MX2012002371A - Galectina-3 y terapia de resincronizacion cardiaca. - Google Patents

Abstract

La presente Invención se refiere a materiales y métodos para monltorear y predecir una respuesta fisiológica de pacientes con Insuficiencia cardiaca a la terapia de resincronización cardiaca; de manera más específica, la presente Invención se refiere a la proteína endógena galectlna-3 y su uso en monltorear la progresión de enfermedad en un paciente que sufre terapia de resincronización cardiaca, y como un predictor de respuesta a terapia de resincronlzaclón cardiaca.

Description

GALECTINA-3 Y TERAPIA DE RESINCRONIZACIÓN CARDIACA REFERENCIA A SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional de E.U.A. No. 61/236,712, presentada el 25 de agosto 2009, cuyo contenido completo se incorpora aquí por referencia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La insuficiencia cardiaca congestiva, o insuficiencia cardiaca, es una causa principal de morbidez y mortalidad. Aproximadamente 5 millones de personas en los Estados Unidos padecen de insuficiencia cardiaca, con aproximadamente 500,000 nuevos casos diagnosticados cada año. En muchos casos, los pacientes con insuficiencia cardiaca congestiva también padecen arritmia reduciendo así la eficiencia del corazón.

Una opción de tratamiento de dichos pacientes implica la implantación de un dispositivo de terapia de resincronización cardiaca (CRT), también conocido como un dispositivo de paso biventricuiar. En un ritmo cardiaco normal, las dos cámaras auriculares del corazón se contraen al unísono, bombeando sangre a las dos cámaras ventriculares. Menos de un segundo después, las dos cámaras ventriculares se contraen al unísono, bombeando la sangre fuera del corazón y a todo el cuerpo. Algunos pacientes con insuficiencia cardiaca tienen un retraso eléctrico entre los ventrículos, de tal manera que las dos cámaras ventriculares ya no se contraen al mismo tiempo. El resultado es una reducción sustancial en gasto cardiaco. Por ejemplo, en ritmo cardiaco normal más de la mitad de la sangre en el ventrículo izquierdo es bombeada hacia afuera con cada latido del corazón. En otras palabras, la "fracción de expulsión ventricular izquierda" o "LVEF" es mayor que 50%. Por el contrario, algunos pacientes con insuficiencia cardiaca, cuyos ritmos cardiacos no están coordinados tienen una LVEF menor de un tercio. En estos pacientes, dos tercios de la sangre permanece "no bombeada" con cada ritmo cardiaco.

La meta de la Terapia de CRT es restaurar el bombeo coordinado de los ventrículos. Esto se logra mediante un dispositivo con terminales eléctricas separadas que estimulan los dos ventrículos para contraerse simultáneamente con cada latido del corazón. Los dispositivos de CRT tienen calidad de vida mejorada y tienen mortalidad disminuida en algunos pacientes con insuficiencia cardíaca moderada o severa; una LVEF menor que o igual a 35%; y un ecocardiograma que indica una despolarización lenta de los ventrículos (un complejo de "QRS" mayor que 120 ms). Sin embargo, aproximadamente 30% de los pacientes con insuficiencia cardiaca que reciben CRT no responden al tratamiento (véase, por ejemplo, Jeevanantham et al. (2009) Cardiol. J. 16(3) 197-209). Como lo advirtió un autor en 2007, "mejores criterios para la identificación del candidato a CRT óptimo son urgentemente garantizados" (Stellbrink (2007) Eur Heart J. 28:1541-1542). Además, aún entre los pacientes con insuficiencia cardiaca que reciben intervención de CRT, la tasa de eventos adversos tales como hospitalizaciones no planeadas para insuficiencia cardiaca y muerte es alta (véase, por ejemplo, Cleland et al. (2005) "The effect of cardiac resynchronization on morbidity and mortality in heart failure" N. Enql. J. Med. 352(15): 1539-49.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Ahora se ha descubierto que las concentraciones de la proteína galectina-3 humana en fluidos corporales se pueden usar para predecir o monitorear progresión de la enfermedad o eficacia terapéutica en pacientes tratados con terapia de resincronización cardiaca. Una concentración en la sangre de galectina-3 del paciente puede ser monitoreada después de que un dispositivo de CRT es implantado para proveer una indicación en curso de desarrollo o progresión de enfermedad y/o de la propiedad continua del curso del tratamiento. Por ejemplo, la invención permite mediciones de cambios con el tiempo en la concentración de galectina-3 en un fluido corporal (v.gr., sangre, suero o plasma) de un paciente con insuficiencia cardiaca y comparar el cambio medido en la concentración de galectina-3 a cambios en la concentración de galectina-3 observados en otros pacientes para quienes la terapia de resincronización cardiaca fue o no benéfica.

Los métodos de monitoreo pueden incluir comparar una concentración de galectina-3 en un paciente con una concentración de galectina-3 anterior en el mismo paciente antes o después de la implantación de un dispositivo de CRT. Los métodos también pueden incluir comparar niveles de galectina-3 medidos en varios tiempos después de la implantación del dispositivo de CRT para desarrollar una historia de concentraciones de galectina-3. Por ejemplo, la invención provee métodos para evaluar a un paciente mediante la detección de la presencia o ausencia de una concentración de galectina-3 cada vez mayor o cada vez menor en un fluido corporal (v.gr., sangre, suero o plasma) del paciente con insuficiencia cardiaca en quien un dispositivo de CRT ha sido implantado. La presencia de una concentración de galectina-3 cada vez mayor con el tiempo es indicativa de una insuficiencia cardiaca congestiva peor en el paciente.

En una modalidad, la invención provee métodos para predecir el pronóstico o el resultado para un humano tratado con terapia de resincronización cardiaca. La concentración de galectina-3 en un fluido corporal, v.gr., la sangre, se puede determinar para la presencia o ausencia de una concentración de galectina-3 indicativa de pronóstico después de terapia de resincronización cardiaca. Por ejemplo, una concentración en la sangre de galectina-3 en un humano se puede medir y comparar con un umbral mínimo. Una concentración en la sangre de galectina-3 por arriba del umbral mínimo puede ser indicativa de un mayor riesgo incrementado de muerte u hospitalización del humano.

Los resultados de la evaluación se pueden usar para informar decisiones que implican el tratamiento del paciente. Por ejemplo, si el paciente con insuficiencia cardiaca parece no responder terapéuticamente a terapia de resincronización cardiaca, con base en la concentración de galectina-3 del paciente o un cambio en la concentración de galectina-3 del paciente, otras formas de tratamiento pueden ser preferidas, tales como angioplastia u otra cirugía y/o administración de un diurético, un inotropo, un beta bloqueador, un péptido natriurético, una estatina o un vasodilatador.

