimulación eléctrica local.

Serie 3: Trece cerdos tuvieron núcleos pulposos autólogos localizados sobre su cauda equina sacrococcígea similar a la serie 2. Cinco cerdos (peso corporal 25 kg) recibieron Remicade® (infliximab) 100 mg i.v. preoperatoriamente, y 8 cerdos recibieron Embrel® (etanercept) 12.5 mg s.c. preoperatoriamente y adicionalmente 12.5 mg s.c. tres días después de la operación. Siete días después de la aplicación del núcleo pulposo, se determinó la velocidad de conducción de la raíz nerviosa sobre la zona de aplicación por estimulación eléctrica local de acuerdo a la serie 2.

E - 4. -J^iw^.^-¿SJÍ-__^^^_tt^*_k^ ¿ .µ-?. 3^! Ü^í^^ ^ ' ^^^^^^&^^^^^^^^^^¿^^^^^^^^ Resultados Serie 1: El FNT(a) se encontró presente en las células del núcleo pulposo.

Serie 2: El anticuerpo selectivo para FNT-a limitó la reducción de la velocidad de conducción nerviosa, aunque estadísticamente no significativamente con respecto a la serie de control. Sin embargo, el tratamiento con doxiciclina bloqueó significativamente la reducción de la velocidad de conducción inducida por los núcleos pulposos.

Serie 3: Ambos fármacos (infliximab y etanercept) bloquearon eficientemente la lesión nerviosa inducida por los núcleos pulposos y se encontraron velocidades de conducción nerviosa promedio después del tratamiento con ambos de estos dos fármacos.

Conclusión Por primera vez, una sustancia especifica, Factor de necrosis tumoral alfa, se ha enlazado a los efectos inducidos por los núcleos pulposos de las raíces nerviosas después de la aplicación local. Aunque los efectos de esta sustancia podrían ser sinérgicos con otras sustancias similares, los resultados del presente estudio podrían ser de importancia significativa para el entendimiento continuo de la actividad biológica de los núcleos pulposos y también, podría ser de uso potencial para estrategias terapéuticas futuras de ciática.

Después de considerar previamente tan sólo un componente tisular biológicamente inactivo, que comprende la raíz nerviosa espinal en la herniación discal, el núcleo pulposo se ha encontrado recientemente que es altamente activo, induciendo los cambios funcionales y estructurales en raíces nerviosas adyacentes cuando se aplican epiduralmente (24, 37, 38, 41, 42) . Por esta razón, se ha establecido que los núcleos pulposos autólogos podrían inducir cambios axonales y una lesión característica de mielina (24, 38, 41, 42), permeabilidad vascular aumentada (9, 44) coagulación intravascular (24, 36) y tal estructura de la ligadura de membrana o sustancias de las células de los núcleos pulposos son responsables de estos efectos (24, 37). Los efectos también se han encontrado que se bloquean eficientemente por metil-prednisolona y ciclosporina A (2, 38). Cuando se observan estos resultados críticamente, se observa que existe al menos una citocina que se relaciona con todos estos efectos, Factor de necrosis tumoral alfa (FNT-a). Para verificar si el FNT-a podría involucrarse en la lesión de raíz nerviosa inducida por el núcleo pulposo, la presencia de 5 FNT-a en las células del núcleo pulposo se verificó y estudió si los efectos inducidos por el núcleo pulposo pudieran bloquearse por doxiciclina, un receptor soluble de FNT, y un anticuerpo monoclonal específico de FNT, el último se administró localmente en el núcleo pulposo y 10 sistémicamente .

MATERIAL Y MÉTODOS.

