MX2011002636A - 4-amino-3-(imidazoil)-pirazolo[3,4-d]pirimidinas. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan compuestos que actúan como potentes antagonistas del receptor de CCR1, y tienen actividad antiinflamatoria in vivo. Los compuestos son derivados de 4-amino-3-imidazoil-pirazolo [3,4-d]pirimidina y son útiles en composiciones farmacéuticas, métodos para el tratamiento de enfermedad mediada por CCR1 y como controles en ensayos para la identificación de antagonistas de CCR1 competitivos.

Description

4-AMINO-3- (I IDAZOIL) -PIRAZOLO [3, 4-D] PIRIMIDINAS REFERENCIAS CRUZADAS A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de la U.S. Serie No. 61/096,191 presentada en septiembre 11 de 2008; cuyo contenido se incorpora en la presente mediante la referencia .

DECLARACIÓN EN CUANTO A LOS DERECHOS A LAS INVENCIONES REALIZADAS BAJO INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO FEDERALMENTE . PATROCINADOS No Aplicable ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos, composiciones ¡farmacéuticas que contienen uno o más de esos compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables, que son efectivos para inhibir el enlace de diversas quimosinas, tales como MIP-l , leucotactina, MPIF-1 y RANTES, al receptor CCRl. Como antagonistas o moduladores para el receptor CCRl, los compuestos y composiciones tienen utilidad para tratar condiciones y enfermedades inflamatorias y de trastornos inmunes .

La salud humana depende , de la capacidad del cuerpo para . detectar y destruir patógenos externos que de otra manera podrían tomar valiosos recursos del individuo y/o inducir enfermedad. El sistema inmune, que comprende leucocitos (glóbulos blancos (WBCs) : linfocitos T y B, monocitos, granulocitos macrófagos, células K, mastocitos, células dendríticas, y células inmunes derivadas (por ejemplo osteoclastos) ) , tejidos linfoides y vasos linfoides, es el sistema de defensa del cuerpo. Para combatir la infección, los glóbulos blancos circulan a través de todo el cuerpo para detectar patógenos. Una vez detectado un patógeno, las células inmunes innatas y las células T citotóxicas en particular, se reclutan hacia el sitio de infección para destruir al patógeno. Las quimosinas actúan como guías moleculares para el reclutamiento y la activación de las células inmunes, tales como linfocitos, monocitos y granulocitos,, identificando los sitios en donde existen patógenos .

A pesar de la regulación de patógenos del sistema inmune, puede desarrollarse cierta señalización inapropiada de quimosina y se ha atribuido la activación o sostenimiento de trastornos inflamatorios, tales como artritis reumatoide, esclerosis múltiple y otros. Por ejemplo,, en la artritis reumatoide, la acumulación no regulada de quimosina en las articulaciones óseas atrae y activa macrófagos y células T de infiltración. Las actividades de estas células inducen una proliferación celular sinovial que conduce, al menos en parte, a inflamación y eventual pérdida de hueso y cartílago (ver, DeVries, M.E., et al., Semin Immunol 11(2) :95-104 (1999)) . Un distintivo de algunas enfermedades desmielinizantes , tales como la esclerosis múltiple, es el reclutamiento de monocito/maerófago y célula T mediado por quimosina hacia el sistema nervioso central (ver, Kennedy, et al., J. Clin. Immunol., 19 (5) :273-279 (1999)) . El reclutamiento de quimosina de WBCs destructivos en trasplantes sé ha implicado en su subsecuente rechazo. Ver, DeVries, M.E.. et al., ibid. Debido a que las quimosinas juegan papeles importantes en la inflamación y en el desarrollo de linfocitos, la capacidad para manipular específicamente su actividad tiene un enorme impacto en el mejoramiento y la detención de enfermedades que actualmente no tienen un tratamiento satisfactorio. Además, el rechazo al trasplante puede minimizarse sin los generalizados y problemáticos efectos de costosos farmacéuticos inmunosupresores .

El metabolismo óseo depende de la actividad general de los osteoblastos que controlan la formación del hueso y los osteoclastos que controlan la resorción ósea. Se considera que la anormalidad del metabolismo óseo es ocasionada por un desbalance de la formación del hueso y de la resorción ósea. La osteoporosis (y la osteoporosis post-menopáusica) , la hipercalcemia, la enfermedad de Paget, la osteodistrofia renal, la artritis reumatoide, la osteoartritis , la metástasis ósea lítica, el mieloma múltiple y lo similar, se conocen como enfermedades que acompañan la anormalidad del metabolismo óseo. La osteoporosis es una enfermedad típica ocasionada · por tal anormalidad de metabolismo óseo. Esta enfermedad se genera cuando la resorción ósea por osteoclastos excede 'la formación ósea por osteoblastos . La enfermedad se caracteriza por una disminución tánto en el material calcificado del hueso como en la matriz ósea. Se cree que el CCRl juega un papel en el reclutamiento de los precursores de osteoclasto y en su maduración, y la inhibición de este proceso puede mejorar la enfermedad (Vallet et al., Blood, 110:3744-3752 (2007)) . El secuestro adicional de células de mieloma múltiple en la médula ósea conduce al reclutamiento de osteoclastos hacia estos sitios, proporcionando un circuito de retroalimentacion para la proliferación del mieloma, y estimulando la descalcificación (Menú et al., Clin Exp Metastases, 23:291-300 (2006)) .

Las quimosinas, un grupo de más de 40 péptidos pequeños (7 a 10 kD) , ligan los receptores expresados principalmente en WBCs o células inmunes derivadas, y señalan a través de cascadas de señalización acopladas a proteína G para mediar sus funciones de quimiotaxina y quimioestimulantes .

Los receptores pueden enlazar más de un ligando; por ejemplo, el receptor CCRl liga a RA TES (célula T normal expresada regulada en activación) , MlP-la (proteína inflamatoria de macrófago) , MPIF-l/CL 8, y quimosinas de leucotactina (entre otras con menores afinidades) . Actualmente, se conocen 24 receptores de quimosina. El número absoluto de quimosinas, los múltiples receptores de enlace de ligando y los diferentes perfiles de receptor en células inmunes, permiten respuestas inmunes estrechamente controladas y específicas. Ver Rossi et al., Ann. Rev. Immunol., 18 (1) :217-242 (2000). La actividad de la quimosina puede controlarse a través de la modulación de sus receptores correspondientes, tratando enfermedades inflamatorias e inmunológicas relacionadas y permitiendo trasplantes de órganos y tejidos.

El receptor CCRl y sus ligandos de quimosina, incluyendo, por ejemplo MIP-la, MPIF-l/CKp8, leucotactina y RA TES, representan significativos objetivos terapéuticos (ver Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003)) ya que, se han implicado en la artritis reumatoide, el rechazo de trasplante (ver, DeVries, M.E. et al., ibíd. ) , y esclerosis múltiple (ver, Fischer et al., J. Neuroimmunol . 110(1-2) .195-208 (2000); Izikson et al., J. Exp . Med. , 192 (7) : 1075-1080 (2000); y Rottman et al., Eur, J. Immunol., 30 (8) :2372-2377 (2000). De hecho, se han descubierto anticuerpos bloqueadores de función, ligandos del receptor de quimosina modificados y pequeños compuestos orgánicos, de los cuales algunos han demostrado prevenir o tratar con éxito algunas enfermedades mediadas por güimosina (revisado en Rossi et al., ibíd.)., Notablemente, en un modelo experimental de artritis reumatoide, disminuye el desarrollo de la enfermedad cuando se administra un ligando RANTES modificado bloqueador de señalización (ver Plater-Zyberk et al., Immunol Lett., 57 (1-3 ) : 117-120 (1997)) . Aunque las terapias de anticuerpo bloqueador de función y de péptido pequeño son promisorias, éstas sufren de riesgos de degradación, vidas medias extremadamente cortas una vez administradas y un costo prohibitivo para su desarrollo y elaboración, característicos de la mayoría de las proteínas. Son preferibles los pequeños compuestos orgánicos ya que frecuentemente tienen vidas medias más largas in vivo, requieren menores dosis para ser efectivos, frecuentemente pueden administrarse y consecuentemente son menos caros. Algunos antagonistas orgánicos de CCRl se han descrito previamente (ver, Hesselgesser et al., J. Biol . Chem. , 273 (25) :15687-15692 (1998); Ng et al., J. Med. Chem., 42 (22) :4680-4694 (1999); Liang et al., J. Biol. Chem. 275 ( 25) :19000-19008 ( 2000); y Liang, et al., Eur. J. Pharmacol., 389(1) : 1-49 (2000)) . En vista de la efectividad demostrada para el tratamiento de enfermedades en modelos animales (ver, Liang et al., J. Biol. Chem., 275 (25) : 19000-19008 (2000) , la investigación ha continuado identificando compuestos adicionales que pueden utilizarse en el tratamiento de enfermedades mediadas por la señalización CCRl.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos tienen la Fórmula I : o sales, hidratos o N-óxidos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En la Fórmula I, Rla y Rlb se seleccionan independientemente de H y CH3; R2a se selecciona de H y F; y R2d se selecciona de H, alcoxi C1-4 y haloalcoxi C1-4.

Además de los compuestos proporcionados en la presente, la presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de estos compuestos, así como métodos para el uso de estos compuestos principalmente para tratar enfermedades asociadas con la actividad de señalización de CCRl, CCR2 y/o CCR3.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS NINGUNA DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA.INVENCIÓN I . Abreviaturas y Definiciones El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se defina de otra manera, un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada, que tiene designado el número de átomos de carbono (i.e^, Ci-8 significa de uno a ocho carbonos). Ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y lo similar.

El término "alcoxi" se utiliza en su sentido convencional, y se refiere a aquellos grupos alquilo unidos al resto de la molécula a través de un átomo de oxígeno. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, isopropoxi, y lo similar.

Los términos "halo" o "halógeno", por sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan, a menos que se defina de otra manera, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, los términos tales como "haloalquilo" pretenden incluir monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo Ci_4" pretende incluir trifluorometilo, 2 , 2 , 2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y lo similar. De manera similar, el término "haloaícoxi" pretende incluir monohaloalcoxi y polihaloalcoxi , tal como trifluorometoxi (CF30-) y 2-fluoroetoxi (FCH2CH20-) .

"Grupo de protección" se refiere a un residuo, excepto grupos alquilo, que, cuando se une a un grupo reactivo en una molécula, enmascara, reduce o evita esa reactividad. Ejemplos de grupos de protección pueden encontrarse en T.W. Greene y P.G.M. Wutts, Protective Groups in Organic Synthesis (Grupos de protección en la síntesis orgánica) 3a edición, John Wiley & Sons, New York, 1999 y en Harrison y Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods (Compendio de métodos orgánicos sintéticos) Vols. 1 a 8 (John Wiley and Sons, 1971-1996) . Los grupos de protección hidroxi representativos incluy6en grupos acilo, éteres de bencilo y tritilo, éteres de tetrahidropiranilo, éteres de trialquilsililo y éteres de alilo. Los grupos de protección amino representativos incluyen formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo (CBZ) , ter-butoxicarbonilo (BOC) , trimetil sililo (TMS) , 2-trimetilsilil-etanosulfonilo (SES) , tritilo y grupos tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC) , nitro-veratriloxicarbonilo (NVOC) y lo similar.

"Reactivo de acoplamiento de aminoácido" se refiere a un reactivo, tal como HBTU (hexafluorofosfato 0-(benzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio) , . etc., que harán reacció con el grupo de ácido carboxílico de un aminoácido para formar un intermediario activado que puede utilizarse para condensarse con una variedad de nucleófilos, por ejemplo, aminas, alcoholes y tioles, para producir otros grupos de ésteres, tioésteres o amidas.

