MX2011005077A - Un metodo para reducir el complejo de lipoproteina-beta-2-glicopro teina 1 de baja densidad oxidado circulante para el tratamiento de ateroesclerosis. - Google Patents

Abstract

Las modalidades de la invención comprenden métodos para reducir la lipoproteína-beta-2-glicoproteína 1 de baja densidad oxidada circulante y los niveles de mieloperoxidasa circulante administrando a sujetos una cantidad efectiva de una composición dietética de aceite que contiene de 20 a 90% por peso de ácidos grasos poliinsaturados. La disminución de los niveles del complejo de lipoproteína-beta-2-glicoproteína de baja densidad oxidada y de mieloperoxidasa puede ser un tratamiento efectivo de la ateroesclerosis.

Description

UN METODO PARA REDUCIR EL COMPLEJO DE LIPOPROTEINA-BETA-2- GLICOPROTEINA 1 DE BAJA DENSIDAD OXIDADO CIRCULANTE PARA EL TRATAMIENTO DE ATEROESCLEROSIS REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional de E.U. número 61/114,823 presentada el 14 de noviembre de 2008.

Campo de la Invención Las modalidades de la invención se refieren a composiciones de aceite para cocinar que contienen ácido graso natural poli insaturado (PUFA) que reducen el complejo de lipoproteína-beta-2-glicoproteína 1 de baja densidad oxidado circulante para la prevención y el tratamiento de la ateroesclerosis .

ANTECEDENTES El colesterol circulatorio elevado es un factor de riesgo establecido en el desarrollo de la ateroesclerosis. La ateroesclerosis puede describirse como el proceso de debilitamiento de las paredes arteriales y un estrechamiento del flujo sanguíneo dentro de estos vasos. Esta secuencia de eventos frecuentemente se presenta en las arterias coronarias, ocasionando la obstrucción del flujo sanguíneo al corazón y conduciendo al infarto al miocardio (daño cardiaco) ; frecuentemente denominado cardiopatía coronaria (CHD) .

Los agentes terapéuticos, tales como estatinas, que controlan la concentración de colesterol en suero, han demostrado alguna efectividad en el tratamiento de la cardiopatía coronaria. Estos agentes modulan los niveles circulantes de lipoproteínas portadoras dé colesterol, inhibiendo la síntesis de colesterol en sí, pero no tienen efecto en eventos aguas abajo, tales como la absorción u oxidación del colesterol, que son etapas necesarias para el inicio de la ateroesclerosis . Sin embargo, los niveles de colesterol se encuentran constantemente bajo presión ascendente debido al alto consumo dietético de grasa animal, y a causa de la síntesis corporal del colesterol en el hígado y otros tejidos cuando el suministro dietético se considera inadecuado.

Se conocen cuatro clases principales de lipoproteínas, todas las cuales comparten una estructura básica similar de un núcleo de lipidos rodeado por una capa superficial ampifílica de fosfolípidos y apolipoproteínas . Entre más grande sea el núcleo de lipidos, menos densa es la partícula de lipoproteína . En orden de tamaño ascendente son: lipoproteína de alta densidad (HDL) , la cual desarrolla un núcleo de lipidos eliminando el colesterol del tejido periférico y por tanto frecuentemente se refiere como "colesterol bueno"; lipoproteína de baja densidad (LDL) , la cual se forma en el hígado a partir de restos de lipoproteína de muy baja densidad (VLDL); lipoproteinas de muy baja densidad (VLDL) , la cuales se forman también en el hígado y contienen en su mayoría triglicéridos y quílomicrones que se forman en el intestino delgado y que se conforman de triglicéridos y grasa dietética.

Varias patentes describen compuestos que son agentes anti-ateroescleróticos útiles. Por ejemplo, la Patente de E.U. No. 4,681,893, que describe un "Método para inhibir la biosíntesis del colesterol en un paciente", y la Patente de E.U. No. 5,846,966, que describe "Combinaciones de compuestos de acetidinona hidroxi-sustituidos e Inhibidores de HMG CoA Reductasa". Esta patente (EU 4681893) y todas las otras patentes y solicitudes de patente mencionadas en la presente solicitud se incorporan en la presente mediante la referencia .

La evidencia más reciente apoya la creencia de que la LDL necesita experimentar una serie de transformaciones y formar complejos antes del inicio de la ateroesclerosis . Una etapa putativa temprana es la formación de la LDL oxidada (oxLDL) , que desempeña un papel principal en el inicio de la ateroesclerosis. La modificación oxidativa de la LDL altera sus propiedades biológicas, dando como resultado la quimiotaxis de monocitos o linfocitos T además de la modulación de los factores de crecimiento y la producción de citosinas a partir de células endoteliales, células de músculo liso, y macrófagos. La citotoxicidad de la oxLDL de las células endoteliales cultivadas ha demostrado ser claramente aterógena. Estos estudios demostraron claramente los mecanismos aterógenos de oxidación de LDL en las paredes arteriales pero estudios posteriores han comenzado a poner más énfasis en la importancia clínica de los niveles de oxLDL circulante en pacientes con cardiopatía coronaria. Esta oxLDL circulante se mide con inmunoanálisis utilizando anticuerpos monoclonales murinos preparados contra LDL modificada con malondialdehído (MDA-LDL) y contra oxLDL de cobre .

Pruebas más recientes han demostrado también la presencia de niveles elevados en plasma de oxLDL en pacientes con cardiopatía coronaria. Los niveles elevados en plasma de oxLDL se han establecido como un marcador de riesgo bioquímico para CHD. La ausencia de asociación de los niveles de oxLDL con otros factores de riesgo, tales como hipertensión, hiperlipidemia, o fumar sugiere que los niveles elevados de oxLDL son un factor de riesgo independiente para CHD y cuando en comparación con otros marcadores bioquímicos, tales como colesterol total, triglicéridos, apoB, o niveles de HDL, la asociación entre los niveles de oxLDL y la CHD es un indicador de riesgo marcadamente superior para CHD.