También se ha descubierto que concentraciones de la proteína galectina-3 humana en fluidos corporales pueden ser informativas en la determinación de si un paciente en cuestión puede beneficiarse de una terapia de resincronización cardiaca. De esta manera, los dispositivos de CRT, con o sin una función de desfibrilador, pueden ser implantados en aquellos pacientes con insuficiencia cardiaca que son más probable de beneficiarse del tratamiento. Por lo tanto, se contempla que pacientes que han experimentado insuficiencia cardiaca o que han sido identificados como en riesgo para: insuficiencia cardiaca sean probados para medir sus niveles de galectina-3; circulantes. Los niveles de galectina-3 medidos permitirán la identificación de dos grupos de pacientes: aquellos que pueden beneficiarse de terapia de resincronización cardiaca, con base su concentración de galectina-3; y aquellos que son poco probables (o con menos probabilidad) de beneficiarse. Los dispositivos de CRT serían implantados en aquellos del primer grupo, en donde otros cursos de terapia se seleccionarían para aquellos en el segundo grupo.

La presente invención por lo tanto provee métodos para seleccionar una terapia para un humano, quien puede padecer o estar en riesgo de insuficiencia cardiaca. Los métodos incluyen medir una concentración de galectina-3 en una muestra, tal como una muestra de sangre, una muestra de suero o una muestra de plasma. La concentración de galectina-3 medida es indicativa de si es probable que el paciente responda favorablemente a terapia de resincronización cardiaca. Las respuestas favorables incluyen, por ejemplo, una probabilidad incrementada de supervivencia durante un período, o una progresión o desarrollo reducido de insuficiencia cardiaca, fuerza cardiaca mejorada, LVEF incrementada, menos hospitalizaciones no planeadas para empeoramiento de insuficiencia cardiaca, incremento en el consumo de oxígeno durante el ejercicio, disminución de fatiga, acortamiento de respiración reducida o apnea de sueño reducida.

En una modalidad, el método incluye medir una concentración de galectina-3 en un fluido corporal (v.gr., sangre, suero o plasma) de un paciente con insuficiencia cardiaca que es un candidato para terapia de resincronización cardiaca, antes de dicho tratamiento, y comparar la concentración de galectina-3 con una concentración de galectina-3 observada en otros pacientes tratados con dispositivos de CRT, con o sin funciones de desfibrilador, para quienes la terapia de resincronización cardiaca ha probado ser benéfica.

De manera similar, la invención provee un método para evaluar un candidato (v.gr., un paciente con insuficiencia cardiaca) para terapia de resincronización cardiaca. El método incluye medir una concentración de galect¡na-3 en un fluido corporal de un paciente que es un candidato para terapia de resincronización cardiaca y comparar la concentración de galectina-3 medida con una concentración de galectina-3 de referencia. La concentración de galectina-3 de referencia se puede derivar de concentraciones observadas de galectina-3 en otros pacientes, y puede ser indicativa de respuesta o no respuesta a implantación de un dispositivo de CRT. La terapia de resincronización cardiaca puede ser restringida o rechazada si la concentración de galectina-3 medida es diferente a una concentración de galectina-3 de referencia.

La invención también provee métodos para tratar a un humano, que puede estar sufriendo de o en riesgo de insuficiencia cardiaca; los métodos incluyen implantar un dispositivo de CRT, con o sin funciones de marcapaso o desfibrilador, en un paciente que tiene una concentración en la sangre de galectina-3 determinada que es indicativa de una respuesta favorable a terapia de resincronización cardiaca. A diferencia de los métodos de selección de una terapia, que implican el proceso de medir una concentración en la sangre de galectina-3, los métodos de tratamiento se relacionan con la implantación subsecuente del dispositivo de CRT. Por lo tanto, los métodos de tratamiento implican la implantación de un dispositivo de CRT en un paciente cuya concentración en la sangre de galectina-3 ha sido determinada como indicativa de una respuesta favorable, independientemente de cómo, o por quién, se hizo previamente la determinación de galectina-3.

En un paciente seleccionado o tratado, la concentración en la sangre de galectina-3 se puede determinar para estar por arriba de un umbral mínimo, por abajo de un umbral máximo o dentro de un intervalo objetivo definido por un umbral mínimo y uno máximo. El umbral mínimo puede ser, por ejemplo, más de 10 ng/ml; entre 10 y 15 ng/ml; entre 15 y 20 ng/ml; entre 20 y 25 ng/ml; entre 25 y 30 ng/ml, o ser más de 30 ng/ml. El umbral máximo puede ser, por ejemplo, por abajo de 70 ng/ml; por abajo de 60 ng/ml; por abajo de 40 ng/ml; entre 30 y 40 ng/ml; entre 25 y 30 ng/ml; entre 20 y 25 ng/ml , o entre 15 y 20 ng/ml.

Los resultados de la evaluación se pueden usar para informar decisiones que implican tratamiento del paciente. Por ejemplo, si una concentración de galectina-3 de un paciente con insuficiencia cardiaca es diferente de la de otros pacientes con insuficiencia cardiaca para quienes la terapia de resincronización cardiaca ha probado ser benéfica, la implantación de un dispositivo de CRT puede no ser indicado, y se puede ofrecer al paciente un medicamento u opción terapéutica diferente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los solicitantes han inventado un método para predecir y/o monitorear una respuesta fisiológica del paciente con insuficiencia cardiaca a terapia de resincronización cardiaca. En los últimos estudios clínicos, entre una cuarta parte y una mitad de los receptores de dispositivos de CRT se clasificaron como "no respondedores" porque no mostraron beneficio significativo del dispositivo (Hawkins et al. (2006) Eur Heart J. 27:1270-1281). Un estudio reportó insuficiencia cardiaca empeorada en 40% de receptores de dispositivo de CRT después de la implantación, aunque un grupo de control estuvo aún peor (Cleland et al. (2005) New Enql J. Med. 352:1539-1549). Los solicitantes han descubierto que la medición de los niveles de galectina-3 circulantes en un paciente se puede usar para identificar a aquellos pacientes que son mejores candidatos para terapia de resincronización cardiaca. De esta manera, la terapia puede ser dirigida preferencialmente a aquellos que es más probable que se beneficien del mismo, aunque otros pacientes pueden ahorrar el riesgo y gasto y dirigirse a diferentes cursos de terapia. Además, los solicitantes han descubierto que la medición de galectina-3 con y/o después de que un dispositivo de CRT es implantado provee una indicación en curso de desarrollo o progresión de enfermedad y/o de la propiedad continua del curso de tratamiento.

