MX2015004980A

MX2015004980A - Materiales reactivos y elementos de prueba asociados.

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Publication number: MX2015004980A
Application number: MX2015004980A
Authority: MX
Inventors: Christopher D Wilsey
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2012-11-02
Filing date: 2013-10-31
Publication date: 2015-07-17
Also published as: CN108845132A; KR101730281B1; WO2014068022A1; EP2914735B1; US9416397B2; ES2707872T3; CN108841913A; RU2015120693A; US8921061B2; MX359319B; SG11201503344SA; AU2013340841B2; JP2017104101A; JP6280127B2; CA2886162A1; CN104736717A; AU2013340841A1; CA2886162C; CN108802397A; EP2914735A1

Abstract

Se proporcionan materiales reactivos y elementos de prueba asociados. En una modalidad, un elemento de prueba que tiene una doble funcionalidad incluye una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima, una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I). En un aspecto, el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa, y el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. Otros aspectos de la presente solicitud se dirigen a materiales reactivos únicos. Otras modalidades, formas, objetos, características, ventajas, aspectos y beneficios se harán evidentes de la descripción y las Figuras.

Description

MATERIALES REACTIVOS Y ELEMENTOS DE PRUEBA ASOCIADOS Antecedentes de la Invención El uso de elementos de prueba desechables se ha vuelto común para medir la presencia y/o concentración de analitos seleccionados en muestras de prueba. Por ejemplo, los pacientes que sufren de diabetes y afecciones médicas similares a menudo se involucran en el automonitoreo de la glucosa en la sangre en donde el paciente controla sus niveles de glucosa en sangre. El propósito de monitorear los niveles de glucosa en sangre es determinar el nivel de concentración y si es necesario tomar medidas correctivas si el nivel es demasiado alto o demasiado bajo con el fin de llevar el nivel de regreso dentro de un intervalo aceptable. La falta de tomar acción correctiva puede tener consecuencias médicas graves. El monitoreo de glucosa es un hecho de la vida cotidiana de los individuos diabéticos, y la exactitud del monitoreo, literalmente, puede significar la diferencia entre la vida y la muerte. El no mantener la glucosa en sangre en niveles aceptables de forma regular puede dar lugar a complicaciones graves relacionadas con la diabetes, incluyendo enfermedad cardiovascular, enfermedad renal, daño de los nervios y ceguera.

Las personas con diabetes que controlan intensamente su azúcar en sangre experimentan beneficios de larga duración. El Ref.255627 ensayo para el Control de la Diabetes y Complicaciones (DCCT, por sus siglas en inglés) fue un estudio clínico llevado a cabo desde 1983 hasta 1993 por el Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (NIDDK, por sus siglas en inglés). El DCCT comparó tratamientos intensivos a los convencionales. Los pacientes en tratamiento intensivo mantienen los niveles de glucosa lo más cerca posible de lo normal con por lo menos tres inyecciones de insulina al día o una bomba de insulina, y el automonitoreo frecuente de los niveles de glucosa en sangre. El tratamiento intensivo dirigido a mantener la hemoglobina Ale (HbAlc), que refleja la glucosa promedio en la sangre durante un período de 2 a 3 meses, lo más cerca posible de lo normal. El tratamiento convencional consiste en una o dos inyecciones de insulina al día con pruebas de glucosa en la orina o sangre una vez al día. Los resultados del estudio DCCT mostró que mantener los niveles de glucosa en la sangre lo más cerca posible de lo normal retrasa el inicio y la progresión de enfermedades de los ojos, riñones y nervios causadas por diabetes. De hecho, se ha demostrado que cualquier reducción sostenida de glucosa en la sangre ayuda, incluso si la persona tiene antecedentes de poco control.

Un número de instrumentos analíticos o biosensores, como medidores de glucosa, están actualmente disponibles, que permiten a un individuo probar el nivel de glucosa en una pequeña muestra de sangre. Muchos de los diseños de medidores disponibles actualmente de un elemento de prueba desechable que, en combinación con el medidor, mide la cantidad de glucosa en la muestra de sangre electroquímicamente u ópticamente. En los medidores de glucosa actuales, la información que aparece como consecuencia de una medición exitosa de glucosa en sangre es el valor respectivo de glucosa en sangre, típicamente se muestra en unidades de mg/dL o mmol, y tal vez la hora y la fecha en que se realiza la medición. Esta información, en combinación con el cálculo de la ingesta de carbohidratos planeada y/o conocida o actividades planeadas o conocidas y el conocimiento de otros factores de la situación o individuales, es en la mayoría de los casos suficiente para permitir que los diabéticos ajusten o deriven su ingesta dietética y/o para inyectar una dosis inmediata de insulina para controlar el nivel de glucosa en sangre en el corto plazo. También, en caso de valores bajos de glucosa, los diabéticos pueden detectar la necesidad de ingesta de azúcar para evitar hipoglucemia.

Una ausencia o cantidad insuficiente de insulina impide que el cuerpo utilice glucosa como fuente de combustible para producir energía. Cuando esto ocurre, el cuerpo produce energía descomponiendo los ácidos grasos, lo que resulta en subproductos de cetonas, y aumento de los niveles de cetona.

Los niveles de cetonas incrementados en los diabéticos también pueden ser causados por un ataque al corazón, accidente cerebrovascular, el uso de drogas recreativas o una enfermedad intercurrente, tal como neumonía, influenza, gastroenteritis, o una infección urológica. Niveles de cetona excesivos en los diabéticos conducen a un episodio de cetoacidosis diabética (DKA, por sus siglas en inglés), una emergencia médica que puede causar la muerte si no se trata. Los síntomas de DKA incluyen náuseas, vómitos, sed excesiva y producción de orina, dolor abdominal, dificultad para respirar, fatiga y coma, entre otros. Dada la gravedad de la DKA, es deseable administrar el tratamiento para reducir los niveles de cetona antes de la aparición de un episodio completo de DKA. Además, puesto que los síntomas relacionados con un episodio de cetoacidosis diabética pueden no presentarse hasta que el episodio de DKA ha iniciado o los niveles de cetona son de otra manera indeseablemente altos, se prefiere generalmente que el tratamiento de reducción de cetona no comience como una respuesta a estos síntomas.

La prevención de los episodios de DKA se puede lograr mediante la medición de los niveles de cetona y buscar atención médica si se elevan por arriba de una cierta concentración. Los análisis de orina pueden ser utilizados para determinar los niveles de cetona. La página web de la ADA recomienda que los niveles de cetona deben ser revisados cada 4-6 horas cuando un diabético tiene una enfermedad (tal como un resfriado o gripe), o cuando su glucosa en sangre es superior a 240 mg/dl. (Ver http://www.diabetes.org/living-with-diabetes/complications/ketoacidosis-dka.html). Sin embargo, para los diabéticos quienes realizan múltiples pruebas de glucosa en la sangre por día, realizando pruebas de orina separadas, además de sus pruebas de glucosa en la sangre es lento y engorroso.

Al tener una doble prueba para medir los niveles de glucosa y cetona en la misma tira reactiva, un diabético está mejor capacitado para cumplir con las recomendaciones de pruebas y el tratamiento más seguro mediante la detección temprana de altos niveles de cetona. Por ejemplo, se recomienda evitar el ejercicio cuando cetona y glucosa en la sangre son altas debido a que los niveles elevados de estos analitos pueden ser indicativos de que el manejo de la diabetes no es satisfactorio. Sin embargo, la mayoría de los diabéticos no tienen pruebas de cetonas fácilmente disponibles para las pruebas, y con frecuencia no tienen información disponible para saber cómo manejar este tipo de situaciones.

El uso de pruebas de orina separadas para determinar los niveles de cetona también requiere suministros de diagnóstico adicionales y sus gastos correspondientes, y hace que sea difícil correlacionar niveles de glucosa en sangre y cetona. También es posible determinar los niveles de cetona de muestras de sangre. Cuando se utilizan muestras de sangre, los niveles de cetonas son comúnmente determinados por la medición de la concentración de hidroxibutirato, que es la cetona predominante en la sangre. Concentraciones de hidroxibutirato inferiores a 0.6 mM en sangre se considera normal, mientras que las concentraciones hidroxibutirato que están entre 0.6 mM y 1.5 mM indican que un problema puede desarrollarse y mayor que 1.5 mM indica un riesgo para el desarrollo de DKA. Concentraciones de hidroxibutirato superiores a 3 mm en sangre son indicativos de DKA y requieren tratamiento médico de emergencia.

Las téenicas actuales para determinar los niveles de cetona en sangre involucran elementos de prueba de una sola función que son apropiados para la detección de concentraciones de hidroxibutirato por ejemplo. Al igual que la prueba de orina descrita anteriormente, sin embargo, los diabéticos que realizan una magnitud relativamente alta de pruebas de glucosa en la sangre por día puede consumir tiempo y ser oneroso realizar análisis de nivel de sangre y cetonas separados, además de sus pruebas de glucosa en sangre, particularmente puesto que los análisis de cetonas en sangre actuales son más lentos que el estado del arte previo que las pruebas de glucosa en la sangre. Análisis de sangre del nivel de cetona que se realizan independiente de pruebas de glucosa en la sangre también requieren suministros de diagnóstico adicionales y gastos adicionales correspondientes con el mismo deben ser efectuados. Por otra parte, la modalidad de pruebas separadas para la determinación de glucosa en sangre y los niveles de cetona en sangre hace difícil correlacionar los valores de glucosa en sangre y de cetona en sangre medidos.

Otras téenicas para la determinación de los niveles de cetona en sangre involucran elementos de prueba apropiados para detectar los niveles de glucosa en la sangre y de cetonas en la sangre. En estos elementos de prueba actuales sin embargo, los niveles de glucosa en la sangre se miden con mayor rapidez que los niveles de cetona en la sangre, de manera que los resultados de prueba de cetona en sangre se retrasan y se proporcionan después de los resultados de la prueba de glucosa en la sangre. Alternativamente, los resultados de ambas pruebas de glucosa en la sangre y de cetonas en la sangre no se proporcionan hasta que se completa la segunda prueba de cetona en sangre. En cualquier caso, la espera de los resultados de una o ambas pruebas hasta que la prueba de cetona en la sangre se completa puede llegar a ser bastante lenta y onerosa para un diabético que realiza una magnitud de pruebas relativamente alta cada día, sobre todo si se considera que en algunos casos la prueba de cetona en sangre puede tomar casi el doble de tiempo para completarse que la prueba de glucosa en la sangre. Por otra parte, cuando los resultados de las pruebas de glucosa en sangre se ofrecen antes y separadas del resto de los resultados de cetona en sangre, se plantea una posibilidad para que un usuario suspenda las pruebas antes de que la prueba de cetona en sangre se ha completado y/o desviar la atención en otro lugar después de que se proporcionan los resultados de la prueba de glucosa en sangre, pero antes de que los resultados de la prueba de cetona en sangre se han considerado apropiadamente.

Dadas las ramificaciones de un registro preciso, el reporte y análisis de las mediciones de cetona en sangre, además de mediciones de glucosa en la sangre, se desean mejoras en las téenicas, procedimientos y equipo para pruebas de niveles de cetona en la sangre y/o los niveles de cetona en sangre y glucosa en la sangre.

Sumario de la Invención Se proporcionan materiales reactivos y elementos de prueba asociados. En una modalidad, un elemento de prueba que tiene una doble funcionalidad incluye una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima, una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) (definido más adelante). En un aspecto, el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa, y el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. Otros aspectos de la solicitud objeto se dirige a materiales reactivos únicos.

