CN102159213A - 4-氨基-3-(咪唑基)-吡唑并[3,4-b]嘧啶 - Google Patents

4-氨基-3-(咪唑基)-吡唑并[3,4-b]嘧啶 Download PDF

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Abstract

本发明提供用作CCR1受体的强效拮抗剂并具有体内抗炎活性的化合物。所述化合物是4-氨基-3-咪唑基-吡唑并[3，4-d]嘧啶衍生物，这些化合物可用于治疗CCR1介导疾病的药物组合物、方法，还能在鉴定竞争性CCR1拮抗剂的试验中用作对照。

Description

4-氨基-3-(咪唑基)-吡唑并[3,4-b]嘧啶
相关申请的交叉引用
本申请要求2008年9月11日提交的美国序列号的优先权61/096,191，该申请的内容通过引用纳入本文。
对于在联邦资助研发下所作出发明的权利的声明
不适用。
发明背景
本发明提供化合物、包含那些化合物或其药学上可接受的盐中一种或多种的药物组合物，其有效抑制各种趋化因子(例如，MIP-1α、白细胞诱素(leukotactin)、MPIF-1及RANTES)与CCR1受体的结合。作为CCR1受体的拮抗剂或调节剂，该化合物和组合物可用于治疗炎性及免疫紊乱状况和疾病。
人类健康取决于身体检测和破坏或可消耗个体的宝贵资源和/或诱发疾病的外来病原体的能力。免疫系统是身体的防御系统，包括白细胞(白血球(WBC)：T和B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞及免疫衍生的细胞(例如，破骨细胞))、淋巴组织及淋巴管。为抵御感染，白细胞在整个身体中循环以检测病原体。一旦检测到病原体，先天免疫细胞，尤其是细胞毒性T细胞募集至感染部位以破坏该病原体。趋化因子用作免疫细胞(例如，淋巴细胞、单核细胞和粒细胞)的募集和活化、鉴定病原体存在部位的分子指示剂。
尽管免疫系统调节病原体，但可产生某些不适当的趋化因子信号传导，原因在于炎性病症(例如，类风湿性关节炎、多发性硬化症等)的触发或持续。例如，在类风湿性关节炎中，聚集于骨关节中的失调趋化因子吸引且活化浸润性巨噬细胞和T-细胞。这些细胞的活性诱导滑膜细胞增殖，从而至少部分导致炎症和最终的骨及软骨损失(参见DeVries，M.E.等，Semin Immunol 11(2)：95-104(1999))。一些脱髓鞘病(例如，多发性硬化症)的特点是趋化因子介导的单核细胞/巨噬细胞和T细胞募集至中枢神经系统(参见Kennedy等，J.Clin.Immunol.19(5)：273-279(1999))。趋化因子将破坏性WBC募集至移植物涉及其随后的排斥。参见DeVries，M.E.等人，同上。由于趋化因子在炎症及淋巴细胞发育中起关键作用，能专门调控其活性对改善和延缓目前没有满意治疗的疾病有巨大影响。此外，可最大程度降低移植排斥而无昂贵的免疫抑制药物的普遍和复杂的影响。
骨代谢取决于控制骨形成的成骨细胞和控制骨再吸收的破骨细胞的总体活性。骨代谢异常认为是骨形成和骨再吸收失衡所致。骨质疏松(和绝经后骨质疏松)、高钙血症、佩吉特病、肾性骨营养不良症、类风湿性关节炎、骨关节炎、溶骨转移(lytic bone metastases)、多发性骨髓瘤等是已知的骨代谢异常相关疾病。骨质疏松是此类骨代谢异常导致的典型疾病。当破骨细胞的骨再吸收作用超过成骨细胞的骨形成作用时该疾病产生。该疾病的特征在于骨钙化物质和骨基质均减少。据信，CCR1在破骨细胞前体募集和它们的成熟中起作用，抑制该过程可缓解该疾病(Vallet等，Blood，110：3744-3752(2007))。骨髓中多发性骨髓瘤细胞的进一步死骨形成导致破骨细胞募集至这些部位，从而为骨髓瘤增殖提供反馈回路并刺激脱钙(Menu等，Clin Exp Metastases，23：291-300(2006))。
趋化因子(一组超过40个小肽(7-10kD))结合主要表达于WBC或免疫衍生细胞上的受体，并通过G-蛋白-偶联信号传导级联反应来传导信号以介导它们的化学引诱物和化学刺激物功能。受体可结合多个配体；例如，受体CCR1结合RANTES(调节活化正常T细胞表达)、MIP-1α(巨噬细胞炎性蛋白)、MPIF-1/CKβ8和白细胞诱素趋化因子(具有较小亲和力)。迄今为止，已知有24个趋化因子受体。趋化因子的绝对数量、多配体结合受体、及免疫细胞上不同的受体情况能进行紧密受控和特异性的免疫应答。参见Rossi等，Ann.Rev.Immunol.18(1)：217-242(2000)。可通过调节相应受体来控制趋化因子活性，从而治疗相关炎性和免疫疾病且能进行器官及组织移植。
受体CCR1及其趋化因子配体(包括例如MIP-1α、MPIF-1/CKβ8、白细胞诱素及RANTES)代表重要治疗靶点(参见Saeki等，Current Pharmaceutical Design 9：1201-1208(2003))，因为它们涉及类风湿性关节炎、移植排斥(参见DeVries，M.E.等，同上)及多发性硬化症(参见Fischer等，J Neuroimmunol.110(1-2)：195-208(2000)；Izikson等，J.Exp.Med.192(7)：1075-1080(2000)和Rottman等，Eur.J.Immunol.30(8)：2372-2377(2000))。事实上，已经发现了功能阻断抗体、经修饰的趋化因子受体配体及有机小化合物，其中一些已成功证实能预防或治疗一些趋化因子介导疾病(综述见Rossi等，同上)。值得注意的是，在类风湿性关节炎的实验模型中，当给予信号传导阻断性的经修饰RANTES配体时，疾病发生降低(参见Plater-Zyberk等，Immunol Lett.57(1-3)：117-120(1997))。尽管功能阻断性抗体和小肽治疗剂有前途，但其具有降解、给予后半衰期极短、及开发和制造费用昂贵的风险，这是大多数蛋白质的特性。有机小化合物因通常具有较长的体内半衰期、起效剂量较低，通常可口服给予以及比较便宜而优选。先前已经描述了CCR1的一些有机拮抗剂(参见Hesselgesser等，J.Biol.chem.273(25)：15687-15692(1998)；Ng等，J.Med.Chem.42(22)：4680-4694(1999)；Liang等，J.Biol.chem.275(25)：19000-19008(2000)；及Liang等，Eur.J.Pharmacol.389(1)：41-49(2000))。鉴于在动物模型中对于疾病治疗显示有效(参见Liang等，J.Biol.chem.275(25)：19000-19008(2000))，继续该研究以鉴定可用于治疗CCR1信号传导所介导疾病的其它化合物。
发明概述
本发明涉及式I所示化合物或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物：
Figure BPA00001330100700031
在式I中，R1a和R1b各自独立选自：H和CH3；R2a选自H或F；R2d选自H、C1-4烷氧基或C1-4卤代烷氧基。
除本文提供的化合物外，本发明还提供包含这些化合物中一种或多种的药物组合物、以及使用这些化合物主要治疗CCR1、CCR2和/或CCR3信号传导活性相关疾病的方法。
附图简述
无。
发明详述
I.缩写和定义
除非另有说明，术语″烷基″本身或作为另一取代基的一部分指具有指定碳原子数的直链或支链烃基团(即，C1-8表示1-8个碳)。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。
术语″烷氧基″以其常规含义使用，指通过氧原子连接至分子其余部分的那些烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
除非另有说明，术语″卤″或″卤素″本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，诸如″卤代烷基″等术语表示包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语″C1-4卤代烷基″表示包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。同样，术语“卤代烷氧基”表示包括单卤代烷氧基和多卤代烷氧基，例如三氟甲氧基(CF3O-)和2-氟乙氧基(FCH2CH2O-)。
″保护基团″指除烷基以外当连接至分子中的反应性基团时掩蔽、减少或阻碍其反应性的部分。保护基团的实例可见T.W.Greene和P.G.M.Wuts，《有机合成中的保护基团》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第3版，约翰韦利父子公司(John Wiley & Sons)，纽约，1999；Harrison和Harrison等，“有机合成方法概要”(Compendium of Synthetic Organic Methods)，第1-8卷(约翰韦利父子公司，1971-1996)。代表性羟基保护基团包括酰基、苄基及三苯甲基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚和烯丙基醚。代表性氨基保护基团包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧基羰基(CBZ)、叔丁氧基羰基(BOC)、三甲基甲硅烷基(TMS)、2-三甲基甲硅烷基-乙烷磺酰基(SES)、三苯甲基和经取代的三苯甲基、烯丙基氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)、硝基-藜芦基氧基羰基(NVOC)等。
″氨基酸偶联剂″指诸如HBTU(六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲
Figure BPA00001330100700051
)等试剂，其与氨基酸的羧酸基团反应形成可用于与各种亲核试剂(例如胺、醇和硫醇)缩合以产生其它酯、硫酯或酰胺基团的活化的中间体。
术语″药学上可接受的盐″表示包括根据本文所述化合物上发现的特定取代基，用相对无毒的酸或碱制得的活性化合物的盐。当本发明化合物包含相对酸性的官能团时，可通过使该化合物的中性形式与足够量的所需碱(纯净的或在适宜的惰性溶剂中)接触获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括以下的盐：伯胺、仲胺和叔胺(包括经取代的胺、环状胺、天然产生的胺等)，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。当本发明化合物包含相对碱性的官能团时，可通过使该化合物的中性形式与足够量的所需酸(纯净或在适宜惰性溶剂中)接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自以下无机酸的那些盐：如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸(monohydrogencarbonic acid)、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸等；和衍生自以下相对无毒的有机酸的盐：如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、延胡索酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，和有机酸，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric acid)等的盐(参见，例如Berge，S.M.等，″药物盐(Pharmaceutical Salts)″，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些具体化合物包含能将化合物转化成碱或酸加成盐的碱性和酸性官能团。
