MX2014004792A - Metodo de tratamiento o reduccion de efp. - Google Patents

Abstract

La presente invención se dirige a un método de tratamiento o reducción de la PEFE en un paciente que comprende la administración de una o múltiples inyecciones de dosis baja de colagenasa a una área afectada por la PEFE. La invención abarca métodos en donde la dosis de colágenasa por inyección está entre alrededor de 50 a alrededor de 200 unidades ABC y/o en donde la concentración de colagenasa está entre alrededor de 50 a alrededor de 200 unidades ABC/mililitro (ml).

Description

MÉTODO PARA EL TRATAMIENTO O REDUCCIÓN DE PANICULOPATÍA EDEMATO-FIBROESCLERÓTICA (PEFE) SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de la Solicitud Provisional de Patente Estadounidense No. 61/549,863 presentada el 21 de octubre de 2011. El contenido total de la solicitud antes referenciada se incorpora en este documento mediante referencia en su totalidad.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La paniculopatia edemato-fibroesclerótica (PEFE), más comúnmente referida como celulitis, es una condición que presenta una alteración topográfica en la apariencia de la piel y afecta alrededor del 90% de mujeres en la post pubertad (Rawlings (2006), Int J Cosmetic Sci 2006; 28: 175-90; Khan, et al. (2010), J Am Acad Dermatol 2010; 62: 361-70). La PEFE parece una piel con hoyuelos y da a la piel lo que se describe comúnmente como apariencia de cáscara de naranja. La trabécula cutánea, compuesta de colagenasa, se cree que juega un papel causativo en la formación de hoyuelos en la piel.

La colagenasa, una enzima que tiene la capacidad especifica de digerir el colágeno, se ha usado para tratar una variedad de trastornos mediados por colágeno, incluyendo, por ejemplo, la contractura de Dupuytren, la enfermedad de Pcyronie, lipoma y capsulitis adhesiva. La Patente Estadounidense No.4,645,668 y la Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20070224184 también divulga ciertos usos de la colagenasa. Una fuente principal de colagenasa es de la fermentación de las bacterias, Clostridium histolyticum. Una formulación inyectable que comprende colagenasa I y colagenasa II de C. histolyticum se vende bajo la marca XIAFLEif y está aprobada por la Administración de Alimentos y Bebidas de los Estados Unidos (FDA por sus siglas en inglés) para el tratamiento de la contractura de Dupuytren.

La presente invención está dirigida a un método para el tratamiento o la reducción de la PEFE que comprende uno o una pluralidad de inyecciones de colagenasa a un área afectada por la PEFE.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN presente invención está basada descubrimiento de que una o más inyecciones de baja dosis de colagenasa a un área afectada por la PEFE son efectivas para reducir o tratar dicha PEFE. La cantidad de colagenasa en una sola inyección puede ser tan baja como 5 unidades de ABC, o 0.00029 mg (0.29 pg). La dosis total de colagenasa administrada depende del tamaño del área de tratamiento, y por lo tanto oscila entre alrededor de 5 a alrededor de 5000 unidades ABC. La concentración de colagenasa está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC/milimetro (mi). 10,000 unidades ABC equivalen a 0.58 mg de colagenasa.

En una modalidad, la invención está dirigida a un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración a dicho paciente de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por la PEFE, en donde la dosis de colagenasa por inyección es de entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC, y en donde la pluralidad de inyecciones subdérmicas se administran en una pluralidad de sitios de inyección. En ciertos aspectos, una pluralidad de inyecciones subdérmicas se administran en una pluralidad de sitios de inyección. En modalidades adicionales, la concentración de colagenasa administrada es de entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro. En ciertas modalidades adicionales, cada inyección de colagenasa se administra en un volumen de alrededor de 0.5 mi o menos. En un aspecto más, la dosis total de colagenasa administrada está entre alrededor de 5 a alrededor de 2000 unidades ABC.

En otra modalidad, la invención está dirigida a un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración a dicho paciente de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa dentro de un área afectada por la PEFE, en donde la dosis total de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 5 a alrededor de 5000 unidades ABC, y en donde la pluralidad de inyecciones se administran en una pluralidad de sitios de inyección. En ciertos aspectos, cada inyección está entre alrededor de 5 y alrededor de 200 unidades ABC. En algunas modalidades, la concentración de colagenasa administrada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro y/o cada inyección de colagenasa se administra en un volumen de alrededor de 0.5 mi o menos.

En otra modalidad más, la invención es un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración a dicho paciente de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por la PEFE, en donde la dosis de colagenasa administrada por inyección al área afectada está entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC y en donde la concentración de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro.

En aún otro aspecto, la invención es un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración a dicho paciente de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por la PEFE, en donde la dosis de colagenasa administrada por inyección al área afectada está entre aproximadamente 5 y aproximadamente 200 unidades de ABC y en donde la concentración de colagenasa administrada al área afectada está entré-alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro.

En un aspecto más, la invención está dirigida a un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por la PEFE en donde la concentración de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro y en donde el volumen de cada inyección de colagenasa es de alrededor de 0.5 mi o menos.

En algunas modalidades, la dosis de colagenasa administrada por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 100 unidades ABC. En modalidades adicionales, la dosis de colagenasa administrada por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 50 unidades ABC.

La colagenasa se puede derivar de una fuente bacteriana o puede ser una forma recombinante de colagenasa. En algunas modalidades, la colagenasa se purifica de Clostridium histolyticum. En una modalidad adicional, la colagenasa comprende colagenasa I y colagenasa II. En aún otras modalidades, la colagenasa I y colagenasa II purificada de Clostridium histolyticum y comprende colagenasa I y colagenasa II.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los anteriores y otros objetos, características y ventajas de la invención serán aparentes de la siguiente descripción más particular de modalidades preferidas de la invención, como se ilustra en los dibujos que se acompañan en los que los caracteres de la misma referencia se refieren a las mismas partes a lo largo de las diferentes vistas. Los dibujos no están necesariamente a escala, haciendo énfasis en su lugar en la ilustración de los principios de la invención.

La Figura 1 es una ilustración de la plantilla de inyección en donde cada punto dentro del octágono representa un sitio de inyección. La X dentro del círculo representa el sitio de inyección al "hoyuelo central". Las cuatro esquinas están marcadas como superior derecha (SD), inferior derecha (ID), superior izquierda (SI) e inferior izquierda (II).