En una modalidad, un elemento de prueba configurado para determinar los primero y segundo analitos incluyen una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima y una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima. El elemento de prueba también incluye una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O u S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN (R) 2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo-?1-?2, Xi, c2 en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3J C(CH3)2, NH, O NCH3 Y = NH, S, O, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, CI, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente forma reducida de la misma.

En una forma de esta modalidad, el primer analito es hidroxibut irato y la primera enzima es una hidroxibut irato deshidrogenasa . En un aspecto de esta forma, el hidroxibut irato deshidrogenasa es 3-hidroxibut irato deshidrogenasa. En otro aspecto de esta forma, la segunda enzima es una deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbitol deshidrogenasa, y una aminoácido deshidrogenasa que comprende L-aminoácido deshidrogenasa. En todavía otro aspecto de esta forma, el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. En un aspecto adicional, la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = CON (R)2 en donde R significa H, Xi = 0, x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) · en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5 ' = CHOH, R5" = CHOH, R5 = CR42 / R6 = CH , y R6 ' = CH .

En aún otro aspecto adicional, la conezima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) (II) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5" = CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6 ' = CH.

En aún otro aspecto adicional, la coenzima es tio-NAD. En otro aspecto adicional, la coenzima es tio-NADP.

En una forma adicional de esta modalidad, el elemento de prueba incluye un primer material reactivo que incluye la primera enzima o el sustrato para la primera enzima, y la coenzima es seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En un aspecto de esta forma, el elemento de prueba también incluye un segundo material reactivo que incluye la segunda enzima o el sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de los mismos. En un aspecto adicional, el elemento de prueba incluye una tira de prueba configurada para portar los primero y segundo materiales reactivos. En aún otro aspecto adicional, la tira de prueba incluye un primer sistema de electrodos asociado con el primer material reactivo y un segundo sistema de electrodos asociado con el segundo material reactivo. En otro aspecto de esta forma, el primer material reactivo incluye, además, uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio.

En otra modalidad, un material reactivo incluye 3-hidroxibutirato deshidrogenasa y un compuesto de coenzima de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente 0 o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, C0N(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo ?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, O NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En una forma de esta modalidad, el compuesto de coenzima es de acuerdo con la fórmula (I) en donde A adenina T = en cada caso significa 0, U = en cada caso significa OH, V en cada caso significa OH, W = CON(R)2 en donde R significa H, Xi= O X2 = 0, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico saturado de 5 miembros de la fórmula general (II) (P) en la que un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH.

En otra forma de esta modalidad, el compuesto de coenzima es de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico saturado de ! miembros de la fórmula general (II) (P) en la que un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5'= CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH.

En una forma adicional, el material reactivo incluye además uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio.

En otra forma de esta modalidad, un elemento de prueba incluye una tira de prueba que porta el material reactivo para determinar un primer analito. En un aspecto de esta forma, la tira de prueba porta además un segundo material reactivo para la determinación de un segundo analito. En un aspecto adicional, el segundo material reactivo incluye una enzima deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbitol deshidrogenasa, y una aminoácido deshidrogenasa que comprende L-aminoácido deshidrogenasa. En aún otro aspecto adicional, el segundo material reactivo incluye una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, C0N(R)2, COR, O CSN (R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo-?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significativamente independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, o NCH3, Y = NH, S, O, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, C1, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

En aún otro aspecto adicional, la tira de prueba está configurada para la determinación electroquímica de los primero y segundo analitos.

En todavía otra modalidad, un método para determinar los primero y segundo analitos en una muestra incluye proporcionar un elemento de prueba configurado para determinar los primero y segundo analitos y que incluye una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima, una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en la cual A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O u S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN (R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo ?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C (CH3)2 NH, O NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo de piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma; en contacto con el elemento de prueba con la muestra; detectar el primer analito; y detectar el segundo analito.

En una forma de esta modalidad, el primer analito es hidroxibutirato y el segundo analito es glucosa. En un aspecto de esta forma, los pasos de detectar el primer analito y detectar el segundo analito se realizan simultáneamente. En otro aspecto de esta forma, los pasos de la detección del primer analito y la detección del segundo analito se completan dentro de cinco segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra.

En todavía otra modalidad, un método incluye los pasos de proporcionar un elemento de prueba configurado para determinar los valores de glucosa y cetona en una muestra; poner en contacto el elemento de prueba con la muestra; y determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra dentro de 7.5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra. En una forma, el elemento de prueba incluye un primer material reactivo para determinar el valor de glucosa y un segundo material reactivo para determinar el valor de cetona. En un aspecto de esta forma, el segundo material reactivo incluye una hidroxibutirato deshidrogenasa. En otra forma, el paso de determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra se completa dentro de 5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra. En aún otra forma, los valores de glucosa y cetona se determinan dentro de 2 segundos uno del otro durante el paso de determinación. En aún otra forma, la muestra comprende sangre.

En una forma de este método, el elemento de prueba incluye una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima y una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima. El elemento de prueba también incluye una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2~, V en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo C1-C2, Xi, X2 = en cada caso representan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, O NCH3 Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En un aspecto, el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa. En un aspecto adicional, la hidroxibutirato deshidrogenasa es 3-hidroxibutirato deshidrogenasa. En un aspecto adicional, la segunda es una enzima deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbítol deshidrogenasa, y una aminoácido deshidrogenasa que comprende L-aminoácido deshidrogenasa. En aún otro aspecto, el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. En un aspecto adicional, la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = CON (R)2 en donde R significa H, Xi = 0, x = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general ( II] (ID en la que un enlace está presente entre R5' y R5", y en la que R4 = H, R5' = CHOH, .R5" = CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH.

En aún otro aspecto adicional, la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = 0, x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) (II) en la que un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 H R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH.

En un aspecto adicional, el elemento de prueba incluye un primer material reactivo que incluye la primera enzima o el sustrato para la primera enzima, y la coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En un aspecto adicional, el elemento de prueba también incluye un segundo material reactivo que incluye la segunda enzima o el sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En un aspecto adicional, el elemento de prueba incluye una tira de prueba configurada para portar los primero y segundo materiales reactivos. En aún otro aspecto adicional, la tira de prueba incluye un primer sistema de electrodos asociado con el primer material reactivo y un segundo sistema de electrodos asociado con el segundo material reactivo. En otro aspecto, el primer material reactivo incluye además uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaminarutenio.

Otro aspecto de la presente solicitud es una téenica única para medir la presencia y/o concentración de múltiples analitos en muestras de prueba. Otros aspectos incluyen métodos únicos, sistemas, dispositivos, kits, ensambles, equipo y/o aparatos relacionados con la detección de analito en una muestra.

Aspectos adicionales, modalidades, formas, características, beneficios, objetos y ventajas serán evidentes de la descripción detallada y figuras proporcionadas aquí.

Breve Descripción de las Figuras La FIG. 1 es una vista en perspectiva de una primera modalidad del elemento de prueba.

La FIG. 2 es una vista en perspectiva en despiece de varias características del elemento de prueba de la Figura 1.

La FIG.3 es una vista en perspectiva en despiece de una segunda modalidad del elemento de prueba.

La FIG. 4 es una vista fragmentaria en sección del elemento de prueba de la Figura 3.

La FIG. 5 es una ilustración esquemática de un instrumento analítico estructurado para su uso con el elemento de prueba de la Figura 1.

Las Figs. 6-18 son ilustraciones gráficas de respuestas de hidroxibutirato determinadas con varios materiales reactivos.

Descripción Detallada de la Invención Para los propósitos de promover una comprensión de los principios de la invención, ahora se hará referencia a las modalidades ilustradas en las Figuras y un lenguaje específico será usado para describir el mismo. No obstante, se entenderá que ninguna limitación del alcance de la invención se pretende con ello, tales alteraciones y modificaciones adicionales en el dispositivo ilustrado, y tales aplicaciones adicionales de los principios de la invención tal como es aquí contemplado que se le ocurrirían normalmente a una persona experimentada en la téenica a la que se refiere la invención.

Se proporcionan materiales reactivos y elementos de prueba asociados. En una modalidad, un elemento de prueba de función dual incluye una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima, una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima, y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I). En un aspecto, el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa, y el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. En otra modalidad, el elemento de prueba es parte de un sistema que también incluye un medidor configurado para interactuar con el elemento de prueba para evaluar los primero y segundo analitos en una muestra. Esta evaluación puede variar de la detección de la presencia de los primero y segundo analitos para determinar la concentración de los primero y segundo analitos. Los primero y segundo analitos y el fluido de muestra pueden ser cualquiera para los que el sistema de prueba es apropiado, aunque de una forma particular, pero no limitante, el primer analito es hidroxibutirato, el segundo analito es glucosa, y el fluido de muestra es sangre o fluido intersticial. Otros aspectos de la presente solicitud se dirigen a materiales reactivos únicos. Otros aspectos y características de la presente solicitud se describen con respecto a las modalidades ilustradas de la siguiente manera.

Con referencia a las figuras 1 y 2, a continuación se proporcionan detalles adicionales de un elemento de prueba 10 configurado para evaluar los primero y segundo analitos en una muestra. El elemento de prueba 10 se proporciona como un sensor electroquímico que incluye una cámara de recepción de muestra para el fluido de muestra, y los primero y segundo materiales reactivos para producir señales electroquímicas en la presencia de los primero y segundo analitos. En la forma ilustrada, el elemento de prueba 10 se extiende entre un extremo de inserción de medidor 12 y un extremo de dosificación 14. En una forma no ilustrada, la forma de extremo de dosificación 14 puede ser distinguible del extremo de inserción de medidor 12 con el fin de ayudar a los usuarios en el manejo y uso apropiado del elemento de prueba 10. El elemento de prueba 10 también puede incluir uno o más gráficos (no se muestran) para proporcionar una guía de usuario en el manejo y uso apropiado.

El elemento de prueba 10 se proporciona en la forma de una tira de prueba desechable que tiene una construcción laminar que incluye un substrato base 16, una capa de separación 18, una cubierta de cuerpo 20 y una cubierta de cámara 22. Detalles adicionales de los elementos de prueba que incluyen una construcción laminar similar se proporcionan en la Patente Estadounidense No 7,727,467, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia en su totalidad. La capa separadora 18 incluye una porción de vacío 24 para proporcionar una cámara de recepción de muestra 26 que se extiende entre el sustrato base 16 y la cubierta del cuerpo 20 y la cubierta de cámara 22. En esta configuración, la cámara de recepción de muestra 26 se abre el extremo de dosificación 14 del elemento de prueba 10 a través de una abertura 28 que está configurada para facilitar el paso de un fluido muestra en la cámara de recepción de muestra 26. Las formas en las que la cámara de recepción de muestra 26 se abre a través de una abertura situada a lo largo de un lado del elemento de prueba 10 también se contemplan. Las formas en las que la cámara de recepción de muestra 26 se abre a través de una abertura situada a lo largo de toda la longitud del extremo de dosificación 14 y que incluye una parte de los lados también se contemplan.