Serie 1, Presencia de FNT-a en células del núcleo 15 pulposo en cerdos: Los núcleos pulposos (NP) de un total de 13 discos torácicos y lumbares se obtuvieron de un cerdo usado para otros propósitos. El NP se lavó una vez en medio F12 de Ham (Gibco BRL, Paisley, Scotland) y después se centrifugó y se suspendió en 5 ml de solución de colagenasa en medio F12 de Ham (0.8 mg/ml, Sigma Chemical Co., St Louis, MO, USA) durante 40 minutos, a 37 "C en matraces de cultivo tisular de 25 cm2. Los granulos de las células del NP separados se suspendieron en medio DMEM/F12 1:1 (Gibco BRL, Paisley, Scotland) suplementado con 1% de L-glutamina 200 mM (Gibco BRL, Paisley, Scotland) , 50 µg de sulfato de gentamicina (Gibco BRL, Paisley, Scotland) y 10% de suero fetal de 5 becerro (FCS), (Gibco, BRL, Paisley, Scotland). Las células se cultivaron a 37*C y 5% de C02 en aire durante 3-4 semanas y después se cultivaron directamente en los portaobjetos de vidrio tratados con el tejido tisular (Becton Dickinson & Co Labware, Franklin Lakes, NJ, USA). Después de 5 días en los portaobjetos de vidrio, las células se fijaron in si tu con acetona durante 10 minutos. Después de bloquear los antígenos irrelevantes por aplicación de H202 al 3% (Sigma Chemical Co., St Louis MO, USA) durante 30 minutos y suero de caballo (ImmunoPure ABC, estuche de teñido IgG de peroxidasa de ratón nr. 32028, Pierce, Rockford, IL) durante 20 minutos, el anticuerpo primario (anticuerpo monoclonal purificado TNF-a de anti-cerdo Endogen, Cambridge, MA, USA) se aplicó durante toda la noche a +40'C, diluido a 1:10, 1:20 y 1:40. Para el control, BSA (albúmina de suero de bovino, Intergen Co, New York, USA) suspendida en PBS (solución salina amortiguada con fosfato, Merck, Darmstadt, Alemania) se aplicó de la misma manera. Al siguiente día, las células se lavaron con 1% de BSA en PBS y el anticuerpo secundario (ImmunoPure ABC, estuche de teñido IgG de peroxidasa de ratón nr. 32028, Pierce, Rockford, IL) se aplicó durante 30 minutos. Para mejorar esta reacción, las células se expusieron al complejo Avidin-Biotin durante 30 minutos adicionales (ImmunoPure ABC, estuche de teñido IgG de peroxidasa de ratón nr. 32028, Pierce, Rockford, IL). Las células después se expusieron a 20 mg de DAB ( tetraclorhidrato de 3,3- diaminobencidina nr. D-5905, Sigma Chemical Co, St Louis MO, USA) y 0.033 ml de H202 al 3% en 10 ml de solución salina durante 10 minutos. Las células se lavaron en PBS, se deshidrataron en una serie de etanol, se montaron y se examinaron por microscopía luminosa mediante un observador no polarizado relacionando la presencia de una coloración café que indicó la presencia de FNT-a.

Serie 2, Evaluación neurofisiológica : Trece cerdos, (peso corporal de 25-30 kg) recibieron una inyección intramuscular de 20 mg/kg de peso corporal de Ketalar® (ketamina 50 mg/ml, Parke- Davis, Morris Plains, New Jersey) y una inyección intravenosa de 4 mg/kg de peso corporal de Hypnodil® (cloruro de metomidato 50 mg/ml, AB Leo, Helsingborg, Suecia) y 0.1 mg/kg de peso corporal de Stresnil® (azaperon 2 mg/ml, Janssen Pharmaceutica, Beerse, Bélgica). La anestesia s^tfdiantuvo por inyecciones intravenosas adicionales de 2 mg/kg de peso corporal de Hypnodil® y 0.05 mg/kg de peso corporal de Stresnil®. 5 Los cerdos recibieron una inyección intravenosa de 0.1 mg/kg de Stesolid Novum® (Diazepam, Dumex, Helsingborg, Suecia) posterior a la cirugía.

El núcleo pulposo se cultivó del 5to disco lumbar a través de un método retroperitoneal ('42). Aproximadamente 40 mg del núcleo pulposo se aplicó a la cauda equina sacrococcígea a través de incisión en la linea media y laminectomía de la primera vertebra coccígea. Cuatro cerdos no recibieron ningún tratamiento (sin tratamiento). Otros cuatro cerdos recibieron una infusión intravenosa de 100 mg de doxiciclina (Vibramicina, Pfizer Inc., New York, USA) en 100 ml de solución salina durante 1 hora. En cinco cerdos, el núcleo pulposo se mezcló con 100 gl de una suspensión de 1.11 mg/ml del anticuerpo de anti-FNT-a usado en la serie 1, antes de la aplicación.

Tres días después de la aplicación, los cerdos se volvieron a anestesiar mediante una inyección intramuscular de 20 mg/kg de peso corporal de Ketalar® y una inyección intravenosa de 35 mg/kg de peso corporal de Pentothal® (Tiopental sódico. Abbot lab, Chicago, IL) . Los cerdos se ventilaron en un respirador. La anestesia se mantuvo por una inyección en bolo intravenoso de 100 mg/kg de peso corporal de Cloralosa (a) -D (+) -gluco-cloralosa, Merck, Darmstadt, Alemania) y por un suministro continuo de 30mg/kg/hora de cloralosa. Se realizó una laminectomía de la 4ta vértebra sacral a la 3ra vértebra coccígea. Las raíces nerviosas se cubrieron con Spongostane® (Ferrosan, Dinamarca). La temperatura tisular local se monitoreo continuamente y se mantuvo a 37.5-38. O'C por medio de una lámpara de calentamiento.

