MXPA01001255A

MXPA01001255A - Inhibidores de senalizacion de reduccion-oxidacion y metodos para utilizar los mismos..

Info

Publication number: MXPA01001255A
Application number: MXPA01001255A
Authority: MX
Inventors: Garth Powis
Original assignee: Prolx Pharmaceuticals Lp
Priority date: 1998-07-31
Filing date: 1999-08-02
Publication date: 2002-11-29
Also published as: WO2000006088A2; AU5463099A; US6372772B1; WO2000006088A3; CA2339233A1

Abstract

la presente invencion se refiere a una composicion de formulacion la cual inhibe o interfiere con la funcion de reduccion-oxidacion celular, y metodo para utilizar los mismos a fin de restablecer la funcion celular normal. Mas especificamente, la composicion de la presente invencion interfiere con o inhibe la proliferacion celular anormal y o restablece la apoptosis celular.

Description

INHIBIDORES DE SEÑALIZACIÓN DE REDUCCIÓN-OXIDACIÓN Y MÉTODOS PARA UTILIZAR LOS MISMOS SOLICITUD RELACIONADA Esía solicitud reivindica el estado continuo de la Solicitud de Patente Provisional No. de Serie 06/054,566, presentada el 1 de Agosto de 1 997.

CAM PO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a agentes los cuales inhiben o interfieren con los sistemas de reducción-oxidación así como también a la utilización de estos agentes como herramientas de diagnóstico y/o agentes terapéuticos. Más específicamente, la presente invención se refiere a agentes los cuales interfieren con o inhiben un sistema de reducción-oxidación de tioredoxina/tioredoxina.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA ANTERIOR Los sistemas de reducción-oxidación celular parecen ser muy importantes para la actividad celular normal. Las células mantienen un ambiente intracelular que se reduce en el frente de un ambiente extracelular altamente oxidante. Las alteraciones reguladas en el estado de reducción-oxidación ¡ntracelular (señalización de reducción-oxidación) pueden modular eventos tales como síntesis de ADN , activación de enzimas, expresión genética selectiva, regulación del ciclo celular, crecimiento celular, y m uerte celular programada Una de las consecuencias más importantes de la señalización de reducción-oxidación intracelular es un cambio en el estado oxidante de residuos de cisteína seleccionados en algunas proteínas. La modificación post-traducción de cisteína es difícil de seguir debido a que carece de un marcador conveniente y se invierte fácilmente cuando los contenidos celulares se exponen a condiciones oxidantes extracelulares. Un tipo de función celular anormal es la proliferación celular anormal. La proliferación celular anormal es una característica cardinal de malignidades humanas. Durante la década pasada hubo muchas ideas sobre las biomoléculas que regulan la proliferación celular y las trayectorias en las cuales operan. Se han identificado estas biomoléculas como objetivos farmacológicos, terapéuticos, y/o de diagnóstico para agentes que inhiben la proliferación celular. Otro tipo de función celular anormal es la resistencia a la apóptosis. La apóptosis es una forma de muerte celular programada caracterizada por formación de ampollas en la membrana, marginación de cromatina, y descomposición del ADN cromosómico en fragmentos del tamaño de nucleosoma. La muerte celular programada o apóptosis es un evento importante en los procesos normales de desarrollo y remodelación de tejidos. La pérdida de apóptosis puede conducir a enfermedades asociadas con proliferación celular, tal como enfermedades autoinmune de cáncer, enfermedades de inflamación e hiperproliferación , mientras que la apóptosis incrementada puede conducir a enfermedades neurodegenerativas y destrucción de tej idos, así como también a daños cardiovasculares. Normalmente, cuando una célula sufre de daño genético substancial que no puede repararse mediante procesos de reparación de ADN normales, esto se reconoce por mecanismos sensoriales en la célula y se inicia una secuencia de eventos que conduce a la muerte de la célula. La apóptosis da como resultado la muerte de células dañadas individuales y protege el organismo de cambios genéticos potencialmente dañinos que pueden conducir a crecimiento celular no regulado que incluye cáncer. La resistencia a la apóptosis se ha correlacionado con la inducción del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina. Existen ahora casos documentados en donde la inhibición de la apóptosis por la expresión anormal de un oncogen o la pérdida de gene supresores de tumor se encuentra estrechamente asociada con malignidades. Se observa también que a medida que las células se desarrollan de un estado no transformado, a través de un estado pre-maligno a uno completamente transformado, progresivamente pierden su capacidad de experimentar apóptosis. La apóptosis también se inhibe por algunas infecciones virales, en enfermedades autoinmunes y enfermedades cutáneas hiperproliferativas. El descubrimiento de moléculas que interfieren con o que inhiben los sistemas de reducción-oxidación celular satisface una necesidad en la materia al proporcionar nuevas composiciones diagnósticas o terapéuticas útiles en la detección, prevención, y tratamiento de enfermedades relacionadas con actividad celular anormal (es decir, proliferación y' apópfosís) Estas enfermedades incluyen cáncer, infecciones virales y otras infecciones, enfermedades inflamatorias, enfermedades cardiovasculares, enfermedades autodegenerativas, enfermedades cutáneas y padecimientos ?nmunológicos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Las proteínas y enzimas involucradas en la reacción de reducción-oxidación celular proporcionan un sitio atractivo para el desarrollo de terapias, diagnóstico y ensayos para estados de enfermedad asociados con función celular anormal. Estos agentes pueden servir como agentes quimioterapéuticos por sí mismos o pueden aumentar la eficacia de los agentes quimioterapéuticos existentes. Debido a las estrechas interacciones entre las trayectorias de señalización intracelular y la muerte, los inhibidores eficaces y selectivos de proliferación celular pueden ocasionar también muerte celular deseable. Las estrategia para seleccionar como objetivo procesos relacionados con reducción-oxidación en el desarrollo de terapias anticáncer pueden subdividirse en tres áreas principales. Primero, ha existido actividad considerable en la explotación de la naturaleza hipóxica de tumores sólidos El conducir esta carga es la búsqueda de drogas bioreductivas las cuales se activarán metabólicamente en la fracción hipóxica Este esfuerzo ha incluido la búsqueda de agentes que modifiquen (tanto aumentar como disminuir) la fracción hipóxica Un seg undo planteamiento intenta alterar los niveles de enzimas o las actividades a través de la terapia genética o de inducción por agentes no tóxicos. Finalmente, las trayectorias de señalización celular que tienen puntos de control de reducción-oxidación se vuelven el objetivo de la intervención terapéutica o quimiopreventiva. Los inhibidores de la reducción-oxidación celular o agentes que interfieren con la reducción-oxidación celular tienen fuertes aplicaciones potenciales como agentes quimioprevent?vos o químioterapéuticos. La invención se refiere a inhibidores de señalización de reducción-oxidación y a un método para utilizar estos inhibidores para el tratamiento terapéutico o profiláctico de un huésped mam ífero ocasionado por función celular anormal. El(los) inhibidor(es) puede(n) administrarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos (por ejemplo, otras drogas anti-cáncer). Esta invención se refiere a una composición comprendida de un inhibidor de señalización de reducción-oxidación , junto con un portador farmacéuticamente aceptable de dicho inhibidor. Es preferible q ue et(los) inhibidor(es) de la señalización de reducción-oxidación evite(n) la inhi bición de la apóptosis Preferentemente el inhibidor de la señalización de reducción-oxidación inhibe o interfiere con un sistema de señalización de reducción-oxidación, y más preferentemente, el inhibidor de dicho sistema de tioredoxina es un inhibidor de tioredoxina o un inhibidor de reductasa de tioredoxina . La presente invención se refiere también a una composición que comprende o que incluye dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación con u n ÍC50 TR/Trx menor q ue aproximadamente 50 µg.'ml. Preferentemente el inhibidor de señalización de reducción- oxidación celular tiene un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 25 µg/ml, más preferentemente un IC5o TR/Trx menor que aproximadamente 10 µg/ml , incluso más preferentemente un IC50 TR/Trx menor que * aproximadamente 5 µg/ml, y muy preferentemente el inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular tiene un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 1 µg/ml. Preferentemente el inhibidor de señalización de reducción- oxidación celular se selecciona a partir del grupo que consiste en NSC ;0 401 005, NSC 208731 , NSC 382000, NSC 665103, NSC 617145, NSC 61 8605, NSC 622378, NSC 6201 09, NSC 1 63027 , NSC 1 31 233, NSC 6651 02, NSC 631 1 36, NSC 681 277, NSC 140377 , NSC 603084, NSC 382007, NSC 635002, NSC 620358, NSC 657028, NSC 661221 , NSC 6221 88 , NSC 645330, NSC 350629, NSC 1 02817, NSC 626162, NSC 15 655897, NSC 267461 , NSC 627124, NSC 610187, NSC 624982, NSC 664951 , NSC 277293, NSC 608972, NSC 634761 , NSC 664271 , NSC 665878, NSC 625814, NSC 264054, NSC 652257 , NSC 661 225, NSC 637828, NSC 647546, NSC 655305, NSC 641 396, NSC 668262, NSC 662781 y NSC 626678. 0 La presente invención se refiere también a una composición comprendida de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente el cual inhibe una señalización de reducción-oxidación celular en donde el agente evita también la inhibición de la apóptosis. Preferentemente el agente tiene un IC50 TR/Trx en el rango de aproximadamente 1 0 µg/ml hasta aproximadamente 25 µg/ml, más preferentemente un IC50 TR/Trx en el rango de aproximadamente 5 µg/ml hasta aproximadamente 1 0 µg/ml, incluso más preferentemente un IC5Q TR/Trx en el rango de aproximadamente 1 µg/ml hasta aproximadamente 5 µg/ml, y muy preferentemente en un rango de aproximadamente .0001 µg/ml hasta aproximadamente 1 µg/ml. La invención se refiere también a una composición comprendida de un inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular y un portador farmacéuticamente aceptable, en donde el inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular se selecciona a partir del grupo que consiste en compuestos NSC identificados en la presente y preferentemente en donde la inhibición se encuentra en una cantidad terapéuticamente eficaz. La cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra preferentemente en un rango desde aproximadamente 0.05 mg/kg/día hasta aproximadamente 5,000 mg/kg/d ía, más preferentemente en un rango desde aproximadamente 0.5 mg/kg/día hasta aproximadamente 500 mg/kg/día , más preferentemente en un rango de aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 50 mg/kg/día, y todavía más preferentemente, la cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente 2 mg/kg/día hasta aproximadamente 20 mg/kg/día, y muy preferentemente la cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente 5 mg/kg/día hasta aproxim adamente 10 mg/kg/d ía.