La absorción de oxLDL por las células endoteliales ha demostrado también ser una etapa critica para el inicio y el des'arrollo de la ateroesclerosis . Las moléculas de adhesión son marcadores inflamatorios, que están sobre-regulados por oxLDL y desempeñan un papel principal en la aterogénesis . Otra manera en la que se puede demostrar que la oxLDL contribuye a la CHD es ayudando a la acumulación de células apoptóticas en placas ateroescleroticas .

El aceite de pescado y más específicamente los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), de Acido Eicosa Pentaenoico (EPA) , Acido Docosa Pentaenoico (DPA) , y Acido Docosa Hexaenoico (DHA) constituyentes del aceite de pescado han demostrado tener un uso potencial como estimulantes cardiotónicos . Algunos estudios in vitro llevados a cabo en células endoteliales coronarias humanas han sugerido que EPA y DHA pueden atenuar la expresión de las moléculas de adhesión que pueden ser una trayectoria para un efecto anti ateroesclerótico del pescado y los aceites de pescado.

En otro ejemplo, se ha estudiado la influencia del aceite de pescado dietético en la trombosis aórtica, la agregación de plaquetas, y actividad del superóxido dismutasa (SOD) en un modelo de rata y se ha demostrado que retarda la formación de trombos arteriales, probablemente al reducir la agregación de plaquetas y el daño arterial asociado al estrés oxidativo .

También está bien establecido en sistemas químicos monofásicos que EPA y DHA altamente insaturados deben oxidarse más rápidamente que los ácidos grasos que contienen menos dobles enlaces. Estudios anteriores han demostrado que el enriquecimiento de LDL, que tiene fases polar y no polar separadas, con estos ácidos grasos no aumentó la oxidación.

Los estudios de Wander (Lipids, Vol. 37, No. 8, pg 789, (2002) ) también han demostrado que el grado de apoptosis inducido por oxLDL enriquecida con EPA/DHA comparado con el inducido por oxLDL no enriquecida con EPA/DHA en células U937 es significativamente menor conduciendo por tanto a la conclusión de que después de la suplementación con PUFA, la apoptosis celular inducida con oxLDL enriquecida con EPA/DHA disminuyó y la disminución no se relacionó con la concentración de hidroperóxidos de lipido. Este resultado sugiere que EPA/DHA proporcionan un efecto de protección para la ateroesclerosis mediante una disminución de la apoptosis celular en la pared arterial, más que cualquier reducción en el daño oxidativo.

La ateroesclerosis también se ha caracterizado por un engrosamiento gradual de las paredes arteriales debido a la excesiva acumulación de lipidos. Los factores pro-inflamatorios y la dislipidemia son los principales contribuyentes a su desarrollo como se describe por Steinberg D . , J. Biol. Chem. Vol. 272(34), pg. 20963, (1997) y Steinberg D., Nature Med. Vol. 8, pg. 1211, (2002). La lipoproteina de baja densidad (LDL) es la forma principal de colesterol que se acumula en las lesiones o placas ateroescleróticas , pero la LDL debe primero modificarse en una estructura oxidada (oxLDL) para iniciar el proceso, y como se muestra por McMurray H. et al. J. Clinical. Med. , Vol. 92, pg 1004, (1993) el mecanismo pro aterógeno más significativo para modificar la LDL en oxLDL es el estrés oxidativo .

A diferencia de la LDL natural, la oxLDL se enlaza a 2GPI-glicoproteina para eventualmente formar un complejo no disociable estable. (Complejo oxLDL- 2GPI, complejo de lipoproteina-beta-2-glicoproteina 1 de baja densidad oxidado). Estos complejos estables son considerados como patógenos y clínicamente muy relevantes y se han implicado como antígenos pro aterógenos y representan un factor de riesgo serológico para el desarrollo de la atero-trombosis. El papel de MPO La mieloperoxidasa (MPO) es una enzima heme peroxidasa-ciclooxigenasa expresada en neutrófilos, monocitos y macrófagos. La MPO participa en el sistema de defensa inmune innato formando oxidantes reactivos microbicidas tales como ácido hipocloroso, un potente agente antimicrobiano. Sin embargo, el ácido hipocloroso también se ha reportado que reacciona con nucleobases dando como resultado la formación de 5-clorouracilo, un marcador del daño del ADN durante la inflamación, el cual se enriquece en el tejido ateroesclerótico humano.

Reciente ha surgido evidencia de que los oxidantes derivados de MPO contribuyen al daño en el tejido y al inicio y propagación de la enfermedad inflamatoria vascular aguda y crónica. Los niveles circulantes de MPO han demostrado predecir los riesgos de eventos cardiacos adversos importantes y los niveles específicos de compuestos clorados derivados de MPO son biomarcadores conocidos para la progresión de la enfermedad de ateroesclerosis . (Takeshita J, Byun J, Nhan TQ, Pritchard DK, Pennathur S, Schwartz SM et al. (2006). La mieloperoxidasa genera 5-clorouracilo en tejido ateroesclerótico humano: una trayectoria potencial para la mutagénesis somática por macrófagos. J. Biol. Chem. , 281 : 3096-3104) .

Otro indicador de oxidación catalizada por MPO de las proteínas de lípido se observa por el ataque del ácido hidrocloroso y la formación de 3-clorotirosina que se ha identificado en lesiones ateroescleróticas humanas y en las lipoproteínas extraídas de estas lesiones (Hazen SL, Heinecke JW, 3-Chlorotyrosine , "a specific marker of myeloperoxidase-catalyzed oxidation, is markedly elevated in low density lipoprotein isolated from human atherosclerotic intima" (La 3-clorotirosina, un marcador específico de la oxidación catalizada por mieloperoxidasa, está marcadamente elevada en la lipoproteina de baja densidad aislada de intima ateroesclerótica humana). J Clin Invest 99:2075-2081 (1997); Thukkani AK, McHowat J, Hsu FF, Brennan ML, Hazen SL, Ford DA, Identification of alpha-chloro fatty aldehydes and unsaturated lysophosphatidylcholine molecular species in human atherosclerotic lesions. (Identificación de aldehidos grasos alfa-cloro y especies moleculares de lisofosfatidilcolina insaturada en lesiones ateroescleróticas humanas). Circulation 108:3128-3133 (2003)).

