MX2011001734A - Composiciones y metodos para influenciar la saciedad, metabolismo de lipidos y utilizacion de grasas. - Google Patents

Abstract

La invención proporciona (1) genes expresados diferencialmente en animales administrados en amidas de ácido graso que afectan uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas y (2) composiciones y métodos relacionados con el uso de los genes para identificar los componentes nuevos que afectan uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA INFLUENCIAR LA SACIEDAD. METABOLISMO DE LÍPIDOS Y UTILIZACIÓN DE GRASAS REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad a la Solicitud Provisional de E.U. Serie No. 61/88907 presentada el 14 de agosto de 2008, la descripción de la cual se constituye en el presente mediante referencia. t ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la Invención La invención se relaciona generalmente con genes expresados de manera diferente en los animales y particularmente con genes expresados de manera diferente expresados en los animales administrados, en una base de largo término regular, aminoácidos grasos que afectan uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización grasa, y para el uso de los genes expresados de manera diferente para identificar nuevos compuestos que afectan uno o más de estos parámetros y para modular el fenotipo asociado en un animal.

DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA RELACIONADA La grasa en exceso y la obesidad se reconocen como un problema de salud mundial entre los humanos. La Organización Mundial de la Salud calcula que hay aproximadamente 1 billón de adultos en sobrepeso, con solo bajo un tercio de ellos clasificados como obesos. Además, la obesidad también se reconoce cada vez más como un problema para los animales y particularmente para los animales de compañía como perros y gatos. De acuerdo con los Centros para el Control de Enfermedades (CDC), la obesidad está muy asociada con por lo menos un riesgo de otros problemas de salud, incluyendo la hipertensión, dislipidemia, diabetes tipo II, enfermedades cardiacas, derrames cerebrales, apnea del sueño y ciertos cánceres como de mama, endometrial y cánceres de colon. Los factores de riesgo para un individuo que se hace obeso incluyen genéticos, emociones/estrés, sobrealimentación y estilo de vida sedentario.

La lucha contra la obesidad inició por lo menos hace dos décadas con comunicación pública incrementada en los riesgos relacionados con la obesidad en exceso. Las recomendaciones de nutrición se han establecido y restablecido, í comunicado ampliamente e incluso enseñado en escuelas. Sin embargo, ¡el número de í gente obesa y con sobrepeso todavía está incrementando. Además de la dieta saludable y de la actividad física con mayor frecuencia, las medicinas para perder peso ahora frecuentemente se prescriben. Estas medicinas funcionan en una variedad de niveles, incluyendo disfrazar la saciedad gástrica, reducir el apetito o limitar la absorción de grasas. Sin embargo, dichas medicinas no se han encontrado satisfactorias para un tratamiento de largo término, debido en parte a la disminución de la efectividad con el i, tiempo, así como los efectos secundarios no deseables. Por al menos estás razones, el acatamiento del paciente con los medicamentos contra la obesidad puede ser menos satisfactorios. Claramente, es necesario en la técnica descubrir y desarrollar nuevos medicamentos o complementos dietéticos en la lucha contra la obesidad.

Los aminoácidos grasos (FAEs) o N-acetil-etanolamidas son lípidos relacionados estructuralmente que contienen un grupo de ácidos grasos conectados con la etanolamina. Los FAEs son una familia de lípidos que ocurren naturalmente", encontrados en plantas y tejidos animales, despliegan efectos sobre la salud como la regulación del balance de energía, el control del consumo alimenticio y también las propiedades antünflamatorias. Los FAEs también se forman in vivo de los derivados de N-acetilado fosfatidil-etanolamina. Los FAEs más prevalentes, encontrados en tejidos biológicos como células cerebrales y neuronales, son anandamida (N-araquidonil-etanolamina) y N-oleoil-etanoamida (OEA). OEA también se encuentra en productos alimenticios en bajas cantidades y principalmente viene de la síntesis de endógena (Di Marzo V, 1999, Life Sci. 65:645-55).

En los roedores, la administración intraperitoneal de OEA se reportó que induce la saciedad y la utilización periférica de sustrato de lípido, de esta manera conduciendo a la ganancia de grasa corporal reducida (Thabuis C, et al., 2007, Lipid Technology 19:225-7). Ambos estudios in vitro y los modelos de animales genéticamente deficientes han revelado algunos mecanismos de acción, como señalización PPAR-alfa (Fu :J, et al., 2003 Nature 425:90-3), el consumo de lípidos dependientes FAT/CD36 por el intestino proximal (Yang Y, et al., 2007, Am J Physiol Regul Integr Comp. Physiol. 292:R235-41 ), activación de neuronas seleccionadas (Ahern GP, 2003, J Biol. Chem. 278:30429-34) y la señalización de ghrelina (Cani PD, et al., 2004, Br J Nutr. 92:757-61 ). El intestino proximal parece que es un órgano objeto para el control de saciedad (Thabuis C, et al., supra). Se ha mostrado que OEA regula el consumo alimenticio en los ratones tipo salvajes pero no en ratones PPAR o (-/-). Se ha mostrado recientemente que OEA también puede unirse al receptor GPR1 19 cannabinoide conectado de proteína G (Overton HA et a., 2006, Cell Metab. 3:167-75). Cuando se administra intraperitoneamente, OEA reduce el consumo alimenticio mediante la influencia de diversos parámetros: disminución del tamaño del alimento, retraso del primer consumo alimenticio e incrementar los intervalos de alimentos (Oveisi F, et al., 2004, Pharmacol Res. 49:461 -6). Los efectos de la administración oral OEA también se han examinado 24 horas después de una administración de alimentación forzada aguda y se ha mostrado que disminuye considerablemente ; el consumo alimenticio durante las primeras 12 horas (Id). Sin embargo, los estudios anteriores | únicamente se llevaron a cabo durante períodos de tiempo corto (6 horas á 1 1 días para i administración intraperitoneal, 24 h para administración oral) y no se han;! mostrado los efectos de largo término en la saciedad u otros parámetros relacionados con la grasa corporal hasta ahora. ¡ Debido a los problemas con los actuales métodos para tratar con la obesidad, se necesitan nuevos métodos y composiciones útiles para la detección sistemática de sustancias para determinar sí son probables para que sean útiles para, promover el fenotipo no obeso en un animal y utilizar dichas sustancias para modular l'a cantidad de tejido adiposo en un animal. ; i í RESUMEN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, un objeto de la invención es proporcionar uno o más genes o segmentos de genes que se expresen de manera diferente en los animales que exhiben un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consunjio alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas. ¡ Otro objetivo de la invención es proporcionar una combinación de una pluralidad de polinucleótidos que se expresan de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo que comprende un fenotipo RBF/IS que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas. i: Otro objetivo de la invención es proporcionar composiciones de dos o más sondas de polinucleótidos o polipéptidos convenientes para detectar la expresión de genes expresados de manera diferente en los animales que presentan un fenotip'p RBF/IS que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas y dispositivos como series de sustrato que contienen las sondas.

Un objeto adicional de la invención es proporcionar métodos para detectar expresiones diferenciales de uno o más genes expresados de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad,' metabolismo de lípidos y utilización de grasas, como se comparó con los animales nórmales o no tratados.

Otro objeto de la invención es proporcionar métodos para medir el efecto de una sustancia de prueba en el perfil de expresión de uno o más genes expresados de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, como se comparó con los animales normales o no tratados.

Un objeto adicional de la invención es proporcionar un método para promover un fenotipo RBF/IS en un animal.

Uno o más de estos objetos se logran utilizando nuevas combinaciones de polinucleótidos o polipéptidos que representan genes y segmentos de genes que se expresan de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas. Los polinucleóticos se utilizan para producir composiciones, sondas, dispositivas basados en las sondas y métodos para determinar el estado de los polinucleótidos|¡ expresan de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS como se comparó con los animales normales o no tratados, los cuales son útiles para lograr los objetos antes indicados, por ejemplo, condiciones de pronóstico y diagnóstico relacionadas con el fenotipo y para las sustancias de selección para determinar si son probables para utilizarse para promover el fenotipo. Dichas sustancias, una vez identificadas, pueden utilizarse para promover el fenotipo. Diversos tipos que comprenden combinaciones de sondas, dispositivos que utilizan las sondas y sustancias también se proporcionan, como l' son diversos programas de computadora para manipular la información y; medios para comunicar la información que pertenece a los genes expresados de maneja diferente y métodos de su uso.

Los objetos, características y ventajas adicionales y otros objetos, características y ventajas de la invención ya serán evidentes para los especialistas en la técnica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN \ i; Definiciones Todos los porcentajes expresados en el presente son por peso de la composición en base de materia seca a menos que se establezca específicamente de ot^a manera. El I especialista apreciará que el término "base de materia seca" significa que una r concentración del ingrediente en una composición está medida después qjiie se eliminó cualquier humedad en la composición. ¡ Los rangos se utilizan en el presente de manera abreviada, con el fin ¡de evitar que tener que establecer en longitud y describir cada valor dentro del rango. Cualquier valor adecuado dentro del rango puede seleccionarse, cuando sea adecuado, como el valor superior, valor inferior, o el término del rango.

Las dosis expresadas en el presente son en miligramos o gramos por kilogramo del peso corporal (mg/kg o g/kg) a menos que se exprese de otra manera.

Como se utilizó en el presente, la forma singular de una palabra incluye el plural y viceversa, a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. Por lo tanto, las referencias "uno" "una" y "el" son generalmente inclusivos de los plurales de los términos respectivos. Por ejemplo, la referencia a "un animal", "un método" o "una sustancia" incluye una pluralidad de dichos "animales", "métodos" o "sustancias". Similarmente, las palabras "comprenden", "comprende" y "comprendiendo" se van a interpretar de manera i inclusiva en vez de exclusiva. 1 El término "animal" significa un humano u otro animal, incluyendo aviar, bovino, canino, equino, felino, hicrino, murino, ovino y porcino, que tienen tejido adiposo. Cuando el término se utiliza en el contexto de sujetos de prueba de comparación, los animales que se comparan son animales de las mismas especies y posiblemente de la misma especie o raza. Un "animal de compañía" es cualquier animal domesticado e incluye, sin límite, gatos, perros, conejos, cerdos de guinea, hurones, hámsters, ratones, jerbos, caballos, vacas, cabras, oveja, burros, cerdos y similares. Preferentemente, el animal es un humano o un animal de compañía como canino o felino. ; El término "anticuerpo" significa cualquier ¡nmunoglobulina que une un antígeno específico, incluyendo los anticuerpos IgC, IgM, IgA, IgD y IgE. El término incluye composiciones de anticuerpo policlonales, monoclonales, monovalentes, humanizadas, heteroconjugadas, con especificidad poliepitópica, anticuerpos quiméricos, biespecíficos, diacuerpos, anticuerpos de una sola cadena y fragmentos de anticuerpos como Fab, Fab', F(ab')2 y Fv u otros fragmentos de unión de antígenos El término "grupo" significa una distribución ordenada de por lo menos dos pruebas o un sustrato. Por lo menos una de las pruebas es un control o norma y por lo menos una de las pruebas es una prueba de diagnóstico. La distribución de aproximadamente dos a aproximadamente 40,000 pruebas en un sustrato asegura que el tamaño y; la intensidad de señal de cada complejo etiquetado formado entre una prueba y un polinucleótido o polipéptido de muestra se distingue individualmente.

El término "complejo de unión" se refiere a un complejo formado cuando un polipéptido en una muestra une específicamente (como se definió en el presente) a un objeto de unión, como un anticuerpo o fragmento funcional del mismo.

Como se utilizó en el presente "complemento dietético" es un producto que tiene como objeto ser ingerido en adición a la dieta normal de un animal. Los complementos dietéticos pueden estar en cualquier forma, por ejemplo, sólidos, tapaderas, geles, tabletas, cápsulas, polvo y similares. Preferentemente, se proporcionan en formas de dosis convenientes. En algunas modalidades, los complementos se proporcionen en cantidades que se van a incluir en otros asuntos alimenticios como refrigerios, gustos, barras de complementos, bebidas y similares.

? El término "expresión diferencial" o "expresado de manera diferente" significa expresión o medios de genes incrementados o no regulados o medios disminuidos o expresión de genes regulados como se detectó por la ausencia, presencia o por lo menos cambios de dos pliegues en la cantidad de RNA enviado transcripto o proteína trasladada en una muestra.