可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来重新产生化合物的中性形式。化合物的母体形式的某些物理性质(例如在极性溶剂中的溶解度)不同于各种盐形式，然而就本发明的目的而言，所述盐在其它方面与化合物的母体形式等效。
除盐形式外，本发明提供前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下易于经化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。此外，前药可通过化学或生物化学方法在离体环境中转化成本发明化合物。例如，当将前药与适宜的酶或化学试剂一起放置于透皮贴剂贮器中时，前药可缓慢转化成本发明化合物。
本发明的某些化合物可存在未溶剂化形式以及溶剂化形式，包括水合形式。溶剂化形式通常与未溶剂化形式等效，应包括在本发明范围内。本发明的某些化合物可以存在多晶型或无定形形式。对于本发明考虑的应用，所有物理形式通常是等效的，包括在本发明范围内。
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体(regioisomer)和单独的异构体(例如，分开的对映体)均应包括在本发明范围内。本发明化合物还可在构成此类化合物的一个或多个原子处包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素(例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C))对化合物作放射性标记。本发明化合物的所有同位素变化形式(无论是否具有放射性)均应包括在本发明范围内。
II.概述
本发明源于发现式I所示化合物作为CCR1受体的强效拮抗剂。该化合物具有体内抗炎活性和优良的药代谢动力学特性。因此，本文提供的化合物可用于药物组合物、治疗CCR1介导疾病的方法，以及作为对照用于鉴定竞争性CCR1拮抗剂的试验中。
III.化合物
在一方面，本发明提供式I所示化合物或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物：
Figure BPA00001330100700071
在式I中，R1a和R1b各自独立选自H或CH3；R2a选自H或F；R2d选自H、C1-4烷氧基或C1-4卤代烷氧基。在一个实施方式中，R2a是氢。在另一实施方式中，R1a和R1b各自是H。在另一实施方式中，R1b是甲基和R1a是H。在还有另一实施方式中，R1a和R1b各自是甲基。在还有另一实施方式中，R2a是氢，R2d选自甲氧基、乙氧基或三氟甲氧基。
在一个优选的实施方式中，本发明化合物如式Ia或Ib所示：
式中R2a选自H或F；R2d选自甲氧基、乙氧基或三氟甲氧基。
在具体的实施方式中，本发明化合物选自下组：
Figure BPA00001330100700073
在另一具体实施方式中，本发明化合物选自下组：
在还有另一实施方式中，本发明化合物如下式所示：
Figure BPA00001330100700082
在还有另一实施方式中，式I所示本发明化合物选自表1所示化合物构成的组。
表1
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
化合物的制备
以下流程1以及实施例中的流程提供某些合成途径，可根据其获得本发明某些化合物。其它途径或下文所示途径的改进对技术人员是显而易见的且包括在本发明范围内。
流程1说明了4-氨基-3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶的合成，其与取代的哌嗪用于偶联反应以形成本发明化合物。如流程1所示，可混合肼羧酸叔丁酯和2，3-二氰基-丁-2-烯二腈(dinitrile)以形成取代的吡唑化合物B(5-氨基-1H-吡唑-3，4-二腈(dicarbonitrile))。用，例如原甲酸酯(例如，原甲酸三甲酯)处理化合物B后得到中间体C(显示为(E)-甲基N-3，4-二氰基-1H-吡唑-5-基亚胺代甲酸酯(formimidate))。用氨处理中间体C实现闭环形成吡唑并[3，4-d]嘧啶(显示为化合物A(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-腈))。
在有碳酸钾存在下，利用，例如氯乙酸叔丁酯处理化合物A对吡唑并[3，4-d]嘧啶进一步精制得到(4-氨基-3-氰基-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-乙酸叔丁酯，然后在有乙醇和乙酸存在下与乙二胺回流产生2-(4-氨基-3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯。
如图所示，可在有溶剂DMSO存在下，用DMP氧化2-(4-氨基-3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯得到2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯。
最后，可在二
Figure BPA00001330100700101
烷(dioxane)中用HCl处理2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯得到4-氨基-3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶盐(2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸.2HCl)。
流程1
III.药物组合物
除以上提供的化合物外，用于调节人和动物中的CCR1、CCR2和CCR3活性的组合物通常包含药物载体或稀释剂。
本文所用的术语″组合物″应包括含特定量的特定成份的产品以及直接或间接地从该特定量的特定成份组合而成的任何产品。″药学上可接受的″表示载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成份相容且对其接受者无害。
给予本发明化合物的药物组合物可方便地是单位剂型，可通过药学及药物递送领域熟知的任何方法制备。所有方法均包括使活性成份与构成一种或多种辅助成份的载体结合的步骤。一般通过使活性成份与液体载体或微细分级的固体载体或两者均匀且紧密地结合，随后(如果需要)使产物成形为所需制剂来制备药物组合物。在药物组合物中，活性目标化合物的含量足以对疾病的过程或状况产生所需效果。
包含活性成份的药物组合物可以是适合口服应用的形式，例如片剂、糖锭(troche)、锭剂(lozenge)、水性或油性悬浮液、可分散粉剂或颗粒、乳液及自乳化液(如美国专利第6,451,339号所述)、硬或软胶囊、糖浆、酏剂、溶液、口腔贴片剂、口服凝胶、口香糖、可咀嚼片剂、泡腾粉剂和泡腾片剂。打算口服使用的组合物可根据本领域已知的任何方法制备以便制造药物组合物，此类组合物可包含一种或多种选自以下的试剂以提供药学上美观且可口的制剂：甜味剂、调味剂、着色剂、抗氧化剂和防腐剂。片剂包含活性成份与适于制造片剂的无毒、药学上可接受的赋形剂的混合物。这些赋形剂可以是，例如惰性稀释剂，如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒及崩解剂，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如，PVP、纤维素、PEG、淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可无包衣，或可通过已知技术对其作肠溶或者其它包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间提供持续作用。例如，可采用诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯等延时材料。可通过美国专利第4,256,108号；第4,166,452号；及第4,265,874号中所阐述的技术对它们包衣，以形成控释的渗透性治疗片剂。
口服应用的制剂还可以是硬明胶胶囊，其中活性成份与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或者可以是软明胶胶囊，其中活性成份与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。此外，可利用非水混溶性成份(例如，油)制备乳液并用表面活性剂(例如，单-二甘油酯、PEG酯等)使之稳定。
水性悬浮液包含活性材料与适于制造水性悬浮液的赋形剂的混合物。此类赋形剂是诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶等悬浮剂；分散剂或润湿剂可以是，例如卵磷脂等天然磷脂、或环氧烷与脂肪酸的缩合物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合物(例如，十七乙烯氧基鲸蜡醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇的偏酯的缩合物(例如，聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇酐的偏酯的缩合物(例如，聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)。水性悬浮液还可包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。
可将活性成份悬浮在诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰油等植物油中或悬浮于诸如液体石蜡等矿物油中配制油性悬浮液。油性悬浮液可包含诸如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇等增稠剂。可加入甜味剂(如上述那些)及调味剂以提供可口的口服制品。这些组合物可通过加入抗氧化剂(例如抗坏血酸)保存。
适合通过加入水来制备水性悬浮液的可分散粉剂和颗粒提供了活性成份与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的例子如上所述。还可存在其它外赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂等。