El término "sales farmacéuticamente aceptables" pretende incluir sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en la presente. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente acídicas, pueden obtenerse sales de adición de base poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, de litio, magnesio, mangánicas, manganosas, de potasio, sodio, zinc y lo similar. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias incluyendo aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y lo similar, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, ?,?'-dibenciletilenódiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol , 2-dimetilaminoetanol , etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, > N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, ¦ isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, prócaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y lo similar. - li ¬ cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un solvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogencarbónico, fosfórico, monohidrogenfosfórico, dihidrogenfosfórico, sulfúrico, monohidrogensulfúrico, yodhídrico, o fosforosos y lo similar, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico, y lo similar. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y lo similar y sales de ácidos orgánicos como los ácidos glucurónico o galacturónico y lo similar (ver, por ejemplo, Berge S.M. et al., "Pharmaceutical Salts" (Sales farmacéuticas) Journal of Pharmaceutical Science 1977, 66, 1-19) . Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como acídicas que permiten convertir los compuestos en sales de adición ya sea de base o de ácido.

Las formas neutras de los compuestos pueden regenerarse poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en solventes polares, pero de otra manera, las sales son equivalentes a la forma original del compuesto para los propósitos; de la presente invención.

Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en forma de un profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en la presente son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un ambiente ex vivo. Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas incluyendo formas hidratadas . En general , las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y pretenden abarcarse dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y pretenden estar dentro del alcance de la presente invención.

Ciertos compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono (centros ópticos) o enlaces dobles asimétricos; los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos e isómeros individuales (e.g., enantiómeros separados) pretenden todos estar abarcados dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporcionen no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden radio-marcarse con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo, tritio (3H) , yodo-125 (125I) o carbono-14 (1C) . todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sea radiactivos o no, pretenden estar abarcados dentro del alcance de la presente invención.

II . General La presente invención se deriva del descubrimiento de que los compuestos de la Fórmula I actúan como potentes antagonistas del receptor CCR1. Los compuestos tienen actividad anti-inflamatoria in vivo y tienen propiedades farmacocinéticas superiores. Por consiguiente, los - In ¬ compuestos proporcionados en la presente son útiles en composiciones farmacéuticas, métodos para el tratamiento de enfermedades mediadas por CCRl y como controles para la identificación de antagonistas de CCRl competitivos.

III. Compuestos En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de la Fórmula I: o sales, hidratos o N-óxidos farmacéuticamente aceptables de, los mismos. En la Fórmula I, Rla y Rlb se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de H y CH3; R2a se selecciona del grupo que consiste de H y F; y R2d se selecciona del grupo que consiste de H, alcoxi Ci-4 y haloalcoxi Ci-4. En una modalidad, R2a es hidrógeno. En otra modalidad, Rla y Rlb son cada uno H. En otra modalidad, Rlb es metilo y Rla es H. Aún en otra modalidad, Rla y Rlb son cada uno metilo. Aún en otra modalidad, R2a es hidrógeno y R2d se selecciona del grupo que consiste de metoxi, etoxi y trifluorometoxi .

En una modalidad preferida, los compuestos de. la invención son de la Fórmula la o Ib: en donde R2a se selecciona del grupo que consiste de H y F; y R2d se selecciona del grupo que consiste de metoxi, etoxi y trifluórometoxi .

En una modalidad específica, los compuestos de la invención se seleccionan del grupo que consiste de: En otra modalidad específica, los compuestos de la invención se seleccionan del grupo que consiste de: Aún n otra modalidad, el compuesto de la invención tiene la fórmula: Aún en otra modalidad, los compuestos de la invención de la Fórmula I se seleccionan del grupo que - consiste de los compuestos establecidos en la Tabla 1.

Tabla 1 (S) -2- (4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -1H- pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il ) -1- (4- (4-cloro-2-fluoro-5- metoxifenil ) -2-metilpiperazin-l-il ) etanona (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-2-fluorofenil ) -2-metilpiperazin-l-il ) etanona 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)piperazin-l-il) etanona 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifeni1 ) piperazin-1-i1 ) etanona (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il ) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil) -2-metilpiperazin-l-il) etanona 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-etoxifenil)piperazin-l-il) etanona (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-clorofenil) -2-metilpiperazin-l-il ) etanona 2- (4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- ( 4-clorofenil ) piperazin-l-il ) etanona 2- (4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil) -2,2-dimetilpiperazin-l-il) etanona (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-etoxifenil ) -2- metilpiperazin-l-il ) etanona 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-( trifluorometoxi) fenil)piperazin-l-il) etanona 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil ) piperazin-1-il) etanona Preparación de Compuestos El Esquema 1 siguiente, así como los esquemas en los Ejemplos, proporcionan ciertas rutas sintéticas que pueden seguirse para tener acceso a ciertos compuestos de la presente invención. Otras rutas o modificaciones de las rutas presentadas a continuación serían fácilmente aparentes para un técnico experto y están dentro del alcance de la presente invención.

El Esquema 1 ilustra la síntesis de una 4-amino-3-imidazoil sustituida pirazolo [3 , 4-d]pirimidina utilizada en. una reacción de acoplamiento con una piperazina sustituida para formar los compuestos de la presente invención. Como se muestra en el Esquema 1, puede combinarse ter-butil éster de ácido hidrazinacarboxílico y 2 , 3-diciano-2-enedinitrilo para formar el compuesto de pirazol sustituido B (5-amino-lH-pirazol-3 , 4-dicarbonitrilo) . El Compuesto B, al tratarse, por ejemplo, con un ortoformato (e.g., trimetilortoformato) proporciona el intermediario C (mostrado como (E)-metil N- 3 , 4-diciano-lH-pirazol-5-ilformimidato) . El cierre de anillo para formar la pirazolo [3 , 4-d]pirimidina mostrada como el compuesto A (4-amino-lH-pirazolo [3 , 4-d]piridimina-3-carbonitrilo) puede lograrse mediante el tratamiento del intermediario C con amonio.

La elaboración adicional de la pirazolo [3 , 4-djpirimidina se logra mediante el tratamiento del Compuesto A, por ejemplo, con ter-butil cloroacetato en presencia de carbonato de potasio para obtener ter-butil éster de ácido (4-amino-3-cia o-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acético, que después puede someterse a reflujo con etilenodiamina en presencia de etanol y ácido acético para producir ter-butil 2- (4-amino-3- (4, 5-dihidro-lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il) acetato .

Como se muestra el ter-butil 2- (4-amino-3- (4 , 5-dihidro-lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acetato puede oxidarse con DMP en presencia del solvente DMSO para obtener ter-butil 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acetato .

Finalmente, el ter-butil 2- (4-amino-3- ( lH-imidazol- 2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ) acetato puede tratarse con HC1 en dioxano para obtener una sal 4-amino-3-imidazoil sustituida pirazolo [3 , 4-d]pirimidina de ácido (2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ) acético (2HC1) .

Esquema 1 Composiciones Farmacéuticas Además de los compuestos proporcionados anteriormente, las composiciones para modular la actividad de CCRl, CCR2 y CCR3 en humanos y animales contendrán típicamente un vehículo o diluyente farmacéutico.

El término "composición" como se utiliza en la presente pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no nocivo para el receptor del mismo.

Las composiciones farmacéuticas para la administración de los compuestos de esta invención pueden presentarse convenientemente en forma de dosis unitaria y pueden, prepararse mediante cualquiera de los métodos muy conocidos en la técnica farmacéutica y de suministro de fármacos . Todos los métodos incluyen la etapa de poner el ingrediente activo en asociación con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones farmacéuticas se preparan poniendo uniformemente e íntimamente en asociación el ingrediente activo con un vehículo líquido o un vehículo sólido finamente dividido o ambos, y después, si es necesario, conformar el producto en la formulación deseada. En la composición farmacéutica, el compuesto objetivo activo se incluye en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado para el proceso o condición de las enfermedades .

Las composiciones farmacéuticas que contienen el ingrediente activo pueden estar en una forma adecuada para uso oral, por ejemplo, como tabletas, comprimidos, pastillas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables , emulsiones y auto-emulsificaciones , como se describe en la Patente de E.U. No. 6,451,339, cápsulas duras o blandas, jarabes, elíxires, soluciones, parche bucal, gel oral, goma de mascar, tabletas masticables, polvo efervescente y tabletas efervescentes . Las composiciones destinadas a uso oral puede prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la elaboración de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de agentes edulcorantes, agentes saborizantes , agentes colorantes, agentes antioxidantes y conservadores a fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y paladeables. Las tabletas contienen el ingrediente activo mezclado con excipientes no tóxicos f rmacéuticamente aceptables que¡ son adecuados para la elaboración de tabletas . Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como celulosa, dióxido, de silicio, óxido de aluminio, carbonato de calcio, carbonato de sodio, glucosa, manitol, sorbitol, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación o de desintegración, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes de enlace, por ejemplo PVP, celulosa, PEG, almidón, gelatina o acacia, y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden ser no recubiertas o pueden ser cubiertas, entéricamente o de otra manera, mediante técnicas conocidas para retardar la desintegración y la absorción en el tracto gastrointestinal y, en consecuencia, proporcionan una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material retardador de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. También pueden recubrirse mediante las técnicas descritas en las Patentes de E.U. Nos. 4,256,108; 4,166,452 y 4,265,874 para formar tabletas terapéuticas osmóticas para liberación controlada.

Las formulaciones para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina duras en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blandas en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de maní, parafina líquida, o aceite de oliva. Adicionalmente, las emulsiones pueden prepararse con un ingrediente no mezclable en agua tal como aceites y estabilizarse con surfactantes tales como mono-diglicéridos , esteres PEG y lo similar.

Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la elaboración de, suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxi-propilmetilcelulosa, alginato de sodio, pplivinil-pirrolidona, goma tragacanto y goma acacia; los agentes de dispersión o de humectación pueden ser fosfátidos de origen natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxi-etileno , o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietileno sorbitol o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol-, por ejemplo, monooleato de polietileno sorbitán. La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservadores, por ejemplo, etilo o n-propilo, p-hidroxibenzoatp, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.

La süspensión oleosa puede formularse suspendiendo el ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de ajonjolí o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por, ejemplo, cera de abeja, parafina líquida o alcohol cetílico. Pueden agregarse agentes edulcorantes tales como los descritos anteriormente ; y agentes saborizantes para proporcionar una preparación oral paladeable. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un anti-oxidante tal como ácido ascórbico.

Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el ingrediente activo mezclado con un agente de dispersión o de humectación, un agente de suspensión y uno o más conservadores . Los agentes de dispersión o de humectación y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por aquellos ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes .

Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase acuosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuate, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina liquida o mezclas de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo goma acacia o goma tragacanto, fosfátidos de origen natural, por ejemplo, frijol de soja, lecitina, y esteres o esteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilenp sorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y saborizantes .

Pueden formularse jarabes y elíxires con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol , sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservador y agentes saborizantes y colorantes . Pueden prepararse soluciones orales en combinación, por ejemplo, con ciclodextrina, PEG y surfactantes . ; Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida utilizando aquellos agentes de dispersión o de humectación y agentes de suspensión que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butano diol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse están el agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites estériles fijos como un medio solvente o de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo blando incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido" oleico encuentran su uso en la preparación de inyectables .

Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en forma de supositorios para la administración rectal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas ordinarias, pero líquido a la temperatura rectal y, en consecuencia, se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao y polietilenglicoles . Adicionalmente, los compuestos pueden administrarse a través de suministro ' ocular por medio de soluciones o ungüentos. Aun adicionalmente, el suministro transdérmico de los compuestos sujeto puede lograrse por medio de parches iontoforéticos y lo similar. Para uso tópico, se emplean cremas, ungüentos, gelatinas, soluciones o suspensiones, etc., que contienen los compuestos de la presente invención. Como se utiliza en la presente, la aplicación tópica también pretende incluir el uso de enjuagues y gárgaras bucales.

Los compuestos de la invención pueden formularse para depositarse en un dispositivo médico, que puede incluir cualquiera de una variedad de injertos, stents, incluyendo injertos de stents, catéteres, esferas, cestas u otro dispositivo que pueda desplegarse . o implantarse permanentemente dentro de un lumen corporal. Como un ejemplo particular, sería deseable - tener dispositivos y métodos que puedan suministrar los compuestos de la invención a la región de un cuerpo que se ha tratado mediante una técnica de intervención.

En la modalidad ejemplar, el agente inhibidor de esta invención puede depositarse dentro de un dispositivo médico, tal como un stent, y suministrarse al sitio de tratamiento para el tratamiento de una porción del cuerpo.

Los stents se han utilizado como vehículos de suministro para agentes terapéuticos (i.e., fármacos) . Generalmente, los stents intravasculares se implantan permanentemente en vasos coronarios o periféricos. Los diseños de stent incluyen los de las Patentes de E.U. Nos. 4,733,655 (Palmaz) , 4,800,882 (Gianturco) , o 4,886,062 (Wiktor) . Tales diseños incluyen stents tanto metálicas como poliméricas, así como stents auto-expansibles y expansibles por esferas. 1 Los stents también pueden utilizarse para suministrar un , fármaco en el sitio de contacto con los vasos sanguíneos, como se describe en la Patente de E.U. No. 5,102,417 (Palmaz) y en las Solicitudes de Patente internacional Nos. WO 91/12779 (Meditronic, Inc) y WO 90/13332 (Cedars-Sanai Medical Center) , Patentes de E.U. Nos. 5,419,760 (Narciso, Jr . ) y la Patente de E.U. No. 5,429,634 (Narciso, Jr.), por ejemplo. También se han utilizado stents para suministrar virus a la pared de un lumen para suministro de genes, como se describe en la Solicitud de Patente de E.U. No. 5,833,651 (Donovan et al.).

El término "depositado" significa que el agente inhibidor se recubre, de adsorbe, se coloca o de otra manera se incorpora en el dispositivo mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el agente inhibidor puede introducirse y liberarse desde dentro de ("tipo matriz") o estar rodeado, y liberarse a través de ("tipo depósito") materiales de polímero que recubren o extienden el dispositivo médico. En el último ejemplo, el agente inhibidor puede estar atrapado dentro de los materiales de polímero o acoplado a los materiales de polímero utilizando una o más técnicas para generar tales materiales conocidos en la técnica. En otras formulaciones, el agente inhibidor puede unirse a la superficie del dispositivo médico sin necesidad de un recubrimiento por medio de uniones desprendibles y liberarse con el tiempo, puede retirarse mediante procesos mecánicos o químicos, o está en una forma permanentemente inmovilizada que presenta el agente inhibidor en el sitio de implantación.

En una modalidad, el agente inhibidor puede incorporarse con composiciones de polímero durante la formación de recubrimientos biocompatibles para dispositivos médicos, tales como stents. Los recubrimientos producidos a partir de estos componentes son típicamente homogéneos y son útiles para recubrir numerosos dispositivos diseñados para implantación.

El polímero puede ser un polímero ya sea bioestable o bioabsorbible dependiendo de la tasa de liberación deseada o del grado deseado de estabilidad del polímero, pero se prefiere un polímero bioabsorbible para esta modalidad ya que, a diferencia de un polímero bioestable, éste no estará presente mucho después de la implantación para ocasionar cualquier respuesta crónica local adversa. Los polímeros bioabsorbibles que podrían utilizarse incluyen, pero no se limitan á, ácido poli (L-láctico) , policaprolactona, poliglicólido (PGA) , poli (láctido-co-glicólico) (PLLA/PGA) , poli (hidroxibutirato) , poli (hidroxibutirato-co-valerato) , polidioxanona, poliortoéster , polianhídrido, ácido poli (glicólico) , ácido poli (D-láctico) , ácido poli(L-láctico) , ácido poli (D, L-láctico) , poli (D, L-láctido) (PLA) , poli (L-láctido) (PLLA) , ácido poli (glicólico-co-carbonato de trometileno) (PGA/PTMC) , óxido de polietileno (PEO) , polidioxanona (PDS) , polifosfoéster , polifosfoéster uretano, poli (aminoácidos) , cianoacrilatos , poli (carbonato de trimetileno) , poli (iminocarbonato) , copoli (éter-ésteres ) (e.g., PEO/PLA) , oxalatos de polialquileno, polifosfazenos y biomoléculas tales como fibrina, fibrinógeno, celulosa, almidón, colágeno y ácido hialurónico, caprolactona poliepsilon, ácido polihidroxi butírico, poliortoésteres , poliacetales , , polidihidropiranos, policianoacrilatos , copolímeros reticulados o de bloque amfifático de hidrogeles y otros polímeros bioabsorbentes conocidos en la técnica. También podrían utilizarse polímeros bioestables con una respuesta de tejido crónica relativamente baja tales como poliuretanos , siliconas y poliésteres y también podrían utilizarse otros polímeros si pudieran disolverse y curarse o polimerizarse en el dispositivo médico, tales como poliolefinas , poliisobutileno y copolímeros de etileno-alfadefina; polímeros y copolímeros de acrílico, polímeros y copolímeros de haluro de vinilo, tales como cloruro de polivinilo; polivinilpirrolidona; polivinil éteres, tales como metil éter de polivinilo; haluros de polivinildeno, tales como fluoruro de. polivinildeno y cloruro de polivinildeno; poliacrilonitrilo, cetonas de polivinilo; aromáticos de polivinilo, tales como poliestireno, ésteres de polivinilo, tales como acetato de polivinilo; copolímeros de monómeros de vinilo unos con otros y olefinas tales como copolímeros de etileno-metil metacrilato, copolímeros de acrilonitrilo-estireno , resinas ABS, y copolímeros de acetato de etileno-vinilo; copolímero de pirano; polihidroxi-propil-metacrilamida-fenol ; polihidroxietil-aspartamida-fenol ; polietilenóxido-polilisina sustituido con residuos de palmitoilo; poliamidas, tales como Nylon 66 y policaprolactam; resinas de alquido, policarbonatos ; polioximetilenos; poliimidas; poliéteres; resinas epóxicas; poliuretanos ; rayón; rayón-triacetato; celulosa, acetato de celulosa, butirato de celulosa; butirato de acetato de celulosa; celofán; nitrato de celulosa; propionato de celulosa; éteres de celulosa; y carboximetil celulosa.

Pueden formarse matrices de polímeros y de polímeros semi-permeables en artículos configurados, tales como válvulas, stents, tuberías, prótesis y lo similar.

En una modalidad de la invención, el agente inhibidor de la invención está acoplado a una matriz de polímero o de polímero semi-permeable que se forma como un stent o dispositivo de st.ent-injerto.

Típicamente, se aplican polímeros a la superficie de un dispositivo implantable mediante recubrimiento giratorio, inmersión o aspersión. También pueden utilizarse para este propósito métodos adicionales conocidos en la técnica. Los métodos de aspersión incluyen métodos tradicionales así como técnicas de microdeposición con un tipo de dispensador de inyección. Adicionalmente, puede depositarse un polímero en un dispositivo implantable utilizando foto-modelado para colocar el polímero solamente sobre porciones específicas del dispositivo. Este recubrimiento del dispositivo proporciona una capa uniforme alrededor del dispositivo lo que permite una difusión mejorada de varios analitos a través del recubrimiento del dispositivo.

En modalidades preferidas de la invención, el agente inhibidor se formula para su liberación del recubrimiento de polímero hacia el ambiente en el cual se coloca el dispositivo médico. Preferentemente, el agente inhibidor se libera de manera controlada durante un extenso marco de tiempo (e.g., meses) utilizando al menos una de varias técnicas muy conocidas que implican vehículos o capas de polímero para controlar la elución. Algunas de estas técnicas se describieron previamente en la Solicitud de Patente de E.U. 20040243225A1.

Además, como se describe, por ejemplo, en la Patente de E.U. No. 6,770,729, los reactivos y las condiciones de reacción de las composiciones de polímero pueden manipularse de manera que pueda controlarse la liberación del agente inhibidor del recubrimiento de polímero. Por ejemplo, eí coeficiente de difusión de uno o más de los recubrimientos de polímero puede modularse para controlar la liberación del agente inhibidor del recubrimiento de polímero. En una variación de este tema, el coeficiente de difusión de los uno o más recubrimientos de polímero puede' controlarse para modular la capacidad de un analito que está presente en el ambiente en el cual se coloca el dispositivo médico (e.g., un analito que facilita la desintegración o hidrólisis de alguna porción del polímero) para tener acceso a uno o más componentes dentro de la composición de polímero (y, por ejemplo, modular así la liberación del agente inhibidor del recubrimiento de polímero) . Aún otra modalidad de la invención incluye un dispositivo que tiene una pluralidad de recubrimientos de polímero, teniendo cada uno úna pluralidad de coeficientes de difusión. En tales modalidades de la invención, la liberación del agente inhibidor del recubrimiento de polímero puede modularse por medio de la pluralidad de recubrimientos de polímero.

Aún en otra modalidad de la invención, la liberación del agente inhibidor del recubrimiento de polímero se controla modulando una o más de las propiedades de la composición de polímero, tales como la presencia de uno o más compuestos endógenos o exógenos o, alternativamente, el pH de la composición de polímero. Por ejemplo, ciertas composiciones de polímero pueden diseñarse para liberar un agente inhibidor en respuesta a la disminución en el pH de la composición de polímero. Alternativamente, ciertas composiciones de polímero pueden diseñarse para liberar el agente inhibidor en respuesta a la presencia de peróxido de hidrógeno .

IV. Métodos para Tratar Enfermedades Moduladas por CCRl Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para tratar condiciones o enfermedades mediadas por CCRl, CCR2 y/o CCR3 administrando a un sujeto que tiene tal enfermedad o condición, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I anterior. El "sujeto" se define en la presente para incluir animales tales como mamíferos, incluyendo, pero sin limitarse a, primates (e.g., humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos fi conejos , ratas, ratones y lo similar.

El CCRl proporciona un objetivo para interferir con o promover los aspectos específicos de las funciones de célula inmune o, más generalmente, con funciones asociadas con la expresión de CCRl en un amplio rango de tipos celulares en un mamífero, tal como un humano. Los compuestos que inhiben CCRl son particularmente útiles para modular la función de monocitos, macrófagos, linfocitos, granulocitos , células NK, mastocitos, células dendríticas y ciertas células inmune derivadas (por ejemplo osteoclastos) para propósitos terapéuticos. Por consiguiente, la presente invención se dirige a compuestos que son útiles en la prevención y/o el tratamiento de una amplia variedad de trastornos y enfermedades inflamatorias e inmunorreguladoras (ver Saeki et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003)).

Por ejemplo, un compuesto presente que inhibe una o más funciones de CCRl puede administrarse para inhibir (i.e., reducir o prevenir) la inflamación o la infiltración celular asociada con un trastorno inmune. Como resultado, puede inhibirse uno o más procesos inflamatorios, tales como la i emigración o la infiltración de leucocitos, la quimiotaxis, la exocitosis (e.g., de enzimas, histamina) o la liberación mediadora inflamatoria. Por ejemplo, la infiltración de monocitos a un sitio inflamatorio (e.g., una articulación afectada en la artritis o en el sistema nervioso central en esclerosis múltiple) puede inhibirse de acuerdo con el presente método.