Sorprendentemente, los presentes inventores han encontrado que los pacientes que utilizan una formulación de aceite para cocinar, que contiene aceite de pescado y/o de algas enriquecido en PUFAs mezclados, en su dieta diaria, durante un periodo sostenido, mostraron una reducción significativa en el complejo oxLDL- 2GPI circulatorio. El efecto positivo de la formulación de aceite para cocinar no puede derivarse de la literatura conocida y descrita.

Además sorprendentemente, los presentes inventores dieron seguimiento a este resultado inesperado con una segunda prueba utilizando la dosis diaria de una vez al día de cápsula de aceite de pescado conteniendo una mezcla de PUFAs y mostraron la misma sorprendente disminución de los niveles del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio como se observó en la prueba de aceite para cocinar. En una extensión adicional de este resultado, los presentes inventores llevaron a cabo una prueba comparativa entre un aceite que contiene predominantemente un solo PUFA (DHA) y un aceite que contiene una mezcla de PUFAs (DHA, EPA, DPA) y mostraron la sorprendente disminución adicional estadísticamente significativa de los niveles del complejo OxLDL- 2GPI para los PUFAs mezclados en comparación con el aceite que contiene predominantemente un único PUFA.

En una cuarta prueba, los presentes inventores descubrieron una sorprendente disminución, estadísticamente significativa de los niveles de MPO circulantes para pacientes que toman una dosis oral de PUFAs mezclados en comparación con un grupo de control no tratado.

SUMARIO Las modalidades de la presente invención comprenden un nuevo método para reducir el complejo OxLDL- 2GPI circulatorio y la mieloperoxidasa (MPO) proporcionando una dosis diaria terapéuticamente efectiva de al menos uno de los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de Acido Eicosa Pentaenoico (EPA), Acido Docosa Pentaenoico (DPA), y Acido Docosa Hexaenoico (DHA) formulado en una composición de aceite para cocinar en donde se agrega al menos uno de EPA, DPA, y DHA como un constituyente del aceite de pescado y/o de algas y se mezcla con uno o más aceites para cocinar conocidos tales como aceite de cacahuate, aceite de salvado de arroz, aceite de soya, aceite de maíz, aceite de ajonjolí, aceite de cánola, aceite de cártamo, aceite de oliva, aceite de maní y/u otros aceites vegetales en una composición de aceite para cocinar estable.

Una modalidad de la presente invención comprende un método para suministrar una dosis diaria terapéuticamente efectiva de al menos uno de los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de Acido Eicosa Pentaenoico (EPA) , Acido Docosa Pentaenoico (DPA) , y Acido Docosa Hexaenoico (DHA) proporcionando una cápsula diaria de aceite de pescado o de algas al paciente para disminuir la OxLDL y MPO circulantes.

DESCRIPCIÓN DETALLADA La ateroesclerosis se caracteriza por un engrosamiento gradual de las paredes arteriales debido a la excesiva acumulación de lipidos. Los factores pro inflamatorios y la dislipidemia son los principales contribuyentes a su desarrollo. La lipoproteina de baja densidad (LDL) es la principal forma de colesterol que se acumula en lesiones o placas ateroescleróticas , pero primero la LDL debe modificarse en una estructura oxidada (oxLDL) para iniciar el proceso, y el mecanismo pro-aterógeno más significativo para modificar la LDL en oxLDL es el estrés oxidativo .

A diferencia de la LDL nativa, la oxLDL se enlaza a 2-glicoproteina 1 para eventualmente formar un complejo estable no disociable (complejo oxLDL- 2GPI) . La reacción inicial es reversible pero es seguida por la formación de complejos estables no disociables (Inoue K. et al., Oxidized LDL/- 2GPI complexes. New aspects in atherosclerosis .

(Complejos de LDL/- 2GPI oxidados. Nuevos aspectos en ateroesclerosis ) Lupus 14, 736 (2005)) considerados como patógenos y clínicamente muy relevantes. La absorción de la oxLDL por los macrófagos es mediada por un receptor de depuración CD36 lo que conduce a la formación de células de espuma dentro de la placa ateroesclerótica . (Podrez E. A. et al., Macrophague scavenger receptor CD36 is the major receptor for LDL modified by monocyte-generated reactive nitrogen species. (El macrófago receptor de depuración CD36 es el principal receptor para LDL modificada mediante especies de nitrógeno reactivas generadas por monocitos) J. Clin. Invest. 105(8), 1085 (2000)).

Ya que la absorción de oxLDL - 2GPI se mejora significativamente en presencia de anticuerpos anti- 2GPI, este mecanismo se vuelve fisiológicamente relevante para explicar el desarrollo de células de espuma dentro de la placa ateroesclerótica. Por lo tanto los complejos oxLDL - 2GPI se han implicado como antígenos pro-aterógenos y representan un factor de riesgo serológico y contribuyen al desarrollo de la atero-trombosis .

Por lo tanto la disminución del complejo oxLDL - 2GPI circulante es un objetivo farmacológico significativo para el tratamiento de la atero-trombosis y es el objetivo de la presente invención.

El complejo oxLDL - 2GPI circulatorio puede medirse con precisión utilizando un análisis inmunométrico basado en una técnica de "intercalado" de doble anticuerpo (ELISA) que detecta el complejo oxLDL - 2GPI circulante en plasma humano. Los pozos de una placa de 96 pozos se recubrieron con un anticuerpo monoclonal contra 2GPI humano que se enlazará a cualquier 2GPI introducida en el pozo. El oxLDL - 2GPI enlazado se detecta utilizando un anticuerpo monoclonal etiquetado con peroxidasa de rábano (HRP) dirigido contra apoBlOO humano. La concentración del complejo oxLDL - 2GPI se determina midiendo la actividad enzimática de la HRP utilizando el reactivo cromóforo tetrametilbencidina (TMB) que forma un distintivo color amarillo medido a 450 nm. La intensidad del color producido se mide utilizando un espectrofotómetro y es directamente proporcional a la cantidad del complejo oxLDL - 2GPI enlazado. Se grafican los resultados contra una curva estándar preparada utilizando soluciones conocidas del complejo para llegar a la medida exacta del complejo oxLDL - 2GPI circulatorio en el plasma analizado.

