MX2011003625A - Uso de inhibidores de receptores tipo toll en la prevencion y tratamiento de hipercolesterolemia e hiperlipidemia y enfermedades relacionadas con esto. - Google Patents

Abstract

La invención provee el uso de inhibidores de TLR o un derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos, opcionalmente en combinación con una o más de una composición de diminución de lípidos, composición de disminución de colesterol, diuréticos, compuestos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAID), anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones para la prevención o tratamiento de hipercolesterolemia y/o hiperlipidemia y/o enfermedades asociadas con estos.

Description

USO DE INHIBIDORES DE RECEPTORES TIPO TOLL EN LA PREVENCIÓN Y TRATAMIENTO DE HIPERCOLESTEROLEMIA E HIPERLIPIDEMIA Y ENFERMEDADES RELACIONADAS CON ESTO Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la solicitud de patente provisional de E.U.A. No. 61/102,974, presentada el 6 de octubre de 2008, la descripción de la cual se incorpora explícitamente para referencia aquí.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención está relacionada con el uso de compuestos y composiciones farmacéuticas que inhiben la trayectoria de señalización del receptor tipo Toll para prevenir o tratar enfermedades o trastornos. La invención además describe el tratamiento de hipercolesterolemia e hiperlipidemia y enfermedades relacionadas con esto.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Debido a su insolubilidad en la sangre, colesterol y lípidos se transportan en el sistema circulatorio en lipoproteínas. Colesterol y lípido en lipoproteínas se pueden depositar en tejidos a través del sistema circulatorio. Altas concentraciones de colesterol (hipercolesterolemia) y/o lípido (hiperlipidemia) en el sistema circulatorio son condiciones conocidas por estar asociadas con muchas enfermedades, que incluyen, pero no se limitan a, enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes y presión sanguínea alta. Se ha establecido que la disminución de concentración de lípido de lipoproteína de baja densidad y/o colesterol de lipoproteína de baja densidad en la sangre es benéfica para proteger contra enfermedades asociadas con concentraciones en sangre altas de colesterol y/o lípidos. Ha sido establecido además que al incrementar la concentración de lípido de lipoproteína de alta densidad y/o concentración de colesterol de lipoproteína de alta densidad en relación con la concentración de lípido de lipoproteína de baja densidad y/o concentración de colesterol de lipoproteína de baja densidad en la sangre es benéfico para la protección contra enfermedades asociadas con concentraciones en sangre altas de colesterol y/o lípidos.

Receptores tipo Toll (TLR) están presentes en muchas células del sistema inmune y se ha mostrado que se involucran en la respuesta inmune innata (Hornung V. et al. (2002) J. Immunol. 168:4531-4537). TLR son medios clave por los cuales los mamíferos reconocen y montan una respuesta inmune a las moléculas externas y también proveen medios por los cuales las respuestas inmunes adaptivas e innatas se enlazan (Akira, S. et al. (2001) Nature Immunol. 2:675-680; Medzhitov, R. (2001) Nature Rev. Immunol 1 : 135-145). En mamíferos, esta familia consiste de al menos once proteínas llamadas TLR1 a TLR1 1 , que son conocidas por reconocer los patrones moleculares asociados con patógeno (PAMP) de bacterias, hongos, parásitos y virus e inducen una respuesta inmune mediada por un número de factores de transcripción (Poltorak, A. et al. (1998) Science 282:2085-2088; Underhill, D.M., et al. (1999) Nature 401 :81 1-815; Hayashi, F. et al. (2001) Nature 410:1099-1 103; Zhang, D. et al. (2004) Science 303:1522-1526; Meier, A. et al. (2003) Cell. Microbiol. 5:561-570; Campos, M.A. et al. (2001) J. Immunol, 167:416-423; Hoebe, K. et al. (2003) Nature 424: 743-748; Lund, J. (2003) J. Exp. Med. 198:513-520; Heil, F. et al. (2004) Science 303:1526-1529; Diebold, S.S. et al. (2004) Science 303:1529-1531 ; Hornung, V. et al. (2004) J. Immunol. 173:5935-5943). TLR son conocidos por ser medios clave por los cuales los mamíferos reconocen y montan una respuesta inmune para moléculas externas y también son reconocidas como que proveen medios por los cuales las respuestas inmunes innatas y adaptivas se enlazan (Akira, S. et al (2001) Nature Immunol 2:675-680; Medzhitov, R. (2001) Nature Rev. Immunol. 1 :135-145).

Algunos TLR se localizan en la superficie celular para detectar e iniciar una respuesta a patógenos extracelulares y otros TLR se localizan detrás de la célula para detectar e iniciar una respuesta a patógenos intracelulares. El cuadro 1 provee una representación de TLR, los agonistas conocidos por lo tanto y los tipos de células conocidos para contener el TLR (Diebold, S.S. et al (2004) Science 303:1529-1531 ; Liew, F. et al. (2005) Nature 5:446-458; Hemmi H et al. (2002) Nat. Immunol. 3:196-200; Jurk M et al. (2002) Nat. Immunol. 3:499; Lee J et al. (2003) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 100:6646-6651); (Alexopoulou, L. (2001) Nature 413:732-738).

CUADRO 1 La localización selectiva de TLR y la señalización generada de esta, provee algún entendimiento en su función en la respuesta inmune. La respuesta inmune involucra una respuesta innata y una adaptiva basada en el subconjunto de células involucradas en la respuesta. Por ejemplo, las células T auxiliares (Th) involucradas en funciones mediadas por célula clásica tal como hipersensibilidad tipo retardada y activación de linfocitos T citotóxicos (CTL) son células Th1. Esta respuesta es la respuesta innata del cuerpo al antígeno (por ejemplo, infecciones virales, patógenos intracelulares, y células tumorales), y resulta en una secreción de IFN-gamma y una activación concomitante de CTL.

Como un resultado de su participación en la regulación de una respuesta inflamatoria, la activación de TLR se ha mostrado que juega una función en la patogénesis de muchas enfermedades, que incluyen autoinmunidad, enfermedades infecciosas e inflamación (Papadimitraki et al. (2007) J. Autoimmun. 29: 310-318; Sun et al. (2007) Inflam. Allergy Drug Targets 6:223-235; Diebold (2008) Adv. Drug Deliv. Rev. 60:813-823; Cook, D.N. et al. (2004) Nature Immunol 5:975-979; Tse and Horner (2008) Semin. Immunopathol. 30:53-62; Tobías & Curtiss (2008) Semin. Immunopathol. 30:23-27; Ropert et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:41-51 ; Lee et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:3-9; Gao et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:29-40; Vijay-Kumar et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:11-21). Como un resultado de su función en inflamación, es reconocido que la sub-regulación de la expresión de TLR y/o actividad puede proveer medios útiles para intervención de la enfermedad.

A la fecha, estrategias investigadoras dirigidas en inhibir selectivamente la actividad de TLR han involucrado moléculas pequeñas (por ejemplo, cloroquina e hidroxicloroquina) (véase, por ejemplo, WO 2005/007672 y Krieg, A. M. (2002) Annu. Rev. Immunol. 20:709), anticuerpos (véase, por ejemplo Duffy, K. et al. (2007) Cell Immunol 248:103-114), tecnologías de ARNi catalítico (por ejemplo, ARN inhibidores pequeños), derivados de ciclohexano (II et al. (2006) Mol. Pharmacol. 69:1288-1295), derivados de lípido (Akira et al (2005) Circulation 114:270-274, oligonucleótidos que contienen secuencias poli-G (Pawar et al. (2007) J. Am. Soc. Nephrol. 18:1721-1731) e inhibición competitiva con oligonucleótidos metilados o modificados (véase, por ejemplo, Barrat and Coffman (2008) Immunol. Rev. 223:271-283). Los pasajes de estas publicaciones que describen inhibidores de TLR se incorporan específicamente para referencia.

Como un resultado de su capacidad para inhibir una respuesta inflamatoria mediada por TLR, antagonistas de TLR están actualmente siendo investigados como terapéuticos posibles para el tratamiento y/o prevención de ciertas enfermedades. Sin embargo, la función de TLR en regulación de concentración de coiesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre y/o las enfermedades asociadas con esto es por lo tanto desconocida.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los presentes inventores han descubierto sorpresivamente que la inhibición de señalización de trayectoria de TLR puede disminuir la concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre y/o incrementar la relación de HDL-C a LDL-C en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados.

De esta manera, en un primer aspecto, la invención provee métodos para disminuir la concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados al inhibir la señalización de TLR. En ciertas modalidades preferidas, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión o actividad de uno o más TLR o una proteína corriente abajo en la trayectoria de señalización de TLR, tal como el marcador de diferenciación mieloide 88 (MyD88), quinasa IL-1R-asociada (IRAK), factor de regulación de interferón (IRF), factor TNF-receptor-asociado (TRAF), quinasa 1 factor beta de crecimiento de transformación (TGFp)-activada, quinasas ???, ???, y NF-??. De esta manera, en algunas modalidades la inhibición de señalización de TLR se logra mediante la administración a un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados de un compuesto antagonista de TLR. Ciertos de estos compuestos o composiciones antagonistas de TLR son moléculas pequeñas, por ejemplo, pero sin limitarse a cloroquina o hidroxicloroquina; anticuerpos; derivados de ciclohexano; derivados de lípido, oligonucleótidos sintéticos que comprenden dos secuencias de triplete, un triplete "CCT" y un triplete "GGG", en que el triplete "CCT" se puede considerar proximal y el triplete "GGG" se puede considerar distal; oligonucleótidos sintéticos que comprenden regiones que contienen secuencias "GGG" y/o "GGGG" y/o "GC", en que múltiples de dichas secuencias pueden estar presentes, oligonucleótidos sintéticos que son metilados; o sintéticos; oligonucleótidos inmunoinhibidores, que pueden tener una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador y/o en un motivo oligonucleótido que puede ser inmunoestimulador pero para la modificación. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR o una proteína corriente abajo en la trayectoria de señalización de TLR, tal como MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y NF- ?? usando tecnologías de bloqueo de expresión genética tal como oligonucleótidos antisentido, ARN señuelo, ribozimas, tecnologías de ARNi catalítico, ARNsi o ARNmi.