本发明药物组合物还可以是水包油乳液形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然树胶(例如阿拉伯胶或黄蓍胶)、天然磷脂(例如大豆、卵磷脂)、和衍生自脂肪酸与己糖醇酐的酯或偏酯(例如山梨糖醇酐单油酸酯)及所述偏酯与环氧乙烷的缩合物(例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)。乳液还可包含甜味剂和调味剂。
可用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖)配制糖浆和酏剂。此类制剂还可包含缓和剂(demulcent)、防腐剂和调味剂及着色剂。可混合例如环糊精、PEG和表面活性剂来制备口服溶液。
药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液形式。此悬浮液可根据已知技术，利用上文述及的那些合适分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制品还可以是无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂配制的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇的溶液。可利用的可接受运载体和溶剂是水、林格液和等渗氯化钠溶液。此外，通常利用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。任何温和的不挥发性油(包括合成单甘油酯或二甘油酯)均可用于此目的。此外，诸如油酸等脂肪酸可用于制备可注射剂。
还可采用经直肠给予药物的栓剂形式给予本发明化合物。可通过混合药物与合适的无刺激赋形剂来制备这些组合物，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因而将在直肠中融化以便释放药物。此类材料包括可可脂及聚乙二醇。此外，可借助溶液或软膏经由眼睛递送来给予化合物。另外，可借助离子电渗贴片等实现目标化合物的经皮递送。对于局部应用，可利用含本发明化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。本文所用局部应用还表示包括利用漱口水和漱口剂。
可将本发明化合物配制成沉积于医学装置上，该装置可包括各种常规移植物、支架，包括支架移植物，导管、球囊、篮或可在体腔内展开或永久植入的其它装置中的任何一种。例如，可将本发明化合物递送至通过介入技术治疗的身体区域的装置和方法是理想的。
在示范性的实施方式中，可将本发明抑制剂沉积在医学装置(例如支架)内并递送至治疗部位以便治疗身体的某一部分。
支架已经用作治疗剂(即，药物)的递送运载体。血管内支架通常永久性地植入冠状或外周血管中。支架设计包括美国专利号4,733,655(Palmaz)、4,800,882(Gianturco)、或4,886,062(Wiktor)的那些。此类设计包括金属和聚合物支架、以及自扩张及球囊扩张式支架。支架还可用于将药物递送至接触脉管系统的部位，例如美国专利号5,102,417(Palmaz)和国际专利申请号WO 91/12779(麦德托尼克公司(Medtronic Inc))和WO 90/13332(Cedars-Sanai Medical Center)、美国专利号5,419,760(Narciso，Jr.)及美国专利号5,429,634(Narciso，Jr.)中所揭示。还利用支架将病毒递送至管腔壁以便递送基因，如美国专利申请序列号5,833,651(Donovan等)所揭示。
术语″沉积的″表示通过本领域已知方法将抑制剂涂布、吸附、放置、或者掺入装置。例如，可将抑制剂包埋入涂布或覆盖医学装置的聚合物材料中并自其中释放(″基质型″)或所述聚合物材料包围抑制剂并通过所述聚合物材料释放(″贮器型″)。在后一例子中，可采用一种或多种本领域已知的产生此类材料的技术将抑制剂截留于聚合物材料内或偶合至聚合物材料。在其它制剂中，可通过可移除的键将抑制剂连接至不需涂层的医学装置表面并随时间释放，可通过活性机械或化学方法去除，或在植入部位提供抑制剂的永久固定形式。
在一个实施方式中，可将抑制剂在医学装置，例如支架的生物相容涂层形成期间掺入聚合物组合物。由这些组份产生的涂层通常均匀且可用于涂布设计用于植入的许多装置。
聚合物可以是生物稳定或生物可吸收的聚合物，取决于所需的释放速率或聚合物稳定程度，但为此实施方式优选生物可吸收的聚合物，因为其不像生物稳定聚合物一样，植入后不会长期存在从而造成任何不良的慢性局部反应。可使用的生物可吸收聚合物包括但不限于：聚(L-乳酸)、聚己内酯、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLLA/PGA)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基丁酸酯-戊酸酯共聚物)、聚二氧杂环己酮、聚原酸酯、聚酐、聚(乙醇酸)、聚(D-乳酸)、聚(L-乳酸)、聚(D，L-乳酸)、聚(D，L-丙交酯)(PLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(乙醇酸-共-三亚甲基碳酸酯)(PGA/PTMC)、聚环氧乙烷(PEO)、聚二氧杂环己酮(PDS)、聚磷酯、聚磷酯氨基甲酸酯、聚(氨基酸)、氰基丙烯酸酯、聚(三亚甲基碳酸酯)、聚(亚氨基碳酸酯)、共聚(醚-酯)(例如，PEO/PLA)、聚草酸亚烷基酯(polyalkylene oxalate)、聚磷腈及生物分子(例如，纤维蛋白、纤维蛋白原、纤维素、淀粉、胶原和透明质酸)、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物和本领域已知的其它合适生物可吸收聚合物。还可利用慢性组织反应较低的生物稳定聚合物(例如，聚氨基甲酸酯、聚硅氧烷和聚酯)，还可利用其它聚合物，如果它们可溶解并能在医学装置上固化或聚合的话，例如，聚烯烃、聚异丁烯及乙烯-α烯烃共聚物；丙烯酸聚合物及共聚物、乙烯基卤化物聚合物和共聚物，例如聚氯乙烯；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯基醚，例如聚乙烯基甲基醚；聚偏1，1-二卤代乙烯，例如聚偏1，1-二氟乙烯和聚偏1，1-二氯乙烯；聚丙烯腈、聚乙烯基酮；聚乙烯基芳族化合物(例如聚苯乙烯)、聚乙烯基酯(例如聚乙酸乙烯酯)；乙烯基单体与彼此及烯烃的共聚物，例如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂、和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；吡喃共聚物；聚羟基-丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚；聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚；聚环氧乙烷-聚经棕榈酰基残基取代的赖氨酸；聚酰胺，例如Nylon 66及聚己内酰胺；醇酸树脂、聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂、聚氨基甲酸酯；人造丝；人造丝-三乙酸酯；纤维素、乙酸纤维素、丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；玻璃纸；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；和羧甲基纤维素。
聚合物和半渗透聚合物基质可形成成型物品，例如瓣膜、支架、输液管、假体等。
在本发明一个实施方式中，本发明的抑制剂偶联至形成为支架或支架-移植物装置的聚合物或半透聚合物基质。
一般通过旋涂、浸渍或喷雾将聚合物施加于可植入装置的表面。为此目的还可采用本领域已知的其它方法。喷雾方法包括传统方法以及利用喷墨型分配器的微沉积技术。此外，可采用光图案形成(photo-patterning)将聚合物沉积于可植入装置上以便使得聚合物仅位于该装置的特定部分上。装置的此涂布提供围绕装置的均匀层，从而能通过装置涂层改善各种分析物的扩散。
在本发明的优选实施方式中，将抑制剂配制成自聚合物涂层释放至医学装置所放置的环境中。优选采用涉及聚合物载体或层以控制洗脱的熟知技术中的至少一种使得抑制剂以控制方式在长时期(例如数月)内释放。这些技术中的一些先前已经阐述于美国专利申请20040243225A1。
此外，如美国专利号6,770,729所述，可操控聚合物组合物的试剂和反应条件以便控制抑制剂自聚合物涂层的释放。例如，可调节一个或多个聚合物涂层的扩散系数以控制抑制剂自聚合物涂层的释放。在该主题的改变形式中，可控制一个或多个聚合物涂层的扩散系数以便调节医学装置所放置的环境中存在的分析物(例如，促进聚合物的一部分分解或水解的分析物)接近聚合物组合物中一种或多种组份的能力(和例如，从而调节抑制剂自聚合物涂层的释放)。本发明的还有另一实施方式包括具有多个聚合物涂层的装置，各装置具有多个扩散系数。在本发明的此类实施方式中，可通过多个聚合物涂层调节抑制剂自聚合物涂层的释放。
在本发明还有另一实施方式中，通过调节聚合物组合物的一种或多种性质，例如一种或多种内源或外源化合物的存在、或者聚合物组合物的pH来控制抑制剂自聚合物涂层的释放。例如，可将某些聚合物组合物设计成对聚合物组合物的pH降低起反应而释放抑制剂。或者，可将某些聚合物组合物设计成对过氧化氢的存在起反应而释放抑制剂。
IV.治疗CCR1调节的疾病的方法
在还有另一方面，本发明提供通过给予患有CCR1-、CCR2-和/或CCR3介导病症或疾病的对象治疗有效量的上式I所示化合物来治疗此疾病或病症的方法。本文将″对象″定义为包括动物，例如哺乳动物，包括但不限于：灵长类(例如，人)、牛、羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠等。
CCR1为干扰或促进免疫细胞功能的特定方面，或更一般而言，为干扰或促进哺乳动物(例如人)中各种细胞类型的CCR1表达相关功能提供靶点。抑制CCR1的化合物尤其可用于为治疗目的调节单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞和某些免疫衍生细胞(例如，破骨细胞)功能。因此，本发明涉及可用于预防和/或治疗各种炎性和免疫调节病症及疾病的化合物(参见Saeki等，Current Pharmaceutical Design 9：1201-1208(2003))。
例如，可给予抑制CCR1的一种或多种功能的本发明化合物以抑制(即，降低或防止)炎症或免疫病症相关的细胞浸润。因此，可抑制一种或多种炎性过程，例如白细胞迁移或浸润、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组胺)、或炎性介体释放。例如，根据本发明方法，可抑制单核细胞浸润至炎性部位(例如，关节炎的受影响关节、或MS的CNS中)。
同样，给予促进CCR1一种或多种功能的本发明化合物以刺激(诱导或增强)炎性反应，例如白细胞迁移、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组胺)或炎性介体释放，从而导致炎性过程的有益刺激。例如，可募集单核细胞以抵御细菌感染。