La cauda equina se estimuló por dos electrodos de aguja de platino subdérmicas E2 (Grass Instrument Co., Quincy, MA) que se conectaron a un estimulador Grass SD9 (Grass Instrument Co . , Quincy, MA) y se colocaron suavemente intermitentemente en la cauda equina en los primeros 10 mm craneales y después 10 mm de cauda para el área expuesta. Para asegurar que sólo se registraron los impulsos de las fibras nerviosas expuestas, se cortó la raíz nerviosa que se excitó del canal espinal entre los dos sitios de estimulación. Una EMG se registró para dos electrodos de aguja de platino subdérmicas que se g¡¿^^gj ^fe^____»_¿^__'g%.^?^g¿fe^_y^¿ 'X- Á¿?&k¿,. 'í,^.s£^t¿Í>-7&7- colocaron en los músculos para-espinales en la cola aproximadamente a 10 mm. Este procedimiento es reproducible y representa una medida funcional de las fibras nerviosas motoras de las raíces nerviosas de la 5 cauda equina. La EMG se visualizó usando una computadora Macintosh Ilci proporcionad con elementos de programación Superscope y convertidor MacAdios II AID (G Intruments, Sommerville, MA) junto con un preamplificador Grass P18 (Grass Instrument Co . , Quincy, MA) . La distancia de separación entre los primeros picos de la EMG de los dos registros se determinó y la distancia de separación entre los dos sitios de estimulación en la cauda equina se midió con calibradores. La velocidad de conducción nerviosa entre 15 los dos sitios de estimulación, de esta manera, podría calcularse de estas dos mediciones.

La persona que realiza los análisis neurofisiológicos desconocía el protocolo experimental para cada animal individual, y después de terminar el estudio completo, los resultados se ordenaron en los tres grupos experimentales y las diferencias estadísticas entre los grupos se evaluaron por la prueba t de Student. El protocolo experimental para este experimento se aprobó por el comité ético local de ^^^^^^^^fc ,^__^.i_3_a___~J_&__. <_?t<?_a -a...»- _..«--». ^gígg ___¿_i6Jí¡tt¿_S_J_ investigación animal Serie 3: Trece cerdos tuvieron el núcleo pulposo autólogo colocado sobre su cauda equina sacrococcígea 5 similar a la serie 2. Cinco cerdos (peso corporal de 25 kg) recibieron el anticuerpo monoclonal de humano/murino Remicade® (Infliximab, Immmunex Corporation, Seattie, WA 98101, USA) 100 mg i.v. preoperatoriamente y 8 cerdos recibieron Enbrel® (etanercept, Centocor B.V., Leiden, the Netherlands) 12.5 mg s.c. preoperatoriamente y 12.5 mg s.c. adicionalmente tres días después de la operación. Siete días después de la aplicación del núcleo pulposo, la velocidad de conducción de la raíz nerviosa se determinó sobre la zona de aplicación por estimulación eléctrica local de acuerdo a la serie 2. Para vislumbrar el estudio la evaluación neurofisiológica, se llevó a cabo en paralelo a otro estudio y la persona que realizó los análisis no conocía de donde provenía el estudio y a que tratamiento especifico se sometió cada animal. Los animales no tratados se incluyeron en la serie 3 debido al conocimiento preexistente de la velocidad de conducción nerviosa después de 7 días de la aplicación del núcleo pulposo o grasa (control). La diferencia estadística entre los grupos, infliximab y etanercept, se verificó el núcleo pulposo sin tratamiento (control positivo de los resultados previos) y la aplicación de grasa retroperitoneal (control negativo de los resultados previos) usando ANOVA y PLSD de Fisher al 5%.

RESULTADOS Serie 1, Presencia de FNT-a en células de núcleo pulposo de cerdo: Ejemplos de la apariencia microscópica de luz de los portaobjetos de vidrio teñidos. En las secciones que usan BSA en PSB como "anticuerpo primario" (control) no se observó teñido, asegurando que no existió marcado y visualización de antígenos irrelevantes. Cuando el anticuerpo anti-FNT-a se aplicó a la dilución 1:40 sólo existió un teñido débil. Sin embargo, el teñido aumentó con diluciones disminuidas del anticuerpo. El teñido se observó en el soma de las células y no fue posible diferenciar si el FNT-a se localizó en el citoplasma, en la superficie celular ligada a la membrana celular o ambos .

Serie 2, Evaluación neurofisiológica : La aplicación del núcleo pulposo no modificado y sin ningún tratamiento, indujo una reducción en la velocidad de conducción nerviosa similar a los estudios previos (Tabla 1), mientras que el tratamiento con doxiciclina bloqueó completamente esta reducción (prueba t de Student p<0.01) . La aplicación local de anticuerpo anti- FNT-a también indujo un bloqueo parcial de esta reducción, aunque no tan completo como la doxiciclina y no es estadísticamente significativo para la serie sin tratamiento.

Serie 3: El tratamiento con ambos fármacos parece que previene la reducción inducida del núcleo pulposo de las velocidades de conducción de raíz nerviosa dado que la velocidad de conducción nerviosa promedio para ambos de estos grupos de tratamiento estuvieron cerca de la conducción promedio de la serie de aplicación de grasa, como se observa en un estudio previo (Tabla 2). Existió una diferencia estadísticamente significativa para la aplicación del núcleo pulposo, pero sin ningún tratamiento, observada para ambos fármacos.

