MX2015000730A - Tratamientos terapeuticos novedosos con anticuerpos anti-her2 que tienen una fucosilacion baja. - Google Patents

Abstract

La presente invención pertenece al campo de la terapia de cáncer utilizando anticuerpos anticáncer. Se proporciona el uso médico de anticuerpos anti-HER2 que tienen características de glicosilación mejoradas, en particular, una fucosilación reducida, los cuales muestran una eficacia aumentada.

Description

TRATAMIENTOS TERAPEUTICOS NOVEDOSOS CON ANTICUERPOS ANTI- HER2 QUE TIENEN UNA FUCOSILACION BAJA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a usos médicos novedosos de anticuerpos anti-HER2 que tienen características de glicosilación mejoradas. Dichos anticuerpos anti-HER2 muestran una eficacia terapéutica en donde la terapia con anticuerpos terapéuticos comunes y agentes quimioterapéuticos ha fallado o es menos eficaz, permitiendo de ese modo tratar con éxito grupos de pacientes nuevos y en particular pacientes, que no se pueden tratar con éxito con la terapia de anticuerpos anti-HER2 convencional. En particular, la presente invención proporciona tratamientos anti-metastásicos novedosos así como tratamientos novedosos para pacientes pretratados, incluyendo pacientes severamente pretratados que sufren de un cáncer metastásico en donde el cáncer o metástasis resurgió a pesar del tratamiento previo. Adicionalmente, la presente invención se refiere a- usos médicos novedosos de anticuerpos anti-HER2 que tienen características de glicosilación mejoradas en el tratamiento de enfermedades HER2 positivas que muestran solamente una baja sobreexpresión de HER2, en particular, los cánceres HER2 positivos que tienen una expresión de HER2 de 1+ o 2+ según se determina mediante inmunohistoquímica (IHC).

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los anticuerpos son agentes de uso extendido en el campo de la medicina y la investigación. En medicina, encuentran aplicación en muchos campos diferentes, en particular, como agentes terapéuticos en el tratamiento y profilaxis de una variedad de enfermedades, en particular, enfermedades neoplásicas tales como cáncer. Sin embargo, los resultados terapéuticos obtenidos mediante la terapia con anticuerpos de pacientes con cáncer son sumamente variables. Un porcentaje significativo de las terapias que utilizan anticuerpos anti-cáncer no muestra o solamente muestra un pequeño alivio de la enfermedad y, a veces se limitan a grupos de pacientes específicos.

Los anticuerpos anti-cáncer establecidos ilustrativos son anticuerpos contra el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2). La proteína del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) se piensa que es un objetivo único y útil para la terapia con anticuerpos contra los cánceres que sobreexpresan el gen HER-2/neu. HER2 es sobreexpresado en diversos tipos de cáncer, incluyendo, pero no limitados al cáncer de mama, cáncer de colon, adenocarcinomas de esófago avanzados, adenocarcinomas gástricos o adenocarcinomas de la unión gastroesofágica. Por ejemplo, el HER2 es sobreexpresado en 20 a 30% de los cánceres de mama humanos y se correlaciona con un pronóstico clínico malo en mujeres con enfermedad de ganglios positivos y de ganglios negativos. La sobreexpresión de HER2 también se ha asociado con tumores más agresivos. Para el tratamiento de tumores HER2 positivos, tales como, en particular, cáncer de mama, el uso de los anticuerpos anti-HER2 es una forma establecida de terapia. El anticuerpo monoclonal anti-HER2 recombinante humanizado llamado trastuzumab (Herceptin®) fue aprobado para uso clínico en Estados Unidos en 1998 y está aprobado para el tratamiento del cáncer de mama, incluyendo el cáncer de mama metastásico y el cáncer gástrico metastásico. El trastuzumab se utiliza como monoterapia y terapia de combinación. El trastuzumab se expresa en células CHO (células de hámster) y por lo tanto, es sumamente fucosilado. Las tasas de respuesta al anticuerpo dado como un agente único (monoterapia) han variado de 15-26%.

Otro anticuerpo anti-HER2 es el anticuerpo pertuzumab (también conocido como anticuerpo monoclonal 2C4 recombinante humano; OMNITARG®), que representa el primero de una nueva clase de anticuerpos que son conocidos como inhibidores de la dimerización de HER (HDI) y funciona para inhibir la capacidad del HER2 para formar heterodímeros activos con otros receptores HER (tales como EGFR/HER1, HER3 y HER4) y es activo, independientemente de los niveles de expresión de HER2. El bloqueo pertuzumab de la formación de heterodímeros HER2/HER3 en las células tumorales ha demostrado inhibir la señalización celular critica, lo que tiene como resultado la proliferación y supervivencia tumoral reducidas. El pertuzumab ha sido sometido a pruebas como un agente único en la clínica. En un estudio de fase I, los pacientes con tumores sólidos recurrentes o metastásicos, localmente avanzados, incurables que habían progresado durante o después de la terapia estándar fueron tratados con pertuzumab administrado por vía intravenosa cada 3 semanas. La regresión del tumor se logró en 3 de 20 pacientes evaluables para respuesta. 2 pacientes habían confirmado respuestas parciales. Enfermedad estable que duró más de 2.5 meses se observó en 6 de 21 pacientes. Estos resultados destacan las dificultades para lograr incluso una respuesta parcial o estabilización de la enfermedad. Muy a menudo, un efecto beneficioso tal como la regresión del tumor o una estabilización de la enfermedad solamente se observa durante unos cuantos meses antes de que la enfermedad progrese con el tiempo.

Los anticuerpos afucosilados han mostrado tener una citotoxicidad mediada por células y dependiente de anticuerpos (ADCC) aumentada y por lo tanto, proporcionan una oportunidad para el desarrollo de anticuerpos biomejorados. La evidencia sugiere que la ausencia de fucosa de la N-acetilglucosamina primaria, tiene como resultado la afinidad aumentada de la unión de anticuerpos IgGl al receptor FcYRIIIa con la consiguiente eficacia de ADCC aumentada, mediada por células asesinas naturales (NK). Esto se confirma en estudios que emplean glicoformas no fucosiladas producidas en células CHO mutantes que son deficientes además del residuo de fucosa, en particular las células CHO en las cuales la enzima OÍ(1-6) fucosil transferasa se ha noqueado. La afinidad de la glicoforma de IgGl no fucosilada por FCYRI O el componente C1 del complemento se reportó como no afectada; se reportó un pequeño aumento en la afinidad por FcYRIIa y FcYRIIb, pero debido a que se mantuvo la relación de activación/inhibitoria, se concluyó que no sería funcionalmente significativa. La ADCC aumentada que se observó para IgG-Fc afucosilada tiene como resultado, en parte, la afinidad aumentada que supera la competencia de IgG sérica normal por FcYRIIIa. La ADCC mejorada también se presentó para trastuzumab afucosilado. El receptor FcyRIIIa es polimórfico y se ha mostrado que la forma FcYRIIIa-158V (valina) tiene una mayor afinidad por IgGl que la forma FcYRIIIa-158F (fenilalanina). Se demostró in vitro que el anticuerpo IgGl fucosilado es más eficiente en la mediación de la ADCC a través de células homocigotas portadoras de FcYRIIIa-158V que a través de células homocigotas portadoras de FcYRIIIa-158F o células heterocigotas portadoras de FcYRIIIa-158V/FcYRIIIa-158F. Se anticipó, por tanto, que diferencias similares, en la eficacia de la ADCC podrían estar relacionadas in vivo, dependiendo de la forma polimórfica de FCyRIIIa expresada. El uso de anticuerpos afucosilados para el tratamiento de respectivas subpoblaciones de pacientes de respuestas débiles que son F/F ho ocigotos o V/F heterocigotos se sugiere en la téenica anterior, por ejemplo, US 2006/0182741. Los anticuerpos afucosilados y los anticuerpos con un contenido reducido de fucosa también se describen en EP 1 500 400 y WO 2008/028686. Los resultados in vitro para los anticuerpos anti-HER2 no fucosilados se describen en Suzuki et al., Clinical Cáncer Research 2007; 13:1875-1882; Juntilla et al., Cáncer Research 2010; 70:4481-4489 y Zhang et al., mAbs 3:3, 289-298, 2011. En estos documentos, los anticuerpos anti-HER2 que tienen una fucosilación reducida se compararon con el anticuerpo trastuzumab (Herceptin®), el cual, debido a su producción en las células CHO tiene una alta fucosilación en la región Fe. Los resultados demuestran que el anticuerpo anti-HER2 que tiene un contenido reducido de fucosa muestra una actividad de ADCC superior. Sin embargo, la relevancia terapéutica de estos resultados en las aplicaciones clínicas de estos anticuerpos aún no se ha demostrado.

Un problema general con los anticuerpos anti-HER2 tal como trastuzumab es que solamente son activos en tumores que sobreexpresan HER2. En consecuencia, solamente una pequeña población de pacientes es apta para un respectivo tratamiento. Ensayos clínicos con trastuzumab mostraron que los pacientes con una expresión de HER2 de nivel 0 a 1+ (determinado por IHC) regularmente no se benefician del fármaco y solamente unos cuantos pacientes con una expresión de nivel 2+ sí se benefician del fármaco. Se benefician más pacientes con una expresión de nivel 3+. Sin embargo, incluso en los grupos de pacientes que tienen nivel 3+ hay una cantidad sustancial de baja o nula respuesta. Se encontró que aunque el trastuzumab muestra una gran afinidad por el receptor HER2 y se puede administrar una alta dosis (debido a su baja toxicidad), por lo menos 70% de los pacientes con HER2+ no responden al tratamiento. Ninguna o solamente una actividad antitumoral reducida se reportó incluso para por lo menos 80% de los pacientes, en particular aquellos del alotipo del receptor F/F y F/V. De hecho, la resistencia se desarrolla regularmente y la enfermedad progresa. En muchos casos, el tiempo para la progresión de la enfermedad solamente se retrasa durante unos cuantos meses, si es que se retrasa.

Los pacientes que sufren de un cáncer HER2 positivo en donde ha fracasado un tratamiento con anticuerpos anti-HER2 convencionales tal como trastuzumab, respectivamente, en donde la enfermedad progresa a pesar del tratamiento con anticuerpos anti-HER2, a menudo han limitado las opciones terapéuticas. Este es en particular el caso, si el paciente ha recibido tratamientos quimioterapéuticos anteriores o simultáneos que tampoco pudieron evitar la progresión de la enfermedad. Tales tratamientos quimioterapéuticos anteriores o simultáneos se encuentran a menudo en el grupo de pacientes en donde los anticuerpos anti-HER2 tal como trastuzumab fracasan, debido a que el trastuzumab se administra en el cáncer de mama metastásico como monoterapia para el tratamiento de pacientes que ya han recibido por lo menos dos regímenes quimioterapéuticos (y en consecuencia son pretratados) y en otras indicaciones como terapia de combinación con agentes quimioterapéuticos tales como paclitaxel o docetaxel. Si la enfermedad progresa a pesar del tratamiento múltiple con agentes quimioterapéuticos y/o anticuerpos anti-HER2, el pronóstico de supervivencia del paciente es bajo. Aquí, también debe tenerse en cuenta que el estado de salud general del paciente disminuye a medida que el número de tratamientos aumenta y la enfermedad progresa. Los pacientes pretratados severamente a menudo tienen un estado de rendimiento malo (ECOG) y en consecuencia son excluidos de tratamientos agresivos adicionales tal como quimioterapia adicional. El pronóstico de supervivencia es particularmente bajo, si el cáncer primario metastatiza y continúa metastatizando a pesar del tratamiento.

La metástasis o enfermedad metastásica es la propagación de una enfermedad desde un órgano o parte a otro órgano o parte no adyacente. El cáncer se produce después de que una sola célula en un tejido es dañada genéticamente de forma progresiva para producir una célula madre cancerosa que posee un fenotipo maligno. Estas células madre cancerosas son capaces de experimentar una mitosis anormal incontrolada que sirve para aumentar el número total de células cancerosas en esa ubicación. Cuando el área de las células cancerosas en el lado de origen se vuelve clínicamente detectable, esto se llama un tumor primario. Algunas células cancerosas también adquieren la capacidad de penetrar e infiltrar tejidos normales circundantes y el área local, formando un nuevo tumor. El tumor de "células hijas" nuevamente formado en el lado adyacente dentro del tejido se denomina una metástasis local. Algunas células cancerosas adquieren la capacidad de penetrar las paredes de los vasos linfáticos y/o sanguíneos, después de lo cual son capaces de circular a través del torrente sanguíneo (células tumorales circulantes) a otros lados y tejidos en el cuerpo. Este proceso se conoce como diseminación linfática o hematógena.

Después de que las células tumorales van a asentarse en otro lado, vuelven a penetrar los vasos o paredes y continúan multiplicándose, formando eventualmente otro tumor Clínicamente detectable. Este nuevo tumor se conoce como un tumor metastásico (o secundario). La metástasis es un símbolo de malignidad. La mayoría de los tumores en otras neoplasias pueden metastatizar, aunque en diferentes grados. Cuando las células tumorales metastatizan, el nuevo tumor se denomina un tumor secundario o metastásico, y sus células son similares a aquellas en el tumor original. Esto significa, por ejemplo, que, si el cáncer de mama metastatiza a los pulmones, el tumor secundario se compone de células de mama anormales, no de células pulmonares anormales.

Los tumores metastásicos son muy comunes en las últimas etapas del cáncer. La propagación de la metástasis puede producirse a través de la sangre o de los vasos linfáticos o a través de ambas rutas. Si la metástasis se produce por diseminación linfática, la invasión en el sistema linfático es seguida por el transporte de las células tumorales a ganglios linfáticos regionales y finalmente a otras partes del cuerpo. Esta es la ruta más común de metástasis para carcinomas. Las células cancerosas se pueden diseminar en ganglios linfáticos (ganglios linfáticos regionales) cerca del tumor primario. Esto se denomina afectación ganglionar, ganglios positivos o enfermedad regional. Es una práctica médica común probar mediante biopsia por lo menos a los ganglios linfáticos cercanos a un sitio del tumor cuando se hace la cirugía para examinar o extirpar un tumor. La diseminación localizada de los ganglios linfáticos regionales cercanos al tumor primario normalmente no se cuenta como metástasis, aunque esto es un signo de mal pronóstico. El transporte a través de los vasos linfáticos es la vía más común para la diseminación inicial de carcinomas.

Los lugares más comunes para que la metástasis se produzca son los pulmones, el hígado, el cerebro y los huesos. Sin embargo, también la piel, las metástasis se encuentran y se producen a menudo en tipos de cáncer específicos tal como el cáncer de mama. La metástasis cutánea (o metástasis de piel - los términos se usan como sinónimos en la presente) se refiere al crecimiento de células cancerosas en la piel que se originan de un cáncer interno. En la mayoría de los casos, las metástasis de piel se desarrollan después del diagnóstico inicial de la malignidad interna primaria (por ejemplo, cáncer de mama o cáncer de pulmón) y tardía en el curso de la enfermedad. La metástasis de piel se produce cuando las células cancerosas se separan del tumor primario y se dirigen hacia la piel a través de la circulación sanguínea o del sistema linfático.

La mayoría de los tumores malignos pueden producir metástasis de piel, pero algunos son más probables que lo hagan que otros. Las fuentes más comunes de metástasis de piel en las mujeres son mama (69%), colon (9%), melanoma (5%), ovarios (4%) y pulmones (4%). La mayoría de las metástasis de piel se producen en una región corporal cercana al tumor primario. Pueden romperse y ulcerarse y por consiguiente romperse a través de la piel. Un tumor ulcerado generalmente se puede desarrollarse de dos maneras. Se puede desarrollar como parte de un tumor primario o como un tumor secundario, es decir, como una metástasis. Tal como se describió anteriormente, si un tumor se disemina en el sistema sanguíneo y linfático puede desplazarse a la piel y desarrollarse como un tumor ulcerado. Esto es raro y comúnmente solo ocurre en las etapas avanzadas del cáncer. Para algunas personas, un tumor ulcerado es el aspecto más molesto de su cáncer y puede afectar en gran medida cómo se siente el paciente acerca de sí mismo si el tumor ulcerado es visible para otras personas, por ejemplo en la cara o en el abdomen. Además, los tumores ulcerados también pueden oler desagradable. En el cáncer de mama, las partes más comunes de metástasis de piel son el pecho y el abdomen. Con el fin de tratar las metástasis de piel, se debe tratar el tumor primario subyacente. Sin embargo, en la mayoría de los casos en donde se ha producido metástasis de piel, el cáncer primario está muy extendido y puede ser intratable. En este caso, se puede dar solamente cuidado paliativo.

El tratamiento y la supervivencia de un paciente afectado con metástasis se determinan generalmente por si o no un cáncer es local o se ha diseminado en otros lugares. Si el cáncer se disemina en otros tejidos y órganos, se puede disminuir la probabilidad de supervivencia de un paciente. La elección del tratamiento depende generalmente del tipo de cáncer primario, el tamaño y la ubicación de las metástasis, la edad y la salud general del paciente, y los tipos de tratamientos usados previamente. Tal como se describió anteriormente, la tasa de mortalidad es particularmente elevada en los pacientes con metástasis de piel, en particular, con metástasis de piel ulcerativas avanzadas. El aspecto de las metástasis de piel indica enfermedad metastásica generalizada, lo que resulta en un mal pronóstico para el paciente.

Los oncólogos clínicos están de acuerdo en que el fracaso del tratamiento de cáncer no es necesariamente causado por el crecimiento del tumor primario, que generalmente es tratado con el uso de cirugía, sino más bien por la propagación metastásica en diferentes órganos. Por lo tanto, es importante el tratamiento eficaz de las metástasis, incluyendo la prevención de las metástasis, la inhibición del crecimiento de la metástasis y la prevención de la propagación adicional de las metástasis. Se sabe que la regresión de tumores primarios mediante diferentes fármacos anticáncer no siempre es indicativa para la actividad anti-metastásica per se. Por el contrario, el aumento de la metástasis se ha observado en respuesta a diversos fármacos anticáncer. Adicionalmente, los agentes quimioterapéuticos, así como anticuerpos terapéuticos muestran un grado diferente de actividad antimetastásica que también depende de la localización de la metástasis.

Se sabe que una terapia con anticuerpos anti-HER2 puede ser útil para tratar tumores primarios, asi como metástasis. Sin embargo, se sabe en la téenica anterior que los anticuerpos anti-HER2 tales como trastuzumab muestran una eficacia más bien divergente en diferentes tipos de metástasis. Por ejemplo Sawaki et al. (Tumori, 20:40-43, 2004: Eficacia y seguridad de trastuzumab como un agente único y pacientes severamente pretratados con cáncer de mama metastásico que sobreexpresa HER-2/ NEU) analizaron cómo respondieron diferentes tipos de metástasis a la terapia con trastuzumab. Se confirmó que los pacientes sobreexpresaron el producto gen HER2. Sawaki describe como un resultado del estudio clínico que, 11.5% de los pacientes tuvieron una respuesta completa al tratamiento con trastuzumab, 11.5% tuvieron una respuesta parcial, 11.5% no tuvieron ningún cambio y 65% de los pacientes mostraron enfermedad progresiva. El tiempo para la progresión de la enfermedad fue de 3.1 meses (mediana) y la mediana de duración de la respuesta fue de 6.4 meses. Los pacientes analizados fueron pretratados con quimioterapia convencional y fueron refractarios a dicha terapia. La mayoría de los pacientes habían recibido múltiples regímenes quimioterapéuticos y por lo tanto, la población de estudio analizada en general tuvo un pronóstico muy malo. Tal como se discutió anteriormente, entre más fallidos sean los tratamientos que recibe un paciente, más malo es su pronóstico. Sawaki concluye que el trastuzumab es activo como un agente único en mujeres con cáncer de mama metastásico que sobreexpresa HER2 que ha progresado después de la quimioterapia, aunque Sawaki concluye que el efecto se considera que carece de suficiente eficacia. Adicionalmente, Sawaki reporta que las tasas de respuesta observadas también difirieron seriamente por el sitio de la metástasis. Sawaki concluye que los resultados obtenidos en el estudio sugieren que el trastuzumab no es eficaz como un agente único contra metástasis viscerales, en particular, metástasis del hígado y metástasis del pulmón y metástasis del cerebro. Se observó una tasa de respuesta del 50% con metástasis de piel, del 43% con ganglios linfáticos, del 10% con metástasis ósea pero no hay ninguna respuesta en relación con metástasis del pulmón y del hígado. Sin embargo, teniendo en cuenta las bajas tasas de respuesta globales esto subraya que el trastuzumab no es eficaz en un gran número de pacientes y en particular pacientes que sufren de metástasis específicas tales como metástasis del pulmón o del hígado.

Rossi et al. (Anticancer research 24:317-320 (2004)) informan de un caso en donde metástasis de médula ósea que se produjo en un paciente severamente pretratado que sufría de cáncer de mama metastásico se pudo tratar eficazmente con trastuzumab. El paciente logró una recuperación completa de los recuentos de células de sangre pero murió al final debido a una progresión de metástasis del pulmón. Rossi informa que la mediana del tiempo de supervivencia después del diagnóstico de cáncer de mama metastásico es de 18 a 24 meses, pero señala que esto varía ampliamente de conformidad con el sitio metastásico de la enfermedad. La mediana del tiempo de supervivencia ha sido tradicionalmente menor para los pacientes con enfermedad visceral (de 6 a 13 meses) versus aquellos con enfermedad ósea solamente (de 18 a 30 meses).

Gori et al. (The Oncologist 2007; 12:766-773: Metástasis del sistema nervioso central en pacientes con cáncer de mama metastásico HER-2 positivos tratados con trastuzumab: incidencia, supervivencia, y factores de riesgo) describe un estudio observacional para evaluar la incidencia de la metástasis del SNC en pacientes con cáncer de mama metastásico HER-2 positivos para definir el resultado de los pacientes con metástasis del SNC e identificar los factores de riesgo para la recaída. Gori informa que las metástasis viscerales son el sitio dominante en la recaída y que esto está asociado con un riesgo significativamente mayor de metástasis del SNC. Esto destaca la importancia de un tratamiento eficaz de las metástasis viscerales.

En vista de lo anterior, es evidente que existe una gran demanda de tratamientos mejorados de enfermedades neoplásicas HER2 positivas, en particular, cánceres metastásicos HER2 positivos. Adicionalmente, existe una gran demanda por proporcionar programas de tratamiento eficaces para los pacientes en donde la enfermedad progresa a pesar del tratamiento previo con anticuerpos anti-HER2 y/o agentes quimioterapéuticos, y en particular, existe una demanda por proporcionar opciones de tratamiento para los pacientes severamente pretratados. En particular, existe una gran demanda por proporcionar opciones eficaces para el tratamiento de metástasis HER2 positivas, en particular, metástasis de piel, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón y de hígado. Adicionalmente, existe una demanda por proporcionar tratamientos mejorados para cánceres HER2 positivos que solamente muestran una baja o moderada expresión de HER2, en particular, HER2 1+ o HER2 2+ según se determina mediante IHC.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los anticuerpos anti-HER2 de conformidad con la presente invención que tienen una fucosilación (incluyendo ausente) reducida en su región Fe demuestran en los ensayos clínicos informados en la presente una eficacia terapéutica notable e inesperada para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular cáncer. Los anticuerpos anti-HER2 descritos en la presente son terapéuticamente activos contra cánceres primarios y metástasis. También mostraron ser terapéuticamente eficaces contra cánceres primarios y metástasis resistentes o refractarias a los tratamientos de cáncer convencionales. Adicionalmente, los anticuerpos anti-HER2 de conformidad con la presente invención que tienen una fucosilación (incluyendo ausente) reducida en su región Fe demuestran una buena eficacia terapéutica contra cánceres HER2 positivos, que solamente muestran una baja o moderada expresión de HER2 (por ejemplo, 1+ o 2+ según se determina mediante IHC). En particular, dichos anticuerpos anti-HER2 son eficaces contra metástasis y tumores primarios resistentes o refractarios a los tratamientos de cáncer convencionales. En particular, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención mostraron una alta eficacia terapéutica contra cánceres primarios y metástasis que fueron o se volvieron resistentes al tratamiento con anticuerpos anti-HER2 convencionales que tienen una alta fucosilación y/o fueron o se volvieron resistentes al tratamiento con uno o más agentes quimioterapéuticos. Con base en los resultados informados en la presente, la presente invención proporciona programas de tratamiento médico novedosos que permiten tratar a grupos específicos de pacientes que no podían o ya no pueden ser tratados con terapia convencional, en particular la terapia convencional con anticuerpos anti-HER2, incluyendo terapias de combinación que incluían anticuerpos anti-HER2 convencionales. En particular, la presente invención proporciona programas de tratamiento exitosos para pacientes severamente pretratados, es decir, pacientes que han recibido múltiples líneas de tratamientos anticáncer anteriores en donde, sin embargo, tales tratamientos anteriores fracasaron y en donde dichos pacientes tienen metástasis de propagación extendida. Los datos presentados en esta solicitud demuestran que tales pacientes se pueden tratar con éxito siguiendo las enseñanzas de la presente invención, incluso si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención se administra como monoterapia. El éxito del tratamiento se observó con numerosas metástasis diferentes, incluyendo metástasis de piel ulcerativa, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales, en particular metástasis de pulmón y de hígado. La fuerte eficacia antimetastásica demostrada es un éxito clínico importante, ya que el tratamiento de este sub-grupo de pacientes específico de pacientes severamente pretratados con metástasis es particularmente-difícil y de esta manera, este grupo de pacientes tiene un pronóstico de supervivencia muy malo. La presente invención proporciona tratamientos novedosos exitosos para dichos pacientes, incluso en un escenario de monoterapia. Adicionalmente, tal como se demuestra por los datos presentados en la presente, se logra el éxito terapéutico incluso cuando se administran dosificaciones bajas del anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la presente invención. Adicionalmente, el efecto terapéutico se observó muy rápidamente, demostrando de ese modo la eficacia terapéutica notable de los anticuerpos anti-HER2 de conformidad con la presente invención en este grupo de pacientes. Por ejemplo, en un paciente severamente pretratado que sufre de cáncer de mama metastásico y metástasis de piel ulcerativa severa en donde múltiples tratamientos anteriores con agentes quimioterapéuticos y anticuerpos anti-HER2 convencionales fracasaron, y la enfermedad progresó, la metástasis de piel ulcerativa ya comenzó a sanar 8 dias después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 (monoterapia) de conformidad con la presente invención y eventualmente, se pudo aliviar totalmente. Adicionalmente, también en un paciente severamente pretratado que sufría de cáncer de colon metastásico y que tenía metástasis de pulmón y de hígado en donde tratamientos anteriores con agentes quimioterapéuticos y anticuerpos anticáncer convencionales fracasaron y la enfermedad progresó, se observó una reducción significativa (44%) de las lesiones objetivo cuando el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención se administró en un escenario de monoterapia.

Adicionalmente, los datos presentados en la presente también demuestran que los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente se pueden utilizar ventajosamente para el tratamiento de cánceres HER2 positivos y en particular, cánceres metastásicos que presentan una baja sobreexpresión de HER2 de 1+ o 2+ (según se determina mediante inmunohistoquímica), de nuevo también en pacientes pretratados en donde tratamientos con numerosos otros agentes anticáncer fracasaron. Adicionalmente, en los estudios clínicos realizados se demostró que los anticuerpos anti-HER2 de conformidad con la presente invención son bien tolerados y que los efectos secundarios observados se redujeron en comparación con las terapias con anticuerpos convencionales. Esto es una ventaja importante teniendo en cuenta el estado de salud de los pacientes severamente pretratados, la cual a menudo excluye terapias agresivas tal como quimioterapia adicional .

Adicionalmente, los datos presentados en la presente solicitud muestran un efecto terapéutico en pacientes que hasta ahora no pudieron ser tratados con éxito con anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa tal como por ejemplo, trastuzumab, por ejemplo, pacientes que sufren de metástasis viscerales tales como metástasis de hígado y de pulmón.

Con base en los resultados anteriores, la presente invención en un primer aspecto proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50%, preferiblemente 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos y lo más preferible de 10% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer metastásico.

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 40% o menos, preferiblemente 30% o menos, 20% o menos, más preferiblemente 15% o menos, lo más preferible de 10% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular cáncer, en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente se ha tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más, en particular 70% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no es glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. Dicho cáncer puede ser un cáncer metastatizante y/o un cáncer que tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o menos, tal como nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC).

En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos, lo más preferible de 10% a 0% o de 10% a 3% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC). El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es particularmente útil para el tratamiento de cáncer metastatizante. Adicionalmente, con base en los resultados anteriores, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50%, preferiblemente 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos, lo más preferible de 10% a 0% o de 10% a 3% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer metastatizante HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC).

Tal como se discutió anteriormente, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente son particularmente eficaces contra las metástasis. Adicionalmente, son particularmente eficaces para el tratamiento de pacientes pretratados y también severamente pretratados y en particular en pacientes que están sufriendo de metástasis, en particular, metástasis viscerales, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis de piel ulcerativa. Los efectos terapéuticos se observaron incluso cuando se administró el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida como monoterapia. Por lo tanto, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención demostró ser muy eficaz y programas de tratamiento eficaces novedosos se proporcionan por la presente invención. El grado de mejora de la eficacia terapéutica de los anticuerpos anti-HER2 poco fucosilados de conformidad con la invención y las opciones de tratamiento resultantes del mismo fueron inesperados incluso en vista de los datos in vitro existentes que demuestran una actividad de ADCC aumentada tras la desfucosilación. En particular, fue sorprendente la posibilidad de tratar eficazmente pacientes que sufren de metástasis que no se pueden tratar regularmente con anticuerpos anti-HER2 sumamente fucosilados convencionales, ya que esto no es simplemente una mejora de un efecto terapéutico ya existente, sino que representa una transformación de un agente terapéutico ineficaz (el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa) en un agente terapéutico sumamente activo (el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida). Tal como se describe en la presente, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente son sumamente eficaces incluso en dosificaciones bajas y son capaces de tratar metástasis tales como metástasis de piel ulcerativas, metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón y/o metástasis de hígado y metástasis de ganglios linfáticos. Adicionalmente, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida también fueron eficaces en cánceres HER2 positivos que solamente tenían una baja sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior e incluso de nivel 1+ (tal como se determina mediante inmunohistoquímica). El efecto terapéutico conseguido se observa muy rápidamente, incluso cuando los anticuerpos de fucosa reducida se administran como monoterapia. Por lo tanto, la presente invención hace una importante contribución a las terapias de cáncer existentes.

Como es evidente a partir de la descripción anterior y posterior, los diferentes aspectos de la presente invención se pueden combinar. Por ejemplo, tal como se muestra en los ejemplos, los anticuerpos anti-HER2 de la invención se pueden utilizar para tratar metástasis y tumores primarios resistentes o refractarios a los tratamientos de cáncer convencionales. La posibilidad de tratar con éxito tales pacientes pretratados y severamente pretratados que sufren de cáncer metastatizante y en particular, con múltiples metástasis existentes es una importante contribución que se hace por la invención. Adicionalmente, es una ventaja que los anticuerpos anti- HER2 de la invención sean eficaces en cánceres HER2 positivos que tienen una baja sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior. Por lo tanto, se proporcionan opciones de tratamiento para los pacientes antes mencionados, incluso si tienen tal cáncer que expresa poco HER2.

En un cuarto aspecto, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad neoplásica HER2 positiva, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente de 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) a dicho paciente en una cantidad suficiente para tratar la enfermedad neoplásica. Las características y modalidades de los otros aspectos de la invención asimismo también se aplican al método de tratamiento de la invención. En particular, la enfermedad neoplásica HER2 positiva puede ser un cáncer metastatizante tal como se describe en la presente, y/o el paciente puede haber recibido uno o más tratamientos contra el cáncer anteriores tal como se describe en la presente, y/o la enfermedad neoplásica HER2 positiva puede ser un cáncer HER2 positivo que tiene una expresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC) tal como se describe en la presente.

Otros objetivos, características, ventajas y aspectos de la presente invención serán evidentes para aquellos expertos en la téenica a partir de la siguiente descripción y reivindicaciones adjuntas. Se debe entender, sin embargo, que la siguiente descripción, reivindicaciones adjuntas, y ejemplos específicos, que indican modalidades preferidas de la solicitud, se dan a modo de ilustración solamente. Varios cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención descrita llegarán a ser fácilmente evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la lectura de lo siguiente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra la vida media sérica tl/2 como una función de la dosis de infusión/peso corporal después de la primera infusión. Fue- Trastuzumab: círculos negros; Fuc+ trastuzumab (Herceptin ®): círculos grises.