Un aceite para cocinar de la presente invención puede prepararse mezclando aceites estándar para cocinar con aceite de algas al 7.5% peso/peso, que contenga un mínimo de 35% de EPA (20%) y DHA (80%) combinados. Los aceites para cocinar estándar seleccionados para la prueba son aceites de cacahuate y girasol comúnmente utilizados. El proceso de mezclado se lleva a cabo en un sistema cerrado bajo nitrógeno (para evitar la oxidación) y a temperaturas entre 20 y 40 grados Celsius.

Se llevó a cabo un estudio abierto aleatorizado etiquetado para evaluar el efecto de este aceite para cocinar en los niveles del complejo oxLDL - 2GPI circulatorio en pacientes con dislipidemia en comparación con aceites vegetales saludables para cocinar, es decir aceite de cacahuate y de girasol.

Se seleccionaron pacientes de sexo indistinto con edades entre 18 y 60 años con niveles de colesterol LDL en suero entre 130 y 250 mg/dl y niveles de triglicéridos en suero entre 150 y 500 mg/dl. Los pacientes con enfermedad conocida de arteria coronaria, en terapia de dieta para dislipidemia, en uso de estatinas/fibratos u otros fármacos de disminución de lipidos, con enfermedad hepática severa o daño renal o mujeres embarazadas/en lactancia, se excluyeron del grupo potencial para este estudio.

Cada paciente se sometió a un examen físico completo inicial, intermedio (mensual), y final (tres meses) consistente en medir RBC con plaquetas, electrocardiograma, perfil de 12 horas de ayuno de lipidos, ayuno de glucosa en sangre, perfil tiroideo, prueba de función hepática y prueba de función renal para ser capaces de evaluar tanto la eficacia como los efectos secundarios durante el periodo de prueba .

Se reclutaron cuarenta y ocho pacientes sanos en proporción aproximadamente igual de hombres y mujeres y se dividieron al azar, utilizando SAS versión 8.2, en los tres grupos A, B y C el tratamiento se inició de la siguiente manera : Grupo A - 3 x 500 mi de aceite para cocinar conteniendo aceite de algas al 7.5% peso/peso para utilizarse para propósitos de cocinar normalmente durante un periodo de tres meses.

Grupo B - 3 x 500 mi de aceite de cacahuate estándar para utilizarse para propósitos de cocinar normalmente durante un periodo de tres meses.

Grupo C - 3 x 500 mi de aceite de girasol estándar para utilizarse para propósitos de cocinar normalmente durante un periodo de tres meses.

En una segunda prueba, cuarenta y ocho pacientes nuevos seleccionados y elegidos al azar como anteriormente, se dividieron en dos grupos, el Grupo A se dejó sin tratamiento y el segundo grupo, Grupo B, se suministró con una cápsula una vez al día de las cápsulas de aceite de pescado comercialmente disponibles (2 x 500 mg) tomada cada mañana con el desayuno durante 1 mes. Los niveles del complejo oxLDL - 2GPI circulatorio se midieron en el día uno y en el día treinta utilizando los mismos métodos descritos en la primera prueba anterior.

En una tercera prueba, los presentes inventores compararon la alimentación de 24 cobayos durante 4 semanas con una cantidad suplementaria de predominantemente un único PUFA y PUFAs mezclados, para determinar la efectividad de cada uno en la disminución del complejo oxLDL-beta-2 glicoproteína circulatorio. Se utilizó una combinación de PUFA de 80% de DHA, 20% de EPA (AO) versus una en la cual la concentración de PUFA es 35% de DHA, 35% de EPA y 30% de DPA (SO) y la oxLDL - 2GPI circulante se midió utilizando un método similar al descrito en la primera prueba anterior.

En una cuarta prueba, veinticuatro nuevos pacientes humanos seleccionados y elegidos al azar se dividieron en dos grupos, el Grupo C se dejó sin tratamiento y el segundo grupo, Grupo FO, se suministró con una cápsula una vez al día de las cápsulas de aceite de pescado comercialmente disponibles (2 x 500 mg) tomada cada mañana con el desayuno durante 1 mes. Los niveles de MPO circulante se midieron en el día uno y tan cerca del día treinta como fue posible. La MPO circulante se midió de forma precisa utilizando un análisis inmunométrico basado en una técnica de "intercalado" de doble anticuerpo (ELISA) que detecta la MPO circulante en plasma humano.

Resultados Experimentales En la primera prueba en donde los pacientes utilizaron aceite para cocinar conteniendo aceite de algas al 7.5% peso/peso contra aceites de girasol y cacahuate, el plasma se recolectó y se midió para el complejo oxLDL - 2GPI circulatorio dando como resultado los resultados descritos en la presente.

Primero se gráfica la curva de concentración del complejo oxLDL - 2GPI diluyendo secuencialmente una solución estándar de referencia, midiendo la absorbencia (a 450 nm) para cada concentración y graficando la curva de calibración mientras que simultáneamente se miden 24 muestras de plasma desconocidas tomadas en duplicado para medir las concentraciones desconocidas del complejo oxLDL - 2GPI en estas muestras como se muestra más adelante en la Tabla 1.

Las soluciones estándar se muestran en los pozos A1-F2 mientras que las muestras de plasma del paciente se muestran en los pozos A3-H8 corridas por duplicado. El número en los pozos de muestra de plasma del paciente denota el código numérico del paciente y la letra I = muestra de plasma inicial, 1M, 2M = muestras de plasma intermedias de 1 mes o 2 meses y F = muestra de plasma final.