Tabla 1 - Serie 2 Tratamiento n NCV fm/s+DE' Anti-FNT-a local 64±28 Doxiciclina 76±9 Sin tratamiento 46±12 Tabla 2 Serie 3 Tratamiento n NCV (m/s+DE) Grasa* 5 76±11 EmbreK 8 78±14 RemicadeC 5 79±15 Sin tratamiento* 5 45±19 * Resultados incluidos de la ref. no. 42, Ol arker et al, 1993 DISCUSIÓN 20 Los resultados del presente estudio demostraron que el FNT-a podría encontrarse en las células del núcleo pulposo del cerdo. Si el FNT-a se bloqueó por un anticuerpo monoclonal selectivo aplicado localmente, la reducción de la velocidad de conducción de raíz nerviosa inducida por el núcleo pulposo se bloqueó parcialmente, aunque no se comparó estadísticamente significante con los animales no tratados. Sin embargo, si los tratamientos sistémicos con doxiciclina, infliximab y etanercept se usaron para inhibir el FNT-a, la reducción de la velocidad de conducción nerviosa se previno significativamente . 10 En años recientes, se ha verificado que la aplicación local del núcleo pulposo autólogo podría lesionar las raíces nerviosas adyacentes. De esa manera, ha llegado a ser evidente que la lesión de la raíz nerviosa observada en la herniación discal no podría basarse exclusivamente en la deformación mecánica de la raíz nerviosa, sino que también podría inducirse por "efectos bioquímicos" desconocidos, relacionados con la presencia epidural de herniación del núcleo pulposo.

Aunque este nuevo campo de investigación ha generado muchos estudios experimentales, los mecanismos y sustancias involucradas no se conocen totalmente. Se ha observado que la aplicación local del núcleo pulposo autólogo podría inducir la lesión axonal (24, 37, 38, 40-42), una lesión característica del recubrimiento de mielina. (24, 38, 40-42), un aumento local de la permeabilidad vascular (9, 36, 44), coagulaciones intravasculares, reducción del flujo sanguíneo intraneural (43) y leucotaxis (36). Se ha observado que 5 los efectos relacionados con el núcleo pulposo podrían bloquearse eficientemente por metilprednisolona (38) y ciclosporina A (2), y ligeramente menos eficientemente con indometacina (3), y lidocaina (69). Además, se entiende que los efectos son mediados por las células del núcleo pulposo (37), particularmente por sustancias o estructuras ligadas a las membranas celulares (25). Cuando estos resultados se consideran críticamente, llega a ser evidente que al menos una citocina específica podría relacionarse con los efectos observados, factor de necrosis tumoral alfa (FNT-a). El FNT-a podría inducir la lesión nerviosa (29, 31, 45, 50, 66) principalmente observada como una lesión de mielina característica que se parece estrechamente con la lesión de mielina inducida por el núcleo pulposo (29, 47, 51, 54, 62, 64, 66, 70). El FNT-a también podría inducir un aumento en la permeabilidad vascular (47, 66) e iniciar la coagulación (22, 34, 63). Además, el FNT-a podría bloquearse por esteroides (4, 8, 21, 61, 68) y la ciclosporina A (11, 55, 67, 68). Sin embargo, el efecto bloqueador en el FNT-a no es tan pronunciado por NSAID ^á^^¿^^, a^S¿__^^¿_j£^,__..5s__a_ ._ _¿_*¿ .....-,.. ¡j¡gggg¡g¡ ¡|¿aí^g¿^A^^5¿^¿^ (14, 17, 20) y muy bajo o el opuesto por lidocaína (5, 32, 46, 60). Se observó recientemente que la aplicación local del núcleo pulposo podría inducir el comportamiento relacionado con el dolor en ratas, 5 particularmente hiperalgesia térmica (23, 40). El FNT-a también se ha encontrado que se relaciona con tales cambios de comportamientos dolorosos (12, 35, 56, 66), y también con neuropatías en general (30, 54, 56, 57). Sin embargo, no hay estudios que hayan verificado la 10 posible presencia del FNT-a en las células del núcleo pulposo .

Para verificar si el FNT-a podría relacionarse con la reducción del núcleo pulposo observado en la velocidad de conducción de la raíz nerviosa, fue necesario analizar primero si existió el FNT-a en las células del núcleo pulposo. Los resultados demostraron claramente que el FNT-a estuvo presente en estas células. El FNT-a se produce como precursor (pro-TNF) que se enlaza a la membrana y se activa por el corte de la membrana celular por una metalo-endopeptidasa dependiente de zinc (enzima que convierte el FNT-a, TACE) (6, 15, 16, 48, 49). De esta manera, esto podría relacionarse bien con los descubrimientos experimentales, cuando la aplicación de las membranas celulares simples de la reducción de la velocidad de conducción nerviosa inducida por las células del núcleo pulposo autólogo, que indicó que los efectos se mediaron por una sustancia ligada por membrana. Segundo, los efectos del FNT-a tuvo que bloquearse de una manera controlada. Después se eligió adicionar el mismo anticuerpo selectivo que se usó para la inmunohistoquímica en la serie 1, que se conoce que también bloquea los efectos del FNT-a, hacia el núcleo pulposo antes de la aplicación. También, se eligió tratar los cerdos con doxiciclina, que se conoce que bloquea el FNT-a (26, 27, 33, 52, 53) . Sin embargo, debido al bajo pH de la preparación de doxiciclina, se eligió tratar los cerdos por inyección intravenosa en lugar de la adición local al núcleo pulposo, dado que el núcleo pulposo a un bajo pH se ha encontrado que potencializa los efectos del núcleo pulposo (38, 39).