De manera similar, se administra un compuesto presente que promueve una o más funciones del CCRl para estimular (inducir o mejorar) una respuesta inflamatoria, tal como la emigración de leucocitos, quimiotaxis, exocitosis (e.g., de enzimas, histamina) o liberación mediadora inflamatoria, dando como resultado la estimulación benéfica de los procésos inflamatorios. Por ejemplo, pueden reclutarse monocitos para combatir las infecciones bacterianas .

Las enfermedades y las condiciones asociadas con la inflamación, trastornos inmunes, enfermedad ósea, cáncer e infección, pueden tratarse utilizando el método de la presente invención. En una modalidad preferida, la enfermedad o condición es una en la cual las acciones de células inmunes tales como monocitos, macrófagos, linfocitos, granulocitos , células NK, mastocitos, células dendríticas o ciertas células inmunes derivadas (por ejemplo osteoblastos) van a inhibirse o promoverse, a fin de modular la respuesta inflamatoria o autoinmune.

En un grupo de modalidades, las enfermedades o condiciones, incluyendo enfermedades crónicas, de humanos u otras especies pueden tratarse con moduladores de la función de CCRl, CCR2 o CCR3. Estas enfermedades o condiciones incluyen: (1) enfermedades alérgicas tales como anafilaxis sistémica o respuestas de hipersensibilidad, alergias a fármacos, alergias a piquetes de insectos y alergias a alimentos, (2) enfermedades inflamatorias intestinales, tales como la enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, ileítis y enteritis; (3) vaginitis, (4) psoriasis y dermatosis inflamatorias tales como dermatitis, eczema, dermatitis (atópica, dermatitis alérgica de contacto, urticaria y prurito, (5) : vasculitis, (6) espondiloartropatías , (7) escleroderma, (8) asma y enfermedades respiratorias alérgicas tales como asma, asma alérgica, rinitis alérgica, enfermedades dé hipersensibilidad pulmonar y lo similar, (9) enfermedades autoinmunes, tales como fibromialgia, escleroderma, espondilitis anquilosante, RA juvenil, enfermedad de Still, Ra juvenil poliarticular, RA juvenil pauciarticular, polimialgia reumática, artritis Takuyasu, artritis reumatoide, artritis psoriática, osteoartritis , artritis poliarticular, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, diabetes tipo I, diabetes tipo II, diabetes tipo I (de inicio reciente) , neuritis óptica, glomerulonefritis , y lo similar, (10) rechazo al injerto incluyendo rechazo al aloinjerto y enfermedad de injerto vs. Huésped aguda o crónica, (11) fibrosis (e.g., fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis pulmonar intersticial), fibrosis asociada con enfermedad renal en etapa terminal, fibrosis ocasionada por radiación, fibrosis tubulointersticial , fibrosis subepitelial , escleroderma (esclerosis sistémica progresiva) , fibrosis hepática (incluyendo la ocasionada por hepatitis alcohólica o viral) , cirrosis primaria y secundaria), (12) inflamación pulmonar aguda o crónica (enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, síndrome de angustia respiratoria adulta, síndrome de angustia respiratoria de infancia, alveolitis compleja inmune) y (13) otras enfermedades en las cuales van a inhibirse respuestas inflamatorias o trastornos inmunes no deseados, tales como la enfermedad cardiovascular incluyendo ateroesclerosis , inflamación vascular resultante de trasplante de tejido o durante resteñosis (incluyendo, pero sin limitarse a restenosis después de la angioplastia y/o inserción de stent) , otras condiciones inflamatorias agudas y crónicas tales como miositis, enfermedades neurodegenerativas (e.g., enfermedad de Alzheimer) , encefalitis, meningitis, hepatitis, nefritis, sepsis, sarcoidosis, conjuntivitis alérgica, otitis, sinusitis, inflamación sinovial ocasionada por artroscopia, hiperuremia, trauma, lesión de reperfusión por isquemia, poliosis nasal, pre-eclampsia, liquen plano oral, síndrome Guillian-Barre, enfermedades granulomatosas , condiciones asociadas con la producción de leptina, síndrome de Behcet y gota, y en aplicación de cicatrización de heridas (14) alergias por alimentos inmune mediadas tales como la enfermedad Celiac.

En otro grupo de modalidades, las enfermedades o condiciones pueden tratarse con moduladores de la función de CCRl . Ejemplos de enfermedades que van a tratarse con moduladores de la función de CCRl incluyen cánceres (tanto primarios como1 metastásicos) (e.g., mieloma múltiple; Hata H., Leukemia & Limphoma (Leucemia y linfoma) , 2005, 46(7); 967-972), enfermedades cardiovasculares, enfermedades osteolíticas incluyendo osteoporosis (y osteoporosi's post-menopáusica) , 1 hipercalcemia, enfermedad de Paget, osteodistrofia renal, artritis reumatoide, osteoartritis , metástasis ósea lítica, y mieloma múltiple, enfermedades en las cuales juega un papel la angiogénesis o la neovascularización (enfermedades neoplásticas, retinopatía y degeneración macular), enfermedades infecciosas (infecciones virales, e.g., infección por VIH, e infecciones bacterianas) y enfermedades inmunosupresoras tales como condiciones de trasplante de órgano y condiciones de trasplante de piel. El término "condiciones de trasplante de órgano" pretende incluir condiciones de trasplante de médula ósea y condiciones de trasplante de órgano sólido (e.g., riñon, hígado, pulmón, corazón, páncreas o combinaciones de los mismos) .

Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden inhibir la producción de metaloproteinasas y citosinas en sitios inflamatorios, ya sea directa o indirectamente (como consecuencia de la disminución de la infiltración celular) proporcionando así un beneficio para enfermedades o condiciones vinculadas a estas citosinas.

Los compuestos de la presente invención, por consiguiente, son útiles en la prevención y el tratamiento de una amplia variedad de trastornos y enfermedades inflamatorias o inmunorreguladoras .

Dependiendo de la enfermedad que va a tratarse y de la condición del sujeto, los compuestos de la presente invención pueden administrarse mediante vías de administración oral, parenteral (e.g., intramuscular, intraperitoneal , intravenosa, ICV, inyección o infusión intracisternal , inyección subcutánea o implante), mediante rocío para inhalación, nasal, vaginal, rectal, sublingual, o tópica y pueden formularse, solos o conjuntamente, en formulaciones de dosis unitaria adecuadas que contienen portadores, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables, apropiados para cada vía de administración .

En el tratamiento o prevención de condiciones que requieren la modulación del receptor de quimosina, un nivel de dosis apropiado será generalmente de aproximadamente 0.001 a 100 mg por kg del peso corporal del paciente por día, que puede administrarse en dosis únicas o múltiples. Preferentemente, el nivel de dosis será de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 25 mg/kg por día; más preferentemente de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 10 mg/kg por día. Un nivel de dosis adecuado puede ser de aproximadamente 0.01 a 25 mg/kg por día, de aproximadamente 0.05 a 10 mg/kg por día, o de aproximadamente 0.1 a 5 mg/kg por día. Dentro de este rango, la dosis puede ser de 0.005 a 0.05, de 0.05 o 0.5 a 5.0 mg/kg por día. Para administración oral, las composiciones ;se proporcionan preferentemente en forma de tabletas que contienen de 1.0 a 1000 miligramos del ingrediente activo, particularmente 1.0, 5.0, 10.0, 15.0, 15.0, 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 150.0, 200.0, 250.0, 300.0, 400.0, 500.0, 600.0, 750.0, 800.0, 900.0 y 1000.0 miligramos del · ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosis al paciente que va" a tratarse. Los compuestos pueden administrarse en un régimen de 1 a 4 veces por día, preferentemente una o dos veces al día.

Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis y la frecuencia de dosis específicos para cualquier paciente en particular pueden variar y dependerán de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la extensión de acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, las características hereditarias, la salud general, el sexo y la dieta del sujeto, así como del modo y el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, y la severidad de la condición particular del sujeto que expérimenta la terapia.

Las enfermedades y condiciones asociadas con inflamación, trastorno inmune, infección y cáncer, pueden tratarse o prevenirse con los presentes compuestos, composiciones y métodos.

Los compuestos y composiciones de la presente invención pueden combinarse con otros compuestos y composiciones que tienen utilidades relacionadas para prevenir y tratar la condición o enfermedad de interés, tal como trastornos inflamatorios o autoinmunes, condiciones y enfermedades que incluye6n enfermedad inflamatoria intestinal, artritis reumatoide, osteoartritis , artritis psoriática, artritis poliarticular, esclerosis múltiple, enfermedades alérgicas, psoriasis, dermatitis atópica y asma, y las patologías anotadas anteriormente.

Por ejemplo, en el tratamiento o prevención de la inflamación o la autoinmunidad o, por ejemplo, de la pérdida ósea asociada a la artritis, los presentes compuestos y composiciones pueden utilizarse en conjunción con un agente anti-inflamatorio o analgésico tal como un agonista de opiato, un inhibidor de lipoxigenasa, tal como un inhibidor de 5-lipoxigenasa, un inhibidor de ciclooxigenasa, tal como un inhibidor de ciclooxigenasa 2, un inhibidor de interleucina, tal como un inhibidor de interleucina 1, un antagonista de N DA, un inhibidor de óxido nítrico o un inhibidor de la síntesis del óxido nítrico, un agente antiinflamatorio no esteroidal, o un agente anti-inflamatorio supresor de citosina, por ejemplo, con un compuesto tal como acetaminofén, aspirina, codeína, fentanilo, ibuprofeno, indometacina, cetorolac, morfina, naproxeno, fenacetina, piroxicam, un analgésico esteroidal, sufentanilo, sunlindac, tenidap, y lo similar. De manera similar, los presentes compuestos y composiciones pueden administrarse con un analgésico listado anteriormente; un potenciador tal como cafeína, un antagonista H2 (e.g., ranitidina) , simeticona, hidróxido de aluminio o magnesio; un descongestivo tal como fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, epinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina o levo desoxi efedrina; un antitusivo tal como codeína, hidrocodona, caramifen, carbetapentano, o dextrometorfan; un diurético; y una antihistamina sedante o no sedante.