En algunas modalidades preferidas, el método para disminuir la concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados que comprende la administración al mamífero de una composición antagonista de TLR que tiene la estructura 5,-Nm-N3N2N1CGN1N2N3-Nm-3', en donde CG es un motivo oligonucleótido y C es citosina o un derivado de nucleóttdo de pirimidina, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina; ^- 2 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido o derivado de nucleótido; Nm y NT, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N1-N3 y/o N -N3 y/o C y/o G sea un derivado de nucleótido en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30.

En una modalidad adicional, la invención provee un método para disminuir concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados que comprende la administración al mamífero de una composición antagonista de TLR que tiene la estructura d'-?^?^???^?^?G-ß', en donde CG es un motivo oligonucleótido y C es citosina o un derivado de nucleótido de pirimidina, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina; N1-N3 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido o un derivado de nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N1-N3 y/o N1-N3 y/o C y/o G es un derivado de nucleótido; y con la condición además de que el compuesto puede contener menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30.

En otra modalidad, la invención se provee para un método de disminución de concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados a través de la administración de una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos o composiciones antagonistas de TLR y un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas modalidades preferidas, la disminución de concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados que comprende la administración de uno o más compuestos antagonistas de TLR, en donde el TLR se selecciona de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

En un segundo aspecto, la invención provee un método para tratar terapéuticamente una enfermedad asociada con concentración de lípido en sangre alta y/o concentración de colesterol en sangre alta en un mamífero, dicho método comprende inhibir la señalización de TLR en el mamífero. En algunas modalidades, la señalización de TLR es inhibida por la administración al mamífero de uno o más compuestos antagonistas de TLR de acuerdo con la invención en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En algunas modalidades la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR, u otra proteína en la trayectoria de señalización de TLR en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, la enfermedad es hipercolesterolemia, hiperlipidemia, enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad periférica vascular, diabetes o presión sanguínea alta.

En un tercer aspecto, la invención provee un método para prevenir una enfermedad asociada con concentración de lípido en sangre alta y/o concentración de colesterol en sangre alta en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevado, dicho método comprende inhibir la señalización de TLR en el mamífero. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe por la administración al mamífero de uno o más compuestos antagonistas de TLR de acuerdo con la invención en una cantidad farmacéuticamente activa. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR, u otra proteína en la trayectoria de señalización de TLR. En ciertas modalidades preferidas, la enfermedad es hipercolesterolemia, hiperlipidemia, enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes o presión sanguínea alta.

En algunas modalidades, los métodos de acuerdo con la invención además comprenden la administración al mamífero de una o más composiciones que disminuyen el colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptídos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1a representa el peso corporal total en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3. Brevemente, ratones C57/BL/6 se alimentan con una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg) o PBS durante 12 semanas. Se mide el peso corporal sobre el curso del estudio de doce semanas. Estos datos demuestran que un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en el peso corporal total después de la administración in vivo a mamíferos alimentados con una dieta alta en grasas.

La figura 1b representa el peso corporal total en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3. Brevemente, ratones ApoE-deficientes se alimentan con una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg) o PBS durante 12 semanas. El peso corporal se mide sobre el curso del estudio de doce semanas. Estos datos demuestran que un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en el peso corporal total después de la administración in vivo a mamíferos con una predisposición a desarrollar hipercolesterolemia y/o hiperlipoproteinemia que se alimentan con una dieta alta en grasas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS La presente invención describe el uso terapéutico de antagonistas de TLR para inhibir y/o suprimir hipercolesterolemia y/o hiperlipidemia y/o las enfermedades asociadas con esto. Los presentes inventores han descubierto sorpresivamente que la inhibición de señalización de trayectoria de TLR puede diminuir la concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados.

De esta manera, en un primer aspecto, la invención provee métodos para disminuir concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lípido en sangre en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados al inhibir la señalización de TLR. En ciertas modalidades preferidas, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión o actividad de uno o más TLR o una proteína corriente abajo en la trayectoria de señalización de TLR, tal como MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y NF-??. De esta manera, en algunas modalidades la inhibición de señalización de TLR se logra mediante la administración a un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados de un compuesto antagonista de TLR. Ciertos de estos compuestos o composiciones antagonistas de TLR son moléculas pequeñas que sub-regulan la maduración de endosomas, por ejemplo, pero sin limitarse a cloroquina o hidroxilcloroquina; anticuerpos; derivados de ciclohexano; derivados de lipido; oligonucleótidos sintéticos que comprenden dos secuencias de triplete, un triplete "CCT" y un triplete "GGG", en que el triplete "CCT" se puede considerar proximal y el triplete "GGG" se puede considerar distal; oligonucleótidos sintéticos que comprenden regiones que contienen secuencias "GGG" y/o "GGGG" y/o "GC", en que múltiples de dichas secuencias pueden estar presentes; oligonucleótidos sintéticos que son metilados; o sintéticos, oligonucleótidos inmunoinhibidores, que pueden tener una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador y/o en un motivo oligonucleótido que puede ser inmunoestimulador pero para la modificación. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR o proteína corriente abajo en la trayectoria de señalización de TLR, tal como MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y/o NF-?? que usa tecnologías de bloqueo de expresión genética tal como oligonucleótidos antisentido, ARN señuelo, ribozimas, tecnologías de ARNi catalítico, ARNsi o ARNmi. En ciertas modalidades en donde la actividad de TLR o expresión se inhibe, el TLR se selecciona de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y/o TLR9.

Además, la presente invención provee compuestos antagonistas de TLR que tienen niveles óptimos de concentración de colesterol en sangre y/o concentración de lipido en sangre disminuyendo la actividad y métodos para producir y usar dichos compuestos.

Además, la inhibición de señalización de TLR de acuerdo con la invención es útil en combinación con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o combinaciones de los mismos para prevenir y/o tratar enfermedades.

Sujetos en necesidad de prevenir un incremento de colesterol en sangre y/o concentración de lípido y/o tratamiento de una concentración de colesterol en sangre alta y/o concentración de lípido en sangre alta pueden incluir, por ejemplo, aquellos en riesgo de tener un evento cardiovascular.

El término "oligonucleótido" generalmente se refiere a un polinucleósido que comprende una pluralidad de unidades de nucleósido enlazado. Dichos oligonucleótidos se pueden obtener a partir de fuentes de ácido nucleico existentes, que incluyen genómica o ADNc, pero son preferiblemente producidos por métodos sintéticos. En modalidades ejemplares cada unidad de nucleósido puede incluir varias modificaciones y sustituciones químicas como las comparadas con oligonucleótidos tipo silvestre, que incluyen pero no se limitan a base de nucleósido modificado y/o unidad de azúcar modificada. Ejemplos de modificaciones químicas son conocidos por personas con experiencia en la técnica y se describen, por ejemplo, en Uhlmann E et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; "Protocols for Oligonucleotides and Analogs" Synthesis and Properties & Synthesis and Analytical Techniques, S. Agrawal, ed., Humana Press, Totowa, USA 1993; Hunziker, J. et al. (1995) Mod. Syn. Methods 7:331-417; y Crooke, S. et al. (1996) Ann. Rev. Pharm. Tox. 36:107-129. Los residuos de nucleósido se pueden acoplar uno con otro por cualquiera de los numerosos enlaces internucleósido conocidos. Dichos enlaces internucleósido incluyen, sin limitación, fosfodiester, fosforotioato, fosforoditioato, alquilfosfonato, alquilfosfonotioato, fosfotriester, fosforamidato, siloxano, carbonato, carboalcoxi, acetamidato, carbamato, morfolino, borano, tioeter, fosforamidato con puente, fosfonato de metileno con puente, fosforotioato con puente, y enlaces internucleósido de sulfona. El término "oligonucleótido" también incluye polinucleósidos que tienen uno o más enlaces internucleósido estereoespecíficos (por ejemplo, (Rp)- o (Sp)-fosforotioato, alquilfosfonato, o enlaces fosfotriester). Como se usa aquí, los términos "oligonucleótido" y "dinucleótido" se destinan expresamente a incluir polinucleósidos y dinucleósidos, respectivamente, que tienen cualquier enlace internucleósido, sin importar si el enlace comprende un grupo fosfato. En ciertas modalidades preferidas, estos enlaces internucleósido pueden ser enlaces fosfodiéster, fosforotioato o fosforoditioato, o combinaciones de los mismos.