El término "cantidad efectiva" significa una cantidad de un compuesto, material, composición, medicamento u otro material que es efectivo para lograr ün resultado biológico particular, como la promoción del fenotipo RBF/IS descrito en el presente.

El término "alimento" o "composición alimenticia" significa una composición que tiene como objetivo la ingestión mediante un animal, incluyendo un humano y proporciona nutrición al mismo. Como se utilizó en el presente, un "producto alimenticio" formulado para el consumo humano es cualquier composición con el objetivo específicamente para la ingestión por un humano. Los "alimentos de mascotas" son composiciones con el objeto de consumo para mascotas, preferentemente mediante los animales de compañía. Un "alimento para mascotas balanceado completo y nutricionalmente", es uno que contiene todos los nutrimentos requeridos conocidos para el receptor o consumidor deseado del alimento, en cantidades adecuadas y proporciones, basado por ; ejemplo en recomendaciones de autoridades reconocidas en el campo de nutrición de animal de compañía. Dichos alimentos son por lo tanto capaces de servir como una sola fuente de consumo dietético para mantener la vida o promover la producción, sin Ja adición de fuentes nutrimentales complementarias. Las composiciones alimenticias de mascotas balanceadas nutrimentalmente son ampliamente conocidas y ampliamente utilizadas en la técnica.

El término "fragmento" significa (1 ) una secuencia de oligonucleótido o polinucleótido que es una porción de una secuencia completa y que tiene la misma o similar actividad para un uso particular como la secuencia de polinucleótido completa o (2) una secuencia de péptido o polipéptido que es una porción de una secuencia completa y que tiene la misma actividad o similar para un uso particular como la secuencia de polipéptido completa. Dichos fragmentos pueden comprender cualquier número de nucleótidos o aminoácidos considerados convenientes para un usp particular. Generalmente, los fragmentos de oligonucléoticos y polinucleótidos contienen por lo menos aproximadamente fragmentos de nucleótidos o polipéptidos de 10, 50, 100 o 1000 aminoácidos consecutivos de la secuencia completa. El término comprende; variantes de polinucleótidos y polipéptidos de fragmentos. : El término "gen" o "genes" significa un segmento completo o parcial de DNA relacionado con la producción del polipéptido, incluyendo regiones anteriores y siguientes de la región de codificación (primero y de avance) y secuencias de intervención (intrones) ente los segmentos de codificación individual (exones). El término comprende cualquier secuencia DNA que hibridiza al complemento de secuencias de codificación de genes.

El término "producto de genes" significa el producto de transcripción de un gen, como mRNA o derivados del mismo (por ejemplo, DNA) o traducción de una transcripción de genes. El término "producto de genes" generalmente se refiere al ' producto de traslación, el cual es una proteína. El término "producto de gen" puede; utilizarse de manera intercambiable con el término "proteína" en el presente.

El término "homólogo" significa (1 ) un polinucleótido, incluyendo polinucleótidos del mismo o diferentes especies animales, que tiene más de 30%, 50%, 70% o 90% similaridad de secuencias a un polinucleótido de referencia y que tiene el mismo o considerablemente las mismas propiedades y la realización de la misma función o considerablemente la misma como el polinucleótido de referencia o que tiene la capacidad de hibridar específicamente a un polinucleótido de referencia bajo las condiciones rigurosas o (2) un polipéptido, que incluye polipéptidos de las mismas especies animales o diferentes, que tienen más de 30%, 50%, 70% o 90% similitud de secuencias a un I i' polinucleótido de referencia y que tiene el mismo o considerablemente, las mismas propiedades y la realización de la misma función o considerablemente la misma como el polinucleótido de referencia o que tiene la capacidad de hibridar específicamente a un polinucleótido de referencia. Cuando se refiere a los fragmentos de secuencias de codificación de longitud completa, la función de estos fragmentos puede simplemente ser para codificar una porción seleccionada de un polipéptido de cierta secuencia o a ser de secuencia similar conveniente para hibridar otro fragmento de polinucleótido codificación ? ese polipéptido. Cuando se refiere a los fragmentos de polipéptidos, la función de estos i; fragmentos puede simplemente ser para formar un epítopo conveniente para la generación de un anticuerpo. La similitud de la secuencia de dos secuencias de polpéptido o de dos secuencias polinucleótidos se determina utilizando métodos para los especialistas, etc., el algoritmo de Karlin y Altschul (Proc. Nati. Acad. Sci.i US 87:2264-2268 (1990)). Dicho algoritmo es incorporado en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al. ( J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)). Para obtener alineaciones hendidas para los propósitos de comparación, Gapped Blast puede utilizarse como se describió en Altschul et al. (Nucí. Acids Res. 25:3389-3402 (1997)). Cuando se utilizan los programas de BLAST y Gapped BLAST, los parámetros de falla de los programas respectivos (por ejemplo, XBLAST y NBLAST) se utilizan. Véase http://ww.ncbi.nlm.nih.gov. j El término "complejo de hibridación" significa un complejo que se forma entre los polinucleótidos simples cuando las purinas de un hidrógeno polinucleótido seji unen con las pirimidinas del polinucleótido complementario, por ejemplo, 5'-A-G-T-C-3' pares de base con 3'-T-C-A-G-5'. El grado de complementariedad y el uso de los análogos nucleótidos afectan la eficiencia y escasez de las reacciones de hibridación. ! I El término "en conjunto" significa que una medicina, alimento u otraj; sustancia es administrada a un animal (1 ) junto con una composición, particularmente: í; composición alimenticia o (2) separadamente en la misma o diferente frecuencia utilizando las mismas o diferentes rutas de administración en aproximadamente el mismo tiempo o periódicamente. "Periódicamente" significa que la sustancia se administra en¡¡un programa de dosis aceptable para una sustancia específica. "Aproximadamente al mismo tiempo" Í significa generalmente que la sustancia (alimento o medicina) es administrada al mismo tiempo o dentro de aproximadamente 72 horas entre éstas. "En conjunto" incluye específicamente los esquemas de administración en donde las sustancias como las medicinas son administradas durante un período prescrito y composiciones de la invención son administradas indefinidamente.

El término "individual" cuando se refiere a un animal significa un animal individual de cualquier especia o tipo.

Administración de "largo término" como se utilizó generalmente en el presente se refiere a períodos en exceso de un mes. Se contemplan los períodos de más de dos, tres o cuatro meses. Asimismo los incluidos son los períodos más extendidos que incluyen más de 5, 6, 7, 8, 9 o 10 meses. Se incluyen también los períodos en exceso de 1 1 meses o 1 año. El uso de los términos más largos que se extienden en 1 , 2, 3 o más años también se contemplan en el presente. En el caso de ciertos animales, se prevee que el animal podría administrarse las sustancias identificadas por los métodos presentes en una base regular. La "base regular" como se utilizó en el presente se refiere a por lo menos semanalmente, la administración. De manera más frecuente se contempla la administración, como dos o tres veces semanalmente. También se incluyen los regímenes que comprenden por lo menos una administración de una vez, dos, o tres veces o más diariamente. Cualquier frecuencia de dosificación, con respecto a si se ejemplifica expresamente en el presente, se considera útil. El especialista apreciará que la frecuencia de dosificación será una función de la sustancia que se está administrando y algunas composiciones pueden requerir más o menos administración frecuente para mantener un efecto de expresión bioquímico, fisiológico o de genes, a saber efectos que incluyen uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo líquido y utilización de. grasa y perfil de expresión de genes asociados con el mismo. El término "base regular extendida" se refiere a una administración de largo término de una sustancia en una base regular.

"Normal" o "sujetos normales" o "animales normales" como se utilizó en relación con los sujetos que manifiestan un fenotipo RBF/IS, se refiere a la ausencia de efectos moleculares, bioquímicos, fisiológicos, celulares, sistémicos y físicos que resultan de la expresión diferencial de los genes asociados con el fenotipo RBF/IS. ¡ El término "administración oral" o "administrar oralmente" significa que el animal consume o un humano se dirige para alimentar o se alimenta, el animal uno o más de las sustancias descritas en el presente. El término "ingestión" se utiliza en el presente de manera intercambiable con el término "administración oral". En donde un humano se dirige para administrar oralmente o alimentarse de la sustancia, dicha dirección puede ser la que instruya y/o informa al humano ese uso de la sustancia puede y/o proporcionará el beneficio de referencia. Dicha dirección puede ser dirección oral (por ejemplo, mediante instrucción oral de, por ejemplo, un físico, veterinario u otro profesional de salud o medios de radio o televisión (es decir, avisos) o dirección escrita (por ejemplo, mediante dirección escrita de, por ejemplo, un físico, veterinario u otro profesional de salud (por ejemplo, prescripciones), ventas de profesionales o de organización (por ejemplo, mediante, por ejemplo, folletos o volantes de mercadotecnia, u otra parafernalia instructiva), medios por escrito (por ejemplo, internet, correo electrónico u otros medios relacionados con computadora) y/o empaquetamiento asociado con la sustancia.

El término "polinucleótido" u "oligonucleótido" significa un polímero de nucleótidos. El término contiene moléculas DNA o RNA (incluyendo cDNA y mRNA), ya sea solas o dobles trenzadas y, de estar solas trenzadas, su secuencia complementaria en ya sea forma lineal o circular. El término también contiene fragmentos, variantes, homólogos y alelos, como sea adecuado para las secuencias, las cuales tienen as mismas o considerablemente las mismas propiedades y ejecutan la misma o considerablemente la misma función como' la secuencia original. En particular, el término contiene los homólogos de diferentes especies, por ejemplo, un ratón y un perro o gato. Las secuencias puede ser completamente complementarias (sin incompatibilidad) cuando se alinean o pueden tener arriba o aproximadamente una incompatibilidad de ¡secuencia de i' 30%. Preferentemente, para los polinucleóticos, la cadena contiene de aproximadamente l; 50 a 10,000 nucleótidos, más preferentemente de aproximadamente 150 a 3,500 nucleótidos. Preferentemente, para los oligonucleótidos, la cadena contiene de aproximadamente 2 a 100 nucleótidos, más preferentemente de aproximadamente 6 a 30 nucleótidos. El tamaño exacto de un polinucleótido o oligonucleótido dependerá de diversos factores y en la aplicación particular y el uso del polinucleótido o oligonucleótido. El término incluye polímeros de nucleótidos que están sintetizados y que están aislados y purificados de fuentes naturales. El término "polinucleótido" es ¡inclusivo de "oligonucleótido".

El término "polipéptido", "péptido" o "proteína" significa un ¡polímero de aminoácidos. El término incluye los polímeros (sintéticos) que ocurren naturalmente y que no ocurren de manera natural y los polímeros en los cuales los miméticos químicos artificiales se sustituyen por uno o más aminoácidos. El término también incluye fragmentos, variantes y homólogos que tienen las mismas o considerablemente las mismas propiedades y llevan a cabo la misma o considerablemente la misma función como la secuencia original. El término comprende los polímeros de cualquier longitud, preferentemente polímeros que contienen de aproximadamente 2 a 100 ^aminoácidos, más preferentemente de aproximadamente 5 a 500 aminoácidos. El término comprende polímeros de aminoácidos que se sintetizan y que se aislan y purifican de fuentes I naturales. ! I El término "prueba" significa (1 ) un oligonucleótidos o polinucleótido, ya sea RNA o DNA, cuando ocurren naturalmente como en el digesto énzimático de restricción purificado o producido sintéticamente, que es capaz de flamear o hibridar específicamente a un polinucleótido con secuencias complementarias para la prueba o (2) un ¡compuesto o sustancia, incluyendo un péptido o polipéptido, capaz de unir una proteína particular o fragmento de proteína a la exclusión considerable de otras proteínas o fragmentos de proteína. Una prueba de oligonucleótidos o polinucleótidos puede ser ya : sea trenzada sola o doble. El largo exacto de la prueba dependerá de muchos factores, incluyendo la temperatura, fuente y uso. Por ejemplo, para las aplicaciones de diagnóstico, dependiendo de la complejidad de la secuencia objeto, una prueba de oligonucleótidos contiene típicamente aproximadamente 10 a 100, 15 a 50, o 15 a 25 de nucleótidos. En ciertas aplicaciones de diagnóstico, una prueba de polinucleótidos contiene aproximadamente 100-1000, 300-600 nucleótidos, preferentemente aproximadamente 300 nucleótidos. Las pruebas en el presente se seleccionan para que sean "considerablemente" complementarias a diferentes cadenas de una secuencia objeto particular. Esto significa que las pruebas pueden ser complementarias suficientemente para hibridar específicamente o flamear con sus secuencias objeto respectivas bajo un conjunto de condiciones predeterminadas. Por lo tanto, la secuencia de prueba necesita no reflejar la secuencia complementaria exacta del objeto. Por ejemplo, un fragmento nucleótido no complementario puede ser unirse al extremo 5' o 3' de la prueba, con el resto de la secuencia de prueba siendo complementario para la secuencia de prueba. Alternativamente, las bases no complementarias o secuencias más largas; pueden ínter calarse en la prueba en la inteligencia que la secuencia de prueba tenga suficiente complementariedad con la secuencia del polinucleótido objeto para flamear específicamente a los polinucleótidos objeto. Una prueba de péptido o polipéptido puede ser cualquier molécula a la cual la proteína o péptido se une específicamente, incluyendo DNA (para las proteínas de unión de DNA), anticuerpos, receptores de membrana celular, péptidos, cofactores, lectinas, azúcares, polisacáridos, células, membranas celulares, organelos y membranas de organelos.