Las Figuras 2A a 2E muestran la impresionante curación de las metástasis de piel ulcerativas que comenzó dentro de los 8 días después de la Ia dosis y se completó después de 6 semanas (2a dosis). Dosificación: 240 mg de Fue- trastuzumab cada tres semanas. Figura 2A: Antes del tratamiento (inicio del estudio); la Figura 2B: Después de 1 semana (ciclo 1, dia 8), 1 dosis de 240 mg de Fuc-trastuzumab; la Figura 2C: Después de 3 semanas (ciclo 2, dia 1), 1 dosis de 240 mg de Fue- trastuzumab; la Figura 2D: Después de 5 semanas (ciclo 2, dia 15), 2 dosis de 240 mg de Fue- trastuzumab; la Figura 2E: Después de 6 semanas (ciclo 3, dia 1), 2 dosis de 240 mg de Fuc-trastuzumab.

Las Figuras 3A y 3B muestran la unión de Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) en diferentes lineas celulares analizadas mediante citometria de flujo. Se muestran los valores de la media de los duplicados ± DS. La Figura 3A: Herceptin® la Figura 3B: Fue- trastuzumab.

La Figura 4A muestra la expresión de HER2/neu en células ZR-75-1 después de 4 dias de incubación con Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®). Se muestran los valores de la media del porcentaje de células HER2 positivas con respecto al control del medio ± DS obtenidos a partir de dos experimentos de citometria de flujo independientes cada uno realizado por duplicado.

La Figura 4B muestra una transferencia Western de U sados de células ZR-75-1 incubadas con Fue- trastuzumab, Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) o hlgGl y el medio como un control negativo a una concentración de 0.1 mg/ml durante 3 dias.

La Figura 5 muestra la inhibición de la Proliferación de células SK-BR-3 por Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®). El tiempo de incubación con los anticuerpos fue de 4 dias. Se muestra el porcentaje de proliferación en comparación con el control del medio. Se dan los valores de la media + EEM de 3 experimentos independientes realizados con 6 mediciones repetidas.

La Figura 6 muestra un ensayo de apoptosis de la caspasa-3 activa utilizando células BT474 después de 6h de incubación con Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) y proteina G. Se muestran los valores de la media del porcentaje de células positivas de la caspasa-3 escindidas (células apoptóticas) ± DS de mediciones por duplicado.

Las Figuras 7A, 7B y 7C muestran un ensayo de ADCC en células SK-BR-3 con Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) utilizando PBMC humanas primarias de donantes con diferentes alotipos FcyRIIIa. Se dan los valores de la media de lisis especifica ± EEM de triplicados. Figura 7A: donante VV; Figura 7B: donante FV; Figura 7C: donante FF.

Las Figuras 8A y 8B y 8C muestran un ensayo de ADCC en células MCF-7 con PBMC humanas primarias de donantes con diferentes alotipos FcyRIIIa. Tiempo de incubación 5h, relación E:T 50:1. Se dan los valores de la media de lisis especifica ± EEM de triplicados. Figura 8A: donante VV; Figura 8B: donante FV; Figura 8C: donante FF.

Las Figuras 9A y 9B muestran una comparación de las concentraciones de Fue- trastuzumab y Herceptin® que se requieren con el fin de lograr la misma lisis especifica en células MCF-7 (a una lisis especifica de 95% de la máxima lisis de Herceptin), asi como el factor (factor de mejora) mediante el cual la concentración de Fue- trastuzumab se redujo con el fin de lograr la misma lisis especifica como Herceptin® a 95% de su máxima lisis. Los símbolos negros representan donantes individuales, los símbolos rojos representan los valores de la media de todos los donantes (véase Figura 9A). Los valores de la media de todos los donantes se muestran como líneas en Figura 9B. El incremento máximo de ADCC mediada por Fue- trastuzumab para tumores que expresan menor HER2 (MCF-7) es hasta 140 veces, con 42 en la media. De esta manera, una ADCC antitumoral en gran medida mejorada se logró para todos los alotipos de los pacientes.

Las Figuras 10, 11, 12A y 12B muestran los resultados de experimentos similares a los mostrados en las Figuras 6 a 8A, 8B y 8C. Se proporcionan más explicaciones en la descripción del correspondiente ejemplo 15.

La Figura 13A muestra la actividad antitumoral in vivo de Fue- trastuzumab y Herceptin® en ratones desnudos portadores de un xenoinjerto de carcinoma de mama humano BT474. Los ratones se trataron al nivel de dosificación indicado cuando los tumores alcanzaron un tamaño palpable. Los anticuerpos se administraron iv dos veces por semana durante 4 semanas. Cada símbolo representa el valor de la media y EEM de un grupo de 8 animales. La Figura 13B muestra la actividad antitumoral in vivo de Fuc-trastuzumab a diferentes concentraciones en ratones desnudos portadores de un xenoinjerto de carcinoma de mama humano BT474. Los ratones se trataron al nivel de dosificación indicado cuando los tumores alcanzaron un tamaño palpable. Los anticuerpos se administraron iv dos veces por semana durante 4 semanas. Cada símbolo representa el valor de la media y EEM de un grupo de 8 animales.

La Figura 14 muestra la actividad antitumoral in vivo de Fue- trastuzumab en ratones desnudos portadores de los xenoinjertos (MV9138) de carcinoma gástrico #7268 derivados de pacientes. Los ratones se trataron al nivel de dosificación indicado cuando los tumores alcanzaron un tamaño palpable. Los anticuerpos se administraron iv dos veces por semana durante 4 semanas. Cada símbolo representa el valor de la media y EEM de un grupo de 8 animales.

La Figura 15A muestra la farmacocinética de Fuc-trastuzumab y Herceptin® después de una dosis única de administración iv de 30 mg/kg de peso corporal. La concentración sérica de anticuerpos de los animales se midió en 10 puntos en el tiempo posterior a la dosificación. Cada símbolo representa el valor de la media y EEM de un grupo de 3 animales. Los puntos de los datos se ajustaron con un decaimiento exponencial de dos fases ponderado con 1/Y2. La Figura 15B muestra las concentraciones séricas de Fue- trastuzumab y Herceptin® después de una infusión única iv. Cada símbolo representa el valor de la media y la desviación estándar de un grupo de animales 3m.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Tal como se utilizan en la presente, las siguientes expresiones en general pretenden tener los significados que se exponen a continuación, excepto en la medida en que el contexto en donde se utilizan indique lo contrario.

La expresión "comprender", tal como se utiliza en la presente, además de su significado literal también incluye y específicamente se refiere a las expresiones "consistir esencialmente en" y "consistir en". De esta manera, la expresión "comprender" se refiere a modalidades en donde la materia objeto que "comprende" elementos enumerados específicamente no comprende elementos adicionales así como modalidades en donde la materia objeto que "comprende" elementos enumerados específicamente puede y/o de hecho no abarcar elementos adicionales. Asimismo, la expresión "tener" ha de entenderse como la expresión "comprende", incluyendo también y haciendo referencia específicamente a las expresiones "consistir esencialmente en" y "consistir en".

El término "anticuerpo" en particular se refiere a una proteína que comprende por lo menos dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras conectadas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada está compuesta de una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de cadena pesada (CH). Cada cadena ligera está compuesta por una región variable de cadena ligera (VL) y una región constante de cadena ligera (CL). La región constante de cadena pesada comprende tres o - en el caso de los anticuerpos del tipo IgM o IgE - cuatro dominios constantes de cadena pesada (CH1, CH2, CH3 y CH4) en donde el primer dominio constante CH1 es adyacente a la región variable y puede ser conectado al segundo dominio constante CH2 por una región bisagra. La región constante de cadena ligera consiste solamente en un dominio constante. Las regiones variables se pueden subdividir adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDRs), intercaladas con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de marco (FR), en donde cada región variable comprende tres CDRs y cuatro FRs. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interacciona con un antigeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina para hospedar tejidos o factores, incluyendo varias células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema del complemento clásico. El anticuerpo puede ser, por ejemplo un anticuerpo humanizado, humano o quimérico. El anticuerpo es capaz de inducir la ADCC.

En particular, el anticuerpo puede ser de cualquier isotipo tales como IgA, IgD, IgE, IgG o IgM, incluyendo cualquier subclase tales como IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl o IgA2. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo IgG, más preferiblemente un anticuerpo IgGl o IgG2, en particular un anticuerpo IgGl. Las regiones constantes de cadena pesada pueden ser de cualquier tipo tales como cadenas pesadas de tipo g, d, a, m o e. Adicionalmente, la región constante de cadena ligera también puede ser de cualquier tipo tales como cadenas ligeras de tipo k o l. Preferiblemente, la cadena ligera del anticuerpo es una cadena K. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa que en el caso de los anticuerpos IgG comprende dos cadenas pesadas de longitud completa y dos cadenas ligeras de longitud completa.

La porción de unión al antigeno de un anticuerpo usualmente se refiere a la longitud completa o uno o más fragmentos de un anticuerpo que retienen la capacidad de unirse específicamente a un antígeno. Se ha mostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo se puede realizar mediante fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Ejemplos de fragmentos de unión de un anticuerpo incluyen un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; un fragmento F(ab)2 un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab, cada uno de los cuales se une al mismo antígeno, enlazado por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; un fragmento dAb (Ward et al., 1989 Nature 341:544-546), que consiste en un dominio VH; y una región determinante de la complementariedad aislada (CDR). La "parte Fab" de un anticuerpo, en particular, se refiere a una parte del anticuerpo que comprende las regiones variables de cadena pesada y ligera (VH y VL) y las primeras regiones constantes de cadena pesada y ligera (CH1 y CL). En los casos en donde el anticuerpo no comprende todas estas regiones, entonces el término "parte Fab" solamente se refiere a aquellas de las regiones VH, VL, CH1 y CL que están presentes en el anticuerpo. Preferiblemente, la "parte Fab" se refiere a aquella parte de un anticuerpo que corresponde al fragmento obtenido mediante la digestión de un anticuerpo natural con papaina que contiene la actividad de unión al antigeno del anticuerpo. En particular, la parte Fab de un anticuerpo abarca el sitio de unión al antígeno o la capacidad de unión al antigeno del mismo. Preferiblemente, la parte Fab comprende por lo menos la región VH del anticuerpo.

La "parte Fe" de un anticuerpo, en particular, se refiere a una parte del anticuerpo que comprende las regiones constantes de cadena pesada 2, 3 y - en su caso -4 (CH2, CH3 y CH4). En los casos en donde el anticuerpo no comprende todas estas regiones, entonces el término "parte Fe" solamente se refiere a aquellas de las regiones CH2, CH3 y CH4 que están presentes en el anticuerpo. Preferiblemente, la parte Fe comprende por lo menos la región CH2 del anticuerpo. Preferiblemente, la "parte Fe" se refiere a aquella parte de un anticuerpo que corresponde al fragmento obtenido mediante la digestión de un anticuerpo natural con papaina que no contiene la actividad de unión al antigeno del anticuerpo. En particular, la parte Fe de un anticuerpo es capaz de unirse al receptor Fe y de esta manera, por ejemplo, comprende un sitio de unión al receptor Fe o una capacidad de unión al receptor Fe. La "parte Fe" es capaz de inducir la ADCC.

Para indicar las posiciones de los aminoácidos de la cadena pesada y de la cadena ligera, en particular, las regiones variables de los mismos, el sistema de numeración de Kabat se utiliza en la presente (Kabat, E.A. et al. (1991) Secuencias de Proteínas de Interes Inmunológico, 5a edición, N1H Publicación No. 91-3242). De conformidad con dicho sistema, la región variable de cadena pesada comprende las posiciones de los aminoácidos desde la posición 0 a la posición 113 incluyendo posición 35A, 35B, 52A a 52C, 82A a 82C y 100A a 100K. Las CDRs de la región variable de cadena pesada se localizan, de conformidad con la numeración de Kabat, en las posiciones 31 a 35B (CDR1), 50 a 65 (CDR2) y 95 a 102 (CDR3). Las posiciones de los aminoácidos restantes forman las regiones de marco FR1 a FR4. La región variable de cadena ligera comprende las posiciones 0 a 109 incluyendo las posiciones 27A a 27F, 95A a 95F y 106A. Las CDRs están ubicadas en las posiciones 24 a 34 (CDR1), 50 a 56 (CDR2) y 89 a 97 (CDR3). Dependiendo de la formación inicial del gen específico de un anticuerpo, no todas estas posiciones tienen que estar presentes en una región variable de cadena pesada o región variable de cadena ligera dadas. En caso de que una posición de aminoácido en una región variable de cadena pesada o de cadena ligera se mencione en la presente, a menos que se indique lo contrario, se refiere a la posición de conformidad con la numeración de Kabat.

De conformidad con la presente invención, el término "anticuerpo quimérico", en particular, se refiere a un anticuerpo en donde las regiones constantes se derivan a partir de un anticuerpo humano o una secuencia consenso de anticuerpo humano, y en donde por lo menos uno y preferiblemente ambas regiones variables se derivan a partir de un anticuerpo no humano, por ejemplo, de un anticuerpo de roedor tal como un anticuerpo de ratón.

De conformidad con la presente invención, el término "anticuerpo humanizado", en particular, se refiere a un anticuerpo en donde por lo menos una CDR se deriva a partir de un anticuerpo no humano, y en donde las regiones constantes y por lo menos una región de marco de una región variable se deriva a partir de un anticuerpo humano o una secuencia consenso de anticuerpo humano. Preferiblemente, todas las CDRs de la región variable de cadena pesada o, más preferiblemente, todas las CDRs de la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera, se derivan a partir de un anticuerpo no humano. Además, preferiblemente todas las regiones de marco de la región variable de cadena pesada o, más preferiblemente, todas las regiones de marco de la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera, se derivan a partir de un anticuerpo humano o una secuencia consenso de anticuerpo humano. Las CDRs se derivan preferiblemente del mismo anticuerpo no humano. Las primeras tres o la totalidad de las regiones de marco de una región variable preferiblemente se derivan a partir del mismo anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano, sin embargo, las regiones de marco de la región variable de cadena pesada no tienen que ser derivadas del mismo anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano que las regiones de marco de la región variable de cadena ligera. En modalidades preferidas particulares, el anticuerpo humanizado es capaz de unirse a los mismos antigenos, en particular, los mismos epitopos que el anticuerpo no humano del cual se derivan las una o más CDRs. Preferiblemente, las CDRs del anticuerpo humanizado que se derivan a partir del anticuerpo no humano son idénticas a las CDRs del anticuerpo no humano. Además, las regiones de marco del anticuerpo humanizado que se derivan a partir del anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano pueden ser idénticas a las regiones de marco del anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano. En otra modalidad, las regiones de marco del anticuerpo humanizado pueden tener una o más sustituciones de aminoácidos en comparación con las regiones de marco del anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano de los cuales se derivan. Los residuos de aminoácidos sustituidos se reemplazan preferiblemente por los residuos de aminoácidos correspondientes del anticuerpo no humano del cual se derivan a partir de una o más de las CDRs (en particular aquellos residuos de aminoácidos correspondientes que están en la misma posición de conformidad con la numeración de Kabat). En particular, las regiones de marco de una región variable (región variable de cadena pesada y/o región variable de cadena ligera) del anticuerpo humanizado comprenden preferiblemente no más de 30 sustituciones de aminoácidos, preferiblemente no más de 25, no más de 20, no más de 15, no más de 12, no más de 10 o no más de 8 sustituciones de aminoácidos. En modalidades preferidas, todas las regiones de marco de la región variable de cadena pesada del anticuerpo humanizado, tomadas juntas, comparten una homología o una identidad de por lo menos 70%, preferiblemente por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85% o por lo menos 90%, con las regiones de marco de la región variable de cadena pesada del anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano de los cuales se derivan. Además, todas las regiones de marco de la región variable de cadena ligera del anticuerpo humanizado, tomadas juntas, preferiblemente comparten una homología o una identidad de por lo menos 70%, preferiblemente por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85% o por lo menos 90%, con las regiones de marco de la región variable de cadena ligera del anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano de los cuales se derivan. Las regiones constantes del anticuerpo humanizado se pueden derivar de cualquier anticuerpo humano o secuencia consenso de anticuerpo humano. En particular, las regiones constantes de cadena pesada pueden ser de cualquier tipo tales como cadenas pesadas de tipo g, d, o¡, m o e. El anticuerpo humanizado puede de esta manera ser de cualquier isotipo, tales como IgA, IgD, IgE, IgG o IgM, incluyendo cualquier subclase tales como IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl o IgA2. Preferiblemente, el anticuerpo humanizado es un anticuerpo IgGl o IgG2, más preferiblemente un anticuerpo IgGl. Además, la región constante de cadena ligera también puede ser de cualquier tipo tales como cadenas ligeras de tipo k o l. Preferiblemente, la cadena ligera del anticuerpo humanizado es una cadena K. Se prefiere el uso de anticuerpos anti-HER2 humanizados como anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida.

El término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en la presente, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables en las cuales tanto la región de marco como la región CDR se derivan a partir de secuencias de origen humano. Además, si el anticuerpo contiene una región constante, la región constante también se deriva a partir de tales secuencias humanas, por ejemplo, secuencias de la linea germinal humana, o versiones mutadas de secuencias de la linea germinal humana o anticuerpo que contiene secuencias consenso de marco derivadas a partir del análisis de secuencias estructurales humanas, por ejemplo, tal como se describe en Knappik, et al . (2000. J Mol Biol 296, 57-86). Los anticuerpos humanos de la invención pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias humanas (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o de sitio especifico in vitro o por mutación somática in vivo) . Sin embargo, el término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en la presente, no pretende incluir anticuerpos en los cuales las secuencias CDR derivadas a partir de la linea germinal de otra especie de mamíferos, tal como un ratón, han sido injertadas en secuencias estructurales humanas. En particular, el anticuerpo humano puede ser un anticuerpo monoclonal humano que presenta una sola especificidad de unión que tiene regiones variables en las cuales tanto la región de marco como la región CDR se derivan a partir de secuencias humanas. Preferiblemente, es recombinante y se prepara, expresa, crea o aísla por medios recombinantes. Tales anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables en las cuales las regiones de marco y CDR se derivan a partir de secuencias de inmunoglobulina de linea germinal humana. En ciertas modalidades, sin embargo, tales anticuerpos humanos recombinantes se pueden someter a mutagénesis in vitro y de esta manera las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas a partir de y relacionadas con las secuencias VH y VL de la linea germinal humana, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de la linea germinal de anticuerpos humanos in vivo.

Además, el anticuerpo de conformidad con la presente invención puede haber sido sometido a ingeniería de marco o Fe. Tales anticuerpos modificados incluyen aquellos en los cuales se han realizado modificaciones a los residuos de marco dentro de VH y/o VL , por ejemplo, para mejorar las propiedades del anticuerpo. Típicamente, tales modificaciones de marco se realizan para disminuir la inmunogenicidad del anticuerpo. Por ejemplo, un enfoque es "retromutar" uno o más residuos de marco a la secuencia de la línea germinal correspondiente. Más específicamente, un anticuerpo que ha sido sometido a mutación somática puede contener residuos de marco que difieren de la secuencia de línea germinal de la cual se deriva el anticuerpo. Tales residuos se pueden identificar mediante la comparación de las secuencias estructurales del anticuerpo con las secuencias de la línea germinal de la cual se deriva el anticuerpo. Para regresar las secuencias de la región de marco a su configuración de línea germinal, las mutaciones somáticas se pueden "retromutar" a la secuencia de la línea germinal mediante, por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis mediada por PCR. Tales anticuerpos "retromutados" también se pueden utilizar de conformidad con la presente invención. Además o como alternativa a las modificaciones realizadas dentro de las regiones de marco o CDR, los anticuerpos de la invención pueden ser modificados por ingeniería para incluir modificaciones dentro de la región Fe, típicamente para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo, tales como vida media sérica, fijación del complemento, unión al receptor Fe, y/o citotoxicidad celular dependiente de antigenos. Por ejemplo, la región Fe se puede alterar mediante el reemplazo de por lo menos un residuo de aminoácido con un residuo de aminoácido diferente para alterar las funciones efectoras del anticuerpo. Por ejemplo, uno o más aminoácidos se pueden reemplazar con un residuo de aminoácido diferente de tal manera que el anticuerpo tiene una afinidad alterada por un ligando efector, pero conserva la capacidad de unión al antígeno del anticuerpo parental. El ligando efector al cual se altera la afinidad puede ser, por ejemplo, un receptor Fe o el componente C1 del complemento. En una modalidad, la región Fe de los anticuerpos descritos se modifica para aumentar la capacidad del anticuerpo para mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o para aumentar la afinidad del anticuerpo por un receptor Fcy mediante la modificación de uno o más aminoácidos. Este enfoque se describe adicionalmente por ejemplo en WO 00/42072. Por otra parte, se han mapeado los sitios de unión en la IgGl humana para FcyRI, FcyRII, FcyRIII y FcRn y se han descrito las variantes con unión mejorada (véase Shields, R.L. et al., 2001, J. Biol. Chen.276:6591-6604).

Una secuencia de aminoácidos objetivo se "deriva" a partir de o "corresponde" a una secuencia de aminoácidos de referencia si la secuencia de aminoácidos objetivo comparte una homología o identidad a lo largo de toda su longitud con una parte correspondiente de la secuencia de aminoácidos de referencia de por lo menos 75%, más preferiblemente por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 93%, por lo menos 95% o por lo menos 97%. Por ejemplo, si una región de marco de un anticuerpo humanizado se deriva a partir de o corresponde a una región variable de un anticuerpo humano en particular, entonces el aminoácido de la región de marco del anticuerpo humanizado comparte una homología o identidad a lo largo de toda su longitud con la región de marco correspondiente del anticuerpo humano de por lo menos 75%, más preferiblemente por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 93%, por lo menos 95% o por lo menos 97%. La "parte correspondiente" o "región de marco correspondiente" significa que, por ejemplo, la región de marco 1 de una región variable de cadena pesada (FRH1) de un anticuerpo objetivo corresponde a la región de marco 1 de la región variable de cadena pesada del anticuerpo de referencia. Lo mismo ocurre, por ejemplo, para FRH2, FRH3, FRH4, FRLl, FRL2, FRL3 y FRL4. En modalidades particulares, una secuencia de aminoácidos objetivo que se "deriva" a partir de o "corresponde" a una secuencia de aminoácidos de referencia es 100% homologa, o en particular 100% idéntica, a lo largo de toda su longitud con una parte correspondiente de la secuencia de aminoácidos de referencia. Una "homología" o "identidad" de una secuencia de aminoácidos o secuencia de nucleótidos se determina preferiblemente de conformidad con la invención a lo largo de toda la longitud de la secuencia de referencia o a lo largo de toda la longitud de la parte correspondiente de la secuencia de referencia que corresponde a la secuencia cuya homología o identidad se define.

"Unión específica" significa preferiblemente que un agente tal como un anticuerpo se une más fuerte a un objetivo tal como un epítopo para el cual es específico en comparación con la unión a otro objetivo. Un agente se une más fuerte a un primer objetivo en comparación con un segundo objetivo si se une al primer objetivo con una constante de disociación (Kd) que es menor que la constante de disociación para el segundo objetivo. Preferiblemente, la constante de disociación para el objetivo al cual el agente se une específicamente es más de 100 veces, 200 veces, 500 veces o más de 1000 veces menor que la constante de disociación para el objetivo al cual el agente no se une específicamente.

El término "trastuzumab" tal como se utiliza en la presente, en particular, se refiere al anticuerpo trastuzumab que tiene las secuencias de aminoácidos del anticuerpo trastuzumab tal como se utiliza en el medicamento Herceptin® (Roche). Siempre que las circunstancias no indiquen lo contrario, el anticuerpo trastuzumab también tiene en su parte Fe el mismo o un similar patrón de glicosilación de alta fucosa que el anticuerpo trastuzumab utilizado en el medicamento Herceptin® (Roche), en donde la fucosilación es de por lo menos 60%, en particular por lo menos 70%. Las circunstancias que indican un patrón de glicosilación diferente son, por ejemplo, la referencia a "Fuc-trastuzumab". El término Fuc-trastuzumab, en particular, se refiere a un anticuerpo que se une al mismo epítopo que el trastuzumab y que tienen secuencias de aminoácidos que son por lo menos 85%, preferiblemente por lo menos 90%, más preferiblemente por lo menos 95% idénticas a aquellas del anticuerpo trastuzumab tal como se utiliza en el medicamento Herceptin® (Roche), en donde, sin embargo, el Fuc-trastuzumab tiene una menor cantidad de fucosa en su parte Fe que el anticuerpo trastuzumab utilizado en el medicamento Herceptin®, y en particular, tiene una fucosilación en la parte Fe de 50% o menos, 30% o menos, preferiblemente 20% o menos, más preferiblemente 15% o menos y lo más preferible de 10% a 0%.

El término "HER2" o "HER2/neu", de conformidad con la presente invención, en particular, se refiere al receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano, también conocido como ErbB-2 o CD340. HER2 es un receptor tirosina quinasa que comprende un dominio extracelular de unión a ligando, un dominio que atraviesa la membrana y un dominio intracelular de quinasa. Tras la unión de su ligando, el HER2 forma ho odímeros o heterodimeros con otros receptores ErbB y su función quinasa se activa, teniendo como resultado la autofosforilación de diversas tirosinas del dominio intracelular. Un anticuerpo anti-HER2 es un anticuerpo que es capaz de unirse específicamente a HER2. Además, un anticuerpo anti-HER2 en general es capaz de inhibir la proliferación de células cancerosas humanas HER2 positivas.

El término "anticuerpo", en particular, "anticuerpo anti-HER2", tal como se utiliza en la presente se refiere especialmente a una población de anticuerpos o a una composición que comprende anticuerpos, en particular, una población de anticuerpos anti-HER2 o una composición que comprende anticuerpos anti-HER2 adecuados para la administración farmacéutica. Todos o sustancialmente todos los anticuerpos en la población de anticuerpos o la composición que comprende los anticuerpos, en particular, tienen la misma secuencia de aminoácidos. Una característica de glicosilación de un anticuerpo tal como un anticuerpo anti-HER2, en particular, se refiere a la glicosilación promedio de los anticuerpos en la población o composición. Por ejemplo, de conformidad con la invención, la cantidad (porcentaje) de fucosa en la parte Fe y de esta manera el dominio CH2 de un anticuerpo, en particular, se refiere al porcentaje de todas las cadenas de carbohidratos unidas al sitio de glicosilación correspondiente en el dominio CH2 de los anticuerpos en la población de anticuerpos o composición de anticuerpos que comprenden un residuo de fucosa. Dichas cadenas de carbohidratos incluyen las cadenas de carbohidratos unidas al sitio de glicosilación correspondiente a la posición del aminoácido 297 de conformidad con la numeración de Kabat de la cadena pesada de los anticuerpos de tipo IgG (por ejemplo la posición del aminoácido 301 en la SEQ ID NO: 9). La glicosilación N-ligada en Asn297 se conserva en IgGs de mamíferos, así como en las regiones homologas de otros isotipos de anticuerpos. Preferiblemente, solamente los residuos de fucosa se consideran gue están unidos por medio de un enlace al,6 con el residuo de GlcNAc en el extremo reductor de la cadena de carbohidratos. Si la cantidad de fucosa en el dominio CH2 de una especie de anticuerpos específica (por ejemplo, anticuerpos anti-HER2) se menciona, entonces solamente las cadenas de carbohidratos unidas al dominio CH2 y de esta manera la parte Fe de las moléculas de anticuerpo de dicha especie de anticuerpos específica en una población o composición de anticuerpos se consideran para la determinación de la cantidad en porcentaje de fucosa. Las cadenas de carbohidratos en la parte Fab del anticuerpo, si está presente, no se consideran. Asimismo, la cantidad (porcentaje) de N-acetilglucosamina de bisección (bisGlcNAc) de un anticuerpo, en particular, se refiere al porcentaje de todas las cadenas de carbohidratos unidas a la parte Fe de los anticuerpos en la población de anticuerpos que comprenden un residuo de bisGlcNAc. La bisGlcNAc se refiere a un residuo de GlcNAc unido al residuo de mañosa central en complejos de tipo N-glicanos. Además, la cantidad (porcentaje) de galactosa de un anticuerpo en una composición, en particular, se refiere al porcentaje de todas las cadenas de carbohidratos unidas a la parte Fe de los anticuerpos en la población de anticuerpos que comprenden por lo menos un residuo de galactosa.

De conformidad con la invención, el término "sitio de glicosilación", en particular, se refiere a una secuencia de aminoácidos que puede ser reconocida y glicosilada específicamente mediante una enzima de glicosilación natural, en particular, una glicosiltransferasa, preferiblemente una glicosiltransferasa de mamífero o humana de origen natural. En particular, el término "sitio de glicosilación" se refiere a un sitio de N-glicosilación, que comprende un residuo de asparagina al cual el carbohidrato es o será unido. En particular, el sitio de glicosilación es un sitio de N-glicosilación que tiene la secuencia de aminoácidos Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys, en donde Xaa es cualquier residuo de aminoácido. Preferiblemente, Xaa no es Pro.

El término "conjugado" significa en particular dos o más compuestos que están unidos entre sí de tal manera que por lo menos algunas de las propiedades de cada compuesto se conservan en el conjugado. La unión se puede conseguir mediante un enlace covalente o no covalente. Preferiblemente, los compuestos del conjugado están unidos por medio de un enlace covalente. Los diferentes compuestos de un conjugado se pueden unir directamente entre si por medio de uno o más enlaces covalentes entre los átomos de los compuestos. Alternativamente, los compuestos se pueden unir entre si por medio de una molécula de enlace en donde el enlazador se une covalentemente a los átomos de los compuestos. Si el conjugado se compone de más de dos compuestos, entonces estos compuestos se pueden, por ejemplo, unir en una conformación de cadena, un compuesto unido al siguiente compuesto, o diversos compuestos pueden estar unidos cada uno a un compuesto central.

El término "paciente", en particular, se refiere a un ser humano.

