MXPA00001207A - Uso del interferon consenso para el tratamiento de pacientes con esclerosis múltiples - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a métodos para prevenir y tratar esclerosis múltiples por medio de la administración a pacientes con necesidad de ello de una cantidad terapéuticamente efectiva de IFN-con, tanto sólo como en combinación con otro agente activo.

Description

USO DEL INTERFERON CONSENSO P2\RA EL TRATAMIENTO DE PACIENTES CON ESCLEROSIS MÚLTIPLES La presente invención se refiere a métodos para la prevención y tratamiento, usando interferón consenso (IF -con), de pacientes que sufren de esclerosis múltiple (MS) .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La esclerosis múltiple (MS) es una enfermedad desmielinizante inflamatoria del sistema nervioso central (CNS) , caracterizada clínicamente por recaídas y remisiones, a menudo guiando a un deterioro físico progresivo. La MS es el trastorno neurológico discapacitante más común que afecta a adultos jóvenes blancos. Por lo menos 350,000 americanos tienen MS, con mujeres afectadas dos veces más a menudo que los hombres. La MS usualmente empieza por las edades de 15 y 50; la edad promedio de comienzo es 30. El riesgo de MS varía para las diferentes áreas geográficas e incrementa a medida que uno viva más alejado hacia el norte o el sur del ecuador.

La etiología precisa y la patogénesis de la enfermedad permanecen desconocidas; sin embargo, las características patológicas, genéticas, e inmunológicas han sido REF.: 32273 identificadas lo cual sugiere que la enfermedad tiene una base autoinmune; ver e.g., Waksman, et al., Proc. Soc. Exp. Biol . Med. ,. 115 : 282-294 (1984) y Hafler et al., Immunol . Rev. , 100: 307-332 (1987). La MS sigue un curso variado, a menudo impredecible, pero es típicamente categorizada dentro de cuatro formas ampliamente reconocidas: recaídas-moderadas (~25% de los casos); recaídas-progresivas (~40% de los casos) ; crónica-progresiva (~15% de los casos) ; y benignas (~20% de los casos) . Casi todos los pacientes con MS sufren síntomas tales como fatiga, espasticidad, estremecimiento, movilidad disminuida, depresión, dolor, complicaciones urológicas, y daño cognitivo en algún punto durante el curso de su enfermedad.

La MS es actualmente incurable, pero es ampliamente tratada. La mayoría de los tratamientos son sintomáticos; es decir, alivian o previenen un síntoma, sin ser capaces de reparar el defecto subyacente de desmielinización, a pesar de que los corticoesteroides y varios inmunosupresores demuestran beneficios transitorios, que alteran la enfermedad. Los corticoesteroides pueden reducir la duración de las explosiones de la enfermedad mientras algunos inmunosupresores, e.g., Burroughs-Wellcome' s I uran®, son considerados para reprimir el número de explosiones experimentadas por los pacientes con MS.

Los interferones son una subclase de citocinas que exhiben actividad tanto antiviral así como antiprolíferativa. Con base en las propiedades bioquímicas e inmunológicas, los interferones que se presentan naturalmente en el humano se agrupan dentro de tres clases: interferón alfa (leucocito), interferón beta (fibroblasto) , e interferón gamma (inmune) . El interferón-alfa está actualmente aprobado en los Estados Unidos y otros países para el tratamiento de leucemia de células vellosas, verrugas venéreas, Sarcoma de Kaposi (un cáncer que comúnmente afecta a pacientes que sufren del Síndrome de Inmuno Deficiencia Adquirida (SIDA) ) , y hepatitis crónica no-A, no-B. Dos variantes de interferón alfa han recibido aprobación para su uso terapéutico: Interferón alfa-2a, puesto en venta bajo el nombre comercial de Roferon®-A, y el Inferieron alfa-2b, puesto en venta bajo el nombre comercial de INTRON® A. Las secuencias de aminoácidos del Roferon®-A y del INTRON® A difieren en solo una posición pero de otra manera son idénticos a la secuencia de aminoácidos del interferón-alfa subtipo 2 (subtipo A) .