El término "muestra" significa cualquier tejido animal o fluido que contiene, por ejemplo, polinucleotidos, polipéptidos, anticuerpos, metabolitos y similares, que incluyen células y otros tejidos que contienen DNA y RNA. Los ejemplos incluyen adiposa, sanguínea, de cartílago, conectiva, epitelial, limfoide, muscular, nervioso! esputuma y similares. Una muestra puede ser sólida o líquida y puede ser DNA, RNA, cDNA, fluidos corporales como sangre u orina, células, preparaciones celulares o fracciones solubles o alícuotas de medios de los mismos, cromosomas, organelas y similares.

El término un "solo paquete" significa que los componentes de un juego están asociados físicamente o con uno o más envases y considerado una unidad para la fabricación, distribución, venta o uso. Los envases incluyen, más no se limitan a, bolsas, cajas, botellas, paquetes envueltos en plástico transparente, engrapados ó fijos de otra manera componentes o combinaciones de los mismos. Un solo paquete pueden ser envases de composiciones alimenticias asociadas físicamente de manera que se consideren una unidad para fabricación, distribución, venta o uso.

El término "unido específicamente" significa una interacción especial y precisa entre dos moléculas la cual es dependiente en su estructura, particularmente sus grupos laterales moleculares. Por ejemplo, la intercalación de una proteína regulatoria en la ranura principal de una molécula DNA, el hidrógeno uniéndose a lo largo de la columna entre dos únicos ácidos nucleicos trenzados o la unión entre un epítope de una proteína y un agonista, antagonista o anticuerpo.

El término "hibridar específicamente" significa una asociación entre dos únicos polinucleotidos trenzados de secuencia suficientemente complementaria para permitir dicha hibridación bajo las condiciones predeterminadas utilizadas generalmente en la técnica (algunas veces llamados "considerablemente complementarios"). Por ejemplo, el término puede referirse a la hibridación de una prueba polinucleotida con una secuencia complementaria considerablemente contenida dentro de una sola molécula DNA o RNA trenzada de acuerdo con un aspecto de la invención, a la exclusión sustancial de la hibridación de la prueba polinucleótida con un solo polinucleótido trenzado de secuencia no complementaria.

El término "estándar" significa (1 ) una muestra de control que contiene tejido de un sujeto administrado a una sustancia de control o referencia, o no sustancia, como se i comparó con una muestra que contiene tejido de un sujeto administrado de una sustancia de prueba, por ejemplo para determinar si la sustancia de prueba causa expresión de genes diferencial, como sea adecuado para el contexto de su uso. j El término "condiciones rigurosas" significa (1 ) la hibridación en 50% (vol/vol) formamida con 0.1 % albúmina de suero bovino, 0.1 % Ficoll, 0.1 % polivinilpirrolidona, 50 mM de buffer de fosfato de sodio en pH 6.5 con 750 mM NaCI, 75 mM de citrato de sodio en 42°C, (2) hibridación en 50% de formamida, 5x SSC (0.75 M NaCI, 0.075 M de citrato de sodio), 50 mM de fosfato de sodio (pH 6.8), 0.1 % de fosfato de sodio, 5x solución de Denhardt, esperma de salmón sonicado DNA (50 pg/ml), 0.1 SDS, y 10% de sulfato dextrano en 42°C, con lavados en 42°C en 0.2x SSC y 0.1 % SDS o lavados: con 0.015 M i, NaCI, 0.0015 M de citrato de sodio, 0.1 % Na2S04 en 50°C o procedimientos similares í que emplean fuerza iónica baja similar y temperatura alta que lava agentes y agentes denaturalizados similares.

El término "variante" significa (1) una secuencia polinucleótida que contiene cualquier sustitución, variación, modificación, reemplazo, tachadura o adición de uno más nucleótidos o a una secuencia polinucleótida y que tiene el mismo o considerablemente las mismas propiedades y lleva a cabo la misma o considerablemente la misma función como la secuencia original y (2) una secuencia de polipéptido que contiene cualquier sustitución, variedad, modificación, reemplazo, tachadura o adición de ' uno o más aminoácidos o a una secuencia polinucleótida y que tiene el mismo o considerablemente i las mismas propiedades y lleva a cabo la misma o considerablemente la misma función como la secuencia original. Por lo tanto, el término incluye un solo polimorfismo nucleótido (SNPs) y variantes de alelos e incluye sustituciones de aminoácidos conservadoras y no conservadoras en los polipéptidos. El término también incluye la reacción con yodo química de un polinucleótido o polipéptido y sustitución de nucleótidos o aminoácidos con nucleótidos o aminoácidos que no ocurren naturalmente, según sea adecuado.

El término "paquete virtual" significa que los componentes de un equipo están asociados por direcciones en uno o más componentes de equipo físico ;o virtual que instruyen al usuario cómo obtener los otros componentes, por ejemplo, en Una bolsa que contiene un componente y direcciones que instruyen al usuario para ir a una página web, contactar un mensaje registrado, observar un mensaje visual o contactar un ayudante o instructor para obtener instrucciones sobre cómo utilizar el equipo. > Los métodos y composiciones y otros avances descritos aquí no, se limitan a metodología, protocolos y reactivos particulares descritos en el presente porque, como el especialista apreciará, que pueden variar. Asimismo, la terminología utilizada en el presente es para describir modalidades particulares únicamente y no tiene como objetivo y no limita el alcance de lo que se describe o se reclama.

A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos1 y científicos, los términos de arte y acrónimos utilizados en el presente tienen los; significados entendidos comúnmente por una persona especialista en la técnica en el pampo de la invención o en el campo donde el término se utilice. Aunque cualesquiera composiciones, métodos, artículos de fabricación u otros medios o materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente pueden utilizarse en la práctica de la presente invención, las composiciones preferidas, métodos, artículos de fabricación u otros medios; o materiales están descritos en el presente.

Todas las patentes, solicitudes de patentes, publicaciones, artículos técnicos y/o escolares y otras referencias citadas o referidas en el presente son en su totalidad incorporados en el presente por referencia en la medida permitida por ley. Los comentarios de estas referencias únicamente tienen como objetivo resumir las afirmaciones hechas en el presente. Ninguna admisión se realiza en cuanto a que dichas patentes, solicitudes de patentes, publicaciones o referencias o cualquier porción de los mismos, son la técnica relevante, material o previa. Se reserva específicamente el derecho a cuestionar la exactitud y pertenencia de cualquier afirmación de dichas patentes, solicitudes de patentes, publicaciones y otras referencias como técnica relevante, material o previa. i La Invención La invención surge en parte de una clara demostración que los aminoácidos grasos conocidos que afectan el consumo alimenticio, saciedad, metabolismo lípido y/p utilización de grasad cuando se administran peritonealmente, causan grasa corporal disminuida y niveles de triglicéridos de plasma, saciedad incrementada como se midió por el consumo alimenticio disminuido, y un cambio concomitante en la expresión de diversos genes asociados con la masa de grasa corporal y consumo alimenticio, cuando se administra oralmente en una base regular extendida. A saber, como se ejemplificó en el presente, el complemento con OEA en dos diferentes concentraciones disminuyó considerablemente el consumo alimenticio, masa de tejido adiposo disminuida y triglicéridos de plasma disminuidos en un período de prueba de cuatro semanas en un modelo animal. La expresión de 44 genes relacionados con la masa de grasa corporal y el consumo alimenticio fue medida por PCR en tiempo real y tejidos periféricos de sujetos administrados OEA o un derivado resistente de hidrólisis del mismo, en un periodo de prueba de multi-semanas. Los productos de genes de los genes expresados diferencialmente se establecen en el presente en la Tabla 1 y la Tabla 2. Los análisis estadísticos multi-variados mostraron un cambio significante en el modelo de expresión de genes general que resulta de estos tratamientos. En particular, los genes de leptina adiposa y FAAH (hidrólisis de aminoácidos grasos), FAT/CD36 intestinal y receptor OEA GPR1 19 fueron entre los genes responsables del cambio. Los análisis de correlación estadísticos mostraron estos genes que se van a asociar con los caminos adiposos reducidos, mientras se encontró que el FAAH adiposo está asociado principalmente con una disminución de consumo alimenticio. ¡ Las proteínas establecidas en la Tabla 1 y la Tabla 2 se dividieron en grupos basados en diferentes criterios. Primero, las proteínas se dividieron en cuatro grupos basados en un análisis estadístico de expresión diferencial de cada gen en los animales no tratados contra los tratados. El primer "grupo" comprende todas las proteínas mencionadas en la Tabla 1 y 2. El segundo grupo, Grupo A, representa proteínas en las cuales la diferencias en la expresión de genes entre los animales tratados contra los no tratados fue estadísticamente considerable en el nivel p< 0.05. El tercer grupo, Grupo B, representa proteínas en las cuales la diferencias en la expresión de genes entre los i animales tratados contra los no tratados fue estadísticamente considerable en el nivel p< 0.01. El cuarto grupo, Grupo C, representa proteínas en las cuales la diferencias en la expresión de genes entre los animales tratados contra los no tratados fue estadísticamente considerable en el nivel p< 0.001 .

Segundo, las proteínas se dividieron en un grupo basado en la ifunción o rol fisiológico de la proteína. Estas funciones incluyen: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa.

Por lo tanto, un número de genes se han identificado que se expresan de manera diferente en los sujetos que manifiestan una disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo alimenticio disminuido (con referencia al presente como grasa corporal reducida/saciedad incrementada fenotipo (RBF/IS)), todos resultantes de la ingestión regular de largo término de sustancias, a saber OEA y derivados de los mismos, los cuales afectan el consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos, y/o utilización de grasa. Los polinucleótidos y fragmentos de los mismos que forman estos genes, así como sus proteínas y fragmentos codificados, pueden utilizarse por ejemplo en, ensayos de diagnóstico o pronóstico para medir un cambio a un fenotipo RBF/IS o ensayos útiles para los compuestos de prueba de pantalla ensayos para medir un cambio a un fenotipo RBF/IS o ensayos útiles para los compuestos de prueba de pantalla para su efectividad para promover o apoyar un fenotipo RBF/IS.

En ciertas modalidades de la invención, la expresión de por lo menos un gen expresado de manera diferente puede medirse. En modalidades preferidas, la expresión de dos o más genes expresados de manera diferente puede medirse, proporcionando un modelo de expresión de gen o perfil de expresión de gen. Más preferentemente, la medida de una multiplicidad de genes expresados de manera diferente puede llevarse a cabo, proporcionando información adicional para un asunto o perfil de expresión de genes.

En diversas modalidades de la invención, los cambios en la expresión de genes puede medirse en uno o dos maneras: (1 ) medir la transcripción mediante laldetección de mRNA producido por un gen particular; y (2) medir la transcripción mediante la detección de proteína producida por una transcripción particular.

