MXPA00005985A - Uso de al menos un fucano para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de patologías periodontales - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a uso de al menos un fucano para la obtención de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad periodontal. El uso caracterizado porque dicho medicamento es para la regeneración de tejido gingival. El uso caracterizado porque dicho fucano es incorporado a un dispositivo de liberación retardada.

Description

USO DE FUCANO PARA REGULAR LA RECONSTRUCCIÓN DE TEJI DOS CONECTIVOS La invención se refiere a novedosos usos de fucanos en el contexto de reparar lesiones de tejido conectivo, y en particular, para regular funciones de fibroblastos. Los fibroblastos juegan un papel esencial en el equilibrio y reparación de tejidos conectivos. En particular son responsables de renovar la matriz extracelular, y a cambio sus funciones son modificadas por las substancias presentes en esta matriz. En particular, en el proceso de curación y remodelación de tejido que ocurre después de una lesión, el tejido conectivo es el contexto para intercam bios constantes entre todas las células involucradas en este proceso. Estos intercambios tienen lugar en particular, vía citocinas o mediadores solubles transmitidos por la matriz extracelular. Por ejemplo, en los tejidos conectivos de cubierta, tales como, los tejidos cutáneos y de encía, el proceso de curación comienza, después de la formación de una matriz provisional (trombo rojo) , con el reclutamiento de células inflamatorias (leucocitos, macrófagos y células polinucleares), los cuales inician una fase de destrucción del tejido lesionado. Estas células inflamatorias participan en la destrucción: - al secretar proteasas de matriz, tales como, colagenas'a (MMP8) , elastasa leucocítica o catepsina G, - al liberar citocinas, y en particular, en interleucin 1 (IL1 ), el cual estimula la proliferación y migración de fibroblastos y de células epiteliales, y la expresión, mediante estas células, de ciertas metaloproteasas, tales como, colagenasa intersticial (MMP 1 ) o gelatinasa B (MMP9). Esta fase de destrucción , la cual empieza muy pronto después de la lesión , termina cuando el epitelio y su membrana de basamento han sido reconstituidos. Se prolonga por las fases de reparación y resolución, en las cuales los fibroblastos reconstruyen y reorganizan el marco de trabajo del colágeno; en particular se observa la expresión por los fibroblastos de gelatinasa A (MMP2) , participando activamente la metaloproteasa de matriz en todo el fenómeno de remodelación de tejido. Algunas patologías están acompañadas por un estado inflamatorio crónico del tejido conectivo, en el cual el balance entre las fases de destrucción, reparación y resolución está alterado, lo cual conduce a una reconstrucción defectuosa del tejido lesionado. Este fenómeno se observa, en particular, en el caso de enfermedades periodontales, o periodontopatías. El periodontio representa el conjunto de estructuras (encía, ligamento dento-alveolar, hueso alveolar y cim iento)), el cual proporciona el soporte para el diente en su alveolo dental. Las periodontopatías se revelan a sí mismas por episodios inflamatorios más o menos localizados, frecuentemente recurrentes, de origen infeccioso en el extremo del cual el tejido periodontal no está reconstruido correctamente.