Los términos "insuficiencia cardiaca ", "HF", "insuficiencia cardiaca congestiva" o "CHF", como se usa aquí, se refieren al síndrome ; clínico complejo que altera la capacidad del ventrículo para llenarse con o expulsar sangre. Cualquier trastorno cardiaco estructural o funcional puede causar HF, con la mayoría de los pacientes HF teniendo funciones de miocardio ventricular izquierda (LV) alterada. Los síntomas de HF incluyen disnea (acortamiento de la respiración), fatiga y retención de fluidos. La Asociación Cardiaca Norteamericana (AHA) ha identificado 4 etapas de la progresión o desarrollo de HF. Los pacientes en las etapas A y B muestran factores de riesgo claros, pero aún no han desarrollado HF. Los pacientes en las etapas y D actualmente presentan o en el pasado han presentado síntomas de HF. Por ejemplo, los pacientes de la etapa A son aquellos con factores de riesgo tales como enfermedad de arterias coronaria, hipertensión o diabetes mellitus quienes no muestran función ventricular izquierda (LV) alterada. Los pacientes de etapa B son asintomáticos, pero tienen anormalidades estructurales cardiacas o remodelación, tal como función de LV alterada, hipertrofia o distorsión de cámara geométrica. Los pacientes de etapa C tienen anormalidades cardiacas y son sintomáticos. Los pacientes de etapa D tienen HF refractaria en los cuales presentan síntomas a pesar del tratamiento médico máximo. Estos son por lo general hospitalizados recurrentemente o incapaces de dejar el hospital sin intervención especializada.

Galectina-3 es un miembro estructuralmente único de una familia de lectinas de unión a ß-galactósido multifuncionales (Gabius (2006) Crit. Rev. Immunol. 26:43-79). La expresión de galectina-3 se ha asociado con el epitelio y células inflamatorias incluyendo macrófagos, neutrófilos y células cebadas. Galectina-3 ha sido implicado en una variedad de procesos biológicos importantes en insuficiencia cardiaca, incluyendo proliferación de miofibroblastos, fibrogénesis, reparación de tejido, remodelación cardiaca e inflamación (Liu et al. (2009) Am. J. Phvsiol. Heart Cira Phvsiol. 296(2):H404-12; Papaspyridonos et al. (2008) Arterioscler. Thromb. Vasa Biol. 28(3):433- 40; Henderson et al. (2006) Proa Nati. Acad. Sci. USA 103:5060-5065; Sharma et al. (2004) Circulation 1 10:3121 -3128; Sano et al. (2000) Immunol. 165(4):2156-64; Kuwabara et al. (1996) J. Immunol. 156(10):3939-44).

Los solicitantes han desarrollado métodos que permiten el uso de niveles de proteína galectina-3 circulantes para predecir la eficacia de terapia de resincronización cardiaca en pacientes con insuficiencia cardiaca. El conocimiento del nivel de galectina-3 de un paciente es informativo de un resultado del paciente al que se ha implantado un dispositivo de CRT. Además, el nivel de marcadores circulantes tales como niveles de galectina-3 después de la implantación son informativos de resultado del paciente, y los cambios en los niveles de galectina-3 pueden indicar un pronóstico cambiante. Aunque concentraciones más altas de galectina-3 se correlacionan con un pronóstico deficiente, tal como muerte y hospitalización, los pacientes con niveles de galectina-3 relativamente altos quienes reciben dispositivos de CRT pueden beneficiarse significativamente, como se mide por el gasto cardiaco, calidad de vida (como se mide, por ejemplo, por el cuestionario Minnesota Living With Heart Failure® Questionnaire, University of Minnesota), progresión o desarrollo reducidos de insuficiencia cardiaca, disminución de fatiga, reducción del acortamiento de la respiración o probabilidad de supervivencia incrementada.

Detección de la qalectina-3 La presente invención provee métodos para predecir y/o monitorear la respuesta fisiológica de un paciente con insuficiencia cardiaca a terapia de resincronización cardiaca al medir los niveles de marcadores tales como galectina-3, opcionalmente en combinación con uno o más de otros marcadores (v.gr., BNP, NT-proBNP). Muchos métodos para detectar una proteína de interés, con o sin cuantificación, son bien conocidos y se pueden usar en la práctica de la presente invención. Ejemplos de dichas pruebas se describen más adelante y pueden incluir, por ejemplo, inmunoensayos, métodos cromatográficos y espectroscopia de masa. Dichos ensayos se pueden realizar sobre cualquier muestra biológica incluyendo, entre otras, sangre, plasma y suero. Por consiguiente, ensayos múltiples se pueden usar para detectar galectina-3, y muestras se pueden analizar de una o más fuentes.

Los marcadores pueden ser detectados o cuantificados en una muestra con la ayuda de uno o más métodos de separación. Por ejemplo, los métodos de separación adecuados puede incluir un método de espectrometría de masa, tal como espectrometría de masa-ionización por electroaspersión (ESI-MS), ESI-MS/MS, ESI-MS/(MS)n (n es un entero mayor que cero), espectrometría de masa de tiempo de vuelo-tiempo de ionización de desorción con láser asistida por matriz (MALDI-TOF-MS), espectrometría de masa de tiempo de vuelo de ionización/desorción por láser incrementada en la superficies (SELDI-TOF-MS), desorción/ionización sobre silicio (DIOS), espectrometría de masa de iones secundarios (SIMS), tiempo de vuelo de cuadripolo (Q-TOF), espectrometría de masa de ionización química por presión atmosférica (APCI-MS), APCI-MS/MS, APCI-(MS)n, o espectrometría de masa de fotoionización por presión atmosférica (APPI-MS), APPI-MS/MS y APPI-(MS)n. Otros métodos de espectrometría de masas pueden incluir, entre otros, cuadripolo, espectrometría de masa transformada de Fourier (FTMS) y trampa de iones. Las técnicas espectrométricas que también se pueden usar incluyen espectroscopia de resonancia y espectroscopia óptica.

Otros métodos de separación adecuados incluyen la partición por extracción química, cromatografía en columna, cromatografía de intercambio de iones, cromatografía de líquidos hidrofóbíca (de fase inversa), enfoque isoeléctrico, electroforesis en gel de poliacrilamida unidimensional (PAGE), electroforesis en gel de poliacrilamida bidimensional (2D-PAGE ), u otras técnicas cromatográficas tales como, cromatografía de capa delgada, de gases o de líquidos, o cualquier combinación de las mismas. En una! modalidad, la muestra biológica que ha de ser probada puede ser fraccionada antes de la aplicación del método de separación.

Los marcadores pueden ser detectados o cuantificados por: métodos que no requieren separación física de los marcadores mismos. Por; ejemplo, se puede usar espectroscopia de resonancia magnética nuclear! (RMN) para resolver un perfil de un marcador de una mezcla compleja de; moléculas. Un uso análogo de RMN para clasificar tumores se describe, por ejemplo, en Hagberg (1998) NMR Biomed. 11 :148-56.