La invención se refiere también a una composición para tratar una enfermedad comprendida de un inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular en una dosis eficaz en el tratamiento de dicha enfermedad. La enfermedad se relaciona preferentemente a una función de reducción-oxidación y más preferentemente a proliferación celular anormal y/o a apóptosis anormal. La enfermedad se selecciona preferentemente a partir del grupo que consiste en cáncer, daño de reperfusión ulterior a la isquemia, hepatitis, esclerosis lateral amietrófica, enfermedades neurodegenerativas, enfermedad autoinmune de enfermedades ?e Alzheimer, síndrome de Sjogren, Lupus, artritis reumatoídes, VIH, síndrome de Hermansky-Pudlack, daño oxidante retinal, retinopatía, hiperplasia cutánea, envejecimiento, daño ultravioleta, cicatrización de heridas, enfermedad de Chron, colitis ulcerativa, angiogénesis, padecimientos uterinos, síndrome de agotamiento respiratorio adulto (ARDS), padecimientos pulmonares, infeccione virales y oras infecciones tales como virus de herpes, virus pustular e infecciones de adenovirus, condiciones inflamatorias, enfermedades autoinmunes tales como, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria de intestino, y diabetes autoinmune, nefritis glomerular mediada inmune, enfermedades hiperproliferativas tales como fungoides de fibrosis, psoriasis, y micosis. Es preferible que el inhibidor de la señalización de reducción-oxidación celular inhibe la actividad de tioredoxina que se encuentra asociada con la tioredoxina y la reductasa de tioredoxina. Esta invención se refiere a un método para inhibir el crecimiento en una célula comprendida de contactar la célula con una cantidad eficaz de un inhibidor de actividad de reducción-oxidación , en donde el inhibidor de actividad de reducción-oxidación es un inhibidor de un sistema de reducción-oxidación de tioredoxina/reductasa de tioredoxina, e incluso más preferentemente en donde dicho agente evita la inhibición de apóptosis. Es preferible que el inhibidor de la señalización de reducción-oxidación celular tiene un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 50 µg/ml , preferentemente menor que aproximadamente 25 µg/ml. más preferentemente menor que aproximadamente 10 µg/ml, incluso más preferentemente un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 5 µg/ml, y muy preferentemente el inhibidor de la señalización de reducción-oxidación celular tiene un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 1 /ml . Preferentemente, el inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular se selecciona a partir del grupo que consiste en compuestos NSC referidos en la presente El crecimiento en una célula se inhibe con una cantidad eficaz de inhibidor la cual puede basarse en la eficiencia de los monitores activos previamente identificados. Preferentemente, la cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en el rango desde aproximadamente 0.01 mg/kg/día hasta aproximadamente 500 mg/kg/d ía. Más preferentemente dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente 0.1 mg/kg/d ía hasta aproximadamente 250 mg/kg/día. I ncluso más preferentemente dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un ra ng o desde aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 50 mg/kg/día. Todavía más preferentemente, dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 20 mg/kg/día, y muy preferentemente dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 10 mg/kg/día. Otro aspecto de la presente invención es un método para inhibir el crecimiento tumoral comprendido de la administración de una cantidad eficaz de un inhibidor .de actividad de tioredoxina a un paciente en necesidad de la misma. Preferentemente, pero ciertamente no un requisito, es q ue el agente evita también la inhibición de la apóptosis. El método para inhibir el crecimiento tumoral involucra la administración del inhibidor en las cantidades terapéuticamente eficaces descritas con anterioridad . Finalmente, la presente invención se refiere a un método para tratar un estado de enfermedad comprendido de administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente el cual inhibe la actividad de tioredoxina en donde dicho agente tiene un IC50 TR/Trx aceptable predeterminado como se describe con anterioridad.