El término "2-sustituido" generalmente incluye nucleósidos o en el cual el grupo hidroxilo en la posición 2' del radical pentosa se sustituye para producir un nucleósido 2'-sustituido o 2'-0-sustituido. En ciertas modalidades, dicha sustitución es con un grupo hidrocarbilo inferior que contiene 1-6 átomos de carbono saturados o insaturados, con un átomo de halógeno, o con un grupo arilo que tiene 6-10 átomos de carbono, en donde dicho hidrocarbilo, o grupo ar'ilo puede ser no sustituido o puede ser sustituido, por ejemplo, pero sin limitarse a sustitución con halo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, acilo, aciloxi, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi o grupos amino. Ejemplos de nucleósidos 2'-0-sustituidos incluyen, sin limitación 2'-amino, 2'-fluoro, 2'-alilo, 2'-0-alquilo o 2'-propargilo ribonucleósidos o arabinosidos, 2'-0-metilribonucleósidos o 2'-O-metilarabinosidos y 2'-0-metoxietoxiribonucleósidos o 2'-0-metoxietoxiarabinosidos.

El término "3"', cuando se usa de manera direccional, generalmente se refiere a una región o posición en un polinucleótido u oligonucleótido 3' (corriente abajo) de otra región o posición en el mismo polinucleótido u oligonucleótido.

El término "5"', cuando se usa de manera direccional, generalmente se refiere a una región o posición en un polinucleótido u oligonucleótido 5' (corriente arriba) de otra región o posición en el mismo polinucleótido u oligonucleótido.

El término "aproximadamente" generalmente significa que el número exacto no es crítico. De esta manera, el número de residuos de nucleósido en los oligonucleótidos de acuerdo con la invención no es crítico, y los oligonucleótidos que tienen uno o dos de algunos residuos de nucleósido, o de uno a varios residuos de nucleósido adicionales se contemplan como equivalentes de cada una de las modalidades anteriores.

El término "agonista" generalmente se refiere a una sustancia que puede unir a un receptor e inducir una respuesta. Dicha respuesta puede ser un incremento en la actividad mediada por el receptor. Un agonista frecuentemente imita la acción de una sustancia de origen natural tal como un ligando.

El término "antagonista" generalmente se refiere a una sustancia que puede unir a un receptor, pero no produce una respuesta biológica en unión. El antagonista puede bloquear, inhibir o atenuar la respuesta mediada por un agonista y puede competir con agonistas para la unión a un receptor. Dicha actividad antagonista puede ser reversible o irreversible.

El término "oligonucleótido antisentido" generalmente se refiere a cadenas de ADN o ARN o sus combinaciones que son complementarias a una secuencia de ácido nucleico elegida. Dicha secuencia de ácido nucleico puede estar en la forma de ARN mensajero (ARNm). Cuando se introduce en un animal o célula, un oligonucleótido antisentido puede unir y causar la reducción en la traducción de ARN a la cual es complementario. Si la unión toma lugar, este complejo de ácido nucleico se puede degradar por enzimas endógenas. Oligonucleótidos antisentido incluyen, pero no se limitan a, oligonucleótidos antisentido tradicionales, ARN de interferencia corta (ARNsi), micro ARN (ARNmi) y ribozimas. Oligonucleótidos antisentido que pueden ser útiles de acuerdo con la invención incluyen pero no se limitan a aquellos en Kandimalla et al. (Solicitud de patente de E.U.A. Nos. 12/510,469; 12/534,462; 12/534,476; 12/534,911; y 12/537,354; y Solicitud de patente provisional de E.U.A. Nos. 61/111 ,143; 61/111 ,148; y 61/111 ,160).

El término "molécula pequeña" generalmente se refiere a compuestos orgánicos pequeños que son biológicamente activos pero no son polímeros. Moléculas pequeñas pueden existir naturalmente o se pueden crear sintéticamente. Generalmente, moléculas pequeñas no incluyen proteínas u oligonucleótidos. Moléculas pequeñas pueden incluir compuestos que sub-regulan la maduración de endosomas, por ejemplo, pero sin limitarse a, cloroquina e hidroxicloroquina.

El término "fisiológicamente aceptable" generalmente se refiere a un material que no interfiere con la efectividad del compuesto antagonista de TLR y que es compatible con un sistema biológico tal como una célula, cultivo celular, tejido u organismo. Preferiblemente, el sistema biológico es un organismo vivo, tal como un mamífero.

El término "farmacéuticamente aceptable" generalmente se refiere a composiciones que son adecuadas para el uso en humanos y animales sin toxicidad excesiva.

El término "portador" generalmente incluye cualquier excipiente, diluyente, sustancia de relleno, sal, regulador de pH, estabilizador, solubilizador, aceite, lípido, lípido que contiene vesícula, microesferas, encapsulacion liposomal, u otro material bien conocido en la técnica para el uso en formulaciones farmacéuticas. Será entendido que las características del portador, excipiente, o diluyente dependerán de la ruta de administración para una aplicación particular. La preparación de formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos materiales se describen en, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 edición, A.

Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990.

El término co-administración" generalmente se refiere a la administración de al menos dos sustancias diferentes suficientemente cercanas en tiempo para modular una respuesta inmune. Co-administración se refiere a administración simultánea, así como orden espaciado temporalmente de arriba de varios días aparte, de al menos dos diferentes sustancias en cualquier orden, ya sea en una dosis sencilla o dosis separada.

Los términos una "cantidad efectiva", "cantidad farmacéuticamente efectiva" o "cantidad terapéuticamente efectiva" generalmente se refieren a una cantidad suficiente para afectar un efecto biológico deseado, tal como resultados benéficos. De esta manera, una "cantidad efectiva" o "cantidad suficiente" o "cantidad farmacéuticamente efectiva" o "cantidad terapéuticamente efectiva" dependerá del contexto en el cual esta siendo administrado. En el contexto de administrar una composición que modula una respuesta inmune a un antígeno co-administrado, una cantidad efectiva de un compuesto antagonista de TLR y antígeno es una cantidad suficiente para lograr la modulación deseada como se compara con la respuesta inmune obtenida cuando el antígeno se administra solo. Una cantidad efectiva se puede administrar en una o más administraciones.

El término "en combinación con" generalmente significa en el curso del tratamiento de una enfermedad o trastorno en un paciente, administrar un compuesto antagonista de TLR y un agente útil para tratar el trastorno o enfermedad que no disminuye el efecto inmunomodulador del compuesto antagonista de TLR. Dicho tratamiento de combinación también puede incluir más de una administración sencilla de un compuesto antagonista de TLR y/o independientemente un agente. La administración del compuesto antagonista de TLR y/o el agente puede ser por la misma o diferentes rutas.

El término "individuo" o "paciente" o "sujeto" o "mamífero" incluye un humano. Mamíferos generalmente incluyen pero no se limitan a, humanos, primates no humanos, ratas, ratones, gatos, perros, caballos, ganado, vacas, cerdos, ovejas y conejos.

El término "nucleosido" generalmente se refiere a compuestos que consisten de un azúcar, usualmente ribosa o deoxiribosa y una base de purina o pirimidina.

El término "nucleótido" generalmente se refiere a un nucleosido que comprende un grupo fosfato unido al azúcar.

Como se usa aquí, el término "nucleosido de pirimidina" se refiere a un nucleosido en donde el componente base del nucleosido es una base pirimidina (por ejemplo, citosina (C) o timidina (T) o uracilo (U)). De manera similar, el término "nucleosido de purina" se refiere a un nucleosido en donde el componente base del nucleosido es una base purina (por ejemplo, adenina (A) o guanina (G)).

Los términos "análogo" o "derivado" se pueden usar de manera intercambiable para generalmente referirse a cualquier nucleótido o nucleosido de purina y/o pirimidina que tiene una base modificada y/o azúcar. Una base modificada es una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo. Un azúcar modificado es cualquier azúcar que no es ribosa o 2'-deoxiribosa que se puede usar en la cadena principal para un oligonucleótido.

El término "que inhibe" o "que suprime" generalmente se refiere a una disminución en una respuesta o diferencia cualitativa en una respuesta, que puede de otra manera surgir de obtener y/o estimular una respuesta.

El término "enlazador no nucleótido" generalmente se refiere a cualquier enlace o radical que puede enlazar o ser enlazado a los oligonucleótidos diferentes a través de un enlace que contiene fósforo. Preferiblemente dicho enlazador es de aproximadamente 2 angstroms a aproximadamente 200 angstroms en longitud.

El término "enlace de nucleótido" generalmente se refiere a un enlace 3'-5' directo que conecta directamente los grupos 3' y 5' hidroxilo de dos nucleósidos a través de un enlace que contiene fósforo.

El término "motivo oligonucleótido" significa una secuencia de oligonucleótido, que incluye un dinucleótido. Un "motivo oligonucleótido que puede ser inmunoestimulador, pero para una o más modificaciones [o modificaciones descritas específicamente]" significa un motivo oligonucleótido que es inmunoestimulador en un oligonucleótido de origen, pero no en un oligonucleótido derivado, en donde el oligonucleótido derivado es derivado del oligonucleótido de origen por una o más modificaciones del oligonucleótido de origen.

Los términos "CpG, C*pG, C*pG* y CpG* se refieren a motivos oligonucleótidos que son inmunoestimuladores y comprenden citosina o un análogo de citosina y una guanina o un análogo de guanina.

El término "hipercolesterolemia" generalmente se refiere a la presencia de altos niveles de colesterol en la sangre. Hipercolesterolemia puede ser secundaria a muchas enfermedades y puede contribuir a muchas otras enfermedades, que incluyen pero no se limitan a enfermedad cardiovascular, aterosclerosis y pancreatitis. Colesterol en sangre elevado puede ser debido a niveles elevados de lipoproteinas, las partículas que portan colesterol y lípidos (por ejemplo triglicéridos) en la corriente sanguínea. Lipoproteinas incluyen, por ejemplo pero sin limitarse a, lipoproteina de alta densidad (HDL), lipoproteina de baja densidad (LDL) y lipoproteina de muy baja densidad (VLDL).