La expresión disminuida o incrementada puede medirse en el nivel RNA utilizando cualquiera de los métodos conocidos en la técnica para la cuantificación de los polinucleótidos, como, por ejemplo PCR (incluyendo, sin límite, RT-PCT y qPCR), protección de RNase, transferencia de Northern, microchip, macrochip y otros métodos de hibridación. Los genes que se ponen a prueba o se examinan de acuerdo con la invención están típicamente en la forma de mRNA o mRNA transcrita reversa. Los genes pueden clonarse y/o amplificarse. La clonación en sí no parece como tendencia la representación de genes dentro de una población. Sin embargo, puede ser preferible utilizar poliA+RNA como una fuente, como puede utilizarse con unos cuantos pasos de procesamiento.

Por lo tanto, un aspecto de la invención proporciona una combinación que comprende una pluralidad de polinucleótidos o proteínas expresadas del mismo que se expresan de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS como resultado de la administración regular extendida de sustancia que afecta uno o más de consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasa, en donde los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En una modalidad, los polinucleótidos o proteínas expresadas se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En otra modalidad, los polinucleótidos o las proteínas expresadas s seleccionan de los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo B de lá Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En otra modalidad, los polinucleótidos o proteínas expresadas se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos. En otra modalidad, los polinucleótidos o proteínas expresadas se seleccionan de los genes de acuerdo con los genes que codifican proteínas relacionadas una o más de las siguientes funciones: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa.

En una modalidad, la combinación comprende dos o más polinucleótidos o proteínas expresadas de los polinucleótidos. Preferentemente, la combinación comprende una pluralidad de polinucleótidos o proteínas expresadas de los polinucleótidos, generalmente aproximadamente, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más polinucleótidos o proteínas o fragmentos de los mismos, como se adecuado para un Grupo y uso particular. Cuando la combinación comprende uno o más fragmentos, los fragmentos pueden ser de cualquier tamaño que retiene las propiedades y la función del polinucleótidos o proteína, preferentemente de aproximadamente 30%, 60% o 90% del original.

Los polinucleótidos y las proteínas pueden ser de cualquier animal, preferentemente caninos y felinos, más preferentemente caninos. Los homólogos de los polinucleótidos y proteínas de diferentes especies animales son obtenibles por el significado de información estándar y métodos moleculares conocidos para el especialista. Por ejemplo, el nombre o descripción de la función de un gen o proteína pueden registrar uno de diversas bases de datos disponibles públicamente, lo cual generará una lista de fuentes que proporcionan información acerca de ! ese gen de diferentes especies, incluyendo información de secuencia. Una base de ; datos es la "Información Hiperconectada en la base de datos de Proteínas (¡HOP), la cual es accesible en internet mediante la url: ihop-net.org. De manera alternativa, un número de adquisición de base de datos pública de un gen conocido o proteína puede utilizarse para tener acceso a la información de secuencia para ese gen o proteína y para buscar homólogos u ortólogos en otras especies utilizando una búsqueda de comparación de secuencia. Por ejemplo, el número de adquisición de GenBank de un gen p proteína del Í ratón puede registrarse en los Institutos Nacionales del Centro Nacional de Salud de la base de datos de Información Biotecnológica (NCBI), teniendo acceso por él mismo a las secuencias DNA o de polipéptido para ese gen del ratón. Utilizando la misma base de datos, una búsqueda BLAST puede llevarse a cabo en el DNA del ratón o secuencias de proteína, o fragmentos del mismo de suficiente longitud para definir el gen o proteína, para identificar secuencias de homología suficiente de otras especies, por ejemplo, canina. Los números de adquisición de las secuencias de otras especies de interés pueden posteriormente registrarse en la base de datos para obtener información que pertenece a estas secuencias de nucleótido de largo completo o de proteínas, así como otra información descriptiva.

Otro aspecto de la invención proporciona una composición que comprende dos o más pruebas para detectar la expresión de gen en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS como resultado de ingestión extendida regular de una sustancia qué afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasa. Las pruebas pueden comprender polinucleótidos u oligonucleótidos que hibridan específicamente con los genes que codifican las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos. Alterativamente, pueden comprender agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente a los polipéptidos que comprenden las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o 2 o fragmentos de los mismos. En ciertas modalidades, los agentes de unión polipéptidos son anticuerpos y en una modalidad particular son anticuerpos monoclonales. En una modalidad, las pruebas hibridan específicamente a los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos, o unen específicámente a los polipéptidos que comprenden las proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En otra modalidad, las pruebas hibridan específicamente a los genes que codifican las proteínas mencionadas en el (Brupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden las proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En incluso otra modalidad, las pruebas hibridan específicamente a los genes que codifican las proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o los fragmentos de los mismos. En otra modalidad, las pruebas hibridan específicamente o específicamente unen a los poiinucleótidos que codifican proteínas o polipéptidos que comprenden proteínas, los cuales tienen una función seleccionada de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa. En una modalidad preferida, las pruebas hibridan o unen específicamente los poiinucleótidos o polipéptidos caninos o felinos.

Preferentemente, la composición comprende una pluralidad de pruebas, generalmente aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, o más pruebas para detectar los poiinucleótidos o proteínas o fragmentos de los mismos, como sea adecuado para un Grupo particular y uso. Se entenderá por el especialista que múltiples pruebas para un solo gen o proteína objeto pueden utilizarse para depurar la sensibilidad o exactitud de un análisis utilizando las pruebas. Por ejemplo, diversas pruebas de oligonucleótidos, que hibridan específicamente diferentes secuencias o un polinucleotido objeto, pueden emplearse. De la misma manera, diversos1 anticuerpos, específicos inmunológicamente para diferentes epítopes en una proteína objeto, pueden utilizarse.

Se puede preparar una o más pruebas de oligonucleótidos o polinucleótidos para examinar una muestra utilizando la información de secuencia para cualquiera de los genes mencionados en el presente, de cualquier especie, preferentemente canino o felino. Las pruebas deben ser de suficiente longitud para hibridar específicamente de manera considerable y exclusiva con genes o transcripciones complementarias adecuadas. En ciertas modalidades, las pruebas de oligonucleótidos serán por lo menos aproximadamente 10, 12, 14, 16, 18, 20 o 25 de nucleótidos en longitud. En algunas modalidades, las pruebas más largas de por lo menos aproximadamente 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 de nucleótidos son convenientes y las pruebas más largas de I aproximadamente 100 nucleótidos pueden ser convenientes en algunas modalidades. Las pruebas pueden comprender proteínas funcionales de codificación de secuencias de longitud completa. Las pruebas de ácido nucleico se realizan o se obtienen utilizando métodos conocidos para los especialistas, por ejemplo, síntesis in vitro dé nucleótidos, aislamiento y purificación de fuentes naturales o segmentación enzimática de los polinucleótidos de la invención.

Los complejos de hibridación que comprenden pruebas de ácidos nucleicos hibridados para un polinucleótido de la invención pueden detectarse mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica. En ciertas modalidades de la invención, las prueba de ácido nucleico inmovilizadas pueden utilizarse para la detección rápida y i, específica de los polinucleótidos y sus patrones de expresión. Típicamente, una prueba de ácido nucleico se conecta con un apoyo sólido y un polinucleótido objeto !(por ejemplo, un gen, un producto de transcripción, un amplímetro o más comúnmente; una mezcla amplificada) se híbrida para la prueba. Ya sea la prueba o el objetivo o ambos, pueden etiquetarse, típicamente con un fluoróforo u otro marcador, como estreptavidina. Donde el objeto es etiquetado, la hibridación puede detectarse mediante la detección de fluorescencia delimitadora. Donde la prueba se etiqueta, la hibridación se detecta típicamente extinguiendo la etiqueta. Donde ambos la prueba y el objeto son etiquetados, la detección de la hibridación se lleva a cabo típicamente mediante el monitoreo de un cambio de color que resulte de la proximidad de dos etiquetas delimitadoras. Se conoce en la técnica una variedad de estrategias de etiquetado, etiquetas y similares, particularmente para las aplicaciones basadas en fluorescencia.

En otra modalidad, las pruebas comprenden agentes delimitadores de polipéptido que unen los polipéptidos producidos por expresión de uno o más de los polipéptidos mencionados en el presente, o fragmentos de los mismos. Dichas pruebas de unión de proteínas pueden prepararse utilizando la información de secuencia disponible para cualesquiera de las proteínas identificadas en la Tabla 1 y la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

Las técnicas de análisis que pueden utilizarse para determinar los niveles de una proteína en una muestra también se conocen bien para los especialistas en la técnica.

Dichos métodos de análisis incluyen radioinmunoanálisis, análisis de unión competitiva, análisis de transferencia de Western y análisis de ELISA. En los métodos de análisis utilizando anticuerpos, anticuerpos policlonales y monoclonales y convenientes para el uso en la invención. Dichos anticuerpos pueden ser específicos inmunológicamente para i. una proteína particular o un epítope de proteína o un fragmento de proteína, como se puede entender por los especialistas en la técnica. Los métodos de realización de anticuerpos policlonales y monoclonales específicos inmunológicamente para una proteína o péptido también se conocen bien en la técnica.

Las modalidades preferidas de la invención pueden utilizar los anticuerpos para la detección y cuantificacion de proteínas producidas por la expresión de los genes descritos en el presente. Aunque las proteínas pueden detectarse mediante la inmunoprecipitación, separación de afinidad, análisis de transferencia de Western y similares, un método preferido utiliza la metodología del tipo ELISA en donde el anticuerpo se inmoviliza en un apoyo sólido y una proteína objeto o péptido se exponen al anticuerpo inmovilizado .Ya sea la prueba, o el objeto o ambos pueden etiquetarse. Una variedad de estrategias de etiquetado, etiquetado y similares, se conocen en la técnica.

Otro aspecto de la invención proporciona un dispositivo que comprende un apoyo sólido al cual se fija una agrupación que comprende una pluralidad de pruebas para detectar expresión de genes diferenciales en animales que exhiben un fenotipo RBF/IS debido a su ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas. En modalidades particularmente preferidas de la invención, los patrones de expresión o perfiles de una pluralidad de genes expresados diferentemente los fenotipos RBF/IF contra los fenotipos normales como se definió en el presente, se observó la utilización de análisis de pruebas para detectar polinucleótidos o proteínas objeto. El dispositivo puede utilizarse para detectar expresiones diferencial de genes que codifican los productos de genes establecidos en la Tabla 1 o en la tabla 2 o en los subconjuntos de los mismos, a saber Grupo A, Grupo B, Grupo C o subconjuntos funcionales incluyendo las funciones seleccionadas de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa. En una modalidad preferida, el dispositivo se utiliza para detectar expresiones diferentes de los genes de los caninos o felinos.

En una modalidad, los análisis de pruebas de oligonucleótidos o polinucleótidos pueden utilizarse, ya sea otra modalidad puede utilizar análisis de anticuerpos u otras proteínas que unen específicamente los productos de genes expresados diferentemente. Dichos análisis puede ser productos sanitarios a medida hechos de costumbre de acuerdo con métodos conocidos, como, por ejemplo, síntesis in-situ en un apoyo sólido o suplementos de pruebas pre-sintetizadas para un apoyo sólido mediante técnicas de microimpresión. En modalidades preferidas, los análisis de ácido nucleico o pruebas de unión de proteínas son productos sanitarios a medida para detectar específicamente los transcriptos o proteínas producidas por dos o más de los genes o fragmentos de genes expresados diferencialmente descritos en el presente.

Otro aspecto de la invención proporciona un método para detectar la expresión diferencial de uno o más genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad según se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, como se comparó con los animales normales ó no tratados. El método generalmente comprende: (a) proporcionar pruebas que comprenden (i) poünucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o Tabla 2 o fragmentos de los mismos o (¡i) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o Tabla 2 o fragmentos de los mismos; (b) agregar las pruebas a una muestra que comprende mRNA o proteínas de un animal que presenta el fenotipo RBF/IS, de manera que permite la hibridación o unión de las pruebas a mRNA o proteínas en la muestra, formando por el mismo la hibridación o los complejos de unión en la muestra (c) opcionalmente, agregar las pruebas a otra muestra que comprende mRNA o proteínas de un animal normal, de manera que permita la hibridación o unión de las pruebas a MRNA o proteínas en la segunda muestra, formando por el mismo la hibridación o complejos de unión en la otra muestra; (d) detectar los complejos de hibridación en la muestra o muestras; y (e) comparar la hibridación o complejos de unión de la primera muestra con la hibridación o complejos de unión de un estándar o opcionalmente de otra muestra, en donde por lo menos una diferencia indica entre la cantidad de hibridación o unión en la muestra como se comparó con la muestra estándar o la opcional expresión diferencial de uno o más genes expresados diferentemente en los animales que presentan el fenotipo RBF/IS, como se comparó con los animales que no presentan el fenotipo.