BREVE DESCRI PCIÓN DE LA INVENCIÓN Las características, aspectos y ventajas de la presente invención se comprenderán mejor con respecto a la siguiente descripción , reivindicaciones anexas, y dibujos acompañantes en donde: La Fig ura 1 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de IC50 de aproximadamente 0.39 hasta menores que aproximadamente 1.0 µg/ml (NSC 131233, NSC 665102, NSC 631136, NSC 140377 y NSC 603084). La Figura 2 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de IC50 de aproximadamente 1.1 hasta menores que aproximadamente 2.0 µg/ml (NSC 382007, NSC 635002, NSC 620358, NSC 657028, NSC 661221 y NSC 622188). La Figura 3 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de IC50 de aproximadamente 2.0 hasta aproximadamente 4.0 µg/ml (NSC 350629, NSC 102817, NSC 626162, NSC 655897, NSC 267491, NSC 627124, NSC 610187 y NSC 624982). La Figura 4 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de IC50 de aproximadamente 6.7 hasta aproximadamente 10.0 µg/ml (NSC 664951, NSC 277293, NSC 608972, NSC 634761, NSC 664271 y NSC 665878) La Figura 5 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de IC50 de aproximadamente 11.0 hasta aproximadamente 250 µg/ml (NSC 625814, NSC 264054, NSC 652257, NSC 661225. NSC 637828 y NSC 647546). La Figura 6 ilustra las estructuras de los inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con valores de !C50 de aproximadamente 33.0 hasta aproximadamente 50.0 µg/ml (NSC 655305, NSC 641 396, NSC 668262, NSC 662781 y NSC 626678).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos o mezclas de compuestos que interfieren, inhiben, o compiten con sistemas de reducción-oxidación, particularmente sistemas de reducción-oxidación q ue involucran proteínas que tienen residuos de cisteína, y más particularmente a sistemas de reducción-oxidación que involucran tioredoxina y/o reductasa de tioredoxina. Los agentes pueden utilizarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos o métodos terapéuticos. La terapia de com binación (es decir, quim ioterapia) q ue utiliza dos o más drogas terapéuticas para tratar tumores malignos en humanos se encuentra actualmente en uso en investigaciones y en la cínica y se contempla específicamente en la presente. Para el cáncer, las drogas terapéuticas o anti-cáncer pueden ser antimetabolitos, agentes alquilantes, antibióticos, venenos en general, etc. Las combinaciones de drogas se administran en un intento por obtener un efecto citotóxico sinerg ístico en la mayoría de los cánceres, por ejemplo, carcinomas, melanomas, linfomas, y sarcomas, y para reducir o elim inar la emergencia de las células resistentes a la droga y para reducir los efectos secundarios a cada droga. Según se utiliza en la presente, el térm ino tratamiento "profiláctico o terapéutico" se refiere a la administración del huésped o sujeto de los inhibidores de señalización de reducción-oxidación antes o después de comenzar el daño biológico al huésped. Si el inhibidor o el(los) agente(s) biológico(s) se administra(n) antes de la exposición al agente que ocasiona el daño biológico o para evitar la ocurrencia de la enfermedad, el tratamiento es profiláctico (es decir, protege el huésped contra el daño), como si se administrara después de la exposición al agente que ocasiona la enfermedad, el tratamiento es terapéutico (es decir, alivia el daño existente). Según se utiliza en la presente, el término "aproximadamente" significa más o menos 10% del número al cual se está haciendo referencia. Por ejemplo, aproximadamente 1 0 gramos significa en el rango de 9-1 1 gramos. Según se utiliza en la presente, IC50 TR/Trx se refiere a la concentración que ocasiona una inhibición al 50% en la actividad en el sistema que se está midiendo. Por ejemplo, en el ensayo de reducción de insulina TR/Trx, se definió I C50 como la concentración de inhibidor que ocasiona una disminución ai 50% en la reducción e insulina por 1C50 TR/Trx. Cuando se hace referencia al sistema en particular que se está analizando 1C50 es seguida típicamente por una abreviación que se refiere a ese sistema (es decir, IC50 TR/Trx para el sistema de reducción-oxidación de tioredoxina anteriormente descrito el cual se encuentra comprendido de reductasa de tioredoxina y tioredoxina) . Según se utiliza en la presente, G l50 se refiere a esa concentración de inhibidor el cual reduce una inhibición de crecimiento medio al 50% . Similar al I C50. G I5Q normalmente designaba el sistema q ue se analizaba o ei tipo de líneas celulares Por ejem plo, G l 50 (todos los tumores) según se utilizan en la presente se refieren a la inhibición de crecimiento medio en las 60 líneas celulares del Instituto Nacional del Cáncer, mientras que Gl50 (leucemias) se refiere a un inhibidor de crecimiento medio al 50% para la línea celular de leucemia. Las composiciones farmacéuticas utilizadas en esta invención pueden administrarse por cualquier número de rutas pero no limitadas a, medios orales, intravenosos, intramusculares, intra-arteriales, intramedulares, intratecales, intraventriculares, transdérmicos, subcutáneos, intraperitoneales, intranasales, entérales, tópicos, sublinguales o rectales. Además de los ingredientes activos, estas composiciones farmacéuticas pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables adecuados que com prenden excipientes y auxiliares los cuales facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente. Según se utiliza en la presente, el término "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un medio portador el cual no interfiere con la eficiencia de la actividad biológica de los ingredientes activos y que no es tóxico para los huéspedes a los cuales se administra. Según se utiliza en la presente, el termino "cantidades farmacológicamente eficaces" como se aplica a inhibidores de señalización de reducción-oxidación se refiere a la cantidad de cada componente en la mezcla o se administra al huésped que da como resultado un aumento en el índice terapéutico del huésped. El "índice terapéutico" se define para propósitos en la presente en térm inos de eficacia (grado de reducción del tumor o de la infección u otra cura) y/o en términos de toxicidad al huésped. Para huéspedes no humanos, si la eficacia aumenta al menos 50% sobre la eficacia que utiliza un control de excipiente (por ejemplo, salina regulada con fosfato) y la proporción de peso corporal medio al final del periodo de evaluación para la respuesta de eficacia al peso corporal medio al inicio del tratamiento es al menos 0.90 (es decir, no mayor que 10% de pérdida de peso corporal) , el índice terapéutico ha aumentado. La proporción de pesos corporales medios indica el grado de toxicidad, con un valor de 1 indicando no toxicidad . Para los huéspedes no humanos que se tratan el cáncer, el grado de eficacia alcanzado puede medirse por la proporción de volumen de tumor medio al final del periodo de evaluación para la respuesta de eficacia a volumen tumoral medio al inicio del tratamiento. Una reducción en la proporción de al menos . 50% del control de excipiente tratado indica una eficacia disminuida. Las dosis, programas y tipos de agentes terapéuticos más preferidos son aq uellos que alcanzan una proporción de volumen de tumor medio de entre 0 y 5, con un calor de 0 como óptimo y que indica la cura. Para los huéspedes humanos , si la eficacia aumenta al menos 50% después del tratamiento con los agentes terapéuticos y la toxicidad es aceptable, es decir, no m ás que fiebres, resfriados, y/o indisposición en general , el índice terapéutico ha aumentado. Para los huéspedes humanos que se tratan el cáncer, et grado de eficacia se determina generalmente en la clínica al medir los diámetros perpendiculares de ios productos de todas las enfermedades medidas Para el cáncer, el tratamiento no se considera terapéutico si después del tratamiento, o si una carga de tumor existente no se elimina o disminuye. El efecto de las dosis puede disminuir con el tiempo. Para los humanos, la dosis puede repetirse durante meses o incluso años. Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a la cantidad de ingrediente activo, por ejemplo, compuesto NSC, el cual mejora los síntomas o condición. La eficacia terapéutica y toxicidad puede determinarse por procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, ED50 (la dosis terapéuticamente eficaz en 50% de la población) y LD50 (la dosis letal para 50% de la población). El índice terapéutico puede definirse como la proporción de dosis entre los efectos terapéuticos y tóxicos (la proporción LD5o/ED5o). Se prefieren las composiciones farmacéuticas que exhiben índices terapéuticos. Según se utiliza en la presente, el término "daño biológico al huésped ocasionado por reducción-oxidación celular anormal" se refiere a cualquier daño a partes celulares, tejidos u otras partes corporales y funciones sostenidas por el huésped como resultado de una reducción-oxidación anormal en el huésped (es decir, proliferación celular anormal) . El término "cáncer" según se utiliza en la definición anterior se refiere a cualquier padecimiento neoplástico, que incluye padecimientos celulares como, por ejemplo, cáncer celular renal , sarcoma de Kaposi, leucemia crónica , cáncer de mama , sarcoma , carcinoma ovapano, cáncer rectal , cáncer de próstata , cá ncer de garganta, melanoma, cáncer de colon, cáncer de vejiga, mastocitoma, cáncer de pulmón y cáncer gastrointestinal o de estómago. Preferentemente, el cáncer es cáncer de colon, melanoma, cáncer celular renal, sarcoma, cáncer de pulmón , adenocarcinoma, próstata o cáncer de mama. La pareja de reducción-oxidación de tioredoxina (TR/Tx) es un sistema de reducción-oxidación ubicado en todos los sitios encontrado tanto en células procarióticas como en células eucarióticas. El sistema de tioredoxina se encuentra comprendido básicamente de dos elementos: tioredoxina y reductasa de tioredoxina. La reductasa de tioredoxina es una flavoproteína que contiene selenio dependiente de NADPH q ue cataliza la reducción de la tioredoxina. La reductasa de t?oredoxina E. coli es un homodímero de 70 kDa. Los residuos de cisteína del sitio activo , Cys-1 35 y Cys-1 38, reciben electrones provenientes de FADH2 y los transfieren al enlace de cisteína activo de tioredoxina. Durante la reducción, la reductasa de tioredoxina experimenta un cambio de conformación la cual protege las cisteínas reducidas de sitio activo de la fase acuosa, evitando la oxidación espontánea. Después de la unión de tioredoxina oxidada al sitio activo, la reductasa de tioredoxína experimenta un cambio de conformación para exponer las cisteínas de sitio activo, permite la reducción del enlace de cistina de la tioredoxina. La reductasa de tioredoxina de organismos más elevados es un homodímero 1 16-1 29 kDa. La reductasa de tioredoxina placentapa humana se ha clonado. El sitio activo de la reductasa de tioredoxina hum a na tiene un a secuencia de aminoácido conservado Cys-Val-Asn-Val-Gly-Cys en el dominio de unión FAD e, inesperadamente una secuencia de aminoácido Gly-Cys-CysSe-Gly terminal en C debido al TGA de codón de paro normal de ADN que codifica para selenocisteína (CysSe) debido a una secuencia de señal repetitiva germinal de señal no traducida 3'. El residuo de CysSe es crítico para la actividad de la reductasa de tioredoxína humana. Estudios han demostrado que puede reducirse la tioredoxina bacteriana , aunque a una tasa disminuida en comparación con una reductasa de tioredoxina humana. Un gen para la reductasa de tioredoxina humana se localiza en la posición cromosómica 12q23-q24. 1 . Las tioredoxínas son una clase de proteínas de reducción-oxidación de peso molecular reducido caracterizadas por un sitio activo de -Cys-Gly-Pro-Cys-Lys altamente conservado. Los residuos de cisteína en el sitio activo de tioredoxina experimentan reducción-oxidación reversible caracterizada por la reductasa de tioredoxina. El gen de tioredoxina humana se ha mapeado a 9q31 . El análisis de clones genómicos de tíoredoxina ha encontrado que el gen completo se expande 1 3 kb y que se encuentra comprendido de 5 exones. Estudios de cristal de rayos X han identificado una superficie hidrofóbica de 1 2 aminoácidos altamente conservados en vertebrados, pero no tioredoxinas bacterianas, representando el 1 0% de la superficie accesible de solvente de la proteína. Se ha clonado y secuenciado la tioredoxina humana Se ha demostrado que la secuencia de aminoácido deducida de tioredoxina es idéntica a aquella de una protéína previamente conocida llam ada factor estimulante de citotoxicidad eosinófila o factor derivado de leucemia de células T adultas (ADF) . También se ha identificado una tioredoxina mitocondrial humana y se completó una secuencia de mARN completa con GeneBank (Miranda-Vizuete A ef al., HSU78678 presentada el 1 8 de Noviembre de 1 996. UniGene hs. 79366). La tioredoxina humana tiene una identidad de aminoácido del 27% para tioredoxina de E. coli y contiene además de los residuos de cisteína de sitio catalítico otros residuos de cisteína que no se encuentran en la tioredoxina bacteriana. Como se describió con anterioridad, se han observado niveles muy elevados de tioredoxina en algunas líneas celulares de tumor humano y tumores humanos primarios. Estos residuos de cisteína parecen entregar actividad promotora de crecimiento único de tioredoxina humana. Se han reportado estudios de mutagénesis que caracterizan la secuencia de sitio activo conservado de tioredoxina. La conversión de Cys32 y Cys35 en residuos de Serina, ya sea individualmente o conjuntamente, da como resultado una pérdida de la capacidad de la proteína para reducirse por la reductasa de tioredoxina y da como resultado una pérdida de actividad antiapoptósica y estimulante de crecimiento de tioredoxina. Un residuo que ha llamado particularmente la atención es un grupo lisina altamente conservado adyacente a la cisteína de sitio más activo terminal en C. La presencia del g rupo amino cargado positivamente tan cercana al sitio activo ha conducido a la sugerencia de que es crítica para mantener el anión de tiolato de Cys-32 Sin embargo , el grupo Usina altamente conservado adyacente a l sitio activo no parece ser esencial para la reducción ya sea de tioredoxina procariótica o eucariótica por la reductasa de tioredoxina, pero se requiere aparentemente para optimizar las interacciones de proteína con la flavoenzima según se evidencia por el aumento en los valores de Km para la tioredoxina humana Lys-36 