可采用本发明方法治疗炎症相关的疾病和病症、免疫疾病、骨疾病、癌症和感染。在优选实施方式中，该疾病或病症是其中要抑制或促进免疫细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞、或某些免疫衍生细胞(例如，破骨细胞))的作用以调节炎性或自体免疫反应的疾病或病状。
在一组实施方式中，可利用CCR1、CCR2或CCR3功能的调节剂来治疗人或其它物种的疾病或病症(包括慢性疾病)。这些疾病或病症包括：(1)过敏性疾病，例如，全身性过敏或过敏反应、药物过敏、昆虫叮咬过敏及食物过敏；(2)炎性肠病，例如克罗恩病(Crohn′s disease)、溃疡性结肠炎、回肠炎及小肠炎；(3)阴道炎；(4)银屑病和炎性皮肤病，例如，皮炎、湿疹、异位性皮炎、过敏性接触皮炎、荨麻疹及瘙痒；(5)血管炎；(6)脊椎关节病；(7)硬皮病；(8)哮喘和呼吸系统过敏性疾病，例如，哮喘、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性肺病等；(9)自体免疫疾病，例如纤维肌肉疼痛、硬皮病、强直性脊椎炎、幼年型RA、斯提耳病(Still′s disease)、多关节幼年型RA、少关节幼年型RA、风湿性多肌痛、高安氏(Takuyasu)关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、多关节关节炎、多发性硬化症、全身性红斑狼疮、I型糖尿病、II型糖尿病、I型糖尿病(近期发作)、视神经炎、肾小球肾炎等；(10)移植物排斥，包括同种异体移植物排斥及急性和慢性移植物抗宿主病；(11)纤维化(例如，肺纤维化(即，特发性肺纤维化、间质性肺纤维化)、与终末期肾病相关的纤维化、由辐射造成的纤维化、肾小管间质性纤维化、上皮下纤维化(subepithelieal fibrosis)、硬皮病(进行性全身硬化症)、肝纤维化(包括由酒精性或病毒性肝炎所造成)、原发性及继发性肝硬化)；(12)急性及慢性肺炎症(慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、成人呼吸窘迫综合征、新生儿呼吸窘迫综合征、免疫复合肺泡炎)和(13)要抑制其中不良炎性反应或免疫病症的其它疾病，例如心血管疾病，包括动脉粥样硬化、由组织移植引起或在再狭窄期间导致的血管炎症(包括但不限于血管成形术和/或支架置入后再狭窄)、其它急性和慢性炎性病症，例如，肌炎、神经退化性疾病(例如，阿尔茨海默病)、脑炎、脑膜炎、肝炎、肾炎、败血症、类肉瘤病、过敏性结膜炎、耳炎、鼻窦炎、由关节镜术造成的滑膜炎症、高尿酸血症、创伤、缺血性再灌注损伤、鼻息肉(nasal polyosis)、先兆子痫、口腔扁平苔藓、格-巴综合征(Guillina-Barre syndrome)、肉芽肿病、与瘦素产生相关的病状、贝切特综合征(Behcet′s syndrome)和痛风，以及伤口愈合应用中(14)免疫介导的食物过敏，例如乳糜泻。
在另一组实施方式中，可采用CCR1功能调节剂来治疗疾病或病症。欲用CCR1功能的调节剂治疗的疾病的例子包括癌症(原发性及转移性)(例如，多发性骨髓瘤；Hata，H.，Leukemia & Lymphoma，2005，46(7)；967-972)、心血管病、溶骨性疾病，包括骨质疏松(和绝经后骨质疏松)、高钙血症、佩吉特病、肾病性骨营养不良、骨关节炎、溶骨转移和多发性骨髓瘤、其中血管生成或新血管形成起作用的疾病(肿瘤性疾病、视网膜病及黄斑变性)、传染病(病毒感染，例如，HIV感染和细菌感染)和免疫抑制性疾病(例如，器官移植病和皮肤移植病)。术语″器官移植病″表示包括骨髓移植病和实体器官(例如，肾、肝、肺、心脏、胰脏或其组合)移植病。
本发明药物组合物还可直接或间接抑制炎性部位产生金属蛋白酶和细胞因子(由于减少细胞浸润)，因而为这些细胞因子相关的疾病或病症提供益处。
因此，本发明化合物可用于预防和治疗各种炎性和免疫调节病症和疾病。
根据待治疗疾病和对象的状况，可通过口服、胃肠外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入喷雾、经鼻、阴道、直肠、舌下或局部给药途径给予本发明化合物，可单独或共同配制成含有常规无毒药学上可接受的载体、佐剂和运载体的适合各给药途径的剂量单位制剂。
治疗或预防需要趋化因子受体调节的病症时，合适剂量水平通常是约0.001-100毫克/公斤患者体重/天，其可采用单一剂量或多剂量给予。该剂量水平优选为约0.01-约25毫克/公斤/天；更优选约0.05-约10毫克/公斤/天。合适剂量水平可以是约0.01-25毫克/公斤/天、约0.05-10毫克/公斤/天、或约0.1-5毫克/公斤/天。在此范围内，剂量可以是0.005-0.05、0.05-0.5或0.5-5.0毫克/公斤/天。就口服给药而言，所述组合物优选采用含有1.0-1000毫克活性成份、尤其是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0、及1000.0毫克活性成份的片剂形式提供以便根据症状调节给予待治疗患者的剂量。所述化合物可按照每天1-4次，优选每天一次或两次的服法给予。
然而，应了解，对于任何具体患者，具体剂量水平和给药频率可能会有所不同，取决于各种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长度、对象的年龄、体重、遗传特性、整体健康状况、性别和饮食、以及给药模式和时间、排泄速率、药物组合、接受治疗的对象的具体病状的严重程度。
可利用本发明化合物、组合物和方法治疗或预防与炎症相关的疾病和病症、免疫病症、感染及癌症。
本发明化合物和组合物可与具有相关效用的其它化合物和组合物联用以预防和治疗感兴趣病症或疾病，例如炎性或自体免疫病症、病状和疾病，包括炎性肠病、类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病性关节炎、多发性关节炎、多发性硬化症、过敏性疾病、银屑病、异位性皮炎和哮喘、及上述那些病理学状况。
例如，治疗或预防炎症或自体免疫或例如关节炎相关的骨损失时，本发明化合物和组合物可与抗炎剂或镇痛剂联用，例如阿片激动剂、脂氧合酶抑制剂(例如5-脂氧合酶抑制剂)、环氧合酶抑制剂(例如环氧合酶-2抑制剂)、白介素抑制剂(例如白介素-1抑制剂)、NMDA拮抗剂、一氧化氮的抑制剂或一氧化氮的合成抑制剂、非类固醇抗炎剂、或细胞因子抑制性抗炎剂，例如，与诸如对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因(codeine)、芬太尼(fentanyl)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮咯酸(ketorolac)、吗啡、萘普生(naproxen)、非纳西汀(phenacetin)、吡罗昔康(piroxicam)、类固醇止痛剂、舒芬太尼(sufentanyl)、苏林酸(Sunlindac)、替尼达普(tenidap)等化合物联用。同样，本发明化合物和组合物可与以下一起给予：上述镇痛剂；增效剂，例如，咖啡因、H2拮抗剂(例如，雷尼替丁(ranitidine))、二甲硅油、氢氧化铝或氢氧化镁；减充血剂，例如，去氧肾上腺素、苯丙醇胺(phenylpropanolamine)、伪麻黄碱(pseudoephedrine)、羟甲唑啉(oxymetazoline)、肾上腺素(ephinephrine)、萘甲唑啉(naphazoline)、赛洛唑啉(xylometazoline)、丙己君(propylhexedrine)、或左旋脱氧麻黄碱；镇咳药，例如，可待因、氢可酮(hydrocodone)、卡拉美芬(caramiphen)、喷托维林(carbetapentane)、或右美沙芬(dextromethorphan)；利尿药；和镇静或非镇静抗组胺药。
同样，本发明化合物和组合物可与用于治疗、预防、抑制或缓解本发明化合物及组合物有用的疾病或病状的其它药物联用。此类其它药物可采用其常用途径和用量与本发明化合物或组合物同时或依序给予。当本发明化合物或组合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除本发明化合物或组合物外还包含此类其它药物的药物组合物。因此，本发明的药物组合物包括除本发明化合物或组合物外还包含一种或多种其它活性成份或治疗剂的那些组合物。可与本发明化合物或组合物联用分别或在同一药物组合物中给予的其它治疗剂的例子包括但不限于：(a)VLA-4拮抗剂；(b)皮质类固醇，例如倍氯米松(beclomethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、氟替卡松(fluticasone)、氢化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、曲安西龙(triamcinolone)、沙美特罗(salmeterol)、沙美特罗、沙丁胺醇(salbutamol)、福美雷司(formeterol)；(c)免疫抑制剂，例如，环孢霉素(cyclosporine)(环孢霉素A、Sandimmune
Figure BPA00001330100700201
Neoral)、他克莫司(tacrolirnus)(FK-506、Prograf
Figure BPA00001330100700203
)、雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)、Rapamune
Figure BPA00001330100700204
)及其它FK-506型免疫抑制剂、及麦考酚酯(mycophenolate)，例如，麦考酚酸吗乙酯(CellCept
Figure BPA00001330100700205