La Figura 2 es una ilustración del glúteo y muslo superior posterior con marcas de esquina de plantilla.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A continuación sigue una descripción de modalidades preferidas de la invención.

Como se discutió anteriormente, la presente invención se basa en el descubrimiento de que las inyecciones de dosis bajas de colagenasa a un área afectada por PEFE son eficaces para lisar colágeno y de ese modo reducir o tratar dicha PEFE. La cantidad de colagenasa en una sola inyección puede ser tan baja como 5 unidades ABC, o 0.00029 mg. La dosis total de colagenasa administrada depende del tamaño de la zona de tratamiento, y es por lo tanto entre aproximadamente 5 a aproximadamente 5,000 unidades ABC y/o en donde la concentración de colagenasa es de entre aproximadamente 50 a aproximadamente 2,000 unidades ABC/mililitro (mi). Las dosis y concentraciones de colagenasa empleadas de acuerdo con el método de la presente invención son sustancialmente inferiores a las dosis y concentraciones de colagenasa utilizadas actualmente y aprobadas por la FDA de los Estados Unidos para el tratamiento de la contractura de Dupuytren .

Las palabras "un", "uno" o "una" pretenden abarcar uno o más, a menos que se especifique lo contrario.

"Tratar" o "tratamiento" de PEFE incluye la administración de las composiciones o agentes descritos en la presente descripción para mejorar la apariencia de la piel previamente afectada por PEFE y/o para lograr un resultado estético mejorado. El tratamiento de PEFE puede, por ejemplo, abarcar una reducción visual en la gravedad de PEFE o una reducción visual en la gravedad o número de hoyuelos de la piel.

La invención abarca un método de tratamiento o reducción de PEFE en un paciente que comprende la administración de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por PEFE, en donde la pluralidad de inyecciones se inyecta en una pluralidad de sitios de inyecciones dentro de un área afectada por PEFE, en donde la dosis de colagenasa administrada por inyección es de aproximadamente 5 a aproximadamente 200 unidades ABC. En modalidades adicionales, la dosis de colagenasa por inyección es de aproximadamente 5 a aproximadamente 100 unidades ABC, o aproximadamente 5 a aproximadamente 50 unidades ABC, o aproximadamente 10 a aproximadamente 100 unidades ABC, o aproximadamente 10 a aproximadamente 50 unidades ABC. En modalidades adicionales, la dosis total de colagenasa que se administra a la zona afectada es de entre aproximadamente 5 a aproximadamente 5.000 unidades ABC. La invención también abarca un método que comprende administrar colagenasa a la zona afectada por PEFE en donde la concentración de colagenasa que se administra a la zona afectada es de aproximadamente 50 a aproximadamente 2.000 unidades ABC/ml. La invención abarca adicionalmente un método de tratamiento o reducción de PEFE en un paciente que comprende la administración de una pluralidad de inyecciones de colagenasa a un área afectada por PEFE, en donde la dosis de la colagenasa por inyección está entre aproximadamente 5 a aproximadamente 200 unidades ABC.

Un área afectada por PEFE (también denominada en este documento como el "área objetivo" o "área de tratamiento") es típicamente un área de la piel de los muslos y/o los glúteos caracterizada por uno o más hoyuelos. En algunas modalidades, la zona de PEFE tratada con la o la pluralidad de inyecciones de colagenasa es una zona de la cara superior lateral del muslo o de una zona de los glúteos y no implica el pliegue del glúteo. La zona objetivo a ser tratada con colagenasa también puede ser un área que tiene una puntuación de escala de severidad fotonumérica de PEFE (CSS) de ³ 10 en representación de intensidad moderada a severa de PEFE dentro del glúteo derecho o izquierdo o el muslo derecho o izquierdo (Hexsel et al., (2009). A validated photonumeric EFP severity scale. JEADV 2009; 23:523-52; el contenido de las cuales se incorporan expresamente por referencia en el presente documento). El CSS es una escala fotonumérica que se ve en cinco características morfológicas principales de PEFE: (A) número de depresiones, (B) profundidad de las depresiones, (C) aspecto morfológico de la superficie de la piel, (D) la laxitud, la flacidez o la flacidez de la piel, y (E) la escala de clasificación descrita originalmente por Nurnberger y Muller, J Dermatol Surg Oncol 1978; 4(3): 221-29) (Hexsel et al., 2009). Cada una de estas características se evalúa en una escala de 4 puntos entre un mínimo de 0 y un máximo de 3. La escala va de 0 a 15.

El área objetivo tratado con la o la pluralidad de inyecciones de PEFE es generalmente un área de la piel que se caracteriza por uno o más hoyuelos que son visualmente evidentes cuando el paciente está de pie. El área geométrica del área de tratamiento depende del tamaño de la zona afectada por PEFE. Así, por ejemplo, si la zona afectada por PEFE incluye un hoyuelo, el área geométrica de la zona de destino puede ser de aproximadamente 1 cm2 a aproximadamente 5 cm2. En aspectos adicionales, el área afectada por la PEFE comprende múltiples hoyuelos y tiene una superficie geométrica superior a 1 cm2. En una modalidad, el área objetivo tiene un área geométrica entre aproximadamente 1 c 2 a aproximadamente 200 cm2. Como se comprenderá, debido a que el área objetivo es generalmente un área del muslo o de los glúteos, la zona puede, por ejemplo, ser aproximadamente de forma rectangular y tener una longitud de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 cm, y una anchura de aproximadamente 1 a alrededor de 10 cm. En un ejemplo adicional, el área objetivo tiene una longitud de aproximadamente 6 a aproximadamente 15 cm y una anchura de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 cm. La persona experta en la téenica también entenderá que el área objetivo puede ser más o menos circular o de cualquier otra forma geométrica en función de la zona deseada para el tratamiento. El área objetivo opcionalmente puede ser caracterizada por al menos un hoyuelo de la piel aproximadamente en el centro de la zona de PEFE tratada, en donde el área de PEFE se trata con la o la pluralidad de inyecciones. Los sitios para la inyección de colagenasa pueden ser numerados y espaciados dentro de la zona afectada por PEFE como para permitir una distribución uniforme y la eficacia de la colagenasa inyectada. El número de inyecciones de colagenasa generalmente dependerá del tamaño de la zona a tratar. En algunas modalidades, el número de puntos de inyección es de al menos 1 o más. En otros aspectos, el número de puntos de inyección es de al menos aproximadamente 3 o más. En otros aspectos, el número de puntos de inyección es de al menos aproximadamente 5 o más. En otros aspectos, el número de puntos de inyección es de al menos aproximadamente 7 o más. En un aspecto adicional, el número de puntos de inyección es de al menos 10 o más.