mutante. La tioredoxina ejerce control de control de reducción-oxidación específico sobre un cierto número de factores de transcripción para modular su unión de ADN y, por consiguiente, para regular la transcripción genética. Los factores de transcripción regulados por tioredoxina ¡ncluyen N F-kB, TFI I IC, BZLF 1 y el receptor para gtucocorticoide. La proteína-1 activadora (AP-1 ) (heterodímero Fos/J un)del factor de transcripción se encuentra sujeta a control de reducción-oxidación por el factor de reducción-oxidación nuclear Ref-1/HAP-í , el cual, a su vez, se reduce por la tioredoxína. La importancia de la regulación de reducción-oxidación de la actividad del factor de transcripción se ilustra por el oncogen v-fos en donde una mutación de punto convierte la Cys154 en un residuo de serina que da como resultado una activación constitutiva y la unión de ADN de la proteína Jun. La tioredoxina recombinante humana ha demostrado estim ular la proliferación de células de cáncer epitelial humanas. Esto parece deberse a la capacidad de la tioredoxina para mejorar la actividad de los factores de crecimiento producidos endógenamente, ya sea ai actuar sobre los mismos factores o al afectar la interacción de los factores con su receptor de superficie celular Por ejemplo, la tioredoxina a niveles nanomolares produce una mejora de 103 veces la actividad estimulante de crecimiento de la interleuquina-2 y una mejora de 102 veces la actividad de factor de crecimiento de fibroblasto básico con células de cáncer de mama humano MCF-7. Las formas inactivas de reducción-oxidación mutantes de tioredoxina que carecen de residuos de cisteína de sitio activo y tíoredoxina E. coli carecen de actividad estimulante de crecimiento. Se ha descubierto que la tioredoxina agregada exógenamente estimula los fibroblastos de ratón y un cierto número de líneas celulares de tumores sólidos humanos. La tioredoxina estimula el crecimiento celular hasta en 90% tan eficazmente como estimulación de suero bovino fetal al 1 0%. Esto es una característica exhibida por algunos otros pocos factores de crecimiento. Una excepción a esto parecen ser las células HepG2 cuya proliferación se estimula por la t?oredoxina en un medio libre de suero pero se inhibe en presencia de suero al 0.5%. Mecanicistamente, la tioredoxina no parece estimular el crecimiento celular junto con las líneas clásicas al actuar sobre un receptor de superficie celular específico. No existió evidencia de unión saturable de 125l-tioredoxina a la superficie de las células de cáncer de mama MCF-J y no hubo la m ínima captación de 125l-tioredoxína en las células. En lugar de ello, la tioredoxina parece ejercer su efecto estimulante de crecimiento celular al sensibilizar las células a factores de crecimiento producidos por la célula en sí misma. El reemplazar el medio cada día con un medio fresco y reductasa de tioredoxi na elim ina completamente el aumento en la proliferación celular Tal proceso el?mina presumiblemente los factores segregados por las células que son necesarias para el crecimiento celular inducido por tioredoxina. Hubo una correlación significativa entre la capacidad de un cierto número de lineas celulares de cáncer humano para proliferar en ausencia de suero, lo cual se debe presumiblemente a la producción autócrjna de factores de crecimiento por la célula, y el grado de estimulación por tioredoxina. Este mecanismo auxiliar, o voitocrino, parece ser único para la tioredoxina y requiere la forma activa de reducción-oxidación de la proteína, además de otras características presentes en la tioredoxina humana pero ausentes en la tioredoxina E. coli. El EC50 para la estimulación de crecimiento de tioredoxina en células de cáncer de mama MCF-7 es 350 nM la cual es considerablemente mayor que la concentración de 4-1 8 nM de tioredoxina encontrada en el suero. Las concentraciones de tioredoxina más elevadas existen en tejidos, 1 hasta 10 µM, que si se liberan deben estimular extracelularmente la proliferación celular. Los niveles de proteína de tioredoxina son elevados en una variedad de tumores primarios humanos que incluyen células epiteliales escamosas neoplásticas cervicales humanas, carcinoma gástrico, y carcinoma hepafocelular Se ha descubierto que un cierto número significativo de cánceres de colon y de pulmón primarios humanos han aumentado el mARN de tioredoxina en comparación con el tejido normal aparejado En el carcinoma gástrico primario humano los niveles incrementados de tioredoxina se encuentran asociados con crecimiento de tu mor agresivo medido por niveles elevados de antígeno de proliferación y niveles bajos de apóptosis . Las células N I H 3T3 transfectadas establemente con cADN de tioredoxina muestran un aumento en la tasa de crecimiento, mientras que las células de cáncer de mama MCF-7 transfectadas con cADN para la tioredoxina mutante C32S/C35S inactiva de reducción-oxidación no formarán más colonias en ágar suave. Estos resultados sugieren que la expresión genética de tioredoxina incrementada podría contribuir, en parte, a la tasa de crecimiento incrementada y al fenotipo transformado de algunos tumores humanos. La prueba molecular de que la reductasa de tioredoxina y la t?oredoxína ofrecen un objetivo racional para el desarrollo de drogas para tratar el cáncer humano proviene de estudios en donde las células NI H 3T3 y las células de cáncer de mama humanas MCF-7 se han transfectado establemente con cADN para tioredoxina humana de tipo silvestre o tioredoxina mutante inactiva a la reducción-oxidación. Las células N I H 3T3 transfectadas con tioredoxina de tipo silvestre alcanzan densidades de saturación celular incrementada sobre superficies plásticas. Las células de cáncer de mama humano MCF-7 transfectadas con tioredoxina mostraron proliferación inalterada sobre las superficies plásticas pero una formación de colonia incrementada 4 veces en ágar suave. El crecimiento independiente de sujeción en ágar es una característica de las células no hematológicas transformadas. La transfección estable de células N I H 3T3 y MCF-7 con una tioredoxina mutante inactiva de reducción-oxidación , dio como resultado una in ibición del crecimiento en las superficies plásticas, y "una i n hibición >70% de formación de colonias en ágar por las células MCF-7. Cuando se inocularon en ratones inmunodeficientes las. células MCF-7 transfectadas con tioredoxina formaron tumores, como lo hicieron las células transfectadas solo por vector, pero la formación tumoral por las células MCF-7 transfectadas con tioredoxina inactivas a la reducción-oxidación se inhibió completamente. Se ha identificado la tioredoxina como un componente en el sistema de factor de embrazo tempranero (EPF), un arreglo complejo de factores presentes en los sueros de mamíferos embarazados. La unión de linfocitos a los glóbulos rojos, es decir, la formación de capullos de roseta, por EPF ocurre durante el inicio del embarazo y diversas proteínas del complejo de EPF pueden actuar de manera sinerg ística , o en combinación . U n estudio de mutagénesis de la tioredoxina humana mostró que los residuos Cys-32 y Cys-35 de sitio catalítico, activos a la reducción-oxidación no fueron esenciales para esta función, pero que sí lo fueron los de Cys-74. Además de su implicación en la proliferación celular, el sistema TR/Trx parece también encontrarse implicado o asociado con la apóptosis. La apóptosis o muerte celular programada se ha asociado también con comportamiento celular normal. Existe evidencia considerable de que un aumento en las especies de oxígeno reactivo constituye una señal intracelular que puede conducir a la apóptosis. La apóptos?s puede inducirse en un cierto número de sistemas celulares por H2O2, las especies de oxígeno reactivo generadas por el reciclaje de reducción-oxidación de las quinonas y la radiación Parece q ue c-myc, el cual es esencial para la apóptosis en muchos sistemas, se induce por H2O2 y especies de oxígeno reactivo. La hipoxia y los antioxidantes inhiben la apóptosis inducida por estos tratamientos. La tioredoxina protege las células de linfoma en contra de la muerte celular mediada por TNF-a. La sobrevivencia de neuronas de ratón embriónicas se mejora por la t?oredoxina, así como también por 2-mercaptoetanol y N-acetilcisteína. En los mismos estudios, se observó que las células de astrocitoma U251 produjeron niveles incrementados de tioredoxina en respuesta al tratamiento de H2O2. Se han observado también niveles elevados de tioredoxina en las células guales del cerebro del jerbo durante la réperfusión ulterior a la isquemia. Por consiguiente, la tioredoxina segregada por las células guales puede proteger las neuronas, in vivo, derivadas de la muerte celular inducida por estrés oxidante. Un modelo de apóptosis en donde la señalización oxidante parece desempeñar un papel importante es la apóptosis inducida por la hormona esteroide de la célula EH I7.2 derivada del timoma m urino. Estudios han demostrado que durante la apóptosis inducida por dexametasona existe una disminución selectiva en los niveles de transcripción de un cierto número de enzimas de defensa antioxidantes, que incluyen tanto dismutasas de superóxido de Mn como de Cu/Zn, catalasa , peroxidasa de glutationa, tioredoxina, y DT-diaforosa. Los cambios en los niveles de transcripción de enzima antioxidante se observan primeramente 8 hrs después del tratamiento de dexametasona y preceden la apóptosis la cual es aparente a las 24 hrs y máximo a las 48 hrs. Las actividades de dismutasa de superóxido, catalasa y DT-diaforosa de las células WEHI7.2 tratadas con dexametasona muestran una caída a las 24 hrs. y se elimina al máximo a las 48 hrs. Parece que bcl-2 es capaz de evitar una disminución en os niveles de enzima de defensa antioxidante a pesar de una disminución en la transcripción genética ocasionada por el tratamiento de dexametasona. Esto puede relacionarse con la inhibición de bcl-2 de proteasas de la familia ICE la cual puede ser capaz de degradar las enzimas antioxidantes. El tratamiento de las células WEHI7.2 con el trolox de antioxidantes (un derivado de la vitamina E soluble al agua), catalasa y selenio, así como también condiciones hipóxicas, evitan la apóptosis inducida por dexametasona. Esto proporciona evidencia de q ue la disminución en las enzimas antioxidantes podría conducir a un aumento en las especies de oxígeno reactivo celulares responsables de señalar la apóptosis. La transfección de células cancerosas de linfoide WEH I7.2 con cADN de tioredoxina bloquea la apóptosis inducida por una variedad de agentes, que ¡ncluyen, etoposida, estaurosporina, tapsigargina y glucocorticoides, lo cual es similar al patrón visto con el oncogen antiapoptótico bcl-2. Cuando se inoculan en ratones scid, la trx transfectó células provenientes de tumores que crecen más rápido que los tumores de células WEH I7.2 transfectadas bcl-2 o de tipo silvestre, debido a una tasa espontánea disminuida de apóptosis, y que son resistentes a la inhibición al crecimiento por tratamiento con dexametasona Además de sus efectos mejoradores del crecim iento la tioredoxina aparecen como la causa de que los tumores sean resistentes a drogas anticáncer. Por consiguiente, la tioredoxina parece ser un completo y poderoso gen causante de cáncer que desempeña un papel importante en el cáncer humano. Muchas enfermedades parecen asociarse con defensas antioxidantes debilitadas y estrés oxidante. Debe subrayarse que el aumento en las especies de oxígeno reactivo que sigue a una disminución en las enzimas antioxidantes es, muy probablemente, un evento de señalización y no un mecanismo ejecutador de la apóptosis. Es decir, los radicales de oxígeno no son directamente responsables de la deg radación de ADN y del daño a la membrana observados durante la trayectoria común final de la apóptosis como se ha propuesto por algunos investigadores. Además, las especies de oxígeno reactivo son probablemente solamente una entre un cierto número de eventos de señalización que pueden inhibir la apóptosis. Se sabe, por ejemplo, que la hipoxia no inhibe la apóptosis ocasionada por la estausporina , un inhibidor de PKC no específico, por el receptor de FAS , con el retiro de I L-3 de las células dependientes de [ L-3 o por la campoteticina inhibidora de topoisomerasa. Sin embargo, la formulación endógena de las especies de oxígeno reactivo podría ser un factor constitutivo que tiende a llevar las células a la apóptosis incluso en ausencia de estím ulos exógenos. Tal modelo de apóptosis es consistente con el planteamiento de que el estado por default de las células es morir de muerte celular programada a menos que se les mantenga vivas por señales específicas provenientes de otras células proporcionadas por factores de crecimiento y agentes anti-apoptóticos. Puede ser que las células cancerosas envíen sus propias señales de sobrevivencia, haciéndose resistentes así tanto a la apóptosis intrínseca como inducida . Existen otros estados de enfermedad en donde las defensas antioxidantes debilitadas y el estrés oxidante se encuentran asociados muerte celular inapropiada. "" Los estudios genéticos de individuos con esclerosis lateral amilotrófica tienen mutaciones identificadas en la codificación genética para Cu, ZnSOD. Estas mutaciones dan como resultado una actividad enzimática disminuida, lo cual puede contribuir a la patología observada de muerte de neuronas motoras. Las células CD4+ y ganglios linfáticos de pacientes con SI DA tienen niveles disminuidos de GSH y tioredoxína, respectivamente. Las actividades de catalasa, MnSOD y peroxidasa de glutationa caen en l íneas celulares T desarrolladas in vitro, después de la infección con virus VI H . a-amiloide es un péptído neurotóxico que se agrega al cerebro de los pacientes de Alzheimer y se ha descubierto que genera péptidos de radicales libres. Esto ha conducido a la hipótesis de que el estrés oxidante, específicamente, el daño de membrana mediado por los radicales derivados de a-amiloide, conduce a la neurodegeneración observada con la enfermedad de Alzheimer. Dos genes ligados a la apóptosis que se han aislado fueron capaces de inhibir la muerte celular i nducida por él receptor de las células T. ALG-2 que codifica para una proteína de unión Ca2+ puede regular señales a través de la trayectoria de muerte, y ALG-3 , un ADN complementario parcial que es homólogo ai gen de la enfermedad de Alzheimer familiar STM2, puede relacionar esa trayectoria de muerte con la