Además de las indicaciones marcadas, el interferón-alfa está siendo usado o evaluado solo o en conjunto con agentes quimioterapéuticos en una variedad de trastornos de proliferación celular, incluyendo leucemia ielógena crónica, mieloma múltiple, cáncer superficial de la vejiga, cánceres de piel (carcinoma de células básales y melanoma maligno) , carcinoma de células renales, cáncer ovárico, linfoma cutáneo de células T y linfocítico de bajo grado, y glio a. El interferón-alfa puede ser efectivo en combinación con otros agentes quimioterapéuticos para el tratamiento de tumores sólidos que surgen del pulmón, cáncer colorectal y de mama (ver Rosenberg et al. "Principies and Applications of Biologic Therapy" en Cáncer: Principies and Practices of Oncology, >rd ed., Devita et al., eds. pp. 301-547 (1989), Bal er DICP, Ann Pharmacother 24, 761-768 (1990) .

Los interferones del tipo 1 (e.g. interferón alfa e interferón beta) se sabe que afectan una variedad de funciones celulares, incluyendo la replicación de ADN -y ARN y las síntesis de proteínas, tanto en células normales como anormales. Así, los efectos citotóxicos del interferón no están restringidos a células tumorales o infectadas por virus sino que también se manifiestan en células normales, saludables. Como resultado, efectos colaterales indeseables surgen durante la terapia con interferón, particularmente cuando se requieren altas dosis. La administración de interferón puede conducir a mielosupresión resultando en niveles reducidos de células rojas de la sangre, células blancas de la sangre y plaquetas. Dosis más altas de interferón comúnmente producen síntomas parecidos a los de la gripe (e.g., fiebre, fatiga, dolores de cabeza y temblores), trastornos gastrointestinales (e.g., anorexia, náusea y diarrea), mareo y tos. Sería útil reducir o eliminar los efectos colaterales indeseables de la terapia con ínterferón sin disminuir los beneficios terapéuticos de tal terapia.

El Betaseron® (Schering Corp' s interferón beta-Ib recombinante) fue el primer medicamento indicado específicamente para el tratamiento de MS. En una prueba clínica mayor, el Betaseron® se encontró que era efectivo en la reducción del número y severidad de las exacerbaciones, o recaídas, sufridas por pacientes con MS, así como en el decremento de la evidencia de la imagen por resonancia magnética (MRl) de la actividad de MS en el cerebro. Importantemente, los resultados de ia prueba se relacionan solamente con el grupo de pacientes con recaídas-moderadas, ya que otras formas de MS no fueron representadas en la prueba. Más aún, la prueba no demostró ningún efecto benéfico del medicamento sobre la discapacidad definitiva de MS durante los 2 a 3 años del estudio, y la efectividad del medicamento es significativamente empeorada por sus efectos colaterales.

Las Patentes U.S. Nos. 4,695,623, 4,897,471 y 5,541,293 publicann nuevos polipéptidos de interferón humano que tienen secuencias de aminoácidos las cuales incluyen aminoácidos comunes o predominantes encontrados en cada posición entre subtipos de polipéptidos de interferón alfa que se presentan naturalmente y son referidos como interferones consenso (IFN-con) . Las secuencias de aminoácidos publicadas de los IFN-con se designan IFN-coni, IFN-con2, e IFN-con3. La preparación de genes fabricados que codifican para IFN-con y la expresión de dichos genes en E. coli también son publicadas. Estudios in vi tro que comparan las actividades relativamente antivirales, antiproliferativas, de células asesinas naturales de IFN-con reco binante con interferones ya sea de leucocito o de otros de tipo-uno recombinante demuestran que el IFN-con muestra actividad significativamente más alta cuando se le compara sobre una base de masa; Ozes et al., J Interferon Research, 12: 55-59, 1992.