En una modalidad, en la que el área a ser tratada es un área de un solo hoyuelo o de otra manera tiene un área geométrica de menos de aproximadamente 5 cm2, sólo hay un sitio único de inyección, y entre aproximadamente 5 y aproximadamente 200 unidades ABC de colagenasa es inyectada. Opcionalmente, la inyección única se puede inyectar en el centro del hoyuelo. En modalidades en las que el área de tratamiento es más grande, habrá múltiples sitios de inyección y entre aproximadamente 5 a aproximadamente 200 unidades ABC de colagenasa se administran por inyección. Opcionalmente, la pluralidad de inyecciones incluyen al menos una inyección administrada al centro de un hoyuelo. Los sitios de inyección pueden, por ejemplo, estar entre aproximadamente 1 a aproximadamente 4 cm entre si. En otros aspectos, los sitios de inyección pueden estar entre aproximadamente 2 a aproximadamente 3 cm entre si. Por ejemplo, en ciertas modalidades, la zona afectada por PEFE tiene una anchura de aproximadamente 8 cm y una longitud de aproximadamente 10 cm de dimensiones y el número de inyecciones administradas de colagenasa es de 10 y la distancia entre los sitios de inyección es de aproximadamente 2.5 cm. En ciertos aspectos, una plantilla de inyección (por ejemplo, hecha de un material transparente delgado) que incluye marcas que muestran los sitios de inyección destinados, se coloca sobre el área objetivo y las una o más inyecciones se realizan en los sitios indicados por la plantilla.

El área de destino se trata con una o una pluralidad de inyecciones simultáneas de colagenasa. Tal como se utiliza en la presente descripción, las inyecciones simultáneas son inyecciones administradas al mismo tiempo o secuencialmente en el mismo periodo de tiempo, es decir, durante una sola sesión de tratamiento. Como se discutió anteriormente, la dosis total de colagenasa que se administra a la zona afectada por PEFE está entre alrededor de 5 a alrededor de 5,000 unidades ABC de colagenasa. La dosis total de colagenasa administrada depende del tamaño de la zona de tratamiento. La dosis total de colagenasa es la suma de las dosis administradas usando una o una pluralidad de inyecciones de colagenasa. En ciertos aspectos, cada inyección de colagenasa comprenderá dosis iguales de colagenasa. Por ejemplo, cuando el número de inyecciones es 10, para ser distribuidas en el área de tratamiento, y cada inyección es de 200 unidades ABC de colagenasa, la dosis total de colagenasa para usar en la zona de destino será de 2000 unidades ABC. A modo de ejemplo adicional, cuando el número de inyecciones es de 10 a ser distribuidas sobre el área de tratamiento, y cada inyección es de 5 unidades ABC de colagenasa, la dosis total de colagenasa para ser administrada a la zona de destino será de 50 unidades ABC. A modo de ejemplo, cuando el número de inyecciones es de 5 a ser distribuidas en el área de tratamiento, y, cada inyección es de 5 unidades ABC de colagenasa, la dosis total de colagenasa para usar en la zona de destino será de 25 unidades ABC. Cuando sólo una sola inyección se va a realizar y la dosis seleccionada es de 5 unidades ABC, la dosis total de colagenasa administrada será de 5 unidades ABC. La concentración de colagenasa que se administra a la zona afectada por colagenasa es de entre aproximadamente 50 unidades ABC/ml a aproximadamente 2,000 unidades ABC/ml. La colagenasa puede ser administrada en un volumen por inyección de aproximadamente 0.5 mi o menos. En otro aspecto, la colagenasa se puede administrar en un volumen por inyección de aproximadamente 0.1 mi a aproximadamente 0.5 mi. El volumen total de colagenasa inyectado puede, por ejemplo, estar entre aproximadamente 0.1 mi (cuando se utiliza sólo un único sitio de inyección) hasta aproximadamente 7 mi (para múltiples sitios de inyección), y más alto para las áreas de tratamiento más grandes de tamaño. En una modalidad en la que la zona de tratamiento es de aproximadamente 80 cm2, el volumen total inyectado es de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mi, sumados a partir de 10 inyecciones de entre 0.1 mi y 0.5 mi.

La colagenasa es una enzima que tiene la capacidad especifica de digerir el colágeno. Una fuente comercial de colagenasa es de la fermentación por la bacteria Clostridium histolyticum. En ciertos aspectos, la colagenasa comprende una combinación de colagenasa I y colagenasa II de Clostridium histolyticum purificado. Preferiblemente, la colagenasa I y la colagenasa II están presentes en una relación de masa de aproximadamente 1 a 1. La colagenasa AUX I tiene una única cadena de polipéptido que consiste en aproximadamente 1000 aminoácidos con un peso molecular de 115 kDa. La colagenasa AUX II también tiene una única cadena de polipéptido que consiste en de alrededor de 1000 aminoácidos con un peso molecular de 110 kDa. La colagenasa cruda obtenida de C. histolyticum se puede purificar por una variedad de métodos conocidos por los expertos en la téenica, incluyendo, por ejemplo, cromatografía de afinidad de heparina, precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de hidroxiapatita, cromatografía de exclusión por tamaño, cromatografía de intercambio iónico, y cromatografía de quelación de metales. Los métodos de purificación de la colagenasa cruda obtenida de C. histolyticum también se describen en la Patente Estadounidense No.7,811,560, cuyos contenidos se incorporan expresamente en el presente documento por referencia. Como se mencionó anteriormente, una formulación inyectable que comprende colagenasa I y colagenasa II de C. histolyticum se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial XIAFLElf y está aprobada por la FDA de los Estados Unidos para el tratamiento de la contractura de Dupuytren. La colagenasa puede, por ejemplo, ser un producto liofilizado parenteral compuesto de dos colagenasas en una relación aproximada de 1:1 de masa, colagenasa I (AUX-I; colagenasa clostridial tipo I) y la colagenasa II (AUX-II; colagenasa clostridial tipo II). Preferiblemente, la colagenasa comprende colagenasa I y colagenasa II y tiene una relación de masa de aproximadamente 1 a 1 y tiene una pureza de al menos aproximadamente 95 % por área determinado por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa (como se describe, por ejemplo, en la patente estadounidense No.7,811,560).