Dos fármacos recientemente desarrollados para la inhibición específica del FNT-a, también se incluyeron en el estudio.

El infliximab es un anticuerpo monoclonal quimérico compuesto de regiones variables de murino y constantes de humano, y se enlaza específicamente al FNT-a humano. ^.-,... a*t~ ¿^~**já ?t? _.__ Opuesto al anticuerpo monoclonal usado en la serie 2 durante el período de observación de 3 días, el infliximab no se administró localmente en el núcleo pulposo autotransplantado, sino que en lugar de esto 5 sistémicamente en una dosificación clínicamente recomendada (4 mg/kg). El etanercept es una proteína de fusión dimérica que consiste de la porción Fc de IgG de humano. El fármaco se administró en una dosificación comparable a la dosificación recomendada para el uso 10 pediátrico (0.5 mg/kg, dos veces por semana).

Los resultados con respecto a la velocidad de conducción nerviosa, mostraron que la reducción se bloqueó completamente por el tratamiento sistémico y, 15 tales velocidades de conducción nerviosa en estas series estuvieron cerca de la velocidad de conducción después de la aplicación de una sustancia de control (grasa retroperitoneal) de un estudio previo (42). La aplicación del anticuerpo anti-FNT-a hacia el núcleo 20 pulposo, también previno parcialmente la reducción en la velocidad de conducción nerviosa, sin embargo, no tal pronunciada como la doxiciclina, y la velocidad en esta serie no .fue estadísticamente diferente a la velocidad en la serie con los animales no tratados, debido a la 25 amplia desviación de los resultados. ^g^^g^^^^^^^^¡^^^^^^^^^,,,^,,^^^,^^^^_^^^_^__^^^^^g^^^^^^a^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^tt El hecho de que el tratamiento del anticuerpo anti- FNT-a sólo bloqueara parcialmente la reducción inducida por el núcleo pulposo de la velocidad de conducción nerviosa y la alta desviación estándar de los 5 resultados, probablemente podría tener al menos tres explicaciones diferentes. Primero, si se observan los resultados específicos dentro de este grupo, se encontró que la velocidad de conducción nerviosa fue baja en 2 animales (media 37.5 m/s) y alta en 3 animales (media 81.3 m/s). De esta manera, existen 2 grupos de resultados distintamente diferentes dentro de las series del tratamiento anti-FNT-a. Esto considera la alta desviación estándar y podría implicar que el efecto bloqueador fue suficiente en 3 animales y no suficiente en 2 animales. La carencia de efectos en estos animales podría basarse simplemente en la cantidad de anticuerpos con relación a las moléculas del FNT-a que no son suficientes, y si se había usado una dosificación superior del anticuerpo, los efectos del FNT-a, de esta manera, habrían sido bloqueados aún en estos animales. Después, tal escenario podría implicar teóricamente que el FNT-a sólo es el responsable de los efectos inducidos del núcleo pulposo observados, y que esto no podría verificarse experimentalmente debido a la cantidad del anticuerpo que es demasiado baja. )'.- - •&• . i ^^^^^^^^&^^^^^^^^^¿^^^^^¿^^^^^ Segundo, también se ha mostrado que las tetraciclinas, tal como doxiciclina y mmociclina podrían bloquear un número de citocinas y otras sustancias. Por ejemplo, podrían bloquear IL-1 (1, 28, 5 58), IFN? (27), NO-sintetasel y metaloproteinasas (1, 53, 58). Particularmente IL-1 y IFN? se conocen que actúan sinergísticamente con el FNT-a y se conocen que son más o menos neurotóxicos (7, 10, 13, 18, 19, 56, 59). Estas sustancias también se bloquean por los esteroides y la ciclosporina A que corresponde bien con las observaciones previas en la lesión de la raíz nerviosa inducida por el núcleo pulposo, las cuales han mostrado que los efectos inducidos por el núcleo pulposo podrían bloquearse por estas sustancias (8, 67). Por lo tanto, también se podría considerar la posibilidad de que un bloqueo selectivo de FNT-a no podría ser suficiente para bloquear completamente los efectos inducidos por el núcleo pulposo en la función nerviosa, y tal bloqueo simultáneo de otras sustancias smergísticas también es necesario. De esta manera, este escenario, por otro lado, implica que el FNT-a no es exclusivamente responsable de los efectos inducidos por el núcleo pulposo, y podría ser necesario, que otras sustancias sinergísticas también se bloqueen por la doxiciclina.

La tercera explicación podría ser que la cantidad del FNT en el núcleo pulposo podría ser suficiente para iniciar la cascada fisiopatológica localmente en la raíz nerviosa, que comprende la permeabilidad y agregación vascular aumentada y recuperación de leucocitos sistémicos. Sin embargo, estos leucocitos tienen el contenido principal de FNT-a y tal tratamiento sistémico en una dosificación suficiente es necesario para bloquear la contribución de estos leucocitos, y por lo 10 cual, también bloquear los casos que llevan a la lesión nerviosa .