La Patente U.S. No. 5,372,808 publica métodos de tratamiento de enfermedades usando interferón consenso. Se muestra que el IFN-con, cuando se utiliza en el tratamiento de enfermedades susceptibles a tratamiento mediante interferones alfa, no causa el mismo grado de efectos colaterales en pacientes como lo hacen los interferones alfa. Se mostró más adelante que dosis de 3 a 5 veces más altas de IFN-con pueden ser utilizadas, conduciendo a un beneficio terapéutico mejorado, con un incremento substancialmente no correspondiente en la frecuencia o severidad de los efectos colaterales indeseables .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención abarca métodos de tratamiento de esclerosis múltiple mediante la administración a pacientes con necesidad de los mismos de una cantidad terapéuticamente efectiva de IFN-con. La invención se basa en el descubrimiento de que el IFN-coni fue capaz de atenuar marcadamente, de una manera dosis-dependiente, la severidad clínica de EAE después de la inmunización con CNS (cerdo de guinea) homogeneizado. Más aún, la combinación de IFN-coni con otros terapéuticos, e.g. IL-1ra, es aún más efectiva en atenuar los signos clínicos de EAE.

El IFN-con es un polipéptido que no se presenta naturalmente que tiene actividad antiproliferativa y antiviral. Preferentemente, el IFN-con es un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de IFN-coni, IFN-con2, o IFN-con3. Más preferentemente, el IFN-con tiene la secuencia de aminoácidos del IFN-coni.

Se entiende que tanto la descripción general precedente y la descripción detallada subsiguiente son solamente ejemplares y explicatorias y no son restrictivas de la invención como se reivindica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica de barras representando el efecto de la dosificación diaria de IFN-con empezando en el día 0 post-inmunización en severidad clínica en GP EAE. 0.3, 0.1, 0.03 y 0.01 mg/kg de IFN-con administrados s.c. una vez al día es comparada contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 2 es una gráfica de barras representando el efecto de la dosificación de cualquier otro día de IFN-con empezando en el día 0 post-inmunización en severidad clínica en GP EAE. 0.3, 0.1, 0.03 y 0.01 mg/kg de IFN-con administrados s.c. una vez al día es comparada contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 3 es una gráfica de barras representando el efecto de la dosificación diaria de IFN-con empezando en el día 4 post-inmunización en severidad clínica en GP EAE. 0.3 y 0.1 mg/kg de IFN-con administrados s.c. una vez al día es comparada contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 4 es una gráfica de barras representando el efecto de la dosificación del día 0, día 4, día 7 y día 11 de 1.0 mg/kg de IFN-con vs. la dosificación diaria de 0.03 mg/kg de IFN-con en severidad clínica en GP EAE. Las muestras de IFN-con fueron administradas s.c. una vez al día y son comparadas contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 5 es una gráfica de barras representando el efecto de la dosificación diaria de 0.03 mg/kg de IFN-con vs. la dosificación diaria de 100 mg/kg de IL-lra vs. la dosificación diaria de 10 mg/kg de IL-lra en severidad clínica en GP EAE. La dosificación comenzó en el día 0 post-inmunización. El IFN-con fue administrado s.c. una vez al día, y el IL-lra fue administrado s.c. 3 veces diarias. Las muestras de IFN-con e IL-lra es comparada contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 6 es una gráfica de barras representando el efecto de la terapia por combinación de IFN-con + IL-lra en severidad clínica en GP EAE. El IFN-con fue administrado s.c. una vez al día y el IL-lra fue administrada s.c. tres veces diarias- Una combinación comprendiendo 0.03 mg/kg de IFN-con + 100 mg/kg de IL-lra y una combinación comprendiendo 0.03 mg/kg de IFN-con + 10 mg/kg de IL-lra fue comparada contra 0.03 mg/kg de IFN-con solo y contra Vehículo después de 14 días de tratamiento.