De manera similar, los compuestos y composiciones de la presente invención pueden utilizarse en combinación con otros fármacos que se utilizan en el tratamiento, prevención, supresión o mejoramiento de las enfermedades o condiciones para las cuales son útiles los compuestos y composiciones de la presente invención. Tales otros fármacos pueden administrarse, mediante una vía y en una cantidad comúnmente utilizada para los mismos, contemporáneamente o secuencialmente con un compuesto o composición de la presente invención. Cuando se utiliza un compuesto o composición de la presente invención contemporáneamente con uno o más fármacos diferentes, se prefiere una composicióOn farmacéutica que contiene tales otros fármacos además del compuesto o composición de la presente invención. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen aquellas que contienen también uno o más ingredientes activos o agentes terapéuticos diferentes además de un compuesto o composición de la presente invención. Ejemplos de otros agentes terapéuticos que pueden combinarse con un compuesto o composición de la presente invención, ya sea administrados por separado o en las mismas composiciones farmacéuticas, incluyen, pero no se limitan a: (a) antagonistas de VLA-4, (b) corticoesteroides , tales como beclometasona, metilprednisolona, betametasona, prednisona, prenisolona, dexametasona, fluticasona, hidrocortisona, budesonida, , triamcinolona, salmeterol , salmeterol , salbutamol, formeterol ; (c) inmunosupresores tales como ciclosporina (ciclosporina A, Sandimmune®, Neoral®) , tacrolimus (FK-506, Prograf®) , rapamicina, (sirolimus, Rapamune®) y otros inmunosupresores tipo FK-506 y micofenolato, e.g., mofetil micofenolato (CellCept®) ; (d) antihistaminas (antagonistas de histamina Hl) , tales como brornofeniramina, clorfeniramina, dexcloifeniramina, tripolidina, clemastina, difenhidramina, difenilpiralina, tripelenamina, hidroxizina, ' metdilazina, prometazina, trimeprazina, azatadina, ciproheptadina, antazolina, feniramina pirilamina, astemizol, terfenadina, loratadina, cetirizina, fexofenadina, descarboetoxiloratadina y lo similar; (e) anti asmáticos no esteroidales (e.g., terbutalina, metaproterenol , fenoterol, isoetarina, albuterol, bitolterol y pirbuterol) , teofilina, sodio cromolin, atropina, bromuro de ipratropio, antagonistas de leucotrieno (e.g., zafmlukast, montelukast, pranlukast, iralukast, pobilukast y SKB-106, 203), inhibidores de biosíntesis de leucotrieno (zileuton, BAY-1005) ; (f) agentes anti-inflamatorios no esteroidales (NSAIDs) tales como derivados de ácido propiónico (e.g., alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, cetoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprozin, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico y tioxaprofeno) , derivados de ácido acético (e.g., indometacina, , acemetacina, alclofenaco, clidanaco, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazac, furofenaco, ibufenaco, isoxepaco, oxpinaco, sulindaco, tiopinaco, tolmetin, zidometacina y zomepiraco) , derivados de ácido fenámico (e.g., ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico, y ácido tolfenámico) , derivados de ácido bifenilcarboxílico (e.g., diflunisal y flufenisal), oxicams (e.g., isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxicam) , salicilatos (e.g., ácido acetil salicílico y sulfasalazina) y las pirazolonas (e.g., apazona, bezpiperilon, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona y fenilbutazona) ; (g) inhibidores de ciclooxigenasa-2 (COX-2) tales como celecoxib (Celebrex®) y rofecoxib (Vioxx®) ; (h) inhibidores de fosfodiesterasa tipo IV (PDE IV) ; (i) compuestos de oro tales como auranofina y aurotxoglucosa, (j) etanercept (Enbrel®) , (k) terapias de anticuerpos tales como ortoclona (OKT3), daclizumab (Zenapax®) , basiliximab (Simulect®) e infliximab (Remicade®) , (1) otros antagonistas de los receptores de güimosina, especialmente CCR5, CXCR2 , CXCR3, CCR2, , CCR3, CCR4 , CCR7 , CX3CRl y CXCR6 ; (m) lubricantes o emolientes tales como petrolato y lanolina, (n) agentes queratolíticos (e.g., tazaroteno) , (o) derivados de vitamina D3 e.g., calcipotrieno o calcipotriol (Dovonex®) , (p) PUVA, (q) antralin (Drithrocreme®) , (r) etretinato (Tegison®) e isotretinoina y (s) agentes terapéuticos de esclerosis múltiple tales como interferón ß-1ß (Betaseron®) , interferón (ß-1a (Avonex®) , azatioprina (Imurek®, Imuran®) , acetato de glatiramero (Capoxone®) , un glucocorticoide (e.g., prednisolona) y ciclofosfamida (t) DMARDS tal como metotrexato (u) otros compuestos tales como ácido 5-aminosalicílico y profármacos de los mismos; hidroxicloroquina; D-penicilamina, antimetabolitos tales como azatioprina, 6-mercaptopurina y metotrexato; inhibidores de síntesis de ADN tales como hidroxiurea y disruptores de microtúbulo tales como colquicina. La proporción p(or peso del compuesto de la presente invención al segundo ingrediente activo puede variar y dependerá de la dosis efectiva de cada ingrediente. Generalmente, se utilizará una dosis efectiva de cada uno. Por tanto, por ejemplo, cuando un compuesto de la presente invención se combina con un NSAID, la proporción por peso del compuesto de la presente invención al NSAID variará generalmente de aproximadamente 1000:1 a aproximadament6e 1:1000, preferentemente de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 1:200. Las combinaciones de un compuesto de la presente invención y otros ingredientes activos también estarán dentro del rango antes mencionado, pero en cada caso, debe utilizarse una dosis efectiva de cada ingrediente activo.

V. Ejemplos Los siguientes ejemplos se o-frecen para ilustrar, pero no para limitar la invención reivindicada.

Los reactivos y solventes utilizados a continuación pueden obtenerse de fuentes comerciales tales como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, EUA) . Las 1H MR se registraron en un espectrómetro de NMR de 400 MHz Varían Mercury. Se proporcionan picos significativos relativos a TMS " y están tabulados en el orden: multiplicidad (s, único; d, doble; t, triple; q, cuádruple; m, múltiple) y número de protones. Los resultados de la espectrometría de masa se reportan como la proporción de masa sobre carga, seguida por la relativa abundancia de cada ion (en paréntesis) . En las tablas, se reporta un valor m/e único para el ion M+H (o, como se anota, M-H) que contiene los isótopos atómicos más comunes . Los ¡patrones de isótopo corresponden a la fórmula esperada en todos los casos. El análisis de espectrometría de masa de ionización por electro-aspersión (ESI) se condujo en un espectrómetro de masa por electro-aspersión Hewlett-Packard MSD utilizando el HP 1100 HPLC equipado con una columna de 5 µ de 2.1 X 50 mm Agilent Zorbax SB-C18 para suministrar la muestra. Normalmente, el analito se disolvió en metanol a ?.1 mg/ml y se infundió 1 microlitro con el solvente de suministro en el espectrómetro de masa, que se escaneó de 100. a 1500 daltons . Todos los compuestos pudieron analizarse en el modo ESI positivo utilizando acetonitrilo/agua con ácido fórmico al 1% como el solvente de suministro. Los compuestos proporcionados a continuación también pudieron analizarse en el modo ESI negativo utilizando 2 mM de NH4OAc en acetonitrilo/agua como sistema de suministro.

Las siguientes abreviaturas se utilizan en los Ejemplos y a través de toda la descripción de la invención: DMF, dimetil formamida; TFA, ácido trifluoroacético; THF, tetrahidrofurano; EtOAc, etil acetato; B0C20, di-terbutil dicarbonato o anhídrido BOC; HPLC, cromatografía líquida a alta presión; DIPEA, diisopropil etilamina; HCTU, hexafluorofosfato de 1- [bis (dimetilamino)metileno] -5-cloro-lH-benzotriazolio-3-óxido (1-); HBTU, hexafluorofosfato de 0- (benzotriazol-l-il ) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio ,- dppf, 1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno; Pd2(dba)3, tris (dibencilidenoacetona) dipaladio (0) ; DIPEA, diisopropiletilamina; DMP, dimetilftalato; Me, metilo; Et, etilo; DCM, diclorometano .

Los compuestos dentro del alcance de esta invención pueden sintetizarse como se describe a continuación, utilizando una diversidad de reacciones conocidas por el técnico experto. El experto en la técnica también reconocerá que pueden utilizarse métodos alternativos para sintetizar los compuestos objetivo de esta invención, y que los procedimientos descritos dentro del cuerpo de este documento no son exhaustivos, sino que proporcionan rutas ampliamente aplicables y prácticas para los compuestos de interés.

Ciertas moléculas reivindicadas en esta patente pueden existir en diferentes formas enantioméricas y diasteroméricas y se reivindican todas tales variantes de estos compuestos.

La descripción detallada de los procedimientos experimentales utilizados para sintetizar los compuestos clave en este texto conduce a moléculas que se describen por medio de los datos físicos que las identifican así como por las representaciones estructurales asociadas con las mismas.

Los expertos en la técnica también reconocerán que durante los procedimientos de operación estándar en química orgánica, se utilizan frecuentemente ácidos y bases. Algunas veces se producen sales de los compuestos de origen, si éstos poseen la necesaria acidez o basicidad intrínseca necesaria, durante los procedimientos experimentales descritos en esta patente.

Ejemplo 1 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil ) piperazin-l-il ] etanona Etapa 1: 4-amino-lH-pirazolo [3 , -d]pirimidina-3- carbonitrilo A una solución de ter-butil éster de ácido hidrazinacarboxílico (129 g, 0.976 mol) en etanol (700 mi) colocada en un baño de hielo se agregó 2 , 3-diciano-but-2-enodinitrilo (125 g, 0.976 mol) en porciones mientras se mantuvo la temperatura interna por debajo de 16°C. Después de completar la adición, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, se concentró y se secó bajo vacío para proporcioriar 5-amino-lH-pirazolo-3 , 4-dicarbonitrilo . MS (ES) m/z 134.1 ; (M+H+) .

El 5-amino-lH-pirazolo-3 , 4-dicarbonitrilo obtenido anteriormente se refluyó en trimetilortoformato (1 litro) durante 8 horas . La mezcla se concentró entonces y se secó bajo vacío para producir metil éster de ácido N- (4 , 5-diciano-2H-pirazol-3-il) -formimídico, el cual se disolvió en metanol (400 mi), se enfrió a 0°C y se trató con 7N de NH3 en metanol (1 litro) . La mezcla resultante se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante la noche y se filtró. El sólido se lavó con una mezcla de 2:1 de MeOH-H20 (100 mi), acetona (100 mi) y éter (100 mi), después se secó bajo vacío para proporcionar 4-amino-lH-pirazolo [3 , -d]pirimidina-3- carbonitrilo (79 g, rendimiento 50%) . MS (ES) m/z 161.0 (M+H+) .

Etapa 2: ter-butil 2- (4-amino-3-ciano-lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acetato azolo [3 , 4-d]pirimidina-3-carbonitrilo (76.6 g, .0.476 mol) y carbonato de potasio (197 g, 1.427 mol) en DMF (680 mi) a 0°C se agregó ter-butil cloroacetato (68.1 mi, 0.476 mol) por goteo mientras se mantuvo la temperatura interna por debajo de 20°C. La mezcla resultante se agitó durante 22 horas, se filtró y se lavó con EtOAc (100 mi x 2) . El sólido obtenido se suspendió en agua helada (1.5 1), se filtró, se lavó con agua helada (500 mi) y éter (100 mi x 2), después se secó in vacuo para ; producir ter-butil 2- (4-amino-3-ciano-lH- i pirazolo [3 , 4-d] irimidin-l-il ) acetato (81.6 g, rendimiento 62.3%) . MS (ES) m/z 275.0 (M+H+) .

Etapa 3: ter-butil 2- (4-amino-3- (4 , 5-dihidro-lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acetato A una mezcla de ter-butil éster de ácido (4-amino-3-cieno-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -acético (80 g, 0.291 mol) y EtOH (800 mi) en un baño de agua helada se agregó ácido acético (67 mi) y después etilenodiamina (195 mi) . La mezcla resultante se refluyó durante 90 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se suspendió en agua (1 litro) , se filtró y se secó in vacuo para proporcionar ter-butil 2- (4-amino-3- (4, 5-dihidro-lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ) acetato (84.6 g, rendimiento 90%). MS (ES) m/z 318.1 (M+H+) .

Etapa 4: dihidrocloruro de ácido (2- (4-amino-3- (1H-imidazol-2-il) 7lH-pirazolo [3 , 4-d] irimidin-l-il ) acético dihidro-lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) acetato (84' g, 0.265 mol) y DMSO (900 mi) en un baño de agua helada se agregó periodinano Dess-Martin (169.6 g, 0.4 mol) en porciones mientras se mantuvo la temperatura interna por debajo de .25°C. La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambient6e y después se vació en agua helada (2 litros) que contenía 84 g de Na2S2C>3. La mezcla se ajustó a un pH de 12 a 14 con 3N de NaOH y se filtró para proporcionar un sólido que se lavó con agua, se re-suspendió en agua helada (2 litros), se filtró, se lavó con agua (500 mi), EtOAc (100 mi :x 2) y Et20 (100 mi x 2) y se secó in vacuo para proporcionar ter-butil áster de ácido (2- (4-amino-3- (1H-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ) acético (66.2 g, rendimiento 180%) . MS (ES) m/z 316.1 (M+H+) .