La cubierta de cuerpo 20 y la cubierta de cámara 22 cubren la capa de separación 18 y definen una ranura 30 entre las mismas lo que proporciona una abertura de ventilación que se comunica con la cámara de recepción de muestra 26 para permitir que el aire escape de la cámara de recepción de muestra 26 mientras un fluido de muestra entra en la cámara de recepción de muestra 26 a través de la abertura 28. La ranura 30 se encuentra en una posición relativa a la cámara de recepción de muestra 26 que es interior de la ubicación de los sistemas de electrodos (descritos a continuación) colocados en la cámara de recepción de muestra 26. El fluido de muestra que entra en la cámara de recepción de muestra 26 progresará alejado de la abertura de ventilación, pero no más lejos. Cuando se ve desde la parte superior, la ranura proporciona una indicación visual de una "línea llena" para confirmar que los sistemas de electrodos en la cámara de recepción de muestra 26 han sido correctamente mojados o cubiertos para funcionar correctamente. Adicionalmente o alternativamente, los electrodos de suficiencia de dosis también pueden ser posicionados adyacentes a la ranura 30 para detectar cuando el fluido de muestra ha progresado a la ranura 30 para asegurar que se ha producido la humectación de los electrodos de medición.

Aparte de los sistemas de electrodos y los materiales reactivos, la cámara de recepción de muestra 26 puede estar vacía o alternativamente puede incluir un material absorbente. Materiales absorbentes apropiados incluyen poliéster, nilón, celulosa y derivados de celulosa tales como nitrocelulosa. Cuando se incluye, un material absorbente ayuda a facilitar la absorción de fluido muestra, ayudando a dispersar el fluido en la cámara de recepción de muestra 26. El uso de un material absorbente también serviría para reducir adicionalmente el volumen vacío de la cámara de recepción de la muestra 26 para la recepción del fluido muestra. En una forma, el llenado de la cámara de recepción de muestra 26 se produce por acción capilar. El llenado de la cámara de recepción de muestra 26 también se puede aumentar por otros medios, tales como mediante la aplicación de una presión sobre el fluido de muestra empujándolo dentro de la cámara de recepción de muestra 26, y/o la creación de un vacío sobre la cámara de recepción de muestra 26 para empujar el fluido de muestra dentro de la cámara de recepción de muestra 26. Además, una o más superficies de la cámara de recepción de muestra 26 pueden formarse a partir de un material hidrofílico, provisto con un recubrimiento de un material hidrofílico, o sometido a un tratamiento de aumento de hidrofilicidad con el fin de facilitar el llenado de la cámara de recepción de muestra 26 con la muestra de prueba.

Elemento de prueba 10 está configurado para detectar la presencia de, y/o medir la concentración de, los primero y segundo analitos por medio de reacciones de oxidación y reducción electroquímica. Estas reacciones se traducen a una señal eléctrica que se puede correlacionar con una cantidad o concentración del analito. Como se muestra en la Figura 2, en donde se ilustran solamente algunas de las características del elemento de prueba 10, el sustrato 16 porta un primer sistema de electrodos 32 que incluye una pluralidad de electrodos 34 y restos de electrodos 36 que terminan en almohadillas de contacto 38. Los electrodos 34 se definen como aquellas porciones de restos de electrodos 36 que están situados dentro de la cámara de recepción de muestra 26. El sustrato 16 también porta un segundo sistema de electrodos 46 que incluye una pluralidad de electrodos 48 y restos de electrodos 50 que termina en almohadillas de contacto 52. Los electrodos 48 se definen como aquellas porciones de restos de electrodos 50 que se colocan dentro de la cámara de recepción de muestra 26. Se debe entender que las configuraciones ilustradas de sistemas de electrodos 32, 46 no son limitantes, y que se contemplan configuraciones alternativas.

El elemento de prueba 10 también incluye un primer material reactivo 60 que recubre por lo menos una parte de los electrodos 34 del primer sistema de electrodos 32 dentro de la cámara de recepción de muestra 26, y un segundo material reactivo 62 que recubre por lo menos una parte de los electrodos 48 del segundo sistema de electrodos 46 dentro de la cámara de recepción de muestra 26. Los primero y segundo materiales reactivos 60, 62 son apropiados para producir señales electroquímicas en la presencia de los respectivos primero y segundo analitos de prueba, y están dispuestos dentro de la cámara de recepción de muestra 26 en posición para proporcionar la señal electroquímica a los electrodos 34, 48 en la cámara de recepción de muestra 26. En la forma ilustrada, un espacio 64 se extiende entre los primero y segundo materiales reactivos 60, 62, aunque las formas en las que el espacio 64 está ausente y los primero y segundo materiales reactivos forman una capa continua sobre los electrodos 34, 48 también se contemplan. Más detalles acerca de los primero y segundo materiales reactivos 60, 62 se proporcionarán más adelante.

Los electrodos 34 del primer sistema de electrodos 32 incluyen un conjunto de electrodos de medición en la forma de electrodo de trabajo 40 y el contraelectrodo 42 que incluye las porciones 44a y 44b separadas en lados opuestos del electrodo de trabajo 40. Como se utiliza aquí, un "electrodo de trabajo" es un electrodo en el que un analito es electrooxidado o electroreducido con o sin la intervención de un mediador redox, mientras que el término "contraelectrodo" se refiere a un electrodo que se empareja con el electrodo de trabajo y a través del cual pasa una corriente electroquímica igual en magnitud y opuesta en signo a la corriente que pasa a través del electrodo de trabajo. El término "contraelectrodo" se pretende que incluya contraelectrodos que funcionan también como electrodos de referencia (en este caso contraelectrodos/referencia). Los electrodos 48 del segundo sistema de electrodos 46 incluyen un conjunto de electrodos de medición en la forma de electrodo de trabajo 54 y el contraelectrodo 56 que incluye porciones 58a y 58b separadas en lados opuestos del electrodo de trabajo 54. En esta disposición, la cámara de recepción de muestra 26 está configurada de tal manera que fluido muestra que entra en la cámara de recepción de muestra 26 se coloca en contacto electrolítico con electrodos de trabajo 40 y 54 y contraelectrodos 42 y 56. Esta disposición también permite que la corriente eléctrica fluya entre los electrodos de medición para afectar a la electrooxidación o electrorreducción de los primero y segundo analitos. Debe ser apreciado sin embargo que lo anterior es sólo una de una serie de configuraciones para los electrodos de medición.

Un elemento de prueba de la modalidad alternativa 110 para evaluar los primero y segundo analitos en una muestra se ilustra en las Figs. 3 y 4. El elemento de prueba 110 se produce utilizando una téenica de fabricación cabeza a cabeza. Más detalles de esta técnica, y del elemento de prueba 110 generalmente, se encuentran en la Publicación de Patente Internacional No WO 2012/003306, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Como se ilustra en la Figura 3, los patrones de electrodos 112 están dispuestos en dos columnas (un conjunto de patrones de electrodos en la columna A y un conjunto en la columna B) sobre una capa alargada (cinta) de un sustrato 114. El elemento de prueba 110 también incluye patrones de electrodos de la cámara muestra 116 situados cerca entre sí y cerca del centro del sustrato 114 y almohadillas de contacto 118 separadas unas de otras y situadas cerca de los bordes opuestos del sustrato 114. En la forma ilustrada, los patrones de electrodos son todos similares; sin embargo, en formas alternativas por lo menos algunos de los patrones de electrodo puede ser diferentes de otros patrones de electrodos. Un primer material reactivo 120 se aplica sobre los electrodos de cámara de muestra 116 en la columna A y un segundo material reactivo 122 se aplica sobre los electrodos de la cámara de muestra 116 en la columna B.

Una capa separadora 124 está unida a la parte superior del sustrato 114 con una capa adhesiva 126. En la forma ilustrada, una tira o cinta alargada forma la capa separadora 124 para cubrir los patrones de electrodos de ambas columnas A y B, aunque las formas en las que dos tiras separadas de capa separadora 124 se unen individualmente al sustrato 114 en la columna A y la columna B y se alinearon a lo largo de la línea central 128 también son posibles. La capa separadora 124 incluye una pluralidad de porciones recortadas 130 dispuestas a lo largo de la línea central 128. Cuando la capa separadora 124 se ensambla con el sustrato 114, las porciones recortadas 130 formarán los perímetros de las cámaras de muestra 132 (Fig. 4). Una sola capa de sustrato superior continua 134 está unida a la parte superior de la capa separadora 124 con una capa adhesiva 136 e incluye una pluralidad de aberturas de ventilación 142, 144 para facilitar la ventilación de las cámaras de muestra 132, puesto que están llenas con un fluido de muestra. Aunque no se discutió previamente, se debe apreciar que las capas adhesivas 126, 136 incluyen una pluralidad de porciones recortadas 138, 140, respectivamente, dispuestas a lo largo de la línea central 128 y que corresponden a porciones de recorte 130 de la capa separadora 124. Alternativamente, se contempla que la capa adhesiva 136 puede ser una capa sólida sin ningún tipo de aberturas o recortes.

Después del sustrato 114, los materiales reactivos 120, 122, la capa separadora 124 y el sustrato superior 134 se combinan y se laminan juntos, la hoja o rollo se separa de tal manera que los patrones de electrodos 116 en las columnas A y B permanecen unidos uno a otro mientras que las tiras de prueba en filas adyacentes (tiras de prueba orientadas de lado a lado) están separadas. En otras palabras, las tiras de prueba en la columna A no se separan completamente de las tiras de prueba en la columna B, y los pares de tiras reactivas se forman con cada par de tiras de prueba dispuestas en una forma de cabeza a cabeza. Cada par de tiras de prueba pueden ser dobladas para colocar almohadillas de contacto 118 de la tira de prueba de la columna A adyacente a las almohadillas de contacto de la tira de prueba de la columna B, y para colocar el extremo de muestreo de la tira de prueba de la columna A adyacente a, y orientado en la misma dirección que el extremo de muestreo de la tira de prueba de la columna B. Utilizando este tipo de par de tiras de prueba de cabeza a cabeza, se proporciona un biosensor de uso dual en el que un usuario puede aplicar una muestra de fluido corporal a ambas tiras de prueba simultáneamente con el fin de probar los primero y segundo analitos diferentes usando una sola muestra. En una modalidad, un medio de filtración de sangre se puede proporcionar dentro de las cámaras de muestras duales 132 antes de doblar el par junto con el fin de evitar que la sangre y el reactivo se mezclen entre las cámaras 132.

Se debe apreciar que las cámaras 132 en cada uno del par orientado cabeza a cabeza de las tiras de prueba deben ser expuestas cuando el par de tiras de prueba se doblan a lo largo de la línea central 128. Téenicas de fabricación alternativas pueden ser usadas para asegurar que ambas cámaras de muestra 132 están expuestas. Por ejemplo, en una modalidad, una de las capas de sustrato, por ejemplo, la capa superior 134, está totalmente separada a lo largo de la línea central 128 durante la fabricación mientras que el sustrato 114 es ya sea modificado o no modificado para doblarse de forma predecible sobre la línea central 128. En una modalidad alternativa, una de las capas de sustrato se modifica, tal como a través de perforaciones o corte parcial que es separado fácilmente por el usuario a lo largo de la línea central 128, mientras que el otro sustrato es modificado, tal como por puntuación, deformación o prensado, para doblar predeciblemente o separar sobre una línea recta, por ejemplo, la línea central 128. En otra modalidad, tanto la capa superior 134 y el sustrato inferior 114 se modificaron para permitir que las tiras de preuba de cabeza a cabeza sean dobladas en cualquier dirección, en este caso, el usuario puede elegir doblar el par de tiras de prueba cabeza-a-cabeza para tener las capas superiores 134 de las dos tiras de prueba colocadas adyacentes entre sí o tener sustratos 114 de las dos tiras de prueba colocadas adyacentes entre sí.