La Figura 7 es una gráfica de barras representando el efecto del IFN-con, IL-lra, IFN-con + IL-lra, y del Vehículo en la ganancia de peso en GP EAE. El IFN-con (0.03 y 1.0 mg/kg) fue administrado s .c . una vez al día y el IL-lra (10 y 100 mg/kg) fue administrada s.c. tres veces diarias. Una combinación comprendiendo 0.03 mg/kg de IFN-con + 100 mg/kg de IL-lra y una combinación comprendiendo 0.03 mg/kg de IFN-con + 10 mg/kg de IL-lra también fue probada y todas las muestras de prueba comparadas contra ganancia de peso en un cerdo de guinea normal después de 14 días de tratamiento.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como es notado arriba, la presente invención se refiere a métodos para la prevención y tratamiento de la esclerosis múltiple en pacientes que sufren de ella. El método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de interferón consenso a un paciente que sufre de MS. Además, la presente invención se refiere a métodos para la prevención o tratamiento de MS que comprenden la administración de interferón consenso en combinación con otro agente activo, e.g. IL-lra.

Como está empleado aquí, el interferón consenso humano (IFN-con) significa un polipéptido que no se presenta naturalmente, el cual incluye predominantemente aquellos residuos de aminoácidos que son comunes a un subgrupo de INF-a' s representativos de la mayoría de los subtipos de secuencias de interferón leucocitario humano que se presenta naturalmente y los cuales incluyen, a una o más de aquellas posiciones donde no hay un aminoácido común para todos los subtipos, un aminoácido el cual se presenta predominantemente en esa posición y en ningún evento incluye ningún residuo de aminoácido el cual no existe en esa posición en por lo menos un subtipo que ocurra naturalmente. El IFN-csn abarca pero no se limita a las secuencias de aminoácidos designadas IFN-coni, IFN-con2 e IFN-con las cuales son publicadas en las comúnmente reconocidas Patentes U.S. Nos. 4,695,623, 4,897,471 y 5,541,293, las publicaciones completas de las cuales son incorporadas por este medio mediante referencia. Las secuencias de ADN que codifican al IFN-con pueden ser sintetizadas como se describe en las patentes arriba mencionadas u otros métodos estándar.

Los polipéptidos IFN-con son preferentemente los productos de expresión de las secuencias fabricadas de ADN transformadas o transferidas dentro de huéspedes bacterianos, especialmente E. coli. Es decir, el IFN-con es IFN-con recombinante. El IFN-con es preferentemente producido en E. coli y es purificado mediante procedimientos conocidos para aquellos expertos en el arte y descritos generalmente en Klein et al., J. Chromatog. 454: 205-215 (1988) . El IFN-coni purificado de ésta manera se reporta que tiene una actividad específica de 3 x 109 unidades/mg proteína como fue medido en el ensayo de inhibición del efecto citopático usando la línea celular humana T98G; Fish et al. J. Interferon Res. 9, 97-114 (1989) .

El IFN-con puede ser utilizado solo o en combinación con otros agentes activos para el tratamiento de MS. Los agentes activos contemplados para su utilización son compuestos sintéticos o naturales los cuales demuestran un efecto biológico cuando son introducidos dentro de una criatura viviente e incluyen péptidos, moléculas pequeñas, hidratos de carbono, ácidos nucleicos, lípidos, y proteínas . Las proteínas contempladas para su utilización incluyen potentes citocinas, incluyendo varios factores hematopoyéticos tales como factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , factor de crecimiento de queratinocitos (KGF) , factor de células madre (SCF) , factor de diferenciación de crecimiento de megacariocitos (MGDF) , factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos (GM-CSF) , los interferones (alfa, beta, y gamma), las interleucinas (2-12), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), factor de células madre (SCF), factor de crecimiento de nervios (NGF) , factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), factor neurotrófico-3 (NT3) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , factor de crecimiento de tumores (alfa, beta) , antagonista del receptor de la interleucina-1 (IL-lra), osteoprotegerina (OPG) , factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF) , inhibidores de p38 y proteína de obesidad (proteína OB) . En una modalidad preferida para el tratamiento de MS, el IFN-con es utilizado en conjunto con una cantidad terapéuticamente efectiva de IL-lra.