El ter-butil éster de ácido (2- (4-amino-3- (1H-imidazol-2-il ) -lH-pirazólo [3 , 4-d] irimidin-l-il ) acético (61 g, 193 mol) sé trató con 4N de HCl en dioxano (700 mi) a reflujo durante 2 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, el sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con EtOAc (80 mi x 2) y Et20 (100 mi) y se secó in vacuo para proporcionar ácido (2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , -d] irimidin-l-il ) acético como una sal de dihidrocloruro (66 g, cuantitativo) . MS (ES) m/z 260.1 (M+H+) .

Etapa 5: 2- [4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-l-il] etanona El dihidrocloruro de ácido - [4-amino-3- (1H-2-il)pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il] acético (79 g, 0.238 mol) y dihidrocloruro de 1- (4-cloro-3-metoxifenil ) piperazina (71.3 g, 0.238 mol) se suspendieron en DMF anhidroso (793 mi) y se enfriaron en un baño de hielo. Se agregó N,N-diisopropiletilamina (290 mi, 1.67 mol) y la mezcla se agitó a temperatura ' ambiente hasta que se disolvieron todos los sólidos para formar una solución café. Se agregó HCTU (113.23 g, 0.273 mol) en porciones durante 10 minutos mientras se mantuvo la temperatura interna por debajo de 20°C. Después de 3 horas, la mezcla de reacción se vació lentamente en un matraz de agua helada vigorosamente agitada (6 litros) para proporcionar una suspensión que se agitó durante 1 hora, se filtró y se lavó con NaHC03 saturado (500 mi x 2) y agua (500 mi x 2) . El sólido se purificó mediante trituración en MeCN a reflujo (2 x 500 mi) para proporcionar 2- [4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-clóro-3-metoxifenil) piperazin-l-il] etanona (90.5 g, rendimiento 81%, > 98% puro mediante LC-MS) . ½ MR (400 MHz , d6 - DMSO) d 13.0 (s, 1H) , 10.14 (d, 1H, J = 3.7 Hz) , 8.16 (s, 1H) , 7.95 (d, 1H, d, J = 3.7 Hz) , 7.25 (dd, 1H, J -1.03 y 1.36 Hz) , 7.20 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 7.16 (s, 1H) , 6.70 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.52 (dd, 1H, J = 2.4 y 8.8 Hz) , 5.37 (s, 2H) , 3.83 (s, 3H) , 3.74 (t, 2H, J = 4.8 Hz) , 3.58 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.28 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.17 (t, 2H, J = 4.8 Hz) . 13C NMR (100.6 MHz, d6 - DMSO) d 165.3, 159.0, 157.3, 155.7, 155.5, 151.6, 141.2, 136.6, 130.3, 128.7, 119.0, 111.9, 109.0, i 101.9, 98.0, 56.7, 49.4, 48.9, 48.8, 44.7, 42.1; IR (KBr) 3219, 2937, 1682, 1638, 1594, 1567 cm"1; MS (ES) m/z 468.1 (M+H+) . Análisis Calculado para C21H22N9O2CI -0.85 H20: C, 52.20; H , 4.94; N , 26.09; Cl, 7.34. Encontrado: C, 51.92; H, 4.68; N, 26.44; Cl, 7.18.

Etapa 6: sal de dihidrocloruro de 2- [4-amino-3- (1H-imidazol-2-il ) ^pirazolo [3 , -d] pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-l-il] etanona A una mezcla de 2- [4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ] -1- [4- ( 4-cloro-3- i metoxifenil)piperazin-l-il] etanona (50 g, 0.1068 mol), H20 (250 mi) , y acetona (750 mi) a 60°C se agregó HC1 concentrado (22.3 mi, 0.267 mol, 2.50 equivalentes) por goteo para proporcionar una solución café. Después de 90 minutos, se formó una suspensión bronce gruesa. La suspensión se diluyó hasta una concentración final de 0.03 M mediante la adición por goteo de acetona (2.1 litros) mientras se mantuvo la temperatura interna entre 58°C y 62 °C. La mezcla resultante se agitó a 60°C durante otros 90 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El sólido se lavó con acetona (60 mi x 2) y se secó in vacuo para producir sal de dihidrocloruro de 2- [4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -írazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-l-il]etanona (49.2 g, rendimiento 80%, >99% puro mediante LC-MS) como prismas bronce finos. 1H NMR (400 MHz , d6 - DMSO) d 13.45 (s, 1H) , 11.92 (s, 1H) , 9.43 (s, 1H), 8.50 (s, 1H) , 7.33 (s, 2H) , 7.22 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 6.72 (d, 1H, j = 2.4 Hz), 6.55 (dd, 1H, J = 2.4, 8.8 Hz) , 5.54 (s, 2H),,'3.84 (s, 3H) , 3.76 (t, 2H, J = 4.8 Hz) , 3.61 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.31 (t, 2H, J = 4.8 Hz) , 3.20 (t, 2H, J = 4.8 Hz) . MS (ES) m/z 468.1 (M+H+) . Análisis Calculado para C2iH22N902Cl-2HCl-l .75 H20: C, 44.07; H, 4.84; N, 22.02; Cl, 18.58. Encontrado: C, 43.89; H, 4.48; N, 22.0; Cl, 18.26. KF (H20) Calculado para C2iH22N902Cl-2HCl-l .75 H20: 5.51%. Encontrado: 5.14%.

Ejemplo 2 ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino 3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d] irimidin-l-il ] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil ) -1 , 2-dimetilpiperazin-l-il] etanona Etapa 1 : dihidrocloruro de 4- (4-cloro-3-metoxi-fenil ) -3 , 3-dimetilpiperazina 60 °C, durante la noche 2) HC_"EtOAc Una mezcla de 5-bromo-2-cloroanisol /3.70 g, 16.7 mol, 1 equivalente), 2 , 2. dimetil-piperazina (2.2 g, 1.2 equivalentes) y rac-BlNAP (1.04 g, 0.1 equivalentes) en tolueno (35 mi) se desgasificó con nitrógeno comprimido durante 5 minutos. A la mezcla se agregó NaOt-Bu (2.3 g, 1.4 equivalentes) y Pd2(dba)3 (54 mg, 0.005 equivalentes). La mezcla resultante se calentó a 60°C durante la noche y se enfrió a temperatura ambiente. Se agregó EtOAc (-200 mi) y la mezcla se filtró a través de celita. El filtrado se lavó con K2C03 saturado acuoso (200 mi), NaHC03 saturado acuoso (200 mi) y salmuera (200 mi) secuencialmente y después se secó sobre sulfato de magnesio. El residuo resultante después de la evaporación se disolvió en EtOAc (100 mi) y se trató con 2 N de HCl en Et20 (100 mi) a temperatura ambiente durante 2 horas. Se recolectó un sólido mediante filtración y se secó in vacuo para producir dihidrocloruro de 4-(4-cloro-3-metoxiLfenil) -3 , 3-dimetilpiperazina (4.0 g) . MS (ES) m/z 255.1 (M+Hf) .

Etapa 2: 2- [4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil ) -2 , 2-dimetilpiperazin-l-il] etanona El dihidrocloruro de ácido [4-amino-3- (lH-imidazol- 2-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-l-il]acético (100 mg, 0.2 mol) y el dihidrocloruro de 1- (4-cloro-3-metoxifenil) -3 , 3- dimetilpiperazina (100 mg, 0.3 mol) se suspendieron en DMF anhidroso (2.5 mi). Se agregó N,N-diisopropiletilamina (0.32 mi, 1 mol) a 0°C y la mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta disolver todos los sólidos para proporcionar una solución café.' Se agregó HBTU (114 mg, 0.3 mol). Después de 2 horas, la mezcla de reacción se vació lentamente en un matraz de agua helada vigorosamente agitado (100 mi) . La suspensión se extrajo con diclorometano (100 ml= y se lavó con NaHC03 saturado (100 mi), salmuera (100 mi) y se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna instantánea para producir 2- [4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) - pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ] -1- [4- (4-cloro-3-metoxifenil ) - 2 , 2-dimetilpiperazin-l-il] etanona como un sólido bronce claro (45 mg) después de la evaporación y el secado in vacuo. ½ MR (400 MHz, d6 - DMSO) d 10.14 (d,. 1H, J = 3.6 Hz) , 8.16 (s, 1H) , 7.95 (d, 1H, d, J = 3.6 Hz) , 7.24 (s, 1H) , 7.15 (s, 1H) , 7.14 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 6.40 (d, 1H, J = 2.4 Hz) , 6.31 (dd, 1H, J = 2.4 y 8.8 Hz), 5.29 (s, 2H) , 3.90 (t, 2H, J = ' 5.4.HZ), 3.84 ' (s, 3H) , 3.46 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.30 (s, 2H) , 1.38 (s, 6H) . MS (ES) m/z 496.1 (M+H+) .

: Ejemplo 3 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino- 3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3, 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil ) -piperazin-l-il] etanona Una mezcla de sal de dihidrocloruro de l-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil) -piperazina (65.2 mg, 0.206 mol, 1 equivalente), ácido [4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ) acético (50 mg, 1 equivalente), reactivo BOP (109 mg, 1.7 equivalentes) y N,N-diisopropiletilamina (0.165 mi, 5 equivalentes) en DMF (0.5 mi) se agitó a temperatura ambiente . durante la noche. La purificación por HPLC en fase inversa (acetonitrilo-H20 con TFA al 0.1% como eluyente) proporcionó 2- [4-amino-3- (1H-imidazol-2-il ) -pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro- 2-fluoro-5-metoxifenil ) -piperazin-l-il] etanona. MS (ES) m/z 486.5 (M+H+) .

Ejemplo 4 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino- 3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3, 4-d] pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil) -2-metil-piperazin-l-il) etanona El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro. de 1- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil) -3-metilpiperazina. XH NMR (400 MHz, d6 - DMSO) d 14.20 (br, 2H) , 10.28 (br, 1H) , 8.15 (s, 1H) , 7.93 (brs, 1H) , 7.33 (d, 1H, J = 11.6 Hz) , 7.17 (brs, 1H) , 6.71 (d, 1H, J = 8.0 Hz) , 5.44 (m, 1H) , 5.21, (d, 1H, J = 15.6 Hz) , 4.54 (m, 0.5H), 4.39 (m, 0.5 H) , 4.19 (m, 0.5 H) , 3.97 (m, 0.5 H) , 3.84 (s, 3H) ( 3.56 (m, 0.5 Hz) , 3.40 (m, 2H) , 3.08 (m, 0.5 H) , 2.96 (m, 0.5 H) , 2.85 (m, 1H) , 2.72 (m, 0.5 H) , 1.42 (d, 1H, J = 6.0 Hz) , 1.24 (d, 2H, j'= 6.8 Hz) . MS ' (ES) m/z 500.5 (M+H+) .