El término "cáncer HER2 positivo" de conformidad con la invención que se puede tratar con los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente, en particular, se refiere a un cáncer o tumor primarios que expresan HER2/neu. Los cánceres HER2 positivos incluyen, pero no están limitados a cáncer de mama, cáncer gástrico, carcinomas, cáncer de colon, carcinoma de células transicionales, cáncer de vejiga, tumores uroteliales, cáncer uterino, adenocarcinomas de esófago avanzados, adenocarcinomas gástricos o adenocarcinomas de la unión gastroesofágica, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, cáncer bronquial, cáncer de endometrio, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de tiroides, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer del cerebro, cáncer cervical, cáncer intestinal, cáncer de hígado, cáncer de glándulas salivales y tumor rabdoide maligno y en formas metastásicas particulares de los anteriores. Preferiblemente, el cáncer HER2 positivo que será tratado con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se selecciona entre cáncer de mama, cáncer de colon y cáncer de vejiga, en particular, cáncer de mama metastásico y cáncer de colon metastásico. Más preferiblemente, el cáncer HER2 positivo es cáncer de mama, en particular, cáncer de mama metastásico. Preferiblemente, el cáncer HER2 positivo sobreexpresa HER2 y/o muestra una amplificación del gen HER2. Por consiguiente, un cáncer HER2 positivo, en particular, es un cáncer que comprende células tumorales y/o células metastásicas que sobreexpresan HER2. Preferiblemente, por lo menos 5%, más preferiblemente por lo menos 10%, por lo menos 25% o por lo menos 50% de las células cancerosas sobreexpresan HER2 y/o muestran amplificación del gen HER2. Un cáncer HER2 positivo, en particular, se refiere a un cáncer que tiene una sobreexpresión de HER2 de por lo menos nivel 1+ (HER21+), preferiblemente por lo menos nivel 2+ (HER2 2+), más preferiblemente nivel 3+ (HER2 3+), según se determina mediante inmunohistoquímica. En ciertas modalidades, el cáncer HER2 positivo es un cáncer que tiene una expresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+ o inferior según se determina mediante inmunohistoquimica. Tal como se muestra en los ejemplos, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente son terapéuticamente eficaces en respectivos tipos de cáncer que muestran solamente una moderada a baja sobreexpresión de HER2. La inmunohistoquimica en este respecto se refiere a la tinción inmunohistoquimica de muestras tumorales fijadas y el análisis de la tinción. Un nivel de expresión de HER2 de 0 (HER2 0) se refiere a ninguna tinción o una tinción de membrana en menos de 10% de las células tumorales, en particular menos de 20,000 HER2 por célula. HER2 1+ se refiere a una tinción de membrana débil en más de 10% de las células tumorales, en donde las membranas celulares se tiñen solamente en forma parcial, en particular, aproximadamente 100,000 HER2 por célula. HER2 2+ se refiere a una tinción débil a moderada de toda la membrana en más de 10% de las células tumorales, en particular aproximadamente 500,000 HER2 por célula. HER23+ se refiere a una fuerte tinción de membrana completa en más de 10% de las células tumorales, en particular aproximadamente 2,000,000 HER2 por célula. La expresión de HER2 preferiblemente se determina usando muestras histológicas que comprenden células cancerosas, en particular, muestras de tejido de cáncer embebidas en parafina, fijadas con formalina. El ensayo inmunohistoquímico utilizado para la determinación de la sobreexpresión de HER2 incluye preferiblemente (i) poner en contacto la muestra que comprende las células cancerosas con un anticuerpo primario contra HER2, seguido de (ii) poner en contacto la muestra con un anticuerpo secundario que está dirigido contra el anticuerpo primario y está acoplado a un agente de visualización tal como una enzima que cataliza una reacción que tiene un producto final visible, por ejemplo, peroxidasa de rábano picante. Los kits de inmunohistoquimica para HER2 adecuados son HercepTest (Dako Denmark A/S) y Pathway HER2 (Ventana Medical Systems, Inc.). Las enfermedades neoplásicas HER2 positivas también incluyen cánceres que son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante hibridación fluorescente in situ (FISH) o hibridación cromogénica in situ (CISH). Un cáncer es positivo para la multiplicación del gen HER2 de conformidad con el ensayo FISH si el número de copias del gen HER2 en las células tumorales es por lo menos 2 veces el número de copias del cromosoma 17 o si las células tumorales comprenden por lo menos 4 copias del gen HER2. Un cáncer es positivo para la multiplicación del gen HER2 de conformidad con el ensayo CISH si por lo menos 5 copias del gen HER2 por núcleo celular están presentes en por lo menos 50% de las células tumorales.

Por "metástasis" o "las metástasis" se entiende la propagación de las células cancerosas de su sitio original a otra parte del cuerpo. Tal como se describió anteriormente en los antecedentes de la invención, la formación de metástasis es un proceso muy complejo y normalmente implica el desprendimiento de las células cancerosas de un tumor primario, entrando en la circulación del cuerpo y asentándose para crecer dentro de tejidos normales en otras partes del cuerpo. Para más detalles, se hace referencia a la descripción respectiva que también se aplica aquí. Tal como se describe en la presente, el cáncer HER2 positivo que se trata con el anticuerpo antí-HER2 de fucosa reducida es de conformidad con la modalidad preferida un cáncer metastásico, también referido en la presente como cáncer metastatizante. Las metástasis pueden ser metástasis distantes. Las metástasis son, en particular, HER2 positivas tal como se describió anteriormente para el cáncer HER2 positivo; se hace referencia a la descripción anterior que también se aplica aquí. Los tipos específicos de las metástasis que se pueden tratar con éxito con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como se describe en la presente son metástasis de piel, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales . "Metástasis de piel" o "las metástasis de piel", términos que se utilizan como sinónimos, se refieren al crecimiento de células cancerosas en la piel que se originan de un cáncer interno. El desarrollo y las características de las metástasis de piel se describen con detalle en los antecedentes de la invención, se hace referencia a la descripción respectiva que también se aplica aquí. En particular, las metástasis de piel pueden ser metástasis de piel ulcerativas. "Metástasis visceral" o "las metástasis viscerales", en particular, se refieren a las metástasis en las visceras, los órganos internos del cuerpo, específicamente aquellos dentro del pecho tales como corazón o pulmones o el abdomen, tal como el hígado, el páncreas o los intestinos. En particular, el término "metástasis visceral" se refiere a las metástasis en el pulmón y/o el hígado.

El término "tratamiento fracasado" o "fracaso del tratamiento" o términos relacionados de conformidad con la invención, en particular, se refieren a los tratamientos de cáncer que tienen como resultado la progresión de la enfermedad. La progresión de la enfermedad, en particular, se refiere a (i) el crecimiento adicional de un tumor existente, en particular, en por lo menos 25%; (ii) el crecimiento o la formación de una o más nuevas metástasis de un tipo existente; (iii) la formación de una o más metástasis adicionales de un tipo diferente; (iii) la formación de lesiones adicionales y/o (iv) el aumento del tamaño de una o más lesiones. El crecimiento adicional de un tumor, en particular, se refiere a un aumento en el volumen del tumor en por lo menos 25%. El aumento del tamaño de una lesión, en particular, se refiere a un aumento en el tamaño de la lesión en por lo menos 25%.

El término "tratamiento exitoso" o "éxito del tratamiento" o términos relacionados de conformidad con la invención se refieren, en particular, a los tratamientos de cáncer o metástasis HER2 positivos que dan lugar a una estabilización de la enfermedad, una remisión parcial y/o una remisión completa de la enfermedad. Un tratamiento exitoso incluye preferiblemente una o más de las siguientes (i) la inhibición del crecimiento del tumor; (ii) la reducción del tamaño de tumor; (iii) la prevención de las metástasis adicionales del mismo tipo y/o de un tipo diferente; (iv) la reducción del número de las metástasis; (v) la prevención de lesiones adicionales; (vi) la reducción del número de lesiones; (vii) la reducción del tamaño de una o más lesiones; y/o (viii) la reducción de dolor. La reducción del tamaño de tumor, en particular, se refiere a una disminución en el volumen del tumor en por lo menos 25%, incluyendo una remisión en donde el volumen del tumor se reduce en 25 a 50%, una remisión parcial en donde el volumen del tumor se reduce en más de 50%, y una remisión completa en donde el volumen del tumor se reduce en 100%. La reducción del tamaño de una lesión, en particular, se refiere a una disminución en el tamaño de la lesión en por lo menos 25%, incluyendo una reducción en donde el tamaño de la lesión se reduce en 25 a 50%, una reducción parcial en donde el tamaño de la lesión se reduce en más de 50%, y una reducción completa en donde el tamaño de la lesión se reduce en 100%. Una lesión, en particular, se refiere a una lesión causada por un tumor primario y/o por una o más metástasis. Un ejemplo particular de una lesión es una úlcera de la piel, en particular, causada por una metástasis de piel. Un tratamiento exitoso, en particular, también incluye los tratamientos que dan lugar a un aumento de la supervivencia libre de progresión y/o un aumento de tiempo de vida, en particular, una supervivencia libre de progresión o un tiempo de vida restante de por lo menos 1 mes, de por lo menos 2 meses, preferiblemente por lo menos 3 meses, por lo menos 4 meses, por lo menos 6 meses, por lo menos 9 meses o por lo menos 1 año, incluso más preferiblemente de por lo menos 1.5 años, por lo menos 2 años, por lo menos 3 años, por lo menos 4 años o por lo menos 5 años. Una "enfermedad estable" y, en consecuencia una estabilización de la enfermedad, en particular, incluye (i) una variación en el tumor y/o volumen de las metástasis en menos de 25% y (ii) ningún cambio en el número de las metástasis. El tratamiento exitoso preferiblemente se determina durante un periodo de observación de por lo menos 1 mes, más preferiblemente por lo menos 2 meses, por lo menos 3 meses, por lo menos 4 meses, por lo menos 6 meses, por lo menos 9 meses, o por lo menos 1 año, incluso más preferiblemente por lo menos 1.5 años, por lo menos 2 años, por lo menos 3 años, por lo menos 4 años o por lo menos 5 años.

El fracaso del tratamiento, asi como un tratamiento exitoso se establecen con base en el criterio médico de un profesional, que se comprueban mediante los resultados de datos clínicos y de laboratorio que son generalmente conocidos en la téenica para evaluar el tratamiento de pacientes. Tales datos se pueden obtener a modo de ejemplo, a partir de la examinación clínica, técnicas citológicas e histológicas, endoscopia y laparoscopia, ultrasonido, tomografías CT, PET y MRI, radiografía de tórax y mamografía. Además, los criterios RECIST se pueden utilizar para determinar la respuesta del tumor.

El término "cirugía" de conformidad con la invención, en particular, se refiere a una extirpación quirúrgica (resección o ectomía) de tejido que comprende la totalidad o una parte de un tumor, en particular, un tumor primario tal como un tumor de mama, y/o uno o más metástasis.

Una "terapia adyuvante", en particular, se refiere al tratamiento de cáncer después de la cirugía.

Una "terapia neoadyuvante", en particular, se refiere al tratamiento de cáncer antes de la cirugía.

Un "tratamiento paliativo", en particular, se refiere a una terapia de cáncer que se da específicamente para abordar la gestión de los síntomas sin esperar reducir significativamente el cáncer. Los cuidados paliativos se dirigen a mejorar síntomas asociados con el cáncer incurable. El objetivo principal de los cuidados paliativos es mejorar la calidad del resto de la vida de un paciente. El dolor es uno de los síntomas comunes asociados con el cáncer. Aproximadamente el 75% de los pacientes con cáncer terminal tienen dolor. El dolor es un síntoma subjetivo y de esta manera no se puede medir utilizando enfoques teenológicos. La mayoría de los pacientes con cáncer experimentan dolor como resultado de la masa tumoral que comprime nervios vecinos, hueso, o tejidos blandos, o de una lesión directa del nervio (dolor neuropático). El dolor puede ocurrir de nervios afectados en las costillas, los músculos y las estructuras internas tal como el abdomen (dolor tipo cólico asociado con obstrucción). Muchos pacientes también experimentan varios tipos de dolor como resultado directo de las pruebas de seguimiento, tratamientos (cirugía, radiación y quimioterapia) y procedimientos de diagnóstico (es decir, biopsia). Una terapia paliativa terapéuticamente útil es capaz de reducir el dolor.

El término "radioterapia", también conocida como terapia de radiación, significa en particular el uso médico de radiación ionizante para controlar o matar las células malignas. La radioterapia se puede utilizar en combinación con cirugía, como adyuvante y/o terapia neoadyuvante, o sin cirugía, por ejemplo para prevenir la recurrencia del tumor después de la cirugía o para extirpar un tumor primario o una metástasis.

El término "composición farmacéutica" y términos similares se refiere, en particular, a una composición adecuada para la administración a un humano, es decir, una composición que contiene componentes que son farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente, una composición farmacéutica comprende un compuesto activo o una sal o profármaco del mismo junto con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticos tal como un tampón, un conservador y un modificador de la tonicidad.

Los términos "composición de anticuerpos" y "composición que comprende un anticuerpo" se utilizan indistintamente en la presente. La composición de anticuerpos puede ser una composición liquida o sólida, y también incluye composiciones de anticuerpos liofilizados o reconstituidos. Preferiblemente, se utiliza una composición liquida, más preferiblemente una composición acuosa. Preferiblemente comprende además un disolvente tal como agua, un tampón para ajustar y mantener el valor de pH, y opcionalmente agentes adicionales para la estabilización del anticuerpo o la prevención de la degradación del anticuerpo. La composición de anticuerpos comprende preferiblemente una cantidad razonable de anticuerpos, en particular por lo menos 1 fmol, preferiblemente por lo menos 1 pmol, por lo menos 1 nmol o por lo menos 1 pmol del anticuerpo. Una composición que comprende un anticuerpo especifico puede comprender adicionalmente anticuerpos adicionales. Sin embargo, preferiblemente, una composición que comprende un anticuerpo especifico no comprende otros anticuerpos aparte del anticuerpo especifico. En particular, por lo menos 75%, preferiblemente por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 97%, por lo menos 98% o por lo menos 99%, lo más preferible aproximadamente 100% de los anticuerpos en una composición de anticuerpos se dirigen a o se unen al mismo antigeno o epitopo. Por consiguiente, el anticuerpo tal como se utiliza en la presente se refiere preferiblemente a un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas. La composición de anticuerpos es preferiblemente una composición farmacéutica.

Los resultados terapéuticos notables conseguidos con las enseñanzas de la presente invención y las opciones de tratamiento novedosos se describieron brevemente en la breve descripción de la presente invención a la que se refiere. Con base en los datos mostrados en los ejemplos, la presente invención proporciona diferentes opciones de tratamientos novedosos para tratar enfermedades neoplásicas HER2 positivas, en particular, cáncer HER2 positivo, que también se pueden combinar.

En un primer aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos o de 10% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva metastatizante, en particular cáncer metastatizante. De esta manera, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50%, preferiblemente 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos y lo más preferible de 10% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer metastatizante.

Además, con base en los datos mostrados en los ejemplos, la presente invención proporciona en un segundo aspecto un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, 40% o menos, 30% o menos, 20 % o menos, preferiblemente 15% o menos o de 10% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular cáncer, en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60%, en particular, 70% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), c) y d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. Las ventajas de dicha enseñanza terapéutica novedosa se describieron anteriormente y también se describen posteriormente.

En un tercer aspecto, con base en los datos mostrados en los ejemplos, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos, de 10% a 0% o de 10% a 3% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular cáncer metastatizante, en donde la enfermedad neoplásica HER2 positiva tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC). En particular, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50%, preferiblemente 40% o menos, 30% o menos, 20% o menos, preferiblemente 15% o menos y lo más preferible de 10% a 0% o de 10% a 3% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer metastatizante que tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC).

Además, se describen tratamientos en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más, preferiblemente 70% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde dichos tratamientos anteriores ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. Las modalidades preferidas de los tratamientos individuales se describen posteriormente y en las reivindicaciones a las que se hace referencia. Tal como se muestra en los ejemplos, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente demuestran una elevada eficacia terapéutica, en particular, contra numerosas metástasis y, además, permiten el tratamiento exitoso de pacientes pretratados y también pacientes severamente pretratados, en donde el cáncer progresó a pesar de los anteriores tratamientos anticáncer recibidos. Además, los diferentes aspectos de la invención se pueden combinar. Por ejemplo, las anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida muestran una actividad anti-metastásica mejorada y se pueden utilizar de forma ventajosa para el tratamiento de las metástasis que fracasaron antes del tratamiento con anticuerpo y/o quimioterapéutico. En particular, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida se pueden utilizar para el tratamiento de las metástasis de piel tales como metástasis de piel ulcerativas y metástasis viscerales tales como las metástasis de pulmón y/o de hígado, así como las metástasis de ganglios linfáticos. Además, el efecto terapéutico se observó con cánceres HER2 positivos que mostraron una baja sobreexpresión de HER2 según se determina mediante IHC (1+ y 2+) y, en consecuencia, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede utilizar para el tratamiento de un paciente que sufre de un cáncer HER2 positivo que muestra una sobreexpresión de HER2 de solamente 1+ o 2+. Además, la eficacia terapéutica se observó en un escenario de monoterapia y también a dosificaciones bajas. Por lo tanto, la presente invención proporciona importantes opciones de tratamientos novedosos tal como también se describen con más detalle anteriormente.

Anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención Los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente tienen una eficacia terapéutica inesperadamente alta y permiten el tratamiento de pacientes y sub-grupo de pacientes que no pueden o no pudieron ser tratados con la terapia convencional. Incluso las metástasis y los tumores que son resistentes al tratamiento con agentes anticáncer establecidos tales como anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa y/o agentes quimioterapéuticos pueden ser tratados con éxito con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención. Además, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente son terapéuticamente eficaces contra cánceres HER2 positivos que muestran solamente una expresión de HER2 baja o moderada (por ejemplo, o el nivel 1+ o 2+ según se determina mediante IHC). Un efecto terapéutico se observa incluso si las anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida se administran como monoterapia y aplican incluso a dosificaciones bajas.

Una característica importante del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención es el patrón de glicosilación mejorado en la parte Fe del anticuerpo. El anticuerpo antí-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es un anticuerpo IgG, más preferiblemente un anticuerpo IgGl, que tiene un sitio de glicosilación en el segundo dominio constante de la cadena pesada (CH2). Este sitio de glicosilación, en particular, está en una posición de aminoácido correspondiente a la posición del aminoácido 297 de la cadena pesada de conformidad con la numeración de Kabat y tiene el motivo Asn Xaa Ser/Thr en la secuencia de aminoácidos en donde Xaa puede ser cualquier aminoácido excepto prolina. La glicosilación N-ligada en Asn297 se conserva en IgGs de mamíferos, así como en las regiones homologas de otros isotipos de anticuerpos. Debido a los aminoácidos adicionales opcionales que pueden estar presentes en la región variable, este sitio de glicosilación conservado está en la posición del aminoácido 301 de la SEQ ID NO: 9. En particular, en por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 85%, por lo menos 90% o por lo menos 95%, más preferiblemente en por lo menos 98% del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprendido en una composición, el sitio de glicosilación de por lo menos un dominio CH2, preferiblemente de ambos dominios CH2, porta una estructura de carbohidratos. La cantidad de fucosilación tal como se describe en la presente se determina en este sitio de glicosilación en la región Fe. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida no comprende sitios de glicosilación adicionales y/o no porta estructuras de carbohidratos en cualquiera de los dominios variables, el dominio CH1 y el dominio CL.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el sitio de glicosilación en el dominio CH2, que es 50% o menos, 40% o menos, 30% o menos o incluso 20% o menos, más preferiblemente 15% o menos, lo más preferible 10% o menos, o es afucosilado y de esta manera no comprende ninguna fucosa. En modalidades particulares, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende por lo menos una cantidad residual de fucosa de por lo menos 2%, por lo menos 3% y preferiblemente por lo menos 5%. El término "cantidad de fucosa", en particular, se refiere a la cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan una unidad de fucosa de todas las cadenas de carbohidratos unidas a los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida en una composición que comprende los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida.

Los anticuerpos anti-HER2 que tienen una cantidad reducida de fucosilación, incluyendo los anticuerpos que no portan ninguna fucosa, tal como se utiliza en la presente se pueden obtener por varios medios. Por ejemplo, el anticuerpo anti-HER2 se puede expresar en una célula huésped con maquinaria de glicosilación alterada. Las células con la maquinaria de glicosilación alterada se han descrito en la téenica y se pueden utilizar como células huésped para producir anticuerpos anti-HER2 recombinantes que tienen una fucosilación reducida en su región Fe tal como se describe en la presente. Por ejemplo, el documento EP 1,176,195 de Hang et al . describe una linea celular con un gen FUT8 funcionalmente alterado, que codifica una fucosil transferasa, de tal manera que los anticuerpos expresados en tal línea celular presentan hipofucosilación. Por lo tanto, en una modalidad, los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se producen mediante la expresión recombinante en una línea celular que presenta un patrón de hipofucosilación, por ejemplo, una línea celular de mamífero con expresión deficiente del gen FUT8 que codifica fucosil transferasa. El documento WO03/035835 describe una variante de la línea celular CHO, células Lecl3, con capacidad reducida para unir fucosa a carbohidratos unidos a Asn(297), también teniendo como resultado la hipofucosilación de anticuerpos expresados en esa célula huésped (véase también Shields, R.L. et al . , 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740). Los anticuerpos comprendidos en las composiciones de la invención se pueden producir en una levadura o un hongo filamentoso diseñado para un patrón de glicosilación similar al de mamíferos, y son capaces de producir anticuerpos que carecen de fucosa como un patrón de glicosilación (véase, por ejemplo EP1297172B1).

Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se obtiene mediante expresión recombinante en una línea celular humana que tiene una reducida o incluso ninguna capacidad de fucosilación. Una respectiva capacidad de fucosilación reducida o ausente se puede lograr, por ejemplo, mediante la reducción de la expresión de enzimas necesarias para la fucosilación (por ejemplo, FUT8 o GMD), o mediante la eliminación de las respectivas funciones de los genes, por ejemplo mediante el noqueo de genes. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente se produce de forma recombinante en una linea celular humana, preferiblemente una linea celular de sangre humana, en particular, en una linea celular de leucemia mieloide humana. La linea celular utilizada para la producción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene preferiblemente una actividad de fucosilación reducida o ausente y/o el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se produce bajo condiciones que dan lugar a una fucosilación reducida o incluso ausente del anticuerpo. Tal como se describe en la presente, una actividad de fucosilación reducida o ausente se puede lograr mediante la manipulación de la expresión o la actividad de las enzimas necesarias para la fucosilación (por ejemplo, FUT8 o GMD). Las lineas celulares humanas preferidas que se pueden utilizar para la producción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, Fuc-trastuzumab, asi como los procedimientos de producción adecuados se describen en el documento WO 2008/028686 A2, que se incorpora en la presente a manera de referencia.

Además, el nivel de fucosilación del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede reducir después de su producción mediante la linea celular, por ejemplo, mediante tratamiento in vitro con una fucosidasa.

Tal como se discutió anteriormente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene preferiblemente un perfil de glicosilación y se obtiene mediante la expresión en una linea celular humana, preferiblemente una linea celular de leucemia mieloide humana. Un perfil de glicosilación humana se caracteriza preferiblemente en que por lo menos 70%, preferiblemente por lo menos 80%, por lo menos 85% o más preferiblemente por lo menos 90% de las cadenas de carbohidratos unidas a la parte Fe del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida son estructuras de glicanos de tipo complejo, preferiblemente estructuras de glicanos de tipo complejo, biantenario. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida que tiene un perfil de glicosilación humana, en particular, no comprende cantidades detectables de ácido N-glicolil neuraminico (NeuGc) y/o estructuras Galal,3-Gal. Las estructuras de glicosilación respectivas se encuentran en los anticuerpos que se producen en lineas celulares no humanas tales como lineas celulares de roedores. Además, comprende preferiblemente cantidades detectables de ácido N-acetil neuraminico acoplado a al,6 (NeuAc).

En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una cantidad de N- acetilglucosamina de bisección (bisGlcNAc) que es mayor que la cantidad de bisGlcNAc del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Puede comprender una cantidad de bisGlcNAc en la cadena de carbohidratos unida al dominio CH2 de por lo menos 2%, preferiblemente por lo menos 5%, por lo menos 8% o más preferiblemente por lo menos 10%. La cantidad de bisGlcNAc está preferiblemente en el intervalo de 5% a 50%, preferiblemente de 7% a 40%, más preferiblemente de 8% a 25% y más preferido de 10% a 25%. El término "cantidad de bisGlcNAc", en particular, se refiere a la cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan una unidad de N-acetilglucosamina de bisección de todas las cadenas de carbohidratos unidas a los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida en una composición que comprende los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida. Se encontró que la reducción de la cantidad de fucosa en el núcleo y al mismo tiempo el aumento de la cantidad de bisGlcNAc en la glicosilación del Fe proporciona un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida que muestra un fuerte aumento de lisis tumoral, una fuerte eficacia anti-metastásica y, además, permite tratar de manera eficiente un espectro más amplio de pacientes.

Además, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende preferiblemente una cantidad de galactosa de por lo menos 50%, preferiblemente por lo menos 55%, por lo menos 60% o por lo menos 65%. La cantidad de galactosa está preferiblemente en el intervalo de 50% a 95%, más preferiblemente de 55% a 90%, lo más preferible de 60% a 80%. El término "cantidad de galactosa", en particular, se refiere a la cantidad relativa de cadenas de carbohidratos galactosiladas, es decir, cadenas de carbohidratos que comprenden por lo menos una unidad de galactosa, de todas las cadenas de carbohidratos unidas a los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida en una composición que comprende los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan dos unidades de galactosa de por lo menos 10%, preferiblemente por lo menos 15%, más preferiblemente por lo menos 18% o por lo menos 20%. La cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan dos unidades de galactosa, en particular, está en el intervalo de 10% a 50%, preferiblemente de 15% a 40%, más preferiblemente de 18% a 30%.

La cantidad de bisGlcNAc y/o la cantidad de galactosa preferiblemente solamente se refieren a la cantidad de bisGlcNAc y la cantidad de galactosa, respectivamente, en las cadenas de carbohidratos unidas al dominio CH2 del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y de esta manera en la parte Fe del anticuerpo. Una glicosilación que comprende bisGlcNAc y galactosa tal como se describió anteriormente es también característica para un patrón de glicosilación humana y se puede obtener mediante la expresión de los anticuerpos anti-HER2 en una línea celular humana tal como se describió anteriormente.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es un anticuerpo IgG, más preferiblemente un anticuerpo IgGl. Tiene la capacidad de unirse específicamente a su epítopo diana y la capacidad de unirse a los receptores Fcy, en particular al receptor Fcy Illa. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es capaz de inducir una reacción de (ADCC) citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es capaz de inducir una ADCC más fuerte que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es por lo menos 2 veces, por lo menos 3 veces, por lo menos 5 veces, por lo menos 7 veces, por lo menos 10 veces, por lo menos 20 veces, por lo menos 30 veces, por lo menos 40 veces o por lo menos 50 veces más potente en la inducción de la ADCC que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, según se determina en ensayos de ADCC in vitro, en particular en los ensayos de ADCC tal como se describe en el Ejemplo 15, a continuación. Tal como se muestra en el mismo, una mejora de hasta 10-140 veces de la actividad antitumoral ADCC se observó cuando se compara el Fuc-trastuzumab (invención) con el anticuerpo Fue + (téenica anterior). La mayor potencia en la inducción de ADCC se refiere preferiblemente a la concentración X-veces menor del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida que es necesario para inducir el mismo nivel de ADCC (tal como la relación de células diana U sadas), preferiblemente la misma lisis específica al 95% de máxima lisis del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, en comparación con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Por ejemplo, si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida induce el mismo nivel de ADCC a una concentración 5 veces menor que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, entonces el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es 5 veces más potente en la inducción de ADCC que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Tal como se muestra por los ejemplos, una concentración de anticuerpo de 10 a 140 veces menor fue necesaria para la misma respuesta ADCC cuando se utiliza el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en comparación con un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Alternativamente, la potencia mayor en la inducción de ADCC puede referirse al nivel de ADCC X-veces mayor (tal como la relación de células diana lisadas) inducida por el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a la misma concentración, preferiblemente 10 ng/ml, que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Por ejemplo, si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida induce un nivel 5 veces mayor de ADCC que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa a la misma concentración de anticuerpo, entonces el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es 5 veces más potente en la inducción de ADCC que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. La potencia X-veces mayor en la inducción de ADCC puede, en particular, referirse a la ADCC inducida con células efectoras de donantes que tienen el alotipo FcyRIIIa-158F/F, o con células efectoras de donantes que tienen el alotipo FcYRIIIa-158V/V, o con células efectoras de donantes que tienen el alotipo FcyRIIIa-158F/V. Preferiblemente, la potencia X-veces mayor en la inducción de ADCC se determina como un promedio de la ADCC inducida para cada uno de los diferentes alotipos FcyRIIIa. Tal como se muestra por los ejemplos, un anticuerpo de fucosa reducida de conformidad con la presente invención muestra en comparación con un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa en general una mayor ADCC, un efecto que es aún más prominente en las células cancerosas que se caracterizan por una sobreexpresión de HER2 baja. Por lo tanto, el anticuerpo anti-HER2 puede mediar de forma eficaz la ADCC en todos los alotipos de receptores ADCC y además, este efecto se observó con los tumores que expresan HER2 inferior (1+ según se determina mediante IHC).

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una región variable de cadena pesada (VH) y un dominio CH2, más preferiblemente los dominios VH, CH1, CH2 y CH3. Además, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende preferiblemente una región variable de cadena ligera (VL), preferiblemente los dominios VL y VH. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida puede comprender dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras. Es preferiblemente un anticuerpo monoclonal recombinante tal como un anticuerpo humano, humanizado o quimérico y preferiblemente es un anticuerpo humanizado.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida media la ADCC y es de conformidad con una modalidad preferida capaz de unirse específicamente a la parte extracelular de HER2/neu, en particular, al dominio IV de HER2/neu y tiene por lo menos una, preferiblemente por lo menos dos, más preferiblemente todas de las siguientes actividades: (i) es capaz de bloquear la unión de ligando a HER2, (ii) es capaz de bloquear la activación de HER2/neu, en particular, de la actividad quinasa de HER2/neu y/o (iii) es capaz de reducir la cantidad de HER2/neu en la superficie celular, en particular, mediante la inducción de la internalización de HER2/neu en la célula. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene todas las características antes mencionadas. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab y, en particular, se une al mismo epitopo que el anticuerpo trastuzumab. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es equivalente al trastuzumab en las propiedades de unión y antitumorales mediadas por Fv, sin embargo, muestra propiedades antitumorales mediadas por ADCC aumentadas debido a la glicosilación mejorada. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende las mismas secuencias CDR de cadena pesada y preferiblemente también de cadena ligera que el trastuzumab. En particular, la secuencia completa de aminoácidos de la cadena pesada y preferiblemente también de la cadena ligera del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es por lo menos 85% idéntica, por lo menos 90% idéntica, por lo menos 95% idéntica, o por lo menos 97% idéntica a las correspondientes secuencias de aminoácidos de trastuzumab. Preferiblemente, las secuencias de aminoácidos del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se derivan a partir de las correspondientes secuencias de aminoácidos de trastuzumab.

En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una región variable de cadena pesada que comprende las regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3, en donde la CDR-H1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y/o CDR-H2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y/o CDR-H3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Preferiblemente, la región variable de cadena pesada del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende todas estas tres secuencias CDR y, en particular, comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una región variable de cadena ligera que comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDRs) CDR-Ll, CDR-L2 y CDR-L3, en donde la CDR-L1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 y/o CDR-L2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y/o CDR-L3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6. Preferiblemente, la región variable de cadena ligera del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende todas estas tres secuencias CDR y, en particular, comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. Además, en ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 85% idéntica, por lo menos 90% idéntica o por lo menos 95% idéntica a las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, y/o una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 85% idéntica, por lo menos 90% idéntica o por lo menos 95% idéntica a las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. Preferiblemente, la(s) cadena (s) pesada(s) del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende(n) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 85% idéntica, por lo menos 90% idéntica o por lo menos 95% idéntica a la misma. Además, la(s) cadena(s) ligera (s) del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende (n) preferiblemente la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos por lo menos 85% idéntica, por lo menos 90% idéntica o por lo menos 95% idéntica a la misma. Tal como se describió anteriormente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es equivalente a trastuzumab en las propiedades de unión y antitumorales mediadas por Fv.

En ciertas modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende adicionalmente una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.

De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida media la ADCC y es capaz de unirse especificamente a HER2 y bloquear la dimerización de HER2/neu, en particular, la heterodimerización de HER2/neu con otros miembros de la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico tales como HERI, HER3 y HER4. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida muestra especificidad cruzada con el anticuerpo pertuzumab, y en particular, se une al mismo epitopo que el anticuerpo pertuzumab. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida comprende las mismas secuencias CDR de cadena pesada y preferiblemente también de cadena ligera como el pertuzumab. En particular, la secuencia de aminoácidos completa de la cadena pesada y preferiblemente también de la cadena ligera del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida son por lo menos 80% idénticas, preferiblemente por lo menos 90% idénticas, por lo menos 95% idénticas, o por lo menos 97% idénticas a las secuencias de aminoácidos correspondientes del pertuzumab.

Preferiblemente, las secuencias de aminoácidos del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se derivan a partir de las correspondientes secuencias de aminoácidos del pertuzumab y el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es equivalente al pertuzumab en las propiedades de unión y antitumorales mediadas por Fv, sin embargo, muestra propiedades antitumorales mediadas por ADCC aumentadas debido a la glicosilación mejorada descrita en la presente.