Un marcador en una muestra también puede ser detectado o cuantificado, por ejemplo, al combinar el marcador con una porción de unión capaz de unirse específicamente al marcador. La porción de unión puede incluir, por ejemplo, un miembro de un par de ligando-receptor, es decir, un par de moléculas capaces de tener una interacción de unión específica. La porción de unión también pueden incluir, por ejemplo, un miembro de un par de unión específica, tal como, anticuerpo-antígeno, enzima-sustrato, ácido nucleico-ácido nucleico, proteína-ácido nucleico, proteína-proteína u otros pares de unión específicos conocidos en la técnica. Se pueden diseñar proteínas de unión que tengan afinidad incrementada para un objetivo. Opcionalmente, la porción de unión puede ser enlazada con un marcador detectable, tal como un marcador enzimático, fluorescente, radioactivo, fosforescente o de partícula coloreada. El complejo marcado puede ser detectado, v.gr., visualmente o con la ayuda de un espectrofotómetro u otro detector, o puede ser cuantificado.

Los niveles de galectina-3 pueden ser cuantificados al realizar un inmunoensayo. Un inmunoensayo de galectina-3 implica poner en contacto una muestra con un sujeto que ha de ser probado con un anticuerpo apropiado bajo condiciones tales que pueda ocurrir unión inmunoespecífica si está presente galectina-3, y detectar o medir la cantidad de cualquier unión inmunoespecífica por el anticuerpo. Se puede usar cualquier inmunoensayo adecuado, incluyendo, sin limitación, sistemas de ensayo competitivos y no competitivos usando técnicas tales como Western blots, radioinmunoensayos, ELISA (ensayo inmunoabsorbente enlazado a enzima), inmunoensayos "intercalados", ensayos de inmunoprecipitación, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación, ensayos de fijación de complemento, ensayos, inmunoradiométricos, inmunoensayos fluorescentes e inmunoensayos de proteína A.

En un ensayo "intercalado", se usan dos moléculas ("moléculas de unión") tales como anticuerpos monoclonales que se unen específicamente a sitios no traslapables (epítopes) sobre galectina-3. Típicamente, una porción de unión es inmovilizada sobre una superficie sólida en donde se une con y captura galectina-3. Esta primera porción de unión por lo tanto se refiere como la porción de unión de captura. Una segunda porción de unión es detectablemente marcada, por ejemplo, con un fluoróforo, enzima o partícula coloreada, de tal manera que la unión de la segunda porción de unión al : complejo galectina-3 indica que galectina-3 ha sido capturado. La intensidad de la señal es proporcional a la concentración de galectina-3 en la muestra. La segunda porción de unión por lo tanto se refiere como la porción de unión de detección o la porción de unión de mareaje. Una porción de unión puede ser cualquier tipo de molécula, siempre que se una específicamente a una porción del N-terminal de galectina-3. En una modalidad preferida, las porciones de unión usadas son anticuerpos anti-galectina-3 monoclonales, es decir, monoclonales producidos contra o de otra manera seleccionados para unirse . a porciones separadas de galectina-3.

Dichos procedimientos de ensayo pueden referirse como métodos de ensayo inmunométricos de dos sitios, método "intercalados" (o cuando los anticuerpos son los aglutinantes) "inmunoensayos intercalados". Como se conoce en la técnica, los anticuerpos de captura y detección pueden ser puestos en contacto con la muestra de prueba simultáneamente o secuencialmente. Los métodos secuenciales se pueden lograr incubando el anticuerpo de captura con la muestra, y añadiendo el anticuerpo de detección marcado en un tiempo predeterminado posteriormente (algunas veces referido como el método "directo"). Alternativamente, el anticuerpo de detección marcado puede ser incubado con la muestra primero y después la muestra puede ser expuesta al anticuerpo de captura (algunas veces referido como el método de "reversa"). Después de que cualquier incubación(es) necesaria, que pueda ser de corta duración, complete el ensayo, el marcador se mide. Dichos ensayos pueden ser implementados en muchos formatos específicos conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo a través del uso de varios analizadores de laboratorio clínico de alto rendimiento o con un punto de: cuidado o dispositivo de prueba doméstico.

En una modalidad, un dispositivo de flujo lateral se puede usar en el formato intercalado en donde la presencia de galectina-3 por arriba de un nivel de sensibilidad de línea basal en una muestra biológica permitirá la formación de una interacción de intercalado corriente arriba de o en la zona de captura en el ensayo de flujo lateral. Véase, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 6,485,982. La zona de captura puede contener porciones de unión de captura tales como moléculas de anticuerpo, adecuadas para capturar galectina-3 o avidina inmovilizada o similares para capturar un complejo biotinilado. Véase, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 6,319,676. El dispositivo también puede incorporar un marcador luminiscente adecuado para capturar en la zona de captura, la concentración de galectina-3 siendo proporcional a la intensidad de la señal en el sitio de captura. Marcadores , adecuados incluyen marcadores fluorescentes inmovilizados sobre microesferas de poliestireno. También se puede usar partículas coloreadas.

Otros formatos de ensayo que se pueden usar en los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, dispositivos de flujo pasante. Véase, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 4,632,901. En un ensayo de flujo pasante, una porción de unión (por ejemplo, un anticuerpo) es inmovilizada a un área definida sobre una superficie de membrana. Esta membrana es después sobrepuesta sobre una capa absorbente que actúa como un depósito para bombear el volumen de muestra a través del dispositivo. Después de la inmovilización, los sitios de unión de proteína restantes sobre la membrana son bloqueados para reducir al mínimo las interacciones no específicas. Durante la operación, una muestra biológica se añade a la membrana y se filtra a través de la matriz, permitiendo que cualquier analito específico para el anticuerpo en la muestra se una al anticuerpo inmovilizado. En un segundo paso, un anticuerpo secundario marcado se puede añadir o liberar el cual reaccione con marcador capturado o complete el intercalado. Alternativamente, el anticuerpo secundario se puede mezclar con la muestra y añadir en un solo paso. Si está presente galectina-3, se desarrolla un punto coloreado sobre la superficie de la membrana.

El inmunoensayo de enzima más común es el "ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA)". ELISA es una técnica para detectar y medir la concentración de un antígeno usando una forma marcada (v.gr., ligada a enzimas) del anticuerpo. Hay diferentes formas de ELISA, que son bien conocidas por los expertos en la técnica. Las técnicas de ELISA estándares se describen en "Methods in Immunodiagnosis", 2a Edición, Rose y Bigazzi, eds. John Wiley & Sons, 980; Campbell et al., "Methods and Immunology", W. A. Benjamín, Inc., 1964; y Oellerich, M. (1984), J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 22:895-904. Un kit de ensayo inmunoabsorbente ligado! a enzima preferido (ELISA) para detectar galectína-3 está comercialmente disponibles (BG Medicine, Waltham, MA).