En esta patolog ía, la iniciación de la respuesta inflamatoria y proliferación celular en respuesta a la lesión infecciosa tiene lugar más o menos normalmente. Por el contrario, la fase de resolución es rara vez satisfactoria; en el mejor de los casos se observa la reparación del tejido destruido, pero no su regeneración completa, y cada episodio de la enfermedad induce a pérdida de tejido. Las periodontopatías no tratadas evolucionan haica la mobílidad y entonces la pérdida de dientes en adultos alrededor de los cuarenta años de edad. Debido a que estas enfermedades períodontales, en una forma más o menos esparcida, afectan aproximadamente de 1 0 a 1 5% de la población, tienen consecuencias considerables en términos de salud pública. Actualmente, la mayoría de los tratamientos propuestos son dirigidos hacia desligar mecánicamente la lesión y reducir el ataque microbiano al administrar antisépticos o antibióticos. Otra aproximación terapéutica consistiría en mejorar la calidad del proceso de reparación para permitir que resulte en la regeneración completa. Sin embargo, esta aproximación en particular requiere ser capaz de estimular, en el momento deseado, la población de células apropiada, con el fin de orientar la proliferación celular y de esta manera controlar los procesos de modificación de tejido. Con este objetivo, los inventores han estudiado la acción de varios polisacáridos; se sabe que algunas de estas moléculas, tales como, glicosaminoglicanos, participan en la composición de los proteoglicanos presentes en la ¡nterfase célula/matriz extracelular, y juegan un papel en la regulación de las funciones celulares. También se sabe que los glicosamínoglicanos en una forma soluble, por ejemplo, derivados de dextrano o heparína, pueden modificar las funciones celulares vía su interacción con varios componentes de la matriz extracelular. Por ejemplo, en el caso de la heparina, se mostró un efecto estimulador en la proliferación celular en el caso de fibroblastos de pulmón de hámster, células epiteliales de cristalino de bovino [Ulrich et al. , Biochem. Biophys Res. Commun. , 1 39, p. 728-732, (1 986)] y células endoteliales capilares [Sudlalter et al. , J. Biol. Chem . , 264, p. 6892-6897, (1 989)]. Por el contrario, también se ha observado que la heparina inhibe la proliferación de ciertos tipos de células en una manera dependiente de la dosis; este efecto anti-proliferativo ha sido estudiado principalmente en el caso de células de músculo suave (SMC), para las cuales la inhibición se vuelve evidente para concentraciones de 1 µg/ml de heparina en los medios de cultivo. La heparina se opone tanto a la migración como a la proliferación de las SMCs, pero no afecta la re-endotelialización o el volumen del tejido conectivo [Clowes y Clowes, Lab. I nvest, 52, p. 61 1 -61 5, (1 985); Clowes y Clowes, Circ. Res. , 58, p. 839-845, (1986); Clowes et al. , J . Cell. Biol. , 1 07, p. 1 939-1 945, (1 988)]. También se observa una inhibición de la proliferación para otros tipos de células, tales como, por ejemplo, fibroblastos de esclerótica [Del Vecchio et al. , I nvest. Ophtalmol. Vis. Sci. , 29, p. 1 272-1 276, (1988)], fibroblastos 3T3 (fibroblastos de embriones de ratón , los cuales conservan la inhibición de contacto) [Paul et al. , Thromb. Res. , 1 8, p. 883-888, (1 980)], células epiteliales de cerviz de rata [Lyons-Gioradano et al. , Biochem . Bíophys. Res. Commun . , 148, p. 1 264-1 269, (1987)] y fibroblastos dérmicos humanos. Ferrao y Masón [Biochem . Biophys. Acta. 1 880, 225-230, ( 1 993)] han estudiado la acción de varios polisacáridos en la proliferación de fibroblastos dérmicos humanos, e indican que a concentraciones de aproximadamente 100 µg/ml, heparina, sulfato de heparano, polisulfato de pentosano y un fucoidano inhiben esta proliferación, mientras que el sulfato de condroitina, hialuronato y sulfato de dermatano no tienen efecto. Se indica que el efecto inhibidor en la proliferación conduce a una estimulación de la síntesis de colágeno tipo I . Por el contrario, se observa una inhibición de la síntesis de colágeno I cuando se adicionan los polisacáridos a cultivos, los cuales tienen confluencia alcanzada. De esta manera, parece que la acción de los polisacáridos en las funciones celulares es compleja y puede variar de acuerdo con el polisacárido, el tipo de célula y tejido involucrado, así como de acuerdo a la concentración de polisacárido usada y el estado de las células. En el contexto de investigación dirigida hacia la dilucidación del mecanismo de acción de varios polísacáridos sobre las funciones de fibroblastos, y en particular aquéllos involucrados en la regeneración de tejido, los inventores estuvieron interesados particularmente en los fucanos. Los fucanos son polisacáridos sulfatados, los cuales participan en la constitución de las paredes celulares de brotes de algas cafés (Pheophyceae); también están presentes en algunos animales marinos, tales como, erizos y cohombros de mar. El fucano crudo, también llamado fucoidano, obtenido mediante extracción con ácido de las paredes celulares de los brotes de algas cafés, consiste de una población heterogénea de moléculas, las cuales comprenden principalmente polímeros de L-fucosa sulfatada de masa molar promedio alta (100, 000 a 800,000 g/mol). Los fucanos han variado las actividades biológicas: de esta manera, se ha mostrado que poseen actividades anticoagulantes, antitrombóticas [T. Nishino y T. Nagumo, Carbohydr. Res. 229, p. 355-362, (1992); solicitud EP 0403 377; S. Colliec et al. Thromb. Res. 64, p. 143-154 (1991 ); S. Soeda et al. Thromb. Res. 72, p. 247-256 (1993) ; Mauray et al. Thromb. Haemost. (5) 1280-1285 (1995)], antiviral [M. Baba et al. J. AIDS, 3, p. 493-499, (1990)], antiangíogénica [R. Hahnenberger y A. M. Jackobson, Glycoconjugate J. , 8, 350-353 (1991 )] y anticomplementaria [C. Blondín et al. , Mol. Immunol. , 31 , p. 247-253, (1994)]. También se ha observado que pueden actuar como moduladores de la adhesión celular [C.G. Glabe et al. , J . Cell Sci. 61 , p. 475-490, (1983)], de liberación de factores de crecimiento [D.A. Belfort et al. , J. Cell. Physiol. 1 57, p. 184-189, (1993)], de proliferación de células de tumor [M. Ellouali et al. , Anticancer Res. , 13, p. 201 1 -2020 (1993); D. R. Coombe et al. , Int. J. Cáncer, 39, pp. 82-90, (1987); D. Riou et al. , Anticancer Res. , 16, 1213-1218 (1996)] y de células de músculo suave vascular [Logeart et al. , Eur. J. Cell. Biol. , 74, pp. 376-384 (1997)], y pueden bloquear interacciones de espermatozoide/óvulo en varias especies [M.C. Mahony et al., Contraception , 48, p. 277-289, (1 993)].