En una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es un conjugado que comprende el anticuerpo conjugado con un agente adicional tal como una sustancia terapéuticamente activa. El agente adicional preferiblemente es útil en la terapia y/o monitorización de cáncer. Por ejemplo, el agente adicional se puede seleccionar del grupo que consiste de radionucleidos, agentes quimioterapéuticos, anticuerpos, en particular, aquellos de diferentes especies y/o diferente especificidad que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, enzimas, dominios de interacción, etiquetas detectables, toxinas, componentes citolíticos, inmunomoduladores, inmunoefectores, antigenos MHC de clase I o clase II, radioisótopos y liposomas. El agente adicional, si está comprendido, puede ser unido covalentemente, en particular, mediante fusión o acoplamiento químico, o unido no covalentemente al anticuerpo. Un agente adicional preferido en particular es un radionucleido o un agente citotóxico capaz de matar células cancerosas, tal como un agente quimioterapéutico, en particular, aquellos descritos en la presente en otra sección. Los ejemplos específicos de agentes quimioterapéuticos que pueden estar conjugados como un agente adicional incluyen agentes alquilantes tales como cisplatino, antimetabolitos, alcaloides y terpenoides de plantas, alcaloides de la vinca, podofilotoxinas, taxanos tales como taxol, inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán y topotecán, o antineoplásicos tales como doxorrubicina. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede conjugar con cualquiera de los agentes quimioterapéuticos y/o anticuerpos descritos en la presente. De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida no está conjugado con un agente adicional que es una sustancia terapéuticamente activa. De conformidad con una modalidad, que también se utilizó en los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida no está conjugado con un agente adicional.

El tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida Tal como se demuestra en los datos clínicos mostrados en los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención entre otras cosas muestra una actividad antimetastásica alta y de esta manera permite el tratamiento de metástasis que puede o podría no ser tratada con un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida muestran en los grupos de pacientes definidos específicamente en la presente una eficacia terapéutica inesperadamente alta, incluso cuando se utilizan como un agente terapéutico único. Además del tratamiento exitoso de cáncer incluyendo el 'cáncer metastatizante, los anticuerpos anti-HER2 de la invención permiten el tratamiento de cánceres HER2 positivos que tienen una expresión de HER2 de nivel 1+ o 2+ (según se determina mediante IHC) y/o el tratamiento de pacientes pretratados tal como se describe en la presente, incluyendo pacientes severamente pretratados. En particular, un efecto destacado se observó en el tratamiento de metástasis, tal como, en particular, en el tratamiento de metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón e hígado. Estos efectos también se observaron en pacientes severamente pretratados, en donde tratamientos anteriores con agentes anticáncer, tales como agentes quimioterapéuticos y/o terapias con anticuerpos, en particular, con anticuerpos anti-HER2, fallaron. De esta manera, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede utilizar para el tratamiento como monoterapia, incluso en pacientes severamente pretratados. Utilizar el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida como monoterapia tiene la ventaja de que se puede lograr un efecto terapéutico mientras que se pueden esperar efectos secundarios solamente menores. Esto es una ventaja cuando se tratan pacientes con cáncer metastásico avanzado, en donde la enfermedad progresó además de tratamientos anteriores con múltiples lineas de quimioterapia y/o terapia con anticuerpos, debido a que este grupo de pacientes a menudo está en malas condiciones de salud y de esta manera, se excluye de tratamiento agresivo adicional.

Sin embargo, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención también se puede utilizar en la terapia de combinación en donde el cáncer se trata adicionalmente con uno o más agentes terapéuticos anticáncer tales como agentes quimioterapéuticos o anticuerpos anticáncer adicionales para mejorar aún más el beneficio terapéutico para el paciente. Debido a que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención es eficaz a bajas dosificaciones y en particular en dosificaciones más bajas que los anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa convencionales, tales terapias de combinación proporcionan de nuevo opciones terapéuticas novedosas y útiles, en particular, para pacientes severamente pretratados. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se utiliza en combinación con uno o más agentes anticáncer tales como agentes quimioterapéuticos y/o uno o más anticuerpos adicionales que son diferentes del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Aquí, las terapias de combinación que se pueden utilizar son aquellas establecidas para anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa, en particular, trastuzumab. El tratamiento también se puede combinar con radioterapia.

Los agentes anticáncer que se pueden utilizar en combinación con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se pueden seleccionar de cualquier agente quimioterapéutico, en particular, agentes quimioterapéuticos conocidos por ser eficaces para el tratamiento de cánceres HER2 positivos. Particularmente, las preferidas son combinaciones con agentes anticáncer que se utilizan para trastuzumab (Herceptin®). El patrón de combinación se puede seleccionar del grupo que consiste de taxanos tales como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere) y SB-T-1214; ciclofosfamida; lapatinib; capecitabina; citarabina; vinorelbina; bevacizumab; gemcitabina; maitansina; antraciclinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, testolcatona (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), exemestano (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestano (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroxiandrostenodiona, 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD) y 4-androsteno-3,6,17-triona (6-0X0); inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán, topotecán, camptotecina, lamellarina D, etopósido (VP-16), tenipósido, doxorrubicina, daunorrubicina, mitoxantrona, amsacrina, elipticinas, ácido aurintricarboxilico y HU-331; agentes quimioterapéuticos a base de platino tales como cis-diaminadicloroplatino (II) (cisplatino), cis-diamina(1,1-ciclobutanodicarboxilato)platino (II) (carboplatino) y [(IR,2R)-ciclohexano-1,2-diamina](etanodioato-O,0')platino (II) (oxaliplatino), y antimetabolitos, en particular, antifolatos tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y pralatrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, floxuridina, 5-fluorouracilo y tegafur-uracilo, y análogos de purina, moduladores selectivos de receptores estrogénicos y reguladores hacia debajo de receptores estrogénicos. Si se utiliza como terapia de combinación, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se utiliza preferiblemente en combinación con un taxano tal como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere). Este particularmente, si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida corresponde a trastuzumab, por ejemplo, tiene las mismas secuencias CDR, en particular, las mismas secuencias generales que el trastuzumab. Aquí, básicamente se pueden utilizar los mismos programas de combinación y esquemas de administración que los que se utilizan en la téenica anterior cuando se utiliza un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, por ejemplo, trastuzumab, en terapia de combinación. Las combinaciones adecuadas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida basadas en terapias con trastuzumab establecidas incluyen, pero no están limitadas a terapias de combinación con: (i) como parte de un régimen de tratamiento que comprende doxorrubicina, ciclofosfamida y ya sea paclitaxel o docetaxel; (ii) docetaxel y carboplatino; (iii) paclitaxel; (iv) cisplatino, capecetabina o 5-fluorouracilo.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede utilizar con posterioridad a la terapia con antraciclinas.

Adicionalmente, los anticuerpos terapéuticos se pueden utilizar como patrón de combinación para el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Puede ser cualquier anticuerpo que es útil en la terapia de cáncer que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En particular, el anticuerpo adicional está aprobado para el tratamiento de cáncer por una administración tal como la Administración de Medicamentos y Alimentos de EE.UU. (FDA), la Agencia Europea de Medicamentos (EMA, anteriormente EMEA) y la Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte (BfArM). Los ejemplos del anticuerpo adicional que se pueden utilizar para el tratamiento de combinación con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida son anticuerpos anti-HER2 tales como pertuzumab (que es particularmente factible si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida muestra especificidad cruzada con trastuzumab y preferiblemente es un anticuerpo trastuzumab de fucosa reducida), anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab (Erbitux), panitumomab (Vectibix) y nimotuzumab (Theraloc); anticuerpos anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin); anticuerpos anti-CD52 tal co o alemtuzumab (Campath); anticuerpos anti-CD30 tal como brentuxi ab (Adcetris); anticuerpos anti-CD33 tal como gemtuzumab (Mylotarg); y anticuerpos anti-CD20 tal como rituximab (Rituxan, Mabthera), tositumomab (Bexxar) e ibritumomab (Zevalin).

Los datos presentados en la presente demuestran que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es exitoso y/o es más eficiente que un tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, utilizando regímenes de dosificación comparables. Tal como se muestra por los datos presentados en la presente, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene éxito, mientras que el tratamiento con otro anticuerpo, en particular, con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab, fracasó. Este éxito del tratamiento se observa con cánceres primarios, asi como en el tratamiento de metástasis y cáncer que tienen una expresión de HER2 de nivel 2+ o 1+ (según se determina mediante IHC). Este efecto se observa cuando se utilizan regímenes de dosificación comparables o incluso cuando se utilizan dosificaciones más bajas.

Los datos presentados en esta solicitud muestran que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es exitoso para pacientes que son homocigotos para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/V) y también puede ser más eficaz para dichos pacientes que un tratamiento con un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Adicionalmente, los datos presentados muestran que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es exitoso para pacientes que son homocigotos para la fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy lilla (FcYRIIIa-158F/F) y pacientes que son heterocigotos para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRllla-158V/F) y es más eficaz para dichos pacientes que un tratamiento con el correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Adicionalmente, los datos muestran que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se pueden utilizar con éxito para el tratamiento de pacientes de cada alotipo Illa del receptor Fcy en particular todos los alotipos F (F/F y F/V) y/o es más eficaz para dichos pacientes que un tratamiento con el correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. De este modo, la presente invención hace una contribución significativa en la provisión de una terapia mejorada para pacientes, en particular, pacientes severamente pretratados, que sufren de cáncer metastásico debido a que el tratamiento de conformidad con la presente invención está disponible para todos los miembros de dicho grupo de pacientes que generalmente tiene una baja oportunidad de supervivencia y opciones de tratamiento limitadas.

Adicionalmente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida enseñado en la presente muestra una respuesta de ADCC mejorada no solamente en células cancerosas que muestran una fuerte sobreexpresión de HER2 (por ejemplo, 3+ según se determina mediante IHC - véase, por ejemplo, los ejemplos realizados con SK-BR-3 que tienen aprox. 1*106 moléculas por célula), sino también en células cancerosas que muestran una menor expresión de HER2 (por ejemplo, 1+ o 2+ según se determina mediante IHC - véase, por ejemplo, los ejemplos realizados con células MCF-7 que tienen aprox. 3.5*104 moléculas/célula). Por lo tanto, más pacientes se beneficiarán de los tratamientos novedosos que se describen en la presente y en pacientes particulares que sufren de un cáncer HER2 positivo, incluyendo cáncer metastatizante, que es 1+ o 2+ y, en particular, que tiene un alotipo F/F o F/V.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida proporcionado en la presente es preferiblemente para el tratamiento de un tumor primario HER2 positivo, un tumor recurrente HER2 positivo y/o metástasis HER2 positivas de tales tumores, y en particular, es útil para el tratamiento antes, durante o después de la cirugía y para la prevención o el tratamiento de las metástasis. Tal como se demuestra por la presente invención, los tratamientos con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida descritos en la presente son particularmente útiles para el tratamiento, incluyendo la prevención, de metástasis tales como metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos, y metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón y metástasis de hígado. Tal como se muestra por los datos proporcionados en la presente, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como se describe en la presente se puede utilizar con éxito para el tratamiento de lesiones causadas por un tumor HER2 positivo o metástasis, en particular, para el tratamiento de lesiones de la piel tales como ulceraciones de piel o lesiones de ganglios linfáticos. Adicionalmente, se observó que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida descrito en la presente se puede utilizar para el tratamiento de dolor y de esta manera, se puede utilizar como terapia paliativa para pacientes con cáncer incurable.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, es para el tratamiento de un paciente como terapia adyuvante. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de un paciente como terapia neoadyuvante o en una terapia neoadyuvante-adyuvante combinada. Adicionalmente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de un paciente como terapia paliativa.

Tal como se muestra por los ejemplos, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como se enseña en la presente es terapéuticamente exitoso, en particular, puede tener como resultado la remisión del tumor o la metástasis o una estabilización de la enfermedad. En particular, en los pacientes analizados severamente pretratados se observaron por lo menos estabilizaciones de la enfermedad y respuestas parciales, los cuales son éxitos importantes en el grupo de pacientes de pacientes severamente pretratados que básicamente no tienen opciones terapéuticas o solamente limitadas. En particular, los ejemplos muestran que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida descrito en la presente pueden tener como resultado la inhibición del crecimiento de tumores, la reducción del tamaño de tumores; la prevención de metástasis adicionales (ya sea del mismo o diferente tipo) y/o la reducción del número o tamaño de las metástasis. En particular, se observó una reducción impresionante de las lesiones causadas por el tumor y/o metástasis primarios, en particular, con respecto a la metástasis de piel, incluyendo la metástasis de piel ulcerativa, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales, incluyendo metástasis de pulmón e hígado. También se observó una reducción de adenopatías mediastínicas. Debido a los efectos terapéuticos obtenidos con el tratamiento de la presente invención, se puede lograr la supervivencia libre de progresión y/o un aumento de la esperanza de vida de los pacientes.

Tal como se muestra por los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida enseñado en la presente es muy eficaz y por lo tanto, se observa rápidamente una respuesta terapéutica. Esto es una ventaja importante en el grupo de pacientes que sufre de cáncer metastatizante, así como en el grupo de pacientes de los pacientes severamente pretratados, en donde han fracasado múltiples tratamientos previos. Tal como se muestra por los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida enseñado en la presente también se puede utilizar para tratar el grupo de pacientes que sufre de cáncer metastatizante, en donde han fracasado múltiples tratamientos previos. Un efecto terapéutico del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, por lo menos una respuesta parcial, se obtiene preferiblemente por lo menos después de la segunda administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente ya después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Tal como se muestra en los ejemplos, se observó una considerable reducción de la metástasis de piel ulcerativa después del primer tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención. En ciertas modalidades, un efecto terapéutico se obtiene después de 8 semanas o menos, preferiblemente 7 semanas o menos, 6 semanas o menos, 5 semanas o menos, 4 semanas o menos, 3 semanas o menos, o 2 semanas o menos, más preferiblemente 1 semana o menos después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Los tratamientos anteriores Los presentes inventores encontraron que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad la presente invención muestra alta eficacia terapéutica y éxito clínico incluso en pacientes en los cuales fracasaron múltiples tratamientos anticáncer anteriores, en particular, pretratamientos con agentes quimioterapéuticos y/u otros anticuerpos anticáncer, en particular, anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa. Los efectos observados son notables debido a que una terapia de cáncer es más propensa a fracasar entre más ha progresado la enfermedad y en particular si ha progresado la metástasis. Después de múltiples tratamientos, las células cancerosas están sumamente mutadas y de ese modo evaden más fácilmente el tratamiento. Adicionalmente, la carga tumoral, es decir, el número de células tumorales en el paciente, aumenta con la progresión de la enfermedad. A números mayores de células tumorales, la muerte de algunas células tumorales puede ser sobrepasada en peso por la proliferación de las células tumorales restantes. Lo mismo se aplica para el desarrollo de metástasis. Por lo tanto, los efectos terapéuticos mostrados del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en pacientes severamente pretratados y, en particular, en los pacientes con metástasis de propagación generalizada son impresionantes e inesperados y también proporcionan opciones de tratamientos novedosos para nuevos grupos de pacientes.

En vista de estos resultados, el anticuerpo anti- HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención es adecuado para el tratamiento de una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular, cáncer HER2 positivo en un paciente que ha recibido uno o más tratamientos previos de dicha enfermedad neoplásica HER2 positiva. De conformidad con una modalidad, dicha enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular, dicho cáncer HER2 positivo es metastatizante. Los tratamientos anteriores de la enfermedad neoplásica incluyen tratamientos con uno o más agentes quimioterapéuticos, tratamientos con radiación (radioterapia), tratamientos con uno o más anticuerpos terapéuticos que son diferentes del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, determinados tratamientos con uno o más anticuerpos de alta fucosa que corresponden preferiblemente con respecto a su eficacia al anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida (por ejemplo, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es equivalente a trastuzumab en las propiedades de unión y antitumorales mediadas por Fv) y combinaciones de dos o más de estos tratamientos. En particular, por lo menos un pretratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab que haya ocurrido ya sea como monoterapia o terapia combinada.

Adicionalmente, la enfermedad neoplásica HER2 positiva puede haber sido tratada mediante cirugía antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En particular, el tratamiento anterior del paciente involucró cirugía de cáncer, preferiblemente una extirpación quirúrgica o por lo menos una parte del tumor primario y/o de la metástasis.

En modalidades preferidas, el paciente fue sujeto a dos o más, preferiblemente tres o más, más preferiblemente cuatro o más, cinco o más, seis o más, siete o más, ocho o más tratamientos anteriores anticáncer previos al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Los tratamientos anteriores comprenden preferiblemente por lo menos un tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como, en particular, trastuzumab ya sea como monoterapia o en combinación con una terapia adicional tal como uno o más agentes quimioterapéuticos y/o radioterapia y/o uno o más anticuerpos adicionales que están dirigidos contra un antígeno diferente de HER2. El tratamiento anterior con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa puede también haber implicado el uso de un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab, que se conjuga con un agente adicional, tal como, en particular, un agente quimioterapéutico tal como maitansina. En una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el pretratamiento no fue conjugado con un agente adicional. De conformidad con una modalidad, un anticuerpo anti-HER2 aglicosilado se utilizó en el tratamiento anterior.

En modalidades particulares, el paciente ha sido tratado con por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos cinco, por lo menos seis, por lo menos siete, por lo menos ocho, por lo menos nueve o por lo menos diez agentes anticáncer diferentes tales como agentes quimioterapéuticos y/o anticuerpos terapéuticos previos al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida descrito en la presente.

Uno o más, en particular, todos los tratamientos anteriores han fracasado y el cáncer HER2 positivo reapareció o progresó después de los tratamientos anteriores.

El anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el tratamiento anterior En aspectos y modalidades preferidas de la invención, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se utiliza después del tratamiento fracasado del paciente con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Los detalles con respecto al anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa y las modalidades particulares del mismo ya se describieron anteriormente. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa se basan en el mismo anticuerpo y de esta manera, en particular, se unen al mismo antigeno y comprenden las mismas regiones CDR pero difieren entre sí en su glicosilación en la región Fe, en particular, en su cantidad de fucosa. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una menor cantidad de fucosa que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa y es capaz de mediar una respuesta de ADCC más fuerte. Adicionalmente, tiene preferiblemente una mayor cantidad de bisGlcNAc tal como se describió anteriormente.

El anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene preferiblemente una cantidad de fucosa en su dominio CH2 que es de 65% o más, 70% o más, o 75% o más. Los anticuerpos de alta fucosa respectivos se obtienen cuando se produce el anticuerpo en lineas celulares estándar tales como células CHO o células SP2/0. Por ejemplo, el anticuerpo trastuzumab (Herceptin ®) que se produce en células CHO es un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa con más de 70% de fucosa en la cadena de carbohidratos que está unida al dominio CH2. En modalidades preferidas, la cantidad de fucosa en el dominio CH2 del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es de por lo menos 20 puntos porcentuales, preferiblemente de por lo menos 30 puntos porcentuales, más preferiblemente de por lo menos 40 puntos porcentuales, de por lo menos 50 puntos porcentuales o de por lo menos 60 puntos porcentuales, o incluso de por lo menos 70 puntos porcentuales menos que la cantidad de fucosa en el dominio CH2 del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Por ejemplo, si el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene un contenido de fucosa de 70% y el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene un contenido de fucosa que es 60 puntos porcentuales menor, este tiene un contenido de fucosa de 10%. De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es afucosilado y no comprende fucosa.

En modalidades adicionales, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el tratamiento previo del paciente tiene una cantidad de bisGlcNAc en el dominio CH2 de 10% o menos, 7% o menos, o 5% o menos, más preferiblemente 3% o menos o no comprende bisGlcNAc. La cantidad de bisGlcNAc del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es de por lo menos 5 puntos porcentuales, más preferiblemente por lo menos 7 puntos porcentuales, lo más preferible por lo menos 10 puntos porcentuales mayor que la cantidad de bisGlcNAc del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Adicionalmente, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa puede comprender una cantidad de galactosa en el dominio CH2 de 70% o menos, 60% o menos o 55% o menos, en particular 50% o menos. La cantidad de galactosa del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es de por lo menos 10 puntos porcentuales mayor, más preferiblemente por lo menos 15 puntos porcentuales mayor o por lo menos 20 puntos porcentuales mayor, lo más preferible por lo menos 25 puntos porcentuales mayor que la cantidad de galactosa del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa.

El anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa preferiblemente es del mismo tipo de anticuerpo que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, y en particular, es un anticuerpo IgG, preferiblemente una anticuerpo IgGl. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es capaz de unirse específicamente al mismo epítopo que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y/o muestra especificidad cruzada con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene secuencias de aminoácidos de cadena pesada y/o cadena ligera que son por lo menos 80%, por lo menos 90% o por lo menos 95%, más preferiblemente 100% idénticas a las secuencias de aminoácidos correspondientes del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En particular, las secuencias de aminoácidos de las CDRs de cadena pesada y/o las CDRs de cadena ligera son idénticas a las secuencias de aminoácidos correspondientes de las CDRs del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el pretratamiento es el anticuerpo trastuzumab (Herceptin) o muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab.

De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el pretratamiento es capaz de bloquear la unión del ligando y/o dimerización de HER2/neu, en particular, la heterodimerización de HER2/neu con otros miembros de la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico tales como HERI, HER3 y HER4. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es el anticuerpo pertuzumab (Omnitarg) o muestra especificidad cruzada con el anticuerpo pertuzumab.

De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el pretratamiento se une específicamente a un epítopo de HER2 que es diferente del epítopo del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En esta modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tienen diferentes secuencias CDR. De conformidad con una modalidad, ellos tienen por lo menos una diferencia en su modo de acción.

El anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa puede ser un anticuerpo completo o un fragmento o derivado de un anticuerpo. Tal como se describió en una modalidad anterior, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el pretratamiento se puede conjugar con un agente terapéutico adicional. Los ejemplos del agente terapéutico adecuado son radionucleidos y agentes quimioterapéuticos, en particular, agentes quimioterapéuticos tal como se describen en la presente, por ejemplo, maitansina. De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es no conjugado. El tratamiento anterior con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa puede ser una monoterapia o una terapia de combinación junto con uno o más agentes quimioterapéuticos y/o uno o más anticuerpos adicionales y/o radioterapia. Los agentes quimioterapéuticos adecuados y anticuerpos adicionales son aquellos descritos en la presente en otra sección.

Tal como se muestra en los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida utilizado de conformidad con la presente invención tiene una eficacia terapéutica mayor que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa que se utilizó en el tratamiento anterior y, además, en configuraciones terapéuticas eficaces, en donde el anticuerpo de alta fucosa no mostró ningún efecto. Los detalles de los efectos terapéuticos y de los grupos de pacientes que se pueden tratar se describen en la presente en otra sección. También se observó que la eficacia terapéutica del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es todavía mayor que aquella de un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa correspondiente incluso cuando el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra a la misma dosis pero con menos frecuencia que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa y/o cuando el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra con la misma frecuencia pero a una dosis más baja que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Por lo tanto, ventajosamente, las dosificaciones se pueden reducir y los ciclos de tratamiento se pueden prolongar cuando se utiliza el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención.

En otras modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se utiliza después del tratamiento fracasado del paciente con un anticuerpo anti-HER2 que no es glicosilado. Un anticuerpo que no tiene ninguna glicosilación en la parte Fe muestra una unión reducida a receptores Fe y por lo tanto, no es capaz de mediar una fuerte actividad de ADCC. Las características y modalidades descritas en la presente con respecto al anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa también asimismo aplican para el anticuerpo anti-HER2 no glicosilado. En particular, los anticuerpos anti-HER2 no glicosilados abarcan fragmentos de anticuerpos que no comprenden un dominio CH2, especialmente fragmentos de anticuerpos que no comprenden una región Fe. Los anticuerpos dirigidos contra otros antígenos utilizados en el tratamiento anterior Los anticuerpos terapéuticos adicionales que son diferentes del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida también incluyen anticuerpos que están dirigidos contra otros antígenos y/o no se unen específicamente a HER2. Estos anticuerpos adicionales que podrían haber sido utilizados en el pretratamiento preferiblemente se unen específicamente a antígenos que están presentes en células tumorales y que preferiblemente no están presentes en células no tumorales o que están presentes en células no tumorales en una cantidad inferior o en sitios que no son accesibles para los anticuerpos. Preferiblemente, los anticuerpos adicionales están aprobados para el tratamiento de cáncer por una administración tal como la Administración de Medicamentos y Alimentos de EE.UU. (FDA), la Agencia Europea de Medicamentos (EMA, anteriormente EMEA) y la Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte (BfArM). Los ejemplos preferidos del anticuerpo adicional son anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab (Erbitux), panitumomab (Vectibix) y nimotuzumab (Theraloc); anticuerpos anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin); anticuerpos anti-CD52 tal como alemtuzumab (Campath); anticuerpos anti-CD30 tal como brentuximab (Adcetris); anticuerpos anti-CD33 tal como gemtuzumab (Mylotarg); y anticuerpos anti-CD20 tales como rituximab (Rituxan, MabThera), tositumomab (Bexxar) y ibritumomab (Zevalin).

El anticuerpo adicional puede ser un anticuerpo completo o un fragmento o derivado de un anticuerpo. En una realización, el anticuerpo adicional se conjuga con un agente terapéutico adicional. Los ejemplos de tales agentes terapéuticos son radionucleidos y agentes quimioterapéuticos, en particular, los agentes quimioterapéuticos tal como se describen en la presente. De conformidad con una modalidad, el anticuerpo adicional que se utilizó en el tratamiento anterior no es conjugado.

Los agentes quimioterapéuticos utilizados en el tratamiento anterior En ciertas modalidades, los tratamientos anteriores incluyen uno o más tratamientos con un agente quimioterapéutico o con una combinación de dos o más agentes quimioterapéuticos, opcionalmente en combinación con uno o más anticuerpos terapéuticos diferentes del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Los agentes guimioterapéuticos pueden ser cualesquiera agentes quimioterapéuticos y se pueden seleccionar del grupo que consiste en ciclofosfamida; lapatinib; capecitabina; citarabina; vinorelbina; bevacizumab; gemcitabina; maitansina; antraciclinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona; taxanos tales como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere) y SB-T-1214; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, testolcatona (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), exemestano (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestano (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroxiandrostenodiona, 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD) y 4-androsteno-3,6,17-triona (6-OXO); inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán, topotecán, ca ptotecina, lamellarina D, etopósido (VP-16), tenipósido, doxorrubicina, daunorrubicina, mitoxantrona, amsacrina, elipticinas, ácido aurintricarboxilico y HU-331; agentes quimioterapéuticos a base de platino tales como cis-diaminadicloroplatino (II) (cisplatino), cis-diamina (1,1-ciclobutanodicarboxilato)latino (II) (carboplatino) y [(IR,2R)-ciclohexano-1,2-diamina](etanodioato-O,0')platino (II) (oxaliplatino), y antimetabolitos, en particular, antifolatos tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y pralatrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, floxuridina, 5-fluorouracilo y tegafur-uracilo, y análogos de purina. En particular, el tratamiento anterior incluyó uno o más tratamientos con un taxano.

Programas de tratamientos anteriores Los tratamientos anteriores a modo de ejemplo que el paciente recibió después de los cuales se utiliza el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida para tratar el cáncer HER2 positivo se dan a continuación y el pretratamiento implica por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos o por lo menos tres de los siguientes tratamientos: - por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia y/o trastuzumab (Herceptin) en combinación con un agente quimioterapéutico, en particular en combinación con un taxano tal como docetaxel y vinorelbina y/o - por lo menos una monoterapia con trastuzumab y por lo menos una, preferiblemente por lo menos dos terapias de combinación que implican trastuzumab; y/o - por lo menos un tratamiento con por lo menos un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con uno, dos o más diferentes taxanos, en particular, con paclitaxel y docetaxel como monoterapia o terapia de combinación; y/o - por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base de platino tal como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; y/o - por lo menos una radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; y/o - por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres o por lo menos cuatro tratamientos con un agente quimioterapéutico o una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina; y/o - por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos o por lo menos tres tratamientos con una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de ácido folinico y fluorouracilo y oxaliplatino (FOLFOX), una combinación de ácido folinico y fluorouracilo e irinotecán (FOLFIRI), y una combinación de tegafur-uracilo y folinato de calcio; y/o - por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos o por lo menos tres tratamientos con un anticuerpo terapéutico que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, con un anticuerpo anti-EGFR tales como panitumomab o cetuximab, y/o con un anticuerpo anti-VEGF tal como bevacizumab, opcionalmente en combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos.

Los tratamientos anteriores mencionados anteriormente podrían haber sido utilizados como terapias adyuvantes y/o neoadyuvantes y los tratamientos anteriores del cáncer pueden aquí y preferiblemente incluir cirugía. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para tratar cáncer en un paciente después de uno o más, preferiblemente dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más, seis o más, siete u ocho o más o más de los tratamientos mencionados anteriormente en cualquier orden. En particular, el tratamiento anterior ha implicado el uso de un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab (Herceptin®).

La enfermedad neoplásica HER2 positiva y el paciente que será tratado La enfermedad neoplásica HER2 positiva que será tratada por el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida preferiblemente es un cáncer HER2 positivo tal como se describió con detalle anteriormente. En la presente, también se describieron tipos preferidos de cánceres HER2 positivos y se hace referencia a la descripción anterior para evitar repeticiones. Tal como se describe en la presente, el cáncer HER2 positivo puede en particular ser seleccionado del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer gástrico, cáncer de esófago, cáncer de pulmón tales como carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer bronquial y cáncer de glándulas salivales tal como carcinoma de la glándula parótida. En ciertas modalidades, que son preferidas, el cáncer es un cáncer metastatizante. El cáncer HER2 positivo puede incluir cualquier tipo de metástasis, tales como metástasis de piel, metástasis de ganglios linfáticos, metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón, metástasis de hígado y/o metástasis del cerebro. En ciertas modalidades, el cáncer es un cáncer que tiene una expresión de HER2 de nivel 2+ o 1+ según se determina mediante IHC y opcionalmente puede ser cáncer metastatizante que tiene estas características. Las ventajas y los programas de tratamiento específicos que se hacen posible debido a la presente invención se describieron anteriormente, se hace referencia a la descripción anterior.

En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de cáncer metastatizante en donde el cáncer o tumor primarios ya desarrollaron una o más metástasis. La una o más metástasis, en particular, está presente en el tejido que es diferente del tejido del cual se desarrolló el cáncer primario o tumor.

En modalidades preferidas, el paciente que será tratado sufre de cáncer de mama HER2 positivo, en particular, cáncer de mama metastatizante. El cáncer de mama incluye carcimona ductal in situ, carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular in situ, carcinoma lobular invasivo, carcinoma medular, enfermedad de Paget del pezón y cáncer de mama metastásico. Un ejemplo específico de tal cáncer de mama HER2 positivo es un carcinoma ductal invasivo de mama, en particular, con la implicación de ganglios linfáticos. En una modalidad, el paciente que será tratado tiene cáncer de mama metastatizante y sufre de metástasis de piel y/o metástasis de ganglios linfáticos. En particular, el paciente que será tratado puede tener lesiones en el sitio del tumor primario y/o una o más metástasis. En particular, el paciente puede tener lesiones de piel tales como ulceraciones de piel, en particular, ulceraciones de piel que tienen un diámetro de por lo menos 2 cm, preferiblemente por lo menos 3 cm, por lo menos 4 cm, por lo menos 5 cm o por lo menos 6 cm. El paciente también puede tener adenopatias mediastinicas causadas por metástasis de ganglios linfáticos. En particular, en el paciente que será tratado por lo menos una parte del tumor primario y/o de las metástasis se eliminó, por ejemplo, mediante cirugía y/o radioterapia, y en donde, por ejemplo, metástasis y/o un tumor recurrente están presentes.

En ciertas modalidades, el paciente que será tratado tiene un tumor y/o metástasis HER2 positivos que son receptor de estrógeno negativo (ER-) y/o receptor de progesterona negativo (PgR-). Receptor de estrógeno negativo se refiere al cáncer en donde ningún receptor de estrógeno pudo ser detectado en las células cancerosas. Receptor de progesterona negativo se refiere al cáncer en donde ningún receptor de progesterona pudo ser detectado en las células cancerosas.

El cáncer HER2 positivo puede, antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención, ser resistente a o puede haber progresado después del tratamiento con uno o más agentes anticáncer tales como agentes quimioterapéuticos y/o anticuerpos terapéuticos, en particular, uno o más de los agentes quimioterapéuticos descritos en la presente y/o uno o más de los anticuerpos descritos en la presente, preferiblemente por lo menos uno o más de los anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa descritos en la presente tales como trastuzumab (Herceptin) y/o pertuzumab (Omnitarg). Además, la enfermedad neoplásica HER2 positiva es resistente a o ha progresado después de la radioterapia.