Las composiciones de colagenasa de la invención también se pueden preparar mezclando un número concreto de unidades de actividad o masas especificas de los enzimas purificadas. La actividad de colagenasa se puede medir por la capacidad de la enzima para hidrolizar ya sea péptido sintético o sustrato de colágeno. Los expertos en la téenica reconocerán que los ensayos enzimáticos distintos de los descritos en este documento también pueden ser utilizados para definir y preparar composiciones enzimáticas funcionalmente equivalentes.

Se entiende que los términos "colagenasa I", "ABC I", "AUX I", "colagenasa AUX I", y "colagenasa ABC I" significan lo mismo y se pueden utilizar indistintamente. Del mismo modo, los términos "colagenasa II", "ABC II", "AUX II", "colagenasa AUX II", y "colagenasa ABC II" se refieren a la misma enzima y también se pueden utilizar indistintamente.

En ciertas modalidades adicionales, la colagenasa administrada de acuerdo con un método descrito en el presente documento es una colagenasa recombinante.

La colagenasa se administra en una composición farmacéutica que comprende colagenasa y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. En algunas modalidades, la composición no incluye una enzima proteasa distinta de la colagenasa (aparte de una cantidad pequeña o traza de enzima proteolítica que puede estar presente en la colagenasa purificada a partir de una fermentación bacteriana). En modalidades adicionales, la composición farmacéutica no incluye una enzima distinta de la colagenasa (aparte de un pequeño rastro o cantidad de enzima que puede estar presente en la colagenasa purificada a partir de una fermentación bacteriana). La persona experta en la téenica comprenderá que una colagenasa derivada de una fermentación bacteriana, incluso después de la purificación, puede contener cantidades pequeñas o traza de impurezas, incluyendo otras enzimas, tales como otras enzimas de la proteasa. La cantidad pequeña o traza de impureza puede, por ejemplo, ser menor que aproximadamente 5 %, menos de aproximadamente 4 %, menos de aproximadamente 3 %, menos de aproximadamente 2 % o menos de aproximadamente 1 % de la composición de colagenasa. En algunas modalidades, la cantidad pequeña o traza de impureza puede ser menos de aproximadamente 1 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 % determinado por cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa. En otro aspecto, la composición farmacéutica consiste esencialmente de colagenasa y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Tal como se usa en el presente documento, una composición farmacéutica "que consiste esencialmente de colagenasa y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable" se pretende excluir de las composiciones farmacéuticas de proteasa y otras enzimas de hialuronidasa que no son pequeñas o pequeñas cantidades como se describió anteriormente. En ciertos aspectos adicionales, una composición "que consiste esencialmente de colagenasa" excluye las composiciones de una enzima que no sea colagenasa. En aún otra modalidad, la composición farmacéutica se compone de colagenasa y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

El método de tratamiento o reducción de PEFE puede incluir además el tratamiento previo de la zona objetivo con un agente anestésico local.

En aspectos adicionales, la invención está dirigida al tratamiento o reducción de PEFE en un paciente que consiste esencialmente en la administración de una o una pluralidad inyecciones de colagenasa a un área afectada por PEFE en donde la dosis de colagenasa administrada es de entre aproximadamente 5 a aproximadamente 200 unidades ABC y opcionalmente, además en donde la concentración de colagenasa es de aproximadamente 50 a aproximadamente 2000 unidades ABC/ml. En aún un aspecto adicional, la invención se refiere al tratamiento o reducción de PEFE en un paciente que consiste en la administración de una pluralidad de inyecciones de colagenasa en donde la dosis de colagenasa que se administra por inyección está entre aproximadamente 5 a aproximadamente 200 unidades ABC y, opcionalmente, más en donde la concentración de colagenasa es de aproximadamente 50 a aproximadamente 2000 unidades ABC/mi.

El vehículo farmacéuticamente aceptable puede ser uno o más vehículos líquidos o excipientes apropiados para la inyección. Como se usa aquí, el término "vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable" significa un rellenador no tóxico, inerte, líquido, diluyente, material de encapsulación o auxiliar de formulación de cualquier tipo. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables son azúcares tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados tales como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; glicoles tales como propilenglicol; ésteres tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico, y soluciones de tampón fosfato, así como otros lubricantes compatibles no tóxicos tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes perfumantes, conservadores y antioxidantes también pueden estar presentes en la composición, de acuerdo con el criterio del formulador. Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, pueden formularse de acuerdo con la téenica conocida usando agentes de dispersión o humectantes adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución inyectable estéril, suspensión o emulsión en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1, 3 butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer, USP y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijos estériles se emplean convencionalmente como un medio disolvente o de suspensión. Para este propósito cualquier aceite fijo suave puede ser empleado incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico se usan en la preparación de inyectables.

Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro de retención bacteriana, o por incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso. Las soluciones estériles también se pueden liofilizar para su uso posterior. En una modalidad, la composición farmacéutica que comprende colagenasa es una composición inyectable liofilizada formulada con lactosa. En una modalidad, cada miligramo de colagenasa inyectable se formula con 1.9 mg de lactosa. En otra modalidad, cada miligramo de colagenasa inyectable tiene preferiblemente aproximadamente 2800 unidades SRC y 51000 unidades medidas con un ensayo de potencia utilizando un sustrato sintético, pzGPGGPA.

En otra modalidad, la composición de colagenasa utilizada de acuerdo con un método de la invención es una composición inyectable liofilizada formulada con sacarosa, Tris a un nivel de pH de aproximadamente 8.0. Por ejemplo, 1.0 mg de la sustancia del fármaco de la invención se formulan en 60 mM de sacarosa, 10 mM de Tris, a un pH de alrededor de 8.0 (esto equivale a 20.5 mg/ml de sacarosa y 1.21 mg/ml de Tris en el tampón de la formulación). Generalmente, una fuente de calcio se incluye en la formulación, tal como cloruro de calcio.