Los resultados de calibración de absorbencia estándar de la Tabla 1 se grafican después en una curva de calibración y se extrapola una ecuación polinominal segundo orden a partir de la gráfica. y = 3.6332x2 + 89.54x - 0.1227 R2 = 0.9999 Tabla 1 oxLDL 450 nm 1 2 3 4 5 6 7 8 StdOl StdOl 4-1 4-F 6-1 6-F 7-1 7-F Std02 Std02 1:1 1:1 1:1 1 : 1 1 : 1 1 : 1 Std03 Std03 8-1 8-F 9-1 9-F 10-1 10-F Std04 Std04 1:1 1:1 1:1 1:1 1:1 1:1 Std05 Std05 12-1 12-F 13-1 13-F 14-1 14-F Std06 Std06 1:1 1:1 1:1 1:1 1:1 1:1 17-1 17-F 18-1 18-F 20-1 20-F 1:1 1 : 1 1:1 1:1 1:1 1:1 1 2 3 4 5 6 7 8 2.54 2.57 1.843 1.689 1.722 1.521 1.969 1.955 1.33 1.32 1.849 1.677 1.705 1.534 1.947 1.923 0.68 0.69 2.876 2.102 1.630 1.514 2.004 2.064 0.34 0.35 2.899 2.130 1.609 1.523 2.018 2.057 0.164 0.165 1.644 1.609 1.497 1.309 1.513 1.529 0.009 0.008 1.637 1.621 1.488 1.314 1.502 1.526 1.451 1.405 2.772 2.435 2.177 2.163 1.421 1.399 2.778 2.441 2.175 2.164 Calibrador Std Absorción Conc. Dcid Conc. Obs. media U/dl U/dl La ecuación derivada de la curva de calibración se aplica después a los datos de absorbencia de la Tabla 1 para proporcionar las concentraciones corregidas del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio en las muestras de plasma recolectadas de los pacientes durante el transcurso de nuestro estudio como se muestra más adelante en la Tabla 2. Tabla 2 Concentración promedio corregida (U/dl) 4-1 4-F 6-1 6-F 7-1 7-F 177.566 160.878 163.986 145.139 189.145 18 .175 8-1 8-F 9-1 9-F 10-1 10-F 288.759 205.635 154.430 144.233 194.656 199.821 12-1 12-F 13-1 13-F 14-1 14-F 156.559 153.974 141.620 123.567 143.127 145.139 17-1 17-F 18-1 18-F 20-1 20-F 135.960 132.564 276.367 239.801 211.943 210.627 La siguiente Tabla 3 muestra un resumen del cambio en las concentraciones del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio durante el periodo de tres meses observado para los 54 pacientes de nuestra prueba. Como puede observarse claramente, los pacientes en el Grupo A de prueba que consumieron el aceite para cocinar conteniendo aceite de algas al 7.5% peso/peso mostraron una disminución estadísticamente significativa en los niveles del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio, lo cual como se describió anteriormente debe conducir a una disminución significativa en el desarrollo de las enfermedades atero-trombóticas para estos pacientes.