El término "hiperlipidemia" generalmente se refiere a la presencia de niveles anormales o elevados de triglicérido (TG), lípidos o lipoproteinas en la sangre. Niveles elevados o anormales de triglicérido, lipido y lipoproteina son comunes en la población general. Esfuerzo sustancial se ejerce para normalizar los niveles de triglicérido, lipido y lipoproteina en pacientes debido a la influencia de lipido y colesterol en enfermedades cardiovasculares y otras enfermedades.

El término "estatina" generalmente se refiere a una clase de fármacos usados para disminuir niveles de colesterol en personas con o en riesgo de desarrollar enfermedad cardiovascular. Estos compuestos disminuyen colesterol al inhibir la redactada HMG-CoA de enzima, la enzima limitante de velocidad en la trayectoria de síntesis de colesterol. Muchas estatinas son bien conocidas en la técnica e incluyen, sin limitación atorvastatina, cerivastatina (rivastatina), fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, y simvastatina.

El término "tratamiento" generalmente se refiere a un método destinado a obtener un beneficio o resultados deseados, que puede incluir alivio de síntomas o retardo o mejoramiento de la progresión de enfermedad. Como tal, y sin limitación, "tratamiento" incluye tratamiento paliativo y resultados benéficos que son temporales (es decir, no permanentes). Por ejemplo, niveles de colesterol pueden disminuir durante el tratamiento de acuerdo con la invención pero incrementar eventualmente una vez que se termina el tratamiento.

En algunas modalidades preferidas, el oligonucleótido comprende un motivo oligonucleótido y al menos una modificación, en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador (por ejemplo, CpG no metilado), pero para una o más modificaciones que suprimen la actividad del motivo oligonucleótido, con la condición de que el compuesto puede contener menos de 4 nucleótidos de guanosina consecutivos y preferiblemente menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos. Dichas modificaciones pueden estar en el término 5' oligonucleótido, en una secuencia que flanquea el motivo oligonucleótido, y/o dentro del motivo oligonucleótido. Estas modificaciones resultan en un compuesto antagonista de TLR que suprime estimulación inmune TLR-estimulada. Dichas modificaciones pueden ser para las bases, residuos de azúcar y/o la cadena principal de fosfato de nucleótidos/nucleósido que flanquean el motivo oligonucleótido o dentro del motivo oligonucleótido. En algunas modalidades, la modificación es una 2 -sustitución.

En algunas modalidades, cuando la modificación es una alquilación 2' o alcoxilación después la modificación no es adyacente 5' al motivo oligonucleótido, cuando la modificación es un enlace internucleósido no cargado entonces la modificación no es adyacente 5' al motivo oligonucleótido, y cuando la modificación es una alquilación 3' o alcoxilación entonces la modificación no es adyacente 5' o 3' al motivo oligonucleótido.

En otras modalidades de la invención, el compuesto antagonista de TLR es un oligonucleótido antisentido.

En algunas modalidades preferidas, la estructura general de un antagonista de TLR basado en oligonucleótido puede estar representado como, pero son limitarse a, en donde CG es un motivo inmunoestimulador y C es citosina o un derivado de nucleótido de pirimidina y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina; N1-N3 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido o derivado de nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlazador no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N N3 y/o N1-N3 y/o C y/o G sea un derivado de nucleótido; y además con la condición de que el compuesto puede contener menos de 4 nucleótidos de guanosina consecutivos y preferiblemente menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde la actividad estimuladora inmune de CG se suprime por el derivado de nucleótido o enlazador no nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30. Dichos antagonistas de TLR basados en oligonucleótido se describen en Solicitud de E.U.A. No. 11/549,048 (Publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2009/0060898), la descripción de la cual se incorpora explícitamente para referencia aquí (al grado de que existe cualquiera de las inconsistencia entre la solicitud actual y solicitud de E.U.A. No. 11/549,048, dichas inconsistencias se deben resolver de acuerdo con la solicitud actual).

En modalidades preferidas adicionales, antagonistas de TLR basados en oligonucleótido pueden contener un motivo inmunoestimulador modificado y se pueden representar como, pero sin limitarse a, la estructura 5'-Nm-N3N2NiCGN1N2N3-Nm-3', en donde CG es un motivo inmunoestimulador modificado y C es citosina, o un derivado de nucleótido de pirimidina seleccionado de 5-metil-dC, 2'-0-sustituido-C, 2'-0-metil-C, 2'-0-metoxietil-C, 2'-0-metoxietil-5-metil-C, y 2'-0-metil-5-metil-C, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina seleccionado de 2'-0-sustituido-G, 2'-0-metil-G, y 2'-0-metoxietil-G; N N3 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de C y/o G del motivo inmunoestimulador modificado es un derivado de nucleótido especificado anteriormente; y opcionalmente que contiene menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde el motivo inmunoestimulador modificado puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30. Dichos antagonistas de TLR basados en oligonucleótido se describe en solicitud provisional de E.U.A. No. 61/182,928, la descripción de la cual es explícitamente incorporada para referencia aquí (al grado de que existe cualquiera de las inconsistencias entre la solicitud actual y solicitud provisional de E.U.A. No. 61/182,928, dichas inconsistencias se deben resolver de acuerdo con la solicitud actual).

En modalidades adicionales de este aspecto de la invención, antagonista de TLR basado en oligonucleótido que contiene un motivo inmunoestimulador modificado comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde CG es el motivo inmunoestimulador modificado y C es citosina, o un derivado de nucleótido de pirimidina seleccionado de 5-metil-dC; 2'-0-sustituido-C, 2'-0-metil-C, 2'-0-metoxietoxi-C, 2'-0-metoxietil-5-metil-C, 2'-0-metil-5-metil-C, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina seleccionado de 2'-0-sustituido-G, 2'-0-metil-G, y 2'-0-metoxietoxi-G; con la condición de que al menos uno de C y/o G del motivo inmunoestimulador modificado es un derivado de nucleótido especificado anteriormente; y opcionalmente que contiene menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde el motivo inmunoestimulador modificado debe ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido.

En ciertas modalidades de la invención, compuestos antagonistas de TLR pueden comprender al menos dos oligonucleótidos enlazados de manera covalente por un enlace de nucleotido, o un enlazador no nucleotido, en sus 5'-, 3'- o 2'-extremos o por azúcar funcionalizada o por nucleobase funcionalizada vía un enlazador no nucleotido o un enlace nucleotido. Dichos compuestos antagonistas de TLR pueden ser lineares o ramificados. Como un ejemplo no limitante, el enlazador se puede unir al 3'-hidroxilo. En dichas modalidades, el enlazador comprende un grupo funcional, que está unido al 3'-hidroxilo por medio de un tipo de enlace basado en fosfato, por ejemplo, fosfodiéster, fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato, o por enlaces basados en no fosfato. Sitios posibles de conjugación para el nucleotido se indican en la fórmula I, posterior, en donde B representa una base heterocíclica y en donde la flecha apunta a P indica cualquier unión al fósforo.

Fórmula I En algunas modalidades, el enlazador no nucleósido es un enlazador de molécula pequeña, macromolécula o biomolécula, que incluye, sin limitación, polipéptídos, anticuerpos, lípidos, antígenos, alérgenos, y oligosacáridos. En algunas otras modalidades, enlazadores no nucleósido es un enlazador de molécula pequeña. Para propósitos de la invención, un enlazador de molécula pequeña es un radical orgánico que tiene un peso molecular de menos de 1 ,000 Da. En algunas modalidades, la molécula pequeña tiene un peso molecular de menos de 750 Da.

En algunas modalidades, el enlazador de molécula pequeña es un hidrocarburo alifático o aromático, ya sea que opcionalmente incluye, en la cadena lineal hacer contacto con los oligoribonucleótidos o anexados a estos, uno o más grupos funcionales que incluyen, pero no se limitan a, hidroxi, amino, tiol, tioeter, éter, amida, tioamida, éster, urea, o tiourea. El enlazador de molécula pequeña puede ser cíclico o acíclico. Ejemplos de enlazadores de molécula pequeña incluyen, pero no se limitan a, aminoácidos, carbohidratos, ciclodextrinas, adamantano, colesterol, haptenos y antibióticos. Sin embargo, para propósitos de describir el enlazador no nucleótido, el término "enlazador de molécula pequeña" no se destina a incluir un nucleósido.

En algunas modalidades, el enlazador no nucleótido es un enlazador alquilo o enlazador amino. En enlazador alquilo puede ser ramificado o no ramificado, cíclico o acíclico, sustituido o no sustituido, saturado o no saturado, quiral, aquiral o mezcla racémica. Los enlazadores alquilo pueden tener de aproximadamente 2 a aproximadamente 18 átomos de carbono. En algunas modalidades dichos enlazadores alquilo tienen de aproximadamente 3 a aproximadamente 9 átomos de carbono. Algunos enlazadores alquilo incluyen uno o más grupos funcionales que incluyen, pero no se limitan a, hidroxi, amino, tiol, tioeter, éter, amida, tioamida, éster, urea y tioéter. Dichos enlazadores alquilo pueden incluir pero no limitarse a, enlazadores 1 ,2-propanodiol, 1 ,2,3-propanotriol, 1 ,3-propanodiol, trietilenglicol hexaetilen glicol, polietilen glicol (por ejemplo, [-0-CH2-CH2-]n (n=1-9)), enlazadores de metilo, enlazadores de etilo, enlazadores de propilo, enlazadores de butilo o enlazadores de hexilo. En algunas modalidades, dichos enlazadores alquilo pueden incluir péptidos o aminoácidos.