La invención se comprenderá mejor en relación con los siguientes ejemplos, que se pretende como una ilustración solamente y no limitativa del alcance de la invención. Diversos cambios y modificaciones a las modalidades descritas serán evidentes para los expertos en la téenica y tales cambios y modificaciones pueden hacerse sin apartarse del espíritu de la invención y el alcance de las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLOS Ejemplo 1 : Efectividad de la Colagenasa de Clostridium Histolyticum en el Usado de colágeno cutáneo en cerdos enanos de Góttingen La colagenasa de Clostridium histolyticum ( Auxilium Product Operation, Malvern, PA) es un producto liofilizado parenteral que comprende dos colagenasas en una relación de masa aproximada de 1:1, Colagenasa I (AUX- I, colagenasa clostridial tipo I) y Colagenasa II (AUX- II; colagenasa clostridial tipo II). Estas colagenasas son aisladas y purificadas a partir de la fermentación de Clostridium histolyticum. El vehículo para la reconstitución del producto liofilizado fue de solución salina (cloruro de sodio 0.9 %) con 0.03 % (2 mM) de cloruro de calcio. El vehículo para la dilución y preparación de las formulaciones descritas en más detalle a continuación fue solución salina (cloruro de sodio al 0.9 % para inyección; Baxter Heal thcare Corporation, Deerfield, IL) con 10 mM (0.13 %) TRIZMA® ( Sigma Aldrich, Inc. , St. Louis, MO), 60 mM (2.0 %) de sacarosa ( Sigma Aldrich, Inc. , St. Louis, MO), y cloruro de calcio 2 m (pH 8.0) ( Aldrich Chemical Corporation, Allentown, PA).1N de HCl (ácido clorhídrico) se utilizó para llevar el pH del vehículo para la dilución a 8.0. El vehículo para la dilución se mezcló a lo largo de todos los procedimientos de preparación, muestreo y administración de la dosis. El vehículo para la dilución fue luego filtrado estéril usando un filtro de jeringa de PVDF de 0.22pm en una ampolleta estéril y tapado con un tapón. El vehículo para la dilución se preparó usando una téenica aséptica dentro de una campana de flujo laminar utilizando cristalería y utensilios esterilizados.

Las formulaciones de dosificación se prepararon en el artículo de prueba (Colagenasa de Clostridium histolyticum) a las concentraciones indicadas en la siguiente tabla: TABLA 1 a = Las formulaciones de artículos de prueba no se ajustaron para pureza. b = Medición del pH usando papel tornasol.

Las formulaciones de dosificación se prepararon en el día de la dosificación. El producto liofilizado se reconstituyó usando el vehículo para la reconstitución para obtener una solución concentrada de artículo de prueba a 2.5 mg/ml. El vehículo para la dilución se utilizó para diluir la solución concentrada de artículo de prueba y preparar las formulaciones a utilizar para la dosificación. Las formulaciones se mantuvieron en hielo húmedo antes de, y durante la dosificación. Las formulaciones se prepararon utilizando una téenica aséptica dentro de una campana de flujo laminar utilizando cristalería y utensilios esterilizados.

Cerdos enanos de Góttingen se utilizaron como el sistema de prueba en este estudio. Esta especie y raza de animales es reconocida como adecuada para los estudios de toxicidad general y se ha utilizado como modelo de investigación biomédica en una amplia variedad de disciplinas. Los porcinos presentan muchas similitudes con el hombre en la anatomía y la fisiología cardiovascular, fisiología digestiva, y estructura y función tegumentaria. Debido a la similitud de la anatomía y la fisiología de la piel entre los cerdos y el hombre, los cerdos se han convertido en modelos estándar para la cirugía plástica, cicatrización de heridas, y estudios de toxicidad dérmica (Svendsen et al, (1998), Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science 1998, 25 (suplemento 1):27—30). Históricamente, los cerdos se han utilizado en la evaluación toxicológica de los posibles agentes terapéuticos.

Se recibieron cerdos enanos Góttingen (4 varones y 3 mujeres) en buen estado de salud de Marshall BioResources, North Rose, NY. Los animales fueron de aproximadamente 3 a 4 meses de edad a la recepción. Cada animal recibió una dosis de todos los 12 tratamientos, para una dosis total por animal de aproximadamente 0.43 mg de colagenasa de Clostridium histolyticum. Los animales fueron aproximadamente de 4 meses de edad en la administración de la dosis. Los pesos corporales oscilaron entre 7185 g y 8646 g para los machos y 9333 g a 9633 g para las hembras en dosificación. Las formulaciones del artículo de prueba se administraron a los animales anestesiados por telazol/xilazina el día de estudio 0 mediante inyección subcutánea (bolo). El día antes de la inyección, las áreas designadas para la inyección se engancharon si era necesario. Seis inyecciones se administraron a lo largo del tronco lateral derecho e izquierdo de cada animal utilizando una jeringa y aguja de tamaño apropiado (calibre 16-23). Los animales no fueron dosificados en el mismo sitio más de una vez. Cada inyección subcutánea consistió en un tratamiento diferente, asignado al azar (combinación de la concentración de la formulación y el volumen de la dosis) . Los puntos de inyección fueron espaciados lo suficientemente aparte para evitar posibles reacciones de los puntos de inyección adyacentes. La zona que rodea el sitio de deposición del articulo de prueba fue marcada usando un marcador permanente y fue remarcada según fuera necesario. Los sitios de inyección individuales se marcaron. La via de administración seleccionada para este estudio fue la inyección subcutánea.

No se detectaron efectos histológicos relacionados con los fármacos en los adipocitos, los nervios, las estructuras anexiales (folículos pilosos, glándulas sudoríparas y glándulas sebáceas) o la epidermis suprayacente. No hubo diferencias consistentes en la lisis del colágeno entre los sexos o entre los animales sacrificados a las 24 ó 48 horas después de la dosis en la medida estimada de la lisis del colágeno y los resultados se combinaron por género para las necropsias después de las dosis de 24 y 48 horas en la siguiente tabla. A concentraciones de menos de 0.015 mg/ml, el grado de lisis de colágeno fue en general la dosis de respuesta. En > 0.015 mg/ml, el alcance de la lisis de colágeno fue generalmente proporcional al volumen de la dosis inyectada en contraposición a la dosis total o concentración de la formulación (por ejemplo, los artículos de prueba 7 y 8 representan la misma dosis administrada a una concentración más baja y un volumen más alto para el artículo de prueba 7).

TABLA 2 a = Para cada género, el alcance medio de la lisis de colágeno se combinó para los tres animales en los intervalos de necropsia de 24 y 48 horas.