El antagonista del receptor de la interleucina-1 (IL-lra) es una proteína humana que actúa como un inhibidor natural de la interleucina-1. Los antagonistas del receptor preferidos, así como métodos de fabricación y uso de éstos, están descritos en Patente U.S. No. 5,075,222 (referida aquí como la patente ?222) ; WO 91/08285; WO 91/17184; AU 9173636; WO 92/16221; WO 93/21946; United States Provisional Patent Application No. 60/011,419 publicada en Febrero 9, 1996 por Collins, y otorgado el derecho en la carta de transmisión Provisional Application como "COMPOSITION AND METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES", United States Provisional Patent Application No. 60/032,789 publicada en Diciembre 6, 1996 por Collins y Bevilacqua, y otorgado el derecho en la carta de transmisión de la Solicitud Provisional como "COMPOSITION AND METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES"; WO 94/06457; WO 94/21275; FR 2706772; WO 94/21235; DE 4219626, WO 94/20517; y WO 96/22793, las publicaciones de los cuales son incorporadas aquí mediante referencia. Las proteínas incluyen antagonistas del receptor IL-1 glucosilados así como no glucosilados.

Específicamente, tres formas útiles de IL-lra y variantes de éste son publicadas y descritas en la patente %222. La primera de éstas, IL-lraa, es caracterizada como una molécula de 22-23 kD en SDS-PAGE con un punto isoeléctrico aproximado de 4.8, eluyendo de una columna Mono Q FPLC a cerca de 52 mM de NaCL en el amortiguador Tris, pH 7.6. La segunda, IL-lraß, es caracterizada como una proteína de 22-23 kD, eluyendo de una columna Mono Q a 48 mM de NaCl. Tanto IL-lraa y IL-lraß son glucosiladas. La tercera, IL-rax, es caracterizada como una proteína de 20 kD, eluyendo de una columna Mono Q a 48 mM de NaCl, y es no glucosilada. Todos estos tres inhibidores poseen actividades funcionales e inmunológicas similares.

Los métodos para producir IL-lra también son publicados en la patente ''222. Un método publicado consiste en aislar los IL-lra de los monocitos humanos, donde son naturalmente producidos. Un segundo método publicado involucra el aislamiento del gen responsable de codificar el IL-lra, la clonación del gen en vectores apropiados y tipos celulares, la expresión del gen para producir los inhibidores y la cosecha de los inhibidores. Éste último método, el cual es ejemplar de los métodos de ADN recombinante en general, es un método preferido. Los métodos de ADN recombinante son preferidos en parte porque son capaces de conseguir cantidades de proteína comparativamente más grandes a una pureza más grande. Así, la invención también abarca el IL-lra que contiene un grupo metionilo N-terminal como consecuencia de la expresión en células procarióticas, como E. coli .

En general, comprendidas por la presente invención están las composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades efectivas de proteína o productos derivativos de la invención junto con diluyentes, estabilizadores, preservativos, solubilizadores, emulsificadores, auxiliares y/o transportadores farmacéuticamente aceptables; ver, e. g. , Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042) páginas 1435-1712 los cuales están aquí incorporados mediante referencia. Una cantidad efectiva de ingrediente activo es una cantidad efectiva terapéuticamente, profilácticamente, o diagnosticalmente, la cual puede ser determinada fácilmente por una persona experta en el arte tomando en consideración tales factores como peso corporal, edad, objetivo terapéutico, profiláctico o diagnóstico, y tasa de liberación deseada.

Las formas particularmente útiles de administrar las formulaciones que contienen IFN-con para distribución sistémica son vía subcutánea, intramuscular, intravenosa, e intranasal. También están contempladas las distribuciones intraventricular e intratecal del IFN-con. Sin tomar en cuenta la manera de administración, la dosis específica es calculada de acuerdo con el peso corporal aproximado del paciente. El refinamiento posterior de los cálculos necesarios para determinar la dosificación apropiada para el tratamiento es llevado a cabo rutinariamente por aquellos con habilidades ordinarias en el arte y está dentro del ámbito de encomiendas llevadas a cabo rutinariamente por aquellos sin la experimentación debida, especialmente a la luz de la información de dosificación y ensayos publicados aquí. Las dosis particularmente útiles de IFN-con en el tratamiento de MS, e.g., estarán en el rango de 6-15 µg administrados subcutáneamente tres veces por semana.