enfermedad de Alzheimer. El mARN de tioredoxina aumenta, en algunos casos hasta 100 veces en comparación con el tejido normal correspondiente, en casi medio pulmón, colon y tumores gástricos primarios humanos examinados. Los niveles de tioredoxina se han reportado también con aumentos en las células epiteliales escamosas neoplásticas cervicales humanas y el carcinoma hepatocelular. La actividad de tioredoxina se incrementa casi dos veces en el cáncer de colon humano en comparación con la mucosa colónica normal. Se sabe que la tíoredoxina se excreta de las células por una trayectoria secretora sin líder de manera que la sobreexpresión de tioredoxina podría conducir a la producción de un factor de crecimiento autócrino para alg unos cánceres humanos. Hemos identificado recientemente dos nuevas reductasas de tioredoxina humana. Estas reductasas parecen ser específicas de tejido y tienen patrones de distribución celular específicos. Los datos de secuencia se suministran en la presente como SECUENCIA 1 y SECUENCIA 2. El sistema de reducción-oxidación de tioredoxina parece desempeñar un papel importante en un cierto número de estados de enfermedad , específicamente mantener el fenotipo transformado de alg unos cánceres humanos Estos datos ilustran que la sobre-expresión de tioredoxina ocasiona la transform ación celular, crecimiento tumoral agresivo y resistencia a la apóptosis espontánea e inducida por droga y por consiguiente es un objetivo racional para el desarrollo de droga de cáncer. Existe la necesidad de drogas que inhiban la actividad del sistema de tioredoxina y que disminuyan consecuentemente el crecimiento celular tumoral y eviten la enfermedad de cáncer agresivo. Los inhibidores de tioredoxina y/o reductasa de tioredoxina parecen alcanzar esta meta. La capacidad de alterar la reducción-oxidación celular de tal manera para manipular las proteínas reguladoras del crecimiento ofrece una posibilidad particularmente intrigante para el desarrollo de drogas anticáncer. La sobreexpresíón y subexpresión ya sea de reductasa de tioredoxina o tioredoxina parecen desempeñar un papel en el desarrollo de la enfermedad . La expresión incrementada de tioredoxina se encuentra asociada con células de linfoma y leucemia de crecimiento incrementado, enfermedad autoinmune tal como el síndrome de Sjogren, artritis reumatoide, Lupus, cáncer y SI DA. Una deficiencia de reductasa de tioredoxina se encuentra asociada con el síndrome de Hermansky-Pudlack. Otras enfermedades asociadas con reducción-oxidación incluyen , ateroesclerosis, complicaciones diabéticas, retinopatías, ang iogénesis, esclerosis lateral amietrófica y otras enfermedades neurodegenerativas, artritis , enfermedades cutáneas (envejecimiento y daño ultravioleta), cicatrización de heridas, enfermedades hepáticas, enfermedad de Wilson , enfermedad de Crohn , colitis ulcerativa , padecimientos uterinos, síndrome de agotamiento respiratorio ad ulto (ARDS) , padeci mientos pulmonares, heridas de reperfusión ulterior a la isquemia (por ejemplo, cardiomiopatía, apoplejía) infecciones virales y otras infecciones tales como virus de la herpes, virus pustular, e infecciones de adenovirus, condiciones inflamatorias, enfermedades autoinmunes tales como, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria de intestino, y diabetes autoinmune, nefritis glomerular mediada inmune, enfermedades hiperproliferativas tales como fungoides de fibrosis, psoriasis, y micosis. Como un planteamiento inicial para desarrollar agentes que puedan inhibir selectivamente la proliferación celular dependiente de tioredoxina y/o apóptosis estudiamos una serie de disulfuros de imidazolilo, de los que es típico el bisulfuro de 2-imidazolilo de 1 -metilpropilo (IV-2) . La incubación prolongada de tioredoxina con el bisulfuro de 2-imidazolilo de alquilo da como resultado una inhibición irreversible de la tioredoxina como un substrato para la reducción por reductasa de tioredoxina. La inhibición parece ser específica para Cys 73 de tioredoxina, la cual permanece como un substrato para la tioredoxina. En cultivo, IV-2 muestra una mayor inhibición de tioredox?na que la proliferación celular dependiente de suero, sugiriendo que puede estar produciendo su efecto al inhibir el sistema de reducción-oxidación de tioredoxina. Filtro celular: Los compuestos IV-2 y DLK-36 (bisulfuro de bencil-2-imidazolilo) otros bisulfuros preferidos se m uestran a continuación. §2 IV-2 ha mostrado también exhibir actividad antitumoral dependiente de la dosis contra el cáncer de mama MCF-7 humano y xenoinjertos HL-60 que crecen en ratones scid. IV-2 y el segundo bisulfuro, DLK-36, produjeron respuestas de inhibición tumoral observadas al 98% y 65% respectivamente en contra del sistema tumoral MCF-7. IV-2 y DLK-36 mostraron actividad antitumoral en contra de la leucemia HL-60 que crece en ratones scid con un cierto número de los animales sin tumores en el día 45 para cada compuesto. El ratón min (neoplasia intestinal múltiple) se ha utilizado en la presente, para probar su actividad quimiopreventiva de IV-2. El ratón min tiene una mutación de línea germinal en el gen APC observada en la poliposis adenomatosa familiar humana (FAP) . Este modelo se eligió debido a su base genética y como una alternativa a los modelos inducidos químicamente de cáncer de colon . La mayoría de los tumores q ue se desarrollan en los ratones min adultos se encuentran en el intestino delgado, aunque los tumores se diagnostican primero en el colon . FAP representa un grupo de sujetos de alto riesgo con un marcador de punto final tempranamente identificable que es adecuado para pruebas de agentes quimiopreventivos novedosos. El compuesto IV-2 en la dieta a 250 ppm (una dosis menor q ue la óptima debido a un suministro limitado) redujo el número de tumores en el colon por 70% (p = 0.0160) y ocasionó una reducción significativa en el tamaño de tumores restantes (p<0.001 en comparación con el control). Más allá de la actividad terapéutica de la reductasa de tioredoxina y tioredoxina e inhibidores de las mismas, nuevas clases de inhibidores tanto de reductasa de tioredoxina como de tioredoxina serían útiles ambas como sondas farmacológicas novedosas para estudiar los papeles de estas enzimas en las trayectorias de transducción de señales y como guías para estudios de optimización de estructura y de estructura/actividad. Se analizaron datos del panel de 60 líneas celulares humanas del I nstituto Nacional del Cáncer (NCI's) (como se describe por Monks er al. Feasibility of a high-flux anticancer drug screen using a device panel of cultured human tumor cell lines. Journal of the National Cáncer Institute, 83, 757, (1 991 ) , el cual se incorpora en la presente para referencia para su enseñanza relacionada con el filtrado) utilizando el programa de reconocimiento de patrón COMPARE (como se describe por Paull et al, Display and analysis of patterns of differential activity of drugs against human tumor cell lines: development of mean g raph and COMPARE algorithm. Journal of the National Cáncer Institute, 81 , 1088, (1 989), el cual se incorpora en la presente para referencia para su enseñanza relacionada con el algoritmo COMPARE) con las dos drogas de bisulfuro (IV-2 y DLK-36) como compuestos sembrados con objeto de identificar otros compuestos con patrones similares de inhibición de crecimiento o como inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina La preselección de las moléculas que utilizan el análisis COMPARE nos permite buscar objetivos moleculares que conocen en ventaja los efectos inhibidores del crecimiento de los compuestos y de acuerdo con lo anterior, reduce el número de compuestos que deben probarse de entre más de 50,000 compuestos ya filtrados en la base de datos de drogas para investigación del NCI . Al utilizar este planteamiento de filtrado dirigido a la célula (CDSA) hemos identificado un cierto número de inhibidores del sistema de reducción-oxidación de tioredoxina con una tasa de aciertos en el filtro primario de 17% para los compuestos con IC50 < 1 0 µg/ml en comparación con una tasa de aciertos de 3 hasta 1 0% al filtrar los productor naturales seleccionados aleatoriamente o no relacionados. Los materiales y métodos de la presente invención son como se explica a continuación: Enzimas: Reductasa de tioredoxina, actividad específica 43.6 µmol de proteína de NADPH reducido/min/mg a 21 °C, se purificó a partir de la placenta humana como se describió previamente (Oblong , er a/. , 1 993) . La reductasa de glutationa , actividad específica 141 .2 µmol de proteína de NADPH reducido/min/mg a 21 °C, se purificó a partir de glóbulos rojos humanos envejecidos (Colmon & Black, 1 965) . La tioredoxina recombinante humana se expresó en E. coli y se purificó como se describió previamente (Gasdaska et al. , 1994). La tioredoxina se almacenó a -20°C con 5 mM de d itiotreitol el cual se extrajo antes de su uso con una columna de destilación (PD 1 0, Pharmacia, Uppsala, Suecia) Ensayos: Se realizaron ensayos colorimétricos de placa de microtitulación, con base en el aumento en absorbencia a 405 nM que ocurre a medida que el ácido ditionitrobenzoico (DTNB) se reduce por la transferencia mediada por enzimas de reducir los equivalentes de NADPH , para reductasa de tioredoxina, reducción de insulina dependiente de tioredoxina/reductasa de tioredoxina y reductasa de glutatíona. Se midió la actividad de reducción de insulina dependiente de tioredoxina/reductasa de tioredoxina en una incubación con un volumen final de 60 µl que contenían 100 mM de regulador HEPES , pH de 7.2, 5 mM de EDTA (regulador HE) , 1 mM de NADPH, 1 .0 µM de reductasa de tioredoxina, 0.8 µM de tiorédoxina y 2.5 mg/ml de insulina bovina . Las incubaciones se llevaron a cabo durante 30 min a 37°C en placas de microtitulación de 96 cavidades de fondo plano. La reacción se detuvo por la adición de 1 00 µl de 6M de guanidina de HCl, 50 mM de Tris, pH de 8.0, y 1 0 mM de DTNB y la absorbencia se midió en 405 nM. Los ensayos de reductasa de tioredoxina o de reductasa de glutationa que se llevaron a cabo en placas de microtitulación de 96 cavidades de fondo plano se midió la actividad de reductasa de tioredoxina en un volumen de incubación final de 60 µl que contenía regulador H E , 1 0 mM de DTN B, 1 .0 µM de reductasa de tioredoxina y 1 mM de NADPH . La actividad de reductasa de glutationa se midió en un ensayo similar en el cual la reductasa de tioredoxina se reemplazó por 1 0 µM de reductasa de glutaniota Los compuestos se diluyeron en regulador de HE y se agregaron a las cavidades como un alícuota de 20 µl , y la reductasa de tioredoxina o reductasa de glutationa se agregaron después también como un alícuota de 20 µl en regulador HE. Para asegurar la cobertura uniforme de la parte inferior de las cavidades de la placa se centrifugaron brevemente 3000 * g . Para comenzar la reacción se agregaron NADPH y DNTB como un alícuota de 20 µl en regulador de H E y la placa se movió hacia el lector de paca precalentado a 37°C. La densidad óptica a 405 nm se midió cada 10 segundos y se midieron las tasas de reacción lineales iniciales. Estos compuestos se identificaron como inhibidores de reductasa de tioredoxina y se probaron para la citotoxicidad en el panel de 60 líneas celulares humanas de línea celular de cáncer humano del NCl (Monks et al. , 1 991 ) . El IV-2 y DLK-36, que han demostrado ser inhibidores de reductasa de tioredoxina con valores Ki de 30.8 µM y 30.9 µM , respectivamente se utilizaron como compuestos sembrados. El programa de reconocimiento de patrón COMPARE se utilizó también para determinar un coeficiente de correlación de Pearson con objeto de ordenar por rangos la semejanza del patrón de inhibición de crecimiento ocasionado por los compuestos provenientes de la base de datos del N Cl de las drogas de investigación con los patrones de inhibición de crecimiento ocasionados por IV-2 y DLK-36. Se identificaron noventa y dos compuestos con patrones similares de actividad derivados de 50,000 com puestos ya probados en el filtro celular. De los 92 com puestos, 47 fueron no discretos y disponibles para su estudio adicional Los coeficientes de correlación para los 100 compuestos oscilan entre 0.836 y 0.71 8. Cuarenta y siete de estos compuestos fueron no discretos y se encontraron disponibles en cantidades suficientes para pruebas adicionales. Como un control negativo para el proceso de evaluación COMPARE, se seleccionaron 52 compuestos no discretos adicionales con base en la carencia de correlación entre sus patrones de citotoxicidad y el de DLK-36. Una biblioteca de 221 productos naturales seleccionados aleatoriamente que comprende una mezcla de alcaloides derivados de vegetales y otros compuestos y productos bacterianos puros se probaron también por su capacidad para inhibir la reducción de insulina dependiente de tioredoxina/reductasa de tioredoxina. Las soluciones base de los compuestos, 1 0 mg/ml . se realizaron en dimetilsulfóxido y se almacenaron a -20°C. Las diluciones en serie derivadas de estas soluciones base se realizaron en regulador HE inmediatamente antes de su uso. La pequeña cantidad de dimetilsulfóxido en los ensayos no tuvo efecto en las actividades. En el filtro inicial los agentes se preincubaron a temperatura am biente durante 30 minutos con reductasa de tioredoxina, reductasa de glutationa o reductasa de tioredoxina/ tioredoxina en un volumen de 40 µl después de lo cual los componentes restantes del ensayo se agregaron como un alícuota de 20 µl. Las actividades de algunos agentes se evaluaron también en ensayos subsiguientes sin la preincubación Resultados: La linealidad de todos los ensayos se verificó con respecto al tiem po y a las cantidades de red uctasa de glutationa, reductasa de tioredoxina o tioredoxina. Para ei ensayo de reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/ tioredoxina la varianza durante los 12 ensayos de control fue de ± 0.05 %. Para los ensayos de reductasa de tioredoxina y reductasa de glutationa la varianza fue de +0.1 8%. Al utilizar los ensayos de réplica, el límite inferior para detección reproducible de inhibición es aproximadamente una inhibición al 5% . Los 47 compuestos que tienen IC50 < 50 µg/ml se muestran a continuación en la Tabla I . De 47 compuestos no discretos probados en un ensayo de reducción de insulina de reductasa de tioredoxina/ t?oredoxina, 36 (77%) fueron inhibidores con IC50S < 10 µg/ml y 1 5 de esos (32%) tuvieron un IC50s = 1 µg/ml.