En una "ELISA intercalada", un anticuerpo (v.gr., anti-galectina-3) es ligado a una fase sólida (es decir, una placa de microtitulación) y expuesto a una muestra biológica que contiene un antígeno (v.gr., galectina-3). La fase! sólida después se lava para remover antígeno no ligado. Un anticuerpo marcado (v.gr., ligado a enzima) es después ligado al antígeno de unión (si está presente) formando un intercalado de anticuerpo-antígeno-anticuerpo. j Ejemplos de enzimas que pueden ser ligadas al anticuerpo son fosfatasa : alcalina, peroxidasa de rábano picante, luciferasa, ureasa, y ß-galactosidasa. j El anticuerpo ligado a enzima reacciona con un sustrato para generar un producto de reacción coloreado que puede ser medido. Cualquiera de los inmunoensayos descritos aquí adecuados para usarse con los kits y métodos de la presente invención también puede usar cualquier porción de unión en lugar de un anticuerpo.

Una revisión detallada de un diseño de ensayo inmunológico, teoría y protocolos se pueden encontrar en numerosos textos en la técnica, incluyendo Butt, W.R., Practical Immunoloqy, ed. Marcel Dekker, New York (1984) y Harlow et al. Antibodies, A Laboratory Approach, ed. Cold Spring Harbor Laboratory (1988).

En general, las consideraciones de diseño de inmunoensayo incluyen la preparación de anticuerpos (v.gr., anticuerpos monoclonales o policlonales) que tienen especificidad de unión suficientemente alta para que el objetivo forme un complejo que pueda ser distinguido fácilmente de productos de interacción no específica. Como se usa aquí, por el término "anticuerpo" se entiende proteínas de unión, por ejemplo, anticuerpos u otras: proteínas que comprenden un dominio de unión similar a la región variable de! inmunoglobulina, que tiene afinidades y especificidades de unión apropiadas! para el objetivo. Mientras más alta es la especificidad de unión del anticuerpo, más baja es la concentración de objetivo que puede ser detectada. Como se : usan aquí, por los términos "unión específica" o "uniéndose específicamente" se entiende que la porción de unión, por ejemplo, una proteína de unión, tiene una afinidad de unión para el objetivo mayor que aproximadamente 105 M" , ; muy preferiblemente mayor que aproximadamente 107 M~1.

Los anticuerpos para un marcador objetivo aislado que son útiles en ensayos para detectar insuficiencia cardiaca en un individuo pueden ser generados usando procedimientos inmunológicos estándares bien conocidos y descritos en la técnica. Véase, por ejemplo Practical Immunoioqy, supra. En resumen, un marcador aislado se usa para producir anticuerpos en un hospedero xenogeneico, tal como un ratón, cabra u otro mamífero adecuado. El marcador se combina con un adyuvante adecuado capaz de incrementar la producción de anticuerpo en el hospedero, y se inyecta en el hospedero, por ejemplo, mediante administración intraperitoneal. Se puede usar cualquier adyuvante adecuado para estimular la respuesta inmunológica del hospedero. Un adyuvante comúnmente usado es el adyuvante completo de Freund (una emulsión que comprende células microbianas muertas y secas y disponible de, por ejemplo, Calbiochem Corp., San Diego, o Gibco, Grand Island, NY). En donde se desean múltiples inyecciones de antígeno, las inyecciones subsecuentes pueden comprender el antígeno en combinación con un adyuvante incompleto (v.gr., emulsión libre de células). Los anticuerpos policlonales pueden ser aislados del hospedero productor de anticuerpo al ¡ extraer suero que contiene anticuerpos a la proteína de interés. Los anticuerpos monocionales pueden ser producidos al aislar células hospederas que producen el anticuerpo deseado, fusionar estas células con células de mieloma usando procedimientos estándares conocidos en la técnica de inmunología y determinar selectivamente células híbridas (hibridomas) que reaccionan específicamente con el objetivo y tienen la afinidad de unión deseada.

Los epítopes ilustrativos del N-terminal de galectina-3 incluyen, pero no se limitan a, MADNFSLHDALS (SEQ ID NO: 1); MADNFSLHDALSGS (SEQ ID NO: 2); WGNQPAGAGG (SEQ ID NO: 3); YPGAPGAYPGAPAPGV (SEQ ID NO: 4); GNPNPQGWPGA (SEQ ID NO: 5); YPSSGQPSATGA (SEQ ID NO: 6); YPGQAPPGAYPGQAPPGA (SEQ ID NO: 7); YPGAPAPGVYPGPPSGPGA (SEQ ID NO: 8), y YPSSGQPSATGA (SEQ ID NO: 9). Otros epítopes de galectina-3, incluyendo epitopes no lineales, también se pueden usar como objetivos para la detección por un anticuerpo anti-galectina-3. Anticuerpos ilustrativos se describen en el documento U.S. 2010/014954, cuyo contenido es incorporado aquí por referencia en su; totalidad.

Los dominios de unión a anticuerpo también pueden ser producidos biosintéticamente y la secuencia de aminoácidos del dominio de unión puede ser manipulado para incrementar afinidad de unión con un epítopo preferido sobre el objetivo. Las metodologías de anticuerpo' específicas son bien entendidas y descritas en la literatura. Una descripción ' más detallada de la preparación se puede encontrar, por ejemplo, en Practical Immunoloqy, supra.

Además, sitios de unión a anticuerpo biosintéticos genéticamente : manipulados, también conocidos en la técnica como BABS o sFv's, se pueden 1 usar para determinar si una muestra contiene un marcador. Los métodos para ! hacer y usar BABS que comprende (i) dímeros de VH y VL sintéticos no covalentemente asociados o unidos a disulfuro, (¡i) sitios de unión a cadena sencilla de VH-VL covalentemente enlazados, (iii) dominios de VH o VL individuales o (iv) sitios de unión a anticuerpo de cadena sencilla se describen, por ejemplo, en las patentes de E.U.A. Nos.: 5,091 ,513; 5, 132,405; 4,704,692; y 4,946,778. Además, BABS que tienen especificidad requerida para el marcador pueden ser derivados por clonación de anticuerpo de fagos de genotecas de genes combinatorios (véase, por ejemplo, Clackson et al. Nature 352: 624-628 (1991)). En resumen, los fagos, que expresan sobre sus superficies de cubierta BABS que tienen regiones variables de inmunoglobulinas codificadas por secuencias de gen de región variable derivadas de ratones pre-inmunizados con un marcador aislado, o un fragmento del mismo, son determinados selectivamente para actividad de unión contra el marcador inmovilizado. Los fagos que se unen ál marcador inmovilizado son cosechados y el gen que codifica el BABS es secuenciado. Las secuencias de ácido nucleico resultantes que codifican los BABS de interés entonces pueden ser expresados en sistemas de expresión convencionales para producir la proteína BABS.