El paciente que será tratado puede ser cualquier paciente humano que padece cáncer HER2 positivo. Preferiblemente, el paciente es un paciente de cáncer severamente pretratado, en particular, un paciente que fue sometido a una o más, preferiblemente dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o seis o más terapias de cáncer antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Los tratamientos anteriores respectivos que caracterizan aall ppaacciieennttee que será tratado se describieron anteriormente, se hace referencia a la descripción anterior.

Los presentes inventores, entre otras cosas, encontraron que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención proporciona un tratamiento mejorado de pacientes con cáncer HER2 positivo que es resistente a, o ha progresado después de una o más terapias de cáncer independientemente del alotipo del receptor FCY Illa. Tal como se demostró en ensayos in vitro y se confirmó en el marco clínico, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención tiene una actividad de ADCC aumentada, en particular, con células efectoras obtenidas de donantes que tienen el alotipo FcYRIIIa-158F/F o F/V. Con estas células efectoras, un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es menos eficaz en el ensayo de ADCC. Sin embargo, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención también muestra un tratamiento mejorado de pacientes con cáncer que es resistente a los anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa comunes para pacientes que tienen el alotipo FcyRIIIa-158V/V. El paciente puede tener, por lo tanto, cualquier alotipo del receptor FCY Illa y se beneficiará de los tratamientos novedosos que se describen en la presente. En particular, el paciente puede ser homocigótico para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158V/V), o el paciente puede ser homocigótico para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F), o el paciente puede ser heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158V/F). De esta manera, todos los alotipos FcYlIIa, incluyendo los alotipos F/F y F/V, se pueden tratar y también los pacientes que tienen una sobreexpresión baja de HER2, tales como HER21+ y HER22+ .

El estudio clínico que utiliza el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención también mostró que el tratamiento con dicho anticuerpo causa muy pocas reacciones adversas. En particular, no se observaron efectos cardiotóxicos clínicos en el estudio. En contraste con esto, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa disponible comercialmente Herceptin® es conocido por tener efectos secundarios cardiotóxicos. Por lo tanto, en modalidades particulares, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención causa menos reacciones adversas, preferiblemente tiene una menor cardiotoxicidad, que el trastuzumab como se utiliza en el medicamento Herceptin®.

En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de cáncer de pacientes que tienen insuficiencia cardíaca congestiva, insuficiencia cardiaca sintomática, enfermedad coronaria del corazón, arritmias incontroladas, angina de pecho, insuficiencia de la válvula cardiaca, hipertonía, infarto al miocardio, disnea en reposo, o un riesgo para una o más de estas enfermedades. Preferiblemente pacientes que tienen una fracción de cyección ventricular izquierda de 55% o menos, en particular 50% o menos o 45% o menos se pueden tratar con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En modalidades particulares, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es adecuado para el tratamiento de estos pacientes en combinación con una o más antracielinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona.

Adicionalmente, el estudio clínico también mostró que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la invención es bien tolerado por los pacientes y causa menos reacciones adversas que Herceptin, en particular, no hay reacciones adversas gastrointestinales tales como diarrea, náuseas y vómitos. De esta manera, preferiblemente el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de pacientes para quienes son críticas las reacciones adversas gastrointestinales.

La composición que comprende el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y dosificaciones El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, está comprendido en una composición terapéutica. Es preferiblemente una composición adecuada para inyección intravenosa, por ejemplo una solución acuosa que comprende el anticuerpo, o una composición que se puede utilizar para preparar una composición adecuada para inyección intravenosa, por ejemplo una composición de anticuerpo liofilizada. La composición que comprende el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida puede comprender adicionalmente uno o más componentes adicionales seleccionados del grupo que consiste en disolventes, diluyentes, y excipientes. Los componentes de la composición todos son preferiblemente farmacéuticamente aceptables. La composición puede ser una composición sólida o liquida, en particular una solución - de preferencia acuosa - emulsión o suspensión o un polvo liofilizado.

La composición comprende preferiblemente el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una concentración en el intervalo de 1 mg/ml a 100 mg/ml, más preferiblemente de 5 mg/ml a 50 mg/ml, desde 10 mg/ml a 30 mg/ml o de 15 mg/ml a 25 mg/ml, en particular, aproximadamente 20 mg/ml.

El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede administrar al paciente por cualquier vía de administración adecuada, preferiblemente mediante inyección intravenosa. En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra en una dosis en el intervalo de 0.5 a 15 mg, 1 a 10 mg, preferiblemente de 2 a 8 mg, más preferiblemente de 3 a 6 mg o de 3 a 5 mg, lo más preferible de aproximadamente 4 mg o de aproximadamente 6 mg por kg de peso corporal del paciente o menos. Aquí, se encontró que los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida se pueden administrar en dosificaciones más bajas que los anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa y provocan un efecto terapéutico incluso cuando se administran como monoterapia. Por lo tanto, se pueden utilizar ventajosamente dosificaciones más bajas. Alternativamente, debido al perfil de efectos secundarios adversos reducidos, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida también se puede administrar en dosis más altas, por ejemplo en una dosis en el intervalo de 0.2 a 30 mg, preferiblemente de 2 a 25 mg, más preferiblemente de 4 a 20 mg o de 6 a 18 mg, lo más preferible de 8 a 15 mg, en particular aproximadamente 12 mg por kg de peso corporal del paciente. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra en una dosis por administración en el intervalo de 10 mg a 1250 mg, preferiblemente de 50 mg a 1000 mg, más preferiblemente de 100 mg a 800 mg, de 200 mg a 750 mg o de 240 a 600 mg. Las dosis más altas de 400 a 2000 mg, preferiblemente de 500 a 1500 mg, más preferiblemente de 600 a 1000 mg también son posibles. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra en intervalos en el intervalo de 1 semana a 2 meses, preferiblemente de 2 semanas a 6 semanas, más preferiblemente de 3 semanas a 4 semanas, en particular, cada tercera o cuarta semana. Las dosis descritas anteriormente son, en particular, optimizadas para la administración cada tercera semana. Debido a la alta eficacia de los anticuerpos anti-HER2, es posible prolongar el intervalo de administración, por ejemplo de tres semanas a cuatro semanas sin tener que aumentar la dosificación. De conformidad con una modalidad, el tratamiento comprende la administración al paciente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una dosis inicial de 1 a 10 mg, preferiblemente de 2 a 8 mg, más preferiblemente de 3 a 6 mg y la administración al paciente de una pluralidad de dosis posteriores del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una cantidad que es igual o menor que la dosis inicial, en donde la dosis inicial y la dosis posterior son separadas en tiempo entre sí por al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 3 semanas, preferiblemente al menos 4 semanas.

La administración de anticuerpos mediante inyección, incluyendo infusión, puede causar reacciones adversas en el cuerpo del paciente, en particular, reacciones relacionadas con la infusión (IRR). También pueden ocurrir respectivos efectos cuando se administra el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Para reducir las respectivas reacciones relacionadas con la infusión, el tratamiento del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se puede combinar con medios para el tratamiento o la prevención de tales reacciones relacionadas con la infusión.

De conformidad con una modalidad de la invención, la prevención o reducción de las IRR se logra mediante la combinación del tratamiento del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida con una pre-medicación de un agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas. Dicho agente puede tener una o más de las siguientes características: es un analgésico no opioide, es un analgésico no salicilato, es un analgésico de anilina/derivado de anilina, es un derivado de acetanilida, es un derivado de aminofenol, es un acetilaminofenol, es un inhibidor de la ciclooxigenasa y/o es un inhibidor de prostaglandinas. Preferiblemente N- (4-hidroxifenil)acetamida (paracetamol o acetaminofeno) se utiliza como agente analgésico y/o antipirético. El agente se administra preferiblemente por via intravenosa o por via oral.

Se encontró por los inventores gue tal pre medicación reduce significativamente de forma inesperada las IRR asociadas con la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Por lo tanto en un aspecto de la invención, esta pre-medicación se utiliza para prevenir o tratar IRR causadas por la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Las reacciones relacionadas con la infusión Ejemplar son fiebre, edema como angioedema, artralgia y escalofríos.

El agente con propiedades analgésicas y/o propiedades antipiréticas se administra preferiblemente en una dosis de 250 mg a 1500 mg, por lo menos 500 mg, preferiblemente por lo menos 700 mg, por lo menos 800 mg, por lo menos 900 mg, más preferiblemente de 1000 mg. Se administra preferiblemente antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente en una dosis única o en dos o más, preferiblemente dos dosis separadas.

En modalidades preferidas, el agente se administra 5 min a 6 h, preferiblemente 10 min a 4 h, 15 min a 3 h o 20 min a 2 h, más preferiblemente 30 min a 90 min, en particular, 1 hora antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, como una dosis única.

En ciertas modalidades preferidas, el agente se administra en dos dosis, mientras que una primera dosis se administra 8 h a 48 h, preferiblemente 12 h a 36 h o 16 h a 24 h, en particular, en la noche antes (es decir, aproximadamente 12 horas antes) de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. La segunda dosis se administra 5 min a 6 h, preferiblemente 10 min a 4 h, 15 min a 3 h o 20 min a 2 h, más preferiblemente 30 min a 90 min, en particular, 1 hora antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. En una modalidad preferida particular, una primera dosis del agente se administra en la noche antes de la administración del anticuerpo y una segunda dosis se administra 1 hora antes de la administración del anticuerpo. Preferiblemente ambas dosis son de 1000 mg del agente. Un agente preferido particular de este esquema de administración es N- {4-hidroxifenil)acetamida.

En modalidades adicionales, el agente se administra al producirse una reacción relacionada con la infusión a la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida.

El agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas se puede administrar en combinación con uno o más esteroides, preferiblemente glucocorticoides, tales como cortisol, acetato de cortisona, cloprenol, prednisona, prednisolona, deflazacort, fluocortolon, triamcinolona, betametasona o dexametasona, en particular, metilprednisolona. El esteroide se administra preferiblemente 5 min a 4 h, más preferiblemente, 15 min a 1 h, más preferiblemente aproximadamente 30 min antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. El esteroide se administra preferiblemente en una dosis de 25 a 500 mg, más preferiblemente de 50 a 250 mg o de 100 a 150 mg, en particular, en una dosis de aproximadamente 125 mg.

En una modalidad preferida particular de la invención, el tratamiento del paciente con el anticuerpo anti-HER2 se combina con una pre-medicación con -(4-hidroxifenil)acetamida y metilprednisolona como sigue con el fin de reducir o prevenir eficazmente las IRR: a) una primera dosis de 1000 mg de N- {4- hidroxifenil)acetamida la noche antes de la administración del anticuerpo, b) una segunda dosis de 1000 mg de N- (4-hidroxifenil) 1 hora antes de la administración del anticuerpo y c) una dosis de 125 mg de metilprednisolona 30 min antes de la administración del anticuerpo.

En este esquema el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra en dosis descritas anteriormente; se hace referencia a la descripción anterior.

En ciertas modalidades, no se administran esteroides, preferiblemente no se administran esteroides ni antihistamínicos. En particular, las reacciones relacionadas con la infusión se tratan o previenen solamente con el agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas para tratar o prevenir reacciones relacionadas con la infusión que son causadas por la administración de un anticuerpo anti-HER2. El anticuerpo anti-HER2 preferiblemente es el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como se define en la presente. Las características y modalidades de los otros aspectos de la invención en consecuencia se aplican a este aspecto de la invención.

Métodos de tratamiento En un aspecto adicional, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad neoplásica HER2 positiva, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) a dicho paciente en una cantidad suficiente para tratar la enfermedad neoplásica.

En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método de tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer mmeettaassttaattiizzaannttee,, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida).

En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método de tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular, cáncer HER2 positivo, después del tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa o un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a dicho paciente en una cantidad suficiente para tratar la enfermedad neoplásica. En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos y el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más. En modalidades preferidas, antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más de fucosa (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), c) y d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente .

En ciertas modalidades, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC), que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida).

Todas las modalidades y características descritas anteriormente y a continuación también se aplican asimismo a los métodos de tratamiento de conformidad con la invención.

Modalidades específicas de la presente invención Las modalidades específicas y particularmente preferidas de la presente invención serán descritas a continuación: Modalidades específicas del tratamiento de cáncer metas tatizante En una primera modalidad especifica de dicho primer aspecto, la presente invención está dirigida a un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida para el tratamiento de un paciente con un cáncer HER2 positivo metastatizante, preferiblemente cáncer de mama o cáncer de colon, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida (i) tiene en el dominio CH2 una cantidad de fucosa de 20% o menos, una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8% y una cantidad de galactosa de por lo menos 65%; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDRl tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; y en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos uno, por lo menos dos y preferiblemente por lo menos tres agentes quimioterapéuticos diferentes; y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), en donde las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente trastuzumab (Herceptin®); c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. Preferiblemente, los tratamientos anteriores en esta primera modalidad incluyeron uno o más de los siguientes (i) por lo menos un tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia y/o por lo menos un tratamiento de combinación con un agente quimioterapéutico, preferiblemente un taxano tal como docetaxel y vinorelbina, en particular, por lo menos una monoterapia con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin®) y adicionalmente por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos tratamientos de combinación con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin); (ii) por lo menos un tratamiento con por lo menos un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con uno, dos o más taxanos diferentes, preferiblemente con paclitaxel y docetaxel; (iii) por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base de platino tales como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; (iv) radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; (v) por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres o por lo menos cuatro tratamientos con un agente quimioterapéutico o una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina; y/o (vi) extirpación quirúrgica de por lo menos una parte del tumor primario y/o una o más metástasis.

En particular, los tratamientos anteriores del paciente incluyen en esta primera modalidad, por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos 5 o la totalidad de los 6 tratamientos (i) a (vi). Preferiblemente, los tratamientos anteriores incluyen por lo menos los tratamientos (i), (v) y (vi).

En una segunda modalidad especifica, la presente invención está dirigida a un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida para el tratamiento de un paciente con un cáncer HER2 positivo metastatizante, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida (i) tiene en el dominio CH2 una cantidad de fucosa de 20% o menos, una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8% y una cantidad de galactosa de por lo menos 65%, no tiene NeuGc detectable, no tiene NeuAc acoplado a Gala2,6 detectable y preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida fue producido de forma recombinante en una linea celular humana; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) es capaz de inducir una ADCC más fuerte que el trastuzumab (Herceptin®); y en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres agentes quimioterapéuticos diferentes; y b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), en donde las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente trastuzumab (Herceptin®); c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente y en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de una metástasis seleccionada de metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón o de hígado. Los tratamientos anteriores preferidos se describieron anteriormente en relación con la primera modalidad específica, se refiere a la respectiva divulgación.

El paciente que es tratado en la primera o en la segunda modalidad específica puede tener las siguientes características: (i) el paciente es homocigoto para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/V); o (ii) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcyRIIIa-158V/F).

En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de la primera y la segunda modalidades específicas se puede utilizar para el tratamiento de pacientes independientemente de su alotipo FcyRIIIa. En la primera y la segunda modalidades especificas, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos pueden tener una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquimica. Preferiblemente, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante FISH o CISH. De conformidad con un aspecto, la paciente que será tratado en la primera o en la segunda modalidades especificas es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcyRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F) y, opcionalmente, además el cáncer y/o metástasis HER2 positivos tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquimica.

Las dosificaciones adecuadas y preferidas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y los programas de premedicación adecuados y preferidos se describieron anteriormente; se hace referencia a la descripción anterior, que también se aplica a la primera y la segunda modalidades específicas. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la primera y la segunda modalidades específicas puede ser para usarse como monoterapia o como terapia de combinación. Las modalidades se describieron anteriormente y se refiere a la respectiva divulgación.

Tal como se ha descrito anteriormente, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer metastatizante, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente de 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida).

Todas las modalidades y características descritas anteriormente o a continuación también se aplican asimismo a los métodos de tratamiento de conformidad con la invención.

Tal como se describió anteriormente, en un cierto aspecto, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es un cáncer metastatizante .

Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 es para el tratamiento de metástasis, en donde las metástasis incluyen una o más de las metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado y metástasis de ganglios linfáticos. De conformidad con una modalidad, el paciente tiene uno o más metástasis viscerales, en particular metástasis de pulmón y/o de hígado. Preferiblemente, el cáncer HER2 positivo tiene una o más de las siguientes características: (i) es cáncer de mama, preferiblemente cáncer de mama metastatizante; (ii) es un carcinoma ductal invasivo de mama, preferiblemente con la implicación de ganglios linfáticos; (iii) está asociado con metástasis de ganglios linfáticos y/o metástasis de piel, en particular, está asociado con adenopatías mediastínicas causadas por metástasis de ganglios linfáticos y/o ulceraciones de piel causadas por metástasis de piel; (iv) está asociado con metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado; (v) se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, cáncer de glándulas salivales tal como el carcinoma de la glándula parótida, cáncer de pulmón tal como el carcinoma de pulmón de células no pequeñas, y cáncer bronquial. De conformidad con una modalidad, las metástasis HER2 positivas tienen una o más de las siguientes características: (i) receptor de estrógeno negativo (ER-) y/o receptor de progesterona negativo (PgR-); (ii) una sobreexpresión de HER2 de por lo menos nivel 1+, preferiblemente nivel 2+ o nivel 3+, según se determina mediante inmunohistoquímica; (iii) una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+ o inferior, tal como se determina mediante inmunohistoquímica; (v) ellos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante hibridación fluorescente in situ (FISH) o hibridación cromogénica in situ (CISH).

De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 es para (i) el tratamiento de un tumor primario; (ii) el tratamiento de un tumor recurrente; (iii) inhibición del crecimiento de tumores; (iv) el tratamiento de metástasis, incluyendo metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado; y/o (v) el tratamiento de lesiones causadas por una metástasis, en particular, lesiones de piel o lesiones de ganglios linfáticos, más particularmente, úlceras de la piel. Preferiblemente, el tratamiento con los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida tiene como resultado una o más de las siguientes: (i) una prevención de metástasis adicionales; (ii) una reducción de lesiones causadas por una o más metástasis, en particular, úlceras de la piel; (iii) reducción del número de metástasis. De conformidad con una modalidad, antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. De conformidad con una modalidad, la enfermedad neoplásica volvió a aparecer o progresó después de los tratamientos anteriores. Tal como se muestra en los ejemplos, el anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la invención es particularmente eficaz en el tratamiento con éxito de pacientes pretratados, incluyendo pacientes severamente pretratados, en donde los tratamientos previos fracasaron o donde el cáncer volvió a aparecer o metástasis adicionales se desarrollaron.

De conformidad con una modalidad, antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida el paciente ha sido tratado con por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, o por lo menos cinco agentes anticáncer diferentes, en particular agentes guimioterapéuticos ya sea en monoterapia o terapia de combinación. Preferiblemente, los tratamientos anteriores incluyen uno o más, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro o por lo menos cinco, lo más preferible todos los siguientes tratamientos: (i) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia; (ii) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) en combinación con un agente quimioterapéutico, preferiblemente en combinación con un taxano tal como docetaxel y vinorelbina; (iii) por lo menos un tratamiento con un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con taxanos diferentes, preferiblemente con paclitaxel y docetaxel; (iv) por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base de platino tal como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; (v) radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; (vi) por lo menos un tratamiento con una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina. De conformidad con una modalidad, el tratamiento anterior del paciente involucró cirugía de cáncer, preferiblemente una extirpación quirúrgica del tumor primario y/o de las metástasis. De conformidad con una modalidad preferida, el cáncer HER2 positivo es resistente a o ha progresado después del tratamiento con por lo menos un agente quimioterapéutico y/o es resistente a o ha progresado después del tratamiento con trastuzumab de alta fucosa (Herceptin ®) y/o pertuzumab de alta fucosa (Omnitarg). De conformidad con una modalidad, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para tratamiento adyuvante, para tratamiento neoadyuvante, para tratamiento adyuvante-neoadyuvante o para tratamiento paliativo. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra repetidamente al paciente y se obtiene un efecto terapéutico por lo menos después de la segunda administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente ya después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Preferiblemente, el efecto terapéutico incluye una reducción de lesiones de piel, en particular lesiones de piel ulcerativas, una reducción de adenopatías mediastínicas y/o una reducción de metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado.

Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 20% o menos, 15% o menos, 10% o menos, 5% o menos, o 0%, en particular en el intervalo de 2 % a 20%, de 3% a 15% o de 5% a 10%. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una o más, preferiblemente todas las siguientes características de glicosilación en el dominio CH2: (i) una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8%; (ii) una cantidad de galactosa de por lo menos 65%; (iii) opcionalmente sin NeuGc detectable; (iv) opcionalmente sin Galal,3-Gal; (v) opcionalmente NeuAc acoplado a a2,b detectable. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una o más, preferiblemente por lo menos dos, más preferiblemente todas las siguientes características: (i) comprende una región variable de cadena pesada que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (iii) que comprende una región variable de cadena ligera que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (v) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab; (vi) comprende secuencias de aminoácidos de cadena pesada y de cadena ligera que son por lo menos 90% idénticas a las secuencias de aminoácidos del anticuerpo trastuzumab; (vii) es equivalente al anticuerpo trastuzumab en las propiedades de unión y respuesta antitumoral mediada por Fv; (viii) se produjo de forma recombinante en una linea celular humana. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es capaz de inducir una ADCC más fuerte que un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, que preferiblemente es trastuzumab (Herceptin®).

De conformidad con una modalidad, el anticuerpo anti-HER2 de .alta fucosa, que preferiblemente es trastuzumab (Herceptin®), tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 70% o más, en particular 80% o más. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el pretratamiento tiene una o más, preferiblemente por lo menos tres de las siguientes características: (i) es un anticuerpo IgG; (ii) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iii) es capaz de unirse específicamente al mismo epítopo que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iv) las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, por lo menos 90% o por lo menos 95%, más preferiblemente 100% idéntica a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (v) es el anticuerpo trastuzumab (Herceptin®); (vi) es capaz de unirse específicamente a HER2, en donde el epítopo del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es diferente del epítopo del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (vii) es el anticuerpo pertuzumab (Omnitarg).

De conformidad con una modalidad, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una monoterapia. Alternativamente, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación, en particular, en combinación con (i) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o (ii) por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (iv) cirugía de cáncer y/o radioterapia.

Tal como se describió anteriormente, los pacientes que serán tratados con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida pueden haber recibido tratamientos de cáncer previos. De conformidad con una modalidad, el tratamiento previo involucró por lo menos un agente quimioterapéutico . Aquí, el por lo menos un agente quimioterapéutico utilizado en el pretratamiento del paciente se puede seleccionar del grupo que consiste en ciclofosfamida; lapatinib; capecitabina; citarabina; vinorelbina; bevacizumab; gemcitabina; maitansina; antraciclinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona; taxanos tales como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere) y SB-T-1214; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, testolcatona (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), exemestano (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestano (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroxiandrostenodiona, 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD) y 4-androsteno-3,6,17-triona (6-OXO); inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán, topotecán, camptotecina, lamellarina D, etopósido (VP-16), tenipósido, doxorrubicina, daunorrubicina, mitoxantrona, amsacrina, elipticinas, ácido aurintricarboxílico y HU-331; agentes quimioterapéuticos a base de platino tales como cis-diaminadicloroplatino (II) (cisplatino), cis-diamina(1,1-ciclobutanodicarboxilato)platino (II) (carboplatino) y [(IR,2R)-ciclohexano-1,2-diamina](etanodioato-O,0')platino (II) (oxaliplatino), y antimetabolitos, en particular, antifolatos tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y pralatrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, floxuridina, 5-fluorouracilo y tegafur-uracilo, y análogos de purina.

Preferiblemente, el tratamiento anterior del paciente involucró el uso de por lo menos un anticuerpo terapéutico diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y el cual, en particular, se selecciona del grupo que consiste de anticuerpos anti-HER2 que difieren en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, pertuzumab, anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab (Erbitux), panitumomab (Vectibix) y nimotuzumab (Theraloc); anticuerpos anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin); anticuerpos anti-CD52 tal como alemtuzumab (Campath); anticuerpos anti-CD30 tal como brentuximab (Adcetris); anticuerpos anti-CD33 tal como gemtuzumab (Mylotarg); y anticuerpos anti-CD20 tales como rituximab (Rituxan, Mabthera), tositumomab (Bexxar) e ibritumomab (Zevalin).

De conformidad con una modalidad, el tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación con por lo menos un agente anticáncer diferente, en donde el agente anticáncer se selecciona del grupo que consiste en (i) agentes quimioterapéuticos, en donde el agente quimioterapéutico es preferiblemente un taxano, y (ii) anticuerpos terapéuticos anticáncer, en donde el anticuerpo terapéutico preferiblemente es un anticuerpo anti-HER2 que difiere en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como pertuzumab si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida corresponde a trastuzumab, anticuerpos anti-EGFR tal como cetuximab (Erbitux) y/o un anticuerpo anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin).

Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra en una cantidad de 1 a 10 mg/kg de peso corporal del paciente cada primera, segunda, tercera o cuarta semana o con menos frecuencia; preferiblemente en una cantidad de 2 a 8 mg/kg de peso corporal del paciente cada tercera semana o con menos frecuencia. Preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una eficacia terapéutica mayor que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa cuando se administra el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a la misma dosis pero con menos frecuencia que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa o cuando el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra con la misma frecuencia pero a una dosis más baja que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa.

Tal como se discutió anteriormente, la eficacia terapéutica mejorada permite tratar diferentes pacientes que no pudieron o pudieron ser tratados menos eficazmente con los anticuerpos anti-HER2 del arte previo. Aquí, existen diferentes opciones: (i) el paciente es homocigoto para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/V); (ii) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158V/F); (iii) el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de pacientes independientemente de su alotipo FcYRIIIa; o (iv) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F) y en donde el cáncer HER2 positivo y/o metástasis tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, tal como se determina mediante inmunohistoquimica y en donde preferiblemente, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante FISH o CISH.

En ciertas modalidades, el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se combina con una pre-medicación del paciente con un agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, en particular, con N- (4-hidroxifenil)acetamida.

Preferiblemente, la pre-medicación comprende por lo menos dos dosis separadas del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, mientras que la primera dosis se administra 8 h a 48 h antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y la segunda dosis se administra 5 min a 6 horas antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. Preferiblemente, cada una de las dosis contiene 250 mg y 1500 mg, en particular 1000 mg del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas. Preferiblemente, la premedicación comprende además la administración de un esteroide, preferiblemente un glucocorticoide, en particular, metilprednisolona. Preferiblemente, el esteroide se administra 5 min a 4 h, en particular, 30 min antes de la administración del anticuerpo. Preferiblemente, la pre-medicación comprende, o consiste en, las siguientes etapas: a) una primera dosis de 1000 mg de IV—(4— hidroxifenil)acetamida la noche antes de la administración del anticuerpo, b) una segunda dosis de 1000 mg de N- (4-hidroxifenil) 1 hora antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y c) una dosis de 125 mg de metilprednisolona 30 min antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida.

En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un agente analgésico y/o antipirético para el tratamiento o la prevención de reacciones relacionadas con la infusión causadas por la administración de los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la pre-medicación tal como se describió anteriormente.