La colagenasa de Clostridium histolyticum administrada como inyecciones subcutáneas individuales en concentraciones gue van 0.0015 a 0.15 mg/ml resultó en inflamación local en los sitios tratados con concentraciones de colagenasa de Clostridium histolyticum ³0.015 mg/ml y la lisis de colágeno (el efecto farmacológico esperado de colagenasa de Clostridium histolyticum) en todas las dosis, volúmenes de dosis, y concentraciones de formulación en este estudio. La dosis mínimamente efectiva en este estudio fue de 0.0003 mg de proteína y la concentración mínimamente eficaz fue 0.0015 mg/ml. A concentraciones de menos de 0.015 mg/ml, una respuesta a la dosis generalmente era evidente para la medida de la lisis de colágeno. A concentraciones de ³ 0.015 mg/ml, el grado de lisis de colágeno eficaz refleja el volumen de dosis dada más de la dosis total o concentración de la formulación.

La lisis del colágeno fue acompañada constantemente por un número de cambios secundarios. Estos cambios incluyen los siguientes: hemorragia y/o inflamación aguda vista consistentemente en todas las dosis eficaces; necrosis de las fibras musculares de la carnosis panicular a ³ 0.003 mg/ml (dosis total > 0.0006 mg de proteína); edema perivascular e intramural, neovascularización/fibrosis, necrosis vascular, y/o trombosis vistas esporádicamente a concentraciones de ³ 0.009 mg/ml (dosis total ³ 0.0018 mg de proteína); y hemorragia arterial intramural vista esporádicamente en concentraciones de formulación de ³ 0.030 mg/ml (dosis total de ³ 0.003 mg de proteína). No hubo efectos mediados por colagenasa de Clostridium histolyticum en adipocitos, nervios, estructuras anexas o la epidermis suprayacente.

Los resultados de este estudio mostraron algún grado de lisis de colágeno histológicamente detectable de la trabécula cutánea en todas las concentraciones de dosis de colagenasa de Clostridium histolyticum; Sin embargo, más áreas de la lisis completa de la trabécula cutánea se observaron a concentraciones de ³ 0.015 mg/ml. En este estudio, no hubo efectos mediados por colagenasa de Clostridium histolyticum en los adipocitos, los nervios, estructuras de la piel anexiales o la epidermis suprayacente. Se observaron efectos locales de la colagenasa de Clostridium histolyticum (hemorragia y/o inflamación aguda) en cada concentración en el examen macroscópico y/o microscópico en la necropsia. No hubo diferencias consistentes en la lisis de colágeno entre los sexos o entre los animales sacrificados a las 24 o 48 horas después de la dosificación el alcance estimado de la lisis de colágeno.

A concentraciones eficaces en la lisis completa de la trabécula subcutánea, la dosis y la lisis de colágeno dependiente del volumen se observó que se produjo dentro de un diámetro de aproximadamente 2.5 cm en el estudio de cerdos enanos.

Ejemplo 2 : Estudio de Fase Ib, de etiqueta abierta , dosis escalada y farmacocinética para el tratamiento de la PEFE Los objetivos de este estudio son evaluar la seguridad, eficacia, farmacocinética y la inmunogenicidad de la colagenasa de Clostridium histolyticum para aumentar las dosis totales en un área de 80 cm2, que van desde 0.0029 mg a 0.116 mg (50 a 2000 unidades ABC) y aumentar las concentraciones que van desde 0.0029 mg/ml a 0.116 mg/ml (50 a 2000 unidades ABC por mi) en el tratamiento de mujeres adultas con PEFE.

Basándose en los resultados discutidos anteriormente en el estudio de cerdos enanos (Ejemplo 1), la plantilla de inyección para la Fase 1 del estudio clínico está diseñada para permitir una distancia de aproximadamente 2.5 cm entre inyecciones. Se espera que esta distancia permita la distribución y la actividad adecuada de la colagenasa de Clostridium histolytícum dentro de los 8 cm x 10 cm de la zona de PEFE y sin brechas o superposiciones significativas o en el área de tratamiento. En un intento por determinar la dosis óptima para el tratamiento de la PEFE (por ejemplo, eficaz con efectos adversos locales mínimos), la selección de la dosis se realizó a raíz del examen del perfil de seguridad favorable de la colagenasa de Clostridium histolytícum hasta la fecha, tanto en el desarrollo clínico como en la práctica clínica, así como en los datos del estudio de cerdos enanos. Como resultado, se propone una dosis inicial de 0.0029 g inyectada como 10 dosis separadas de 0.00029 mg dentro de los 8 cm x 10 cm de la zona objetivo de PEFE a una concentración de 0.0029 mg/ml para el estudio de la Fase 1.

Este estudio es un estudio de Fase Ib, de etiqueta abierta, de dosis escalada y farmacocinética. Durante la visita de selección, mientras el sujeto está de pie, el investigador o la persona cualificada examinarán el glúteo izquierdo y derecho y el muslo izquierdo y derecho y seleccionará un cuadrante que tenga una puntuación de escala fotonumérica de severidad de PEFE (CSS) de ³ 10 representando severidad de PEFE de moderada a severa (Hexsel et al., 2009). El investigador o la persona cualificada identificará un área de PEFE dentro del cuadrante seleccionado que es de al menos 8 cm x 10 cm (es decir, la zona objetivo de PEFE) y sea adecuada para el tratamiento (es decir, que esté en la cara superior lateral del muslo o dentro del glúteo y no implique el pliegue glúteo). El área objetivo de PEFE debe ser evidente cuando el sujeto está de pie, sin el uso de ningún tipo de manipulación tal como pellizcar la piel o contracción muscular. Cada sujeto será evaluado para la elegibilidad del estudio dentro de los 21 dias antes de la inyección del fármaco del estudio en el Dia 1.

En este estudio, 63 sujetos recibirán cada uno 10 inyecciones concurrentes de igual volumen de colagenasa de Clostridium histolyticum dentro del área objetivo de PEFE. Después de la detección y determinación de la elegibilidad del estudio, los sujetos se asignarán secuencialmente a las cohortes 1, 2, 3, y 4 (Tabla 3). Los primeros nueve sujetos serán asignados a la cohorte 1 (volumen total/área objetivo de PEFE de 1 i). Dentro de cada una de las siguientes cohortes 2 a 4, los primeros nueve pacientes en cada cohorte se asignarán al volumen total /superficie objetivo de PEFE de la seguridad de los sujetos en la cohorte 1 haya sido evaluada por el comité de control de seguridad (SMC por sus siglas en inglés). La dosificación en la cohorte 4 no comenzará hasta que la seguridad de los sujetos en las cohortes 2 y 3 haya sido evaluada por el SMC.