El método puede utilizarse para detectar la expresión diferencial de los genes que codifican los productos de genes establecidos en la Tabla 1 o la tabla 2 o en los subconjuntos de los mismos, a saber Grupo A, Grupo B, Grupo C o | subconjuntos funcionales incluyendo las funciones seleccionadas de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control ¡de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa. En una modalidad preferida, el método se utiliza para detectar expresiones diferentes de los genes de los caninos o felinos. En modalidades particulares, las pruebas se unen a un sustrato, preferentemente en una serie. i El paso (c) y parte de los pasos (d) y ' (e) son opcionales y se utilizan si una comparación relativamente contemporánea de dos o más sistemas de pruebas se va a i conducir. Sin embargo, en una modalidad preferida, el estándar utilizado para la comparación se basa en los datos previamente obtenidos utilizando el método.

Estas pruebas se exponen a una muestra para formar la hibridación o complejos de unión que se detectan y comparan con los de un estándar. Las diferencias entre la hibridación o complejos de unión de la muestra y estándar indican la expresión diferencial de los polinucleotidos y por lo tanto los genes expresados diferencialmente en el fenotipo RBF/IS contra el fenotipo normal en la muestra. En una modalidad preferida, las pruebas se realizan para detectar específicamente los polinucleótidos o fragmentos de los mismos producidos por uno o más de los genes o fragmentos de genes identificados por la invención. Los métodos para detectar los complejos de hibridación se conocen por los especialistas.

En una modalidad, el método además comprende la exposición del animal o muestra para una sustancia de muestra antes de llevar a cabo el análisis. Posteriormente, la comparación es indicativa de si la sustancia de prueba alteró la expresión de los genes expresados diferencialmente en los animales tratados contra los no tratados.

En otra modalidad útil para la determinación de diagnóstico o pronóstico del fenotipo RBF/IS, la detección se lleva a cabo en intervalos, por ejemplo, para monitorear un progreso del animal cuando intenta inducir el fenotipo RBF/IS en el animal.

Otro aspecto de la invención proporciona un método de determinación si una sustancia de prueba puede ser útil en afectar uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, por el mismo induciendo un fenotipo RBF/IS cuando se administra a un animal en una base extendida regular. El método comprende típicamente (a) determinar un primer perfil de expresión de gen mediante la medida de la transcripción o productos de traducción de dos o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la ausencia de la sustancia de prueba; (b) determinar un segundo perfil de expresión de gen mediante la medida de la transcripción o productos de traducción de dos o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la presencia de la sustancia de prueba; y (c) comparar el primer perfil de expresión de gen con el segundo perfil de expresión de gen, en donde un cambio en el segundo perfil de expresión de gen como se comparó con el primer perfil de expresión de gen'i indica que la sustancia de prueba puede ser útil en afectar uno o más del consunr† alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, cuando se administra a un animal. i En ciertas modalidades, el método puede además incluir el paso de comparar por lo menos el segundo perfil de expresión de gen con una referencia o perfil ¡de expresión de gen estándar obtenido mediante la medida de los productos de transcripción o traducción de dos o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la presencia de una sustancia de referencia conocida que afecta í uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, cuando se administra a un animal. Dicha sustancia puede ser por ejemplo OEA o un derivado resistente de hidrólisis de la misma. ¡ En una modalidad, el sistema de prueba comprende una población de células cultivadas. Una construcción de ácido nucleico que comprende un gen ¡asociado de RBF/IF de acuerdo con la invención es introducida en células huéspedes cultivadas. Las I células huéspedes pueden ser líneas celulares mamalianas, como hongo;, bacterias y i, células de insectos también pueden ser utilizadas. Las secuencias de codificación de los genes se unen de manera operable conectadas a los elementos de expresión adecuados regulatoriamente convenientes para la célula huésped particular que se va a utilizar. Las l' construcciones de ácido nucleico pueden introducirse en las células huésped de acuerdo con cualquier medio aceptable en la técnica, incluyendo más no limitándose a la transfixión, transformación, precipitación de fosfato de calcio, electrpporxación y lipofección. Dichas técnicas se conocen bien y son rutinarias en la técnica1; Las células transformadas también pueden utilizarse para identificar los compuestos que modulan la expresión de los genes asociados de RBF/IS.

Los análisis de expresión de genes pueden llevarse a cabo utilizando una construcción de genes que comprenden el promotor de un gen asociado con RBF/IS seleccionado conectado operablemente a un gen reportador. La construcción reportadora también puede introducirse en una célula cultivada conveniente, incluyendo, más no limitándose a las líneas celulares huésped estándar descritas anteriormente o células aisladas frescamente de un sujeto como células adiposas, musculares o hepáticas.

En una modalidad preferida, el sistema de prueba comprende animales.

Típicamente, un compuesto de prueba se administra a un sujeto y el perfil ¡de expresión i de gen del sujeto es analizado para determinar el efecto del compuesto ¡ide prueba o transcripción o la traducción de los genes o productos de genes de la invención. La expresión de genes puede analizarse in situ o ex vivo para determinar el efecto del compuesto de prueba. En otra modalidad, un compuesto de prueba es administrado a un sujeto y la actividad de una proteína expresada de un gen es analizada in situ o ex vivo de acuerdo con cualquier medio conveniente en la técnica para determinar el efecto del compuesto de prueba en la actividad de proteínas de interés. Además, donde un compuesto de prueba es administrado a un sujeto, los efectos fisiológicos, sistemáticos y físicos del compuesto, así como la toxicidad potencial del compuesto pueden también evaluarse.

Las sustancias de pruebas pueden ser cualquier sustancia que pueda tener un efecto en los polinucleótidos o genes expresados diferente en los animales que presentan un fenotipo RBF/IS. Las sustancias de prueba preferidas son aminos de ácidos grasos, como los derivados de OEA. Otras sustancias de prueba incluyen, más nó se limitan a amino ácidos; proteínas, péptidos, polipéptidos, ácidos nucleicos, oligpnucleótidos, polinucleótidos, pequeñas moléculas, macromoléculas, vitaminas, azúcares simples; azúcares complejos, polisácaridos, carbohidratos, triglicéridos de cadena media (MCTs); trigliceéridos (TAGs); n-3 (omega-3) ácidos grasos que incluyen DHA, EPA, ALA; n-6 (omega-6) ácidos grasos que incluyen LA, ácido y-linoléico (GLA) y ARA; SA, ácido linoléico conjugado (CLA); fuentes de cloro como lectina; vitaminas de ácidos solubles que incluyen vitamina A y precursores de los mismos como carotenoidos (por ejemplo (carotena), fuentes de vitamina D como vitamina D2 (ergocalciferol) y vitamina D3 (colecalciferol), vitamina E como tocoferoles (por ejemplo, tocoferol) y tocotrienoles y vitamina K como la vitamina K1 (filiquinona) y vitamina K2 (menadiona); ! vitaminas de agua soluble que incluye vitaminas B como riboflavina, niacina (que incluyen nicotinamida y ácido nicotinico), piridoxina, ácido pantoténico, ácido fólico, biotina y cobalamina; y vitamina C (ácido ascórbico); antioxidantes, que incluyen algunos de las vitaminas mencionadas anteriormente, especialmente vitaminas E y C; también bioflavonoides como catequina, quercetina y teaflavina; quiñones como ubiquinona; carotenoides como licopena y licoxantina; resveratrol y ácido lipoico, L-carnitina; D-limonena; glucosamina; S-adenosilmetionina y quitosán. En una modalidad preferida, las sustancias de prueba son nutrientes que pueden agregarse al alimento o consumirse como un suplemento.

Las sustancias identificadas por el método anterior se contemplan también como parte de la invención. ' Otro aspecto de la invención proporciona un método para proporcionar fenotipo RBF/IS en un animal. El método comprende administración oral al animal, regularmente extendido, una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización grasa. Preferentemente el animal es canino o felino, Típicamente, la sustancia es administrada regularmente por la menos dos semanas, más preferentemente pro al menos cuatro semanas o más. La administración de la sustancia puede continuar indefinidamente, por ejemplo, por uno, dos, tres, seis o nueve meses, o durante un año o más, o incluso para la vida del animal. La sustancia generalmente es administrada por al menos diariamente, 'pero el régimen de dosis dependerá de la naturaleza y potencia de la sustancia. Por consiguiente, la administración puede ser más frecuente, por ejemplo, dos o tres veces diariamente, o menos frecuente, por ejemplo tres veces por semana, dos veces por semana, semanalmente, dos veces mensualmente o mensualmente.

En ciertas modalidades, la sustancia es un amino de ácido graso. En particular, la sustancia e N-oleoil-etanolamida o un derivado resistente de hidrólisis del 'mismo, como (Z)-(R)-0-octadecena-mida, N-(2-hidroxietil, 1 -metilo). En otras modalidades, la sustancia es una sustancia identificada por el método de pantalla descrito anteriormente.

En ciertas modalidades, la administración regular oral extendida dé la sustancia causa un cambio en la expresión de uno o más genes de la Tabla 1 o la Tabla 2. En modalidades específicas, la administración oral regular extendida de la sustancia causa un cambio en la expresión de uno o más genes que codifican las proteínas seleccionadas de leptina, hidrólisis amina de ácido graso (FAAH), FAT/CD36 y receptor oleoil-etanolamida GRP1 19. j Cuando se utiliza como un complemento para requisitos dietéticos! ordinarios, la sustancia puede ser administrada directamente al animal. La sustancia puede alternativamente conectarse con, o administrarse con alimento diario o alimento, incluyendo fluidos, como agua de bebida o suministrada como un complemento dietético. Cuando se utilizan en conjunto o incorporan en un alimento diario o alimento, la administración será conocida para estos de herramientas comunes. La administración puede llevarse a cabo como parte de un régimen dietético para el animal. Por ejemplo, un régimen dietético puede comprender la causa de la ingestión regular por el animal de la sustancia, en una cantidad efectiva para promover el fenotipo RBF/IS. En otra modalidad, la sustancia es administrada al animal en conjunto con una o más medicinas, nutracéuticos o agentes nutricionales para la modulación de la grasa 'corporal o la promoción de un fenotipo RBF/IS en el animal.

En ciertas modalidades, la dosis diaria o periódica para la sustancia administrada de acuerdo con este método el rango de aproximadamente 0.001 g/kg peso corporal a 10 g/kg de peso corporal. Más particularmente, la dosis excede de 0.01 , 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09 0.1 g/kg peso corporal. En otras modalidades, la dosis puede ser 0.2, 0.5, 1 .3, 5, 7 o 10 g/kg peso corporal o más, dependiendo de la sustancia y la frecuencia de dosificación. El especialista es familiar con el desarrollo de las dosis y los regímenes de dosificación para los sujetos. i Otro aspecto de la invención proporciona un sistema de computadora que comprende una base de datos que comprende niveles de expresión de identificación de información de uno o más polinucleótidos que se expresan diferencialmente en los animales administrados de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización grasa, y para el uso de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o Tabla 2, o fragmentos de los mismos, y i una interfase de usuario que permite al usuario accesar o manipular la información en la base de datos. El sistema comprende una base de datos que contiene información que identifica el nivel de expresión de uno o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2 y/o po ipéptidos que unen específicamente las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, y una interfase de usuario para interactuar con la base de datos, particularmente, a la entrada, manipular y revisar la información para diferentes animales o categorías de sanímales. En una modalidad, la base de datos además contiene información que identifica el nivel de cavidad de uno o más poíipéptidos mencionadas en la tabla 1 o la tabla 2. En otra, la base de datos además comprende la información de secuencia para uno¡,o más de los polinucleótidos o polipéptidos como se menciono en la Tabla 1 o la Tabla 2, preferentemente de una variedad de especies. En otras modalidades, la base de datos contiene información adicional que describe la descripción putativa de los genes en uno o más especies de animales. El sistema de computadora es cualquier dispositivo electrónico capaz de contener y manipular los datos e ¡nteractuar con un usuario, por ejemplo, una computadora típica o un instrumento analítico diseñado para facilitar utilizando la invención y la salida de los resultados relacionados con el estado de un animal En otro aspecto, la invención proporciona un juego que comprende un envase que contiene una colección de dos o más pruebas para detectar la expresión de genes diferenciales del fenotipo RBF/IS que resultan de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasa. El juego comprende en envases separados en un solo paquete o en diversos envases en un paquete virtual, según sea adecuado para el uso o componente del equipo, dos o más pruebas para detectar la expresión del gen diferencia en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el l, consumo del alimento disminuido (RFB/IS fenotipo) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos, y utilización de grasa, en donde las pruebas comprenden: (a) polinucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la tabla 1 o 2 o fragmentos de los mismos; o (b) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de proteínas mencionas en la tabla 1 o la tabla 2 o fragmentos de los mismos, y además comprende por lo menos uno de (1 ) instrucciones de como utilizar las prueba en una análisis de expresión de gen para detectar la expresión de triglicéridos dé plasma y un incremento en la saciedad según se midió por el consumo alimenticio disminuido (RBF/IS i fenotipo) que resulta de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos, y utilización de grasas, (2) reagentes y equipo para utilizar las pruebas y (3) una composición conocida que induce el fenotipo RBF/IS en la ingestión extendida regular. Preferentemente, las pruebas están fijas para un apoyo solido en ubicaciones conocidas. Las sustancias de referencia convenientes conocidas que inducen el fenotipo RBF/IS en la ingestión regular son N-oleoil etanolamidas o derivados resistentes de hidrólisis de los mismos. ; Cuando el equipo comprende un paquete virtual, el paquete está limitado para las instrucciones en un ambiente virtual en combinación con uno o más componentes del equipo físicos. En una modalidad, el equipo contiene las pruebas y/o los! componentes físicos y las instrucciones para usar las pruebas y otros componentes están disponibles mediante internet. El equipo puede contener puntos adicionales como dispositivo para mezclar muestras, pruebas y reagentes y dispositivo para usar el equipo, por ejemplo, j tubos de prueba o utensilios de mezcla.