Modalidades específicas del tratamiento de pacientes pre tra tados A continuación, se enumeran modalidades específicas de la presente invención de conformidad con el segundo aspecto con respecto al tratamiento de pacientes que han recibido tratamientos de cáncer previos. Todas las características y modalidades descritas anteriormente en la presente también se aplican a y se pueden combinar con las siguientes modalidades. 1. Un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular, cáncer HER2 positivo, en donde previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; y b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. 2. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 1, en donde la enfermedad neoplásica volvió a aparecer o progresó después de los tratamientos anteriores. 3. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 1 o 2, en donde previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida el paciente ha sido tratado con por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, o por lo menos cinco agentes quimioterapéuticos diferentes ya sea en monoterapia o terapia de combinación. 4. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde los tratamientos anteriores incluyen uno o más, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro o por lo menos cinco o todos los siguientes tratamientos: (i) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia; (ii) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) en combinación con un agente quimioterapéutico, preferiblemente en combinación con un taxano tales como docetaxel y vinorelbina; (iii) por lo menos un tratamiento con un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con diferentes taxanos, preferiblemente con paclitaxel y docetaxel; (iv) por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base de platino tal como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; (v) radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; (vi) por lo menos un tratamiento con una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina. 5. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 4, en donde el tratamiento anterior del paciente involucró cirugía de cáncer, preferiblemente una extirpación quirúrgica del tumor y/o metástasis primarios. 6. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 5, en donde el cáncer HER2 positivo es un cáncer metastatizante. 7. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 6, en donde las metástasis incluyen una o más de metástasis de piel, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado y metástasis de ganglios linfáticos. 8. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 7, en donde el paciente tiene una o más metástasis de piel ulcerativas. 9. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 8, para el tratamiento de un cáncer HER2 positivo que tiene una o más de las siguientes características: (i) es cáncer de mama, preferiblemente cáncer de mama metastatizante; (ii) es un carcinoma ductal invasivo de mama, preferiblemente con la implicación de ganglios linfáticos; (iii) está asociado con metástasis de ganglios linfáticos y/o metástasis de piel, en particular, está asociado con adenopatías mediastínicas causadas por metástasis de ganglios linfáticos y/o ulceraciones de piel causadas por metástasis de piel; (iv) está asociado con metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado. 10. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 9, para el tratamiento de un tumor y/o metástasis HER2 positivos que tienen una o más de las siquientes características: (i) receptor de estrógeno negativo (ER-) y/o receptor de progesterona negativo (PgR-); (ii) una sobreexpresión de HER2 de por lo menos nivel 1+, preferiblemente nivel 2+ o nivel 3+, según se determina mediante inmunohistoquímica; (iii) una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquímica; (v) es positivo para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante hibridación fluorescente in situ (FISH) o hibridación cromogénica in situ (CISH). 11. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 10, donde el cáncer HER2 positivo es resistente a o ha progresado después del tratamiento con por lo menos un agente quimioterapéutico y/o es resistente a o ha progresado después del tratamiento con trastuzumab de alta fucosa (Herceptin) y/o pertuzumab de alta fucosa (Omnitarg). 12. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 11, para (i) el tratamiento de un tumor primario; (ii) el tratamiento de un tumor recurrente; (iii) inhibición del crecimiento de tumores; (iv) el tratamiento de metástasis, incluyendo metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado; y/o (v) el tratamiento de lesiones causadas por un tumor o una metástasis, en particular, lesiones de piel o lesiones de ganglios linfáticos, más particularmente, úlceras de la piel. 13. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 12, en donde el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene como resultado uno o más de los siguientes: (i) inhibición del crecimiento de tumor; (ii) reducción del tamaño de tumor; (iii) prevención de metástasis adicionales; (iv) reducción de lesiones causadas por el tumor primario y/o una o más metástasis, en particular, úlceras de la piel; (v) reducción del número de metástasis; (vii) aumento de la supervivencia libre de progresión; y/o (viii) aumento de la esperanza de vida. 14. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 13, en donde el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para tratamiento adyuvante, para tratamiento neoadyuvante, para tratamiento adyuvante-neoadyuvante o para tratamiento paliativo. 15. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 14, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra de forma repetida al paciente y en donde un efecto terapéutico se obtiene por lo menos después de la segunda administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente ya después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. 16. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 15, en donde el efecto terapéutico incluye una reducción de lesiones de la piel, en particular lesiones de la piel ulcerativas, una reducción de adenopatias mediastinicas y/o una reducción de metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado. 17. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 16, que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 20% o menos, 15% o menos, 10% o menos, 5% o menos o 0%, preferiblemente en el intervalo de 2% a 20%, de 3% a 15% o de 5% a 10%. 18. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 17, que tiene una o más, preferiblemente todas las siguientes características de glicosilación en el dominio CH2: (i) una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8%; (ii) una cantidad de galactosa de por lo menos 65%; (iii) opcionalmente sin NeuGc detectable; (iv) opcionalmente sin Gala1,3-Gal detectable; (v) opcionalmente NeuAc acoplado a OÍ2,6 detectable. 19. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 18, que tiene una o más, preferiblemente por lo menos dos, más preferiblemente todas las siguientes características: (i) comprende una región variable de cadena pesada que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 , una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (v) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab; (vi) comprende secuencias de aminoácidos de cadena pesada y de cadena ligera que son por lo menos 90% idénticas a las secuencias de aminoácidos del anticuerpo trastuzumab; (vii) es equivalente al anticuerpo trastuzumab en la unión y la respuesta antitumoral mediada por Fv; (ix) se produce de forma recombinante en una linea celular humana. 20. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 19, que es capaz de inducir una ADCC más fuerte que el correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. 21. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 20, en donde el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 70% o más. 22. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 y 21, en donde el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el pretratamiento tiene una o más, preferiblemente por lo menos tres de las siguientes características: (i) es un anticuerpo IgG; (ii) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iii) es capaz de unirse específicamente al mismo epítopo que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iv) las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, por lo menos 90% o por lo menos 95%, más preferiblemente 100% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (v) es el anticuerpo trastuzumab (Herceptin®); (vi) es capaz de unirse específicamente a HER2, en donde el epítopo del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es diferente del epítopo del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (vii) es el anticuerpo pertuzumab (Omnitarg). 23. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 22, en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una monoterapia. 24. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 23, en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación, en particular, en combinación con (i) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o (ii) por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (iv) cirugía de cáncer y/o radioterapia. 25. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 24, en donde a) el por lo menos un agente quimioterapéutico utilizado en el pretratamiento del paciente se selecciona del grupo que consiste en ciclofosfamida; lapatinib; capecitabina; citarabina; vinorelbina; bevacizumab; gemcitabina; maitansina; antraciclinas tales como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona; taxanos tales como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere) y SB-T-1214; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, testolcatona (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), exemestano (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestano (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroxiandrostenodiona, 1, ,6-androstatrien-3,17-diona (ATD) y 4-androsteno-3,6,17-triona (6-0X0); inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán, topotecán, ca ptotecina, lamellarina D, etopósido (VP-16), tenipósido, doxorrubicina, daunorrubicina, mitoxantrona, amsacrina, elipticinas, ácido aurintricarboxílico y HU-331; agentes quimioterapéuticos a base de platino tales como cis-diaminadicloroplatino (II) (cisplatino), cis-diamina (1,1-ciclobutanodicarboxilato)platino (II) (carboplatino) y [(IR,2R)-ciclohexano-1,2-diamina](etanodioato-O,0')platino (II) (oxaliplatino), y antimetabolitos, en particular, antifolatos tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y pralatrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, floxuridina, 5-fluorouracilo y tegafur-uracilo, y análogos de purina; y/o b) en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación con por lo menos un agente anticáncer diferente, en donde el agente anticáncer se selecciona del grupo que consiste en (i) agentes quimioterapéuticos, en donde el agente quimioterapéutico preferiblemente es un taxano, y (ii) anticuerpos terapéuticos anticáncer, en donde el anticuerpo terapéutico preferiblemente es un anticuerpo anti-HER2 que difiere en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como pertuzumab si el anticuerpo anti- HER2 de fucosa reducida corresponde a trastuzumab, anticuerpos anti-EGFR tal como cetuximab (Erbitux) y/o un anticuerpo anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin). 26. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 25, en donde el tratamiento anterior del paciente involucró el uso de por lo menos un anticuerpo terapéutico diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y el cual, en particular, se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos anti-HER2 que difieren en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, pertuzumab, anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab (Erbitux), panitumomab (Vectibix) y nimotuzumab (Theraloc); anticuerpos anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin); anticuerpos anti-CD52 tal como alemtuzumab (Campath); anticuerpos anti-CD30 tal como brentuximab (Adcetris); anticuerpos anti-CD33 tal como gemtuzumab (Mylotarg); y anticuerpos anti-CD20 tales como rituximab (Rituxan, MabThera), tositu o ab (Bexxar) e ibritumomab (Zevalin). 27. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 26, para la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una cantidad de 1 a 10 mg/kg de peso corporal del paciente cada primera, segunda, tercera o cuarta semana o con menos frecuencia; preferiblemente en una cantidad de 2 a 5 mg/kg de peso corporal del paciente cada tercera semana o con menos frecuencia. 28. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 27, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una eficacia terapéutica mayor que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa cuando se administra el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a la misma dosis pero con menos frecuencia que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa o cuando se administra el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida con la misma frecuencia pero a una dosis menor que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. 29. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 28, en donde: (i) el paciente es homocigoto para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/V); (ii) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcyRIIIa-158V/F); (iii) el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de pacientes independientemente de su alotipo FcyRIIIa; o (iv) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F) y en donde el cáncer y/o metástasis HER2 positivos tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, tal como se determina mediante inmunohistoquimica y en donde preferiblemente, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante FISH o CISH. 30. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 29, en donde el tratamiento del anticuerpo anti-HER2 se combina con una pre-medicación del paciente con un agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, en particular con h7-(4-hidroxifenil)acetamida. 31. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 30, en donde la pre-medicación comprende por lo menos dos dosis separadas del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, mientras que la primera dosis se da 8 h a 48 h antes de la administración del anticuerpo y la segunda dosis se da 5 minutos a 6 horas antes de la administración del anticuerpo. 32. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 30, en donde la cada una de las dosis contiene 250 mg y 1500 mg, en particular, 1000 mg del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas. 33. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con una de las modalidades 30 a 32, en donde la pre-medicación comprende además la administración de un esteroide, preferiblemente un glucocorticoide, en particular, metilprednisolona. 34. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 33, en donde el esteroide se administra 5 min a 4 h, en particular, 30 min antes de la administración del anticuerpo. 35. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con una de las modalidades 30 a 34, en donde la pre-medicación comprende, o consiste en, las siguientes etapas: a) una primera dosis de 1000 mg de N- { 4-hidroxifenil)acetamida la noche antes de la administración del anticuerpo, b) una segunda dosis de 1000 mg de N- {4-hidroxifenil) 1 hora antes de la administración del anticuerpo y c) una dosis de 125 mg de metilprednisolona 30 min antes de la administración del anticuerpo. 36. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 35, para el tratamiento de un cáncer HER2 positivo que se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, cáncer de glándulas salivales tal como carcinoma de la glándula parótida, cáncer de pulmón tal como carcinoma de pulmón de células no pequeñas, y cáncer bronquial. 37. Un agente analgésico y/o antipirético para el tratamiento o la prevención de reacciones relacionadas con la infusión causadas por la administración de una composición que comprende anticuerpos anti-HER2 de conformidad con la pre-medicación de cualquiera de las modalidades 30 a 35.

En un aspecto adicional, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad neoplásica HER2-positiva, en particular, cáncer HER2 positivo después del tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a dicho paciente en una cantidad suficiente para tratar la enfermedad neoplásica. En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos y el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más. En modalidades preferidas, previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más de fucosa (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), c) y d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente.

Todas las modalidades y características descritas anteriormente también se aplican asimismo a los métodos de tratamiento de conformidad con la invención.

Modalidades específicas del tratamiento de cáncer con baja expresión de HER2 A continuación, se enumeran realizaciones especificas de la presente invención de conformidad con el tercer aspecto relativo al tratamiento de cáncer con baja expresión de HER2 . Todas las características y realizaciones descritas anteriormente en la presente también se aplican a y se pueden combinar con las siguientes realizaciones. 1. Un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente con una enfermedad neoplásica HER2 positiva, en particular, un cáncer HER2 positivo, en donde el tumor HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC). 2. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 1, en donde la enfermedad neoplásica HER2 positiva es un cáncer metastatizante. 3. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 1 o 2, en donde: (i) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F); o (ii) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor FCY Illa (FcYRIIIa-158V/F) y en donde el cáncer y/o metástasis HER2 positivos tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquimica y en donde el cáncer y/o metástasis HER2 positivos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante FISH o CISH. 4. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. 5. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 4, en donde el cáncer HER2 positivo volvió a aparecer o progresó después de los tratamientos anteriores. 6. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 4 o 5, en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida el paciente ha sido tratado con por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, o por lo menos cinco agentes anticáncer diferentes, en particular, agentes quimioterapéuticos y/o anticuerpos terapéuticos ya sea en monoterapia o terapia de combinación. 7. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 a 6, en donde los tratamientos anteriores incluyen uno o más, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro o por lo menos cinco o todos los siguientes tratamientos: (i) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia; (ii) por lo menos un tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) en combinación con un agente quimioterapéutico, preferiblemente en combinación con un taxano tales como docetaxel y vinorelbina; (iii) por lo menos un tratamiento con un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con diferentes taxanos, preferiblemente con paclitaxel y docetaxel; (iv) por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base platino tal como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; (v) radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; (vi) por lo menos un tratamiento con una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina. 8. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 a 7, en donde el tratamiento anterior del paciente involucró cirugía de cáncer, preferiblemente una extirpación quirúrgica del tumor y/o metástasis primarios. 9. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde el cáncer se selecciona de cáncer de mama, cáncer gástrico, carcinomas, cáncer de colon, carcinoma de células transicionales, cáncer de vejiga, tumores uroteliales, cáncer uterino, adenocarcinomas de esófago avanzados, adenocarcinomas gástricos o adenocarcinomas de la unión gastroesofágica, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de endometrio, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de tiroides, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer del cerebro, cáncer cervical, cáncer intestinal y cáncer de hígado, preferiblemente cáncer de colon, cáncer de glándulas salivales tal como carcinoma de la glándula parótida, cáncer de pulmón tal como carcinoma de pulmón de células no pequeñas, y cáncer bronquial, y en particular, formas metastásicas de los anteriores. 10. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con una o más de las modalidades 2 a 9, en donde las metástasis incluyen una o más de metástasis de piel, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado y metástasis de ganglios linfáticos. 11. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 10, en donde el paciente tiene una o más metástasis de piel ulcerativas. 12. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 11, para el tratamiento de un cáncer HER2 positivo que tiene una o más de las siguientes características: (i) es cáncer de mama, preferiblemente cáncer de mama metastatizante; (ii) es un carcinoma ductal invasivo de mama, preferiblemente con la implicación de ganglios linfáticos; (iii) es un cáncer de colon; (iv) es cáncer de vejiga; (v) está asociado con metástasis de ganglios linfáticos y/o metástasis de piel, en particular, está asociado con adenopatías mediastínicas causadas por metástasis de ganglios linfáticos y/o ulceraciones de la piel causadas por metástasis de piel; (vi) está asociado con metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado. 13. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 12, para el tratamiento de un tumor y/o metástasis HER2 positivos que tienen una o más de las siguientes características: (i) receptor de estrógeno negativo (ER-) y/o receptor de progesterona negativo (PgR-) (ii) ellos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante hibridación fluorescente in situ (FISH) o hibridación cromogénica in situ (CISH). 14. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 a 13, donde el cáncer HER2 positivo es resistente a o ha progresado después del tratamiento con por lo menos un agente quimioterapéutico y/o es resistente a o ha progresado después del tratamiento con trastuzumab de alta fucosa (Herceptin) y/o pertuzumab de alta fucosa (Omnitarg). 15. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 14, para (i) el tratamiento de un tumor primario; (ii) el tratamiento de un tumor recurrente; (iii) la inhibición del crecimiento de tumor; (iv) el tratamiento de metástasis, incluyendo metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado; y/o (v) lesiones causadas por un tumor o una metástasis, en particular, lesiones de piel o lesiones de ganglios linfáticos, más particularmente úlceras de la piel. 16. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 15, en donde el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene como resultado una o más de las siguientes: (i) inhibición del crecimiento de tumor; (ii) reducción del tamaño de tumor; (iii) prevención de metástasis adicionales; (iv) reducción de lesiones causadas por el tumor primario y/o una o más metástasis, en particular, úlceras de la piel; (v) reducción del número de metástasis; (vii) aumento de la supervivencia libre de progresión; y/o (viii) aumento de la esperanza de vida. 17. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 16, en donde el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para tratamiento adyuvante, para tratamiento neoadyuvante, para tratamiento adyuvante-neoadyuvante o para tratamiento paliativo. 18. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 17, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra de forma repetida al paciente y en donde un efecto terapéutico se obtiene por lo menos después de la segunda administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente ya después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. 19. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 18, en donde el efecto terapéutico incluye una reducción de lesiones de piel, en particular, lesiones de piel ulcerativas, una reducción de adenopatias mediastinicas y/o una reducción de metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado tienen como resultado una reducción del dolor. 20. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 19, que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 20% o menos, 15% o menos, 10% o menos, 5% o menos, de 10% a 3% o 0%, preferiblemente en el intervalo de 2% a 20%, de 3% a 15% o de 5% a 10%. 21. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 20, que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 20% o menos, preferiblemente 15% o menos, más preferiblemente 10% o menos y una o más, preferiblemente todas las siguientes características de glicosilación: (i) una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8%; (ii) una cantidad de galactosa de por lo menos 65%; (iii) opcionalmente sin NeuGc detectable; (iv) opcionalmente sin Gala1,3-Gal detectable; (v) opcionalmente NeuAc acoplado a a2,6 detectable. 22. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 21, que tiene una o más, preferiblemente por lo menos dos, más preferiblemente todas las siguientes características: (i) comprende una región variable de cadena pesada que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (v) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab; (vi) comprende secuencias de aminoácidos de cadena pesada y de cadena ligera que son por lo menos 90% idénticas a las secuencias de aminoácidos del anticuerpo trastuzumab; (vii) es equivalente al anticuerpo trastuzumab en la unión y respuesta antitumoral mediada por Fv; (viii) se produce de forma recombinante en una linea celular humana. 23. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 22, que es capaz de inducir una ADCC más fuerte que un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. 24. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 a 23, en donde el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el tratamiento anterior tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 70% o más. 25. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 y 24, en donde el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa utilizado en el tratamiento anterior tiene una o más, preferiblemente por lo menos tres de las siguientes características: (i) es un anticuerpo IgG; (ii) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iii) es capaz de unirse específicamente al mismo epítopo que el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (iv) las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, por lo menos 90% o por lo menos 95%, más preferiblemente 100% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; (v) es el anticuerpo trastuzumab (Herceptin®); (vi) es capaz de unirse específicamente a HER2, en donde el epítopo del anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa es diferente del epitopo del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (vii) es el anticuerpo pertuzumab (Omnitarg). 26. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 25, en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una monoterapia. 27. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 26, en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación, en particular, en combinación con (i) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o (ii) por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (iii) cirugía de cáncer y/o radioterapia. 28. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 27, en donde a) el por lo menos un agente quimioterapéutico utilizado en el tratamiento anterior del paciente de conformidad con la modalidad 4 se selecciona del grupo que consiste en ciclofosfamida; lapatinib; capecitabina; citarabina; vinorelbina; bevacizumab; gemcitabina; maitansina; antraciclinas tales como daunorrubíciña, doxorrubicina, epirubicina, idarubicina, valrubicina y mitoxantrona; taxanos tales como paclitaxel (Taxol), docetaxel (Taxotere) y SB-T-1214; inhibidores de la aromatasa tales como aminoglutetimida, testolcatona (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), exemestano (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestano (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroxiandrostenodiona, 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD) y 4-androsteno-3,6,17-triona (6-OXO); inhibidores de la topoisomerasa tales como irinotecán, topotecán, camptotecina, lamellarina D, etopósido (VP-16), tenipósido, doxorrubicina, daunorrubicina, mitoxantrona, amsacrina, elipticinas, ácido aurintricarboxilico y HU-331; agentes quimioterapéuticos a base de platino tales como cis-diaminadicloroplatino (II) (cisplatino), cis-dia ina(1,1-ciclobutanodicarboxilato)platino (II) (carboplatino) y [(IR,2R)-ciclohexano-1,2-diamina](etanodioato-O,0')platino (II) (oxaliplatino), y antimetabolitos, en particular, antifolatos tales como metotrexato, pemetrexed, raltitrexed y pralatrexato, análogos de pirimidina tales como fluorouracilo, gemcitabina, floxuridina, 5-fluorouracilo y tegafur-uracilo, y análogos de purina; y/o b) en donde el tratamiento con anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación con por lo menos un agente anticáncer diferente, en donde el agente anticáncer se selecciona del grupo que consiste en (i) agentes quimioterapéuticos, en donde el agente quimioterapéutico preferiblemente es un taxano, y (ii) anticuerpos terapéuticos anticáncer, en donde el anticuerpo terapéutico preferiblemente es un anticuerpo anti-HER2 que difiere en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tal como pertuzumab si el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida corresponde a trastuzumab, anticuerpos anti-EGFR tal como cetuximab (Erbitux) y/o un anticuerpo anti-VEGF tal como bevacizumab (Avastin). 29. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 28, en donde el tratamiento anterior del paciente involucró el uso de por lo menos un anticuerpo terapéutico diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y el cual, en particular, se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos anti-HER2 que difieren en su modo de acción del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, en particular, pertuzumab, anticuerpos anti-EGFR tales como cetuximab (Erbitux), panitumomab (panitumumab) y nimotuzumab (Theraloc); anticuerpos anti-VEGF tales como bevacizumab (Avastin); anticuerpos anti-CD52 tal como alemtuzumab (Campath); anticuerpos anti-CD30 tal como brentuximab (Adcetris); anticuerpos anti-CD33 tal como gemtuzumab (Mylotarg); y anticuerpos anti-CD20 tales como rituximab (Rituxan, Mabthera), tositumomab (Bexxar) e ibritumomab (Zevalin). 30. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 29, para la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una cantidad de 1 a 10 mg/kg de peso corporal del paciente cada primera, segunda, tercera o cuarta semana o con menos frecuencia; preferiblemente en una cantidad de 2 a 5 mg/kg de peso corporal del paciente cada tercera semana o con menos frecuencia. 31. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 4 a 30, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una eficacia terapéutica mayor que un correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa cuando se administra el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a la misma dosis pero con menos frecuencia que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa o cuando el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra con la misma frecuencia pero a una dosis más baja que el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. 32. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las modalidades 1 a 31, en donde el tratamiento del anticuerpo anti-HER2 se combina con una pre-medicación del paciente con un agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, en particular, con N- {4-hidroxifenil)acetamida. 33. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 32, en donde la pre-medicación comprende por lo menos dos dosis separadas del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas, mientras que la primera dosis se da 8 h a 48 h antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y la segunda dosis se da 5 minutos a 6 horas antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. 34. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 33, en donde la cada una de las dosis contiene 250 mg y 1500 mg, en particular 1000 mg del agente con propiedades analgésicas y/o antipiréticas. 35. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con una de las modalidades 32 a 34, en donde la pre-medicación comprende además la administración de un esteroide, preferiblemente un glucocorticoide, en particular, metilprednisolona. 36. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la modalidad 35, en donde el esteroide se administra 5 min a 4 h, en particular, 30 min antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida. 37. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con una de las modalidades 32 a 34, en donde la pre-medicación comprende, o consiste en, las siguientes etapas: a) una primera dosis de 1000 mg de Ai-(4- hidroxifenil)acetamida la noche antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, b) una segunda dosis de 1000 mg de N- (4-hidroxifenil) 1 hora antes de la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y c) una dosis de 125 mg de metilprednisolona 30 min antes de la administración del anticuerpo. 38. Un agente analgésico y/o antipirético para el tratamiento o la prevención de reacciones relacionadas con la infusión causadas por la administración de una composición que comprende anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la pre-medicación de cualquiera de las modalidades 32 a 37.

Las modalidades especificas y particularmente preferidas de este aspecto serán descritas de nuevo en lo siguiente: Las modalidades especificas y particularmente preferidas de la presente invención serán descritas en lo siguiente: En una primera modalidad especifica, la presente invención está dirigida a un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida para el tratamiento de un paciente con cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquímica (IHC) y en donde preferiblemente, el cáncer es un cáncer metastatizante, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida (i) tiene en el dominio CH2 una cantidad de fucosa de 20% o menos, preferiblemente 15% o menos, más preferiblemente de 10% a 0% o de 10% a 3% una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8% y una cantidad de galactosa de por lo menos 65%; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDRl tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDRl tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; y en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos uno, por lo menos dos y preferiblemente por lo menos tres agentes quimioterapéuticos diferentes; y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), en donde las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente trastuzumab (Herceptin®); c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. Preferiblemente, los tratamientos anteriores en esta primera modalidad incluyeron uno o más de los siguientes (i) por lo menos un tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin®) como monoterapia y/o por lo menos un tratamiento de combinación con un agente quimioterapéutico, preferiblemente un taxano tales como docetaxel y vinorelbina, en particular, por lo menos una monoterapia con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin®) y adicionalmente por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos tratamientos de combinación con el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Herceptin); (ii) por lo menos un tratamiento con por lo menos un taxano, preferiblemente por lo menos dos tratamientos separados con uno, dos o más taxanos diferentes, preferiblemente con paclitaxel y docetaxel; (iii) por lo menos un tratamiento con un agente quimioterapéutico a base de platino tal como cisplatino, preferiblemente en combinación con un agente quimioterapéutico tal como gemcitabina; (iv) radioterapia, preferiblemente como terapia adyuvante; (v) por lo menos uno, preferiblemente por lo menos dos, por lo menos tres o por lo menos cuatro tratamientos con un agente quimioterapéutico o una combinación de diferentes agentes quimioterapéuticos tales como una combinación de doxorrubicina y ciclofosfamida, una combinación de lapatinib y capecitabina, una combinación de idarubicina y etopósido y citarabina, y una combinación de bevacizumab y vinorelbina y capecitabina; y/o (vi) extracción quirúrgica de por lo menos una parte del tumor primario y/o una o más metástasis.

En particular, los tratamientos anteriores del paciente incluyen en esta primera modalidad, por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos 5 o la totalidad de los 6 tratamientos (i) a (vi). Preferiblemente, los tratamientos anteriores incluyen por lo menos los tratamientos (i), (v) y (vi).

En una segunda modalidad específica, la presente invención está dirigida a un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida para el tratamiento de un paciente con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquímica (IHC) y en donde preferiblemente, el cáncer es un cáncer metastatizante, en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida (i) tiene en el dominio CH2 una cantidad de fucosa de 15% o menos, preferiblemente de 10% a 0% o de 10% a 2%, una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8% y una cantidad de galactosa de por lo menos 65%, no tiene NeuGc detectadle, no tiene NeuAc acoplado a Gala2,6 detectable y preferiblemente, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se produjo de forma recombinante en una línea celular humana; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma, en donde la CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, la CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y la CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) es capaz de inducir una ADCC más fuerte que el trastuzumab (Herceptin®); y en donde antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos dos, preferiblemente por lo menos tres agentes quimioterapéuticos diferentes; y b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), en donde las secuencias de aminoácidos de su región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera son por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% idénticas a aquellas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente trastuzumab (Herceptin®); c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente y en donde el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de una metástasis seleccionada de metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis de ganglios linfáticos y metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón o de hígado. Los tratamientos anteriores preferidos se describieron anteriormente en relación con la primera modalidad específica, se refiere a la respectiva divulgación.

El paciente que es tratado en la primera o la segunda modalidades específicas puede tener las siguientes características: (i) el paciente es homocigoto para valina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcyRIIIa-158V/V); o (ii) el paciente es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcyRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F).

En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de la primera y la segunda modalidades especificas se puede utilizar para el tratamiento de pacientes independientemente de su alotipo FcyRIIIa. En la primera y la segunda modalidades especificas, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos pueden tener una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, según se determina por inmunohistoquimica. Preferiblemente, el cáncer y/o metástasis HER2 positivos son positivos para la amplificación del gen HER2 según se determina mediante FISH o CISH. De conformidad con un aspecto, el paciente que será tratado en la primera o la segunda modalidades especificas es homocigoto para fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158F/F) o el paciente es heterocigoto para valina y fenilalanina en la posición del aminoácido 158 del receptor Fcy Illa (FcYRIIIa-158V/F) y opcionalmente además el cáncer y/o metástasis HER2 positivos tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquimica.

Las dosificaciones adecuadas y preferidas del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida y los programas de pre-medicación adecuados y preferidos se describieron anteriormente; se hace referencia a la descripción anterior, que también se aplica a la primera y la segunda modalidades especificas. El anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la primera y la segunda modalidades especificas puede ser para usarse como monoterapia o como terapia de combinación. Las modalidades se describieron anteriormente y se refiere a la respectiva descripción.

Tal como se ha descrito anteriormente, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer HER2 positivo tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquimica (IHC) y en donde, preferiblemente, el cáncer es un cáncer metastatizante, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos, preferiblemente 30% o menos, más preferiblemente de 15% a 0% (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida).

Tal como se describió anteriormente, la presente invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad neoplásica HER2-positiva, en particular cáncer HER2 positivo después del tratamiento con una anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa, que comprende administrar un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida a dicho paciente en una cantidad suficiente para tratar la enfermedad neoplásica. En particular, el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos y el anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más. En modalidades preferidas, antes del tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más de fucosa (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa); c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), c) y d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente. El cáncer puede ser un cáncer HER2 positivo que tiene una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+, según se determina mediante inmunohistoquímica (IHC).

Todas las modalidades y características descritas anteriormente también se aplican asimismo a los métodos de tratamiento de conformidad con la invención.

La presente solicitud reivindica el beneficio de las solicitudes anteriores US 61/673,201, presentada el 18 de julio de 2012, US 61/673,216, presentada el 18 de julio de 2012, US 61/673,229, presentada el 18 de julio de 2012 y EP 12197 768.0, presentada el 18 de diciembre de 2012, las cuales se incorporan en la presente a manera de referencia.

Los intervalos numéricos descritos en la presente son inclusive de los números que definen el intervalo. Los títulos proporcionados en la presente no son limitaciones de los diversos aspectos o modalidades de esta invención que pueden ser leídos por referencia a la especificación como un todo. De conformidad con una modalidad, la materia objeto descrita en la presente debido a que comprende ciertas etapas en el caso de los métodos o debido a que comprende ciertos ingredientes en el caso de las composiciones se refiere a la materia objeto que consiste en los respectivos pasos o ingredientes. Se prefiere seleccionar y combinar aspectos y modalidades que son preferidos y descritos en la presente y la materia objeto específica que surge de una respectiva combinación de las modalidades preferidas también pertenece a la presente descripción.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Análisis de glicosilación de variantes de trastuzumab Un anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención, aquí una variante de baja fucosilación de trastuzumab (Fue- trastuzumab, también referido posteriormente como TrasGEX™) se obtuvo mediante la expresión en una línea celular de leucemia mieloide humana que tiene una actividad de fucosilación reducida tal como se describe en WO 2008/028686 A2, incorporado en la presente a manera de referencia. El anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa trastuzumab (Fuc+ trastuzumab) se produjo en células CHO de hámster y de esta manera corresponde sustancialmente a trastuzumab (Herceptin®).

Para caracterizar el patrón de glicosilación del Fue- trastuzumab con más detalle, se realizaron estudios de glico-perfilado. El anticuerpo IgGl humanizado trastuzumab comprende un sitio de N-glicosilación en la región constante de cadena pesada 2. Para el glico-perfilado, N-glicanos intactos se liberaron del núcleo de la proteína y los extremos reductores de los N-glicanos se marcaron con un marcador de fluorescencia. La muestra purificada de los N-glicanos marcados se separó mediante UPLC. Las áreas de picos basadas en la detección fluorométrica se emplearon para el cálculo de las abundancias molares relativas de las estructuras de N-glicano. Los datos estimados para el anticuerpo se resumen en la Tabla 1. Los valores representan los contenidos molares relativos de los N-glicanos que contienen el tipo de monosacárido de interés (por ejemplo, fucosa).

Tabla 1 están relacionadas con la cantidad total de N-glicanos.

F = N-glicanos fucosilado; S > 0 = N-glicanos sialilados; G > 0 = N-glicanos galactosilados; G2 = N-glicanos con dos galactosas; B = N-glicanos con N-acetilglucosamina de bisección.

El glico-perfilado muestra que Fue- trastuzumab tiene un contenido de fucosa mucho menor y un contenido de bisGlcNAc mayor en comparación con el trastuzumabf Fue expresado en células CHO de hámster (como se utilizan para la producción de Herceptin®). Además, el Fue- trastuzumab tuvo, debido a la producción en una linea celular humana, un perfil de glicosilación humana y de esta manera sin NeuGc detectable y sin Gal 1,3-Gal detectable.

La unión, la especificidad, la afinidad y la actividad antitumoral mediada por Fv objetivo del Fuc-trastuzumab y el Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) se analizaron en diferentes estudios de comparación (véanse también los ejemplos a continuación), en particular ELISA de antigeno HER2, análisis de citometría de flujo, modulación hacia abajo de HER2, reducción de producción de VEGF, inhibición de proliferación tumoral y la inducción de apoptosis del tumor. Los resultados confirmaron que el Fuc-trastuzumab de conformidad con la presente invención muestra el mantenimiento completo de la inhibición de la proliferación de células tumorales y la inducción de la apoptosis de células tumorales. Por lo tanto, el Fuc-trastuzumab y el Fuc+ trastuzumab son básicamente equivalentes en las propiedades de unión y antitumorales mediadas por Fv. De esta manera, las mejoras en cuanto a la eficacia terapéutica y, en particular, la actividad antimetastásica son atribuibles a las características mejoradas de glicosilación del anticuerpo anti HER2 de fucosa reducida.

El Fue- trastuzumab tal como se describe en el ejemplo 1 se utilizó en los análisis y los ejemplos posteriores.

Ejemplo 2: Estudios clínicos Se realizó un estudio de escalada de dosis en fase I y farmacocinético de Fue- trastuzumab (véase el ejemplo 1) en pacientes con cáncer HER2-positivo localmente avanzado o metastásico. Se utilizó un esquema de dosificación de tres semanas. Los pacientes recibieron ya sea 12 mg, 60 mg, 120 mg, 240 mg, 480 mg o 720 mg del Fue- trastuzumab. El tratamiento fue seguro y muy bien tolerado con solamente reacciones relacionadas con la infusión (IRR) ocasionales principalmente en la primera infusión que pueden ser controladas por esteroides, y en particular, con una combinación de paracetamol y esteroides tal como se describe en la presente.

Con respecto a la farmacocinética observada, el Fue- trastuzumab mostró propiedades farmacocinéticas totalmente comparables a Herceptin®, incluyendo la vida media sérica, Cmax, Cmin, AUC y aclaramiento. Por ejemplo, la vida media en circulación ti/2 del Fue- trastuzumab después de la primera infusión fue dependiente de la dosis y totalmente comparable a Herceptin®, con suero ti/2 después de 480 mg de infusión siendo de 213 ± 59 h y suero ti/2 después de 720 mg de infusión siendo de 306 ± 131 h (véase la Figura 1).

Una eficacia terapéutica impresionante se observó en estos pacientes de etapa tardía que recibieron múltiples tratamientos previos de quimioterapia y/o terapia con anticuerpos. Un efecto terapéutico se observó en pacientes que no respondieron previamente a Herceptin®. Adicionalmente, se observaron respuestas a dosis menores que aquellas utilizadas para Herceptin®. Adicionalmente, la eficacia terapéutica también se observó en pacientes con una baja expresión de HER2 tal como 1+ y 2+ (determinada mediante IHC), en donde se pudo lograr una estabilización de la enfermedad durante meses.

Tabla 2: Estado de HER2 de los pacientes tratados con Fue- tras tuzumab en el estudio clínico.

El Fue- trastuzumab muestra eficacia terapéutica comparable en los pacientes con diferente estatus de FcYRIIIa, lo que demuestra que el tratamiento con el Fuc-trastuzumab es independiente del alotipo FcyRIIIa: Tabla 3: Estado de FcyRIIIa de los pacientes tratados con Fue- trastuzumab en el estudio clínico.

Por otra parte, se observó una eficacia terapéutica en indicaciones donde Herceptin® no muestra un efecto terapéutico significativo. En particular, se observó una alta eficacia en la metástasis, en particular, metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativa, metástasis de pulmón y de hígado, lesiones de ganglios linfáticos y adicionalmente, también se observó una reducción del dolor que mejora significativamente la calidad de vida de los pacientes, en particular, de los pacientes incurables. Adicionalmente, respectivamente, se observó tratamiento eficaz de pacientes que tienen cáncer de colon, carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer bronquial o carcinoma de la glándula parótida. Por lo tanto, los datos clínicos obtenidos confirman la alta eficacia terapéutica de los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención en los programas de tratamiento novedosos y los grupos de pacientes descritos en la presente.