La encefalo ielitis alérgica experimental (EAE) , un modelo murino de una enfermedad desmielinizante inflamatoria autoinmune del CNS, ha sido aceptada comp proporción de un excelente modelo para valorar intervenciones que alteran el curso de MS humana. La EAE se desarrolla en animales inyectados con proteínas de la médula espinal, y también puede ser inducida mediante la transferencia pasiva de clonas de células T hechas reactivas para ciertos antígenos de mielina (e.g. proteína básica de mielina) . El interferón de rata natural parenteral (IV) (105 unidades) puede suprimir parcialmente la EAE aguda en ratas Lewis macho; Abreu et al., Immunol . Común . , 1_1: 1-7 (1982) e inhibir la EAE localizada hiperaguda pasiva cuando se administra en el mismo día de la inoculación inmunógena; Abreu et al., Jnt. Arch. Allergy Appl . Immunol . , 12 : 30-33 (1983). Otras citocinas administradas parenteralmente, como la TGF-ß pueden disminuir la enfermedad clínica y la inflamación en el cerebro y médula espinal en la EAE; Johns et al., J. I munol . , 147: 1792-1796 (1991).

En el Ejemplo 1 proporcionado abajo, se muestra que el IFN-coni es efectivo en la atenuación marcada, de una manera dosis-dependiente de la severidad clínica de la EAE después de la inmunización con CNS (cerdo de guinea) homogeneizado. El Ejemplo 2 demuestra que la combinación de IFN-coni con IL-lra es aún más efectiva en la atenuación de los signos clínicos de la EAE, con las mejoras asociadas a la ganancia de peso que parecen ser sinergistas. Los ejemplos se ofrecen para ilustrar más completamente la invención pero no deben de interpretarse como limitantes del alcance de la misma.

EJEMPLO 1 En este ejemplo, se muestra que el IFN-coni es efectivo en la atenuación marcada, de una manera dosis-dependiente, de la severidad clínica de la EAE después de la inmunización con CNS (cerdo de guinea) homogeneizado.

A. Descripción del Producto El IFN-coni fue producido en E. coli utilizando métodos descritos en Patente U.S. Nos. 4,695,623 y 4,897,471. El IFN-coni fue purificado mediante procedimientos generalmente descritos en Klein et al., supra (1988). Para su administración subcutáne.a en el estudio actual, el IFN-coni fue proporcionado como una solución proteica clara, incolora, estéril libre de partículas y formulada en un amortiguador acuoso antes de sufrir filtración estéril y de llenar los frascos. El IFN-coni recombinante no está menos del 95% puro.

B. Diseño del Modelo Un conjunto de 13 cabayos hembra (175-200 gramos) fueron anestesiadas con 2% de isoflurano + 02 e inmunizadas en el día 0 con 0.5 L de una emulsión que contiene un CNS homogeneizado de cerebro singénico + médula espinal (12 gramos) en 24 mL de fosfato amortiguador salino, 24 mL de adyuvante de Freund que contiene 2.5 mg/mL de M. Tuberculoso H37Ra (Difco Lab, MI) . La emulsión fue inyectada intradérmicamente en 4-5 sitios en la región del cuello de los cabayos.

Todas las inyecciones de IFN-coni y su vehículo fueron aplicadas subcutáneamente y hubo varios regímenes de tratamiento para el IFN-coni: 1) el tratamiento (0.01-0.3 mg/kg) comenzó en el día de la inmunización y se continuó todos los días hasta el día del sacrificio (día 14) ; 2) el tratamiento (0.01-0.3 mg/kg) comenzó el día de la inmunización y continuó cada tercer día hasta el día del sacrificio; 3) el tratamiento (0.3 mg/kg y 0.1 mg/kg) comenzó en el día 4 post-inmunización y continuó diariamente hasta el día de}, sacrificio; y 4) el tratamiento (1 mg/kg) comenzó en el día de la inmunización y continuó en los días 4, 7 y 11 postinmunización.