El análisis de multimarcador se puede usar para mejorar la exactitud de diagnóstico y monitoreo. Por ejemplo, concentraciones en la sangre de galectina-3 (Gal-3) y péptido natriurético cerebral (BNP) se pueden usar para diagnosticar insuficiencia cardiaca y para predecir el resultado a largo plazo de insuficiencia cardiaca (van Kimmenade et al., J. Am. Coll. Cardiol.. 48:1217-24 (2006), Sharma et al., Circulation. 1 10:3121-28 (2004); Lok ef al., Eur Heart J., 28:141 , Abstract 1035 (2007)). BNP y su equivalente de digestión proBNP amino-terminal (NT-proBNP) son elevados en músculo cardiaco y en la sangre durante insuficiencia cardiaca como resultado de altas presiones de llenado de cámaras cardiacas y la extensión de fibras de músculo cardiaco. Otros marcadores secundarios que se podrían usar para diagnosticar insuficiencia cardiaca pueden incluir marcadores cardiacos no polipeptídicos tales como esfingolípidos, esfingosina y esfingosina-1 -fosfato, dihidroesfingosína y esfingosilfosforilcolina (véase patente de E.U.A. No. 6,534,322). Cuando se miden los niveles de los marcadores anteriores, correcciones para edad y género pueden ser incorporadas para mejorar la exactitud del diagnóstico.

Métodos de tratamiento Los pacientes cuyos niveles de galectina-3 los identifican como candidatos para terapia de resincronización cardiaca pueden ser tratados por implantación de un dispositivo de CRT.

Los marcapasos tradicionales incluyen una o dos terminales eléctricas colocadas en la aurícula derecha, el ventrículo derecho o ambos, para regular sus contracciones. Los dispositivos de CRT incluyen por lo* menos dos terminales: una en el ventrículo derecho, y una en el seno coronario contra la pared del ventrículo izquierdo, para inducir contracciones simultáneas de los ventrículos izquierdo y derecho. Con frecuencia, una tercera terminal de detección es colocada en la aurícula derecha para proveer datos para regular el tiempo de las contracciones ventriculares. Dichos dispositivos de CRT no sólo promueven la contracción coordinada de los ventrículos izquierdo y derecho, sino también aseguran su control de tiempo con respecto a la contracción de las aurículas. Las terminales son conectadas a un generador de pulso impulsado por batería implantado en el pecho, por abajo de la piel. Después de que las contracciones auriculares llenan los ventrículos con sangre, el generador de pulso envía señales eléctricas pequeñas a los ventrículos, estimulando su contracción coordinada, expulsando la sangre del corazón y bombeándola a través del sistema circulatorio.

Los dispositivos de CRT están disponibles con o sin una función de desfibrilador asociada. Los dispositivos que incluyen una función de desfibrilador algunas veces son referidos como dispositivos CRT-D. Los dispositivos CRT-D son particularmente útiles en pacientes en riesgo de ritmos cardiacos anormales. Por ejemplo, un latido del corazón irregular rápido puede evitar que el corazón complete una contracción completa; los latidos , del corazón muy lentos también pueden ser peligrosos. Si el corazón ! desarrolla un ritmo anormal, un dispositivo de CRT-D puede impactar el corazón, alterar el ritmo anormal y dar al corazón la oportunidad de reanudar una velocidad más normal.

Los dispositivos de CRT están ampliamente disponibles de fabricantes tales como St. Jude Medical (Atlas® II HF ICD, Atlas®+ HF ICD, Epic® HF ICD, Epic® II HF ICD, Promote® RF CRT-D), Boston Scientific ! (COGNIS®, Contak Renewal, LIVIAN™), Medtronic (Consulta™, Concertó®, Máximo® II, InSync® Máximo®), Sorin Group ERM (OVATIO™ y NewLiving™), y BIOTRONIK® (Stratos® LV y Stratos® LV-T).

La terapia de resincronización cardiaca es opcionalmente combinada con uno o más de otros tratamientos para insuficiencia cardiaca. Por ejemplo, un paciente también puede ser tratado con: una estatina, tal como rosuvastatina, atorvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina o simvastatina;, un diurético, tal como furosemida, bumetanida, hidroclorotiazida, espironolactona, eplerenona, triamtereno, torasemida o metolazona; inotropo, tal como dobutamina, milrinona o digoxina; un beta-bloqueador, tal como carvediol o metoprolol; y/o un péptido natriurético, tal como BNP.

Los tratamientos también pueden incluir un vasodilatador, tal como: inhibidor de enzima convertidora de angiotensina (ACE) (v.gr., captopril, enalapril, lisinopril, benazepril, quinapril, fosinopril o ramipril), un bloqueador de receptor de angiotensina II, tal como candesartán, irbesartán, olmesartán, losartán, valsartán, telmisartán o eprosartán, un nitrato, tal como mononitrato de isosorbide o dinitrato de isosorbide; y/o hidralazina. Otras formas de intervención médica tales como angioplastia u otra cirugía también se pueden realizar en casos apropiados.

La eficacia de la terapia puede ser monitoreada con el tiempo por medición regular de biomarcadores relevantes tales como galectina-3. Los niveles de galectina-3 y/o otros biomarcadores (tales como BNP) se pueden medir en un paciente con CRT y se pueden comparar con una concentración de galectina-3 previa medida en el paciente. Un incremento o disminución en la concentración de galectina-3 en relación con una o más concentraciones de galectina-3 previas en el paciente pueden ser una indicación de que el paciente está respondiendo o no está respondiendo a terapia de resincronización cardiaca. Los niveles de marcadores pueden ser monitoreados con el tiempo, tales como en muestras obtenidas de un paciente a intervalos anuales, semianuales, bimensuales, mensuales, trisemanales, bisemanales, semanales, diarios o a intervalos variables.

EJEMPLO Galectina-3 y terapia de resincronización cardiaca Métodos Población de estudio Un ensayo clínico reclutó a pacientes con insuficiencia cardiaca (HF) para por lo menos 6 semanas (clase funcional III o IV de la New York Heart Association), con evidencia de la disfunción sistólica ventricular izquierda y disincronía cardiaca (como se indica por amplitud de QRS mayor : que o igual a 150 ms o disíncronía ecocardiográfica, si QRS era de 120-149 mseg). El diseño y los resultados primarios de ensayo se reportan en la literatura publicada J. Cleland et al., "The effect of cardiac resynchronization on morbidity and mortality in heart failure". N Enql J Med. 2005 Apr 14;352(15): 1539-49]. Todos los pacientes recibieron terapia farmacológica estándar incluyendo inhibidores de enzima convertidora de angiotensina, beta bloqueadores y diuréticos. Los pacientes fueron asignados aleatoriamente al , tratamiento con terapia farmacológica optimizada sola o combinada con terapia de resincronizacion cardiaca (CRT) de una manera de marcador abierto. Los pacientes que recibieron CRT recibieron un dispositivo InSync® III CRT (Medtronic Inc., Minneapolis, MN), además de su terapia farmacológica de fondo. Se usó regulación de paso auriculoventricular, con paso auricular para prevenir velocidades más lentas que 60 latidos por minuto. El ventrículo derecho y ventrículo izquierdo fueron estimulados simultáneamente. Se usó ecocardiografia para optimizar el retraso auriculoventricular usando la señal de flujo entrante mitral. El retraso auriculoventricular más corto que no acortó el componente auricular de la señal de flujo entrante se consideró óptimo.