En otro aspecto, la invención proporciona un medio para comunicarla información j acerca o instrucciones para uno o más de las composiciones y métodos descritos en el presente. Los medios comprenden los documentos, medios de almacenamiento digital, medios de almacenamiento óptico, presentación de audio o despliegue visual que contiene la información o instrucciones. Por ejemplo, los medios de comunicaciones pueden ser un sitio web desplegado, kiosko, folleto, etiqueta del producto^, inserción del paquete, anuncio, anuncio público, citas de audio, cintas de video, DVD, CD-ROM, chip legible por computadora, tarjeta legible por computadora, disco legible por 'computadora, memoria de computadora, o combinación de los mismos. La información útil incluye uno o más de (1 ) métodos para proporcionar la salud y bienestar del animal e (2) información de contacto para los cuidadores de animales para utilizar si tiene una pregunta acerca de la invención y su uso. Las instrucciones útiles incluyen técnicas para usar las pruebas, instrucciones para realizar un análisis de expresión de genes, y cantidades de administración y frecuencia para las sustancias. Los medios de comunicación son útiles para instruir sobre los beneficios del uso de la invención.

EJEMPLOS Diversos aspectos de la invención pueden ser ilustrados además por los siguientes ejemplos. Se entenderá que estos ejemplos se proporcionan simplemente para objetos de ilustración y no limitan el alcance déla invención descritos en el presente a menos que se especifique de otra manera.

Ejemplo 1 Los efectos fisiológicos y bioquímicos de la administración OEA oral crónica fueron investigados. Los ratones fueron alimentados crónicamente con OEA, proporcionados de un suplemento durante 4 semanas, para estudiar el efecto en la ganancia de peso corporal y consumo alimenticio acumulativo entre otros parámetros.

Materiales y Métodos Los animales, dieta y diseño experimental. Los ratones C3H machos adultos comprados de 8 semanas de edad fueron almacenados individualmente y mantenidos ad libitum en diferentes dieta y agua durante dos semanas. Siete ratones fueron colocados en 3 grupos mediante randomización por peso, y alimentados con una alta dieta de grasa (lípidos representados 50% de energía diaria) durante dos semanas. La composición de la alta dieta de grasa por kg fue: 284.5 g de almidón, 89.5 g de sacarosa, 250 g de caseína, 50g de celulosa, 10 g de una mezcla de vitaminas (V1001 ), 35g de una mezcla de minerales (S10026) y 281 g de aceite de cañóla (UPAE, Jouy en Josas, Francia). Posteriormente el OEA, fue agregado a las dietas en diferentes niveles para proporcionar 0, 10, 100 mg OEA/kg peso corporal. Los ratones fueron conservadores en cada dieta respectiva durante cuatro semanas. Durante la intervención nutricional, consumo de alimento diario fue monitoreado y los ratones fueron pesados 3 veces una semana.

Muestreo. Al final del período experimental, los ratones se sacrificaron mediante la extracción sanguínea (pinchazo cardiaco) después la anestesia con ¡soflurano. El plasma se obtuvo mediante la centrifugación (1 ,000 g durante 10 minutos en 4°C). Los depósitos adiposos mesentéricos, epididimales, inguinales y peritoneales, así como el hígado, estómago, pequeña mucosa de intestino, páncreas y el músculo gastronemiano fueron removidos y congelados en nitrógeno líquido. El plasma y las muestras de órganos fueron conservadas a -°80C hasta el análisis. Los triglicéridos, la glucosa, colesterol total y el colesterol HDL se midieron directamente en las muestras de plasma reunidas durante el sacrificio mediante procedimientos enzimáticos, utilizando Beckman Coulter Systems SYNCHRON LX 20 (Beckman Coulter, Fullerton, USA) (método de oxidasa, Beckman Coulter para glucosa, método GPO, Beckman Coulter para TG, método de oxidasa y estearasa, Beckman Coulter para colesterol).1 HDL fueron aislados mediante la solubilización específica, utilizando un juego de aislamiento de precipitación (Beckman Coulter, Fullerton USA).

El análisis estadístico. Los resultados se determinaron según significa ± error estándar de los medios (SEM). El análisis estadístico de los parámetros fisiológicos se levó a cabo por ANOVA de un camino en el software Statview (SAS Institute, Cary USA). El significado estadístico fue establecido arriba del nivel P<0.05.

Resultados Consumo de alimentos. De acuerdo con el análisis de regresión lineal, el consumo de alimentos acumulativo en el período experimental puede predecir arriba del 40% de la variación total de las masas del camino graso adiposo. El consumo alimenticio fue ligeramente (-6.5%) pero considerablemente (P<0.05) disminuido en ; los ratones consumiendo OEA. El consumo alimenticio diario fue considerablemente diferente para ambas dosis de OEA comparado con el control en todo el período experimental (dos maneras ANOVA, P<0.01 ). Sin embargo, el efecto observado fue ninguna dosis dependiente.

Los parámetros fisiológicos y bioquímicos. El tratamiento OEA no induce hepatomegalia. OEA indujo una disminución similar del peso de caminos grasos adiposos totales. El tejido adiposo peritoneal fue principalmente disminuido y los caminos grasos inguinales, tomados como un indicador del depósito graso subcutáneo (sitio principal de almacenamiento graso), también se disminuyeron por el consumo OEA (P<0.05), ya sea los caminos grasos mesentéricos permanecieron sin afectar independientemente de la dosis administrada. El peso del cuerpo final de los ratones no se afectó.

Los triglicéridos de plasma se disminuyeron considerablemente en ambos grupos OEA (-72%, P<0.05 para 10 mg de dosis; -59%, P<0.05 para 100 mg dé dosis). Una tendencia para el colesterol total de plasma disminuido fue observado en ; 10 mg/kg, el cual alcanzó la importancia estadística en 100 mg/kg de tratamiento de peso corporal.

Ejemplo 2 La expresión de 45 genes fue medida mediante PC en tiempo real en los tejidos periféricos para identificar los genes que se expresaron diferencialmente en respuesta a la administración oral de oleoiletanolamida (OEA) o un análogo OEA no hidrolizable (KDS 5104), el cual afecta la saciedad, metabolismo lípido, utilización de grasas, consumo alimenticio y masa de grasa corporal. í Materiales y Métodos Los animales, dieta y diseño experimental. Los ratones C57bl6j machos adultos comprados de 8 semanas de edad fueron almacenados individualmente y mantenidos ad libitum en una alta dieta de grasas y agua durante dos semanas. Siete ratones fueron colocados de manera aleatoria en 3 grupos y alimentados con una alta djeta de grasa (lípidos representados 50% de energía diaria) durante dos semanas. Para un kilogramo, la composición de la alta dieta de grasa fue: 235 g de caseína, 201 g de sacarosa, 3.5 g i de cisteína L, 85g de almidón, 1 16g de maltodextrina, 60g de celulosa, 12g de mezcla de vitaminas (AIN-93M, UPAE, Jouy-enJosas, Francia), 51.5 g mezcla mineral (AIN-93Vx, UPAE, Jouy-en-Josas, Francia) y 236 g de manteca. Posteriormente, ya sea OEA o KDS ,5104 fue agregada a la dieta en una concentración de 100 mg/kg/peso corporal. Los ratones se conservaron bajo tratamiento durante 5 semanas. ! Síntesis química. OEA fue sintetizada químicamente del aceite de girasol oleico algo y etanolamina (Sigma-Aldrich, Saint-Louis, USA) de acuerdo con Roe, ET et al., 1952, J., American Oil Chemists's Society 29 (1 ): 18-22. KDS 5104 [(Z)-(R)-9-octadecenamida, N-(2-hidroxietil, 1 -metil)] fue sintetizado por la reacción estoiquiométrica de oleoilcloro con el amino correspondiente: (R)-(-)-2-aminopropanol (Sigma-Aldrick, SaintLouis, USA) en la presencia de trietilamina (Sigma-Aldrich, Saint Louis, USA) utilizado procedimientos conocidos. La reacción fue conducida en diclorometano a 0-°4C bajo la mezcla de 12 h. El solvente fue removido bajo el vacío, y la mezcla fue disuelta en tetrahidrofurano/etanol (1 :1 ) y tratado con solución acuosa de 3 N KOH (2E Eq). La solución fue conservada en reflujo durante 30 minutos, después de los cuales el solvente se removió. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavo secuencialmente con agua, hidróxido de sodio (2 N), ybrina. La fase orgánica se secó en sulfato de sodio, filtrado y concentrado bajo la presión reducida (cf. Astarita et al. 2006, J. Pharmacol. Exp. Ther. 318 (2):(563-70).

Muestreo. Al final del período experimental, los ratones se sacrificaron mediante la extracción sanguínea (pinchazo cardiaco) después la anestesia con isoflurano. El plasma se obtuvo mediante la centrifugación (1 ,000 g durante 10 minutos en 4°C). Los depósitos adiposos mesentéricos, epididimales, inguinales y perifonéales, así como el hígado, estómago, pequeña mucosa de intestino, páncreas y el músculo gastronemiano fueron removidos y congelados en nitrógeno líquido. El plasma, la orina, las hebes fecales y muestras de órganos fueron conservadas a °80C hasta el análisis.

La extracción de RNA y la expresión de genes. El RNA total del hígado, intestino membrana de mucosa, tejidos adiposos, músculo gastronemiano, páncreas y estómago fueron extraídos con el reagente TRIzol(lnvitrogen, Carlbad, USA) de acuerdo con la instrucción del fabricante. La concentración RNA se determinó en narjiodrop de la absorbencia en 260 nm. La retro transcripción PCRs para sintetizar cDNA :fue llevada a cabo utilizando un Cilindro Térmico del Biosistema Aplicado 2720 y Superscripto II (Invitrogen, Carlsbad, USA) de acuerdo con el protocolo del fabricante. PCR cuantitativo en tiempo real (RT-qPCR) fue llevado a cabo en cDNA obtenido según se describió anteriormente utilizando un sistema de alto rendimiento (Biomeck 3000, -Beckman & Coulter, Fullerton, USA) y Lightcycler 480 (Roche/Hitachi, Base, Suiza) con SYBR Green Master mix + kit (Eurogentec, Filadelfia, USA). Los principales para los genes seleccionados fueron generados utilizando ayuda de informática en línea del fabricante Lightcycler (Roche). La base de datos utilizada para identificar los genes fue (1 ) la base de datos NCBI (GenBank) y (2) el IHOP (Información hiperconectada en la Proteína) base de datos (www.ihop-net.org/UniPub/iHOP/bng/). Los valores fueron expresados como radio de los niveles de RNA relativo a los ratones de control (dietas con 0 mg de OEA/kg/peso corporal) utilizando ?? (Ct) (Livak KJ & Schmittgen TD, 2001 , Métodos 25:402-8). La expresión de genes de los siguientes genes fue medida (abreviación y Acceso de GenBank mostrada en paréntesis).