Se obtuvieron preparaciones de fucanos de masa molar promedio menor que 20,000, o incluso que 10,000 g/mol, la cual facilita su uso en un contexto terapéutico, por ejemplo, mediante hidrólisis acida controlada de fucano de masa molar alta (patente EP 0,403,377 en el nombre de I FREM ER) , o mediante despolimerización de radicales (solicitud de PCT WO/9708206 en el nombre de I FREMER y CN RS) . En el reporte que seguirá, el término: "fucano" abarca tanto los fucanos de masa molar alta como las preparaciones de masa molar inferior obtenidas a partir de los mismos. Los inventores han observado que los fucanos poseen un perfil de actividad sobre las funciones de los fibroblastos, el cual es diferente de aquél de la heparina. En particular, han observado al probar estos dos polísacáridos bajo las mismas condiciones, que mientras que la heparina inhibe tanto la proliferación de fibroblastos dérmicos y aquélla de fibroblastos de encías, los fucanos activan la proliferación de fibroblastos dérmicos, mientras que al mismo tiempo inhiben aquélla de los fibroblastos de las encías. Además, los inventores también han observado que los fucanos modifican la morfología de los fibroblastos dérmicos los cuales se redondean, mientras que los fibroblastos de encías, por el contrario, conservan un morfotipo fibrolástico. Los inventores también han observado q ue los fucanos aumentan la cantidad de proteínas en la capa celular y la actividad de MMP2 (gelatinasa A) , e inhiben la elastasa leucocítica. Estos efectos se revelan por sí solos tanto en fibroblastos dérmicos como en fibroblastos de encías.