Los sustratos 16, 114 pueden estar formados de un material aislante en el que los sistemas de electrodos 32, 46 y los patrones de electrodos 112, respectivamente, están colocados. Típicamente, plásticos tales como polímeros de vinilo, poliimidas, poliésteres, y estírenos proporcionan las propiedades eléctricas y estructurales que se requieren. Además, debido a que los elementos de prueba se pueden producir en masa de rollos de material, es deseable que las propiedades del material apropiado tengan la suficiente flexibilidad para el procesamiento de rollo, mientras que también da una rigidez útil para el elemento de acabado. El material para los sustratos 16, 114 puede ser seleccionado como un material polimérico flexible, tal como poliéster, incluyendo materiales de poliéster a alta temperatura; naftalato de polietileno (PEN); y poliimida, o mezclas de dos o más de éstos. Las poliimidas están disponibles en el comercio, por ejemplo bajo el nombre comercial Kapton®, de E.I. DuPont de Nemours and Company de Wilmington, Del. (DuPont). Un material específico posible para los sustratos 16, 114 es MELINEX® 329 disponible de DuPont.

Los electrodos de trabajo y el contraelectrodo, y las porciones restantes de los sistemas de electrodos 32, 46 y los patrones de electrodo 112, se pueden formar de una variedad de materiales. En un aspecto, los electrodos deben tener una resistencia eléctrica relativamente baja y deben ser electroquímicamente inertes sobre el intervalo de operación de los elementos de prueba. Conductores apropiados para el electrodo de trabajo incluyen oro, paladio, platino, carbono, titanio, dióxido de rutenio, y óxido de indio y estaño, e iridio, así como otros. El contraelectrodo puede estar hecho de los mismos o diferentes materiales, por ejemplo, cloruro de plata/plata. En una modalidad específica, los electrodos de trabajo y el contraelectrodo son ambos electrodos de oro.

Los sistemas de electrodos 32, 46 y los patrones de electrodo 112 se pueden aplicar a los sustratos 16, 114, respectivamente, de cualquier manera que produce electrodos de conductividad e integridad adecuada. Procesos ejemplares incluyen pulverización catódica e impresión, sólo para proporcionar algunas posibilidades no limitantes. En una forma específica, se proporcionan electrodos de oro mediante el recubrimiento de los materiales de los sustratos 16, 114 y después la eliminación de porciones seleccionadas del recubrimiento para producir los sistemas de electrodos 32, 46 y los patrones de electrodos 112. Un método particular para la eliminación de partes del recubrimiento incluyen ablación con láser, y más particularmente la ablación con láser de amplio campo, como se describe en la Patente Estadounidense No 7,073,246, los contenidos de la cual se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Téenicas de ablación con láser típicamente incluyen la ablación de una sola capa metálica o una composición de múltiples capas que incluye un material aislante y un material conductor, por ejemplo, un laminado metálico laminado de una capa de metal recubierto sobre o laminado con un material aislante. La capa metálica puede contener metales puros, aleaciones, u otros materiales, que son conductores metálicos. Ejemplos de metales o conductores metálicos similares incluyen: aluminio, carbono (tal como grafito), cobalto, cobre, galio, oro, indio, níquel, paladio, platino, plata, titanio, mezclas de los mismos, y aleaciones o soluciones sólidas de estos materiales. En un aspecto, los materiales son seleccionados para ser esencialmente no reactivos a los sistemas biológicos, ejemplos no limitantes de los cuales incluyen oro, platino, paladio, óxido de estaño andiridio de carbono. La capa metálica puede ser de cualquier espesor deseado que, en una forma particular, es de aproximadamente 500 nm.

Se debe entender que la forma ilustrada de los elementos de prueba 10, 110 no es limitante, y que configuraciones alternativas para los elementos de prueba de función dual de la presente solicitud, incluyendo los dispuestos para las técnicas de detección óptica, también se contemplan. En este sentido, en una forma adicional y no limitante, un elemento de prueba de doble función puede incluir una configuración tipo sándwich en donde un primer sustrato que porta un primer sistema de electrodos se coloca sobre un segundo sustrato que porta un segundo sistema de electrodos. Los primero y segundo sustratos están separados uno de otro por una capa intermedia que incluye un canal capilar o de otro modo se forma un canal capilar entre los primero y segundo sustratos. En esta configuración, el fluido de muestra que entra en el canal capilar se dirige hacia el primero y segundo sistemas de electrodos de manera que se produce la cubierta simultánea cerca de simultánea de los primero y segundo sistemas de electrodos. Aunque no se discutió previamente, se debe entender además que el primer sustrato está provisto con un primer material reactivo apropiado para la determinación de un primer analito y que el segundo sustrato está provisto con un segundo material reactivo apropiado para la determinación de un segundo analito. A modo de ejemplo no limitante, una téenica para la producción de elementos de prueba que tienen esta configuración implica producir por separado el primer sustrato que porta el primer material reactivo y el primer sistema de electrodo y el segundo sustrato que porta el segundo material reactivo y el segundo sistema de electrodo y después ensamblar los primero y segundo sustratos juntos.

En otra forma no limitante, un elemento de prueba de doble función puede incluir una configuración tipo sándwich ligeramente diferente. En esta configuración, un primer sustrato que porta un primer sistema de electrodos se coloca sobre un segundo sustrato que porta un segundo sistema de electrodos. Sin embargo, los primero y segundo sustratos están unidos por una capa adhesiva y cada capa incluye una cámara de muestra separada colocada sobre su respectivo sistema de electrodos en lugar de un solo canal capilar. En esta forma, el elemento de prueba incluye una configuración que facilita el llenado simultáneo o cerca de simultáneo de las cámaras de muestra individuales de manera que también se produce cobertura simultánea o cerca de simultánea de los primero y segundo sistemas de electrodo. Aunque no se discutió previamente, se debe entender además que el primer sustrato está provisto de un primer material reactivo apropiado para la determinación de un primer analito y que el segundo sustrato está provisto con un segundo material reactivo apropiado para la determinación de un segundo analito. Este elemento de prueba también puede ser producido utilizando la téenica discutida anteriormente en relación con la otra configuración tipo sándwich descrita en este documento. Detalles adicionales de un elemento de prueba no limitantes que tienen esta forma se proporcionan en la Publicación de Patente Internacional No WO 2012/003306 (incorporada en este documento anteriormente).

Otros ejemplos de arreglos no limitantes que pueden ser utilizados para el elemento de prueba de la presente solicitud se describen en las Patentes Estadounidenses Nos.6,984,307 y 4,397,956, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Se contempla que los elementos de prueba 10, 110 pueden ser útiles para la determinación de una amplia variedad de primero y segundo analitos de un fluido biológico. Por ejemplo, los elementos de prueba 10, 110 se pueden adaptar fácilmente para su uso con materiales reactivos 60, 62 y 120, 122 que tienen cualquiera química apropiada que se puede utilizar para evaluar la presencia y/o concentración de los primero y segundo analitos. Materiales reactivos 60, 62 y 120, 122 son operables para reaccionar con los primero y segundo analitos para producir las señales electroquímicas que representan la presencia y/o concentración de los primero y segundo analitos en el fluido de muestra. Como se discutirá en mayor detalle a continuación, los materiales reactivos 60, 62 y 120, 122 pueden incluir una variedad de componentes activos seleccionados para determinar la presencia y/o concentración de diversos primero y segundo analitos. Por lo tanto, se seleccionan las químicas de prueba de materiales reactivos 60, 62 y 120, 122 con respecto a los primero y segundo analitos que deben ser evaluados. Tales analitos pueden incluir, por ejemplo, glucosa, colesterol, colesterol HDL, triglicéridos, glicerina, lactatos, lactato deshidrogenasa, malatos, alcohol, ácido úrico, sorbitol, aminoácidos, 1,5-anhidroglucitol y analitos representativos de cuerpos cetónicos, tales como hidroxibutirato. En una modalidad particular, los elementos de prueba 10, 110 incluyen materiales de reactivos 60, 62 y 120, 122, respectivamente, que se seleccionan para determinar la presencia y/o concentración de hidroxibutirato y glucosa en sangre.

Ejemplos de fluidos biológicos no limitantes en los que los primero y segundo analitos pueden ser evaluados incluyen cualquier fluido corporal en el que los analitos se pueden medir, tal como fluido intersticial, lágrimas, orina, y sangre no limitantes. El término "sangre" en el contexto de este documento incluye sangre entera y sus componentes sin células, es decir, plasma y suero. Cuando los elementos de prueba están configurados para la prueba de hidroxibutirato y glucosa, el fluido de muestra puede incluir específicamente, por ejemplo, sangre capilar fresca obtenida de la punta del dedo o sitios alternativos aprobados (por ejemplo, el antebrazo, palma, lóbulo de la oreja, el brazo superior, la pantorrilla y el muslo), sangre venosa fresca u orina. Además, los elementos de prueba también pueden ser útiles en conexión con fluidos de control que se utilizan de manera convencional para verificar la integridad del sistema para la prueba.

El fluido corporal que contiene el analito a evaluar pueden ser adquirido y liberado a los elementos de prueba en cualquier forma. Por ejemplo, una muestra de sangre puede ser obtenida de manera convencional por la incisión de la piel, tal como con una lanceta, y después poner en contacto el elemento de prueba con el fluido que aparece en la superficie de la piel. En un aspecto, los elementos de prueba son operables para evaluar el analito objetivo, mientras que solamente utiliza muestras muy pequeñas de fluidos. Del mismo modo, en un aspecto, sólo una ligera incisión de la piel es necesaria para producir el volumen de fluido requerido para la prueba, y el dolor y otras preocupaciones con tal método pueden ser minimizados o eliminados.

Materiales reactivos 60, 120 incluyen una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima y una coenzima apropiada. Estos componentes son típicamente disueltos o suspendidos en una matriz. La muestra de prueba líquida hidrata o se disuelve la matriz, y el primer analito se difunde a través de la matriz para reaccionar con uno o más de los componentes activos. Las enzimas apropiadas que podrían estar incluidas en materiales reactivos 60, 120 son por ejemplo deshidrogenases seleccionadas de glucosa deshidrogenasa (E.C.1.1.1.47), lactato deshidrogenasa (E.C.1.1.1.27, 1.1.1.28), malato deshidrogenasa (E.C.1.1.1.37), glicerol deshidrogenasa (E.C.1.1.6), alcohol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.1), hidroxibutirato deshidrogenasa (HBDH), tales como 3-hidroxibutirato deshidrogenasa o beta-hidroxibutirato deshidrogenasa, alfa-hidroxibutirato deshidrogenase y gamma -hidroxibutirato deshidrogenase, sorbitol deshidrogenasa, y aminoácido deshidrogenase por ejemplo, L-amino ácido deshidrogenasa (E.C.1.4.1.5). Además enzimas apropiadas son oxidasas como glucosa oxidasa (E.C.1.1.3.4) o colesterol oxidasa (E.C.1.1.3.6) o aminotransferasas tales como aspartato o alanina aminotransferasa, 5'-nucleotidasa o creatina quinasa. Dependiendo de la enzima seleccionada, coenzimas potenciales apropiadas para uso en materiales reactivos 60, 120 incluyen FAD, NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente 0 o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON (R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo ?1-?2, Ci, X2 = en cada caso significan independientemente O, CH2, CHCH3, C(CH3)2 NH, O NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en el que CR4 está unido al grupo cíclico y X2 y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

En una modalidad, W = C0NH2 o C0CH3.