Tabla I . Com puestos identificados como inhibidores potenciales de ' reductasa de tioredoxina NSC# |C50 (µg/ml) en Gl50 (µg/ml) Todos GI50 (µg/m l) ensayo de TR/Trx los tumores Leucemias 401005a 0.06 7.6 1 .8 208731b 0.10 0.6 0.03 382000 0.10 1 .0 0 1 665103b 0.10 0.4 0.04 617145a 0.12 4.4 0.2 618605a 0.12 7 2 2 5 622378a 012 5 0 1 6 á9- NSC# |C50 (µg/ml) en Gl50 (µg/ml) Todos GI50 (µg/ml) ensayo de TR/Trx los tumores Leucemias 620109a 0.32 1.1 0.2 163027a 0.38 3.1 0.6 131233a 0.39 2.9 ND 665102a 0.42 0.7 0.1 631136a 0.47 2.4 0.8 681277a 0.49 0.7 0.2 140377a 0.63 0.3 0.1 603084a 0.84 2.7 0.4 382007a 1.1 5.7 2.1 635002a 1.1 3.3 1.5 6203583 1.3 0.5 0.1 657028b 1.5 14.9 10.7 661221a 1.7 08 0.3 622188a 1.9 18.4 7.3 645330a 1.9 1.5 0.3 350629b 2.0 1.7 0.1 102817a 2.1 1 3 0.2 626162 2.3 0.1 0.01 655897a 2.5 8.5 1 8 267461a 3.0 0.1 0.03 627124a 3.0 1 1 22 2 610187a 4.0 3 1 " 1 0 NSC# |C50 (µg/ml) en Gl50 (µg/ml) Todos GI50 (µg/ml) ensayo de TR/Trx los tumores Leucemias 624982b 4.0 1.5 0.4 664951a 6.7 7.2 3.8 277293 7.0 0.3 0.1 608972b 7.0 10.3 1.9 634761b 7.0 3.8 1.1 664271b 10.0 1.7 0.2 665878a 10.0 2.4 1.9 10 625814a 11.0 9.9 3.3 264054a 15.0 0.5 0.2 652257a 16.0 9.2 1.1 661225b 17.0 0.8 0.1 637828a 25.0 0.5 0.1 15 647546b 25.0 5.8 1.6 655305 33.0 4.0 1 2 641396 35.0 1.1 0.2 668262b 35.0 0.5 0.1 662781 40.0 0.5 0.1 20 626678a 50.0 3.1 1.5 aCompuestos identificados por COMPARE con IV-2 sembrado Compuestos identificados con DLK-36 sembrado. El rango de coeficientes de correlación de Pearson a los compuestos sembrados IV-2 o DLK-36 para estos compuestos fue de ~> 0.836 (NSC 401005) hasta 0.718 (NSC 603084). Se determina la concentración que ocasiona inhibición al 50% de actividad en el ensayo de reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina, clasificada desde los compuestos más activos a los menos activos. También se determina la concentración de inhibición de crecimiento al 50% media (Gl50) de los compuestos para el panel de línea celular completa y para las leucemias que fue el tipo de tumor humano más sensible. Las estructuras de los 8 inhibidores más potentes (IC50 TRTx < 0.15 µg/ml) en el ensayo de reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina se muestran a continuación: 622378 En comparación, un ensayo de filtrado similar de 52 compuestos derivados de la base de datos de! NCl cuya actividad no se relacionó con aquel del compuesto sembrado DLK-36 produjo solamente 5 compuestos (1 0%) con IC50s = 10 µg/ml y 1" compuesto (2%) con un IC50 < µg/ml. Un ensayo de filtrado de 221 compuestos puros seleccionados aleatoriamente derivados de fuentes vegetales y microbianas identificó 6 compuestos (3%) con IC50 < 1 0 µg/ml y 3 compuestos (1 .5%) con IC50 < 1 µg/ml Utilizamos como filtros secundarios ensayos de reductasa de tioredoxina solamente, para estimar la contribución de su inhibición a la inhibición observada en el filtro primario, y ta reductasa de glutationa, para obtener estimados de la especificidad de inhibición de reductasa. Esto se muestra a continuación en la Tabla I I - Tabla II. Selectividad de compuestos para la reductasa de tioredoxina, reductasa de glutationa o tioredoxina NSC# IC50 TRTx IC50GR IC50TR TR/TRT rx GR/TR (µg/ml) (µg/ml) (µg/ml) 401005a 0.06 15 0.1 1.7 150 208731b 0.10 5 0.1 1.0 50 382000b 0.10 3 0.1 1.0 30 665103b 0.10 32 5 50.0 6 617145a 0.12 50 0.1 0.8 500 618605a 0.12 34 0.1 0.8 340 622378a 0.12 20 0.1 0.8 200 620109a 0.32 33 0.1 0.3 330 163027a 0.38 40 5 13.2 8 131233a 0.39 30 1 2.6 30 631136a 0.47 70 2 4.3 35 681277a 0.49 33 0 0.2 330 140377a 0.63 15 4 6.4 4 603084a 0.84 15 5 6.0 3 382007a 1.08 3 2 1.9 2 635002a 1.14 20 10 8.8 2 620538a 1.26 30 7 5.6 4 657028 1.50 28 6 4.0 5 661221a 1.65 34 7 4.2 5 622188a 1.89 80 5 2.7 16 645330a 1.89 50 50 26.5 1 350269b 2.00 35 3 1.5 12 102817a 2.08 50 5 2.4 10 664951a 665 35 50 7.5 1 aCompuestos identificados por COMPARE con IV-2 sembrado. bCompuestos identificados con DLK-36 sembrado En la Tabla I I , las concentraciones de compuesto que ocasionan una inhibición de actividad al 50% en el ensayo de reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina (I C50-TRTrx), en el ensayo de reductasa de tioredoxina (IC50TR) , en el ensayo de reductasa de glutationa (IC50TR) o en el ensayo de reductasa de g lutationa (IC50GR) se determinan clasificados en orden decreciente de potencia de inhibición del ensayo de insulina dependiente de reductasa de tioredox?na/tíoredoxina. También se determinan la proporción del IC50 en el ensayo dependiente de tioredoxina al IC50 en el ensayo de reductasa de tioredoxina sola (TR/TRTrx) , y la proporción del IC50 en el ensayo de reductasa de glutatíona al iC5o del ensayo de reductasa de tioredoxina (REDUCTASA DE GLUTAT1ONA/TR). De 24 compuestos los cuales fueron potentes inhibidores de reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina, 1 3 fueron al menos 1 0 veces más selectivos como inhibidores de reductasa de tioredoxina en comparación con reductasa de glutationa con 6 de los compuestos que muestran una selectividad de 1 00 veces. De la mayoría de los compuestos potentes, cuatro muestran una selectividad de más de 100 veces para la inhibición de reductasa de tioredoxina contra reductasa de glutationa (N SC 401 005, NSC 61 7145, NSC 61 8605 y NSC 622378) . Además , los siguientes com puestos (N SC 6201 09 y NSC 681 277) m uestran una selectividad de más de 1 00 veces para la i nhibición de la reductasa de t?oredoxina contra la reductasa de glutatióna. 620109 681277 Además, muchos de los compuestos identificados parecen ser específicos para ya sea reductasa de tioredoxina o tioredoxína (incluyendo su interacción con la reductasa de tioredoxina) . Hubo varios compuestos que, aunque fueron activos en el ensayo de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina, no inhibieron la reductasa de tioredoxina sola sugiriendo que estos compuestos inhiben la tioredoxina. Estos compuestos ¡ncluyen NSC 665103 (mostrados con anterioridad) , NSC 645330, y NSC 1 63027 (am bos cuales se muestran a continuación): 645330 163027 En el panel de l ínea celular del NCl la sensibilidad de las leucemias para inhibición de crecimiento por los compuestos seleccionados fue consistentemente mayor que la sensibilidad media de todas las líneas celulares (ver la Tabla II): Un cierto número de los compuestos mostraron patrones de inhibición de crecimiento selectivo para líneas celulares de cáncer de colon, renal y de mama (datos no mostrados). Los compuestos de la presente invención pueden identificar otras estructuras (es decir, compuestos relacionados) los cuales inhiben la tioredoxina/reductasa de tioredoxina. Aunque no se desea limitarse por la teoría, existe una comunalidad entre las estructuras de los compuestps los cuales inhibieron la reducción de insulina dependiente de reductasa de tioredoxina/tioredoxina. Esta comunalidad parece ser el residuo de queto a-ß-nosaturado con centros altamente deficientes de electrones. El alto grado de halogenación de cierto número de estos agentes puede contribuir también a su reactividad. Aparte de la capacidad de estos residuos deficientes de electrones para seleccionar como objetivo las funciones tiol de la reductasa de tioredoxina y tioredoxína, la especificidad del agente para la inhibición puede surgir de ia interacción de las funciones de carbonilo múltiples con histidina cargada positivamente, o residuos e-amino de lisina. El método de esta invención involucra administrar a un huésped mamífero, preferentemente un huésped humano, cantidades farmacológicamente eficaces de un inhibidor de señalización de reducción-oxidación. Los inhibidores (es decir, los compuestos NSC descritos con anterioridad), pueden combinarse in vitro antes de la administración o administrarse separadamente al huésped con otros agentes anticáncer, en cualquier orden o concurrentemente o simultáneamente, con la administración generalmente teniendo lugar hasta 24 horas después de la administración de el(los) otro(s) agente(s) activo(s) biológico(s). La(s) admnistración(es) puede(n) tener lugar por cualquier técnica adecuado, incluyendo la administración oral, subcutánea y parenteral, preferentemente parenteral u oral. Los ejemplos de administración parenteral ¡ncluyen intravenosa, intraarterial, intramuscular, e ¡ntraperitoneal, prefiriéndose la intraperitoneal e intravenosa. La dosis y régimen de dosificación dependerán principalmente de que los inhibidores se administren para propósitos terapéuticos o profilácticos, separadamente o como una mezcla, el tipo de daño biológico y huésped , el historial del huésped , y el tipo de inhibidores o agente activo biológicamente. La cantidad debe 'se eficaz para alcanzar un índice terapéutico mejorado como se definió con anterioridad. Se observa que los humanos se tratan durante más tiempo que los ratones y las ratas con una duración proporcional a la duración del proceso de enfermedad y a la eficacia de la droga. Las dosis pueden ser dosis sencillas o dosis múltiples durante un período de varios días, pero se prefieren las dosis sencillas. Para propósitos de la presente, un nivel de protección de al menos 50% significa que al menos 50%o de los huéspedes tratados exhiben mejora en contra de la enfermedad o infección , incluyendo pero no lim itándose a una tasa de sobrevivencia mejorada, una recuperación más rápida, o mejora o elim inación de los síntomas. Las dosis pueden ser dosis sencillas o dosis múltiples. Si se emplean dosis múltiples, como se prefiera, la frecuencia de administración dependerá, por ejemplo, del tipo de h uésped y tipo de cáncer, cantidades de dosis, etc. Para algunos tipos de cánceres o líneas de cáncer, puede ser eficaz la administración diaria, en vista de que para otros, la administración cada otro día o cada tercer d ía puede ser eficaz, pero la administración diaria puede ser ineficaz. El practicante será capaz de determinar después de la experimentación de rutina qué ruta de administración y frecuencia de administración son más eficaces en cada caso particular. Las cantidades de dosificación para el cáncer que parecen ser más eficaces en la presente son aquellas que dan como resultado la regresión en tamaño del tumor o desaparición completa o no reaparición del tumor, y son no tóxicas o son aceptablemente tóxicas para el paciente huésped. Generalmente, tales condiciones como fiebre, resfriados y malestar general se consideran aceptables. Los niveles de dosis óptimos pueden depender también de la secuencia de administración, de la carga de tumor existente, del tipo de precursor. Los compuestos y agentes de la presente invención, conjuntamente con un portador farmacéuticamente aceptable, pueden utilizarse para cualquiera de los efectos terapéuticos, descritos con anterioridad . Tales composiciones pueden encontrarse en forma de un agente en combinación con al menos otro agente, tal como compuestos estabilizadores , los cuales pueden administrarse en cualquier portador farmacéutico biocompatible, estéril, que incluye, pero que no se limita a , salina, salina reg ulada , dextrosa y ag ua. Las com posiciones pueden administrarse a un paciente solas, o en combinación con otros agentes, drogas y hormonas. Esta modalidad de la invención se refiere a la administración de una composición farmacéutica (un inhibidor), junto con un portador farmacéuticamente aceptable, para cualquiera de los efectos terapéuticos descritos con anterioridad. Además de los ingredientes activos, estas composiciones farmacéuticas pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables adecuados q ue comprenden excipientes y auxiliares los cuales facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden utilizarse farmacéuticamente. Los detalles adicionales de técnicas para formulación y administración pueden encontrarse en la última edición de Reminqton's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co. , Easton, PA) incorporada en la presente para referencia en su totalidad. Las composiciones farmacéuticas para la administración oral puede formularse utilizando portadores farmacéuticamente aceptables bien conocidas en la materia en dosis adecuadas para administración oral . Tales portadores le permiten las composiciones farmacéuticas formularse tabletas, pastillas , grageas, cápsulas, l íquidos, geles, jarabes, pastas aguadas, suspensiones, y lo similar, para la ingestión por el paciente. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse a través de la combinación de compuestos activos con excipiente sólido, opcionalmente moliendo una mezcla resultante, y procesando la mezcla de granulos, después de agregar auxiliares adecuados, si se desea, para obtener tabletas o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son materiales de relleno de carbohidrato o proteína, tales como azúcares, que incluyen lactosa, sucrosa, mannitil, o sorbitol; almidón derivado de maíz, trigo, arroz, papa, u otros vegetales; celulosa, tal como celulosa de metilo, hidroxipropilmetil-celulosa, o carboximetilcelulosa de sodio; gomas que incluyen arábica y tragacanto; y proteínas tales como gelatina y colágeno. Si se desea, pueden agregarse agentes desintegrantes o solubilizantes, tales como la pirrolidona de polivinilo reticulado, ágar, ácido alg ínico o una sal de los mismos, tal como alginato de sodio. • Pueden utilizarse núcleos de gragea conjuntamente con recubrimientos adecuados, tales como soluciones de azúcar concentrado, las cuales pueden contener también goma arábico, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Las materias colorantes o pigmentos pueden agregarse a las tabletas o recubrimientos de gragea para la identificación del producto o para caracterizar la cantidad del compuesto activo, es decir, dosificación . Las preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse oralmente incluyen cápsulas de ajuste suave hechas de gelatina , así como también , cápsulas selladas, suaves, hechas de gelatina y de un recubrimiento, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste suave pueden contener ingredientes activos mezclados con un m aterial de relleno o aglutinantes, tal como lactosa o almidones, lubricantes, tal como talco o estearato de magnesio, y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas suaves, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, líquidos o polietilenglicol líquido con o sin estabilizadores. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración parenteral pueden formularse en soluciones acuosas, preferentemente en reguladores fisiológicamente compatibles tales como solución de Hank, solución de Ringer, o salina regulada fisiológicamente. Las suspensiones de inyección acuosa pueden contener substancias que aumenten la viscosidad de la suspensión, tales como celulosa de carboximetilo de sodio sorbitol y dextrano. Además, pueden prepararse suspensiones de los compuestos activos como suspensiones de inyección aceitosas apropiadas. Los solventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasas tales como aceite de sésamo, o esteres de ácido graso sintético, tales como oleato o triglicéridos de etilo, o liposomas. Opcionalmente, la suspensión puede contener también estabilizadores o agentes adecuados que aumenten la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Para la administración tópica o nasal, los penetrantes apropiados para la barrera particular a permearse se utilizan en la formulación Tales penetrantes son generalmente conocidos en la materia. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden fabricarse de manera conocida en la materia, por ejemplo, por medio de procesos de mezclado, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, entrampamiento, o liofilización convencionales. La composición farmacéutica puede proporcionarse como una sal y puede formarse con muchos ácidos, que incluyen pero que no se limitan a, ácido hidrociórico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en solventes acuosos u otros solventes protónicos de lo que son las formas correspondientes de base libre. En otros casos, la preparación preferida puede ser un polvo liofilizado el cual puede contener alg uno o todos de los sig uientes: 1 -50 mM de histidina, sucrosa al 0.1 %-2% , y mannitil al 2-7%, a un rango de pH de 4.5 hasta 5.5, es decir combinada con reg ulador antes de su uso. Después de que se han preparado las composiciones farmacéuticas, pueden colocarse en un recipiente apropiado y etiquetarse para el tratamiento de una condición indicada. Para la administración de inhibidores TR/Trx, tal etíquetaje incluiría cantidad, frecuencia, y método de administración . Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso en ia invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se encuentran contenidos en una cantidad eficaz para alcanzar el propósito deseado. La determinación de una dosis eficaz se encuentra dentro de la capacidad de aquellos expertos en la materia. Para cualq uier compuesto , la dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente ya sea en ensayos de cultivos celulares, por ejemplo, de células neoplásticas, o en modelos animales, generalmente ratones, conejos, perros o cerdos. El modelo animal puede utilizarse también para determinar el rango de concentración apropiado y ruta de la administración. Tal información puede utilizase luego para determinar las dosis y rutas útiles para la administración en humanos. La dosificación exacto se determinará por el practicante, a la luz de factores relacionados con el sujeto que requiere el tratamiento. La dosificación y administración se ajustan para proporcionar niveles suficientes del residuo activo o para mantener el efecto deseado. Los factores que pueden toarse en cuenta incluyen la severidad del estado de enfermedad, salud general del sujeto, edad, peso, y género del sujeto, dieta, tiempo y frecuencia de administración, combinación(es) de droga, sensibilidades de reacción, y tolerancia/respuesta a la terapia. Las composiciones farmacéuticas de activación larga pueden administrarse cada 3 hasta 4 días, cada semana, o una vez cada dos semanas dependiendo de la vida medía y velocidad de eliminación de la formulación particular. Las cantidades de dosificación normales pueden variar desde 0.1 hasta 100,000 microgramos, hasta una dosis total de aproximadamente 1 gramo, dependiendo de la ruta de administración La guía para dosificaciones y métodos particulares de suministro se proporciona en la literatura y en la presente así corrió también se encuentra generalmente disponible a los practicantes en la materia La composición NSC que inhibe tioredoxina y/o reductasa de tioredoxina e induce la apóptosis, mejorará la actividad antitumoral de los agentes anticáncer clínicamente utilizados al contribuir a la muerte de células tumorosas. Esto mejorará la actividad antitumoral del agente clínico, especialmente para aquellos agentes en donde las células tumorosas se han vuelto resistentes al agente antitumoral por medio de sus niveles elevados de tioredoxina y/o la falta de capacidad para la apóptosis. Por lo tanto, en otra modalidad, los compuestos NSC pueden administrarse en combinación cuyos agentes clínicamente disponibles se utilizaron para tratar el cáncer. Estos pueden incluir, pero no se limitan a, cisplatina, doxorubicina, etoposida, taxol, taxotero, tamoxifeno, IL-2. metotrexato, y 5-fluorouracilo. El tejido con niveles elevados de tioredoxina puede perder la capacidad de eliminar células dañadas a través del proceso de apóptosis y por lo tanto puede conducir al desarrollo del cáncer Por lo tanto, en una modalidad, la composición NSC la cual inhibe la tioredoxina e induce la apóptosis, pueden administrarse sobre una base regular para inducir la apóptosis para la prevención del cáncer. Con base en las dosis de tratamiento in vivo medidas de los b?sulfuros (IV-2, DLK-36), la Tabla lll muestra los rangos de dosis IP preferidos esperados.