La evaluación de la enfermedad clínica estuvo basada en un sistema de puntuación standard de 0-5 y fue llevada a cabo todos los días durante un período de 14 días. El espectro de estimación fue: 0, normal; 1, debilidad de miembro posterior; 2, paresis en los 2 miembros posteriores o parálisis en 1 miembro posterior; 3, parálisis en ambos miembros posteriores; 4, moribundo; y -5, muerte. Los cabayos que sobrevivieron fueron sacrificados en el día 14 y su cerebro y médula espinal removidos por análisis histológico. El marcador clínico integrado para cada cabayo durante el curso total de la enfermedad fue calculado como el área bajo la curva de los marcadores clínicos diarios contra tiempo (unidades arbitrarias) . Los valores de los grupos tratados fueron comparados estadísticamente contra aquellos del grupo control vehículo usando la prueba Mann-Whitney.

C. Resultados El procedimiento de inmunización produjo signos clínicos empezando en el día 8-10. En general, la severidad de los signos clínicos incrementó con el tiempo. Todos los animales inyectados con el vehículo murieron alrededor del día 11 post-inmunización.

Como se representa en la Figura 1, IFN-coni (0.01-0.3 mg/kg s.c.) redujo ( p < 0.05; p < 0.01) significativamente los signos clínicos de una manera dosis-dependiente. Este efecto dosis-dependiente fue también observado con el régimen de dosificación de cada tercer día (Figura 2). El IFN-coni (0.3 y 0.1 mg/kg s.c.) dosificado diariamente comenzando en el día 4 postinmunización atenuó (p < 0.01) significativamente la severidad clínica por 87% y 75%, respectivamente (Figura 3). El IFN-coni (1 mg/kg s.c.) aplicado en los días 0, 4, 7 y 11 post-inmunízación atenuó (p < 0.002) significativamente la severidad clínica por 80% (Figura 4) . Finalmente, el examen inicial de los animales tratados con IFN-coni mostró que el tejido de la médula espinal tuvo una disminución en el número de células inflamatorias dentro del CNS como se comparó a animales tratados con vehículo.

EJEMPLO 2 En este ejemplo, se muestra que la combinación de terapia involucrando IFN-coni e IL-lra es efectiva en la atenuación marcada de la severidad clínica de EAE después de la inmunización con CNS homogeneizado cbayos.

Ademas, parece que la perdida de peso causada por el tratamiento con IFN-coni puede ser disminuido por co-administración con IL-lra.

A. Descripciones del Producto.

El IFN-coni fue producido como se describe en el Ejemplo 1 arriba. El IL-lra fue producida en E^ coli usando métodos tales como aquellos descritos en e.g., Patente US No. 5,075,222. Para la administración subcutánea en el actual estudio, el IL-lra fue suministrado como solución proteica estéril libre de partículas, clara,' incolora y formulada en un amortiguador acuoso antes de someterlo a filtración estéril y de llenar los frascos. El IL-lra recombinante está a no menos del 95% puro.

B. Diseño del Modelo F '-•< «. z r Un conjunto de 13 cerdos— e .'-guisea hembra (175-200 gramos) fueron anestesiadas con 2% de isoflurano + 02 e inmunizadas en el día 0 con 0.5 mL de una emulsión que contiene un CNS homogeneizado de cerebro singénico + médula espinal (12 gramos) en 24 mL de fosfato amortiguador salino, 24 L de adyuvante de Freund que contiene 2.5 mg/mL de M. Tuberculoso H37Ra (Difco Lab, MI) . La emulsión fue inyectada intradér icamente en 4-5 sitios en la región del cuello ,de los cábayos.