Un objetivo de la presente invención es el uso de un fucano para obtener un producto medicinal , el cual modifique la expresión y/o la actividad de metaloproteinasas fibroblásticas, y en particular de MMP2, y el cual inhiba la elastasa leucocítica. De esta manera, los fucanos pueden hacer posible controlar la actividad proteolítica en tejidos conectivos, tales como, tejidos dérmicos y de encía, y en particular, limitar la actividad de elastasa, la cual exhibe un considerable potencial destructivo con respecto a las estructuras macromoleculares conectivas, mientras que al mismo tiempo, por el contrario, promueven la actividad de proteasas que participan en la reconstrucción de tejido, tales como, MM P2. De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, dicho producto medicinal también puede ser usado para inhibir la proliferación de fibroblastos de encías y para activar su síntesis de colágeno. Permite el tratamiento de patolog ías periodontales vía una mejora en la fase de resolución. De manera específica, debido a la combinación de una regulación de actividades proteolíticas (en particular, la activación de MM P2 e inhibición de elastasa) con una inhibición de la proliferación de fibroblastos de encías, un incremento en la síntesis de una matriz fisiológica y la conservación del morfotipo fibroblástico, los fucanos hacen posible acoplar estos fibroblastos de goma en la ruta de remodelación , la cual es requerida para cualquier proceso de reparación o regeneración de tej ido. De acuerdo con otra modalidad de la presente invención, dicho producto medicinal también puede ser usado para activar la proliferación de fibroblastos dérmicos y su síntesis de colágeno. De esta manera, permite el tratamiento de lesiones dérmicas al mejorar la fase de recuperación del tejido lesionado. Los productos medicinales obtenidos de acuerdo con la invención pueden ser administrados de manera general (oral o parenteralmente). También pueden ser adm inistrados en manera local, en la forma de geles, cremas, ungüentos, lociones, pastillas, enjuagues bucales, etc. También pueden ser administrados in sítu vía substratos, dispositivos reabsorbibles o no reabsorbibles, tales como, por ejemplo, soportes de liberación retardada, o esponjas que se desintegran lentamente. Los fucanos también pueden ser usados en cosmetología, como activadores de la proliferación de fibroblastos en el contexto de tratamientos dirigidos hacia estética, por ejemplo, de tratam ientos antiarrugas o de prevención del envejecim iento de la piel, etc. La presente invención será mejor entendida con la ayuda de la descripción adicional , la cual se presenta a continuación, refiriéndose a ejemplos que demuestran la actividad de los fucanos en fibroblastos dérmicos y de encías.

EJEMPLO 1 : ACCIÓN DEL FUCANO EN LA PROLIFERACIÓN DE FI BROBLASTOS DE ENCÍAS Y DÉRMICOS Polisacáridos Fucano: El fucano usado es una fracción de masa molar promedio de 20,000 ± 2000 obtenido de la alga café marina Ascophylum nodosum, de acuerdo con el método descrito en la patente EO 0,403, 377. Este fucano tiene un alto nivel de fucosa (44 ± 5%) , pocos ácidos urónicos (7 ± 3%), 28 ± 3% de grupos de sulfato y nada de proteínas.

Células Los fibroblastos usados fueron obtenidos de explantas de tejidos dérmicos y de encías saludables, cuyos orígenes son tres donadores diferentes (de 1 5 a 30 años de edad) .