Las dosis propuestas para tratar un área de 8 cm x 10 cm de PEFE representan entre el 0.5 % (0.0029 mg) y el 20 % (0.116 mg) de la dosis utilizada en una sola inyección de la contractura de Dupuytren en una concentración que está entre 0.1 % (0.0029 mg/ml) y 5 % (0.116 mg/ml) de la concentración utilizada en el producto aprobado para la contractura de Dupuytren.

TABLA 3 : Asignación de Fármaco de Estudio por Cohorte Los componentes de la colagenasa de Clostridium histolyticum son: colagenasa AUX-I y AUX-II mixta, 10 mM de tris, 60 mM de sacarosa. Los componentes del diluyente A de colagenasa de Clostridium histolyticum estéril para reconstitución son: 0.03 % (2 mM) de cloruro de calcio (CaCl) en 0.9 (154 mM) de solución de cloruro de sodio (NaCl), pH 6.0-7.O, se suministra como un liquido esterilizado terminalmente en 3.0 mi por ampolleta. Los componentes del diluyente B de colagenasa de Clostridium histolyticum estéril tamponada para dilución adicional son: 0.03 % (2 mM) de cloruro de calcio y 0.12 % (10 mM) de trometamina (TRIS) en 0.9 % (154 mM) de cloruro de sodio, se suministra cloruro a pH 8.0 como un liquido esterilizado terminalmente en 3.0 mi por ampolleta. Después de la reconstitución con el diluyente de A y la posterior dilución con el diluyente B, la solución A4500 puede mantenerse a temperatura ambiente (20°a 25°C/68° a 77°F) durante hasta una hora o refrigerado entre 2o y 8°C (36° a 46°F) durante hasta 4 horas antes de la administración.

Una plantilla de inyección se hace de un material transparente delgado. Las plantillas de inyección de 8 cm x 10 cm serán pre-estampadas con los sitios de diagramas y de inyección que se muestran en la figura 1. Cada uno de los puntos negros dentro del octágono representa un sitio de inyección. La "X" en el circulo representa el sitio de inyección del hoyuelo central (es decir, la zona de depresión más profunda en el área objetivo (figura 1). Cada punto negro (incluyendo el sitio del hoyuelo central y las cuatro esquinas) será suprimido para que el investigador marque el área objetivo de PEFE, según sea necesario. Cada punto dentro del octágono que se muestra en la figura 1 representa un lugar de inyección. La X en el circulo representa el sitio de la inyección al "hoyuelo central". Las cuatro esquinas se etiquetan como superior derecha (SD), inferior derecha (ID), superior izquierda (SI), e inferior izquierda (II).

Durante la visita de selección, mientras el sujeto está de pie, el investigador o la persona cualificada examinarán el glúteo izquierdo y derecho y el muslo superior posterior izquierdo y derecho y seleccionará un cuadrante que tenga PEFE de moderada a severa (puntuación CSS de ³10). El investigador o la persona cualificada identificará un área de PEFE dentro del cuadrante seleccionado que sea de al menos 8 cm x 10 cm (denominados en este ejemplo como el área objetivo de PEFE) y sea adecuada para el tratamiento (por ejemplo, esté dentro del muslo posterior superior o dentro del glúteo y no implique el pliegue glúteo). El área objetivo de PEFE también debe ser evidente cuando el sujeto está de pie, sin el uso de ningún tipo de manipulación (tal como pellizcar la piel o contracción muscular).

Después, el investigador colocará la plantilla de inyección en el área objetivo de PEFE (mientras el sujeto permanece de pie) y colocará la "X" en el circulo en la plantilla sobre el centro de la depresión más profunda (por ejemplo, el hoyuelo central) en la zona objetivo. El investigador utilizará un rotulador quirúrgico y marcará la piel del sujeto en dos esquinas de la plantilla. El investigador retirará la plantilla y registrará cuáles dos esquinas de la plantilla fueron marcadas (por ejemplo, superior derecha, inferior derecha, superior izquierda, inferior izquierda). El investigador utilizará una cinta métrica para medir de la siguiente manera: 1. Identificar la linea media de la parte superior del muslo y el glúteo comenzando desde el centro de la fosa poplítea (figura 2). 2. Identificar la linea que es perpendicular a la linea media y se va a través de la primera marca de esquina de la plantilla (como se representa en la figura 2, [Linea BC]). Medir la distancia entre los puntos B y C (distancia récord). 3. Medir la distancia del punto A al punto B como se muestra en la figura 2 (distancia récord). 4. Repetir los pasos 2 y 3 para la medición de la segunda marca de esquina de la plantilla (figura 2, [puntos A, D y E]).

Cada medición registrada se usará después para reubicar el área de destino de PEFE de 8 cm x 10 cm antes de la inyección y antes de cada punto temporal de evaluación de eficacia .

En el Día 1, después de que el sitio de inyección ha sido identificado, marcado (como se describe anteriormente), fotografiado, y las evaluaciones de eficacia de pre-inyección se han completado, el sujeto quedará situado boca abajo en la mesa de exploración de manera que la totalidad del área objetivo de PEFE de 8 cm x 10 cm con los sitios de inyección previamente marcados sea visible y evaluable para el investigador. El sitio de inyección debe ser preparado con un antiséptico apropiado como alcohol.

El uso de una jeringa de 5 mi o 1 mi previamente preparada (dependiendo de la asignación de cohortes) con una aguja de calibre 30 de ~ 7 mm, el investigador administrará una dosis de 0.5 mi o 0.1 mi de colagenasa de Clostridium histolyticum en cada uno de los 10 sitios de inyección. En cada uno de los 10 sitios, el fármaco del estudio se inyecta perpendicular a la piel del sujeto a una profundidad de ~ 7 mm.

El investigador le administrará el fármaco del estudio en una secuencia que garantiza que cada uno de los 10 sitios reciba una sola inyección de 0.5 mi o 0.1 mi de colagenasa de Clostridium histolyticum . Después de la décima inyección, se ha administrado el volumen máximo permitido del fármaco del estudio (5 mi o 1 i). Cualquier inyectado en la superficie de un sitio de inyección después de la inyección (sugerente de extravasación) se observará y la ubicación de inyección asociada se registrará. No se llevará a cabo ningún masaje o palpación local posterior a la inyección del fármaco del estudio.