Muestreo de sangre Se extrajeron muestras de sangre en línea basal, a 3 y a 18 meses. Todas las muestras se almacenaron a -80°C.

Análisis de laboratorio Determinación de concentración de galectina-3 en muestras de suero se evaluó usando kits de ELISA (ensayo de Galectína-3; BG Medicine Inc., Waltham, MA, E.U.A.). La sensibilidad del ensayo (concentración más baja diferente de cero) fue 0.96 ng/mL. Variaciones intra-ensayo e ínter-ensayo fueron menores que 8% y 10 % respectivamente.

Análisis estadístico Todos los análisis se realizaron usando software SAS versión 9 (SAS Institute, Cary, NC, E.U.A.). Se usó regresión logística para evaluar la asociación de niveles y resultados de analitos. Sólo pacientes completos en todas las covariantes de interés en un análisis particular se consideraron para incluirse en ese análisis. El nivel de significancia de dos colas se fijó a 0.05, y los valores de probabilidad menores que 0.05 se consideraron significativos.

Resultados Concentración de Galectina-3 con el tiempo en pacientes La media y desviación estándar de galectina-3 en la línea basal que se define como el tiempo de reclutamiento en el estudio, y a 18 mesesi después de la línea basal se muestran en el cuadro 1 más adelante, por grupo de intervención. Nótese que no todos los pacientes tuvieron una muestra de suero disponible para medición de galectina-3 en cada punto de tiempo; el: cuadro 1 presenta resultados para todos los pacientes con una medición de galectina-3 disponible.

CUADRO 1 Concentraciones de galectina-3 en el suero (media y desviación estándar) en la línea basal y a 18 meses después de la línea basal, por grupo de intervención. Los números entre paréntesis indican una desviación estándar. El número de pacientes que tuvieron muestras de suero con medición de galectina-3 también se indica en el cuadro para cada punto de tiempo y grupo.

Del cuadro 1 se observa que la media de la concentración de galectina-3 en el suero en pacientes que no recibieron CRT es idéntica en la línea basal y 18 meses después de la línea basal, mientras que la media de la concentración de galectina-3 en el suero en pacientes que recibieron CRT disminuyó entre la línea basal y 18 meses.

Concentración de qalectina-3 con el tiempo en pacientes, v resultado adverso La frecuencia de un resultado adverso, a saber, muerte u hospitalización no planeada para insuficiencia cardiaca dentro de 18 meses1 después de la línea basal, se investigó para los 10 pacientes qué experimentaron la reducción más grande de galectina-3 en el suero entre línea basal y 3 meses después de la línea basal. Se observó que de los 10 pacientes con la reducción más grande en los niveles de galectina-3 entre la línea basal y 3 meses después de la línea basal, 6 de estos pacientes (60%) padecieron el resultado adverso de muerte u hospitalización para insuficiencia cardiaca dentro de 18 meses de la línea basal. Por el contrario, de los otros pacientes con un valor de galectina-3 en el suero en la línea basal y a 3 meses después de la línea basal e información disponible sobre resultado adverso, 81 % (128 pacientes de 159 pacientes) padeció el resultado adverso de muerte u hospitalización para insuficiencia cardiaca a 18 meses.

Concentración de galectina-3 en la línea basal en pacientes que recibieron CRT está asociada con resultado adverso Se observe que la concentración de galectina-3 en el suero de línea basal estuvo asociada significativamente con el riesgo de un resultado adverso subsecuente, a saber, muerte dentro de 18 meses u hospitalización dentro de 18 meses, en pacientes que recibieron CRT. El cuadro 2 siguiente muestra los resultados de un análisis de regresión logística estadístico para evaluar la asociación entre galectina-3 de línea basal y resultado adverso subsecuente. Para detalles acerca de la técnica de regresión logística, véase v.gr., David W. Hosmer y Stanley Lemeshow, Applied logistic regression (New York: Wiley, 2000). En el análisis, los datos de pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal mayores que 30 ng/mL se colocaron en un grupo, y datos de pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal menores que o iguales a 30 ng/mL se colocaron en un grupo separado. Además, el volumen ventricular y sistólico (LVESV) para cada paciente también se consideró en el modelo estadístico como una covariante; como tal, sólo 98 pacientes que tuvieron mediciones de ambas variables en la línea basal son capaces de ser; incluidos en este análisis. Los pacientes que recibieron un CRT y que tuvieron un nivel de galectina-3 en línea basal por arriba de 30 ng/mL tuvieron posibilidades de muerte aproximadamente tres veces más altas dentro de 18 meses u hospitalización dentro de 18 meses en comparación con pacientes que recibieron un CRT y que tuvieron un nivel de galectina-3 en línea basal menor que o igual a 30 ng/mL.

CUADRO 2 Resultados de análisis de regresión logística para el punto final de muerte u hospitalización dentro de 18 meses, para pacientes que recibieron CRT. La relación de posibilidades para galectina-3 es relativa al grupo con galectina-3 en línea basal menor que o igual a 30 ng/mL; la relación de posibilidades para LVESV es relativa al grupo con LVESV menor que o igual a 200 mL.

Concentraciones de galectina-3 en la línea basal están significativamente asociadas con resultado entre pacientes que recibieron CRT pero no entre pacientes que no recibieron CRT Se observó que la concentración de galectina-3 en el suero en línea basal estuvo significativamente asociada con el riesgo de un resultado , adverso subsecuente, a saber, muerte dentro de 18 meses u hospitalización no planeada dentro de 18 meses de la línea basal, en pacientes que recibieron CRT, pero no en pacientes que no recibieron CRT. El cuadro 3 siguiente muestra los resultados de un análisis de regresión logística estadístico para evaluar la asociación entre galectina-3 en línea basal y resultado adverso subsecuente. Este análisis se realizó por separado para pacientes que recibieron CRT, y para pacientes que no recibieron CRT. Para detalles acerca de la técnica de regresión logística, véase, v.gr., David W. Hosmer y Stanley Lemeshow, Applied logistic regression (New York: Wiley, 2000). En el análisis, los datos de pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal mayores que 30 ng/mL se colocaron en un grupo, y datos de: pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal menores que o iguales a 30 ng/mL se colocaron en un grupo separado. Además, el volumen ventricular y sistólico (LVESV) para cada paciente también se consideró en los modelos estadísticos como una covariante. El cuadro 3 presenta los resultados de, estos análisis. Hubo 98 pacientes evaluables que recibieron CRT, de quienes 22 (22.4% de 98) experimentaron un resultado adverso de muerte u hospitalización dentro de 18 meses. Hubo 96 pacientes evaluables que no recibieron CRT, de quienes 29 (30.2% de 96) experimentaron un resultado adverso de muerte u hospitalización dentro de 18 meses.