Cultivo El protocolo de cultivo es el mismo para los fibroblastos de encía y los fibroblastos dérmicos. De la explanta, las células son cultivadas en un medio de cultivo DMEM (Medio Eagle Modificado de Dulbecco) conteniendo D-glucosa en 1 g/l y GLUTAMAX a 0.862 g/l , un antibiótico (penicilina/estreptomicina a 1 000 U/ml) , fungizone (anfotericina B a 250 U/ml; G I BCO BRL) y 20% de suero de ternera fetal (FCS). Los especímenes son removidos del medio de transporte. Habiendo sido enjuagados tres veces en el medio de cultivo, son finamente cortados a pequeñas piezas de aproximadamente 1 mm2. Se arreglan de manera que la capa epitelial está orientada hacia arriba y la capa conectiva está orientada hacia abajo, en contacto con la placa de cultivo de 25 cm2. La placa es colocada verticalmente en un incubador a 37°C (95% de aire, 5% de CO2) durante media hora, con el fin de promover la adhesión. Después de adicionar una gota de medio sobre cada fragmento de tejido, la placa es regresada al incubador durante la noche. El día siguiente, el medio de cultivo es reemplazado con medio fresco. La placa se deja así en el incubador durante cuatro d ías. El medio es cambiado entonces cada tercer día, y las explantas son removidas tan pronto como los fibroblastos se adhieren a la pared. Cuando los fibroblastos han invadido el fondo completo de la placa, el cultivo primario es terminado.

Pasos subsecuentes El medio de cultivo es removido, y la placa es enjuagada tres veces con DPBS (Solución salina amortiguada con fosfato de Dulbecco) para remover todas las trazas de FCS y entonces se tripsiniza (tripsina diluida a 0.05% en DPBS y filtrada). Después de 5 minutos, los fibroblastos se despegan y se redondean. Las células son distribuidas en tres placas, en DMEM (1 0 a 12 mi) conteniendo 1 0% de FCS y 1 000 U/ml de penicilina/estreptomicina. El medio es cambiado regularmente hasta la colonización completa de la nueva placa.

Protocolo de proliferación celular Las células confluentes son tripsinizadas, suspendidas en DMEM en una proporción de 7000 a 1 0, 000 células/ml, y entonces se distribuyen en las cavidades de placas de 24 cavidades. Se adiciona medio conteniendo 10% de FCS a las cavidades, y las placas sembradas son regresadas al incubador durante dos horas para permitir la adhesión . Tres horas después del sembrado, los medios son reemplazados con un medio de DM EM/1 0% FCS (grupo de control) o un medio de DMEM/1 0% FCS con 1 , 10 o 1 00 µg/ml del polisacárido probado (fucano o heparina) . Las células se cuentan diariamente hasta el cuarto d ía . El porcentaje de proliferación es calculado usando la relación: %P = (proliferación neta con producto - 1 ) x 1 00 proliferación neta de controles Si el valor calculado es positivo, existe proliferación celular; si es negativo, existe inhibición de la proliferación celular. Los resultados que conciernen al porcentaje de proliferación en la presencia de varías concentracioens de fucano se ilustran mediante las Tablas la (fibroblastos de encía) y I b (fibroblastos dérmicos) a continuación: TABLA la TABLA Ib Estos resultados muestran que el fucano influencia la proliferación de fibroblastos de encías y de fibroblastos dérmicos en manera diferente: - Fibroblastos de encías (Tabla la): puede observarse una inhibición de la proliferación que alcanza su máximo en la fase de crecimiento exponencial. Esta inhibición parece ser dependiente de la dosis. - Fibroblastos dérmicos (Tabla Ib): los diversos experimentos muestran un efecto pro-proliferatívo de fucano en los cultivos de fibroblastos dérm icos. Este efecto es máximo en el cuarto d ía de cultivo, y 10 µg/ml es la concentración más efectiva.