Ejemplo 5 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3, 4-d] pirimidin-l-il ] -l-[4- (4-cloro-2-fluorofenil) -2-metil-piperazin-l-il ] etanona Etapa 1- (4-cloro-2-fluoro-fenil) -3-metilpiperazina El l-bromo-4-cloro-2-fluorobenceno (5 g, 23.9 mol, 1 equivalente), de 2- metilpiperazina (2.8 g, 1.15 equivalentes), tris-bencilidinaacetona dipaladio (0) (0.43 g, 0.05 equivalentes), rac-BINAP (0.89 g, 0.15 equivalentes), ter-butóxido de sodio (3.2 g, 1.4 equivalentes) se mezclaron en tolueno (60 mi) y la mezcla se calentó a 65°C durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se agregó etil acetato (100 mi). El precipitado negro se retiró mediante filtración. El filtrado se lavó con 3 N de solución de carbonato de potasio dos veces. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se neutralizó con 2 N de HCl-éter. El sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con éter y se secó, in vacuo para proporcionar 1- (4-cloro-2-fluorofenil ) -3-metilpiperazina como una sal de dihidrocloruro .

Etapa 2: El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando 1- (4-cloro-2-fluorofenil) -3-metilpiperazina . 1H MR (400 MHz, CDC13) d 10.38 (br, 1H) , 10.26 (br, 1H) , 8.32 (s, 1H) , 7.24 (m, 2H) , 7.17 (s, 1H) , 7.07 (s, 1H) , 7.04 (d, 2H, J = 2-Hz),: 6.80 (t, 1H, J = 8.8 Hz) , 5.93 (brs, 1H) , 5.24 (m, 2H) , 4.81 (s, 0.5 H) , 4.47 (d, 0.5 H, J = 12 Hz) , 4.20 (s, 0.5 H) , 3.68 (m, 1H) , 3.31 (m, 2H) , 2.88 (t, 1H, J = 16 Hz), 2.76 (dd, 1H, J = 12, 3.6 Hz) , 1.50 (d, 1.5 H, J = 5.2 Hz), 1.39 (d, 1.5 H, J = 6.4 Hz). MS (ES) m/z 470.5 (M+H+) .

Ejemplo 6 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- [4- (4-cloro-3-etoxifenil) -piperazin-l-il ) etanona El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro de 1- (4-cloro-3-etoxifenil)piperazina. 1H MMR (400 Hz , d6 - DMSO) d 14.20 (br, 1H) , 10.13 (br, 1H) , 8.15 (s, 1H) , 7.98 (d, 1H, J = 4 Hz) , 7.25 (S, 1H) , 7.19 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 7.Í5 (s, 1H), 6.68 (d, 1H, J' = 2.4 Hz) , 6.51 (dd, 1H, J = 8.8, 2.8 Hz), 5.36 (s, 2H) , 4.09 (q, 2H, J = 6.4 Hz) , 3.73 (br, 2H) ,: 3.57 (br, 2H) , 3.26 (br, 2H) , 3.15 (br, 2H) , 1.34 (t, 3H, J! = 6.8 Hz) . MS (ES) m/z 482.5 (M+H+) .

Ejemplo 7 Este : ejemplo ilustra- la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4- loro-3-metoxifenil ) -2-metil-piperazin-l-il ] etanona El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro de 1- (4-cloro-3-metoxifenil) -3-metilpiperazina. ½ NMR (400 MHz, d6 - DMSO) d 14.4 (br, 1H) , 10.13 (s, 1H) , 8.16 (s, 1H) , 7.99 (s, 1H) , 7.25 (t, 1H, J = 1.2 Hz) , 7.19 (d, 1H, J = 8 Hz) , 7.15 (s, 1H) , 6.64 (s, 1H) , 6.50 (m, 1H), 5.51-5.21 (m, 2H) , 4.49 (s, 0.5 H) , 4.38 (s, 0.5 H) , 4.15 (m, 0.5 H) , 3.98 (m, 0.5 H) , 3.83 (s, 3H) , 3.70 (m, 1H) , 3.55. (m, 1H) , 3.29 (s, 1H) , 3.08-2.85 (m, 2H) , 1.37 (d, 1.5 H, J = 6.0 Hz), 1.18 (d, 1.5 H, J = 6.4 Hz) . MS (ES) m/z 482.2 (M+H+) .

Ejemplo 8 Estei ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazolr2-il) -pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-clorofenil) -2-metilpiperazin-l-il] etanona El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro de 1- (4-clorofenil) -3-metilpiperazina. 1H NMR (400 MHz , d6 - DMSO) d 11.96 (br, 1H) , 9.62 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.48 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 7.30 (s, 1H) , 7.22 (t, 2H, J = 2.4 Hz) , 6.96 (t, 2H, J = 8 Hz) , 5.50 (m, 2H) , 4.45 (m, 0.5 H) , 4.15 (m, 0.5 H) , 3.90 (m, 0.5 H) , 3.55 (m, 2H) , 2.8-3.14 (m, 2H) , 2.60 (m, 0.5 Hz) , 1.89 (s, 1H) , 1.39 (d, 1.5 H, J = 6.0 Hz), 1.18 (d, 1.5 H, J = 6.8 Hz).. MS (ES) m/z 452.1 (M+H+) .

Ejemplo 9 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo[3, 4-d]pirimidin-l-il] -l-[4- (4-clorofenil ) piperazin-l-il ] etanona El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro' de 1- (4-clorofenil)piperazina. MS (ES) m/z 438.1 (M+H+) .

Ejemplo 10 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3, -d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-etoxifenil ) -2-metilpiperazin-l-il] etanona BOP, DIEA El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3 utilizando dihidrocloruro de 1- (4-cloro-3-etoxifenil) -3-metilpiperazina . XH MR (400 MHz, d6 - DMSO) d 14.4 (br, 1H) , 10.15 (s, 1H) , 8.16 (s, 1H), 7.98 (s, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 7.18 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.15 (s, 1H) , 6.62 (s, 1H) , 6.50 (m, 1H) , 5.51-5.25 (m, 2H) , 4.48 (s, 0.5 H) , 4.38 (s, 0.5 H) , 4.09 (m, 2.5 H) , 3.93 (m, 1 0.5 H) , 3.68-3.51 (m, 2H) , 3.07-2.75 (m, 2.5 H) , 2.61 (m, 0.5 H) , 1.33 (t, 3 H, J = 6.8 Hz) , 1.17 (d, 3 H, J = 7.2 Hz) . MS (ES) m/z 496.5 ( +H+) .

Ejemplo 11 Este ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3, 4-d]pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-trifluorometoxifenil )piperazin-l-il ] etanona Una mezcla de sal de dihidrocloruro de l-(4-cloro-3-trifluorometoxifenil)piperazina (70 mg, 0.198 mol, 1 equivalente), ácido [4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il] acético (96 mg, 1 equivalente), HATU (98 mg, 1.3 equivalentes) y N, N-diisopropiletilamina (0.276 mi, 8, equivalentes) en DMF (0.5 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas . La mezcla de reacción se diluyó con etil acetato, se lavó con bicarbonato de sodio saturado acuoso, se secó sobre sulfato de sodio y se purificó mediante TLC para proporcionar 2- [.4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il] -1- [4- (4-cloro-3-trifluorometoxifenil ) piperazin-l-il ] etaríona . 1H MR (400 MHz , CD3OD) d 8.18 (s, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 7.18 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 6.95 (s, 2H) , 5.40 (s, 2H) , 3.85 (m, 4H) , 3.25 (m, 4H) . los tres protones restantes (provenientes del grupo amino y del anillo de imidazol) no se observaron debido al uso de CD3OD como solvente. MS (ES) m/z 522.1 (M+H+) .

Ejemplo 12 Este; ejemplo ilustra la preparación de 2-[4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -pirazolo [3 , 4-d] pirimidin-l-il ] -1- [4- (4-cloro-2-fluorofenil ) piperazin-l-il ] etanona Etapa 1: 1- (4-cloro-2-fluorofenil) piperazina El l-bromo-4-cloro-2-fluorobenceno (5 g, 23.9 mol, 1 equivalente) , ter-butil éster de ácido piperazina-1-carboxílico (5.3 g, 1.15 equivalentes), tris-bencilidinaacetona dipaladio (0) (0.43 g, 0.05 equivalentes), rac-BINAP (0.89 g, 0.15 equivalentes), ter-butóxido de sodio (3.2 g, 1.4 equivalentes) se mezclaron en tolueno (60 mi) y la mezcla se calentó a 65°C durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se agregó etil acetato (100 mi). El precipitado negro se retiró mediante ' filtración. El filtrado se lavó con 3 N de solución de carbonato de potasio dos veces. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se concentró y se trató con 4 N de HCl en dioxano. El sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con éter y se secó bajo alto vacío para proporcionar 1- ( 4-cloro-2- fluorofenil)piperazina como una sal de dihidrocloruro .

Etapa 2: El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 11 utilizando dihidrocloruro de 1- (4-cloro-2- fluorofeniDpiperazina. XH MR (400 MHz, CD3OD) d 8.16 (s, 1H) , 7.19 (s, lH), 7.1-7.17 (m, 3H) , 7.05 (m, 1H) , 5.40 (s, I 2H) , 3.85 (m, '2?) , 3.75 (m, 2 H) , 3.18 (m, 2H) , 3.07 (m, 2H) . Los tres protones restantes (provenientes del grupo amino y del anillo dei imidazol) no se observaron debido al uso de CD3OD como solvente. MS (ES) m/z 456.1 (M+H+) .