CUADRO 3 Resultados de análisis de regresión logística para el punto final de muerte u hospitalización dentro de 18 meses, analizados por separado para pacientes que recibieron CRT y para pacientes que no recibieron CRT. Las relaciones de posibilidades para galectina-3 son relativas al grupo con galectina-3 en línea basal menor que o igual a 30 ng/ml_; relaciones de posibilidades para LVESV es relativa al grupo con LVESV menor que o igual a 200 mL Se encontró que sólo entre pacientes que recibieron CRT fue galectina-3 en línea basal estadísticamente significativa asociada con el resultado adverso de muerte u hospitalización dentro de 18 meses con el nivel de significancia estadística pre-especificado. La galectina-3 en línea basal en el grupo de pacientes que no recibieron CRT no estuvo significativamente asociada con el mismo punto final de resultado adverso en el nivel dé significancia prescrito menor que 0.05, y el 95% de intervalo de confianza en ese grupo traslapó el valor nulo de relaciones de posibilidades de 1 , o unidad.

CRT está asociado con tasas de evento reducidas en general pero con una reducción más grande en pacientes con concentraciones de galectina-3 más altas El número de pacientes en cada una de cuatro categorías que experimentaron un evento de muerte u hospitalización no planeada para insuficiencia cardiaca dentro de 18 meses de la línea basal es enumerado en ' el cuadro 4 siguiente. Este cuadro incluye todos los pacientes del estudio cuya muestra de sangre de línea basal tuvo un valor de concentración de galectina-3 en línea basal, y quienes fueron seguidos exitosamente durante 18 meses, de tal manera que el punto final de muerte u hospitalización no planeada para insuficiencia cardiaca dentro de 18 meses de línea basal se pudo investigar.

CUADRO 4 Números de pacientes, por tratamiento de CRT y categoría de galectina-3. El número y porcentaje de eventos está indicado en cada celda del cuadro. El evento en este cuadro se define como muerte u hospitalización no planeada para insuficiencia cardiaca dentro de 18 meses de línea basal.

Como se puede observar a partir del cuadro 4, los pacientes que recibieron CRT mostraron una frecuencia de evento disminuida en comparación con pacientes que no recibieron CRT. Cabe notar que en el grupo de galectina-3 bajo, a saber, pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal < 30 ng/mL, la reducción absoluta en frecuencia de evento fue 9.1% (27.6% menos 18.5%). En el grupo de galectina-3 alta, a saber, pacientes con niveles de galectina-3 en línea basal > 30 ng/mL, la reducción absoluta en frecuencia de evento fue 9.6% (42.9% menos 33.3%). Estos datos probablemente indican que los valores de galectina-3 de línea basal más altos identifican pacientes que presentan un beneficio más grande de CRT, debido a que la reducción de 9.6% en el grupo de galectina-3 de línea basal más alto es mayor que la reducción de 9.1 % en el grupo de galectina-3 en línea basal más baja Incorporación por referencia La descripción entera de cada uno de los documentos de patente y artículos científicos mencionados en la presente es incorporada por referencia para todos los propósitos.

Equivalentes La invención puede ser modalizada en otras formas específicas sin apartarse de la esencia o características esenciales de la misma. Las modalidades anteriores por lo tanto se consideran ilustrativas en todos los aspectos y no limitantes sobre la invención descrita aquí. El alcance de la invención por lo tanto está indicado por las reivindicaciones anexas y no por la descripción anterior, y se pretende que todos los cambios que caen dentro del significado y ámbito de equivalencia de las reivindicaciones sean abarcados en la presente.

Claims (25)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1 .- Un método in vitro de evaluación de un candidato humano para o tratado con terapia de resincronización cardiaca, el método comprendiendo medir una concentración de galectina-3 en la sangre en una muestra del humano, para determinar asi la presencia o ausencia de una concentración de galectina-3 en la sangre indicativa de respuesta a, o pronóstico después de, terapia de resincronización cardiaca.

2. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el humano es un candidato para terapia de1 resincronización cardiaca.

3. - El método de conformidad con la reivindicación *\ , caracterizado además porque el humano ha sido tratado previamente con ! terapia de resincronización cardiaca.

4. - Un método de monitoreo del desarrollo o progresión de l insuficiencia cardiaca en un humano tratado con terapia de resincronización ; cardiaca, el método comprendiendo medir una concentración de galectina-3 ! en la sangre en una muestra del humano, para determinar así la presencia o , ausencia de una concentración de galectina-3 en la sangre indicativa del desarrollo o progresión de enfermedad cardiaca.

5. - El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la muestra inicial del humano se toma en el tiempo que un dispositivo de resincronización cardiaca es implantado.

6.- El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque comprende adicionalmente medir una concentración de galectina-3 en la sangre en una muestra adicional del humano, y comparar la concentración de galectina-3 en la sangre de por lo menos una muestra adicional con la concentración de galectina-3 en la sangre de la muestra inicial, en donde la muestra adicional se ha tomado un tiempo después de tomar la muestra inicial.

7.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque la muestra comprende sangre, suero o plasma.

8. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque la respuesta comprende supervivencia mejorada, menos hospitalizaciones no planeadas ! para empeoramiento de insuficiencia cardiaca, fuerza del corazón mejorada, disminución de fatiga, acortamiento de la respiración reducido, o apnea de : sueño reducida.

9. - El método de conformidad con cualquiera de las ! reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque el dispositivo de terapia de resincronización cardiaca además comprende un desfibrilador.

10. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque el paciente tiene una concentración de galectina-3 en la sangre determinada para estar dentro de un intervalo objetivo.

1 1. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque el paciente tiene una concentración de galectina-3 en la sangre determinada para estar por arriba de un umbral mínimo.

12. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el umbral mínimo es más que 10 ng/ml.

13. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el umbral mínimo es entre 10 y 15 ng/ml.

14. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el umbral mínimo está entre 15 y 20 ng/ml.

15. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el umbral mínimo está entre 20 y 25 ng/ml.

16.- El método de conformidad con la reivindicación 1 1 ; caracterizado además porque el umbral mínimo está entre 25 y 30 ng/ml.

17. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque el umbral mínimo es más de 30 ng/ml.

18. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque el paciente tiene una concentración de galectina-3 en la sangre determinada para estar por debajo de un umbral máximo.

19. - El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está por debajo de 70 ng/ml.

20. - El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está por debajo de 60 ng/ml.

21. - El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está por debajo de 40 ng/ml.

22. - El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está entre 30 y 40 ng/ml.

23. - El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está entre 25 y 30 ng/ml.

24.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está entre 20 y 25 ng/ml.

25.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el umbral máximo está entre 15 y 20 ng/ml.