EJEM PLO 2: INFLUENCIA DE FUCANO EN LA ACTIVI DAD DE MMP2 (GELATI NASA A) Y EN LA MORFOLOGÍA DE LOS FI BROBLASTOS: Las células son sembradas en placas de 24 cavidades (7000 a 1 0, 000 células/ml) y se cultiva en la presencia de DM EM/10% FCS. En la confluencia, el medio es reemplazado con DMEM para los controles, o DMEM conteniendo las diversas concentraciones de fucano (1 , 1 0 o 100 µg/ml) , durante 24 horas. Los medios son recuperados entonces, para detectar la actividad gelatinol ítíca de pro-MMP2, y las células, las cuales se fijan y se manchan (metanol/GI EMSA) se cuentan y se analizan morfométicamente en una computadora BIOCOM 200.

Determinación de la actividad gelatinolítica: Las actividades geiatinolítícas presentes en los medios de cultivo son detectadas por zymografía, después de electroforesis bajo condiciones no reductoras en gel de SDS-poliacrilamida + geltaina, y entonces remoción de SDS. Los resultados son cuantificados mediante análisis de imagen semiautomática en una computadora BIOCOM 200. Para cada banda que aprece en el gel, el producto de la densidad gris (D) es determinado por el área de superficie de la banda (S) . Este producto, reportado a número de células, hace posible valorar y com parar las diversas actividades gelatinolíticas.

Los resultados se ilustran en la Tabla I I a continuación: TABLA I I Estos resultados m uestran que el fucano aumenta significativamente, desde las concentraciones más bajas, la secreción de pro-MMP2 en ambos tipos de fibroblastos estudiados.

Morfometría celular Se estudian cuatro parámetros: la circunferencia (expresada en µm), el área de superficie de la célula (expresada en µm2) , su diámetro equivalente (expresado en µm) y su factor de forma El diámetro equivalente es el diámetro del círculo más pequeño, el cual contiene completamente la célula. Se define la mayor longitud de la célula. El factor de forma es determinado por la proporción 4pS/C2, donde S representa el área de superficie y C la circunferencia; cuando se acerca a cero, indica una estructura alargada; cuando aumenta, indica una redondeo de la forma. Los resultados se ilustran en las Tablas Illa (fibroblastos de encías) y lllb (fibroblastos dérmicos) a continuación: TABLA Illa TABLA lllb Estos resultados muestran que los fibroblastos de encías y dérmicos reaccionan de manera diferente al fucano: Fibroblastos de encías: el área de superficie y el diámetro de las células disminuye, mientras q ue su circunferencia aumenta. Estos parámetros hacen posible calcular un factor de forma que se acerca a cero, lo cual implica un célula alargada del tipo fibroblástico. Fibroblastos dérmicos : bajo la influencia del fucano, el área de superficie y el diámetro de las células aumenta, mientras que su circunferencia permanece constante. El factor de forma aumenta, lo cual implica células que se redondean.

EJEMPLO 3: IN FLUENCIA DEL FUCANO SOBRE LA ACTIVIDAD DE ELASTASA LEUCOCITICA La actividad de elastasa leucocítica en la presencia de fucano (1 µg/ml o 1 0 µg/ml) o de heparina H 1 08 (1 l U/ml o 1 0 l U/ml) se mide usando como substrato el péptido sintético: N-MeO-Succ-Ala-Ala-Pro-Val-PA, de acuerdo con el protocolo descrito por Bizot-Foulon et al. [I nternatioonal Journal of Cosmetic Science, 1 7, p. 255-264, (1 995)]. Los resultados son ilustrados por la Tabla IV a continuación: TABLA IV *1 lU/ml = 5.8 µg/ml Estos resultados muestran que en el caso de la heparina, la inhibición de elastasa leucocítica es limitada, y que el efecto inhibitorio disminuye cuando la concentración de heparina aumenta; por el contrario, en el caso del fucano, la inhibición es mucho mayor, desde la concentración de 1 µg/ml.