Los registros seleccionados de pacientes que tuvieron una mayor respuesta tras la administración de los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención, aquí Fue- trastuzumab (véase el ejemplo 1) se describen en los siguientes ejemplos. La evaluación del tumor se realizó durante el estudio clínico de conformidad con las directrices de los Criterios de Evaluación de Respuesta en Tumores Sólidos (RECIST) publicados por una colaboración internacional incluyendo la Organización Europea para la Investigación y Tratamiento del Cáncer (EORTC), el Instituto Nacional del Cáncer de los Estados Unidos, y el Instituto Nacional del Cáncer de Canadá de Grupo de Ensayos Clínicos de Canadá.

Ejemplo 3: Tratamiento de un paciente severamente pretratado que sufre de cáncer de mama metastásico con Fuc-trastuzumab Características del paciente: femenino, estado de Fcyllla F/F Cronología del pretratamiento: Septiembre de 2006: diagnóstico de cáncer de mama derecha localmente avanzado (histología: carcinoma ductal invasivo; ER- PgR-; Herceptest 3+).

De septiembre de 2006 a enero de 2007: 4 ciclos de terapia con doxorrubicina y ciclofosfamida seguidos por 2 ciclos de terapia con paclitaxel, con respuesta parcial de la enfermedad.

Febrero de 2007: mastectomía derecha (histología: carcinoma ductal invasivo GUI; ER- PgR-; Herceptest 3+).

De marzo a junio de 2007: 3 ciclos de terapia con paclitaxel, seguido de radioterapia en la pared torácica derecha, región supraclavicular y axilar derecha y cadena mamaria interna derecha.

De abril de 2007 a junio de 2008: tratamiento con trastuzumab (Herceptin® Fuc+).

Marzo de 2009: recurrencia de la enfermedad (metástasis de piel en la pared torácica, adenopatias mediastinales). Una biopsia de metástasis de piel se realizó la cual confirmó la localización de cáncer de mama (ER-; PgR-; HER2/neu 3+).

De abril a mayo de 2009: 3 ciclos de terapia con trastuzumab (Herceptin®) y docetaxel, con progresión de la enfermedad.

De junio de 2009 a enero de 2010: tratamiento con lapatinib y capecitabina, con respuesta parcial inicial de la enfermedad, seguido de la progresión de la enfermedad.

De febrero a septiembre de 2010: tratamiento. con idarubicina, etopósido y citarabina, con respuesta parcial inicial de la enfermedad, seguido de la progresión de la enfermedad.

Octubre de 2010: una biopsia de metástasis de piel se repitió (histología: localización de cáncer de mama; ER-; PgR-; HER2/neu 3+).

De diciembre de 2010 a febrero de 2011: tratamiento con trastuzumab (Herceptin®) y vinorelbina, con la progresión de la enfermedad.

De marzo a agosto de 2011: 8 ciclos de terapia con bevacizumab, vinorelbina y capecitabina, con respuesta parcial inicial de la enfermedad, seguido de la progresión de la enfermedad.

Desde octubre de 2011 a febrero de 2012: 4 ciclos de terapia con cisplatino y gemcitabina, con la progresión de la enfermedad.

Tratamiento con Fue- trastuzumab Después de los pretratamientos fracasados descritos anteriormente, el paciente fue inscrito en un estudio con Fue- trastuzumab en marzo de 2012. Al inicio del estudio, el paciente estaba progresando rápidamente con lesiones de piel e infestación de ganglios linfáticos mediastinicos. En particular, hubo una implicación neoplásica de piel difusa en la pared torácica con múltiples áreas de sangrado de úlceras de piel. El área de ulceración de la piel era más grande en la región paraesternal derecha (diámetro máximo de 6 cm). La tomografia CT confirmó la presencia de adenopatias mediastinicas. Tal como se puede deducir a partir de los pretratamientos descritos anteriormente, no se observó ningún efecto con Herceptin® en una monoterapia y dos terapias de combinación.

El paciente recibió 6 ciclos de terapia con Fuc-trastuzumab (240 g cada tercera semana, que se traduce en una dosificación de aprox. 3.3 mg/kg), bien tolerada. Un proceso de reparación del área de ulceración de la piel ya era notorio en el dia 8 del ciclo 1, es decir, después de la dosis inicial, y se convirtió gradualmente mayor. Se ha documentado una respuesta parcial de la enfermedad después del ciclo 3. La infiltración neoplásica cutánea se mejora globalmente; particularmente el área de ulceración de la piel en la región paraesternal derecha se reparó completamente (véase Figuras 2A a 2E). Adicionalmente, se informó de una fuerte reducción de la infestación de ganglios linfáticos (adenopatias mediastinicas). Se informó de una reducción del 72% de la suma objetivo en la primera tomografia CT y 3 ciclos de Fue - trastuzumab (suma de los diámetros más largos: reducción de 135 mm a 37 rn).

El Ejemplo 3 demuestra la alta eficacia de los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida en pacientes severamente pretratados en los cuales fracasó el tratamiento con un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa (Herceptin®) y numerosos tratamientos quimioterapéuticos y, en particular, mostró un efecto notable sobre las metástasis de piel ulcerativas y metástasis de ganglios linfáticos. El Ejemplo 3 de esta manera soporta la importante contribución que la presente invención hace al arte previo.

Ejemplo 4: Tratamiento de un paciente severamente pretratado que sufre de cáncer de colon con Fue- trastuzumab Características del paciente: femenino, estado de FcylIIa: F/V Características del cáncer inicial: - etapa IV de cáncer de colon metastásico - carcinoma invasivo sigma-rectum con metástasis de hígado y de pulmón - HER23+ (Herceptest; tinción de membrana completa en 95% de las células) Pretratamiento : 8 líneas de tratamientos previos: varias quimioterapias que comprenden los agentes quimioterapéuticos Folfox, Folfiri, tegafur-uracilo y folinato cálcico I incluyendo combinaciones con anticuerpos anticáncer: panitumomab (anticuerpo anti-EGFR monoclonal), 4*Avastin = bevacizumab (anticuerpo anti-VEGF monoclonal) en la línea de base que progresa con la metástasis de pulmón y de hígado.

Tratamiento con Fue- trastuzumab : El paciente recibió 5 ciclos de terapia con Fuc-trastuzumab (480 g cada tres semanas, lo que se traduce en una dosificación de aprox.7.5 mg/kg). El tratamiento fue bien tolerado y se documentaron los efectos terapéuticos importantes. En particular, se logró una reducción del 44% de las lesiones objetivo (suma de los diámetros más largos: reducción de 197 mm a 111 mm) (documentada en la primera tomografia CT después de 8 semanas). El Ejemplo 4 demuestra que el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención es sorprendentemente eficaz en el tratamiento de metástasis viscerales, tales como, en particular, metástasis de pulmón y de hígado. Este es un resultado importante porque el arte previo describe que los anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab (Herceptin ®) no son eficaces en metástasis de pulmón y de hígado. Tal como se describe en los antecedentes de la invención, las metástasis viscerales, tales como metástasis de pulmón y de hígado son el lado dominante de recidiva, en particular, en los pacientes que fueron tratados con anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa tal como trastuzumab (Herceptin®). Estos resultados importantes descritos en esta solicitud proporcionan opciones de tratamientos novedosos para pacientes que sufren de metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y de hígado, como tal las metástasis se pueden tratar con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención. Ejemplo 5: Tra tamiento de un paciente que sufre de cáncer de pulmón con Fue- trastuzumab Características del paciente: masculino , estado de FoyUIa: F/F Características del cáncer inicial : - Etapa IV de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) - HER23+ Estadificación de cáncer mediante TNM: CT1BN0M1A (tumor con 2 a 3 cm de diámetro; sin diseminación a ganglios linfáticos; cerca de metástasis en pulmón o liquido pleural o pericárdico) Cronología : - Tiroidectomia en 1997 debido a carcinoma de tiroides.

- Anemia hemolitica autoinmune en enero de 2013. Diagnóstico de carcinoma de pulmón de células no pequeñas.

Tratamiento con Fue- trastuzumab : El paciente fue inscrito en un estudio con Fuc-trastuzumab en febrero de 2013. Al inicio del estudio, se identificaron dos lesiones como lesiones objetivo. Hasta la fecha, el paciente ha recibido 6 ciclos de terapia con Fuc-trastuzumab (720 mg cada tercera semana, lo cual se traduce en una dosificación de aproximadamente 9.5 mg/kg). La suma de los diámetros de las lesiones objetivo se mantuvo sin cambios entre el valor inicial y la evaluación después de dos meses en donde la respuesta del tumor evaluada de conformidad con RECIST 1.1. fue Enfermedad Estable. El tratamiento está actualmente en curso.

Ejemplo 6: Tra tamiento de un paciente que sufre de cáncer de la glándula parótida con Fue- trastuzumab Características del paciente: masculino , estado de FoyUIa: F/F Características del cáncer inicial : - Etapa IIB de carcinoma de la glándula parótida derecha - HER23+ Estadificación de cáncer mediante TNM: CT3CN0CM0 (tumor con más de 7 cm de diámetro; sin diseminación a los ganglios linfáticos; sin metástasis) Cronología : Diagnóstico inicial en diciembre de 2011, extirpación del tumor enoral - Recaída local en enero de 2013 - Radioterapia adyuvante de fosa retromandibular en ganglios linfáticos nivel I-III en enero a marzo de 2013 Tratamiento con Fue- trastuzumab : El paciente fue inscrito en un estudio con Fuc-trastuzumab en febrero de 2013. Al inicio del estudio, se identificó una lesión como lesión objetivo. Hasta la fecha, el paciente ha recibido 6 ciclos de terapia con Fue- trastuzumab (720 mg cada tercera semana, lo cual se traduce en una dosificación de aproximadamente 8.9 mg/kg). La suma de los diámetros de las lesiones objetivo disminuyó en 26% entre el valor inicial y la evaluación después de dos meses. La respuesta del tumor evaluada de conformidad con RECIST 1.1. fue Enfermedad Estable. El tratamiento está actualmente en curso.

Ejemplo 7: Tratamiento de un paciente que sufre de cáncer bronquial con Fue- trastuzumab Características del paciente: femenino, estado de FcYlIIa: F/F Características del cáncer inicial : - Etapa IIIB de cáncer bronquial - HER22+ - Estadificación de cáncer mediante TNM: T2N3M0 (tumor con 3 a 7 cm de diámetro; diseminado a los ganglios linfáticos distantes; sin metástasis) Cronología : - Diagnóstico inicial en junio de 2012, biopsia de ganglio linfático cervical 13 ciclos de terapia con vinorelbina desde julio de 2012 a enero de 2013 Tratamiento con Fue- trastuzumab: La paciente fue inscrita en un estudio con Fuc-trastuzumab en febrero de 2013. Al inicio del estudio, se identificó una lesión como lesión objetivo. Hasta la fecha, la paciente ha recibido 6 ciclos de terapia con Fuc-trastuzumab (720 mg cada tercera semana, lo cual se traduce en una dosificación de aproximadamente 12.2 mg/kg). Después de dos meses, la respuesta del tumor evaluada de conformidad con RECIST 1.1. fue Enfermedad Estable. El tratamiento está actualmente en curso.

Ejemplo 8: Tratamiento de pacientes severamente pretratados que sufren de cánceres HER2 positivos que expresan moderadamente HER2 con Fue- trastuzumab Adicionalmente, en los estudios clínicos realizados, se observó un efecto terapéutico fuerte en pacientes gue sufren de diferentes cánceres HER2-postivos, los cuales muestran una sobreexpresión de HER2 de solamente 1+ o 2+ (tal como se determina mediante IHC): Una paciente (femenino, estado de Fcyllla: F/V, expresión de HER2 1+ según se determina mediante IHC) que sufría de carcinoma urotelial (etapa IV) también mostró una respuesta clínica mayor tras la inclusión en el estudio, a pesar del estado de baja expresión de HER2 del cáncer. El carcinoma urotelial fue una vejiga con carcinomatosis peritoneal y linfoadenopatías retroperitoneales. El paciente se trató previamente con diversos agentes quimioterapéuticos, incluyendo carboplatino y gemeitabina. Adicionalmente, la paciente recibió diversos procedimientos quirúrgicos de cáncer. El tumor volvió a aparecer tres veces. De esta manera, a pesar de las cirugías realizadas y a pesar de los tratamientos quimioterapéuticos, la paciente sufría de lesiones objetivo y mostró metástasis tras la inclusión en el estudio. En esta paciente, se logró una estabilización de la enfermedad cuando se administró el Fue- trastuzumab en una dosificación de solamente 240 mg por infusión, lo cual se traduce en una dosificación de aproximadamente 3.5 mg/kg. Adicionalmente, la paciente informó de una fuerte reducción del dolor que es también un efecto clínico importante. Estos resultados confirman que las anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención permiten el tratamiento de enfermedades neoplásicas HER2 positivas, que solamente muestran una sobreexpresión de HER2 moderada e incluso de solamente 1+ según se determina mediante IHC.

Resultados similares también se observaron en una paciente que sufría de carcinoma de mama progresivo (femenino, estado de FcYlIIa: F/F, expresión de HER2 1+ según se determina mediante IHC). También aquí, se observó una estabilización de la enfermedad, incluso cuando se administra una dosificación muy baja de 60 mg de Fuc-trastuzumab lo cual se traduce en una dosificación de aprox. 1 mg/kg (esta paciente fue inscrita en una cohorte que recibió las dosificaciones de anticuerpos más bajas).

Una paciente adicional que sufría de carcinoma de mama ductal invasivo (femenino, estado de FcylIIa: F/F, expresión de HER2 2+ según se determina mediante IHC) también mostró una estabilización en curso tras la recepción de Fue- trastuzumab, a pesar de que el anticuerpo se administró a una dosificación muy baja de 60 mg en cada ciclo (esto se traduce de nuevo en una concentración de aprox. 1 mg/kg) . Considerando las respuestas que se observaron en las dosificaciones más altas, es evidente que una respuesta más fuerte será visible tras la administración de una dosificación más alta también en respectivos cánceres HER2 positivos que se caracterizan por una baja expresión de HER2.

Ejemplo 9: Reacciones adversas En los estudios clínicos realizados, también se observaron las reacciones adversas causadas por el tratamiento con Fue- trastuzumab. Durante el estudio, no se detectaron síntomas cardíacos. Esto es importante debido a que el Herceptin se conoce por causar reacciones cardíacas. Adicionalmente, debido al pretratamiento severo y al estado de la enfermedad mucho más desarrollado de los pacientes incluidos, dichos pacientes tenían en general mala salud y por lo tanto son más susceptibles a las enfermedades cardíacas.

Adicionalmente, el Fue- trastuzumab también fue en general bien tolerado y mostró eventos adversos leves o moderados. En particular, no se observaron reacciones adversas gastrointestinales tales como diarrea, náuseas y vómitos, y los pacientes no tuvieron alteraciones adversas en su conteo sanguíneo.

Ejemplo 10: Prevención de las reacciones relacionadas con la infusión En el estudio clínico para la evaluación de la actividad terapéutica de Fue- trastuzumab, también se observaron reacciones adversas de leves a moderadas causadas por la infusión del Fue- trastuzumab (reacciones relacionadas con la infusión, IRR) en los pacientes de la primera y la segunda cohortes. Para evitar las IRR en las administraciones posteriores de Fue- trastuzumab, los pacientes restantes se pretrataron con paracetamol ya sea solo o en combinación con el esteroide metilprednisolona antes de la infusión de Fue- trastuzumab. El pretratamiento con Paracetamol implicó una dosis de 1000 mg por la noche antes y una dosis de 1000 mg 1 h antes de la infusión de Fue- trastuzumab. La metilprednisolona se administró adicionalmente a algunos pacientes 30 min antes de la infusión de Fue- trastuzumab en una dosis de 125 mg. El pretratamiento de los pacientes tuvo como resultado una disminución en las IRR. En particular, casi el 50% de los pacientes que recibieron el pretratamiento con paracetamol y opcionalmente metilprednisolona no mostró ninguna IRR tras la infusión de Fue- trastuzumab. Esto fue aún más notable debido a que los primeros pacientes que no fueron pretratados y mostraron IRR, recibieron las dosis más bajas de Fue- trastuzumab. De esta manera, se pudo evitar completamente mediante el pretratamiento con paracetamol y opcionalmente metilprednisolona que los pacientes que tuvieron IRR recibieran hasta 40 veces dosis mayores de Fue- trastuzumab.

Después de la introducción de la pre-medicación de esferoides y paracetamol, solamente uno de los siete pacientes mostró una IRR. Dicho paciente mostró IRR grado 2 que se restringieron a la primera y la segunda infusiones. Sin el uso de esferoides, las IRRs ocurrieron en todos menos un paciente, por lo menos una vez (grado 1 a 3). Por lo tanto, se recomienda utilizar una pre-medicación que comprende y, preferiblemente, que consiste en esferoides y paracetamol y restringir la respectiva pre-medicación a la primera infusión y a la siguiente única infusión después de una IRR. Preferiblemente, el paracetamol se da en la noche anterior y una hora antes de la infusión con el anticuerpo anti-HER2 de glucosa reducida. Los esferoides (por ejemplo, 125 mg de metilprednisolona) se administrarán preferiblemente 30 minutos antes de la infusión al paciente. En ausencia de cualquier IRR (IRR ³ grado 1) en la primera infusión, no se necesita pre-medicación que deba darse durante las siguientes infusiones.

En caso de que cualquier IRR (IRR > grado 1) ocurra durante la primera o una de las siguientes infusiones, la pre-medicación (por ejemplo paracetamol y esferoides tal como se describió anteriormente) se administrará al paciente durante la siguiente infusión y siempre que una IRR (IRR ³ grado 1) se haya observado durante la última infusión. En caso de que el paciente esté experimentando una segunda recaída de cualquier IRR (IRR > grado 1), se recomienda que este paciente recibirá pre-medicación (paracetamol y esferoides) durante todas las infusiones posteriores.

Estos resultados demuestran que las IRR causadas por la infusión de Fue- trastuzumab se pueden evitar mediante el pretratamiento con un agente analgésico tal como paracetamol, opcionalmente en combinación con un esferoide tal como metilprednisolona.

Ejemplo 11: Unión de las variantes de anticuerpos diferencialmente fucosilados a diferentes células que expresan HER2 Se analizaron diversas líneas celulares HER2 positivas mediante citometría de flujo con el fin de comparar las propiedades de unión de Fue- trastuzumab y Fuct trastuzumab (Herceptin®).

Brevemente, las células objetivo se recogieron y se incubaron con la variante de trastuzumab a diferentes concentraciones. Las células se lavaron y se incubaron con un anticuerpo anti-humano conjugado con Cy3 secundario a 4 °C en la oscuridad. Las células se lavaron y se analizaron en un citómetro de flujo FACS Canto II (Becton Dickinson). Las células vivas se seleccionaron para análisis con base en sus propiedades de dispersión y el porcentaje de células positivas se calculó utilizando el Software FACSDiva (Becton Dickinson). Como resultado, Fue- trastuzumab y Fuct trastuzumab (Herceptin®) muestran características de unión comparables en todas las líneas celulares tumorales ensayadas tal como se muestra en las Figuras 3A y 3B. No hubo diferencias en el porcentaje de células positivas sobre todo el intervalo de concentraciones analizado de 0.01 a 10 mg/ml.

Ejemplo 12: Modulación hacia abajo del receptor HER2 por variantes de anticuerpos de fucosa reducida y de alta fucosa Debido a la especificidad de unión idéntica y a la afinidad y su secuencia de proteína de la región variable, se esperaba que los mecanismos mediados por la unión del anticuerpo al receptor HER2 sin más interacciones mediadas por la porción Fe serían idénticos para Fue- y Fuct trastuzumab. Se reportó que la unión de Herceptin® al receptor HER2 modula hacia abajo la expresión del receptor en la superficie celular (Murphy et al., 2009; Cuello et al., 2001; Frankel, 2002; De Lorenzo et al., 2007). La expresión reducida del receptor HER2 en la superficie celular permite menos formación de heterodimeros HER2, lo que resulta en la inhibición de la señalización inducida por el factor de crecimiento, la progresión del ciclo celular y la proliferación.

Con el fin de analizar la capacidad de Fuc-trastuzumab para modular hacia abajo la expresión del receptor HER2 en una forma similar a Herceptin®, se realizó un estudio de modulación hacia abajo del receptor comparando este mecanismo de acción de ambos anticuerpos. La modulación hacia abajo del receptor HER2 se analizó mediante citometria de flujo e inmunoblot.

Para los análisis de citometria de flujo, células ZR-75-1 se sembraron en placas de 96 pocilios de fondo plano y se incubaron durante un dia a 37 °C en una incubadora de CO2. Se agregaron Fue- Trastuzumab, Herceptin® o hlgGl como un control negativo a diferentes concentraciones. Las placas se incubaron durante 3 a 4 dias a 37 °C en una incubadora de C02. Las células ZR-75-1 se recogieron y se tiñeron con un anticuerpo HER2 anti-humano conjugado con FITC (BMS120FI, eBioscience, Bender Medsystems) que reconoce un epitopo diferente de aquel unido por trastuzumab. Utilizando este anticuerpo, es posible la tinción del receptor HER2 a pesar de la presencia de trastuzumab. Células positivas BMS120FI se analizaron mediante citometria de flujo en un citómetro de flujo BD FACS Canto II utilizando un Software BD FACSDiva™.

La Figura 4A muestra los resultados de la media de dos ensayos independientes utilizando células ZR-75-1 después de 4 dias de incubación con Fue- trastuzumab, Herceptin® o hlgGl. Los datos representan la expresión del receptor HER2 como un porcentaje del control del medio. Se pudo mostrar que la expresión de HER2 en presencia de Fuc-trastuzumab o Herceptin® se redujo en aproximadamente 30% en comparación con el control del medio. El control de isotipo IgGl humano no dio lugar a una expresión reducida del receptor HER2.

Por lo tanto, la unión de Fue- trastuzumab a las células ZR-75-1 induce la regulación hacia abajo del receptor HER2 en la superficie celular. El nivel de regulación hacia debajo de HER2 fue comparable entre Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®).

Los resultados de los análisis de citometria de flujo fueron confirmados mediante inmunoblot. Brevemente, las células ZR-75-1 se sembraron en placas de cultivo celular de 10 cm y se incubaron durante un día a 37 °C en una incubadora de CO2. Se agregaron Fue- Trastuzumab, Herceptin® o hlgGl como un control negativo a una concentración de 0.1 mg/ml. Las placas se incubaron durante 3 a 4 días a 37 °C en una incubadora de CO2. Las células ZR-75-1 se recogieron y los sedimentos se almacenaron congelados a -80 °C para su uso posterior. Los sedimentos se disolvieron en un tampón de lisis (Tampón-Ripa: 50 mM de Tris-HCl pH 7.5; 1 mM de NaCl; 1% de Nonidet P-40; 0.5% de desoxicolato de sodio; 0.1% de SDS; 1 mM de EDTA) que contiene un cóctel inhibidor de proteasas (PIC: cóctel inhibidor de proteasas Complete Mini, Roche). Las células se U saron durante 10 min en hielo y el U sado se aclaró mediante centrifugación. Se agregó PIC y el contenido de proteina se determinó mediante el ensayo de proteínas DC (Bio-Rad Kit II) de conformidad con el protocolo del fabricante. El inmunoblot se realizó de conformidad con SOP-07-10. Brevemente, los Usados celulares se diluyeron en tampón de muestra reductor y se desnaturalizaron durante 10 min a 70 °C. Para SDS-PAGE, 30 mg de proteína por línea se cargaron sobre un Ready Gel 7.5% Tris-HCl (Bio-Rad). Después del inmunoblot sobre una membrana de nitrocelulosa, la membrana se bloqueó y el receptor HER2 se detectó utilizando un anticuerpo ErbB2 humano anti-oveja (Abcam). Como un anticuerpo secundario, se utilizó una peroxidasa de rábano (HRP) acoplada a anticuerpos conejo anti-oveja (Abcam). Como un control para la carga de cantidades iguales de proteína, se realizó una segunda transferencia por adsorción en paralelo y se incubó con un anticuerpo de conejo contra b-actina (Señalización Celular) y se detectó con una HRP acoplada a un anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo H+L (Jackson ImmunoResearch). El inmunoblot se desarrolló utilizando el kit de sustrato mejorado DAB Metal (Thermo Scientific) de conformidad con el protocolo del fabricante.

La Figura 4B muestra un ejemplo de un análisis de inmunoblot. El control de b-actina muestra que la misma cantidad de lisado celular se carga sobre el gel. El receptor HER2 tiene un peso molecular de 185kDa. La banda correspondiente se reduce drásticamente en los U sados de células ZR-75-1 que se incubaron con Fue- trastuzumab o Herceptin® en comparación con el control del medio o el anticuerpo de control de isotipo (hlgGl).

Por lo tanto, se mostró mediante inmunoblot y citometría de flujo, que Fue- trastuzumab modula hacia abajo la expresión del receptor HER2 en las células ZR-75-1 de una manera comparable a Fuc+ trastuzumab (Herceptin®). Ejemplo 13: Inhibición de la Proliferación de células tumorales que expresan HER2 La unión de trastuzumab en el dominio extracelular de HER2 tiene como resultado la inhibición de la proliferación de células tumorales (Brockhoff et al., 2007; Spiridon et al., 2002). Con el fin de analizar este mecanismo de acción para Fue- trastuzumab, la proliferación de células SK-BR-3 (linea celular de carcinoma de mama humano) se midió en un ensayo de MTT con diferentes concentraciones (0.1 - 1 mg/ml)· de Fue- trastuzumab o Fuc+ trastuzumab (Herceptin®, Roche). El ensayo de MTT es un ensayo no radiactivo basado en la escisión de la sal de tetrazolio amarilla y soluble MTT bromuro de (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio; azul de tiazolilo) por deshidrogenasas mitocondriales de células viables. Esto tiene como resultado la formación de un formazán púrpura, que se puede medir en un lector de ELISA a 570 nm. La señal de absorción es una medida directa de las células viables en el cultivo.

Como un control positivo, la proliferación se inhibió completamente mediante la adición de taxol, y el hlgGl o el medio solo sirvieron como controles negativos. Brevemente, las células SK-BR-3 fueron cultivadas durante 2 dias en placas de 96 pocilios de fondo plano. Fuc-trastuzumab, Herceptin® y sustancias de control (hlgGl y Taxol (20 nM)) se agregaron y las placas se incubaron durante otros 4-6 dias a 37 °C en una incubadora de CO2 humidificada. El sobrenadante se eliminó completamente y se agregó MTT. Las células se incubaron durante 2 horas con MTT a 37 °C en una incubadora de C02 humidificada. El sobrenadante se eliminó y las células se U saron utilizando HCl y tampón de lisis que contiene 2-propanol durante lh a temperatura ambiente en la oscuridad. La absorción a 570 nm/630 nm se midió en un lector de placas Infinite F200 (Tecan Austria GmbH).

La Figura 5 muestra los resultados de tres experimentos independientes realizados con Fue- trastuzumab y Herceptin®. La proliferación después de 4 dias de incubación con los anticuerpos se calculó con respecto a la proliferación en el control del medio. El control positivo Taxol (20 nM) tuvo como resultado la inhibición de proliferación máxima (solamente 6% de proliferación en comparación con el control del medio; datos no mostrados). Fue- Trastuzumab y Herceptin® indujeron una inhibición dependiente de la concentración de la proliferación de las células SK-BR-3. A una concentración de anticuerpo de 100 pg/ml, la proliferación se redujo en más del 50%. Utilizando pruebas posteriores de Bonferroni, no hubo ninguna diferencia significativa en la inhibición de la proliferación inducida por Fue- trastuzumab y Herceptin® para observarse. En comparación con el control de isotipo humano, hubo una reducción sumamente significativa en la proliferación de las células SK-BR-3 observada a concentraciones de 0.1 mp/ml y mayores.

Ejemplo 14: Inducción de la Apoptosis de células tumorales que expresan HER2 La inducción de la apoptosis es un mecanismo adicional mediante el cual los anticuerpos pueden mediar la actividad antitumoral. Aunque la inducción directa de la apoptosis por anticuerpos monoméricos es a menudo ineficaz (tal como se ve para rituximab, Zhang et al., 2005) la reticulación del anticuerpo por inmunoglobulina anti-humana o proteina G evoca este mecanismo de acción. In vivo, la reticulación del anticuerpo se puede inducir mediante células portadoras del receptor Fe.

Existen resultados contradictorios publicados sobre la actividad apoptótica de Herceptin® (Chakraborty et al., 2008; Brockhoff et al., 2007; Spiridon et al., 2002; De Lorenzo 2007).

Con el fin de estudiar este potencial modo de acción, la inducción de la apoptosis por Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) se analizó después de la reticulación con la proteina G en la linea celular tumoral BT474. Como un marcador para la inducción de la apoptosis, analizamos la activación de la caspasa-3 utilizando el Kit de Apoptosis de la Caspasa-3 Activa BD PE. La caspasa-3, una cisteina proteasa, es una proteasa clave que se activa durante las primeras etapas de la apoptosis. Se sintetiza como una pro-enzima inactiva de 32 kDa que se procesa en células que experimentan apoptosis. La forma procesada consiste en dos subunidades (17 kDa y 12 kDa) que se asocian para formar la caspasa activa. La caspasa-3 activa escinde proteoliticamente y activa otras caspasas, asi como se dirige en el citoplasma y en el núcleo, promoviendo de ese modo la apoptosis. La activación de las caspasas es generalmente considerada como el "punto de no retorno" en las vías apoptóticas. Utilizando el Kit de Apoptosis de la Caspasa-3 Activa BD PE, las células apoptóticas se tiñen con un anticuerpo especifico para la forma activa de la caspasa-3 que no reconoce la forma de pro-enzima inactiva de la caspasa-3.

Brevemente, las líneas celulares tumorales se cultivaron en un medio que contiene 1% de FCS durante un día antes del ensayo. Las células se sembraron en placas de 48 pocilios incubadas a 37 °C en una incubadora de CO2 durante la noche. Se agregaron Fue- trastuzumab, Herceptin® o hlgGl como un control negativo a diferentes concentraciones y la proteína G a una concentración final de 2 y/ml. Las placas se incubaron durante 4 a 48 h a 37 °C en una incubadora de CO2.

Las células (tanto células adherentes como no adherentes) se recogieron, se permeabilizaron, se fijaron y se tiñeron para la caspasa-3 activa de conformidad con el protocolo del fabricante. Las células (apoptóticas) caspasa-3-positivas activas se analizaron mediante citometría de flujo en un citómetro de flujo BD FACS Canto II utilizando un Software BD FACSDiva™. La Figura 6 muestra los resultados de un ensayo de la apoptosis de la caspasa-3 activa utilizando células BT474. Después de la reticulación por la proteina G, Fue- trastuzumab indujo una fuerte apoptosis dependiente de la concentración en las células BT474. La inducción de la apoptosis fue comparable entre Fue- trastuzumab y Herceptin® confirmando de ese modo que se mantienen las actividades tumorales mediadas por Fab. Ejemplo 15: Actividad de ADCC de la variante de anticuerpos diferencialmente fucosilados Se reportó que la reducción del contenido de fucosa dentro del sitio de glicosilación en el dominio Fe del anticuerpo conduce a un aumento de la actividad de ADCC, la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo resultando en una lisis especifica de las células tumorales positivas de antígeno. Este efecto es causado por la mayor afinidad de unión del anticuerpo de fucosa reducida al receptor FcyRIIIa en células asesinas naturales. Se sabe que dos alotipos de este receptor en la posición del aminoácido 158 (V158F) tienen diferentes afinidades con anticuerpos IgGl humanos. En general, el alelo V tiene una mayor afinidad con el IgGl humano que el receptor del alelo F. Por lo tanto, se analizó la actividad de ADCC de Fuc-trastuzumab en comparación con Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) en donantes con diferentes receptores FcYRIIIa: donantes V/V homocigóticos, F/F homocigóticos y F/V heterocigóticos se utilizaron para estos estudios. Debido a que la magnitud de la actividad de ADCC se reportó ser dependiente del nivel de expresión del antigeno en la superficie celular, se analizaron lineas celulares tumorales que expresan niveles de HER2 bajos o altos en el ensayo de ADCC.