AcilCoA oxidasa (ACO) (NM_015729) Alfa 1 coactivador gamma receptor activado proliferador de peroxisóma (PGC 1 a) (NM_008904) Carboxiquinasa de fosfoenolpiruvato (PEP CK) (NM_028994) Alfa receptor activado proliferador de peroxisoma (PPAR a) (NM_01 1 144) Gamma receptor activado proliferador de peroxisoma (PPAR Y) (NM_133249) Carboxilasa CoA Acil (ACC) (NM_133360) ' Factor de adipocitos inducido rápido (Fiaf) (NM_020581 ) Transportador de ácido graso/cluster de diferenciación 36 (FAT/CD 36) (NM_007643) Lipasa de lipoproteína (LPL) (NM_008509) Proteína 1 de unión de ácido graso de hígado (LFABP1 ) (NM_017399) Subtilisina convertasa de proteína/tipo kexina 9 (NM_153565) Un dominio 17 disintegrina y metaloproteinasa (Adam 17) (NM_009615) Grelina (NM_021488) Receptor 1 19 conectado proteína G (GPR 1 19) (NM_181751 ) Colescistokinina (CCK) (NM_031 161 ) Péptido YY (NM_145435) Leptina (NM_008493) Adiponectina (NM_009605) Visfatina (NM_021524) Proteína-c 1 de unión del elemento regulatorio esteral (SREBP 1 c) (NM_01 1480) Proteína-C 2 de unión del elemento regulatorio esteral (SREBP2 1 ) (N _033218) Hidrolasa de amino de ácido graso (FAAH) (NM_010173) Tipo amidohidrolasa de N-acilsfingosina (NAAA) (N _025972) : Sintasa de oleoiletanolamida (OEA sintasa) (NM_178728) Proteína 2 no enparejada (UCP2) (N _01 1671 ) Transportador 4 de glucosa (Glut 4) (NM_009204) Delta receptor activado proliferador de peroxisoma (PPAR?) (NM_01 1 145) Receptor 1 de cannabinoide (CB1 ) (NM_007726) Sustrato 1 receptor de insulina (IRS 1 ) (NM_010570) Fosfataso 6 de glucosa (G6P) (NM_008061 ) Desaturasa 1 A Estearoil-Coenzima (SCD 1 ) (NM_009127) · Sintasa de Ácido Graso (FAS 1 ) (NM_007988) El análisis estadístico. Los resultados se presentaron según significa ± error estándar de los medios (SEM). El análisis estadístico de los parámetros fisiológicos y los datos de expresión de genes fue llevado a cabo por ANOVA de un camino en el software Statview (SAS Institute, Cary USA). El consumo alimenticio diario fue analizado utilizando ANOVA de dos caminos en el software Starview. El significado estadístico fue establecido arriba del nivel P<0.05, el nivel P<0.01 , nivel P<0.001. Para el análisis estadístico de los datos de expresión de genes, los valores se calcularon relativos a 18S expresión para cada ratón y gen.

Resultados Los resultados para el tratamiento OEA se muestran en la Tabla 1 . Los resultados para el tratamiento de KD5104 se muestran en la Tabla 2. La siguiente nomenclatura se utiliza en las Tablas: i: intestino proximal, s: estómago, I: hígado, m: músculo, p: páncreas, at: tejido adiposo, at ep: tejido adiposo epididimal; at per: tejido adiposo peritóneal.

Tabla 1 Grupo A Grupo B Grupo C FUNCIONES GENES Todos los 0.05< valor 0.01 < valor valor P < genes P < 0.01 P < 0.001 0.001 CPT1 p 1.35 CPT1 I I Oxidación de CPT1 i 1.74 Lípidos ß CPT1 I 2.00 i ACO I 1 .06 UCP2 m 1.19 FAS I 1 .65 Lipogénesis SREBPI c I 1 .24 SREBPI c at 1.08 i ep SREBPI c at -1 .39 per SREBP2 1 1.22 SCD1 I 2.13 SCD 1 at ep 1 .00 SCD 1 at per -1.30 FAT/CD36 I 1 .45 FAT/CD36 i 1 .61 FAT/CD35 -1.88 at ep Transporte FAT/CD36 -1 .81 de Lípidos at per PCSK9 I 1 .44 Fiaf i 1.15 Fiaf at ep -1.41 Fiaf at per 2.42 visfatin at ep -1.55 visfatin al ; -1.80 per Señalización adiponectina -1.14 de insulina at ep adiponectina -2.08 at per ghrelin s 1.98 GPR1 19 i 1.97 Control de PPAR a i 1.20 consumo CCK i 1 .57 alimenticio leptina at ep 1.22 leptina at per 3.44 leptina s 1.41 CB1 i -1 .02 CB1 at ep -1 .94 Metabolismo CB1 at per -5.27 y FAAH i 1 .68 señalización FAAH at ep 2.22 de FAAH at per 1 .62 etanolamidas NAAA i 1 .85 de ácido NAAA at ep 1 .36 graso NAAA at per 1 .03 OEA sintasa -1.38 1 i Glut 4 m 3.27 i l' Metabolismo i' PepCK I 1 .02 de Glucosa G6P 1 1 .29 Con referencia a la Tabla 1 , los análisis estadísticos multivariados: muestran un cambio significativo en la cuestión de la expresión de genes en general en los tratamientos OEA. Los genes de la leptina adiposa y FAAH (hidrolasa amida de ácido graso), receptor GPR1 19 intestinal FAT/CD36 y OEA fueron entre los genes principalmente responsables para este cambio y también se asociaron con los caminos de grasa corporal reducida. FAAH adiposo fue encontrado para que sea principalmente asociado con una disminución en el consumo alimenticio. Estos datos muestran que la acción anti-obesidad de OEA se basa en parte en la modulación del camino de hidrólisis de aminos de ácido graso en el tejido adiposo y mediante la modulación del camino de señalización OEA GPR1 19 descubierto recientemente y la regulación del consumo de ácido graso en el intestino proximal.

Tabla 2 i Grupo A Grupo B Grupo C FUNCIONES GENES Todos los 0.05< valor 0.01 < valor valor P < genes P < 0.01 P < 0.001 0.001 CPT1 p 1.80 CPT1 I 1.06 Oxidación de CPT1 i ; 1.63 Lípidos ß ACO I 1.15 UCP2 m 1.1 1 FAS I 2.47 SREBPI c I 1.47 Lipogénesis SREBPI c at 1.00 ep SREBPI c at -1.35 r per SREBP21 1.13 SCD1 I -1.91 SCD 1 at ep 1.24 SCD 1 at per 1.51 FAT/CD36 I 0.88 FAT/CD36 i 1.83 FAT/CD36 -2.24 at ep Transporte FAT/CD36 1.01 de Lípidos at per PCSK9 I 1.34 Fiaf i 0.68 Fiaf at ep 0.46 Fiaf at per 2.79 visfatin at ep -1.08 visfatin at -1.10 per Señalización adiponectina -1.02 de insulina at ep adiponectina -1.52 at per Control de ghrelin s 1.04 consumo GPR119 i 4.95 alimenticio PPAR a i 1 .02 CCK í 1 .62 leptina at ep 1 .35 leptina at per -1.32 leptina s -1.02 CB1 i -1 .25 CB1 at ep -1 .48 Metabolismo CB1 at per -3.00 y FAAH i 1 .28 señalización FAAH at ep 9.71 de FAAH at per 3.82 etanolamidas NAAA i 1.60 de ácido NAAA at ep 1 .38 graso NAAA at per 1.52 OEA sintasa -1.36 i Glut 4 m 5.70 Metabolismo PepCK I 1.55 de Glucosa G6P 1 2.12 Con referencia a la Tabla 2, el análisis estadístico multivariado mostró un importante cambio en la cuestión de expresión de genes general en los tratamientos KDS 5104. Los genes del hígado FAS (Sintasa de Ácido Graso), CPT1 intestinal y receptor GPR1 19 oleoiletanolamida fueron entre los genes principalmente responsables de este cambio y también se asociaron con los caminos de grasa corporal reducidos. GPR1 19 se encontró que está principalmente asociado con una disminución en el consumo alimenticio. Los datos muestran que la acción de anti obesidad de KDS 5104 se basa en parte en la modulación del camino de hidrólisis de aminos de ácido graso en el tejido adiposo y mediante la modulación del camino de señalización de endocannabinoide recién descubierto GPR 19 y la regulación del consumo de ácido grado en el intestino proximal.

La especificación ha descrito y ejemplificado las modalidades preferidas típicas de la invención y, mediante los términos específicos se emplearon, se utilizan en un sentido genérico y descriptivo únicamente y no para objetos de límite, el alcance de la invención siendo establecido en las reivindicaciones. Obviamente, muchas modificaciones y variaciones de la invención son posibles a la luz de la enseñanza anterior. Por lo tanto, se entiende que dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas la invención puede practicarse de otra manera según se describió específicamente.

Claims (68)

G REIVINDICACIONES 1 j:

1 . Una combinación que comprende la pluralidad de polinucleótidos que se f expresan de manera diferente en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y triglicéridos y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que : resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más ! del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, én donde los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o fragmentos de los mismos. j:

2. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 ! caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos. i

3. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos. I I

4. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 ('caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas mencionados en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

5. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 [ caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas relacionados con la oxidación de lípidos ß. '

6. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 ! caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas relacionados con la lipogénesis. ¡i

7. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 j, caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas I relacionados con el transporte de lípidos. '

8. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 j caracterizada r además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas relacionados con la señalización de insulina. i

9. ,La combinación de conformidad con la reivindicación 1 caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas relacionados con el control de consumo alimenticio. ¡

10. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 jicaracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas I' relacionados con el metabolismo de etanolamida de ácido graso y señalización.

1 1 . La combinación de conformidad con la reivindicación 1 caracterizada además porque los polinucleótidos se seleccionan de los genes que codifican proteínas j relacionados con el metabolismo de glucosa.

12. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 ¡ caracterizada además porque la sustancia es ingerida regularmente por al menos cuatro semanas.

13. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 ! caracterizada r además porque la sustancia es ingerida por lo menos una vez diariamente. |

14. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 '.¡caracterizada además porque la sustancia es un amino de ácido graso. ? r

15. La combinación de conformidad con la reivindicación 14 ¡caracterizada í además porque la sustancia es derivado de N-oleoil-etanolamida o resistente de hidrólisis i' del mismo. ! ?

16. La combinación de conformidad con la reivindicación 15 ¡caracterizada además porque la sustancia es (Z)-(R)-0-octadecena-mida, N-(2-hidroxietil, 1 -metilo).

17. La combinación de conformidad con la reivindicación 1 caracterizada además porque los polilnucleótidos son caninos o felinos polinucleótidos.

18. Una combinación que comprende dos o más pruebas para detectar la expresión de genes diferencial en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y triglicéridos y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, en donde los polinucleótidos comprenden: , (a) polinucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la tabla 1 o 2 o fragmentos de los mismos; o (b) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de proteínas mencionas en la tabla 1 o la tabla 2 o fragmentos de los mismos,

19. La composición de conformidad con la reivindicación 18 caracterizada además por los agentes de unión de polipéptidos son anticuerpos.

20. La composición de conformidad con la reivindicación 18 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acúerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

21. La composición de conformidad con la reivindicación 18 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

22. La composición de conformidad con la reivindicación 18 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

23. La composición de conformidad con la reivindicación 18 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente, o unen específicamente a los polinucleótidos que codifican proteínas o polipéptidos que comprenden proteínas, los cuales tienen una función seleccionada de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa. I

24. La composición de la reivindicación 18 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente o unen los polinucleótidos o polipéptidos caninos o felinos. '

25. Un dispositivo que comprende un apoyo sólido al cual ¡ se fija una agrupación que comprende una pluralidad de pruebas para detectar expresión de genes diferenciales en animales que exhiben un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de, la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo' alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, en donde Jas pruebas comprenden: (a) polinucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la tabla 1 o 2 o fragmentos de los mismos; o (b) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de proteínas mencionas en la tabla 1 o la tabla 2 o fragmentos de los mismos,

26. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 caracterizada además por los agentes de unión de polipéptidos son anticuerpos.

27. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

28. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 ¡caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

29. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 caracterizada l además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

30. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente, o unen específicamente a los polinucleótidos que codifican proteínas o polipéptidos que comprenden proteínas, los cuales tienen una función seleccionada de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa.

31 . El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25 caracterizada además porque las pruebas hibridan específicamente o unen los polinucleótidos o polipéptidos caninos o felinos.

32. Un. método para detectar la expresión diferencial de uno o más genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad según se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, como se comparó con los animales normales o no tratados, el método comprende: | (a) proporcionar pruebas que comprenden (i) polinucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o Tabla 2 o fragmentos de los mismos o (ii) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de las proteínas mencionadas en la Tabla 1 o Tabla 2 o fragmentos de los mismos; (b) agregar las pruebas a una muestra que comprende mRNA o proteínas de un animal que presenta el fenotipo RBF/IS, de manera que permite la hibridación o unión de las pruebas a mRNA o proteínas en la muestra, formando por el mismo la hibridación o los complejos de unión en la muestra; (c) opcionalmente, agregar las pruebas a otra muestra que comprende mRNA o proteínas de un animal normal, de manera que permita la hibridación q unión de las pruebas a MRNA o proteínas en la segunda muestra, formando por el mismo la hibridación o complejos de unión en la otra muestra; (d) detectar los complejos de hibridación en la muestra o muestras;|y (e) comparar la hibridación o complejos de unión de la primera muestra con la hibridación o complejos de unión de un estándar o opcionalmente de otra muestra, en donde por lo menos una diferencia indica entre la cantidad de hibridación o unión en la muestra como se comparó con la muestra estándar o la opcional expresión diferencial de uno o más genes expresados diferentemente en los animales que presentan el fenotipo RBF/IS, como se comparó con los animales que no presentan el fenotipo.

33. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizado además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con; las proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

34. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizado además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con, las proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos. ?

35. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizado además porque las pruebas hibridan específicamente a los genes de acuerdo con las proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2", o fragmentos de ¡os mismos; o unen específicamente a los polipéptidos que comprenden proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

36. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizado además porque las pruebas hibridan específicamente, o unen específicamente a los polinucleotidos que codifican proteínas o polipéptidos que comprenden proteínas, los cuales tienen una función seleccionada de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, ; metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa.

37. El método de la reivindicación 32 caracterizado además porque las pruebas hibridan específicamente o unen los polinucleótidos o polipéptidos caninos o felinos.

38. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizada además porque las pruebas están unidas a un sustrato.

39. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizada además porque las pruebas están en un conjunto.

40. El método de conformidad con la reivindicación 32 caracterizado además porque la detección se lleva a cabo en intervalos y se utiliza para monitorear un progreso del animal cuando intenta inducir el fenotipo RBF/IS en el animal.

41 . Un método de determinación si una sustancia de prueba puede ser útil en la promoción de un fenotipo comprendiendo una disminución en la grasa corporal y triglicéridos y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo BRF/IS) afectando uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, cuando se administra a un animal, el método comprende: : (a) determinar un primer perfil de expresión de gen mediante la medida de la transcripción o productos de traducción de dos o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la ausencia de la ¡sustancia de prueba; (b) determinar un segundo perfil de expresión de gen mediante la medida de la transcripción o productos de traducción de dos o más polinucleótidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la presencia de la sustancia de prueba; y ! (c) comparar el primer perfil de expresión de gen con el segundo perfil de expresión de gen, en donde un cambio en el segundo perfil de expresión de gen como se comparó con el primer perfil de expresión de gen indica que la sustancia de prueba puede ser útil en afectar uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, cuando se administra a un animal.

42. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque por lo menos el segundo perfil de expresión de gen con una referencia o perfil de expresión de gen estándar obtenido mediante la medida de los productos de transcripción o traducción de dos o más polinucleotidos seleccionados de los genes que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o la Tabla 2 o los fragmentos de los mismos, en un sistema de prueba en la presencia de una sustancia de referencia conocida que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, cuando se administra a un animal.

43. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque el sistema de prueba comprende una población de células cultivadas.'

44. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque el sistema de prueba comprende animales. !

45. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque los productos de transcripción o traducción codifican proteínas o ¡ comprenden proteínas mencionadas en el Grupo A de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos. ¡

46. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque los productos de transcripción o traducción codifican proteínas o comprenden proteínas mencionadas en el Grupo B de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

47. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizado además porque los productos de transcripción o traducción codifican proteínas o comprenden proteínas mencionadas en el Grupo C de la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos.

48. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizada además porque los productos de transcripción o traducción codifican proteínas o comprenden proteínas los cuales tienen una función seleccionada de: oxidación ß de lípidos, lipogénesis, transporte de lípidos, señalización de insulina, control de consumo alimenticio, metabolismo etanolamida de ácido graso o señalización, y metabolismo de glucosa.

49. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizada además i porque la muestra contiene mRNA o proteínas de un canino o felino.

50. El método de conformidad con la reivindicación 41 caracterizada además porque el perfil de expresión de gen se determina en intervalos y se utiliza para monitorear el efecto del compuesto de prueba que induce el fenotipo RBF/IS en el animal con el tiempo.

51 . Una sustancia identificada por el método de la reivindicación 41 como promover un fenotipo que comprende un disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, por el mismo induciendo un fenotipo RBF/IS cuando se administra a un animal.

52. Un método para promover un fenotipo en un animal, el cual comprende una disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad, como se midió por el consumo alimenticio disminuido (RBF/IS fenotipo) el método comprende únicamente la administración oral al animal, en un tiempo regular extendido, una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas. !

53. El método de conformidad con la reivindicación 52 caracterizada además porque la sustancia es regularmente administrada durante por lo menos cuatro semanas.

54. El método de conformidad con la reivindicación 52 caracterizada además porque la sustancia es administrada por lo menos una vez diariamente.

55. El método de conformidad con la reivindicación 55 caracterizada además porque la sustancia es un amino de ácido graso.

56. El método de conformidad con la reivindicación 56 caracterizada además porque la sustancia es un derivado N-oleoil-etanolamida resistente de; hidrólisis del mismo.

57. El método de conformidad con la reivindicación 56 caracterizada además porque la sustancia es (Z)-(R)-0-octadecena-mida, N-(2-hidroxietil, 1 -metilo).

58. El método de conformidad con la reivindicación 52 caracterizada además porque la administración regular oral extendida de la sustancia causa un ; cambio en la expresión de uno o más genes de la Tabla 1 o la Tabla 2.

59. El método de conformidad con la reivindicación 58 caracterizada además porque la administración oral regular extendida de la sustancia causa un ¡ cambio en la expresión de uno o más genes que codifican las proteínas seleccionadas de leptina, hidrólisis amina de ácido graso (FAAH), FAT/CD36 y receptor oleolyl-etanolamida GRP1 19. i

60. El método de conformidad con la reivindicación 52 caracterizada además porque la sustancia es una sustancia identificada por el método de 41.

61 . El método de conformidad con la reivindicación 52 caracterizada además porque el animal es canino o felino.

62. Un sistema de computadora que comprende una base de datos que comprende niveles de expresión de identificación de información dej uno o más polinucleótidos que se expresan diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad según se midió por el consumo alimenticio disminuido (fenotipo RBF/IS) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, en donde los polinucleótidos se seleccionan de los genes ;que codifican proteínas mencionados en la Tabla 1 o Tabla 2, o fragmentos de los mismos, y una interfase de usuario que permite al usuario accesar o manipular la información en la base de datos.

63. Un juego que comprende en envases separados en un solo, paquete o en diversos envases en un paquete virtual, dos o más pruebas para detectar la expresión del gen diferencia en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo del alimento disminuido (RFB/IS fenotipo) que resulta de la ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más /del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos, y utilización de grasa, en donde las pruebas comprenden: (a) polinucleótidos que hibridan específicamente dos o más genes que codifican proteínas mencionados en la tabla 1 o 2 o fragmentos de los mismos; o (b) agentes de unión de polipéptidos que unen específicamente dos o más polipéptidos seleccionados de proteínas mencionas en la tabla 1 o la tabla 2 o fragmentos de los mismos, y además comprende por lo menos uno de (1 ) instrucciones de como utilizar las prueba en una análisis de expresión de gen para detectar la expresión de triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad según se midió por el consumo alimenticio disminuido (RBF/IS fenotipo) que resulta de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos, y utilización de grasas, (2) reagentes y equipo para utilizar las pruebas y (3) una composición conocida que induce el fenotipo RBF/IS en la ingestión extendida regular. Preferentemente, las pruebas están fijas para un apoyo solido en ubicaciones conocidas. Las sustancias de referencia convenientes conocidas que inducen el fenotipo RBF/IS en la ingestión regular son N-oleoil etanolamidas o derivados resistentes de hidrólisis de los mismos.

64. El juego de conformidad con la reivindicación 63 caracterizado además porque las pruebas se fijan a un apoyo sólido en ubicaciones conocidas.

65. El juego de conformidad con la reivindicación 63 caracterizado además porque los agentes de unión de polipéptidos son anticuerpos.

66. El juego de conformidad con la reivindicación 63 caracterizado además porque la sustancia conocida para inducir el fenotipo RBF/IS en ingestión regular es N-oleoil-etanolamida o un derivado resistente de hidrólisis, del mismo. i

67. Medios para comunicar información acerca o instrucciones para una o más de (1 ) utilizar polinucleótidos que codifican proteínas mencionadas en la ¡Tabla 1 o la Tabla 2, o las proteínas codificadas por el mismos o fragmentos de los mismos, para detectar la expresión de genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende un disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo:de alimentos disminuido (RBF/IS fenotipo) que resultan de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas; (2) utilizar polinucleótidos que codifican proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, o las proteínas codificadas por el mismos o fragmentos de los mismos, para medir el efecto de una sustancia de prueba en la expresión de genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende i. un disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo de alimentos disminuido (RBF/IS fenotipo) que resultan de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas; (3) utilizar polinucleótidos que codifican proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, o las proteínas codificadas por el mismos o fragmentos de los mismos, para filtrar una sustancia de prueba para determinar si puede modular la expresión de genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende un disminución en la grasa corporal y triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo de alimentos disminuido (RBF/IS fenotipo) que resultan de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas; (4) utilizar polinucleótidos que codifican proteínas mencionadas en la Tabla .1 o la Tabla 2, o las proteínas codificadas por el mismos o fragmentos de los mismos, para modular expresión de uno o más genes expresados diferencialmente en los animales que presentan un fenotipo que comprende un disminución en la grasa corporal y triglicéridos dé plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo de alimentos disminuido (RBF/IS fenotipo) que resultan de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos; '(5) utilizar un sistema de computadora que comprende una base de datos que contiene información que l' identifica niveles de expresión de uno o más polinucleótidos que se expresan diferentemente en los animales que presentan un fenotipo que comprende una disminución en la grasa corporal y los triglicéridos de plasma y un incremento en la saciedad como se midió por el consumo de alimentos disminuido (RBF/IS fenotipo) que resultan de una ingestión regular extendida de una sustancia que afecta uno o más consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas, en donde los polinucleótidos se seleccionan de los gene que codifican proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, o fragmentos de los mismos; y (6) administrar las sustancias identificadas mediante su capacidad de causar la expresión diferencial de uno o más genes que codifican proteínas mencionadas en la Tabla 1 o la Tabla 2, a ser útiles en la promoción de un fenotipo que comprende una disminución de la grasa corporal y triglicéridos y un incremento en la saciedad afectando uno o más del consumo alimenticio, saciedad, metabolismo de lípidos y utilización de grasas cuando se administro a un animal; en donde el medio comprende uno o más de un documento, medios de almacenamiento digital, medios de almacenamiento óptico, presentación, de audio o despliegue visual que contiene la información o instrucciones.

68. Los medios de conformidad con la reivindicación 67 los cuales son un sitio web desplegado, kiosko, folleto, etiqueta del producto, inserción del paquete, anuncio, anuncio público, citas de audio, cintas de video, DVD, CD-ROM, chip legible por computadora, tarjeta legible por computadora, disco legible por computadora memoria de computadora, o combinación de los mismos.