)；(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，例如，溴苯那敏(brompheniramine)、氯苯那敏(chlorpheniramine)、右氯苯那敏(dexchloipheniramine)、曲普利啶(triprolidine)、氯马斯汀(clemastine)、苯海拉明(diphenhydramine)、二苯拉林(diphenylpyraline)、曲吡那敏(tripelennamine)、羟嗪(hydroxyzine)、甲地嗪(methdilazine)、异丙嗪(promethazine)、三甲泼拉嗪(trimeprazine)、阿扎他定(azatadine)、赛庚啶(cyproheptadine)、安他唑啉(antazoline)、非尼拉敏(pheniramine)、美吡拉敏(pyrilamine)、阿司咪唑(astemizole)、特非那定(terfenadine)、氯雷他定(loratadine)、西替利嗪(cetirizine)、非索非那定(fexofenadine)、脱羧乙氧氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非类固醇抗哮喘药(例如，特布他林(terbutaline)、奥西那林(metaproterenol)、非诺特罗(fenoterol)、异他林(isoetharine)、沙丁胺醇(albuterol)、比托特罗(bitolterol)及吡布特罗(pirbuterol))、茶碱(theophylline)、色甘酸钠(cromolyn sodium)、阿托品(atropine)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、白三烯(leukotriene)拮抗剂(例如，扎氟普汀(zafmlukast))、孟鲁司特(montelukast)、普仑司特(pranlukast)、伊拉司特(iralukast)、泊比司特(pobilukast)及SKB-106,203)、白三烯生物合成抑制剂(齐留通(zileuton)、BAY-1005)；(f)非类固醇抗炎剂(NSAID)，例如，丙酸衍生物(例如，阿明洛芬(alminoprofen))、苯恶洛芬(benoxaprofen)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、布洛芬、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生、奥沙普秦(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)及硫恶洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(例如，吲哚美辛、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(fentiazac)、呋罗芬酸(furofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、奥皮酸(oxpinac)、舒林酸(sulindac)、硫平酸(tiopinac)、托美丁(tolmetin)、齐多美辛(zidometacin)及佐美酸(zomepirac))、芬那酸(fenamic acid)衍生物(例如，氟芬那酸(flufenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、尼氟酸(niflumic acid)及托芬那酸(tolfenamic acid))、联苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳(diflunisal)及氟苯柳(flufenisal))、昔康类(oxicam)(例如，伊索昔康(isoxicam)、吡罗昔康、舒多昔康(sudoxicam)及替诺昔康(tenoxicam))、水杨酸酯(例如，乙酰水杨酸及柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine))及吡唑啉酮(例如，阿扎丙宗(apazone)、贝皮泼龙(bezpiperylon)、非普拉宗(feprazone)、莫非布宗(mofebutazone)、羟布宗(oxyphenbutazone)及保泰松(phenylbutazone))；(g)环氧合酶-2(COX-2)抑制剂，例如，塞来考昔(celecoxib)(Celebrex
Figure BPA00001330100700221
)及罗非考昔(rofecoxib)(Vioxx
Figure BPA00001330100700222
)；(h)IV型磷酸二酯酶(PDE IV)的抑制剂；(i)金化合物，例如，金诺芬(auranofin)及金硫葡糖(aurothioglucose)；(j)依那西普(etanercept)(Enbrel
Figure BPA00001330100700223
)；(k)抗体治疗剂，例如，奥素克隆(orthoclone)(OKT3))、达珠单抗(daclizumab)(Zenapax))、巴利昔单抗(basiliximab)(Simulect
Figure BPA00001330100700225
)及英夫利昔单抗(infliximab)(Remicade
Figure BPA00001330100700226
))、(l)趋化因子受体、尤其CCR5、CXCR2、CXCR3、CCR2、CCR3、CCR4、CCR7、CX3CR1及CXCR6的其它拮抗剂；(m)润滑剂或缓和剂，例如，矿脂及羊毛脂；(n)角质软化剂(例如，他扎罗汀(tazarotene)；(o)维生素D3衍生物，例如，卡泊三烯(calcipotriene)或卡泊三醇(calcipotriol)(Dovonex
Figure BPA00001330100700227
)；(p)PUVA；(q)地蒽酚(anthralin)(Drithrocreme
Figure BPA00001330100700228
)；(r)依曲替酯(etretinate)(Tegison
Figure BPA00001330100700229
)及异维甲酸(isotretinoin)；及(s)多发性硬化症治疗剂，例如，干扰素β-1β(Betaseron
Figure BPA000013301007002210
)、干扰素(β-1α(Avonex
Figure BPA000013301007002211
)、硫唑嘌呤(Imurek
Figure BPA000013301007002212
Imuran
Figure BPA000013301007002213
)、乙酸格拉默(glatiramer acetate)(Capoxone
Figure BPA000013301007002214
)、糖皮质激素(例如，泼尼松龙)及环磷酰胺；(t)DMARDS，例如，甲氨蝶呤；(u)其它化合物，例如，5-氨基水杨酸及其前药；羟氯喹啉；D-青霉胺；抗代谢物，例如，硫唑嘌呤、6-巯嘌呤及甲氨蝶呤；DNA合成抑制剂(例如，羟基脲)及微管破坏剂(例如，秋水仙碱(colchicine))。可改变本发明化合物与第二活性成份的重量比，这取决于各成份的有效剂量。一般采用各成份的有效剂量。因此，例如，当本发明化合物与NSAID组合时，本发明化合物与NSAID的重量比通常是约1000∶1至约1∶1000，优选约200∶1至约1∶200。本发明化合物与其它活性成份的组合通常属于上述范围内，但在各情况下，应采用各活性成份的有效剂量。
V.实施例
提供以下实施例用来说明而非限制本发明。
以下所用试剂及溶剂可自商业来源获得，例如，美国威斯康星州密尔沃基市的阿尔德里奇化学品公司(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)。1H-NMR用Varian Mercury 400MHz NMR光谱计记录。有效峰是相对于TMS提供，采用以下顺序制表：多重性(s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)和质子数。质谱结果报道成质荷比，随后是各离子的相对丰度(括号中)。在表中，报道含最常见原子同位素的M+H(或如所示的，M-H)离子的单一m/e值。在所有情况中，同位素模式(isotope pattern)对应于预计(分子)式。利用配备有Agilent Zorbax SB-C18，2.1X50mm，5μ柱的HP1100 HPLC进行样品递送，用惠普公司(Hewlett-Packard)的MSD电喷射质谱仪进行电喷雾电离(ESI)质谱分析。通常将分析物以0.1毫克/毫升溶于甲醇并用递送溶剂将1微升注入质谱仪中，质谱仪作100至1500道尔顿扫描。可采用正ESI模式分析所有化合物，利用含1％甲酸的乙腈/水作为递送溶剂。还可采用负ESI模式分析下文提供的化合物，利用乙腈/水配制的2mM NH4OAc作为递送系统。
本发明实施例和通篇说明书中使用以下缩写：
DMF，二甲基甲酰胺；TFA，三氟乙酸；THF，四氢呋喃；EtOAc，乙酸乙酯；BOC2O，二碳酸二叔丁基酯或BOC酸酐；HPLC，高压液相色谱；DIPEA，二异丙基乙胺；HCTU，六氟磷酸1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-5-氯-1H-苯并三唑鎓-3-氧化物(1-)；HBTU，六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓；dppf，1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁；Pd2(dba)3，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；DIPEA，二异丙基乙胺；DMP，邻苯二甲酸二甲酯；Me，甲基；Et，乙基；DCM，二氯甲烷。
还可采用技术人员已知的反应，如下所述合成本发明范围内的化合物。本领域技术人员还应认识到，可采用其它方法来合成本发明的目标化合物，本文件所述的方法并非穷举性的，而是提供感兴趣化合物的广泛适用和实践的途径。
本专利中要求保护的某些分子存在不同对映体和非对映体形式，这些化合物的所有此类变体均应得到保护。
详细描述用于合成本文关键化合物的实验流程可获得通过鉴别所述化合物的物理数据以及与所述化合物相关的结构阐述所描述的分子。
本领域技术人员还应认识到，在有机化学的标准后处理程序中，经常使用酸和碱。如果母体化合物具有所需固有酸度或碱度，则有时在本专利内所述实验程序期间制备其盐。
实施例1
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮的制备。
步骤1：4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-腈
Figure BPA00001330100700241
向置于冰浴中的肼羧酸叔丁酯(129g，0.976mol)的乙醇溶液(700mL)中分批加入2，3-二氰基-丁-2-烯二腈(125g，0.976mol)，同时维持内部温度低于16℃。加料完毕后，将该反应混合物加热回流4小时，真空浓缩并干燥得到5-氨基-1H-吡唑-3，4-二腈。MS(ES)m/z 134.1(M+H+)。
将以上获得的5-氨基-1H-吡唑-3，4-二腈在原甲酸三甲酯(1L)中回流8小时。然后真空浓缩并干燥该混合物得到N-(4，5-二氰基-2H-吡唑-3-基)-亚胺代甲酸甲酯(formimidic acid methyl ester)，将其溶解于甲醇(400mL)，冷却至0℃并用7N NH3的甲醇溶液(1L)处理。将得到的混合物升温至室温过夜并过滤。用MeOH-H2O的2∶1混合物(100mL)、丙酮(100mL)和醚(100mL)洗涤固体，然后真空干燥得到4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-腈(79g，50％产率)。MS(ES)m/z 161.0(M+H+)。
步骤2：2-(4-氨基-3-氰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯
Figure BPA00001330100700242
0℃，向4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-腈(76.6g，0.476mol)和碳酸钾(197g，1.427mmol)在DMF(680mL)中的混合物中滴加氯乙酸叔丁酯(68.1mL，0.476mol)，同时维持内部温度低于20℃。搅拌得到的混合物22小时，过滤并用EtOAc(100mLx2)洗涤。将所得固体悬浮在冰水中(1.5L)，过滤，用冰水(500mL)和醚(100mLx2)洗涤，然后真空干燥得到2-(4-氨基-3-氰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯(81.6g，62.3％产率)。MS(ES)m/z 275.0(M+H+)。