Los siguientes criterios primarios de valoración serán evaluados en el dia 90: • Evaluación del investigador a escala global de mejora estética de la zona PEFE objetivo; • Evaluación del sujeto a escala global de mejora estética de la zona PEFE objetivo; • Un análisis de respuesta en base a la proporción de sujetos con una mejoría del ³ 30 % del valor basal en la desviación estándar del contorno de la superficie de la zona objetivo de PEFE con base en la fotografía digital en 3-D.

Aunque esta invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencias a modalidades preferidas de la misma, los expertos en la téenica entenderán que diversos cambios en forma y detalles pueden hacerse a la misma sin apartarse del alcance de la invención abarcado por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (43)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar o reducir la paniculopatia edemato-fibroesclerótica (PEFE) en un paciente que comprende la administración de al menos una inyección subdérmica de colagenasa a un área afectada por la PEFE, en donde la dosis de colagenasa por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC.

2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque una pluralidad de inyecciones subdérmicas se administran en una pluralidad de sitios de inyección.

3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la concentración de colagenasa administrada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque cada inyección de colagenasa se administra en un volumen de alrededor de 0.5 mi o menos.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la dosis total de colagenasa administrada es de entre alrededor de 5 a alrededor de 2000 unidades ABC.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la dosis de colagenasa por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 100 unidades ABC.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la dosis de colagenasa por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 50 unidades ABC.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado porque la colagenasa se purifica de Clostridium histolyticum.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado porque la colagenasa es una colagenasa recombinante.

10. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque la colagenasa purificada de Clostridium histolyticum comprende colagenasa I y colagenasa II.

11. El método de la reivindicación 5, caracterizado porque la colagenasa I y la colagenasa II están presentes en una relación de masa de 1:1.

12. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la colagenasa está presente en una composición farmacéutica que consiste esencialmente de colagenasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la colagenasa está presente en una composición farmacéutica que consiste de colagenasa y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el método consiste esencialmente de la administración de una o una pluralidad de inyecciones de inyecciones subdérmicas de colagenasa.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el método consiste de la administración de una o una pluralidad de inyecciones de inyecciones subdérmicas de colagenasa.

16. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque al menos dos inyecciones de colagenasa se administran a dos sitios de inyección dentro del área afectada.

17. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque al menos cinco inyecciones de colagenasa se administran a cinco sitios de inyección dentro del área afectada.

18. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque al menos diez inyecciones de colagenasa se administran a diez sitios de inyección dentro del área afectada.

19. El método de cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, caracterizado porque el área afectada de PEFE tiene un área de aproximadamente 1 cm2 a aproximadamente 200 cm2.

20. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa se administran y en donde la distancia entre los sitios de inyección es de al menos alrededor de 1 a alrededor de 4 cm.

21. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque la distancia entre los sitios de inyección es de alrededor de 2 a alrededor de 3 cm.

22. El método de la reivindicación 19, caracterizado porque el área afectada por PEFE tiene una longitud de alrededor de 10 cm y un ancho de alrededor de 8 cm.

23. El método de la reivindicación 22, caracterizado porque hay una distancia de alrededor de 2.5 cm entre los sitios de inyección.

24. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque cada inyección tiene un volumen de alrededor de 0.5 mi.

25. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque cada inyección tiene un volumen de alrededor de 0.1 mi.

26. Un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa dentro de un área afectada por la PEFE, en donde la dosis total de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 5 y alrededor de 5000 unidades ABC, y en donde la pluralidad de inyecciones están cada una entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC, y en donde la pluralidad de inyecciones se administran en una pluralidad de sitios de inyección.

27. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa se administran en una pluralidad de sitios de inyección.

28. El método de cualquiera de las reivindicaciones 26 y 27, caracterizado porque la concentración de colagenasa administrada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC.

29. El método de cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, caracterizado porque cada inyección de colagenasa se administra en un volumen de alrededor de 0.5 mi o menos.

30. El método de cualquiera de las reivindicaciones 25 a 29, caracterizado porque la dosis de colagenasa por inyección está entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC.

31. El método de cualquiera de las reivindicaciones 25 a 30, caracterizado porque la dosis total de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 5 a alrededor de 2000 unidades ABC.

32. El método de la reivindicación 31, caracterizado porque la dosis total de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 5 a alrededor de 1000 unidades ABC.

33. El método de cualquiera de las reivindicaciones 26 a 32, caracterizado porque la colagenasa es purificada de Clostridium histolyticum.

34. El método de cualquiera de las reivindicaciones 26 a 32, caracterizado porque la colagenasa es una colagenasa recombinante.

35. El método de la reivindicación 33, caracterizado porque la colagenasa purificada de Clostridium histolyticum comprende colagenasa I y colagenasa II.

36. El método de la reivindicación 35, caracterizado porque la colagenasa I y la colagenasa II están presentes en una relación de masa de 1:1.

37. El método de cualquiera de las reivindicaciones 26 a 32, caracterizado porque al menos dos inyecciones de colagenasa se administran a dos sitios de inyección dentro del área afectada.

38. El método de la reivindicación 37, caracterizado porque al menos cinco inyecciones de colagenasa se administran a cinco sitios de inyección dentro del área afectada.

39. El método de la reivindicación 38, caracterizado porque al menos diez inyecciones de colagenasa se administran a diez sitios de inyección dentro del área afectada.

40. Un método para tratar o reducir la PEFE en un paciente que comprende la administración de una o una pluralidad de inyecciones subdérmicas de colagenasa a un área afectada por la PEFE, en donde la dosis de colagenasa administrada por inyección al área afectada está entre alrededor de 5 a alrededor de 200 unidades ABC, en donde la concentración de colagenasa administrada al área afectada está entre alrededor de 50 a alrededor de 2000 unidades ABC por mililitro, y en donde la pluralidad de inyecciones se administran en una pluralidad de sitios de inyección.

41. El método de la reivindicación 40, caracterizado porque la pluralidad de inyecciones se administran en una pluralidad de sitios de inyección.

42. El método de cualquiera de las reivindicaciones 40 y 41, caracterizado porque el volumen de cada inyección de colagenasa administrada es de alrededor de 0.5 mi o menos.

43. El método de cualquiera de las reivindicaciones 40 a 42, caracterizado porque cada inyección tiene un volumen de alrededor de 0.2 mi o menos.