Ejemplos de sustituyentes en Z son seleccionados del grupo que consiste de OH, F, Cl, y alquilo Ci-C2 que están opcionalmente fluorados o clorados y/o sustituidos con OH, 0-alquilo Ci-C2.

En otra modalidad, un primer residuo V es OH y un segundo residuo V es un grupo fosfato. Opcionalmente, un grupo OH y un grupo fosfato pueden formar un anillo junto con los átomos de carbono a los que están unidos.

Ejemplos no limitantes de análogos de adenina incluyen adenina sustituida con Cs y sustituida con e, variantes de desaza tales como variantes de 7-desaza aza tales como 8-aza o combinaciones tales ccoommoo 77--ddeeaazzaa o 8-aza o análogos carbocíclicos tales como formicina en donde las variantes de 7-desaza pueden ser sustituidas en la posición 7 con halógeno, alquinilo-Ci-C6, alquenilo-Ci-C6 o alquilo-Ci-C6. En una modalidad adicional los compuestos contienen análogos de adenosina que contienen por ejemplo 2-metoxodeoxoribosa, 2'-fluorodeoxi-ribosa, hexitol, altritol o análogos policíclicos tales como azúcares bicíclicos, LNA y tricíclicos en lugar de ribosa. En una forma, oxígenos de (di)fosfato también pueden ser isoelectronicamente sustituidos tal como por ejemplo 0 por S y/o por BH3, 0 por NH, NCH3 y/o por CH2 y =0 por =S. En una modalidad, por lo menos un residuo U de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) es diferente de OH y en otras modalidades por lo menos un residuo U=BH3.

Otro compuesto más particular pero no limitante de acuerdo con la fórmula (I) en la que: A = adenina, T = en cada caso significa 0, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general ( II] ' ' (II) en la que un enlace está presente entre R5' y R5" , y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH es carba-NAD o cNAD. carba-NAD tiene la siguiente estructura: carbaNAD Aún, otro compuesto más particular, pero no limitante de acuerdo con la fórmula (I) en cual: A = adenina, T = en cada caso signfica O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = 0, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmul general ( II ) en donde un solo enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH es carba-NADP o cNADP. carba-NADP tiene la siguiente estructura: Otros compuestos particulares, pero no limitantes de acuerdo con la fórmula (I) incluyen borano carba-NAD, ciclopentilo NAD, y ciclofosfato carba-NAD. Estos compuestos tienen las siguientes estructuras: ciclpentilo NAD ? Ciclofosfato carbaNAD Detalles adicionales con respecto a compuestos de acuerdo con la fórmula (I) y la síntesis de los mismos se proporcionan en la Publicación de Patente Estadounidense No 2008/0231809, los contenidos de la cuales son incorporados aquí por referencia en su totalidad.

En una modalidad, los materiales reactivos 60, 120 son operables para facilitar la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato e incluyen una hidroxibutirato deshidrogenasa. Ningunos ejemplos limitantes de hidroxibutirato deshidrogenasa incluyen alfa-hidroxibutirato deshidrogenasa, beta o 3-hidroxibutirato deshidrogenasa y gamma hidroxibutirato deshidrogenasa. En una forma particular, la hidroxibutirato deshidrogenasa es 3-hidroxibutirato deshidrogenasa. En esta modalidad, los materiales reactivos 60, 120 incluyen además una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. En una forma particular, los materiales reactivos 60, 120 incluyen 3-hidroxibutirato deshidrogenasa y uno de carbaNAD y carbaNADP. En las formas en donde el primer material reactivo incluye una hidroxibutirato deshidrogenasa y una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma, se ha descubierto sorprendentemente que la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato puede ser completada en o cerca de cinco segundos después de que el elemento de prueba se ha puesto en contacto con la muestra, que corresponde generalmente al estado del arte previo de la prueba de glucosa que tarda aproximadamente cinco segundos. Detalles adicionales en este sentido se dan en relación con los "EJEMPLOS" más adelante. Se debe entender que el uso de materiales reactivos que requieren más de cinco segundos para completar la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato son también apropiados para su uso en elementos de ensayo de la presente solicitud.

Además, mientras que el uso de un material reactivo que incluye una hidroxibutirato deshidrogenasa y una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma se han descrito aquí en relación con los elementos de prueba que tienen funcionalidades duales, debe entenderse que el uso de este material reactivo en relación con los elementos de prueba que tienen una funcionalidad única también es posible. Ejemplos no limitantes de formas adicionales de elementos de prueba para los que el uso de este material reactivo se contempla se describe en la Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No 2005/0016844 y la Patente Estadounidense No 7,008,799, cuyos contenidos se incorporan en este documento por referencia en su totalidad. También debe ser apreciado que el material reactivo no requiere enzimas adicionales, tales como diaforasa, para ser operable para la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato en formas en donde se incluye una hidroxibutirato deshidrogenase y una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. Sin embargo, también se contempla la inclusión de enzimas adicionales dentro del primer material reactivo.

El primer material reactivo también puede incluir un mediador. El mediador se puede seleccionar como cualquier especie química (generalmente electroactivo) que puede participar en un esquema de reacción que implica la enzima, el primer analito, y la coenzima, y los productos de reacción de los mismos, para producir un producto de reacción detectable electroactivo. Típicamente, la participación del mediador en la reacción implica un cambio en su estado de oxidación (por ejemplo, una reducción), durante la interacción con cualquiera del primer analito, la enzima, o la coenzima, o una especie que es un producto de reacción de uno de éstos (por ejemplo, una coenzima reaccionada a un estado de oxidación diferente). Una variedad de mediadores exhiben comportamiento electroquímico apropiado. Un mediador también preferiblemente puede ser estable en su forma oxidada, pueden exhibir opcionalmente electroquímica redox reversible, pueden exhibir preferiblemente una buena solubilidad en soluciones acuosas, y preferiblemente reacciona rápidamente para producir un producto de reacción electroactivo. Ejemplos de mediadores incluyen benzoquinona, meldola azul, complejos de metales de transición tales como derivados de ferricianuro de potasio y osmio (ver la Publicación de Patente Internacional No WO 98/35225), y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio (ver la Patente Estadounidense No 8,008,037). El primer material reactivo también puede incluir un compuesto a base de nitrosoanilina que actúa como un precursor mediador (ver por ejemplo la patente Estadounidense No 5,286,362). En este sentido, el precursor mediador basado en nitrosoanilina se descompone en componentes reversibles mediadores cuando entran en contacto con una muestra de analito tal como sangre.

Ejemplos adicionales de mediadores y precursores mediadores a base de nitrosoanilina incluyen N-(2-hidroxietil)-N'-p-nitrosofenil-piperazina, N,N-bis-(2-hidroxietil)-p-nitrosoanilina, o-metoxi- [N,N-bis-(2-hidroxietil)]-p-nitrosoanilina, p-hidroxinitrosobenceno, N-metil-N'- (4-nitrosofenil)piperazina, p-quinona dioxima, N,N-dimetil-p-nitrosoanilina, N,N-dietil-p-nitroanilina, N-(4-nitrosofenil)-morfolina, N-bencil-N- (5'-carboxipentil)-p-nitrosoanilina, N,N-dimetil-4-nitroso-1-naftilamina, N,N,3-trimetil-4-nitrosoanilina, N-(2-hidroxietil)-5-nitrosoindolina, N,N-bis- (2-hidroxietil)-3-cloro-4-nitrosoanilina, 2,4-dimetoxi-nitrosobenceno, N,N-bis-(2-metoxietil)-4-nitrosoanilina, 3-metoxi-4-nitrosofenol, N- (2-hidroxietil)-6-nitroso-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina, N,N- dimetil-3-cloro-4-nitrosoanilina, N,N-bis-(2-hidroxietil)-3-fluoro-4-nitrosoanilina, N,N-bis-(2-hidroxietil)-3-metiltio-4-nitrosoanilina, N-(2-hidroxietil)-N-(2-(2-metoxietoxi)etil)-4-nitrosoanilina, N- (2-hidroxietil)-N-(3-metoxi-2-hidroxi-1-propil)-4-nitrosoanilina, N-(2-hidroxietil)-N-(3-(2-hidroxietoxi)-2-hidroxi-l-propil)-4-nitrosoanilina, y N-(2-hidroxietil)-N-(2-(2-hidroxietoxi)etil)-4-nitrosoanilina.

Los materiales reactivos 62, 122 incluyen una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima y una coenzima apropiada. Estos componentes son típicamente disueltos o suspendidos en una matriz. La muestra de prueba líquida hidrata o disuelve la matriz, y el analito se difunde a través de la matriz para reaccionar con uno o más de los componentes activos. Las enzimas apropiadas que podrían estar incluidas en materiales reactivos 62, 122 son por ejemplo deshidrogenases seleccionadas de glucosa deshidrogenase (E.C.1.1.1.47), lactato deshidrogenase (E.C.1.1.1.27, 1.1.1.28), malato deshidrogenasa (E.C.1.1.1.37), glicerol deshidrogenasa (E.C.1.1,1.6), alcohol deshidrogenasa (E.C.1.1.1.1), hidroxibutirato deshidrogenasa (HBDH), tales como 3-hidroxibutirato deshidrogenasa o beta-hidroxibutirato deshidrogenasa, alfa-hidroxibutirato deshidrogenasa y gamma-hidroxibutirato deshidrogenasa, sorbitol deshidrogenasa, y aminoácido deshidrogenasa por ejemplo, L-aminoácido deshidrogenasa (E.C.1.4.1.5). Además enzimas apropiadas son oxidasas como glucosa oxidasa (E.C.1.1.3.4) o colesterol oxidasa (E.C.1.1.3.6) o aminotransferasas tales como aspartato o alanina aminotransferasa, 5'-nucleotidasa o creatina quinasa. Dependiendo de la enzima seleccionada, coenzimas potenciales apropiadas para uso en materiales de reactivos 62, 122 incluyen FAD, NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de las mismas.

En una modalidad en donde los materiales reactivos 60, 120 son operables para facilitar la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato, los materiales reactivos 62, 122 son operables para facilitar la detección de la presencia y/o concentración de glucosa e incluyen una enzima para glucosa. En una forma particular, la enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. En esta modalidad, los materiales reactivos 62, 122 además incluyen una coenzima seleccionada del FAD, NAD, NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. Aunque no se discutió previamente, las formas en las que los materiales reactivos 60 y 62 tienen una coenzima común, por ejemplo, un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma, se contempla que se fusionan juntos para formar una sola capa de reactivo de manera que el espacio 64 entre los mismos se elimina. También debe entenderse que los materiales reactivos descritos en este documento para detectar la presencia y/o concentración de glucosa no son limitantes, y que otras formas para lo mismo son conocidas en el arte previo. Ejemplos adicionales no limitantes de materiales reactivos operables para detectar la presencia y/o concentración de glucosa se describen en la Patente Estadounidense No 7,727,467 (incorporada aquí anteriormente) y la patente Estadounidense No. 8,008,037, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia en su totalidad. El segundo material reactivo también puede incluir un mediador. El mediador se puede seleccionar como cualquier especie química (generalmente electroactiva) que puede participar en un esquema de reacción que implica la segunda enzima, el segundo analito, y la coenzima, y productos de reacción de los mismos, para producir un producto de reacción detectable electroactivo. Típicamente, la participación del mediador en la reacción implica un cambio en su estado de oxidación (por ejemplo, una reducción), durante la interacción con cualquiera del segundo analito, la segunda enzima, o la coenzima, o una especie que es un producto de reacción de uno de éstos (por ejemplo, una coenzima reaccionada a un estado de oxidación diferente) . Una variedad de mediadores exhiben comportamiento electroquímico apropiado. Un mediador también puede preferiblemente ser estable en su forma oxidada, opcionalmente puede exhibir electroquímica redox reversible, preferiblemente puede exhibir una buena solubilidad en soluciones acuosas, y preferiblemente reacciona rápidamente para producir un producto de reacción electroactivo. Ejemplos de mediadores incluyen benzoquinona, azul meldola, complejos de metales de transición tales como derivados de ferricianuro de potasio y de osmio (ver Publicación de Patente Internacional No WO 98/35225), y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaminarutenio (ver la Patente Estadounidense No. 8,008,037). El segundo material reactivo también puede incluir un compuesto a base de nitrosoanilina que actúa como un precursor mediador (ver por ejemplo la patente Estadounidense No. 5,286,362). En este sentido, el precursor mediador a base de nitrosoanilina se descompone en componentes mediadores reversibles cuando entra en contacto con una muestra de analito, tal como sangre.