步骤3：2-(4-氨基-3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯
Figure BPA00001330100700251
在冰水浴中向(4-氨基-3-氰基-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-乙酸叔丁酯(80g，0.291mol)和EtOH(800mL)的混合物中加入乙酸(67mL)，然后加入乙二胺(195mL)。将得到的混合物回流90分钟，冷却至室温并过滤。将固体悬浮在水(1L)中，过滤并真空干燥得到2-(4-氨基-3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯(84.6g，90％产率)。MS(ES)m/z 318.1(M+H+)。
步骤4：(2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸二盐酸盐
Figure BPA00001330100700252
在冰水浴中向2-(4-氨基-3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯(84g，0.265mol)和DMSO(900mL)的混合物中分批加入戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinane)(169.6g，0.4mol)，同时维持内部温度低于25℃。室温下搅拌混合物2小时，然后倒入含84g Na2S2O3的冰水(2L)中。用3N NaOH调节混合物至pH 12-14，过滤得到固体，用水洗涤固体，重悬在冰-水(2L)中，过滤，用水(500mL)、EtOAc(100mLx2)和Et2O(100mLx2)洗涤，真空干燥得到(2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯(66.2g，80％产率)。MS(ES)m/z 316.1(M+H+)。
用在二
Figure BPA00001330100700253
烷(700mL)中的4N HCl处理(2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸叔丁酯(61g，193mmol)，回流2小时。冷却至室温后，过滤收集固体，用EtOAc(80mLx2)和Et2O(100mL)洗涤，真空干燥得到(2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙酸的二盐酸盐(66g，定量)。MS(ES)m/z 260.1(M+H+)。
步骤5：2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮
Figure BPA00001330100700261
将[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸二盐酸盐(79g，0.238mol)和1-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪二盐酸盐(71.3g，0.238mol)悬浮在无水DMF(793mL)中，在冰浴中冷却。加入N，N-二异丙基乙胺(290mL，1.67mol)，室温下搅拌该混合物直至所有固体溶解形成棕色溶液。在10分钟期间分批加入HCTU(113.23g，0.273mol)，同时维持内部温度低于20℃。3小时后，将反应混合物缓慢倒入剧烈搅拌的冰水烧瓶中(6L)得到悬浮液，搅拌该悬浮液1小时，过滤并用饱和的NaHCO3(500mLx2)和水(500mLx2)洗涤。通过在回流的MeCN(2x500mL)中研磨来纯化固体得到2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮(90.5g，81％产率，LC-MS检测到纯度＞98％)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ13.0(s，1H)，10.14(d，1H，J＝3.7Hz)，8.16(s，1H)，7.95(d，1H，d，J＝3.7Hz)，7.25(dd，1H，J＝1.03和1.36Hz)，7.20(d，1H，J＝8.8Hz)，7.16(s，1H)，6.70(d，1H，J＝2.4Hz)，6.52(dd，1H，J＝2.4和8.8Hz)，5.37(s，2H)，3.83(s，3H)，3.74(t，2H，J＝4.8Hz)，3.58(t，2H，J＝4.8Hz)，3.28(t，2H，J＝4.8Hz)，3.17(t，2H，J＝4.8Hz).13C NMR(100.6MHz，d6-DMSO)δ165.3，159.0，157.3，155.7，155.5，151.6，141.2，136.6，130.3，128.7，119.0，111.9，109.0，101.9，98.0，56.7，49.4，48.9，48.8，44.7，42.1；IR(KBr)3219，2937，1682，1638，1594，1567cm-1；MS(ES)m/z 468.1(M+H+)。C21H22N9O2Cl-0.85H2O的分析计算值为：C，52.20；H，4.94；N，26.09；Cl，7.34。实测值为：C，51.92；H，4.68；N，26.44；Cl，7.18。
步骤6：2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮二盐酸盐
Figure BPA00001330100700271
60℃，向2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮(50g，0.1068mol)、H2O(250mL)和丙酮(750mL)的混合物中滴加浓盐酸(22.3mL，0.267mol，2.50当量)得到棕色溶液。90分钟后，形成稠的棕褐色悬液。通过滴加丙酮(2.1L)将该悬液稀释至终浓度为0.03M，同时维持内部温度在58℃-62℃。60℃，再搅拌得到的混合物90分钟，冷却至室温并过滤。用丙酮(60mLx2)洗涤固体，真空干燥得到细小棕褐色棱柱状的2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮二盐酸盐(49.2g，80％产率，LC-MS检测到纯度＞99％)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ13.45(s，1H)，11.92(s，1H)，9.43(s，1H)，8.50(s，1H)，7.33(s，2H)，7.22(d，1H，J＝8.8Hz)，6.72(d，1H，J＝2.4Hz)，6.55(dd，1H，J＝2.4，8.8Hz)，5.54(s，2H)，3.84(s，3H)，3.76(t，2H，J＝4.8Hz)，3.61(t，2H，J＝4.8Hz)，3.31(t，2H，J＝4.8Hz)，3.20(t，2H，J＝4.8Hz)。MS(ES)m/z 468.1(M+H+).C21H22N9O2Cl-2HCl-1.75H2O的分析计算值为：C，44.07；H，4.84；N，22.02；Cl，18.58。实测值为：C，43.89；H，4.48；N，22.0；Cl，18.26.C21H22N9O2Cl-2HCl-1.75H2O的KF(H2O)计算值为：5.51％。实测值：5.14％。
实施例2
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪-1-基]乙酮的制备
步骤1：4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3，3-二甲基哌嗪二盐酸盐
用压缩氮气对5-溴-2-氯茴香醚(3.70g，16.7mmol，1当量)、2，2-二甲基-哌嗪(2.2g，1.2当量)和外消旋的(rac)-BINAP(1.04g，0.1当量)在甲苯(35mL)中的混合物脱气5分钟。向该混合物中加入叔丁醇钠(2.3g，1.4当量)和Pd2(dba)3(54mg，0.005当量)。60℃，加热得到的混合物过夜，冷却至室温。加入EtOAc(约200mL)，将该混合物经硅藻土过滤。用饱和的K2CO3水溶液(200mL)、饱和的NaHCO3水溶液(200mL)和盐水(200mL)依次洗涤滤液，然后经硫酸镁干燥。将蒸发后得到的残留物溶解于EtOAc(100mL)，室温下，用Et2O(100mL)配制的2N HCl处理2小时。过滤收集固体，真空干燥得到4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(4.0g)。MS(ES)m/z 255.1(M+H+)。
步骤2：2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪-1-基]乙酮
Figure BPA00001330100700282
将[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸二盐酸盐(100mg，0.2mmol)和1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(100mg，0.3mmol)悬浮在无水DMF中(2.5mL)。0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(0.32mL，1mmol)，室温下搅拌该混合物直至所有固体溶解得到棕色溶液。加入HBTU(114mg，0.3mmol)。2小时后，将反应混合物缓慢倒入剧烈搅拌的冰-水烧瓶中(100mL)。用二氯甲烷(100mL)萃取得到的悬浮液，用饱和NaHCO3(100mL)、盐水(100mL)洗涤并蒸发。快速柱层析纯化残留物，蒸发和真空干燥后得到浅褐色固体状的2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪-1-基]乙酮(45mg)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.14(d，1H，J＝3.6Hz)，8.16(s，1H)，7.95(d，1H，d，J＝3.6Hz)，7.24(s，1H)，7.15(s，1H)，7.14(d，1H，J＝8.8Hz)，6.40(d，1H，J＝2.4Hz)，6.31(dd，1H，J＝2.4和8.8Hz)，5.29(s，2H)，3.90(t，2H，J＝5.4Hz)，3.84(s，3H)，3.46(t，2H，J＝5.4Hz)，3.30(s，2H)，1.38(s，6H)。MS(ES)m/z 496.1(M+H+)。
实施例3
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-哌嗪-1-基]乙酮的制备