Tabla lll Dosis de tratamiento in vivo Compuesto IC50 in vitro Dosis in vivo dosis de Rango de Volumen TR/Trx (µg/m l) tratamiento tratam iento in tumoral de (mg/kg/día) para 14 vivo de dosis T/C% al día dias proyectada 28 (mg/kg/día) lV-2 7 5 - 56.7 7 10 - 459 7 1 5 - 2.3 DLK-36 40 25 - 1007 10 40 - 237 401005 =0.1 001-5 - 208731 <0.1 0.01-5 - 15 382000 <0.1 0.01-5 - 665103 <0.1 0.01-5 - 617145 <0.5 0.05-25 - 618605 =0.5 0.05-25 - 622378 <0.5 0.05-25 - 20 620109 <0.5 0.05-25 - 163027 <0.5 0.05-25 - 131233 <0.5 0.05-25 - 665102 <05 0.05-25 - 631136 <0.5 0.05-25 _ ? 681277 <0.5 0.05-25 140377 <1.0 0.1 -50 382007 <5.0 0.5-250 635002 =5.0 0.5-250 620358 <5.0 0.5-250 657028 =5.0 0.5-250 661221 <5.0 0.5-250 622188 <5.0 0.5-250 645330 <5.0 0.5-250 350629 <5.0 0.5-250 102817 <5.0 0.5-250 626162 <5.Q 0.5-250 655897 =5.0 0.5-250 267124 <5.0 0.5-250 610187 <5.0 0.5-250 624982 <5.0 0.5-250 664951 =10.0 1 -500 277293 =10.0 1 -500 608972 <10.0 1 -500 634761 <10.0 1 -500 664271 =10.0 1 -500 665878 <10.0 1 -500 Se anticipa q ue a medida que avance la com prensión de la reducción-oxidación cel ular establecida y su papel en el control del crecimiento celular, emergerán nuevos objetivos para el desarrollo de drogas anticáncer. Existe evidencia convincente a partir de estudios in vitro que las alteraciones en el estado de reducción-oxidación de las proteinas que involucran residuos de cisteína clave pueden conducir a cambios de conformación que afectan el factor biológico de la proteína. El enlace entre los estímulos exteriores y la activación del crecimiento, muerte y transformación celular, por medio de la modulación de la reducción-oxidación está creciendo. La posibilidad de invertir el crecimiento no controlado de tumores por medio del control de la señalización de reducción-oxidación , o destinar una célula a morir por ia regulación de reducción-oxidación de factores implicados en la muerte celular proporciona prospectos intrigantes para el desarrollo de drogas futuras Aunque se ha establecido lo anterior a detalles considerables , las secuencias se presentan para la elucidación , y no la limitación. Las modificaciones y mejoras incluyendo equivalentes, de la tecnolog ía anteriormente descrita las cuales se encuentran dentro del alcance y capacidades de aquellos expertos en la materia se incluyen dentro del alcance de las reivindicaciones anexas a la misma. Será fácilmente aparente para aquellos expertos en la materia que pueden hacerse numerosas modificaciones, alteraciones y cambios con respecto a los puntos específicos de la descripción anterior sin aislarse del concepto inventivo descrito en la presente. <1X0> KIRKPATRICK, D. Lynn, POWIS, Garth <120> INHIBITORS OF REDOX SIGNALING AND METHODS OF USOíG SAME <130> 98-571-WO <140> <141> August 2, 1999 <X50> 09/127,219 <151> July 31, 1998 <160> 2 <170> Microsoft Windows 95, Microsoft Word 97 <210> 1 <211> 2191 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <223> mEHA <400> 1 gaa ttc ggg ccg ggt ggt gat ett cag caá gag eta ctg tcc cea tag 48 tac teg ggt gaa aga act ett ttc ttc ttt ggg agt cga atg taa tgt 96 ett gga act tga tea agt tga tga tgg ggc cag ggt tea aga agt gct 144 gtc aga aat cac taa tea gaa aac tgt gcc ca tat ttt cgt gaa taa 192 agt gca tgt agg tgg atg tga cea aac ttt cea ggc ata tea gag tgg 240 ttt gtt acg gaa gct cct tea gga aga ttt ggc ata tga tta tga tet 288 cat cat cat cgg tgg tgg ttc tgg agg cct ttc atg tgc gaa gga age 336 tgc cat ttt ggg aaa gaa agt tat ggt gct aga ett tgt tgt ccc gtc 384 acc tea ggg cac atc ctg ggg tet tgg tgg cac ttg tgt aaa tgt agg 432 ttg tat tcc taa gaa att gat gca tea ggc tgc cct ttt ggg gca ggc 480 att atg tga ctc aag gaa att tgg ctg gga ata taa tea ac agt a 528 gca caá ctg gga gac aat gac aaa age gat tea gaa cea cat cag ctc 576 tet aaa ctg ggg cta cag gtt gtc tet gag gga aaa c tgt ggc cta 624 tgt ca ttc cta tgg aga att tgt tga acá tea taa aat aaa ggc aac 672 caá taa aaa agg acá gga gac tta tta tac tgs tgc ac gtt tgt cat 720 age aac ggg tga aag gcc acg gta ttt agg aat cea agg aga taa aga 768 ata ctg tat tac tag tga tga cct ttt ttc tet gcc fcta ttg ccc tgg 816 ca aac att ágt ggt gg tgc ctc tta tgt tgc cct gga gtg tgc «gg 864 gtt tet ggc tgg ett tgg cct aga tgt cac agt tat ggt acg ctc aat 912 cct tet ceg tgg ett cga cea aga aat ggc aga aaa agt ggg ttc cta 960 cat gga gca gca tgg tgt gaa gtt cct acg gaa att cat acc tgt gat 1008 ggt tea acá gtt gga gaa agg ttc acc tgg aaa gct gaa agt gtt ggc 1056 taa atc cac tga agg aga aac aat tga agg agt cta taa cac agt ttt 1104 gtt age tat tgg teg tga ctc ctg tac aag gaa aat agg ett a gaa 1152 gat tgg tgt ca aat taa tga gaa gag tgg aaa aat acc tgt aaa tga 1200 tgt gga acá gac caá tgt gcc ata tgt cta tgc tgt tgg tga tat ttt 1248 gga gga taa gcc aga gct cac tcc tgt cgc cat ac gtc agg ca get 1296 gct age tea gag act ttt tgg ggc ctc ttt aga aaa gtg tga tta tat 1344 taa tet tcc gac tac agt gtt tac tcc tet gga gta tgg ttg ctg tgg 1392 att atc tga aga gaa age tat tga agt ata taa aaa aga gaa tet aga 1440 aat ata tea tag ttt gtt ctg gcc tet tga atg gac agt age tgg cag 1488 aga gaa caá cac ttg tta cgc aaa gat aat ctg caá taa att cga cea 1536 tga teg ggt gat agg att tea tat tet tgg acc aaa cgc cgg tga ggt 1584 tac cea agg att tgc age tgc aat gaa atg tgg gct cac aaa acá gct 1632 act tga tga cac cat tgg aat tea ccc cac atg tgg gga ggt gtt cac 1680 gac ttt gga aat cac aaa gtc gtc agg act aga cat cac tea gaa agg 1728 ctg ctg agg cta ggc ctg ctg ctg ttt agt tet cct tgt cat att ctc 1776 att tet ctc aaa gat aag aat gct ctc gga taa aat gag cct gtg ctc 1824 atg ac gct gct ctg tta ctc agg gac cag tgc agg gct gtc tta cga 1872 cac tta gat gag aaa gta gac aag gaa aga gga cag cag tgg gca tet 1920 gcc ttg tgg tet tgc tga cag cga gaa gca gtg gga ctg ett cct tga 1968 cgc ett age ttg gag ccc cgt tat gag gtg age caá ggc tga ctc teg 2016 caá gcc agg act gag ett ccc teg gaa aga cct ttg agt ggc acc att 2064 cac cta agt tag ett ttc tgg teg cta ttg ttt tta tcc cct ttg ttt 2112 gtt gtt tet gtg aaa ata tat ttt cag tta aga aat gca aat atc tta 2160 atg agt ggt aaa aaa aaa aaa acc gga att c 2191 <210> 2 <211 2187 <212> RHA <213> Homo sapiens <220> <223> mRNA <400> 2 gaa ttc cga ttc ccc ac ccc tat ccc agt gtt cea ccc tag gtc tga 48 agg ccc ceg ccc cga atc cgg ceg cat teg gcc ceg gtc tag cea gcg 96 ctc tea cct ctc ceg cga cgg ccc gcc ggg act gga ccc gcc ceg gtc 144 cgg cgc agg cag cgc ggc ggg cag ccc tag ctg ccc cag aag ccc cac 192 gac gat ggc ggc aat ggc ggt ggc gct gcg ggg att agg agg gcg ett 240 ceg gtg gcg gac gca ggc cgt ggc ggg cgg ggt gcg ggg cgc ggc gcg 288 ggg cgc age age agg tea gcg gga cta tga tet cct ggt ggt cgg cgg 336 ggg atc tgg tgg cct ggc ttg tgc ca gga ggc cgc tea gct ggg aag 384 gaa ggt gtc cgt ggt gga cta cgt gga acc ttc tcc cea agg cac ceg 432 gtg ggg cct tgg cgg cac ctg cgt caá cgt ggg ctg cat ccc ca gaa 480 gct gat gca cea ggc ggc act gct ggg agg cct gat cea aga tgc ccc 528 caá cta tgg ctg gga ggt ggc cea gcc cgt gcc gca tga ctg gag gaa S76 gat ggc aga age tgt tea aaa tea cgt gaa ate ett gaa ctg sgg cea 624 ceg tgt cea gct tea gga cag aaa agt caá gta ett taa cat ca age 672 cag ett tgt tga cga gca cac ggt ttg cgg cgt tgc ca agg tgg gaa 720 aga gat tet gct gtc age cga tea cat cat cat tgc tac tgg agg gcg 768 gcc gag ata ccc cac gca cat cga agg tgc ett gga ata tgg aat cac 816 aag tga tga cat ett ctg gct gaa gga atc ccc tgg aaa aac gtt ggt 864 ggt cgg ggc cag cta tgt ggc cct gga gtg tgc tgg ett cct cae cgg 912 gat tgg gct gga cae cac cat cat gat gcg cag cat ccc cct ceg cgg 960 ett cga cea gca aat gtc ctc cat ggt cat aga gca cat ggc atc tea 1008 tgg cac ceg gtt cct gag ggg ctg tgc ccc ctc gcg ggt cag gag gct 1056 ccc tga tgg cea gct gca ggt cac ctg gga gga cag cae cac cgg caá 1104 a gga cae ggg cac ett tga cae cgt cct gtg ggc cat agg teg agt 1152 ccc aga cac cag aag tet gaa ttt gga gaa ggc tgg ggt aga tac tag 1200 ccc cga cac tea gaa gat cct ggt ga ctc ceg gga age cac ete tgt 1248 gcc cea cat cta cgc cat tgg tga cgt ggt gga ggg gcg gcc tga gct 1296 gac acc cat age gát cat ggc cgg g«g gct cct ggt gca gcg gct ett 1344 cgg cgg gtfc ctc aga tet gat a cta cga ca tgt tcc cac gac cgt 1392 ett cac ccc gct gga gta tgg ctg tgt ggg gct gtc cga gga gga ggc 1440 agt ggc teg cea cgg gca gga gca tgt tga ggt cta tea cgc cea tta 1488 taa acc act gga gtt cac ggt ggc tgg acg aga tgc ate cea gtg tta 1536 tgt aaa gat ggt gLg cct gag gga gcc ccc acá gct ggt gct ggg cct 1584 gca ttt cct tgg ccc caá cgc agg cga agt tac tea agg att tgc tet 1632 ggg gat caá gtg tgg ggc ttc cta tgc gca ggt gat gcg gac cgt ggg 1680 tat cea tcc cac atg ctc tga gga ggt agt ca gct gcg cat ctc ca 1728 gcg ctc agg cct gga ccc cac ggt gac agg ctg ctg agg gta age gcc 1776 ate cct gca ggc cag c acá c tgc gcc cgc cgc cag ctc ctc gga 1824 ggc cag acc cag gat ggc tgc agg cea ggt ttg ggg ggc ctc aac CCt 1872 ctc ctg gag cgc ctg tga gat ggt cag cgt gga gcg caá gtg ctg gac 1920 agg tgg ccc gtg tgc ccc ac ggg atg gct cag ggg act gtc cac ctc 1968 acc cct gca cct ctc age ctc tgc cgc cgg gca ccc ccc ccc agg ctc 2016 ctg gtg cea gat gat gac gac ctg ggt gg* aac cta ccc tgt ggg cae 2064 cea tgt ceg age ccc ctg gca ttt ctg caá tgc aaa taa aga ggg tac 2112 ttt ttc tga taa aaa aaa aaa aaa aaa «aa «aa aaa aaa aaa «aa aaa 2160 aaa aaa aaa aaa aaa aaa aaa aaa aaa 2187