En algunas modalidades, el enlazador no nucleótido puede incluir, pero no limitarse a, aquellos enlistados en el cuadro 2, en donde el antagonista de TLR basado en oligonucleótido se enlaza a través de un grupo hidroxilo presente en el enlazador no nucleótido.

CUADRO 2 Enlazadores no nucleotídicos representativos Glicerol (1 ,2,3-propanotriol) 1 ,1 ,1-tris(hidroximetil)nitrometano 1 ,2,4-butanotriol 1 ,1 ,1-tris(hidroximetil)propano -(h¡drox¡metil)-1 ,3-propanodiol -(h¡droximet¡l)-1 ,4-butanodiol 3-metil-1 ,3,5-pentanotriol 1 ,2,3-heptanotriol ,1 ,1 -tris(hidroximetil)etano 2-amino-2-(hidroximetil)-1 ,3-propanodiol N-[Tris(h¡droximet¡l)metil]acrilamida -1 ,3,5-ciclohexanotriol 1 ,3-d¡( C¡s-1 ,3,5-tr'i(h¡droximetil)ciclohexano ,5-di(h¡droximetil)fenol 1 ,2,4-trihidroxil-benceno 1,6-anhidro-p-D-glucosa 4,6-nitropirogalol Ácido 1 ,3,5-Tris(2-hidrox¡etil)-cianúr¡co ácido gálico 3,5,7-trihidroxiflavona 1 ,5-pentanodiol 1 ,3-propanodiol 2,4-pentanodiol 1 ,2-propanodiol 1 ,6-hexanodiol 1 ,3-butanodiol 1 ,5-hexanodiol 2,3-butanodiol 2,5-hexanodiol 1,7-heptanodiol -(1-am¡noprop¡l)-1,3-propanodiol 1 ,8-octanodiol 1,2-dideoxiribosa 1,9-nonanodiol 1,12-dodecanodiol Trietilenglicol ?? S, ramificador glicerol; B, ramificador Sin enlazador enlazador corto enlazador largo En algunas modalidades, el enlazador de molécula pequeña es glicerol o un homólogo de glicerol de la fórmula HO (CH2)o-CH(OH)-(CH2)p-OH, en donde o y p son independientemente números enteros de 1 a aproximadamente 6, de 1 a aproximadamente 4, o de 1 a aproximadamente 3. En algunas otras modalidades, el enlazador de molécula pequeña es un derivado de 1 ,3-diamino-2-hidroxipropano. Algunos de dichos derivados tienen la fórmula HO-(CH2)m-C(0)NH-CH2-CH(OH)-CH2-NHC(0)-(CH2)m-OH, en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 10, de 0 a aproximadamente 6, de 2 a aproximadamente 6, o de 2 a aproximadamente 4.

Algunos enlazadores no nucleótido de acuerdo con la invención permiten la unión de más de dos oligonucleótidos. Por ejemplo, el glicerol enlazador de molécula pequeña tiene tres grupos hidroxilo a los cuales los oligonucleótidos se pueden unir de manera covalente. Algunos antagonistas de TLR de acuerdo con la invención, por lo tanto, comprenden dos o más oligonucleótidos enlazados a un enlazador nucleótido o no nucleótido. Dichos antagonistas de TLR son referidos como que son "ramificados".

Compuestos antagonistas de TLR pueden comprender al menos dos oligonucleótidos enlazados no de manera covalente, tal como mediante interacciones electrostáticas, interacciones hidrófobas, interacciones de p-apilamiento, unión de hidrógeno y sus combinaciones. Ejemplos no limitantes de dichos enlaces no covalentes incluyen apareo de base Watson-Crick, apareo de base Hoogsteen y apilamiento de base.

En ciertas modalidades, nucleósidos de pirimidina en oligonucleótidos inmuno-reguladores usados en las composiciones y métodos de acuerdo con la invención tienen la estructura (II): en donde: D es un donador de enlace de hidrógeno; D' se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, donador de enlace de hidrógeno, aceptor de enlace de hidrógeno, grupo hidrófilo, grupo hidrófobo, grupo de separación de electrón y grupo donador de electrón; A es un aceptor de enlace de hidrógeno o un grupo hidrófilo; A' se selecciona del grupo que consiste de aceptor de enlace de hidrógeno, grupo hidrófilo, grupo hidrófobo, grupo de separación de electrón y grupo donador de electrón; X es carbono o nitrógeno; y S' es un anillo de azúcar de pentosa o hexosa, o un análogo de azúcar.

En ciertas modalidades, el anillo de azúcar se deriva con un radical de fosfato, radical de fosfato modificado, u otro radical enlazador adecuado para enlazar el nucleósido de pirimidina a otro nucleósido o análogo de nucleósido.

En algunas modalidades donadores de enlace de hidrógeno, sin limitación, -NH-, -NH2-, -SH y -OH. Aceptores de enlace de hidrógeno preferidos incluyen, sin limitación, C=O, C=S, y los átomos de nitrógeno de anillo de un heterociclo aromático, por ejemplo, N3 de citosina.

En algunas modalidades, (II) es un derivado de nucleósido de pirimidina. Ejemplos de derivados de nucleósido de pirimidina incluyen, sin limitación, 5-hidroxicitosina, 5-hidroximetilcitosina, N4-alquilcitosina o N4-etilcitosina, araC, 5-OH-dC, N3-Me-dC, y 4-tiouracilo. Derivados modificados químicos también incluyen, pero no se limitan a, derivados de timina o análogos de uracilo. En algunas modalidades, el radical azúcar S' en (II) es un derivado de azúcar. Derivados de azúcar adecuados incluyen, pero no se limitan a, trehalosa o derivados de trehalosa, hexosa o derivados de hexosa, arabinosa o derivados de arabinosa.

En algunas modalidades, los polinucleósidos de purina en los antagonistas de TLR usados en las composiciones y métodos de acuerdo con la invención tienen la estructura (III): en donde: D es un donador de enlace de hidrógeno; D' se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, donador de enlace de hidrógeno, y grupo hidrófilo; A es un aceptor de enlace de hidrógeno o un grupo hidrófilo; X es carbono o nitrógeno; cada L se selecciona independientemente del grupo que cosiste de C, O, N y S; y S' es un anillo de azúcar de pentosa o hexosa, o un análogo de azúcar.

En ciertas modalidades, el anillo de azúcar se deriva con un radical de fosfato, radical de fosfato modificado, u otro radical enlazador adecuado para enlazar el nucleósido de pirimidina a otro nucleósido o análogo de nucleósido.

En ciertas modalidades los donadores de enlace de hidrógeno incluyen, sin limitación, -NH-, -NH2-, -SH y -OH. En ciertas modalidades aceptores de enlace de hidrógeno incluyen, sin limitación, C=O, C=S, -NO2 y los átomos de nitrógeno de anillo de un heterociclo aromático, por ejemplo, N1 de guanina.

En algunas modalidades, (III) es un derivado de nucleósido de purina. Ejemplos de derivados de nucleósido de purina incluyen, sin limitación, análogos de guanina tal como 7-deaza-G, 7-deaza-dG, ara-G, 6-tio-G, Inosina, Iso-G, loxoribina, TOG(7-tio-8-oxo)-G, 8-bromo-G, 8-hidroxi-G, 5-aminoformicina B, oxoformicina, 7-metil-G, 9-p-clorofenil-8-aza-G, 9-fenil-G, 9-hexil-guanina, 7-deaza-9-bencil-G, 6-cloro-7-deazaguanina, 6-metoxi-7-deazaguanina, 8-aza-7-deaza-G(PPG), 2-(dimetilamino)guanosina, 7-metil-6-tioguanosina, 8-benciloxiguanosina, 9-Deazaguanosina, l-(B-D-ribofuranosil)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina, 1 -(2'-deoxi-p-D-ribofuranosil)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina. Derivados modificados químicamente también incluyen, pero no se limitan a. análogos de adenina tal como 9-bencil-8-hidroxi-2-(2-metoxietoxi)adenina, 2-amino-N2-0-, metiladenosina, 8-aza-7-deaza-A, 7-deaza-A, Vidarabina, 2-aminoadenosina, N1 -Metiladenosina, 8-Azaadenosina, 5-yodotubercidina, y N1-Me-dG. En algunas modalidades, el radical azúcar S' en (III) es un derivado de azúcar como se define para la fórmula II.

En ciertas modalidades de la invención, el antagonista de TLR comprende una secuencia de ácido nucleico que contiene al menos un nucleósido B-L-deoxi o 3'-deoxi nucleósido.