#ID Iniciales Sexo Aceite de Colesterol Basal Muestra Muestra a % Muestra a % Muestra % Paciente Prueba Inicial 1 mes Cambio 2 meses Cambio final Cambio de oxLDL de oxLDL de oxLDL 3 AP M Grupo A 230.50 MG/DL 01-Nov 17-Dic -8.54% 4-Ene -9.65% 04-Feb -9.43% 4 SG F Grupo A 236.50 MG/DL 01-Nov 17-Dic -11.89% 7-Ene -11.93% 05-Feb -9.40% 5 PM F Grupo A 268.90 MG/DL 01-Nov 18-Dic -6.34% 4-Ene -9.42% 04-Feb -14.82% 6 JBP F Grupo A 273.80 MG/DL 01 -Nov 17-Dic -5.57% 4-Ene -11.66% 05-Feb -11.49% 7 G F Grupo B 283.40 MG/DL 02-Nov 18-Dic -1.22% 7-Ene -1.87% 04-Feb -1.04% 5 8 MM F Grupo A 377.20 MG/DL 02-Nov 17-Dic -12.86% 8-Ene -12.42% 05-Feb -24.68% 9 RW M Grupo A 277.80 MG/DL 02-Nov 18-Dic -20.65% 8-Ene -18.65% 05-Feb -6.60% 10 AJ F Grupo B 271.33 MG/DL 02-Nov 03-Dic 1.34% 8-Ene 1.21% 05-Feb 2.65% 12 DG F Grupo C 231.43 MG/DL 05-Nov 03-Dic 2.46% 8-Ene 2.85% 05-Feb -1.65% 13 PK F Grupo A 215.70 MG/DL 05-Nov 05-Dic -8.21% 10-Ene -10.02% 06-Feb -12.75% 14 G F Grupo B 218.70 MG/DL 05-Nov 05-Dic -1.89% 10-Ene -1.57% 06-Feb 1.41% 15 SJ F Grupo B 251.90 MG/DL 05-Nov 05-Dic -2.33% 10-Ene -1.81% 06-Feb -1.44% 17 BR M Grupo B 220.50 MG/DL 05-Nov 17-Dic -1.12% 10-Ene -0.93% 06-Feb -2.50% 18 A M Grupo A 398.60 MG/DL 21 -Nov 17-Dic -10.72% 15-Ene -10.90% 24-Feb -13.23% 19 MJ M Grupo A 224.60 MG/DL 22-Nov 17-Dic -9.21% 29-Ene -11.39% 24-Feb -10.74% 20 SSK. M Grupo B 258.36 MG/DL 22-Nov 21-Dic 2.79% 29-Ene 4.64% 24-Feb 2.31% 21 PN M Grupo A 222.01 MG/DL 22-Nov 21-Dic -11.39% 29-Ene -14.89% 24-Feb -8.61% 22 BPN F Grupo A 224.71 MG/DL 22-Nov 21-Dic -8.62% 29-Ene -10.41% 24-Feb -8.34% 23 BCC F Grupo B 245.80 MG/DL 17-Dic 21 -Ene -1.59% 15-Feb -1.33% 19-Mar -0.70% 24 PG F Grupo B 269.50 MG/DL 18-Dic 14-Ene 1.94% 15-Feb 1.36% 19-Mar -2.55% 25 SP F Grupo B 275.56 MG/DL 18-Dic 14-Ene 2.54% 15-Feb 0.89% 20-Mar 2.30% 26 ART M Grupo A 312.00 MG/DL 17-Dic 14-Ene -9.90% 21-Feb -11.86% 20-Mar -12.21% 27 PR M Grupo A 239.15 MG/DL 20-Dic 15-Ene -10.42% 25-Feb -10.75% 20-Mar -14.67% 28 BSK F Grupo A 183.10 MG/DL 20-Dic 15-Ene -7.10% 25-Feb -9.82% 20-Mar -13.59% 29 SK M Grupo C 296.07 MG/DL 19-Dic 14-Ene -0.52% 25-Feb 0.95% 21 -Mar 0.57% 30 DD M Grupo C 208.21 MG/DL 19-Dic 15-Ene 0.44% 26-Feb 3.42% 21 -Mar 2.93% 31 VRP F Grupo A 153.45 MG/DL 19-Dic 15-Ene -6.45% 27-Feb -2.96% 21 -Mar -6.48% 32 RD F Grupo A 228.87 MG/DL 19-Dic 14-Ene -8.63% 26-Feb -9.42% 21 -Mar -16.72% 33 MG F Grupo A 262.61 MG/DL 20-Dic 15-Ene -14.65% 26-Feb -5.84% 25-Mar -11.05% 34 FA M Grupo C 242.60 MG/DL 20-Dic 21 -Ene 2.56% 27-Feb 2.14% 25-Mar 1.94% 35 MSS F Grupo C 259.54 MG/DL 21-Dic 21 -Ene 3.85% 27-Feb -0.58% 25-Mar -0.97% 37 AK. M Grupo C 250.70 MG/DL 20-Dic 21 -Ene 0.55% 27-Feb -0.52% 25-Mar -0.41% 38 SKS M Grupo C 248.74 MG/DL 21-Dic 21 -Ene 0.33% 26-Feb -0.09% 25-Mar 1.45% 39 RSW M Grupo C 209.90 MG/DL 17-Ene 21-Feb 1.26% 20-Mar -2.01% 20-Abr -2.39% 40 RJ F Grupo C 295.00 MG/DL 17-Ene 21-Feb 1.94% 20-Mar 0.87% 20-Abr 1.60% 41 AL M Grupo A 268.00 MG/DL 18-Ene 21-Feb -8.75% 21 -Mar -4.64% 20-Abr -6.52% 42 MRG F Grupo B 211.40 MG/DL 17-Ene 22-Feb -2.45% 20-Mar -2.13% 20-Abr -1.71% 43 MS M Grupo A 180.68 MG/DL 17-Ene 29-Feb -5.65% 20-Mar -6.47% 20-Abr -9.72% 44 A M Grupo A 202.10 MG/DL 18-Ene 29-Feb -6.71% 21 -Mar -11.05% 22-Abr -11.29% 45 sv F Grupo B 150.80 MG/DL 18-Ene 29-Feb -1.32% 21 -Mar -1.78% 22-Abr -1.48% 46 JL M Grupo A 280.40 MG/DL 18-Ene 29-Feb -9.59% 21 -Mar -7.34% 22-Abr -12.26% 47 CS F Grupo A 243.90 MG/DL 01-Feb 06-Mar -4.45% 4-Abr -6.58% 05-May -8.83% 48 PGT F Grupo B 221.4 MG/DL 04- ar 07-Abr -0.84% 5-Abr -2.67% 11-Jun -1.22% 49 SSD M Grupo C 210.4 MG/DL 04-Mar 07-Abr 1.79% 6-Abr 3.16% 11-Jun 3.86% 50 USP M Grupo C 199.7 MG/DL 04-Mar 07-Abr 2.03% 6-Abr 2.70% 11-Jun 2.01% 51 SSN M Grupo A 312.88 MG/DL 06-Mar 07-Abr -5.33% 14-Abr -8.01% 12-Jun -11.47% 52 SSG M Grupo A 284.5 MG/DL 06-Mar 17-Abr -13.58% 14-Abr -11.04% 12-Jun -17.73% 53 APC M Grupo C 271 MG/DL 07-Mar 18-Abr -1.47% 14-Abr -1.42% 12-Jun -1.27% - - La reducción media en el complejo oxLDL- 2GPI circulatorio en el Grupo A de prueba es 11.78% lo cual es significativamente mayor a la reducción media del Grupo B de control en -0.33% y el aumento numérico en el complejo oxLDL- 2GPI circulatorio observado del Grupo C de control a 0.64%. Se observa una estadística significativa con desviaciones estándar de 0.016, 0.011 y 0.011 y un nivel de confianza de 0.021, 0.010, 0.010 en un alfa de 0.01 para los tres grupos respectivamente .

En la segunda prueba, a los pacientes se les administraron cápsulas 2 x 500 mg de aceite de pescado una vez al día y los niveles del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio se midieron de la manera anteriormente descrita, al inicio y al final de los treinta días y los resultados se muestran en la presente.

Se analizó el aceite de pescado por su perfil de lípidos el cual se muestra más adelante en la Tabla 4 y muestra la presencia de PUFAs mezclados (EPA, DPA, DHA) y los resultados de la medición del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio se muestran más adelante en la Tabla 5.

- - Tabla 4 La reducción media en el complejo oxLDL- 2GPI circulatorio en el Grupo F de prueba (cápsula de aceite de pescado) es de -9.77% lo cual es significativamente diferente al aumento numérico en el complejo oxLDL- 2GPI circulatorio observado del grupo de control etiquetado "C" a 0.54% como se - - muestra más adelante en la Tabla 5. Se observa una estadística significativa con .las desviaciones estándar de 0.014, 0.005 con un nivel de confianza de 0.007 y 0.002 en un alfa de 0.05 para los grupos F y C respectivamente.