Ejemplos adicionales de mediadores y precursores mediadores a base de nitrosoanilina incluyen N-(2-hidroxietil)-N'-p-nitrosofenil-piperazina, N,N-bis-(2-hidroxietil)-p-nitrosoanilina, o-metoxi- [N,N-bis-(2-hidroxietil)]-p-nitrosoanilina, p-hidroxinitrosobenceno, N-metil-N'-(4-nitrosofenil)piperazina, p-quinona dioxima, N,N-dimetil-p-nitrosoanilina, N,N-dietil-p-nitrosoanilina, N-(4-nitrosofenil)morfolina, N-bencil-N- (5'-carboxipentil)-p-nitrosoanilina, N,N-dimetil-4-nitroso-1-naftilamina, N,N,3- trimetil-4-nitrosoanilina, N- (2-hidroxietil)-5-nitrosoindolina, N,N-bis- (2-hidroxietil)-3-cloro-4-nitrosoanilina, 2,4-dimetoxi-nitrosobenceno, N,N-bis-(2-metoxietil)-4-nitrosoanilina, 3-metoxi-4-nitroso-fenol, N-(2-hidroxietil)-6-nitroso-l,2,3,4-tetrahidroquinolina, N,N-dimetil-3-cloro-4-nitrosoanilina, N,N-bis- (2-hidroxietil)-3-fluoro-4-nitrosoanilina, N,N-bis-(2-hidroxietil)-3-metiltio-4-nitrosoanilina, N-(2-hidroxietil)-N-(2-(2-metoxietoxi)etil)-4-nitrosoanilina, N- (2-hidroxietil)-N-(3-metoxi-2-hidroxi-1-propil)-4-nitrosoanilina, N- (2-hidroxietil)-N-(3-(2-hidroxietoxi)-2-hidroxi-l-propil)-4-nitrosoanilina, y N- (2-hidroxietil)-N-(2-(2-hidroxietoxi)etil)-4-nitrosoanilina.

Los materiales reactivos también pueden incluir una variedad de adyuvantes para mejorar diversas propiedades o características de los mismos. Ver, por ejemplo, la patente Estadounidense No 7,749,437 referida anteriormente en este documento. Por ejemplo, materiales de reactivos 60, 62 y 120, 122 pueden incluir materiales para facilitar su colocación sobre los sustratos respectivos 16, 14 y 1 para mejorar su adhesión a la misma, o para aumentar la velocidad de hidratación de los materiales reactivos por el fluido de muestra. Adicionalmente, los materiales reactivos pueden incluir componentes seleccionados para mejorar las propiedades físicas de la capa de reactivo seca resultante, y la absorción de una muestra de prueba de líquido para su análisis. Ejemplos de materiales adyuvantes para ser utilizados con los materiales reactivos incluyen espesantes, moduladores de viscosidad, formadores de película, estabilizantes, soluciones amortiguadoras, detergentes, agentes gelificantes, rellenos, abridores de película, agentes colorantes, y agentes tixotrópicos.

Ejemplos no limitantes de espesantes que pueden incluirse en los materiales reactivos incluyen (1) almidones, gomas (por ejemplo, pectina, goma guar, algarroba (semilla de algarroba), goma konjac, goma xantano, alginatos, y agar), caseína, gelatina, y ficocoloides; (2) celulosa y derivados de celulosa semi-sintéticos (carboximetilcelulosa, metilcelulosa, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, metilhidroxietilcelulosa); (3) alcohol polivinílico y carboxi-vinilatos; y (4) bentonita, silicatos y sílice coloidal. Formas más específicas de espesantes incluyen una combinación de una goma xantano comercializada bajo el nombre comercial Keltrol F por CP Kelco US, Inc., y carboximetilcelulosa vendida bajo el nombre comercial de Aqualon® CMC 7F PH por Hercules Inc., Aqualon División.

Formadores de película y agentes tixotrópicos que pueden ser incluidos en los materiales reactivos incluyen polímeros y sílice. Un agente tixotrópico más específico incluye sílice vendido bajo el nombre comercial Kieselsaure Sipemate FK 320 DS por Degussa AG, mientras que un agente formador de película más específico incluye polivinilpirrolidona, vendido bajo la marca comercial polivinilpirrolidona Kollidon 25, por BASF, y dispersión de propionato de polivinilo.

Estabilizadores para las enzimas en los materiales reactivos se pueden seleccionar de sacáridos y sales de ácidos mono- o di-grasos. Estabilizadores más específicos incluyen trehalosa vendida bajo el nombre comercial D-(+)-trehalosa dihydrate por Sigma Chemical Co. y succinato de sodio.

Ejemplos no limitantes de detergentes que se pueden incluir en los materiales reactivos incluyen jabones solubles en agua, así como compuestos tensioactivos sintéticos solubles en agua tales como sales alcalinas, alcalinotérreas o de amonio opcionalmente sustituidas de ácidos grasos superiores, por ejemplo, ácido oleico o esteárico, mezclas de ácidos grasos naturales, por ejemplo, de coco o aceite de sebo, sulfatos grasos, ésteres de ácidos sulfónicos, sales de ácidos alquil sulfónicos, sales de taurina de ácidos grasos, amidas de ácidos grasos, y amidas de éster. Formas más específicas de detergentes incluyen una amida de éster, n-octanoil-N-metilglucamida, vendida bajo el nombre comercial de Mega-8 por Dojindo Molecular Technologies, Inc., y una sal de ácido graso, sal de N-metil oleil taurato de sodio, vendido bajo el nombre comercial Geropon T77 por Rhodia HPCII (Hogar, Personal Care and Industrial Ingredients).

En una forma, los materiales reactivos se formulan como una solución viscosa que incluye agentes espesantes y tixotrópicos para mejorar sus propiedades físicas. Los espesantes se seleccionan para proporcionar una matriz líquida espesa, que tiene componentes restantes dispersados homogéneamente en la misma. Los agentes espesantes y tixotrópicos también inhiben que el material líquido o semipastoso que corra o se extienda sobre la superficie de los sustratos 16, 114 después de haber sido depositado y antes de que se seque. Después de que se depositan los materiales reactivos, se secan rápidamente a una matriz fácilmente hidratable.

Como se indicó anteriormente, se ha descubierto sorprendentemente que la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato se puede completar en o alrededor de cinco segundos después de que el elemento de prueba se ha puesto en contacto con la muestra en formas en donde el primer material reactivo incluye una hidroxibutirato deshidrogenasa y una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. El estado actual del arte previo para la prueba de glucosa facilita la detección de la presencia y/o concentración de glucosa para ser completada en o alrededor de cinco segundos después de que el elemento de prueba se ha puesto en contacto con la muestra. La patente Estadounidense No 8,008,037 describe una forma no limitante de las pruebas de glucosa que facilita la detección de la presencia y/o concentración de glucosa dentro de este plazo.

Formas no limitantes adicionales de las pruebas de glucosa que facilita la detección de la presencia y/o concentración de glucosa dentro de este plazo, se describen en la Patente Estadounidenses Nos. 7,276,146 y 7,276,147, los contenidos de ambos son incorporados aquí por referencia en su totalidad. Debe entenderse sin embargo, que otros materiales reactivos que facilitan la detección de la presencia y/o concentración de glucosa dentro de este u otros marcos de tiempo son conocidos y podrían ser utilizados en los elementos de prueba descritos en este documento.

En vista de lo anterior, se debe apreciar que la detección de la presencia y/o concentración de hidroxibutirato y glucosa puede ser completada dentro de los cinco segundos después de que el elemento de prueba ha sido contactado por la muestra cuando el elemento de prueba incluye un primer material reactivo que tiene una hidroxibutirato deshidrogenasa y una coenzima seleccionada de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma, y un segundo material reactivo que es apropiado para la detección de glucosa y apropiadamente formulado. Sin embargo, también debe ser entendido que las variaciones en el tiempo para completar la detección de hidroxibutirato y glucosa con estos elementos de prueba también son posibles y dependen de, por ejemplo, la formulación específica de los materiales reactivos, entre otros aspectos. En una forma por ejemplo, la detección de hidroxibutirato y la glucosa se completa dentro de 10 segundos después de que el elemento de prueba ha sido contactado por la muestra. En otra forma, la detección de hidroxibutirato y glucosa se completa en 7.5 segundos después de que el elemento de prueba ha sido contactado por la muestra. También debe ser apreciado que el tiempo para la finalización de la detección de hidroxibutirato y la detección de glucosa puede ser diferente. Por ejemplo, en una o más de las anteriores u otras formas la detección hidroxibutirato se completa dentro de 4 segundos antes o después de la finalización de la detección de glucosa. En otra variante, la detección de hidroxibutirato se completa en 2 segundos antes o después de la finalización de la detección de glucosa. En aún otra variante, la detección de hidroxibutirato se completa en o cerca del mismo tiempo que se completa la detección de glucosa. Debe entenderse sin embargo, que se contemplan otras variaciones en el marco de tiempo para la finalización de detección de hidroxibutirato y glucosa.

Ejemplos Los siguientes ejemplos son para fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes de la invención descrita en este documento a solamente las modalidades descritas en estos ejemplos.

Formulación de Material Reactivo Material Reactivo de la Figura 6 Una solución amortiguadora conenetrada se preparó agregando 7.344 g de la sal de sodio MOPS, 0.125 g de Tritón™ X-100 (un detergente no iónico de Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO), 2.400 g de trehalosa, y 2.026 g de succinato de sodio hexahidratado a 400 mi de agua doble destilada y ajustando el pH de la solución a 8.14. Esta solución se agregó a un matraz aforado de 500 mi y se diluyó con agua doble destilada para hacer una solución de 500 mi.

La preparación de una solución de solución amortiguadora/Natrosol/polímero PEO se completó mediante la combinación de 396 g de la solución amortiguadora inicial con 2 g de óxido de polietileno (300K) y 2 g de Natrosol® 250 M (un polímero de hidroxietilcelulosa soluble en agua no iónico de Ashland, Inc., Covingtion, KY). La mezcla se mezcló durante una noche antes de su uso.