En ciertas modalidades de la invención, el antagonista de TLR comprende una secuencia de ácido nucleico que contiene al menos un dinucleótido seleccionado de CpG, C*pG, C*pG* y CpG*, en donde C es citosina o 2'-deoxicitidina, G es guanosina o 2'-deoxiguanosina, C* es 2'- deoxitimidina, 1 -(2'-deoxi-p-D-ribofuranosil)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina, 2'- dideoxi-5-halocitosina, 2'-dideoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, arabinocitidina 2'-deoxi-2'-sustituida, arabinocitidina 2'-O-sustituida, 2'-deoxi-5- hidroxicitidina, 2'-deoxi-N4-alqu¡l-citidina, 2'-deoxi-4-tiouridina, u otros análogos de nucleósido de pirimidina, G* es 2'-deoxi-7-deazaguanosina, 2'- deoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, 2'-deoxi-2'sustituida- arabinoguanosina, 2'-0-sustituida-arabinoguanosina, 2'- deoxiinosina, u otros análogos de nucleósido de purina, y p es un enlace internucleósido seleccionado del grupo que consiste de fosfodiéster, fosforotioato y fosforoditioato, y en donde la actividad de al menos un dinucleótido se regula por la secuencia de flanqueo.

Las secuencias de antagonistas de TLR seleccionadas dentro de estas estructuras generales que pueden ser útiles para la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aquellas mostradas en el cuadro 3.

CUADRO 3 SEQ ID NO: Secuencia 5 5'-CTATCTGACGTTCTCTGT-3' 7 5'-CTATCTGACGTTCTCTGT-3' 17 5'-CTATCTGACG-|TTCTCTGT-3' 37 5'-CTATCTGACG4TTCTCTGT-3' 39 5'-CTATCTGAC4GTTCTCTGT-3' 41 5 -CTATCTGAC5GTTCTCTGT-3' 43 5'-CTATCTGAC6GTTCTCTGT-3' 45 5'-CTATCTGACG5TTCTCTGT-3' 47 5'-CTATCTGAC7GTTCTCTGT-3' 64 5'-CTATCTAACGTTCTCTGT-3' G subrayada, A o U = 2'-OMe; T subrayada = 3'-OMe; = 3'-OMe; Gi = 7-deaza-dG; m=P-Me; A2, T2, C2 y G2 = B-L-desoxi nucleósido; Xi = abásico; X2 = enlazador de glicerol, X3 = C3-enlazador; C3 y G3 = 3'-deoxi-nucleósido; G4 = araG; C4 = araC; C5= 5-OH-dC; C6 = 1-(2'-deoxi-p-D- ribofuranosil)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina; G5 = N1-Me-dG; C7 = N3-Me-dC; U 1 = 3'-0Me; U2= dU; C1 = 2'-0-metil-C; C2 = 5-metil-dC; C3 = 2'-O-metil-5-metil-C; G1 = 2'-0-metil-G En algunas modalidades, antagonistas de TLR cada uno tienen de aproximadamente 6 a aproximadamente 35 residuos de nucleósido, preferiblemente de aproximadamente 9 a aproximadamente 30 residuos de nucleósido, más preferiblemente de aproximadamente 11 a aproximadamente 23 residuos de nucleósido. En algunas modalidades, los antagonistas de TLR tienen de aproximadamente 6 a aproximadamente 18 residuos de nucleósido.

En un segundo aspecto, la invención provee un método para tratar terapéuticamente una enfermedad asociada con concentración de lípido en sangre alta y/o concentración de colesterol en sangre alta en un mamífero, dicho método comprende inhibir la señalización de TLR en el mamífero, como se describe en el primer aspecto de la invención. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe mediante la administración al mamífero de uno o más compuestos antagonistas de TLR de acuerdo con la invención en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR, u otra proteína en la trayectoria de señalización de TLR. En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, la enfermedad es hipercolesterolemia, hiperlipidemia, enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes o presión sanguínea alta.

En un tercer aspecto, la invención provee un método para prevenir una enfermedad asociada con concentración de lípido en sangre y/o concentración de colesterol en sangre alta en un mamífero que tiene colesterol en sangre y/o lípido en sangre elevados, dicho método que comprende inhibir la señalización de TLR en el mamífero como se describe en el primer aspecto de la invención. En algunas modalidades, la señalización de TLR se inhibe mediante la administración al mamífero de uno o más compuestos antagonistas de TLR de acuerdo con la invención en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En algunas modalidades la señalización de TLR se inhibe al inhibir la expresión de uno o más TLR, u otra proteína en la trayectoria de señalización de TLR. En ciertas modalidades preferidas, la enfermedad es hipercolesterolemia, hiperlipidemia, enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes o presión sanguínea alta.

En algunas modalidades, los métodos de acuerdo con la invención además comprenden administrar al mamífero una o más composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

En los métodos de acuerdo con la invención, la administración del compuesto antagonista de TLR puede ser mediante cualquier ruta adecuada, que incluyen, sin limitación, parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, infraocular, intratraqueal, intrarectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal. La administración de las composiciones terapéuticas del compuesto antagonista de TLR se puede llevar a cabo usando procedimientos conocidos en dosificaciones y por periodos de tiempo efectivos para reducir los síntomas o marcadores sustitutos de la enfermedad. Cuando se administra sistémicamente, la composición terapéutica preferiblemente se administra en una dosificación suficiente para unir un nivel de sangre del compuesto antagonista de TLR de aproximadamente 0.0001 micromolar a aproximadamente 10 micromolares. Para administración localizada, muchas concentraciones mucho más bajas que esta pueden ser efectivas, y concentraciones mucho más altas pueden ser toleradas. En algunas modalidades preferidas, una dosificación total del compuesto antagonista de de TLR varía de aproximadamente 0.001 mg por paciente por día a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por día. Puede ser deseable administrar de manera simultánea, o secuencial una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los antagonistas de TLR a un individuo como un episodio de tratamiento sencillo.

El compuesto antagonista de TLR se puede administrar o usar en combinación con otros compuestos que incluyen, sin limitación, uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esferoidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

Los métodos de acuerdo con la invención son útiles para el tratamiento profiláctico o terapéutico de enfermedad de humano y/o animal. Por ejemplo, los métodos pueden ser útiles para aplicaciones de adulto, pediátricas y veterinarias.

En cualquiera de los métodos de acuerdo con la invención, el compuesto antagonista de TLR se puede administrar en combinación con cualquier otro agente útil para tratar la enfermedad o condición que no disminuye la actividad antagonista del compuesto antagonista de TLR. En cualquiera de los métodos de acuerdo con la invención, el agente útil para tratar la enfermedad o condición incluye, pero no se limita a, uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones, que pueden incrementar la especificidad o magnitud de la respuesta al antagonista de TLR. Por ejemplo, en el tratamiento de hiperlipidemia y/o hipercolesterolemia, se contempla que el compuesto antagonista de TLR se puede administrar en combinación con uno o más compuestos que disminuyen de lípido y/o colesterol, que incluyen, sin limitación, estatinas, agentes terapéuticos dirigidos y/o anticuerpos monoclonales.

Los siguientes ejemplos se destinan a ilustrar además ciertas modalidades ejemplares de la invención y no se destinan a limitar el alcance de la invención. Por ejemplo, antagonistas de TLR representativos se muestran en los siguientes ejemplos, pero no limitan el alcance de TLR para el cual el antagonista de la invención es aplicable.

Las patentes y publicaciones citadas aquí representan conocimiento común en el campo y se incorporan para referencia en su totalidad. Cualquier conflicto entre las enseñanzas de las referencias citadas y la especificación actual se debe resolver a favor de la última.

EJEMPLO 1 Síntesis de oligonucleótidos que contienen radicales reguladores inmunes Todos los oligonucleótidos sintéticos se sintetizan de acuerdo con los procedimientos estándar (véase, por ejemplo, publicación de patente de E.U.A. No. 2004/0097719).

Se sintetizan oligonucleótidos en una escala de 1 µ?t? usando un sintetizador de ADN automático (Expedite 8909; PerSeptive Biosystems, Framingham, Mass.), siguiendo los procedimientos de síntesis lineal o síntesis paralela estándares (véase, por ejemplo, figuras 5 y 6 de publicación de patente de E.U.A. No. 2004/0097719).

Deoxiribonucleósido fosforamiditas se obtienen de (Aldrich-Sigma, St Louis, Mo). 1',2'-dideoxiribosa fosforamidita, propil-1-fosforamidita, 2-deoxiuridina fosforamidita, 1 ,3-bis-[5-(4,4'-dimetoxitritil)pentilamidil]-2-propanol fosforamidita y metil fosponamidita se obtienen de Glen Research (Sterling, Va.). p-L-2'-deoxiribonucleosido fosforamidita, alfa-2'-deoxiribonucleosido fosforamidita, mono-DMT-glicerol fosforamidita y di-DMT-glicerol fosforamidita se obtienen de ChemGenes (Willmington, Mass.). (4-Aminobutil)-1 ,3-propanediol fosforamidita se obtiene de Clontech (Palo Alto, Calif.). Arabinocitidina fosforamidita, arabinoguanosina, arabinotimidina, y arabinouridina se obtienen de Reliable Pharmaceutical (St. Louis, Mo.). Arabinoguanosina fosforamidita, arabinotimidina fosforamidita y arabinouridina fosforamidita se sintetizan en Idera Pharmaceutical, Inc. (Cambridge, Mass.) (Noroña et al (2000) Biochem. 39:7050-7062).

Todos los nucleósido fosforamiditas se caracterizan por espectros 31 P y espectros 1H RMN. Nucleósidos modificados se incorporan en sitios específicos usando ciclos de acoplamiento normales. Después de la síntesis, los oligonucleótidos se desprotegen usando hidróxido de amonio concentrado y se purifican mediante HPLC de fase inversa, seguido por diálisis. Oligonucleótidos purificados como forma de sal de sodio se liofilizan antes del uso. La pureza se analiza por CGE y MALDI-TOF EM.