El FNT-a podría tener varios efectos fisiopatológicos . Podría tener efectos directos en 15 tejidos, tal como tejido nervioso y vasos sanguíneos, podría desencadenar otras células para producir otras sustancias patogénicas y podría desencadenar la liberación de más FNT-a, ambos por células inflamatorias y también por células de Schwann localmente en el tejido 20 nervioso (65) . De esta manera, es la razón para creer que aún cantidades bajas del FNT-a podrían ser suficientes para iniciar estos procesos y que hay una recuperación local de células que producen citocinas y un aumento subsecuente en la producción y liberación de 25 otras citocinas así como el FNT-a. El FNT-a, por lo ^^¡j^^ii¿^^^^^^^^^^^^^^^^¿^^^^^^^^^^^^^^*¿^^^^^^^£tó! *< tanto, podría actuar como la "llave de contacto" de los procesos fisiopatológicos ^""jugar un papel importante para la iniciación de la cascada fisiopatológica después de la lesión nerviosa inducida por el núcleo pulposo. Sin embargo, la contribución principal del FNT-a podría derivarse de los leucocitos recuperados, agregados y podría ser aún de los leucocitos extravasados, y tal bloqueo farmacológico exitoso podría alcanzarse solamente mediante el tratamiento sistémico.

En conclusión, aunque el papel exacto del FNT-a no puede entenderse completamente a partir de la preparación experimental, se podría concluir que por primera vez una sustancia específica (FNT-a) se ha enlazado con la lesión de la raíz nerviosa inducida por el núcleo pulposo. Esta nueva información podría ser de importancia significativa para el entendimiento continuo de la lesión nerviosa inducida por el núcleo pulposo, así como del surgimiento de la cuestión del uso clínico futuro potencial de la interferencia farmacológica con el FNT-a y las sustancias relacionadas, para el tratamiento de la ciática.

La presencia del FNT-a en células del núcleo pulposo de cerdos, de esta manera, se verificó inmunohistoquímicamente . El bloqueo del FNT-a por un anticuerpo monoclonal aplicado localmente, limitó parcialmente la reducción inducida por el núcleo pulposo de la velocidad de conducción de la raíz nerviosa, mientras que el tratamiento intravenoso con doxiciclina, infliximab y etanercept bloqueó significativamente esta reducción. Estos resultados por primera vez enlazan una sustancia específica, el FNT-a, a la lesión nerviosa inducida por el núcleo pulposo. 10 La aminoguanidina ha mostrado que inhibe la liberación de óxido de nitrógeno (NO) a las lesiones de la raíz nerviosa, inhibiendo la sintetasa de óxido de nitrógeno inducible, y la aminoguanidina es, de esta 15 manera, un compuesto que inhibe un compuesto desencadenado por la liberación del FNT-a.

Los compuestos de la invención pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación, e.g, 20 oralmente, en la forma de tabletas, cápsulas, tabletas recubiertas de azúcar o película, soluciones líquidas; rectalmente, en la forma de supositorios; parenteralmente, e.g., intramuscularmente o por inyección intravenosa o infusión. El régimen terapéutico 25 para los diferentes síndromes clínicos debe adaptarse al e^.^flfe,.^..^^ ^„, ^ÉSÉ i2^^^^£*<??^ tipo de patología tomada en cuenta, como es usual, también la vía de administración, la forma en que el compuesto se administra y edad, peso, y condición del sujeto involucrado.

Se emplea la vía oral, en general, para todas las condiciones, que requieren tales compuestos. En los casos de emergencia, se da de preferencia a la inyección intravenosa. Para estos propósitos los compuestos de la invención podrían administrarse oralmente a dosificaciones en el rango de aproximadamente 20 a aproximadamente 1500 mg/día. Por supuesto, estos regímenes de dosificación podrían ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima.

La naturaleza de la composición farmacéutica que contienen los compuestos de la invención en asociación con vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, por supuesto, dependerá de la vía de administración deseada. La composición podría formularse de la manera convencional con los ingredientes usuales. Por ejemplo, los compuestos de la invención podrían administrarse en la forma de soluciones o suspensiones acuosas o aceitosas, tabletas, pildoras, cápsulas de gelatina (duras o suaves) jarabes, gotas o supositorios.

Así, para la administración oral, las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención son preferentemente tabletas, pildoras o cápsulas de gelatina, que contienen la sustancia activa junto con diluyentes, tal como lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa; lubricantes, e.g., sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio, y/o polietilen glicoles; o también podrían contener aglutinantes, tal como almidones, gelatina, metil celulosa, carboximetilcelulosa, goma arábiga, tragacanto, polivinilpirrolidona; agentes desagregantes tal como almidones, ácido algínico, alginatos, glicolato de almidón de sodio, celulosa microcristalina; agentes efervescentes tal como carbonatos y ácidos; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes, tal como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y en general sustancias farmacéuticamente inertes y no tóxicas usadas en la formulación de las composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas podrían elaborarse de las maneras conocidas, e.g., por medio de mezclado, granulación, formación de tabletas, procesos de recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película. En el caso de los compuestos provistos de película pueden seleccionarse para proporcionar la liberación en ' jt»éw <S¿_J SÉtii .*é ¿.7?! & ^¿ el lugar correcto en el tracto intestinal con respecto a la absorción y el efecto máximo. De esta manera, los formadores de película dependientes del pH pueden usarse para permitir la absorción en los intestinos como tales, 5 por lo cual, se usan normalmente diferentes ftalatos o derivados y polímeros de ácido acrí lico/ácido metacrílico .