室温下，搅拌1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-哌嗪二盐酸盐(65.2mg，0.206mmol，1当量)、[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸(50mg，1当量)、BOP试剂(109mg，1.7当量)和N，N-二异丙基乙胺(0.165mL，5当量)在DMF(0.5mL)中的混合物过夜。反相HPLC(含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-哌嗪-1-基]乙酮。MS(ES)m/z 486.5(M+H+)。
实施例4
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700292
利用1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐，通过与实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ14.20(br，2H)，10.28(br，1H)，8.15(s.1H)，7.93(br s，1H)，7.33(d，1H，J＝11.6Hz)，7.17(br s，1H)，6.71(d，1H，J＝8.0Hz)，5.44(m，1H)，5.21(d，1H，J＝15.6Hz)，4.54(m，0.5H)，4.39(m，0.5H)，4.19(m，0.5H)，3.97(m，0.5H)，3.84(s，3H)，3.56(m，0.5Hz)，3.40(m，2H)，3.08(m，0.5H)，2.96(m，0.5H)，2.85(m，1H)，2.72(m，0.5H)，1.42(d，1H，J＝6.0Hz)，1.24(d，2H，J＝6.8Hz)。MS(ES)m/z 500.5(M+H+)。
实施例5
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700301
步骤1：1-(4-氯-2-氟-苯基)-3-甲基哌嗪
将1-溴-4-氯-2-氟苯(5g，23.9mmol，1当量)、2-甲基哌嗪(2.8g，1.15当量)、三-次苄基(benzylidine)丙酮二钯(0)(0.43g，0，05当量)、外消旋-BINAP(0.89g，0.15当量)、叔丁醇钠(3.2g，1.4当量)在甲苯(60mL)中打浆，65℃加热该混合物过夜。冷却至室温后，加入乙酸乙酯(100mL)。过滤除去黑色沉淀物。用3N碳酸钾溶液洗涤滤液两次。硫酸钠干燥有机相，用2N HCl-乙醚中和。过滤收集固体，用乙醚洗涤，真空干燥得到1-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐。
步骤2：利用1-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲基哌嗪，通过与实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.38(br，1H)，10.26(br，1H)，8.32(s，1H)，7.24(m，2H)，7.17(s，1H)，7.07(s，1H)，7.04(d，2H，J＝2Hz)，6.80(t，1H，J＝8.8Hz)，5.93(br s，1H)，5.24(m，2H)，4.81(s，0.5H)，4.47(d，0.5H，J＝12Hz)，4.20(s，0.5H)，3.68(m，1H)，3.31(m，2H)，2.88(t，1H，J＝16Hz)，2.76(dd，1H，J＝12，3.6Hz)，1.50(d，1.5H，J＝5.2Hz)，1.39(d，1.5H，J＝6.4Hz).MS(ES)m/z 470.5(M+H+)。
实施例6
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700311
利用1-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪二盐酸盐，通过实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ14.20(br，1H)，10.13(br，1H)，8.15(s，1H)，7.98(d，1H，J＝4Hz)，7.25(S，1H，)，7.19(d，1H，J＝8.8Hz)，7.15(s，1H)，6.68(d，1H，J＝2.4Hz)，6.51(dd，1H，J＝8.8，2.8Hz)，5.36(s，2H)，4.09(q，2H，J＝6.4Hz)，3.73(br，2H)，3.57(br，2H)，3.26(br，2H)，3.15(br，2H)，1.34(t，3H，J＝6.8Hz)。MS(ES)m/z 482.5(M+H+)。
实施例7
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]乙酮的制备
利用1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐，通过实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ14.4(br，1H)，10.13(s，1H)，8.16(s，1H)，7.99(s，1H)，7.25(t，1H，J＝1.2Hz)，7.19(d，1H，J＝8Hz)，7.15(s，1H)，6.64(s，1H)，6.50(m，1H)，5.51-5.21(m，2H)，4.49(s，0.5H)，4.38(s，0.5H)，4.15(m，0.5H)，3.98(m，0.5H)，3.83(s，3H)，3.70(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，1H)，3.08-2.85(m，2H)，1.37(d，1.5H，J＝6.0Hz)，1.18(d，1.5H，J＝6.4Hz)。MS(ES)m/z 482.2(M+H+)。
实施例8
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700321
利用1-(4-氯苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐，通过实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ11.96(br，1H)，9.62(s，1H)，8.52(s，1H)，7.48(s，1H)，7.35(s，1H)，7.30(s，1H)，7.22(t，2H，J＝2.4Hz)，6.96(t，2H，J＝8Hz)，5.50(m，2H)，4.45(m，0.5H)，4.15(m，0.5H)，3.90(m，0.5H)，3.55(m，2H)，2.8-3.14(m，2H)，2.60(m，0.5Hz)，1.89(s，1H)，1.39(d，1.5H，J＝6.0Hz)，1.18(d，1.5H，J＝6.8Hz)。MS(ES)m/z 452.1(M+H+)。
实施例9
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]乙酮的制备
利用1-(4-氯苯基)哌嗪二盐酸盐，通过实施例3所述类似的方法制备标题化合物。MS(ES)m/z 438.1(M+H+)。
实施例10
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700331
利用1-(4-氯-3-乙氧基苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐，通过实施例3所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ14.4(br，1H)，10.15(s，1H)，8.16(s，1H)，7.98(s，1H)，7.25(s，1H)，7.18(d，1H，J＝8.8Hz)，7.15(s，1H)，6.62(s，1H，)，6.50(m，1H)，5.51-5.25(m，2H)，4.48(s，0.5H)，4.38(s，0.5H)，4.09(m，2.5H)，3.93(m，0.5H)，3.68-3.51(m，2H)，3.07-2.75(m，2.5H)，2.61(m，0.5H)，1.33(t，3H，J＝6.8Hz)，1.17(d，3H，J＝7.2Hz)。MS(ES)m/z 496.5(M+H+)。
实施例11
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700332
室温下，搅拌1-(4-氯-3-三氟甲氧基苯基)哌嗪二盐酸盐(70mg，0.198mmol，1当量)、[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酸(96mg，1当量)、HATU(98mg，1.3当量)和N，N-二异丙基乙胺(0.276mL，8当量)在DMF(0.5mL)中的混合物3小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，TLC纯化得到2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙酮。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.18(s，1H)，7.39(s，1H，)，7.18(d，2H，J＝8.8Hz)，6.95(s，2H)，5.40(s，2H)，3.85(m，4H)，3.25(m，4H)。由于利用CD3OD作为溶剂，未观察到其余三个质子(氨基和咪唑环的)。MS(ES)m/z522.1(M+H+)。
实施例12
本实施例说明了2-[4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-[4-(4-氯-2-氟苯基)哌嗪-1-基]乙酮的制备
Figure BPA00001330100700341
步骤1：1-(4-氯-2-氟苯基)哌嗪
将1-溴-4-氯-2-氟苯(5g，23.9mmol，1当量)、哌嗪-1羧酸叔丁酯(5.3g，1.15当量)、三-次苄基丙酮二钯(0)(0.43g，0.05当量)、外消旋-BINAP(0.89g，0.15当量)、叔丁醇钠(3.2g，1.4当量)在甲苯(60mL)中打浆，65℃加热混合物过夜。冷却至室温后，加入乙酸乙酯(100mL)。过滤除去黑色沉淀物。用3N碳酸钾溶液洗涤滤液两次。硫酸钠干燥有机相，浓缩并用二
Figure BPA00001330100700342
烷配制的4N HCl处理。过滤收集固体，用乙醚洗涤，高度真空干燥得到1-(4-氯-2-氟苯基)哌嗪二盐酸盐。
步骤2：利用1-(4-氯-2-氟苯基)哌嗪二盐酸盐，通过与实施例11所述类似的方法制备标题化合物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.16(s，1H)，7.19(s，1H)，7.1-7.17(m，3H)，7.05(m，1H)，5.40(s，2H)，3.85(m，2H)，3.75(m，2H)，3.18(m，2H)，3.07(m，2H)。由于利用CD3OD作为溶剂，未观察到其余三个质子(氨基和咪唑环的)。MS(ES)m/z 456.1(M+H+)。
实施例13
本实施例说明与本发明感兴趣化合物相关的生物活性的评价。
材料与方法
A.细胞
1.表达CCR1的细胞
a)THP-1细胞