Tabla 5 # ID del Aceite Muestra Muestra % de paciente de inicial a 1 mes cambio prueba de oxLDL 1 C Marzo 26 Mayo 08 0.69% 2 F Marzo 26 Mayo 07 -11.61% 3 F Marzo 26 Mayo 05 -8.99% 4 F Marzo 26 Mayo 14 -9.92% 5 C Marzo 26 Mayo 08 0.34% 6 C Marzo 28 Mayo 05 0.77% 7 c Marzo 28 Mayo 05 0.39% 8 F Marzo 28 Mayo 08 -9.71% 9 C Marzo 28 Mayo 08 0.43% 10 F Marzo 28 Mayo 08 -8.09% 11 C Marzo 28 Mayo 14 1.07% 12 F Marzo 29 Mayo 06 -9.39% 13 C Marzo 29 Mayo 06 1.17% 14 C Marzo 29 Mayo 06 0.32% 15 F Marzo 29 Mayo 06 -9.41% 16 F Marzo 29 Mayo 06 -10.26% 17 F Marzo 29 Mayo 06 -12.73% 18 C Marzo 31 Mayo 08 0.28% 19 C Marzo 31 Mayo 05 0.89% 20 C Marzo 31 Mayo 08 1.14% 21 C Abril 01 Mayo 08 -0.22% 22 c Abril 01 Mayo 14 0.71% 23 F Abril 01 Mayo 08 -9.35% 24 F Abril 01 Mayo 05 -10.73% 25 C Marzo 26 Mayo 08 0.69% 26 C Marzo 26 Mayo 07 0.61% 27 F Marzo 26 Mayo 05 -8.99% 28 C Marzo 26 Mayo 14 0.92% 29 C Marzo 26 Mayo 08 -0.34% 30 c Marzo 28 Mayo 05 0.77% 31 c Marzo 28 Mayo 05 -0.27% 32 F Marzo 28 Mayo 08 -9.38% 33 C Marzo 28 Mayo 08 0.52% 34 F Marzo 28 Mayo 08 -10.07% 35 C Marzo 28 Mayo 14 0.77% 36 F Marzo 29 Mayo 06 -9.39% 37 C Marzo 29 Mayo 06 -0.39% 38 C Marzo 29 Mayo 06 0.75% 39 F Marzo 29 Mayo 06 -7.41% 40 F Marzo 29 Mayo 06 -11.69% 41 F Marzo 29 Mayo 06 -12.73% 42 F Marzo 31 Mayo 08 -8.28% 43 F Marzo 31 Mayo 05 -9.22% 44 C Marzo 31 Mayo 08 0.86% 45 F Abril 01 Mayo 08 -8.33% 46 F Abril 01 Mayo 14 -8.73% 47 F Abril 01 Mayo 08 -9.35% 48 F Abril 01 Mayo 05 -10.73% - - En un experimento adicional con cobayos, comparamos alimentar a 24 cobayos durante 4 semanas con una cantidad suplementaria (250 mg / 1 kg de peso corporal) de aceite de algas (AO) comparado con un aceite de salmón (SO) suplementario (250 mg / 1 kg de peso corporal) , para determinar la efectividad de cada aceite en la disminución del complejo oxLDL-beta2 glicoproteina circulatorio. Se utilizó una combinación de PUFA de 80% de DHA, 20% de EPA (AO) versus una en la cual la concentración de PUFA es 35% de DHA, 35% de EPA y 30% de DPA (SO) . Se encontró que ambas disminuyeron el complejo oxLDL pero los PUFAs mezclados fueron aproximadamente 3 veces más efectivos. Los resultados del experimento se muestran en la Tabla 6. La distribución de energía de las dietas fue de 45:30:25 carbohidratos : grasas : proteínas .

- - El Grupo A se alimentó con 250 mg / Kg de pes orporal de aceite de salmón.

El Grupo B se alimentó con 25? mg / Kg de pes orporal de aceite de algas.

- - La Reducción Promedio en la oxLDL circulante en el Grupo A = -12.02% +/- 0.71 a 95% de nivel de confianza.

La Reducción Promedio en la oxLDL circulante en el Grupo B = -4.64% +/- 0.40 a 95% de nivel de confianza.

Análisis del efecto en MPO circulante.

Durante el transcurso de nuestra investigación en la disminución de glicoproteinas LDL-beta-2 oxidadas en sujetos prescritos con cápsulas de 2 x 500 mg de aceite de pescado por dia conteniendo PUFAs mezclados, también investigamos uno de los mecanismos mediante el cual tal disminución de oxLDL puede ocurrir, es decir una reducción proporcional en la mieloperoxidasa circulante.

Se levó a cabo un estudio abierto etiquetado aleatorizado para evaluar el efecto de este aceite para cocinar en los niveles del complejo oxLDL- 2GPI circulatorio en pacientes con dislipidemia en comparación con aceites vegetales saludables para cocinar, es decir aceite de cacahuate y de girasol.

Se reclutaron veinticuatro pacientes sanos de sexo indistinto de edades entre 20 y 50 años y que se auto declararon como sanos durante los 15 días anteriores al reclutamiento, aproximadamente en la misma proporción de hombres y mujeres y divididos al azar, utilizando SAS versión 8.2, en dos grupos C (Control no Tratado) y F (Tratado con Cápsula de Aceite de Pescado) . Se excluyó a los pacientes - - con enfermedad conocida de arteria coronaria, en terapia de dieta por dislipidemia, en uso de estatinas/fibratos u otros fármacos de disminución de lipidos, con enfermedad hepática severa o daño renal o mujeres embarazadas/en lactancia, del grupo potencial para este estudio. Cada paciente se sometió a un examen físico inicial de selección para asegurar la buena salud de cada sujeto.

Cada paciente en el Grupo F se suministró con una cápsula de 2 x 500 mg de aceite de pescado para ingerir una vez al mes durante el desayuno. Se extrajo sangre en el primero y aproximadamente en el día 30 de tratamiento y se midieron los niveles de PO circulatorio en el plasma.