Las dispersiones líquidas para la administración 10 oral podrían ser e.g., jarabes, emulsiones y suspensiones .

Los jarabes podrían contener como vehículo, e.g., sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol. 15 Las suspensiones y emulsiones podrían contener como vehículo, e.g., una goma natural, tal como goma arábica, goma de xantano, agar, alginato de sodio, pectina, metil celulosa, carboximetilcelulosa, alcohol polivinílico.

Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares podrían contener junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como e.g., agua estéril, aceite de olivo, oleato de etilo, glicoles, e.g., propilen glicol, y si se desea, una cantidad apropiada de clorhidrato de lidocaína. También pueden adicionarse adyuvantes para desencadenar el efecto de la inyección.

Las soluciones para inyección o infusión intravenosa podrían contener como vehículo, e.g., agua estéril, o preferentemente, una solución salina isotónica estéril, así como adyuvantes usados en el campo de la inyección de los compuestos activos. 10 Los supositorios podrían contener junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, e.g., polietilen glicol de manteca de cacao, un surfactante de éster de ácido graso de polietilen 15 sorbitan o lecitina.

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Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los objetos a que la misma se refiere.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes.

Claims (34)

REIVINDICACIONES

1. El uso de un inhibidor del FNT-a, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: inhibidores de metaloproteinasa excluyendo metilprednisolona, tetraciclinas incluyendo las tetraciclinas modificadas químicamente, quinolonas , corticosteroides, talidomida, lazaroides , pentoxifilinas, derivados del ácido hidroxámico, ácidos carbocíclicos, naftopiranos , receptores de citocina solubles, anticuerpos monoclonales hacia el FNT-a, amrinona, pimobendan, vesnarinona, inhibidores de la fosfodiesterasa III, lactoferrina y análogos derivados de lactoferrina, y melatonina en la forma de la base o su sal de adición, en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación del FNT-a y compuestos desencadenados mediante la liberación de o la presencia de FNT-a, que inhiben el FNT-a del disco espinal . 10

2. El uso de un inhibidor del FNT-a en la forma de un receptor de citocina soluble en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa 15 causada por la liberación del FNT-a, y compuestos desencadenados mediante la liberación de o la presencia del FNT-a que inhiben el FNT-a del disco espinal.

3. El uso de acuerdo a la reivindicación 1 o 2, en 20 donde el inhibidor del FNT-a es el receptor de citocina soluble etanercept.

4. El uso de un inhibidor del FNT-a en la forma de un anticuerpo monoclonal hacia el FNT-a en la 25 preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación de FNT-a, y compuestos desencadenados mediante la liberación de o la presencia de FNT-a que inhiben el FNT-a del disco 5 espinal.

5. El uso de acuerdo a la reivindicación 1 o 4, en donde el inhibidor del FNT-a es el anticuerpo monoclonal infliximab . 10

6. El uso de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el inhibidor del FNT-a se selecciona del grupo que consiste de tetraciclina, doxiciclina, limeciclina, o x i t e t r a c i c l i n a , m i n o c i c l i n a y 15 dedimetilaminotetraciclina de tetraciclinas modificadas químicamente, en la forma de bases o sales de adición.

7. El uso de acuerdo a la reivindicación 6, en donde el inhibidor del FNT-a es doxiciclina. 20

8. El uso de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el inhibidor del FNT-a se selecciona de los compuestos del ácido hidroxámico, ácidos carbocíclicos y derivados, talidomida, lazaroides, pentoxifilina, naftopiranos , 25 amrinona, pimobendan, vesnarinona, inhibidores de la fosfodiesterasa III, melat^£ ?_a en la forma de bases o sales de adición.

9. El uso de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el inhibidor del FNT-a se selecciona de norfloxacina, ofloxacina, c ipr o f 1 oxac i na , ga t i f 1 oxa c i na , perfloxacina, lomefloxacina y temafloxacina en la forma de bases o sales de adición.

10. El uso de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el inhibidor del FNT-a es un inhibidor de la metaloproteinasa en la forma de base o sales de adición.

11. El uso de una sustancia que inhibe un compuesto desencadenado por la liberación del FNT-a, tal como interferon-gamma, interleucina-1 y óxido de nitrógeno (NO) , en la forma de base o sales de adición en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación del FNT-a y los compuestos desencadenados mediante la liberación de o la presencia del FNT-a que inhiben el FNT-a del disco espinal .

12 El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en , .náe la lesión de la raíz nerviosa se induce por herniación del disco.

13. El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde la lesión de la raíz nerviosa se induce por el núcleo pulposo.