EJEMPLO 2 Actividades de disminución de colesterol y lipido de antagonistas de TLR in vivo.

Ratones C57BL/6 hembra de 5 semanas de edad se obtienen de The Jackson Laboratory. Todos los experimentos animales se realizan como por líneas guía de protocolos aprobados ICAUC Idera Pharmaceutical. Los ratones se alimentan con una dieta Western que consiste de 60% de manteca de cerdo (Research Diets, New Brunswick, NJ). Antagonista de TLR se administra a ratones en dosis de 5 y 20 mg/kg, s.c. dos veces una semana por cinco semanas iniciando en la semana 6 a la semana 10. Lipitor® se administra a ratones en una dosis de 20 mg/kg i.g. cinco veces una semana durante cinco semanas. El grupo de control de ratones se inyecta con PBS. Cada grupo tiene cinco ratones. Se colecta la sangre durante el curso del estudio y en la semana 12 cuando el experimento se termina. El nivel de colesterol en suero se determina en cada muestra por "Kit de ensayo de colesterol EnzyChrom™" de BioAssay System.

CUADRO A Niveles de colesterol total en suero (mq/dl ± SD) Semana PBS Antagonista de TLR Lipitor® 5 mg/kg 20 mg/kg 6 145 ± 6 135 ±16 155 ± 1 140 ± 6 8 185 ± 2 167 ± 1 132 ± 7 164 ± 1 10 197 + 8 177 + 5 145 + 3 182 ± 5 12 234 ± 1 1 179 ± 7 162 ± 8 189 ± 23 El cuadro A representa el colesterol en suero total en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 2. Brevemente, los animales se alimentan de una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg), PBS o Lipitor® (20 mg/kg) durante 12 semanas. Muestras de sangre se colectan sobre el curso del estudio de doce semanas y se usan para determinar el colesterol en suero total. Estos datos demuestran que la administración de un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en el colesterol en suero total después de la administración in vivo.

CUADRO B % de cambio en la semana 6 Semana PBS Antagonista de TLR Lipitor® 5 mg/kg 20 mg/kg 8 28 24 -15 17 10 36 31 -7 30 12 61 32 5 35 El cuadro B representa el cambio porcentual en colesterol en suero total sobre el tiempo, en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 2. Brevemente, los animales se alimentan con una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg), PBS o Lipitor® (20 mg/kg) durante 12 semanas. Se colectan muestras de sangre sobre el curso del estudio de doce semanas y se usan para determinar el colesterol en suero total. Estos datos demuestran que un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en colesterol en suero total después de la administración in vivo.

EJEMPLO 3 Actividades de disminución de colesterol, lipoproteína, lípido y glucosa de antagonistas de TLR in vivo Ratones C57BL/6 o ApoE-deficientes hembra de 5 semanas de edad se obtienen de The Jackson Laboratory. Todos los experimentos de animales se realizan como por líneas guía de protocolos aprobados ICAUC de Idera Pharmaceutical. Ratones se alimentan con una dieta Western que consiste de 60% de manteca de cerdo (Research Diets, New Brunswick, NJ). Se administran antagonistas a ratones en dosis de 15 mg/kg s.c. dos veces una semana durante cinco semanas iniciando en la semana 6 a semana 10. Grupo de control de ratones se inyecta con PBS. Cada grupo tiene 15 ratones. Se colecta sangre cada semana después de ayuno toda la noche de ratones en la semana 12 cuando el experimento se termina y niveles de suero de colesterol, HDL, LDL, ALT, AST, triglicérido y glucosa se determina en' Queso Laboratories.

CUADRO C Análisis de suero de ratones C57BL/6 Col, mg/dl HDL, mg/dl LDL, mg/dl TG, mg/dl Glucosa, mg/dl HDL-C/LDL-C Semana PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta 6 81 82 59 57 5 3 86 108 149 159 1 1.8 19 7 114 104 86 77 7 13 105 72 184 163 12.3 5.9 8 91 75 77 55 5 6 42 72 128 62 15.4 9.2 9 84 84 70 72 6 - 40 49 70 47 1 1.7 - 10 122 62 96 41 15 14 55 37 119 1 17 6.4 2.9 11 95 62 85 47 - 7 55 41 53 85 6.7 12 101 60 91 46 - 6 64 40 48 86 -- 7.7 El cuadro C representa el colesterol en suero total, lipoproteína de alta densidad (HDL), lipoproteína de baja densidad (LDL), triglicérido (TG), glucosa, y la relación de HDL-colesterol a LDL-colesterol (HDL-C/LDL-C) en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3. Brevemente, ratones C57/BIJ6 se alimentan con una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg) o PBS durante 12 semanas. Muestras de sangre se colectan sobre el curso del estudio de doce semanas y se usan para determinar el colesterol en suero total, HDL, LDL, TG y concentraciones de glucosa. Estos datos demuestran que un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en colesterol en suero total, LDL y TG y mantener o disminuir concentraciones de glucosa en sangre después de la administración in vivo.

CUADRO D Suero de ratones 57B/6: % de cambio Col, mq/dl HDL. mq/dl LDL. mq/dl TG. mq/dl Glucosa, mq/dl Sem. PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta 7 40.7 26.8 45.7 35.1 40 333.3 22.1 -33.3 23.5 2.5 8 12.3 -8.5 30.5 -3.5 0 100 -45.3 -33.3 14.1 -61 9 3.7 2.4 18.6 26.3 20 -100 -53.5 -54.6 -53 -70.4 10 50.6 -24.4 62.7 -28.1 200 366.7 -36.1 -65.7 -20.1 -26.4 11 17.3 -24.4 44.1 -17.5 -100 133.3 -36.1 -62 -64.4 -46.5 12 24.7 -26.8 54.2 -19.3 -100 100 -25.6 -63 -67.8 -45.9 El cuadro D representa los cambios porcentuales en colesterol en suero total, lipoproteína de alta densidad (HDL), lipoproteína de baja densidad (LDL), triglicérido (TG), y glucosa en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3.

CUADRO E Análisis de suero en ratones deficientes ApoE El cuadro E representa el colesterol en suero total, lipoproteína de alta densidad (HDL), lipoproteína de baja densidad (LDL), triglicérido (TG), glucosa, y la relación de HDL-colesterol a LDL-colesterol (HDL-C/LDL-C) en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3. Brevemente, ratones ApoE- deficientes se alimentan con una dieta Western y se administra un antagonista de TLR (5 mg/kg o 20 mg/kg) o PBS durante 12 semanas. Muestras de sangre se colectan sobre el curso del estudio de doce semanas y se usan para determinar el colesterol en suero total, HDL, LDL, TG y concentraciones de glucosa. Estos datos demuestran que un antagonista de TLR puede inhibir una elevación en colesterol en suero total, LDL, TG y mantener o disminuir las concentraciones de glucosa en sangre después de la administración in vivo a mamíferos con una predisposición para desarrollar hipercolesterolemia y/o hiperlipidemia.

CUADRO F Ratones deficientes-ApoE: % de cambio Col, mg/dl HDL, mq/dl LDL, mg/dl TG, mg/dl Glucosa, mg/dl Sem. PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta PBS Anta 7 153.5 106.3 250 202.9 133.4 81.8 6.8 15.5 0.6 -12.1 8 133.2 108.9 252.9 205.7 107.1 88.1 -34 -39.8 -72.5 -66.1 9 120.1 105.6 208.8 197.4 103.9 86.9 -51.5 -51.5 -69.7 -50.6 10 124 28 261.8 97.1 92.8 13.4 -47.6 -53.4 -24.7 -49.4 11 116.2 26.9 211.8 114.3 94 5.1 4.9 -60.2 -10.7 -48.9 12 248.5 35.4 288.2 114.3 249.3 16.7 46.6 -60.2 -10.1 -59.2 El cuadro F representa los cambios porcentuales en colesterol en suero total, lipoproteína de alta densidad (HDL), lipoproteína de baja densidad (LDL), triglicérido (TG), y glucosa en animales tratados de acuerdo con el ejemplo 3.

EJEMPLO 4 Actividades de disminución de peso corporal de antagonistas de TLR in vivo Ratones C57BL/6 o ApoE-deficientes hembra de 5 semanas de edad se obtienen de The Jackson Laboratory. Todos los experimentos de animales se realizan como por líneas guía de protocolos aprobados ICAUC de Idera Pharmaceutical. Ratones se alimentan con una dieta Western que consiste de 60% de manteca de cerdo (Research Diets, New Brunswick, NJ). Se administra antagonista a ratones en dosis de 15 mg/kg s.c. dos veces una semana durante cinco semanas iniciando en la semana 6 a semana 10. Grupo de control de ratones se inyecta con PBS. Cada grupo tiene 15 ratones. Se mide el peso corporal.

Claims (48)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de un inhibidor de la actividad de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR, en la fabricación de un medicamento para disminuir concentraciones en sangre de colesterol, lípidos y/o lipoproteína de baja densidad en un mamífero que tiene concentraciones elevadas de los mismos, en donde la señalización de TLR se inhibe en el mamífero.

2. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el TLR se selecciona del grupo que consiste de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

3. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde la proteína involucrada en señalización de TLR se selecciona del grupo que consiste de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGF , quinasa ???, ??? y NF- ??.

4. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor es un compuesto seleccionado del grupo que consiste de una molécula pequeña; un anticuerpo; un derivado de ciclohexano; un derivado de lípido, un oligonucleótido sintético que comprende un triplete "CCT" y un triplete "GGG", un oligonucleótido sintético que comprende regiones que contienen secuencias "GGG" y/o "GGGG" y/o "GC", un oligonucleótido sintético que es metilado; un sintético; oligonucleótido inmunoinhibidor, que tiene una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador que puede ser inmunoestimulador pero para la modificación; y un oligonucleótido inmunoinhibidor sintético, que contiene un motivo inmunoestimulador modificado que comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde el motivo inmunoestimulador modificado puede ser inmunoestimulador pero para la modificación.

5.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 4, en donde la molécula pequeña es cloroquina o hidroxicloroquina.

6.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor es un compuesto antagonista de TLR que tiene la estructura 5'-Nm-N3N2NiCGN N3-Nm-3', en donde CG es un motivo oligonucleótido, C es citosina o un derivado de nucleótido de pirimidina o un enlace no nucleótido, y G es guanosina un derivado de nucleótido de purina o enlace no nucleótido; NrN3 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N1-N3 y/o N1-N3 y/o C y/o G sea un derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30.

7.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor es un compuesto antagonista de TLR que contiene un motivo inmunoestimulador modificado que comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde GC es el motivo inmunoestimulador modificado, en donde C es citosina, o un derivado de nucleótido de pirimidina seleccionado de 5-metil-dC; 2'-0-sustituido-C, 2'-0-metil-C, 2'-0-metoxietoxi-C, 2'-0-metoxietil-5-metil-C y 2'-0-metil-5-metil-C, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina seleccionado de 2'-0-sustituido-G, 2'-0-metil-G, y 2'-0-metoxietoxi-G; con la condición de que al menos uno de C y/o G del motivo inmunoestimulador modificado es un derivado de nucleótido especificado; y opcionalmente que contiene menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde el motivo inmunoestimulador modificado debe ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido.

8.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, infraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

9.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos anti- inflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

10. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 9, en donde la composición que disminuye colesterol es una estatina.

11. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor es un inhibidor de la expresión de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR.

12. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 1 , en donde el TLR se selecciona del grupo que consiste de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

13. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde la proteína involucrada en señalización de TLR se selecciona del grupo que consiste de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGF , quinasa ???, ??? y NF- ??.

14.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

15.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

16.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde la composición que disminuye colesterol es una estatina.

17. - El uso de un inhibidor de la actividad de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR, en la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero que tiene una enfermedad seleccionada de enfermedad cardiaca coronaria, arteriesclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes y presión sanguínea alta, en donde la señalización de TLR se inhibe en el mamífero.

18. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el TLR se selecciona del grupo que consiste de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

19. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde la proteína involucrada en señalización de TLR se selecciona del grupo que consiste de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y NF- ??.

20. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el inhibidor es un compuesto seleccionado del grupo que consiste de una molécula pequeña; un anticuerpo; derivado de ciclohexano; un derivado de lípido, un oligonucleótido sintético que comprende un triplete "CCT" y un triplete "GGG", un oligonucleótido sintético que comprende regiones que contienen secuencias "GGG" y/o "GGGG" y/o "GC", un oligonucleótido sintético que es metilado o un sintético; oligonucleótidos inmunoinhibidores, que tienen una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador que puede ser inmunoestimulador pero para la modificación; y un oligonucleótido inmunoinhibidor sintético, que contiene un motivo inmunoestimulador modificado que comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde el motivo inmunoestimulador modificado puede ser inmunoestimulador pero para la modificación.

21. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 20, en donde la molécula pequeña es cloroquina o hidroxicloroquina.

22. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el inhibidor es un compuesto antagonista de TLR que tiene la estructura 5'-Nm-N3N2N1CGN1N2N3-Nrn-3', en donde CG es un motivo oligonucleótido y C es citosina o un derivado de nucleótido de pirimidina o un enlace no nucleótido, y G es guanosina un derivado de nucleótido de purina o enlace no nucleótido; N1-N3 y N1-N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N N3 y/o N1-N3 y/o C y/o G sea un derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30.

23.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el inhibidor es un compuesto antagonista de TLR que contiene un motivo inmunoestimulador modificado que comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde GC es el motivo inmunoestimulador modificado, en donde C es citosina, o un derivado de nucleótido de pirimidina seleccionado de 5-metil-dC; 2'-0-sustituido-C, 2'-0-metil-C, 2'-0-metoxietoxi-C, 2'-0-metoxietil-5-metil-C y 2'-0-metil-5-metil-C, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina seleccionado de 2'-0-sustituido-G, 2'-0-metil-G, y 2'-O-metoxietoxi-G; con la condición de que al menos uno de C y/o G del motivo inmunoestimulador modificado es un derivado de nucleótido especificado; y opcionalmente que contiene menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde el motivo inmunoestimulador modificado debe ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido.

24.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

25.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípido, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

26.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde la composición que disminuye colesterol es una estatina.

27.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el inhibidor es un inhibidor de la expresión de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR.

28.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 27, en donde el TLR se selecciona del grupo que consiste de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

29. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 27, en donde la proteína involucrada en señalización de TLR se selecciona del grupo que consiste de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y NF- ??.

30. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 27, en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intraocular, ¡ntratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

31. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 27, en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen los lípidos, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

32. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 31 , en donde la composición que disminuye el colesterol es una estatina.

33. - El uso de un inhibidor de la actividad de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR, en la fabricación de un medicamento para prevenir una enfermedad en un mamífero, en donde la enfermedad se selecciona de enfermedad cardiaca coronaria, arteriosclerosis, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, diabetes y presión sanguínea alta, en donde la señalización de TLR se inhibe en el mamífero.

34. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el TLR se selecciona del grupo que consta de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

35. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde la proteína involucrada en la señalización de TLR se selecciona del grupo que consta de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGF , quinasa ???, ??? y NF-

36. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el inhibidor es un compuesto seleccionado del grupo que consta de una molécula pequeño; un anticuerpo; un derivado de ciclohexeno; un derivado de lípido, un oligonucleótido sintético que comprende un triplete "CCT" y un triplete "GGG"; un oligonucleótido sintético que comprende regiones que contienen secuencias "GGG" y/o "GGGG" y/o "GC"; un oligonucleótido sintético que es metilado o un sintético; oligonucleótidos inmunoinhibidores, que tienen una o más modificaciones químicas en la secuencia que flanquea un motivo inmunoestimulador que puede ser inmunoestimulador pero para la modificación; y un oligonucleótido inmunoinhibidor sintético, que contiene un motivo inmunoestimulador modificado que comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde el motivo inmunoestimulador modificado puede ser inmunoestimulador pero para la modificación.

37. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 36, en donde la molécula pequeña es cloroquina o hidroxicloroquina.

38. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el inhibidor es un compuesto antagonista TLR que tiene la estructura: en donde: CG es un motivo oligonucleótido y C es citosina o un derivado de nucleótido de pirimidina o enlace no nucleótido, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina o enlace no nucleótido; N 1-N3 y N -N3, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; Nm y Nm, en cada ocurrencia, es independientemente un nucleótido, derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; con la condición de que al menos uno de N N3 y/o N1-N3 y/o C y/o G sea un derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; en donde el motivo oligonucleótido puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido o enlace no nucleótido; y en donde m es un número entero de 0 a aproximadamente 30.

39. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el inhibidor es un compuesto antagonista de TLR que contiene un motivo inmunoestimulador modificado comprende uno o más motivos inmunoestimuladores modificados, en donde CG es el motivo inmunoestimulador modificado, en donde C es citosina, o un derivado de nucleótido de pirimidina seleccionado de 5-metil-dC, 2'-0-sustituido-C, 2'-0-metil-C, 2'-0-metoxietoxi-C, 2'-0-metoxietil-5-metil-C, 2'-0-metil-5-metil-C, y G es guanosina o un derivado de nucleótido de purina seleccionado de 2 -0-sustituido-G, 2'-0-metil-G, y 2'-0-metoxietoxi-G¡ con la condición de que al menos uno de C y/o G del motivo inmunoestimulador modificado es un derivado de nucleótido especificado; y opcionalmente que contiene menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en donde el motivo inmunoestimulador modificado puede ser inmunoestimulador pero para el derivado de nucleótido.

40. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, infraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

41. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen lípidos, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

42. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 41 , en donde la composición que disminuye el colesterol es una estatina.

43. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el inhibidor es un inhibidor de la expresión de uno o más TLR o una proteína involucrada en la señalización de TLR.

44. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 43, en donde el TLR se selecciona del grupo que consta de TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 y TLR9.

45.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 43, en donde la proteína involucrada en la señalización de TLR se selecciona del grupo que consta de MyD88, IRAK, IRF, TRAF, TGFp, quinasa ???, ??? y NF-

46.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 43, en donde el medicamento se adapta para ser administrable por una ruta de administración seleccionada de parenteral, suministro mucosal, oral, sublingual, transdérmica, tópica, inhalación, intranasal, aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, por pistola génica, parche dérmico o en gotas para los ojos o forma de enjuague bucal.

47. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 43, en donde el medicamento además se adapta para ser administrable con uno o más compuestos o composiciones que disminuyen los lipidos, compuestos o composiciones que disminuyen colesterol, diuréticos, compuestos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID), estatinas, anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, péptidos, proteínas o vectores de terapia génica o sus combinaciones.

48. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 47, en donde la composición que disminuye el colesterol es una estatina.