EJ EMPLO 4: I N FLUENCIA DEL FUCANO SOBRE LA BIOSINTESIS DE COLÁGENO FIBRILAR La bíosíntesis de colágeno es medida después de la incorporación de prolina titulada (3H-Pro). Las células son cultivadas en DM EM/1 0% FCS hasta confluencia. Los medios son reemplazados entonces con DMEM conteniendo ácido ascórbico (50 µg/ml) y 3H-Pro (25 µCi/ml) para los controles, o el mismo medio con fucano adicionado a varias concentraciones (1 , 1 0 o 100 µg/ml) o con heparina H 1 08 adicionada a una concentración de 400 µg/ml. Después de 24 horas, los medios y la capa celular son recuperados. La extracción específica de prolina e hidroxiprolina radiomarcada mediante el método de Rojkind y Gonzales [Anal . Biochem . 57: 1 -7 (1 974)] hace posible determ inar la proporción de síntesis de colágeno total/síntesis de proteína total. Los resultados se ilustran en las Tablas Va (fibroblastos de encías) y Vb (fibroblastos dérmicos) a continuación: TABLA Va TABLA Vb Estos resultados muestran que, bajo el efecto del fucano, ambos tipos de fibroblastos tienden a sintetizar una matriz, la cual es depositada preferencialmente en la capa celular. Este depósito de matriz parece incubír todas las proteínas, y no solo a colágeno, el cual, para ambos tipos de células, excluye cualquier riesgo fibrótico. - Fibroblastos de encías: la proporción de síntesis de colágeno total/síntesis de proteína total no varía . El porcentaje de colágenos en la capa celular aumenta en paralelo con el porcentaje de proteínas, en una manera dependiente de la dosis. - Fibroblastos dérmicos : el porcentaje de colágenos presente en la capa celular (intra- + pericelular) aumenta a dosis baja y no varía a 1 00 µg/ml, mientras que la cantidad de proteínas presente en este compartimiento aumenta con la concentración de fucano. La proporción de síntesis de colágeno total/síntesis de proteína total disminuye.

Influencia del fucano o de la heparina en el depósito de colágenos pericelulares sintetizados por fibroblastos de goma Las células son cultivadas como se describió antes, en la presencia de prolina titulada; se adiciona fucano a una concentración de 1 00 µg/ml, o de heparina H 108 (masa molar promedio 21 , 000 + 2000, actividad de 173 l U/mg , vendida por Choay Sanofi) a una concentración de 400 µg/ml. Para estimar la cantidad de colágeno fibrilar, los colágenos intracelulares y pericelulares son extraídos diferencialmente con deoxicolato (el cual extrae esencialmente procolágeno intracelular) y SDS (el cual solubiliza colágeno pericelular acumulado en la matriz extracelular) . Los resultados se ilustran en la Tabla VI a continuación : TABLA VI Estos resultados hacen posible confirmar que el aumento en colágenos en la capa celular se debe realmente a un depósito de matriz (de esta manera pericelular), y no a retención intracelular excesiva. También muestran que este depósito de matriz es más considerable en la presencia de fucano que en la presencia de heparina.

Claims (4)

REIVI NDICACION ES

1 . El uso de al menos un fucano para obtener un producto medicinal , el cual modifica la expresión y/o la actividad de metaloproteinasas fibroblásticas, y el cual inhibe la elastasa leucocítica.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho producto medicinal puede ser usado para inhibir la proliferación de fibroblastos de encías y para activar su síntesis de colágeno.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho producto medicinal puede ser usado para activar la proliferación de fibroblastos dérmicos y su síntesis de colágeno.

4. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho fucano es incorporado a un dispositivo de liberación retardada. (54) Título: USO DE FUCANO PARA REG U LAR LA RECONSTRUCCIÓN DE TEJ I DOS CONECTIVOS (57) Resumen: La invención concierne al uso de fucanos para obtener medicinas para modular metaloproteasa e inhibir elastasa leucocítica. Dichas medicinas ayudan a activar la síntesis de colágeno, inhiben la proliferación de fibroblastos gingivales, y activan la proliferación de fibroblastos dérmicos. Son útiles, en particular, para tratar patolog ías periodontales y lesiones dérmicas.