El ensayo se realizó como un ensayo de liberación de europio. Brevemente, las lineas celulares objetivo HER2 positivas (SK-BR-3; CF-7) se cargaron con europio (Eu3+) mediante electroporación y se incubaron con células mononucleares de sangre periférica humanas primarias descongeladas (PBMCs, células efectoras, almacenadas en nitrógeno liquido) en una relación de células efectoras a células objetivo (relación E:T) de 50:1 en presencia de Fue- trastuzumab, Herceptin® o anticuerpos humanos de control a diferentes concentraciones durante 5 horas. La liberación de europio en el sobrenadante (que indica muerte celular mediada por anticuerpos) se cuantificó utilizando un lector de placas de fluorescencia Infinite F200 (Tecan Austria GmbH). La liberación máxima se logró mediante la incubación de células objetivo con triton-X-100 y la liberación espontánea se midió en muestras que contienen solamente células objetivo solas. La citotoxicidad especifica se calculó como: % de Lisis especifica = (liberación experimental - liberación espontánea) / (liberación máxima - liberación espontánea) x 100.

Se analizaron los resultados de una serie de experimentos realizados con ambos anticuerpos en la linea celular objetivo SK-BR-3 que expresa niveles elevados de HER2 (~lxl06 sitios de unión por célula), y en la linea celular objetivo MCF-7 que expresa bajos niveles de HER2 (~3xl04 sitios de unión por célula) utilizando células efectoras de diferentes donantes de todos los tres alotipos.

Para la aproximación de la magnitud de la mejora de ADCC de Fue- trastuzumab en comparación con Herceptin®, curvas de concentración de Fue- trastuzumab y Herceptin® se midieron en paralelo en la misma placa para cada donante. El ajuste de curvas se realizó para ambos anticuerpos utilizando por separado un gráfico de la logística de cuatro parámetros (4PL) calculada mediante el software GraphPad Prism 5 versión 5.01. A partir de las curvas resultantes, se calcularon los valores de lisis superior e inferior y los valores de EC50. Adicionalmente, se interpolaron los valores de lisis específica a ciertas concentraciones de anticuerpos o la concentración de anticuerpos correspondiente a ciertos valores de lisis específica. La lisis específica máxima se calcula como la diferencia de los valores de la curva superior e inferior. Mejora de la actividad de ADCC en las celulas SK-BR-3 Se analizaron trece diferentes donantes (3 donantes V/V, 5 donantes F/V, 5 donantes F/F) en cuanto a su actividad de ADCC en las células SK-BR-3 mediada por Fue- trastuzumab o Herceptin®.

El Fue- Trastuzumab media las actividades de ADCC que se mejoran considerablemente en comparación con el Herceptin® en los alotipos de todos los donantes en la línea celular SK-BR-3 de expresión de alto nivel de HER2. En las Figuras 7A a 7C, se muestran ejemplos representativos de las curvas de concentración obtenidas con los donantes de los diferentes alotipos.

La máxima lisis alcanzada con Fue- trastuzumab y Herceptin® fue comparable para todos los donantes y las curvas mostraron valores superiores e inferiores comparables de lisis específica para Fue- trastuzumab y Herceptin®. Por lo tanto, la magnitud del aumento de la actividad de ADCC de Fue- trastuzumab se estimó para todos los donantes con base en la comparación de las curvas en otros parámetros: (i) el aumento de la lisis específica a una concentración de anticuerpos fija, y (ii) la concentración de anticuerpos eficaz requerida para la mitad de la máxima lisis especifica de ambos anticuerpos (valores de EC50).

A una concentración de anticuerpos fija de 0.5 ng/ml el Fue- trastuzumab muestra un aumento notable en la lisis especifica para todos los tipos de donantes (véase las Figuras 7A a 7C). La media de la lisis específica mediada por Fuc-trastuzumab de todos los 13 donantes fue de 39% en comparación con 12% de la lisis especifica mediada por Herceptin®. La diferencia de la media de la lisis especifica mediada por anticuerpos fue la más alta en donantes del alotipo F/F (60%) en comparación con los donantes del alotipo V/V o F/V (28 y 26%, respectivamente). El factor de incremento de la media fue de 6, lo que indica un aumento de 6 veces en la actividad de ADCC de % de células tumorales muertas para Fue- trastuzumab.

Adicionalmente, se comparó la concentración de anticuerpos a la cual se logra la mitad de la máxima (50%) lisis especifica (valores de EC50) para Fue- trastuzumab y Herceptin®. Una mayor eficacia del anticuerpo se correlaciona con valores de EC50 inferiores. Los valores de EC50 fueron significativamente diferentes para ambos anticuerpos (valor p 0.0009; prueba t de Student emparejada de dos colas). Fue- Trastuzumab alcanza la mitad de la máxima lisis especifica a 9 veces los valores de concentración inferiores de EC50 en comparación con Herceptin®. El factor de mejora fue mayor para los donantes F/F y F/V.

En resumen, se compararon las curvas de concentración obtenidas por Fuc-trastuzumab y Herceptin® en el ensayo de ADCC con 13 donantes humanos de diferentes alotipos. Mientras que las curvas mostraron una máxima lisis comparable mediada por ambos anticuerpos, Fuc-trastuzumab mostró una mejora de aproximadamente 9 veces de las actividades de ADCC, tal como se muestra por la reducción de 9 veces del valor de EC50 y de la concentración requerida para la misma lisis especifica (para más detalles véase la Tabla 4).

Tabla 4: Resumen de análisis de ensayos de ADCC de Fuc- trastuzumab comparado con Herceptin® en células SK-BR-3 Se dan los valores de la media de los valores de Fue- trastuzumab y Herceptin® y el valor de la media de los factores individuales de aumento/mejora y el intervalo de este factor entre los 13donantes (5 FF,3 VV,5 FV).

Mejora de la actividad de ADCC en células MCF-7 Doce diferentes donantes (3 donantes V/V, 5 donantes F/V, 4 donantes F/F) se analizaron en cuanto a su actividad de ADCC en células MCF-7 mediada por Fuc-trastuzumab o Herceptin®.

En las células MCF-7, Fue- trastuzumab media las actividades de ADCC que se mejoran considerablemente en comparación con Herceptin® en los alotipos de todos los donantes. En las Figuras 8A a 8C se muestran ejemplos representativos de las curvas de concentración obtenidas con los donantes de los diferentes alotipos.

Las células MCF-7 expresan aproximadamente 30 veces menos antigeno HER2 en la superficie celular que las células SK-BR-3. Debido a que la actividad de ADCC se correlaciona con la densidad del antigeno en la superficie celular, se esperaba una máxima lisis inferior para las células MCF-7 en comparación con las células SK-BR-3. De hecho, la media de la máxima lisis especifica de Fuc-trastuzumab fue solamente del 40% en comparación con 74% en las células SK-BR-3. Esto es consistente con un informe de Suzuki y colaboradores (2007) que muestra mayores actividades de ADCC de Fuc+ trastuzumab en las células SK-BR-3 en comparación con las células MCF-7. Sorprendentemente, la máxima lisis de las células MCF-7 obtenía con Fuc-trastuzumab se mejoró drásticamente en comparación con Herceptin® (valor p <0.0001). Mientras que la máxima lisis mediada por Fue- trastuzumab fue entre 17% y 72%, la máxima lisis mediada por Herceptin® fue mucho más baja variando de 6 a 29%. La media de la máxima lisis mediada por Fuc-trastuzumab se incrementó por un factor de 3 (2x a 5x).

Debido a las diferencias en la máxima lisis especifica obtenida por Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab, una comparación de los valores de EC50 de los anticuerpos no es informativa, ya que el valor de EC50 podría ser el mismo a pesar de la lisis específica mucho mayor de Fue- trastuzumab. Por lo tanto, las diferencias de las curvas de unión de Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab se analizaron mediante la comparación de (i) la lisis específica lograda a 10 ng/ml y (ii) las concentraciones requeridas para la misma lisis específica.

La lisis específica que fue mediada por Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab a una concentración de anticuerpos de 10 ng/ml muestra una diferencia significativa entre ambos anticuerpos (valor p <0.0001). Se observó un aumento de la media en la lisis específica de 18%, correspondiente a una lisis específica 3 veces mayor a una concentración de anticuerpos de 10 ng/ml obtenida con Fue- trastuzumab en comparación con Fuc+ trastuzumab.

Hubo una diferencia significativa entre la concentración de anticuerpos requerida de Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab que se requiere para 95% de la máxima lisis específica (valor p 0.03). La concentración de anticuerpos requerida con el fin de lograr la misma lisis específica en este punto se redujo por un factor de 5 a un factor de 138 (factor de mejora) entre los diferentes donantes (véase las Figuras 9A y 9B). La reducción en las concentraciones de anticuerpos requeridas es la más alta para los donantes FF (factores de mejora: 55 donantes FF, 28 donantes VV, 40 donantes FV).

En las células MCF-7 que expresan un bajo nivel de HER2, la comparación de la actividad de ADCC de Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab en tres puntos diferentes de la curva de concentración, mostró un aumento drástico de la actividad de ADCC para el anticuerpo trastuzumab de fucosa reducida. La lisis específica alcanzada al máximo (correspondiente al porcentaje de células objetivo que el anticuerpo es capaz de matar) y la lisis específica a 10 ng/ml se incrementaron hasta en 5 veces. Para la misma lisis específica, se requirieron concentraciones de anticuerpos de Fue- trastuzumab hasta 138 veces más bajas en comparación con Fuc+ trastuzumab (véase la Tabla 5).

Tabla. 5: Resumen de análisis de ensayos de ADCC de Fue-tras tuzumab comparado con Fuc+ trastuzumab en células MCF-7 Se dan los valores de la media de los valores de Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab y elvalor de lamedia de los factores individuales de aumento/mejora y el intervalo de este factor entre los 12 donantes (5 FF,3 VV, 4 FV).

Resultados adicionales Una caracterización de las lineas celulares de conformidad con su estado de HER2 se da en la siguiente Tabla 6: Tabla 6: Estado de HER2 de diferentes líneas celulares Resultados adicionales en experimentos similares a los descritos anteriormente también se muestran en las Figuras 10 a 12B. La Figura 10 muestra que la glico-optimización del Fue- trastuzumab (baja fucosa, bisGlcNAc aumentada) conduce a una actividad de ADCC sumamente mejorada para el tratamiento de todos los subgrupos de pacientes, especialmente aquellos con tumores que expresan HER2 inferior. Los resultados mostrados en la Figura 11 confirman que las respuestas de ADCC aumentadas se observan con todos los donantes de PBMC. Se necesita 10 a 140 menos la concentración de anticuerpos para la misma respuesta de ADCC. El Fue- trastuzumab mostró una respuesta de ADCC mejorada en las células de alto HER2 (SK-BR-3), asi como en las células de bajo HER2 (MCF-7). Las Figuras 12A y 12B muestra los valores de EC50 obtenidos a partir de los ensayos de ADCC con 14 donantes de diferentes alotipos para Fue- trastuzumab tal como se describe en el ejemplo 1 (también denominado como TrasGEX™) utilizando células SK-BR-3 de alto HER2. La Figura 12A muestra los valores de EC50 de los 14 donantes individuales. Cada símbolo representa un donante individual. La mediana de los niveles se da como líneas. La Figura 12B muestra el factor de mejora de los donantes (EC50 de Herceptin®/EC50 de Fuc-trastuzumab). Cada símbolo representa un donante individual. Los valores de la media se dan como líneas. Resumen de los análisis de ensayos de ADCC de Fuc-trastuzumab comparado con Fuc+ trastuzumab La comparación de la actividad de ADCC de Fuc-trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) muestra un aumento drástico de la actividad de ADCC para el anticuerpo trastuzumab de fucosa reducida para las células tumorales que expresan niveles de HER2 tanto altos como bajos. El aumento ADCC mediado por Fue- trastuzumab es especialmente prominente en las células tumorales que expresan niveles de HER2 bajos.

Tal como lo demuestran los resultados, el máximo aumento de ADCC mediado por Fue- trastuzumab para los tumores que expresan bajo HER2 (MCF-7) es de hasta ~140 veces, con 43 veces en la media, y para los tumores que expresan alto HER2 (SK-BR-3) es de hasta ~30 veces para un máximo aumento con 9 veces en la media. Incluso el % máximo de lisis de células tumorales se incrementó considerablemente con hasta 5 veces (3 veces la media) para los tumores que expresan bajo HER2 cuando se utiliza Fuc-trastuzumab. La alta eficacia en tumores que expresan bajo HER2 que proporciona opciones terapéuticas importantes para los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida como un tratamiento de cánceres HER2 positivos que solamente muestran una cantidad baja o moderada de sobreexpresión de HER2 se hace posible. Tal como se describió anteriormente, un efecto terapéutico incluso se observó en pacientes que muestran una sobreexpresión de HER2 de solamente 1+ (HER2 1+) según se determina mediante IHC.

De esta manera, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención muestran un alto incremento en la actividad de ADCC que es un modo clave de la acción tumoral. Adicionalmente, los efectos logrados debido a la glicosilación optimizada permiten ampliar el espectro de pacientes adecuados a los pacientes que hasta ahora no se benefician de los correspondientes anticuerpos anti-HER2 de alta fucosa. Tal como se muestra en la presente, un efecto terapéutico se observa para todos los alotipos FcYRIIIa en lugar de menos del 20% para un anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa tal como Herceptin®. Adicionalmente, también los pacientes con menor expresión de HER2 se pueden beneficiar de los tratamientos descritos. Este es un efecto importante, en particular, teniendo en cuenta los efectos terapéuticos novedosos observados en las metástasis, en particular, las metástasis de piel ulcerativas y las metástasis viscerales tales como metástasis de pulmón y de hígado.

La actividad de ADCC aumentada de Fuc-trastuzumab que se ha demostrado por estos experimentos in vitro se basa especialmente en el bajo contenido de fucosa (menos del 10%) y, adicionalmente, es soportada por la cantidad mejorada de GlcNAc de bisección (más del 10%) de la glicosilación del fragmento Fe.

Ejemplo 16: Farmacología in vivo de la variante de anticuerpos diferencialmente fucosilados Se realizaron diversos estudios in vivo en ratones y monos macacos para investigar los efectos farmacológicos de Fue- trastuzumab, algunos de ellos se realizaron en comparación con Fuc+ trastuzumab (Herceptin®).

Estudios de reactividad cruzada de tejidos con Fuc+ trastuzumab mostraron que el anticuerpo reaccionó solamente con tejido humano y de mono macaco pero no con los tejidos de roedores o los tejidos de cualquier otra especie animal. Debido a que el Fue- trastuzumab muestra las mismas especificidades de unión a antígeno, las mismas afinidades y el mismo modo de acción que el Fuc+ trastuzumab, se espera que su reactividad tisular sea idéntica a Herceptin®. Por lo tanto, los estudios con roedores utilizando modelos de xenoinjertos de células tumorales humanas son considerados como estudios de eficacia importantes.

A diferencia de los roedores, el mono macaco se consideró como una especie apropiada para las pruebas de seguridad y toxicidad de Fuc+ trastuzumab, y por lo tanto, también es relevante para las pruebas de toxicidad de Fuc-trastuzumab.

Actividad antitumoral en modelos animales Un estudio farmacodinámico en ratones desnudos que analizan la eficacia de Fue- trastuzumab en diferentes modelos tumorales se realizó y también se comparó con Fuc+ trastuzumab. Se utilizaron ratones atimicos desnudos xenoinjertados con células tumorales HER2 positivas de una linea celular humana BT474 o de carcinomas derivados de un paciente.

En el estudio, 1 x 107 células tumorales fueron implantadas por via subcutánea (s.c.) en ratones desnudos (N = 8 por grupo) y se dejaron crecer hasta que los tumores alcanzaron un tamaño palpable, el cual se alcanzó aproximadamente 7 - 13 dias después de la implantación. El tamaño del tumor objetivo fue de ~ 0.1 cm3. En este momento se inició el tratamiento con anticuerpos. El tamaño del tumor se midió dos veces por semana con un instrumento similar a pinzas. Volúmenes de los tumores individuales se calcularon (V = (longitud + ancho2)/2) y se relacionaron con los valores en el primer dia de tratamiento (volumen relativo del tumor). El efecto terapéutico se determinó en términos de la inhibición del crecimiento del tumor primario.

Fue- Trastuzumab y Fuc+ trastuzumab (N = 8f/grupo) se administraron por vía intravenosa dos veces por semana durante 4 semanas a niveles de dosis de 3 g/kg y 30 mg/kg. El volumen de aplicación fue de 10 ml/g de peso corporal para ambas formulaciones de anticuerpos. El ajuste de la concentración en la solución de inyección se realizó mediante dilución con PBS. Para el conjunto de experimentos se seleccionó una dosificación basada en el peso corporal para mejorar la precisión de dosificación y la comparabilidad durante el período de tratamiento (Fichtner et al.2008, Steiner et al.2007). Mabthera® (Roche) sirvió como un control de anticuerpo irrelevante y solamente se administró en una dosis de 30 mg/kg. Ratones xenoinjertados se trataron al nivel de dosificación indicado cuando los tumores alcanzaron un tamaño palpable. Cada símbolo representa el valor de la media y EEM de un grupo de 8 animales. La media de los volúmenes relativos de tumores de los animales tratados se muestran en la Figura 13D.

Ambos anticuerpos, el Fue- trastuzumab así como el Fuc+ trastuzumab inhiben considerablemente el crecimiento del tumor BT 74 en comparación con los animales tratados con PBS (p < 0.001). No se observó ninguna diferencia significativa entre los niveles de dosis. El Fue- Trastuzumab causó remisiones tumorales en 8 de 8 tumores, Herceptin® causó remisiones tumorales en 7 de 8 tumores. No se encontró ninguna diferencia significativa entre el volumen relativo del tumor y el número de remisiones tumorales en el grupo tratado con Fuc-trastuzumab y el grupo tratado con Fuc+ trastuzumab en los grupos de dosis. Por lo tanto, este experimento verifica que el Fue- trastuzumab muestra una fuerte actividad antitumoral dependiente de la dosis. Una eficacia comparable de Fue- trastuzumab y Fuc+ trastuzumab se esperaba en este modelo, ya que los ratones no son sensibles a la glico-optimización realizada, es decir, la reducción de la fucosa y el aumento de bisGlcNAc. Las mejoras y opciones terapéuticas novedosas de los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención son, en particular, demostradas por los datos clínicos mostrados en la presente. No se observaron cambios significativos en el peso corporal de los animales lo que indica que no se produjo ninguna toxicidad.

Se realizó un segundo estudio para investigar la dependencia de la dosis del efecto antitumoral de Fuc-trastuzumab. Se investigaron cinco niveles de dosis diferentes que varían de 0.1 mg/kg a 10 mg/kg de Fuc-trastuzumab. El Fue- trastuzumab (N = 8) se administró por vía intravenosa dos veces por semana durante 4 semanas. La media del volumen relativo del tumor de los animales se muestra en la Figura 13B. El Fue- trastuzumab inhibió considerablemente y de forma dependiente de la dosis el crecimiento tumoral BT474 en comparación con los animales tratados con vehículo (p <0.001).

No se observaron cambios significativos en el peso corporal de los animales lo que indica que no se produjo ninguna toxicidad.

Ejemplo 17: Modelo de tumor derivado de un paciente La actividad antitumoral de Fue- trastuzumab se estudió en ratones desnudos inmunodeficientes portadores de xenoinjertos de carcinoma derivados de un paciente humano de origen gástrico. Los xenoinjertos de células tumorales derivados de un paciente se supone que son más similares al tejido original que las líneas celulares tumorales y por lo tanto, se consideran de mayor relevancia clínica. El modelo tumoral se seleccionó de conformidad con su estado de expresión de HER2 positiva que ha sido evaluado mediante inmunohistoquímica. El tumor de origen de carcinoma gástrico se demostró que expresa niveles moderados de HER2 mediante inmunohistoquimica.

En el modelo gástrico, Fue- trastuzumab (N = 8 m/grupo) se administró iv dos veces por semana durante 4 semanas a niveles de dosis de 1 mg/kg y 10 mg/kg. El ajuste de la concentración en la solución de inyección se realizó mediante dilución con un tampón de formulación. El volumen de aplicación se mantuvo constante a 10 ml/g de peso corporal. La media del volumen relativo del tumor de los animales se muestra en la Figura 14.

El Fue- trastuzumab inhibió el crecimiento del tumor significativamente (p < 0.001), confirmando de ese modo que los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención son adecuados para el tratamiento de tumores HER2 positivos que también expresan niveles moderados de HER2. No se observó ninguna diferencia importante en la eficacia entre los dos niveles de dosis ensayados, confirmando de nuevo que los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención son sumamente eficaces incluso en pequeñas dosificaciones. Ningún animal murió prematuramente. No se observaron cambios significativos en el peso corporal de los animales lo que indica que no se produjo ninguna toxicidad importante.

Ejemplo 18: Farmacocinetica El perfil PK/TK de Fue- trastuzumab se investigó en un estudio PK de dosis única para evaluar la vida media sérica de Fue- trastuzumab en ratones desnudos en comparación con Herceptin®.

Adicionalmente, el perfil PK/TK de Fuc-trastuzumab se caracterizó en un estudio de mono macaco de dosis única comparando el perfil PK de Fue- trastuzumab y Herceptin®. Las muestras de plasma recogidas en este estudio se analizaron mediante un método de ELISA.

Vida media sérica en ra tones desnudos El comportamiento farmacocinético de Fuc-trastuzumab y Herceptin® se estudió en ratones desnudos después de una administración única en bolo intravenosa (iv) de 30 mg/kg de peso corporal en un volumen de aplicación de 10 ml/kg de peso corporal (N = 3 f/grupo). Los niveles de dosis de 1 mg/kg hasta 100 mg/kg se consideran dentro del intervalo eficaz (Fujimoto-Ouchi et al., 2007; Baselga et al., 1998; Pietras et al., 1998) y también se utilizaron en estudios farmacocinético de dosis única con Herceptin® (EMEA, EPAR para Herceptin®). Las muestras de sangre se tomaron antes de la dosis (-1 d), en 5 min, 1, 6, 24 horas y 3, 5, 7, 10, 15, 21 d después de la dosificación. Los niveles séricos de anticuerpos se determinaron mediante un ensayo de ELISA de titulo comercial. El intervalo de calibración del ensayo fue de 1 hasta 1000 ng de anticuerpo por mi de suero. Los resultados se muestran en la Figura 15A.

La concentración de la solución de inyección de Fue- trastuzumab y Herceptin® se ajustó mediante dilución con PBS.

El Fue- trastuzumab, asi como el Herceptin® exhibieron un decaimiento exponencial de dos fases con una vida media inicial de 3.5 h y 3.0 h, respectivamente. La vida media terminal de Fue- trastuzumab es 5.4 d (es igual a 130 h) y 5.5 d (es igual a 132 h) para Herceptin®. La máxima concentración plasmática fue de 801 ± 151 mg/ml para Fue- trastuzumab y 868 ± 84 pg/ml para Herceptin®. Estas diferencias en la concentración plasmática y la vida media no son estadísticamente significativas, de esta manera, el comportamiento farmacocinético de ambos anticuerpos se considera que es similar. Estos resultados están en buen acuerdo con los datos publicados (Palm et al., 2003; ti/2 = 110 h).

Estudio Farmacocinétíco de Fue- trastuzumab en Comparación con Herceptin® después de una Infusión Única Intravenosa de 1 -h a Monos Macacos El objetivo de este estudio fue evaluar la farmacocinética de Fue- trastuzumab en comparación con el producto de referencia Herceptin® después de una infusión única iv de 1 hora a monos macacos seguido de un periodo de observación de 20 dias. 2 grupos, cada uno comprendiendo 3 monos macacos machos fueron tratados por una infusión única iv de 1 hora con ya sea Fue- trastuzumab o Fuc+ trastuzumab (Herceptin®) a una dosis de 40 mg/kg de peso corporal (bw). La dosis se seleccionó haciendo referencia a los estudios farmacocinéticos y toxicológicos en monos Rhesus y macacos que utilizaron dosis de 1-47 mg/kg de Herceptin® (EMEA, EPAR para Herceptin®).

Los animales se observaron antes y después de la dosificación en cada momento de la dosificación para cualquier señal de cambios de comportamiento, reacción al tratamiento o enfermedad. Las observaciones en el laboratorio incluyeron piel/pelaje, membranas mucosas, sistemas respiratorio y circulatorio, actividad somatomotora y patrones de comportamiento. Se puso especial atención a la tolerancia local de la prueba o elemento de referencia en el sitio de infusión. El peso corporal de cada mono se registró antes de la dosis, al inicio del estudio y después del mismo en intervalos siempre en el mismo día de la semana a la misma hora del día.

El muestreo de sangre se realizó previo a la infusión, inmediatamente (dentro de 2 minutos) después del final de la infusión de 1 hora y 2, 4, 6, 8, 12 y 24 horas después del final de la infusión. Adicionalmente, en los días de prueba 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 y 20 después del final de la infusión se recolectaron muestras de sangre. Se evaluaron parámetros toxicocinéticos estándar.

Ninguno de los animales murió prematuramente durante el curso del estudio o mostró signos clínicos de toxicidad sistémica. No se notó ninguna influencia relacionada con el elemento de prueba o con la intolerancia local. Los valores Cmax se observaron inmediatamente (dentro de 2 minutos) después del final de la infusión de 1 hora para ambos, Fue- trastuzumab y Herceptin®, y se encontró que están en el mismo intervalo. La media de la vida media de eliminación de suero terminal de Fue- trastuzumab fue de 170 horas, mientras que la media de la vida media de eliminación de suero terminal de Herceptin® fue de 195 horas, cada una en el día de prueba 1. No hubo ninguna diferencia estadísticamente significativa (a p £ 0.01) entre los parámetros toxicocinéticos de Fue- trastuzumab en comparación con Herceptin® (Figura 15B). Por lo tanto, los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención muestran un comportamiento farmacocinético similar al correspondiente anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa. Esto confirma, que los efectos terapéuticos mejorados y novedosos que se observan con los anticuerpos anti-HER2 de fucosa reducida de conformidad con la presente invención realmente son atribuibles a la actividad tumoral que se cambia debido a la glicosilación cambiada y no son atribuibles a un cambio en el comportamiento farmacocinético.

La media de los parámetros toxicocinéticos en el suero de monos se da en la Tabla 7.

Tabla 7; Parámetros Toxicocinéticos calculados después de una infusión de anticuerpos única Desviación estándar DS; # Valores obtenidos a partir del análisis de suero de Fue- trastuzumab y Herceptin®, todos los otros valores se calcularon mediante análisis toxicocinético; ## tiempo después del final de la infusión Se realizaron estudios de la toxicidad de dosis repetidas en monos macacos. En el estudio de los resultados del intervalo de dosis, los siguientes niveles de dosis se probaron: 5, 20, y 40 mg/kg bw/día de Fue- trastuzumab. El programa de dosificación fue de dos veces por semana, para dos semanas y cinco administraciones en total. La vía de administración fue infusiones iv de una hora. Se estudiaron los parámetros toxicológicos estándar y no se observó ningún efecto relacionado con el tratamiento.

En un estudio pivotal de dosis repetidas de cuatro semanas, los siguientes niveles de dosis se probaron: 40, 20 y 5 mg/kg de Fue- trastuzumab. Los programas de dosificación fueron por semana, para cuatro semanas, y cinco administraciones en total. La via de administración fue de infusiones iv de una hora. Se estudiaron parámetros toxicológicos estándar incluyendo inmunogenicidad y parámetros farmacológicos de seguridad. Ningún efecto adverso y ningún nivel de efecto adverso observado por encima de 40 mg/kg b.w./dosis se encontró. Adicionalmente, se realizó reactividad cruzada de tejidos en tejido de humanos y de monos macacos y la reactividad cruzada de tejidos se encontró que es comparable para el Fuc+ trastuzumab (Herceptin®).

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 50% o menos (anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida) para el tratamiento de un paciente humano con un cáncer HER2 positivo, en donde el cáncer es cáncer metastatizante.

2. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida tiene las siguientes características de glicosilación en el dominio CH2: (i) una cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan fucosa de 20% o menos; (ii) una cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan GlcNAc de bisección de por lo menos 8%; (iii) una cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan por lo menos una unidad de galactosa de por lo menos 65%; y (iv) una cantidad relativa de cadenas de carbohidratos que portan por lo menos dos unidades de galactosa de por lo menos 15%.

3. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa).

4. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque es para el tratamiento de metástasis, en donde las metástasis incluyen una o más de metástasis de piel, en particular, metástasis de piel ulcerativas, metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado y metástasis de ganglios linfáticos.

5. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el paciente tiene una o más metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado.

6. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque es para el tratamiento de cáncer HER2 positivo el cual es un cáncer de mama metastatizante, en particular, un carcinoma ductal invasivo de mama, preferiblemente con la implicación de ganglios linfáticos.

7. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque es para el tratamiento de un cáncer metastatizante HER2 positivo el cual se selecciona del grupo que consiste de cáncer de colon, cáncer de glándulas salivales tal como carcinoma de la glándula parótida, cáncer de pulmón tal como carcinoma de pulmón de células no pequeñas, y cáncer bronquial.

8. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque es para el tratamiento de las metástasis HER2 positivas que tienen una sobreexpresión de HER2 de nivel 2+ o inferior, preferiblemente de nivel 1+ o inferior, según se determina mediante inmunohistoquimica.

9. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque es para el tratamiento de lesiones de la piel o lesiones de los ganglios linfáticos causadas por una metástasis, particularmente úlceras de la piel.

10. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida dicho paciente ha sido tratado con a) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o b) por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 60% o más (anticuerpo anti-HER2 de alta fucosa), o por lo menos un anticuerpo anti-HER2 que no está glicosilado; c) opcionalmente radioterapia; y d) opcionalmente por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional; en donde los tratamientos anteriores a), b), opcionalmente c) y opcionalmente d) ocurrieron en cualquier orden secuencial o simultáneamente.

11. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque previo al tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida el paciente ha sido tratado con por lo menos cinco diferentes agentes anticáncer, en particular, agentes qui ioterapéuticos ya sea en monoterapia o terapia de combinación.

12. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 10 u 11, caracterizado porque el cáncer HER2 positivo es resistente a o ha progresado después del tratamiento con por lo menos un agente quimioterapéutico y/o es resistente a o ha progresado después del tratamiento con trastuzumab de alta fucosa (Herceptin ®) y/o pertuzumab de alta fucosa (Omnitarg).

13. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida se administra de forma repetida al paciente y en donde un efecto terapéutico se obtiene por lo menos después de la segunda administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida, preferiblemente ya después de la primera administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida.

14. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el efecto terapéutico incluye una reducción de lesiones de la piel, en particular, lesiones de la piel ulcerativas, una reducción de adenopatías mediastínicas y/o una reducción de metástasis viscerales, en particular, metástasis de pulmón y/o de hígado.

15. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque tiene una cantidad de fucosa en el dominio CH2 de 20% o menos, 15% o menos, 10% o menos, 5% o menos o 0%, preferiblemente en el intervalo de 2% a 20%, de 3% a 15% o de 5% a 10%.

16. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque tiene las siguientes características de glicosilación en el dominio CH2: (i) una cantidad de GlcNAc de bisección de por lo menos 8%; (ii) una cantidad de galactosa de por lo menos 65o o/. (iii) sin NeuGc detectable; (iv) sin Gala1,3-Gal detectable; y (v) NeuAc acoplado a a2,6 detectable.

17. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en particular la reivindicación 14, caracterizado porque tiene las siguientes características: (i) comprende una región variable de cadena pesada que comprende una CDRl que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; (ii) comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (iii) comprende una región variable de cadena ligera que comprende una CDRl que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (iv) comprende una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que es por lo menos 80% idéntica a la misma; (v) muestra especificidad cruzada con el anticuerpo trastuzumab; y (vi) es un anticuerpo IgG.

18. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una monoterapia; o en donde el tratamiento con el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es una terapia de combinación, en particular, en combinación con (i) por lo menos un agente quimioterapéutico; y/o (ii) por lo menos un anticuerpo terapéutico adicional que es diferente del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida; y/o (iv) cirugía de cáncer y/o radioterapia.

19. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque es para la administración del anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida en una cantidad de 1 a 15 mg/kg de peso corporal del paciente cada primera, segunda, tercera o cuarta semana o con menos frecuencia; preferiblemente en una cantidad de 2 a 8 mg/kg de peso corporal del paciente cada tercera semana o con menos frecuencia.

20. El anticuerpo anti-HER2 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque el anticuerpo anti-HER2 de fucosa reducida es para el tratamiento de pacientes independientemente de su alotipo FcYRIIIa.