Un material reactivo de nitrosoanilina/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi de velocidad que contiene 5.0595 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero en una forma seriada: a) 0.0415 g de un derivado de nitrosoanilina sustituida (NA 1144 suministrada por Roche Diagnostics, Inc.) se agregó al recipiente y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.7; b) 0.0692 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y c) 0.2134 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de Alcaligenes faecalis se agregaron al depósito y se mezcló a velocidad durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la figura 7 Una solución amortiguadora concentrada se preparó agregando 9.086 g de base Tris, 0.125 g de Tritón™ X-100, 0.625 g de Tergitol® 15-S-9 (un tensioactivo no iónico de la empresa Dow Chemical, Midland, MI), 2.400 g de trehalosa, y 2.026 g de succinato de sodio hexahidratato a 400 mi de agua doble destilada y ajustando el pH de la solución a 7.95. Esta solución se agregó a un matraz aforado de 500 mi y se diluyó con agua doble destilada para hacer una solución de 500 mi.

La preparación de una solución de solución amortiguádora/Natrosol®/polímero de PEO se completó mediante la combinación de 396 g de la solución amortiguadora inicial con 2 g de óxido de polietileno (300K) y 2 g de Natrosol® 250 M. La mezcla se mezcló durante una noche antes de su uso. Un material reactivo hexaminarutenio/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a un recipiente de mezclado rápido de 20 mi que contiene 4.048 g de solución concentrada de solución amortiguadora/polímero de una manera seriada: a) 0.0619 g de cloruro de hexaminarutenio y b) 0.0034 g de 1-(3-carbroxipropiloxi)-5-etil fenazina se agregaron al recipiente y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; y c) 0.0791 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de hexaminarutenio/fenazina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.24.0.0862 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de Alcaligenes faecalis fueron agregados a la taza y se mezclaron rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de las Figuras 8 y 9 Un material reactivo de hexaaminarutenio/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 4.048 g de la solución concentrada de solución amortiguadora de Tris/PEO/polímero de Natrosol® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la Figura 7 en una manera seriada: a) 0.062 g de cloruro de hexaaminarutenio y b) 0.003 g de l-(3-carbroxipropiloxi)-5-etil fenazina se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; y c) 0.079 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contenía 3 mi de solución de hexaaminarutenio/fenazina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.24.

Después se agregaron 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa del Alcaligenes faecalis a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la figura 10 Una solución amortiguadora concentrada se preparó agregando 9.086 g de base Tris, 0.125 g de Tritón™ X-100, 0.625 g de Tergitol® 15-S-9, 2.40 g de trehalosa, y 2.026 g de succinato de sodio hexahidratado a 400 mi de agua doble destilada y ajustando el pH de la solución a 7.95. Esta solución se agregó a un matraz aforado de 500 mi y se diluyó con agua doble destilada para hacer una solución de 500 mi.

La preparación de una solución de solución amortiguadora/polímero Kollidon® VA 64 se completó mediante la combinación de 392 g de solución amortiguadora inicial con 8 g de Kollidon® VA 64 (un copolímero de vinilpirrolidona-acetato de vinilo de BASF Corporation, Florham Park, NJ). La mezcla se mezcló durante una noche antes de su uso.

Un material reactivo de nitrosoanilina/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.071 g de solución concentrada de solución amortiguadora/polímero de una manera seriada: a) 0.0600 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.050 g de un derivado de nitrosoanilina sustituida (NA 1144 proporcionado por Roche Diagnostics, I Inncc..,, I Innddiiaannaappoolliiss,, IN) se agregaron al recipiente y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; c) 0.069 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de Alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la Figura 11 Un material reactivo de hexaaminarutenio/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 4.049 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero de Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada : a) 0.040 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA), b) 0.062 g de cloruro de hexaaminarutenio, y c) 0.003 g de 1-(3-carboxipropiloxi)-5-etil fenazina se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; d) 0.079 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de hexaaminarutenio/fenazina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y e) 0.259 g de beta-hldroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material reactivo de la Figura 12 Un material reactivo de nitrosoanilina/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada: a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.050 g de un derivado de nitroanilina sustituida (NA 1144 proporcionado por Roche Diagnostics, Inc., Indianapolis, IN) se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.8; c) 0.069 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y e) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de Alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la Figura 13 Un material reactivo de hexaaminarutenio/Tio-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada: a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA), b) 0.093 g de cloruro de hexaaminarutenio y c) 0.005 g de 1-(3-carbroxipropiloxi)-5-etil fenazina se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; d) 0.079 g de ácido libre de Tio-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de hexaaminarutenio/fenazina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y e) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la Figura 14 Un material reactivo de nitrosoanilina/Tio-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la Figura 10 en una manera seriada: a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.050 g de un derivado de nitroanilina sustituida (NA 1144 proporcionado por Roche Diagnostics, Inc., Indianapolis, IN) se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.8; c) 0.079 g de ácido libre Tio-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la Figura 15 Un material reactivo de hexaminarutenio/carba-NADP se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado con velocidad de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada : a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA), b) 0.093 g de cloruro de hexaaminarutenio y c) 0.005 g de 1-(3-carbroxipropiloxi)-5-etil fenazina se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.9; c) 0.076 g de ácido libre carba-NADP se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de hexaaminarutenio/fenazina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; y d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y velocidad de mezclado durante 2 minutos a 24,000 rpm. Material Reactivo de la Figura 16 Un material reactivo de nitrosoanilina/carba-NADP se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución conenetrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada: a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.050 g de un derivado de nitroanilina sustituida (NA 1144 proporcionada por Roche Diagnostics, Inc., Indianapolis, IN) se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.8; c) 0.076 g de ácido libre carba-NADP se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y velocidad de mezclado durante 2 minutos a 24,000 rpm. Material Reactivo de la Figura 17 Un material reactivo de ferricianuro/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 4.049 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la Figura 10 en una manera seriada: a) 0.040 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.026 g de ferricianuro de potasio a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.8; c) 0.076 g de ácido libre carba-NAD se agregaron a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de ferricianuro, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis se agregaron a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Material Reactivo de la Figura 18 Un material reactivo de nitrosoanilina/carba-NAD se preparó agregando los siguientes ingredientes a una taza de mezclado rápido de 20 mi que contiene 6.074 g de la solución concentrada de solución amortiguadora/polímero Tris/Kollidon® descrita anteriormente junto con el material reactivo de la figura 10 en una manera seriada: a) 0.060 g de sílice ahumada sin tratar (Cabosil®, Cabot Corporation, Boston, MA) y b) 0.050 g de un derivado de nitrosoanilina sustituida (NA 1144 proporcionado por Roche Diagnostics, Inc.) se agregaron a la taza y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.8; c) 0.079 g de ácido libre carba-NAD a una taza de mezclado rápido de 10 mi que contiene 3 mi de la solución de nitrosoanilina, y la matriz se mezcló durante 1 minuto a 24,000 rpm y el pH se ajustó a 7.2; d) 0.259 g de beta-hidroxibutirato deshidrogenasa de alcaligenes faecalis a la taza y mezclado rápido durante 2 minutos a 24,000 rpm.

Preparación de las tiras de prueba Tarjetas de electrodos de la marca ACCU-CHECK®Aviva con diseños separadores y capilares fueron usadas para producir tiras de prueba.1.5 ml de los materiales reactivos, descritos anteriormente, se suministraron en cada canal capilar de electrodo utilizando un sistema de suministro PIXSYS™ serie SQ (Cartesian Technologies Irvine California) y se secó durante 1.5 minutos a 45°C. Las tarjetas secas se almacenan en una atmósfera seca durante la noche y tiras de láminas superiores hidrofílicas fueron laminadas manualmente sobre la capa separadora durante la capilaridad. Las tarjetas se cortaron en sensores individuales y se almacenaron en viales desecados hasta su uso.

Preparación de soluciones de prueba Una solución amortiguadora salina de fosfato concentrada se preparó agregando 0.1829 g de sal monobásica de fosfato de potasio, 0.2007 g sal dibásica de fosfato de potasio y 2.7956 g de cloruro de potasio a 200 mi de agua doble destilada y ajustando el pH de la solución a 7.00. Esta solución se agregó a un matraz volumétrico de 250 mi y se diluyó con agua doble destilada para hacer una solución de 250 mi.

Una solución concentrada 21 veces de hidroxibutirato se preparó agregando 1.3372 g de sal de hidroxibutirato de sodio a 40 mi de solución amortiguadora salina de fosfato. La solución se agregó a un matraz volumétrico de 50 mi y se diluyó con solución amortiguadora salina de fosfato a 50 mi. La solución concentrada resultante se diluyó en serie con solución amortiguadora salina de fosfato para producir 11 concentrados de prueba de hidroxibutirato.

Las soluciones de prueba finales fueron preparadas agregando 1 mi de cualquiera solución salina de fosfato o sangre con 0.05 mi de los concentrados de prueba.

Respuestas de dosis cinética Muestras de sangre entera o de solución salina que contienen diversos niveles de hidroxibutirato (mM) se midieron utilizando las tiras de preuba preparadas anteriormente. El potencial requerido (222 mV para Tiras de Hexaa inarutenio y 450 mV para tiras de nitrosoanilina) se aplicó después de poner en contacto la muestra en la tira. El tiempo total de ensayo fue de 6 segundos. El punto final para el ensayo fue tomado 0.5 segundos (Figura 7) y 5 segundos (Figuras 9 y 10) después de poner en contacto la tira de prueba con la muestra. Respuestas de Dosis del Punto Final Muestras de sangre o solución salina que contienen diversos niveles de hidroxibutirato (0 a 10 mM) se midieron usando las tiras de prueba preparadas anteriormente. El ensayo consistió en un retraso de 4.5 segundos después del contacto de la muestra con la tira de prueba seguido por aplicación potencial, 450 mV para las tiras de nitrosoanilina y 222 mV para las tiras de hexaaminarutenio por 6 segundos después del período de retraso. El punto final para el ensayo se tomó 5 segundos después de poner en contacto la tira de prueba con la muestra.

Aunque no se discutió previamente, se debe apreciar que la proporción entre la concentración de hidroxibutirato y la corriente medida facilita la utilización de los materiales reactivos ejemplares para analizar hidroxibutirato.

Aunque la invención se ha ilustrado y descrito en detalle en las Figuras y descripción anterior, la misma se debe considerar como ilustrativa y no de carácter restrictivo, entendiéndose que sólo ciertas modalidades se han mostrado y descrito y que todos los cambios y modificaciones que están comprendidos dentro del espíritu de las invenciones se desean ser protegidos. Se debe entender que, si bien el uso de palabras tales como preferible, preferiblemente, preferido o más preferidos utilizados en la descripción anterior indica que la característica así descrita puede ser más deseable, sin embargo, puede no ser necesario y modalidades que carecen de la misma se pueden contemplar como dentro del alcance de la invención, el alcance está definido por las reivindicaciones que siguen. En la lectura de las reivindicaciones, se pretende que cuando se utilizan palabras como "un", "una", "por lo menos uno", o "por lo menos una porción" no hay ninguna intención de limitar la reivindicación a un solo artículo a menos que se indique específicamente lo contrario en la reivindicación. Cuando se usa el lenguaje "por lo menos una porción" y/o "una porción" el artículo puede incluir una parte y/o todo el elemento a menos que se indique específicamente lo contrario.