14. El uso de acuerdo a la reivindicación 12 o 13, en donde la lesión de la raíz nerviosa es la ciática. 10 15. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la lesión de la raíz nerviosa, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un receptor de citocina

15 soluble .

16. Una composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 15, caracterizada porque el receptor de citocina soluble es etanercept. 20

17. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la lesión de la raíz nerviosa, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un anticuerpo monoclonal 25 selectivo para el FNT-a.

18. Una composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 17, caracterizada porque el anticuerpo monoclonal es infliximab.

19. Un método para bloquear parcialmente la reducción inducida por el núcleo pulposo de la velocidad de conducción nerviosa, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad de bloqueo efectiva de un anticuerpo monoclonal selectivo para el FNT-a.

20. Un método de acuerdo a la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo monoclonal es infliximab .

21. Un método para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación del FNT-a en mamíferos, incluyendo el hombre, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad farmacéuticamente efectiva de un inhibidor del FNT-a seleccionado del grupo que consiste de: inhibidores de la metaloproteinasa excluyendo metilprednisolona, tetraciclinas incluyendo tetraciclinas modificadas químicamente, ,-^¿»^j^^<te.-^j^»a^_í a?¿^^-». jte ».>fc, . «¡^ quinolonas, corticosteroides, talidomida, lazaroides, pentoxifilinas, derivados del ácido hidroxámico, ácidos carboxíclicos , naftopiranos, receptores de citocina solubles, 10 anticuerpos monoclonales hacia el FNT-a, amrinona, pimobendan, vesnarinona, inhibidores de la fosfodiesterasa III, 15 lactoferrina y análogos derivados de lactoferrina, y melatonina en la forma de la base o su sal de adición. 20

22. Un método para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación del FNT-a en mamíferos, incluyendo el hombre, caracterizado porque comprende la administración de una 25 cantidad farmacéuticamente efectiva de un inhibidor del g¡fe^^^w¡gi ^ ^^tós É aÉ^atogfe FNT-a en la forma de un receptor de citocma soluble.

23. Un método de acuerdo a la reivindicación 21 o 22, caracterizado porque el inhibidor del FNT-a es el 5 receptor de citocina soluble etanercept.

24. Un método para el tratamiento de padecimientos espinales como lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación de FNT-a en mamíferos, incluyendo el hombre, 10 caracterizado porque comprende la administración de una cantidad farmacéuticamente efectiva de un inhibidor del FNT-a en la forma de un anticuerpo monoclonal hacia el FNT-a. 15

25. Un método de acuerdo a la reivindicación 21 o 24, caracterizado porque el inhibidor del FNT-a es el anticuerpo monoclonal infliximab.

26. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, 20 caracterizado porque el inhibidor del FNT-a se selecciona del grupo que consiste de tetraciclina, doxiciclina, limeciclina, oxitetraciclina, minociclina y dedimetilaminotetraciclina de tetraciclinas modificadas químicamente, en la forma de bases o sales 25 de adición. ^ s ^^^^?—Mj^±^^sA^^^s=!^£^^^¿^..... ^ . k -.^ , ^^^^^^ ^m ^^&^&^^^^^^^^A^ tí^ ?

27. Un método de acuerdo a la reivindicación 26, caracterizado porque el inhibidor del FNT-a es doxiciclina .

28. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, caracterizado porque el inhibidor del FNT-a se selecciona de los compuestos del ácido hidroxámico, ácidos carbocíclicos y derivados, talidomida, lazaroides, pentoxifilina, naftopiranos , amrinona, 10 pimobendan, vesnarinona, inhibidores de la fosfodiesterasa III, melatonina en la forma de bases o sales de adición.

29. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, 15 caracterizado porque el inhibidor del FNT-a se selecciona de norfloxacina, ofloxacina, ciprofloxacina, gat i f 1 oxac ina , pefloxacina, lomef loxacina y temafloxacina en la forma de bases o sales de adición. 20

30. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, caracterizado porque el inhibidor del FNT-a es un inhibidor de la metaloproteinasa en la forma de base o sales de adición. 25

31. Un método para el tratamiento de padecimientos ««*._*________. ~*^^ ,_*tt___¿an»s___*,J ^ ^.. ,^.... ^Í^^^^^^^S^^^^^^Á^A^^^,^^^ espinales como la lesión de la raíz nerviosa causada por la liberación del FNT-a y los compuestos desencadenados por la liberación de o la presencia del FNT-a en mamíferos, incluyendo el hombre, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad farmacéuticamente efectiva de una sustancia que inhibe un compuesto desencadenado por la liberación del FNT-a, tal como interferon-gamma, interleucina-1 y óxido de nitrógeno (NO), en la forma de base o sales de adición.

32. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, caracterizado porque la lesión de la raíz nerviosa se induce por herniación del disco.

33. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, caracterizado porque la lesión de la raíz nerviosa se induce por el núcleo pulposo.

34. Un método de acuerdo a la reivindicación 21, caracterizado porque la lesión de la raíz nerviosa es la ciática . _¿1 s„í__&____á - ^-__a_£^_»=_M_Bgaaah'