Claims

REIVI N DICACION ES

1 . Una composición caractepzada porque comprende: un inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular; y un portador farmacéuticamente aceptable de dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular

2. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular evita la inhibición de la apóptosis.

3. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular inhibe un sistema de reducción-oxidación de tioredoxina .

4. La composición según la reivindicación 3, caracterizada porque dicho inhibidor de dicho sistema de reducción-oxidación de tioredoxina inhibe la tioredoxina.

5. La composición seg ún la reivindicación 3, caracterizada porque dicho inhibidor de dicho sistema de reducción-oxidación de tioredoxina inhibe la reductasa de tioredoxina .

6. La composición según la reivindicación 5 , caracterizada porq ue dicha composición tiene un valor de IC50 TR/Trx menor que aproximadamente 50 µg/ml .

7. La composición según la reivindicación 6, caracterizada porque dicho valor de I C50 TR/Trx es menor que aproximadamente 10 µg/ml.

8. La composición según la reivindicación 7, caracterizada porque dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular se selecciona a partir del grupo que consiste en NSC 401 005, NSC 208731 , NSC 382000, NSC 6651 03, NSC 61 7145, NSC 61 8605, NSC 622378, NSC 620109, NSC 163027, NSC 1 31 233, NSC 665102, NSC 631 136, NSC 681277, NSC 140377, NSC 603084, NSC 382007, NSC 635002, NSC 620358, NSC 657028, NSC 661 221 , NSC 6221 88, NSC 645330, NSC 350629, NSC 10281 7, NSC 6261 62, NSC 655897, NSC 267461 , NSC 627124, NSC 610187, NSC 624982, NSC 664951 , NSC 277293, NSC 608972, NSC 634761 , NSC 664271 , NSC 665878 y NSC 625814.

9. La composición según la reivindicación 8, caracterizada porque dicho valor de IC50 TR/Trx es menor que aproximadamente 1 µg/ml .

10. Una composición caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente la cual inhibe la señalización de reducción-oxidación celular. 1 1 . La composición según la reivindicación 1 0, caracterizada porque dicho agente inhibe la proliferación celular. 12. La composición según _ la reivindicación 10, caracterizada porque dicho agente evita la inhibición de la apóptosis 13. La composición seg ún la reivindicación 1 0, caracterizada porque dicho inhibidor de señalización de reducción- oxidación celular tiene un IC50 TR/Trx menor que aproximadamente .1 µg/ml . 14. La composición según la reivindicación 1 3, caracterizada porque dicho inhibidor de señalización de reducción-oxidación celular se selecciona a partir del grupo que consiste en NSC 401 005, NSC 208731 , NSC 382000, y NSC 665103. 15. La composición según la reivindicación 14, caracterizada porque dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango desde aproximadamente .0001 mg/kg/día hasta aproximadamente 500 mg/kg/día. 16. La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque dicha composición se utiliza para tratar una enfermedad. 17. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque dicha enfermedad es cáncer. 1 8. La composición según la reivindicación 1 6, caracterizada porque dicha enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste en daño de reperfusión ulterior a la isquemia , hepatitis, esclerosis lateral amietrófica, enfermedades neurodegenerativas , enfermedad autoinmune de enfermedad de Alzheimers, síndrome de Sjogren , Lupus, artritis reumatoide, VI H , síndrome de Hermansky-Pudlack, daño oxidante retinal , retinopatía , huperplasía cutánea , envejecimiento, daño ultravioleta, cicatrización de heridas, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa , ang iogénesis , padecimientos uterinos, síndrome de_ agotamiento respiratorio adulto (ARDS) , padecimientos pulmonares, infeccione virales y oras infecciones tales como virus de herpes, virus pustular e infecciones de adenovirus, condiciones inflamatorias, enfermedades autoinmunes tales como, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria de intestino, y diabetes autoinmune, nefritis glomerular mediada inmune, enfermedades hiperproliferativas tales como fungoides de fibrosis, -psoriasis, y micosis. 19. Un método para inhibir el crecimiento en una célula caracterizado porque comprende contactar dicha célula con una cantidad eficaz de un inhibidor de actividad de reducción-oxidación. 20. El método según la reivindicación 19, caracterizado porque dicho inhibidor de actividad de reducción-oxidación es un inhibidor del sistema de reducción-oxidación de reductasa de tioredoxina/ tioredoxina. 21 . El método según la reivindicación 20, caracterizado porque dicho agente evita la inhibición de la apóptosis. 22. El método según la reivindicación 1 9, caracterizado porque dicho crecimiento en una célula es un crecim iento tumoral . 23. Un método para tratar un estado de enfermedad caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente el cual inhibe la actividad de tioredoxina 24. El método según la reivindicación 23, caracterizado porq ue dicho agente evita la inhibición de la apóptosis 25 _El método seg ún la reivindicación 23, caracterizado » * 67 porque dicha cantidad terapéuticamente eficaz' se encuentra en un rango de desde .05 mg/kg/día hasta aproximadamente 5, 000 mg/kg/d ía. 26. El método según la reivindicación 25, caracterizado porque dicha cantidad terapéuticamente eficaz se encuentra en un rango 5 xie desde aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 50 mg/kg/día. » « - 68 - RESUMEN La presente invención se refiere a una composición o formulación la cual inhibe o interfiere con la función de reducción- oxidación celular, y a un método para utilizar la misma para restablecer la función celular normal. Más específicamente, la composición de la presente invención interfiere con o inhibe la proliferación celular anormal y o restablece la apóptosis celular