La reducción media en MPO circulatorio se midió mediante un análisis ELISA modificado a 405 nm. El Grupo F de prueba (cápsula de aceite de pescado) mostró una reducción mayor estadísticamente significativa a -8.1% en comparación con la disminución numérica en MPO circulatorio observada en el grupo de control etiquetado "C" a -0.3% como se muestra en más adelante en la Tabla 7. Se observó una estadística significativa con desviaciones estándar de 0.011, 0.006 con un nivel de confianza de 0.006 y 0.003 en un alfa de 0.05 para los grupos F y C respectivamente.

Tabla 7 Cambio en los niveles circulatorios de MPO (cápsula de 2 x 500 mg de FO durante 1 mes) - - - - Reducción Desviación 95% de Media Estándar confianza F=Aceite de pescado -8.1% 0.011 0.0061 C= Control -0.3% 0.006 0.0031 Las modalidades de la invención son métodos para reducir el complejo oxLDL-beta-2 glicoproteina 1 circulante y los niveles de MPO circulantes en suero humano como un medio de prevención y tratamiento de la ateroesclerosis que comprende administrar a una persona una cantidad efectiva de una composición dietética de aceite que contiene 1 a 99 por ciento por peso de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) . modalidades de la invención comprenden además métodos en donde la composición dietética de aceite comprende además un aceite comestible para cocinar, en donde la composición comprende una distribución de ácido graso de 15 a 55 por ciento por peso de ácidos grasos saturados (SFA) ; de 40 a 80 por ciento por peso de ácidos grasos mono insaturados (MUFA) ; y de 5 a 45 por ciento por peso de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) .

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde la composición dietética de aceite se administra mediante una cápsula, conteniendo la cápsula una composición dietética de aceite que comprende una distribución de ácido graso de 5 a 10 por ciento por peso de ácidos grasos saturados (SFA) ; de 5 a 10 por ciento por peso - - de ácidos grasos mono insaturados (MUFA) ; y de 20 a 90 por ciento por peso de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA).

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde los ácidos grasos poliinsaturados preferidos son Acido Eicosa Pentaenoico (EPA) , Acido Docosa Pentaenoico (DPA) y Acido Docosa Hexaenoico (DHA) , preferentemente en una proporción de 0.1-1, 0.1-.5, y 0.5-1.

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde la fracción de PUFA comprende al menos un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite marino y aceite de algas, en donde el aceite marino y el aceite de algas comprenden EPA, DHA, DPA y anti-oxidantes naturales.

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde el aceite comestible para cocinar comprende aceite vegetal.

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde el aceite comestible para cocinar comprende un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite de cacahuate, aceite de salvado de arroz, aceite de soya, aceite de maíz, aceite de ajonjolí, aceite de cánola, aceite de cártamo, aceite de oliva, y aceite de maní.

Las modalidades de la invención comprenden además métodos en donde el aceite comestible para cocinar comprende además al menos uno de Vitamina A, Vitamina D, Vitamina E, o un extracto vegetal anti-oxidante .

- - Las modalidades de la invención comprenden además un proceso para fabricar una composición dietética de aceite que comprende: a) cargar un recipiente con un aceite comestible para cocinar; b) agregar al recipiente al menos un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite marino y aceite de algas; y c) agitar los aceites hasta mezclarlos.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Un método para reducir el complejo oxLDL-beta-2-glicoproteina 1 circulante y la mieloperoxidasa circulante en suero humano como un medio de prevención y tratamiento de la ateroesclerosis que comprende; administrar a una persona una cantidad efectiva de una composición dietética de aceite que contiene de 1 a 99% por peso de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA).

2. El método de la reivindicación 1, en donde la composición dietética de aceite comprende además un aceite comestible para cocinar; comprendiendo la composición una distribución de ácido graso de: (i) ácidos grasos saturados (SFA) de 15 a 55% por peso; (ii) ácidos grasos mono insaturados (MUFA) de 40 a 80% por peso; y (iii) ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de 5 a 45% por peso.

3. El método de la reivindicación 1, en donde la composición dietética de aceite se administra mediante una cápsula, conteniendo la cápsula una composición dietética de aceite que comprende una distribución de ácidos grasos de: (i) ácidos grasos saturados (SFA) de 5 a 10% por peso; - se- íii) ácidos grasos mono insaturados (MUFA) de 5 a 10% por peso; y (iii) ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de 20 a 90% por peso.

4. Un método como en la reivindicación 1, en donde los ácidos grasos poliinsaturados preferidos son una mezcla de Acido Docosa Hexaenoico (DHA) , Acido Eicosa Pentaenoico (EPA) y Acido Docosa Pentaenoico (DPA) en una proporción de 0.5-1, 0.1-1, 0.1-0.5 respectivamente.

5. Un método como en la reivindicación 1, en donde la fracción de PUFA comprende al menos un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite marino y aceite de algas, en donde el aceite marino comprende una mezcla de EPA, DHA, DPA y anti-oxidantes naturales.

6. Un método como en la reivindicación 2, en donde el aceite comestible para cocinar comprende un aceite vegetal .

7. Un método como en la reivindicación 2, en donde el aceite comestible para cocinar comprende un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite de cacahuate, aceite de salvado de arroz, aceite de soya, aceite de maíz, aceite de ajonjolí, aceite de cánola, aceite de cártamo, aceite de oliva, y aceite de maní.

8. Un método como en la reivindicación 2, en donde el aceite comestible para cocinar comprende además al menos uno de Vitamina Af Vitamina D, Vitamina E, o un extracto vegetal anti-oxidante .

9. Un proceso para fabricar una composición dietética de aceite como en la reivindicación 2 que comprende: a) cargar un recipiente con un aceite comestible para cocinar; b) agregar al recipiente al menos un aceite seleccionado del grupo que consiste de aceite marino y aceite de algas; y c) agitar los aceites hasta mezclarlos.