THP-1细胞自ATCC获得(TIB-202)，作为悬浮液培养在补加了2mM L-谷氨酰胺、1.5克/升碳酸氢钠、4.5克/升葡萄糖、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠、0.05％2-巯基乙醇及10％FBS的RPMI-1640培养基中。37℃，细胞在5％CO2/95％空气、100％湿度下生长，每周以1∶5继代培养两次(细胞以2x105至2x106个细胞/毫升的密度范围培养)，以1x106个细胞/毫升收获。THP-1细胞表达CCR1，可用于CCR1结合和功能测定中。
2.趋化性测定
鉴定CCR1的抑制剂
趋化因子的一种主要功能是其介导表达趋化因子受体的细胞(例如，白细胞)迁移的能力。为证实感兴趣化合物不仅抑制CCR1特异性结合及信号转导(至少如通过钙动员测定所确定)，还抑制CCR1介导的迁移，采用趋化性测定。使用类似于单核细胞的THP-1骨髓单核细胞性白血病细胞、以及新分离的单核细胞作为受CCR1趋化因子配体(即，MIP-1α、CCL15/白细胞诱素(leukotactin))化学引诱的靶标。使用趋化性缓冲液(Hank的平衡盐溶液(HBSS)及1％FBS)将细胞置于微孔迁移室的顶部室，96孔趋化性室中的5微米孔聚碳酸酯、聚乙烯基吡咯烷酮涂布的过滤器(马里兰州盖瑟斯堡的神经探针公司(Neuroprobe；Gaithersburg，MD))。使用CCR1趋化因子配体(即，MIP-1α，CCL15/白细胞诱素；明尼苏达州明尼阿波利斯的RD系统公司(R&D Systems；Minneapolis，MN))来评价化合物介导的对CCR1介导迁移的抑制。其它趋化因子(即，SDF-1α；明尼苏达州明尼阿波利斯的RD系统公司)用作特异性对照。下部室装载有29微升趋化因子(即，0.1nM CCL15/白细胞诱素)和不同量的化合物；顶部室含有100,000个THP-1或单核细胞，20微升。在缺乏抑制剂的情况下，细胞对趋化因子激动剂起反应迁移至下部室中；若化合物抑制CCR1功能，则大部分细胞将留在上部室中。为确定感兴趣化合物对CCR1的亲和力和证实其抑制CCR1介导细胞迁移的能力，在此趋化性测定中在1x10-10至1x10-4M的化合物浓度范围内滴定抑制活性。在此测定中，改变化合物的量；同时细胞数量和趋化因子激动剂浓度保持恒定。37℃，温育趋化性室1-2小时后，通过CyQuant试验(分子探针公司)(一种测量核酸含量的荧光染料方法)标记和用Spectrafluor Plus(替康公司(Tecan))测量来确定下部室中响应细胞的数量。使用加利福尼亚州圣迭戈的GP公司(GraphPad，Inc，San Diego，Ca)的计算机程序Prism计算IC50值。IC50值是使响应CCR1激动剂的细胞数量受到50％抑制所需的化合物浓度。
3.体内效力
a)破坏性关节炎症的兔模型
家兔LPS研究基本上如Podolin等(同上)所述进行。利用LPS(10纳克)对雌性新西兰兔(约2公斤)的两个膝进行关节内处理。以5ml/kg的剂量体积口服给予感兴趣的化合物(例如，1％的甲基纤维素配制)或运载体(1％的甲基纤维素)两次(关节内注射LPS前2小时和关节内注射LPS后4小时)。LPS注射16个小时后，灌洗膝并进行细胞计数。通过募集到膝关节发炎的滑液的炎性细胞数目减少来确定治疗的有益作用。用感兴趣的化合物治疗导致募集的炎性细胞明显减少。
b)感兴趣化合物在胶原诱发关节炎的大鼠模型中的评价
对发展17天的II型胶原关节炎进行研究以评价感兴趣化合物对关节炎诱发的临床踝肿胀的作用。大鼠胶原型关节炎是已广泛用于许多抗关节炎剂的临床前测试的多关节炎试验模型(参见Trentham等，J.Exp.Med.146(3)：857-868(1977)、Bendele等人，Toxicologic Pathol.27：134-142(1999)、Bendele等人，Arthritis Rheum.42：498-506(1999))。此模型的特点是可靠发作和稳定发展、容易测量多关节炎症、与血管翳形成及轻微至中等骨再吸收相关的显著软骨破坏及骨膜骨增殖。
在此17天研究的第0天及第6天使用异氟烷麻醉雌性Lewis大鼠(约0.2公斤)并在尾根部及背部两个部位注射含2毫克/毫升牛II型胶原的不完全弗氏佐剂。采用皮下方式，自第0天直至第17天每天给予有效剂量的感兴趣化合物。获取踝关节直径的卡尺测量值，并将减少的关节肿胀作为效能的量度。
c)卵巢切除术诱发骨质疏松的大鼠模型
可基本如Dunstan等((1999)J.Bone and Min Res.14：953)所述实施卵巢切除术诱发骨质疏松的大鼠模型。对年轻雌性Sprague-Dawley大鼠(180-200g)施以假手术或卵巢切除术(OVX)。手术7天内，开始每日口服给予CCR1拮抗剂或单独的运载体(芝麻油)。给药两周后，麻醉大鼠，分析破骨细胞和成骨细胞生物标记(分别是C-端肽和MID骨钙蛋白)的血清水平。此外，取出股骨和胫骨，用H&E和/或TRAP染色作组织病理学检测。
d)骨髓瘤骨疾病的改进Radl 5TGM1模型
可如Oyajobi等(Mol Cancer Ther，2007，6：1701-1708)中进一步描述的研究骨髓瘤骨疾病。利用6-至9-周龄雌性C57BL/KaLwRijHsd小鼠(Harlan)进行动物研究。通过尾静脉静脉内接种106个活5TGM1-eGFP H1.1+细胞或亲本5TGM1细胞以诱发小鼠中的骨髓瘤病损。每日两次口服给予2.5ml/kg剂量体积的感兴趣化合物(例如，100％芝麻油配制)或运载体(100％芝麻油)，共4周。测定基线时以及随后每周的动物体重。4周结束时，所有动物成像，处死后立即切出骨骼和内脏器官(脾脏、肝脏、肾脏、生殖腺、脑、肺和心脏)并作荧光肿瘤灶成像以评估肿瘤负载。
表2(下)中提供了本文所述代表性化合物的结构和活性。上述趋化性测定的活性显示为：+，10nM＜IC50≤150nM；++，1nM＜IC50≤10nM；和+++，IC50≤1nM。
表2
Figure BPA00001330100700371
Figure BPA00001330100700381
在直接比较中，本发明的化合物1.001、1.003、1.004、1.006、1.007、1.010和1.011提供的活性比测试的相关化合物(相关美国申请序列号12/124,894中的咪唑-取代的吡啶并[4，3-b]吡唑)显示的活性至少好一个数量级。例如，在趋化试验中，
Figure BPA00001330100700382
提供的IC50比
Figure BPA00001330100700391
的低一个数量级。
现已根据书面说明书和实施例描述了本发明，本领域技术人员应知道可采用各种实施方式实施本发明，以上说明书和实施例是出于说明的目的而非限制随附的权利要求书。

Claims (24)

1.式I所示化合物或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物：
Figure FPA00001330100600011
式中
R1a和R1b各自独立选自：H和CH3；
R2a选自H或F；和
R2d选自H、C1-4烷氧基或C1-4卤代烷氧基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R2a是H。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1a和R1b各自是H。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1b是甲基，R1a是H。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1a和R1b各自是CH3。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R2a是氢，R2d选自甲氧基、乙氧基或三氟甲氧基。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物如式Ia或Ib所示：
Figure FPA00001330100600012
式中R2a选自H或F；R2d选自甲氧基、乙氧基或三氟甲氧基。
8.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：
Figure FPA00001330100600021
9.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：
Figure FPA00001330100600022
10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示或其药学上可接受的盐或N-氧化物：
Figure FPA00001330100600023
11.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有下式：
Figure FPA00001330100600031
12.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有下式
Figure FPA00001330100600032
是药学上可接受的盐形式。
13.如权利要求12所述的化合物，其特征在于，所述盐形式是盐酸盐形式。
14.选自下组的化合物：
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪-1-基)乙酮
(S)-2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙酮
2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮。
15.化合物2-(4-氨基-3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮。
16.一种药物组合物，其含有权利要求1所述化合物和药学上可接受的赋形剂或载体。
17.如权利要求1-15中任一项所述化合物在制备治疗疾病或病症的药物中的应用。
18.如权利要求1-15中任一项所述化合物在制备治疗CCR1-介导疾病或病症的药物中的应用。
19.如权利要求18所述的应用，其特征在于，所述CCR1-介导疾病或病症是炎性病症。
20.如权利要求18所述的应用，其特征在于，所述CCR1-介导疾病或病症是免疫调节性病症。
21.如权利要求18所述的应用，其特征在于，所述CCR1-介导疾病或病症选自：骨关节炎性疾病、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、多发性硬化症、移植物排斥、再狭窄、皮炎、湿疹、荨麻疹、血管炎、炎性肠病、食物过敏、哮喘、阿尔茨海默病、帕金森病、银屑病、全身性红斑狼疮、骨关节炎、中风、再狭窄和脑脊髓炎。
22.如权利要求18所述的应用，其特征在于，所述CCR1-介导疾病或病症选自：骨关节炎性疾病、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎和移植物排斥。
23.如权利要求18所述的应用，其特征在于，将所述药物制备成用于口服、胃肠外、直肠、透皮、舌下、鼻部或局部给予。
24.如权利要求18所述的应用，其特征在于，所述药物制备成与抗炎剂、镇痛剂、抗-增殖剂、代谢抑制剂、白细胞迁移抑制剂或免疫调节剂组合给予。
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