Todas las inyecciones de IFN-coni, vehículo, o IL-lra fueron aplicadas subcutáneamente y ahí fueron utilizados tres regímenes de tratamiento: 1) el IL-lra a 100 mg/kg o 10 mg/kg s.c. tres veces al día comenzando en el día 0 contra IFN-coni a 0.03 mg/kg aplicado una vez al día; 2) la combinación de IL-lra (100 mg/kg s.c. 3 veces/día) + IFN-coni (0*.03 mg/kg s.c. 1 vez/día) e IL-lra (10 mg/kg s.c. 3 veces/día) + IFN-coni (0.03 mg/kg s.c. 1 vez/día). El tratamiento (0.01-0.3 mg/kg comenzó en el día de la inmunización y continuó todos los días hasta el día del sacrificio (día 14) . La evaluación de la enfermedad clínica fue realizada como se describió en "el Ejemplo 1 arriba.

C. Resultados Como se describió en el • Ejemplo 1 arriba, el procedimiento de inmunización produjo signos clínicos comenzando en el día 8-10. En general, la severidad de los signos clínicos incrementó con el tiempo. Todos los animales inyectados con el vehículo murieron alrededor del día 11 post-inmunización.

Como se representa en la Figura 5, el IL-lra a lOOmg/kg o 10 mg/kg s.c. tres veces al día comenzando en el día 0 atenuó los signos clínicos por 53% y 49% respectivamente, como se compara al 30% de atenuación observada con administración de IFN-coni (0.03 mg/kg s.c. 1 vez diariamente) . La combinación de IL-lra (100 mg/kg s.c. 3 veces diariamente + IFN-coni (0.03 mg/kg s.c. 1 vez diariamente) o IL-lra (10 mg/kg s.c. 3 veces al día + IFN-coni (0.03 mg/kg s.c. 1 vez diariamente) atenuó los signos clínicos por 73% y 84% respectivamente (Figura 6) . Además, las combinaciones mejoraron significativamente la ganancia de peso en los animales a comparación con los animales tratados con vehículo (Figura 7) .

Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Un método para la prevención o tratamiento de la esclerosis múltiple caracterizado porque comprende la administración a un paciente con necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente efectiva de interferón consenso.

2. Un método acorde con la Reivindicación 1, caracterizado porque dicho interferón consenso está seleccionado de un grupo consistente de IFN-coni, IFN-con2, e IFN-con3.

3. Un método acorde con la Reivindicación 2, caracterizado porque dicho interferón consenso es IFN-coni.

. Un método acorde con la Reivindicación 1 caracterizado porque dicho interferón consenso es un producto de expresión procariótica de una secuencia de ADN exógeno.

5. Un método acorde con la Reivindicación 1 caracterizado porque dicho interferón consenso es administrado en un portador farmacéuticamente aceptable.

6. Un método acorde con la Reivindicación 1, caracterizado porque la cantidad terapéuticamente efectiva es administrada oralmente, intravenosamente, intramuscularmente, subcutáneamente, intranasalmente, intraventricularmente, intratecalmente, o intralesionalmente.

7. Un método acorde con la Reivindicación 1, caracterizado porque la cantidad de interferón consenso terapéuticamente efectiva es 6-15 Dg administrados subcutáneamente 3 veces a la semana.

8. Un método acorde con la Reivindicación 1 comprende además de la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de otro agente activo seleccionado de un grupo consistente de péptidos, pequeñas moléculas y proteínas, caracterizado porque el interferón consenso y el agente activo son administrados separadamente o en combinación.

9. Un método acorde con la Reivindicación 8 caracterizado porque dicho agente activo es una proteína.

10. Un método acorde con la Reivindicación 9 caracterizado porque dicha proteína es un antagonista del receptor de la interleucina-1 (IL-lra) .

11. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el interferón consenso y otro agente activo.

12. La composición farmacéutica de la Reivindicación 11 caracterizada porque el agente activo es IL-lra.

13. Un uso del interferón consenso en la preparación de un medicamento, el cual está caracterizado para el tratamiento de esclerosis múltiple en un mamífero.