Modalidades adicionales de la invención se muestran a continuación. 1. Un elemento de prueba configurado para determinar el primero y segundo analitos, que comprende: una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima; una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima; una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente 0 u S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo-?1-?2, Ci, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2 NH, o NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, Cl, o CH3 siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. 2. El elemento de prueba de la modalidad 1, en donde el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa. 3. El elemento de prueba de la modalidad 2, en donde el hidroxibutirato deshidrogenasa es 3-hidroxibutirato deshidrogenasa. 4. El elemento de prueba de la modalidad 2, en donde la segunda enzima es una deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de una glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbítol deshidrogenasa, y una aminoácido deshidrogenasa que comprende L-amino ácido deshidrogenasa. 5. El elemento de prueba de la modalidad 2, en donde el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa. 6. El elemento de prueba de la modalidad 5, en donde la coenzima es un compuesto de acuerdo fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa 0, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) (II) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH. 7. El elemento de prueba de la modalidad 5, en donde la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = CO (R)2 en donde R significa H, Xi = 0, x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (ü) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6' = CH, y R6' = CH. 8. El elemento de prueba de la modalidad 5, en donde la coenzima es tio-NAD. 9. El elemento de prueba de la modalidad 5, en donde la coenzima es tio-NADP. 10. El elemento de prueba de la modalidad 1, que además comprende un primer material reactivo, el primer material reactivo incluye la primera enzima o el sustrato para la primera enzima y la coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. 11. El elemento de prueba de la modalidad 10, que además comprende un segundo material reactivo, el segundo material reactivo que incluye la segunda enzima o el sustrato para la segunda enzima y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y el compuesto de acuerdo con fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. 12. El elemento de prueba de la modalidad 11, que además comprende una tira de prueba configurada para portar los primero y segundo materiales reactivos. 13. El elemento de prueba de la modalidad 12, en donde la tira de prueba incluye un primer sistema de electrodos asociado con el primer material reactivo y un segundo sistema de electrodos asociado con el segundo material reactivo. 14. El elemento de prueba de la modalidad 10, en donde el primer material reactivo comprende además uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio. 15. Un material reactivo, que comprende: 3-hidroxibutirato deshidrogenasa; y un compuesto de coenzima de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, C0N(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo ?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, o NCH3, Y = NH, S, 0, O CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0 , S y N y opcionalmente uno o más sust ituyentes , y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y X 2, y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no esten unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. 16. El material reactivo de la modalidad 15, en donde el compuesto de la coenzima es de acuerdo con la fórmula en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = CON (R)2 en donde R significa H, Xi= O X2 = O, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico saturado de 5 miembros de la fórmula general (II) (P) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH. 17. El material reactivo de la modalidad 15, en donde el compuesto de la coenzima es de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico saturado de 5 miembros de la fórmula general (II) (ii) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5'= CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' CH. 18. El material reactivo de la modalidad 15, que además comprende uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio. 19. Un elemento de prueba, que comprende una tira de prueba que porta un primer material reactivo de acuerdo con la modalidad 15 para determinar un primer analito. 20. El elemento de prueba de la modalidad 19, en donde la tira de prueba porta además un segundo material reactivo para la determinación de un segundo analito. 21. El elemento de prueba de la modalidad 20, en donde el segundo material reactivo incluye una enzima deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de una glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbitol deshidrogenasa, y un ácido amino deshidrogenasa que comprende L-aminoácido deshidrogenasa. 22. El elemento de prueba de la modalidad 21, en donde el segundo material reactivo incluye además una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente 0 o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN (R)2 en donde R en cada caso representa independientemente H o alquilo-?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2 NH, O NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, CI, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma. 23. El elemento de prueba de la modalidad 20, en donde la tira de prueba está configurada para la determinación electroquímica de los primero y segundo analitos. 24. Un método para determinar los primero y segundo analitos en una muestra, que comprende los pasos de: proporcionar un elemento de prueba de acuerdo con la modalidad 1; poner en contacto el elemento de prueba con la muestra; detectar el primer analito; y detectar el segundo analito. 25. El método de la modalidad 24, en donde el primer analito es hidroxibutirato y el segundo analito es glucosa. 26. El método de la modalidad 25, en donde los pasos de detectar el primer analito y detectar el segundo analito se realizan simulténeamente. 27. El método de la modalidad 25, en donde los pasos de detectar el primer analito y detectar el segundo analito se completan dentro de cinco segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra. 28. Un método, que comprende: proporcionar un elemento de prueba configurado para determinar los valores de glucosa y cetona en una muestra; poner en contacto el elemento de prueba con la muestra; y determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra dentro de 7.5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra. 29. El método de la modalidad 28, en donde el elemento de prueba incluye un primer material reactivo para determinar el valor de glucosa y un segundo material reactivo para determinar el valor de cetona. 30. El método de la modalidad 29, en donde el segundo material reactivo incluye una hidroxibutirato deshidrogenasa. 31. El método de la modalidad 28, en donde el paso de determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra se completa dentro de 5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra. 32. El método de la modalidad 28, en donde los valores de glucosa y cetona se determinan dentro de 2 segundos uno de otro durante el paso de determinación. 33. El método de la modalidad 28, en donde la muestra comprende sangre.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un elemento de prueba configurado para determinar los primero y segundo analitos, caracterizado porque comprende: una primera enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la primera enzima; una segunda enzima dependiente de la coenzima o un sustrato para la segunda enzima; una coenzima seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP, y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O u S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, o BCNH2-, V en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo-?1-?2, Ci, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, O NCH3 Y = NH, S, O, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, C1, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

2. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el primer analito es hidroxibutirato y la primera enzima es una hidroxibutirato deshidrogenasa.

3. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el hidroxibutirato deshidrogenasa es 3-hidroxibutirato deshidrogenasa.

4. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque la segunda enzima es una deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de una glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa , sorbitol deshidrogenasa, y una aminoácido deshidrogenasa que comprende L-amino ácido deshidrogenasa.

5. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque el segundo analito es glucosa y la segunda enzima es una glucosa deshidrogenasa o una glucosa oxidasa.

6. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = CON(R)2 en donde R significa H, Xi = O, x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) (P) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH.

7. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la coenzima es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = 0, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico de 5 miembros de la fórmula general (II) · Oí) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH.

8. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la coenzima es tio-NAD.

9. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la coenzima es tio- NADP.

10. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque además comprende un primer material reactivo, el primer material reactivo incluye la primera enzima o el sustrato para la primera enzima y la coenzima es seleccionada del grupo que consiste de tio-NAD, tio-NADP y el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

11. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque además comprende un segundo material reactivo, el segundo material reactivo que incluye la segunda enzima o el sustrato para la segunda enzima y una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y el compuesto de acuerdo con fórmula (I) o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

12. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque además comprende una tira de prueba configurada para portar los primero y segundo materiales reactivos.

13. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la tira de prueba incluye un primer sistema de electrodos asociado con el primer material reactivo y un segundo sistema de electrodos asociado con el segundo material reactivo.

14. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque el primer material reactivo comprende además uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio.

15. Un material reactivo, caracterizado porque comprende: 3-hidroxibutirato deshidrogenasa; y un compuesto de coenzima de acuerdo con la fórmula (I): en donde A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, C0N(R)2, COR, O CSN(R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo ?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, O NCH3. Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado de 0, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y X2 y en donde R4 = en cada caso significa independientemente H, F, Cl, o CH3, siempre que Z y el residuo piridina no estén unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma.

16. El material reactivo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el compuesto de la coenzima es de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina, T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en cada caso significa OH, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Ci= O x2 = o, Y = o, y Z = un anillo carbocíclico saturado de 5 miembros de la fórmula general · en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5' = CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6'= CH.

17. El material reactivo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el compuesto de la coenzima es de acuerdo con la fórmula (I) en donde A = adenina. T = en cada caso significa O, U = en cada caso significa OH, V = en un primer caso significa OH y en un segundo caso significa un grupo fosfato, W = C0N(R)2 en donde R significa H, Xi = O, X2 = 0, Y = O, y Z = un anillo carbocíclico saturado de 5 miembros de la fórmula general (II) (ii) en donde un enlace está presente entre R5' y R5", y en donde R4 = H, R5'= CHOH, R5"= CHOH, R5 = CR42, R6 = CH, y R6' = CH.

18. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizado porque además comprende uno de nitrosoanilina, ferricianuro de potasio, y una combinación de un derivado de fenazina y cloruro de hexaaminarutenio.

19. Un elemento de prueba, caracterizado porque comprende una tira de prueba que porta un primer material reactivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18 para determinar un primer analito.

20. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la tira de prueba porta además un segundo material reactivo para la determinación de un segundo analito.

21. El elemento de prueba de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el segundo material reactivo incluye una enzima deshidrogenasa seleccionada del grupo que consiste de una glucosa deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa, alcohol deshidrogenasa, sorbítol deshidrogenasa, y un ácido amino deshidrogenasa que comprende L-aminoácido deshidrogenasa.

22. El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 o 21, caracterizado porque el segundo material reactivo incluye además una coenzima seleccionada del grupo que consiste de FAD, NAD, NADP y un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde

A = adenina o un análogo de la misma, T = en cada caso significa independientemente O o S, U = en cada caso significa independientemente OH, SH, BH3-, O BCNH2-, V = en cada caso significa independientemente OH o un grupo fosfato, W = COOR, CON (R)2, COR, o CSN (R)2 en donde R en cada caso significa independientemente H o alquilo-?1-?2, Xi, X2 = en cada caso significan independientemente 0, CH2, CHCH3, C(CH3)2, NH, O NCH3, Y = NH, S, 0, o CH2, Z = un residuo que comprende un grupo cíclico con 5 átomos de carbono que contiene opcionalmente un heteroáto o seleccionado de O, S y N y opcionalmente uno o más sustituyentes, y un residuo de CR42 en donde CR42 está unido al grupo cíclico y a X2, y en donde R4 = en cada caso representa independientemente H, F, Cl , o CH3 , siempre que Z y el residuo piridina no esten unidos por un enlace glicosídico, o una sal u opcionalmente una forma reducida de la misma . 23 . El elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22 , caracterizado porque la tira de prueba está configurada para la determinación electroquímica de los primero y segundo analitos .

24 . Un método para determinar los primero y segundo analitos en una muestra, caracterizado porque comprende los pasos de : proporcionar un elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o 19 a 23; poner en contacto el elemento de prueba con la muestra; detectar el primer analito; y detectar el segundo analito.

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el primer analito es hidroxibutirato y el segundo analito es glucosa.

26. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 o 25, caracterizado porque los pasos de detectar el primer analito y detectar el segundo analito se realizan simultáneamente.

27. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, caracterizado porque los pasos de detectar el primer analito y detectar el segundo analito se completan dentro de cinco segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra.

28. Un método, caracterizado porque comprende: proporcionar un elemento de prueba de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o 19 a 23 configurado para determinar los valores de glucosa y cetona en una muestra; poner en contacto el elemento de prueba con la muestra; y determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra dentro de 7.5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra.

29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el elemento de prueba incluye un primer material reactivo para determinar el valor de glucosa y un segundo material reactivo para determinar el valor de cetona.

30. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el segundo material reactivo incluye una hidroxibutirato deshidrogenase.

31. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 30, caracterizado porque el paso de determinar los valores de glucosa y cetona en la muestra se completa dentro de 5 segundos después de poner en contacto el elemento de prueba con la muestra.

32. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 31, caracterizado porque los valores de glucosa y cetona se determinan dentro de 2 segundos uno de otro durante el paso de determinación.

33. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 32, caracterizado porque la muestra comprende sangre.