Ejemplo 13 Este ejemplo ilustra la evaluación de la actividad biológica asociada con los compuestos de interés de la invención. ' ' MATERIALES Y MÉTODOS A. Células 1. Células que expresan CCRl a) células THP-1 Las células THP-1 se obtuvieron de la ATCC (TIB-202) y se cultivaron como una suspensión en medio RPMI-1640 suplementado con 2 mM de L-glutamina, 1-5 g/1 de bicarbonato de sodio, 4.5 g/1 de glucosa, 10: mM de HEPES, 1 mM de piruvato de sodio, 0.05% de 2-mercaptoetanol y 10% de FBS . Las células se cultivaron bajo 5% C02/95% aire, 100% de humedad a 37°C y se sub-cultivaron dos veces por semana a 1:5 (las células se cultivaron a un rango de densidad de 2 x 105 a 2 x 106 células/ml) y se cosecharon a 1 x 106 células/mi. Las células THP-1 expresan CCRl y pueden utilizarse en ensayos de enlace de CCRl y funcionales . 2. Ensayos de Quimiotaxis Identificación de inhibidores de CCRl Una de las funciones primarias de las quimosinas es su capacidad para mediar la migración de células que expresan el receptor de quimosina, tales como los glóbulos blancos. Para confirmar que un compuesto de interés inhibió no solamente el enlace específico y la señalización de CCRl (al menos como se determina mediante ensayos de movilización de calcio) , sino también la migración mediada por CCRl, se empleó un ensayo de quimiotaxis . Las células mielomonocíticas de leucemia THP-1, que se asemejan a monocitos, así como monocitos recientemente aislados, se utilizaron como objetivos para la función del factor ¾ quimiotáctico por medio de ligandos de quimosina CCRl (i.e., ???-?a, CCLl5/leucotactina) . Las células se colocaron en el compartimento superior de una cámara de migración de micro pozo, con filtros de policarbonato recubiertos con polivinilpirrólidona de poro de 5 ' um en cámaras de quimiotaxis de 96 pozos (Neuroprobe; Gaithersburg, MD) utilizando amortiguador de quimiotaxis (solución salina balanceada de Hank ( HBSS ) y 1% de FBS . Los ligandos de quimosina CCRl (i.e., MIP-la, CCLl5/leucotactina; R&D Systems; Minneapolis, MN) se utilizan para evaluar la inhibición mediada por el compuesto de la migración mediada por CCRl. Otras quimosinas (i.e., SDF- IOÍ; R&D Systems; Minneapolis, MN) se utilizan como controles de especificidad. La cámara inférior se cargó con 29 µ? de quimosina (i.e., 0.1 nM de CCLlS/leucotactina) y cantidades variables del compuesto; la cámara superior conten a 100,000 THP-1 o células de monocito en 20 µ? . En ausencia de inhibidor, las células migrarán a la cámara inferior en respuesta al agonista de quimosina; si un compuesto inhibió la función de CCRl, entonces la mayor parte de las células permanecerán en la cámara superior. Para evaluar un compuesto de afinidad de interés para CCRl asi como para confirmar su capacidad para inhibir la migración celular mediada por CCRl, se tituló la actividad inhibidora sobre un rango de concentraciones del compuesto de 1 x 10"10 a 1 x 10"4 en este ensayo de quimiotaxis. ; - En este ensayo, la cantidad del compuesto varió; mientras que el número de células y las concentraciones del agonista de quimosina se mantuvieron constantes. Después de incubar las cámaras de quimiotaxis de 1 a 2 horas a 37°C, las células que respondieron en la cámara inferior se cuantificaron marcándolas con · el ensayo CyQuant (Molecular Próbes) , un método de tinte fluorescente que mide el contenido de ácido nucleico, y se midieron con un Spectrafluor Plus (Tecan) . El programa computarizado Prism para GraphPad,, Inc., (San Diego, Ca) se utilizó para calcular los valores ICso- Los valores IC50 son aquellas concentraciones del compuesto requeridas para inhibir el número de células que responden a un agonista de CCRl por 1 50%. 3. Eficacia in vivo a) Modelo de conejo de inflamación destructiva de articulación ' Un estudio LPS en conejo puede conducirse esencialmente ,como se describe en Podolin et al., bid. , se tratan conejos, hembra de Nueva Zelanda (aproximadamente de 2 kilogramos) iiitra-articularmente en ambas rodillas con LPS (10 ng) . El compuesto de interés (e.g., formulado en 1% de metocel) o el vehículo (1% de metocel) se dosifica oralmente a un volumen de dosis de 5 ml/kg dos veces (2 horas antes de la inyección i'ntra-articular de LPS y 4 horas después de la inyección intra-articular de LPS) . Dieciséis horas después de la inyección de LPS, se lavan y se llevan a cabo las cuentas celulares. Los efectos benéficos del tratamiento se determinan por la reducción en el número de células inflamatorias ' reclutadas hacia el fluido sinovial inflamado de las articulaciones de rodilla. El tratamiento con el compuesto de interés da como resultado una reducción significativa en las células inflamatorias reclutadas. b) Evaluación de un compuesto de interés en un modelo de rata de artritis inducida por colágeno Puede conducirse un estudio de artritis por colágeno tipo II a 17 días del desarrollo para evaluar los efectos de uri compuesto de interés en hinchazón clínica de tobillo inducida por artritis. La artritis por colágeno en ratas es un modelo experimental de poliartritis que se ha utilizado ampliamente para la prueba preclínica de numerosos agentes anti-artríticos (ver Trentham et al., J. Exp. Med. 146 (3 ) : 857-868 (1977), Bendele et al., Toxicologic Pathol . , 27:134-142 (1999), Bendele et al., Arthritis Rheum. , 42:498-506 (1999)) . Las marcas distintivas de este modelo son confiables para el comienzo y progreso de una robusta inflamación poliarticular fácilmente medible, una marcada destrucción del cartílago en asociación con formación paño sinovial y resorción ósea de leve a moderada y proliferación ósea perióstica.

Se anestesia a ratas Lewis hembra (aproximadamente de 0.2 kilogramos) con isoflurano y se inyectan con adyuvante incompleto de Freund conteniendo 2 mg/ml de colágeno bovino tipo II en la base del rabo y en dos sitios en el lomo en los días 0 y 6 de este estudio de 17 días. Se dosifica el compuesto de interés diariamente de manera subcutánea desde el día 0 hasta el día 17 en una dosis, eficaz. Se toman mediciones del calibre del diámetro de la articulación del tobillo y la hinchazón reducida de la articulación se toma como una medida de la eficacia. c) Modelo de rata de osteoporosis inducida por ovariotomía un modelo de rata de osteoporosis inducida por ovariotomía puede conducirse esencialmente como en Dunstan et al., (1999) J. Bone and Min Res., 14:953. Se opera simuladamente a ratas jóvenes hembra Sprague-Dawley (180-200 g) o se ovariotomizan (OVX) . Dentro de los 7 días siguientes a la operación, se inician dosis orales diarias de antagonista CCRl o vehículo solo (aceite de ajonjolí) . Después de dos semanas de dosificación, se eutaniza a las ratas y se analizan los niveles en suero de los biomarcadores de osteoclastos y osteoblastos (C-telopéptido y osteocalcina MID, respectivamente) . Adicionalmente, se retira el fémur y la tibia para su examen histopatológico con manchado H&E y/o TRAP . d) El modelo Radl 5TGM1 modificado de enfermedad de mieloma óseo La enfermedad de mieloma óseo puede estudiarse como se describe adicionalmente en Oyajobi et al., Mol. Cáncer Ther., 2007, 6:1701-1708. Se conducen estudios en animales utilizando ratones hembra C57BL/ aLwRijHsd de 6 a 9 semanas de edad (Harían) . Las lesiones de mieloma se inducen en ratones mediante la inoculación intravenosa de 106 células 5TGMl-eGFP H1.1+ viables o células 5TGM1 de originales a través de las venas del rabo. El compuesto de interés (e.g., formulado en aceite de ajonjolí al 100%) o el vehículo (100% aceite de ajonjolí) se dosifica oralmente en un volumen de dosis de 2.5 ml/kg dos veces al día durante 4 semanas. Se determinan los pesos corporales de los animales en la línea de base y posteriormente cada semana. Al final de las 4 semanas, se visualizan los ratones completos e inmediatamente después del sacrificio, se disecan los esqueletos y los órganos viscerales (bazos, hígados, ríñones, gónadas, cerebros, pulmones y corazones) y se visualizan por focos de tumor fluorescentes para valorar la carga del tumor .

En la Tabla 2 (siguiente) se proporcionan las estructuras y la actividad para los compuestos representativos descritos en la presente. Se proporciona la actividad, como sigue, para el ensayo de quimiotaxis como se describió anteriormente: +, 10 nM < IC50 < 150 nM; ++, 1 nM < IC5o 10 nM; y +++, IC50 < 1 nM.

Tabla 2 1.009/+ 1.010/+++ 1.011/+ 1.012/++ En las comparaciones directas, los compuestos 1.001, 1.003, 1.004, 1.006, 1.007, 1.010 y 1.011 de la presente invención proporcionaron una actividad que fue al menos un orden de magnitud mejor que la actividad demostrada por los compuestos relacionados probados (pirido[4,3-b]pirazolos imidazol sustituidos en la Solicitud de E.U. relacionada Serie No. 12/124,894. Por ejemplo, en el análisis de quimiotaxis, proporcionó una IC50 que fue de un orden de magnitud menor que Habiendo descrito ahora la invención a modo de descripción escrita y ejemplos, los expertos en la técnica reconocerán que la invención puede practicarse en una variedad de modalidades y que la descripción y ejemplos anteriores son para propósitos de ilustración y no como limitación de, las reivindicaciones siguientes.

Claims (24)

1. t - 78 - REIVINDICACIONES Un compuesto de la Fórmula I o sales, hidratos o N-óxidos farmacéu icamente aceptables de los mismos, en donde R y R se seleccionan independientemente cada uno del grupo que consiste de H y CH3; R2a se selecciona del grupo que consiste de H y F; y R2d se selecciona del grupo que consiste de H, alcoxi C1-4 y haloalcoxi C1-4.
2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde R2a es H.
3. 3. El compuesto de la reivindicación 1 , en donde Rla y Rlb son cada uno H.
4. 4. El compuesto de la reivindicación 1, en donde Rlb es metilo y Rla es H.
5. 5. El compuesto de la reivindicación 1, en donde Ria y Rib son CA¿A UNO CH3.
6. 6. El compuesto de la reivindicación 1, en donde R2a es hidrógeno y R2d se selecciona del grupo que consiste de metoxi, etoxi y trifluorometoxi .
7. 7. El' compuesto de la reivindicación 1, en donde dicho compuesto es de la Fórmula la la Ib en donde R2a se selecciona del grupo que consiste de H y F; y R2d se selecciona del grupo que consiste de metoxi, etoxi y trifluorometoxi .
8. 8. El compuesto de la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste de:
9. 9. , El compuesto de la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste de:
10. 10. El compuesto de la reivindicación 1, en donde dicho compuesto tiene la fórmula: o sales o N-óxidos farmacéuticamente aceptables del mismo .
11. 11. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
12. 12. , El compuesto de la reivindicación 1, que tiene fórmula : en una forma de sal farmacéuticamente aceptable.
13. 13. El compuesto de la reivindicación 12, en donde dicha forma dé sal es una forma de sal de hidrocloruro .
14. 14. i Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil) -2-metilpiperazin-l-il ) etanona; (S) -2- (4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -1H-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il ) -1- (4- ( 4-cloro-2-fluorofenil ) -2-metilpiperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil) piperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4- · d]pirimidin-l-il) -1- (4- ( 4-cloro-2-fluoro-5-metoxifeni1 ) piperazin-1-i1 ) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-l- il) etanona; . (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo[3 , 4-d]pirimidin-l-il ) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil) -2-metilpiperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- ( lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , -d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-etoxifenil)piperazin-l-il) etanona; (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo [3 , 4-d] irimidin-l-il ) -1- (4- (4-clorofenil) -2-metilpiperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-clorofenil)piperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil) -2,2-dimetilpiperazin-l-il) etanona; (S) -2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -1H-pirazolo[3 , 4-d] pirimidin-l-il ) -1- (4- (4-cloro-3-etoxifenil) -2-metilpiperazin-l-il) etanona; 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3- ( trifluorometóxi) fenil ) piperazin-l-il ) etanona; y 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il ) -lH-pirazolo [3 , 4-d]pirimidin-l-il) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-l-il) etanona.
15. 15. El compuesto 2- (4-amino-3- (lH-imidazol-2-il) - lH-pirazolo [3 4-d] pirimidin-l-il ) -1- (4- (4-cloro-3-metoxifeni1 ) piperazin-1-i1) etanona .
16. 16. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un excipiente o vehículo farmacéuticaménte aceptable.
17. 17. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición.
18. 18. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o condiciones mediadas por CCR1. '
19. 19. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicha enfermedad o condición mediada por CCRl es una condición inflamatoria.
20. 20. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicha enfermedad o condición mediada por CCRl es un trastorno inmunorregulador .
21. 21. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicha enfermedad o condición mediada por CCRl se selecciona del grupo que consiste de enfermedad osteoartrítica, mieloma múltiple, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, rechazo al trasplante, restenosis, dermatitis, eczema, urticaria, vasculitis, enfermedad inflamatoria intestinal, alergia a alimentos, asma, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, psoriasis, lupus eritematoso, osteoartritis , accidente cerebro-vascular, restenosis y éncefalomielitis .
22. 22. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicha enfermedad o condición se selecciona del grupo que consiste de enfermedad osteoartrítica, mieloma múltiple, artritis reumatoide y rechazo al trasplante.
23. 23. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicho medicamento se elabora para administración oral, parenteral, rectal, transdérmica, sublingual, nasal o tópica.
24. 24. Un uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicho medicamento se elabora para su administración en combinación con un agente anti-inflamatorio, un agente analgésico, un agente anti-proliferativo , un inhibidor metabólico, un inhibidor de migración de leucocitos, o un inmuno modulador.