MX2008011351A - Medios para mejorar la salud cardiovascular. - Google Patents

Abstract

La presente invención está en los campos del metabolismo de lípidos y la suplementación alimenticia, y proporciona métodos y composiciones para mejorar la salud del corazón de un mamífero, administrándole oralmente ácido estearidónico y compuestos relacionados a dicho mamífero; la salud mejorada del corazón está evidenciada por el enriquecimiento del tejido cardiaco con ácido eicosapentaenoico (20:5, ?3) y ácido docosapentaenoico (22:5, ?3) después de la administración; también se proporcionan métodos para promover un producto que contiene ácido estearidónico anunciando sus beneficios para la salud del corazón.

Description

MEDIOS PARA MEJORAR LA SALUD CARDIOVASCULAR REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la solicitud provisional de los Estados Unidos con número de serie No. 60/779,135 presentada el 03 de Marzo de 2006.

CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere generalmente a los campos del metabolismo de lípidos y la suplementación alimenticia. Más particularmente, se refiere a composiciones y a métodos para controlar o incrementar las concentraciones de ácido eicosapentaenoico (EPA) y ácido docosapentaenoico (DPA) en el sistema cardiovascular de los mamíferos, por medio del uso de aceites de semillas modificadas genéticamente que contienen ácido estearidónico (SDA) y/o sus análogos como ingredientes alimenticios, suplementos alimenticios o agentes farmacéuticos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los ácidos grasos omega-3 (?3) son ácidos grasos poliinsaturados en los cuales se localiza un enlace doble entre el tercero y cuarto átomos de carbono del extremo metilo de la cadena de ácido graso. Estos incluyen, pero no están limitados a, ácido a-linolénico (ALA, 18:3), ácido estearidónica (SDA, 18:4), ácido eicosapentaenoico (EPA, 20:5), ácido docosapentaenoico (DPA, 22:5) y ácido docosahexaenoico (DHA, 22:6) y similares. Están bien documentados los beneficios terapéuticos y preventivos de las dietas enriquecidas con ácidos grasos ?3 en las enfermedades cardiovasculares. Por ejemplo, hay estudios epidemiológicos que apoyan la idea de que la gente que come pescado que contiene ácidos grasos ?3 tienen un riesgo más bajo de encontrarse en los puntos extremos de las enfermedades cardiovasculares severas, que aquellos que consumen poco o nada de pescado (Dyerberg and Bang (1979) Haemostasis 8: 227-33-, Kromhout et al. (1985) N. Engl J. Med. 312: 1205-09). Muchos estudios importantes reportados recientemente han contribuido a solidificar el punto de vista de que los ácidos grasos ?3 alimenticios son cardioprotectores. Por ejemplo, los análisis en el ensayo GISSI-Prevenzione indicaron que los pacientes que sobrevivieron a un reciente infarto al miocardio tienen un riesgo significativamente inferior de muerte cardiovascular si sus dietas están suplementadas con aproximadamente 1 g/d de ácidos grasos ?3 (Investigators GISSI-Prevenzione (1999) Lancet 354: 447-55). Adicionalmente, en el estudio Nurses' Health, las mujeres que no habían tenido una enfermedad cardiovascular previa tuvieron un riesgo inferior de la enfermedad coronaria del corazón con la ingestión de ácidos grasos de pescado o co3 (Hu et al. (2002) J. Am. Med. Assoc. 287: 1815-21 ). También se reportó una relación directa entre las concentraciones en el tejido de ácidos grasos ?3 y el riesgo de tener una enfermedad cardiovascular, en un análisis basado en caso-control prospectivo, de hombres reclutados en el estudio Physicians' Health en donde se relacionaron inversamente las concentraciones en la sangre de ácidos grasos ?3 con el riesgo de una muerte repentina entre hombres que no tenían una evidencia previa de una enfermedad cardiovascular (Albert et al. (2002) N. EngI J. Med. 346: 1 113-8). Como se indicó antes, ahora está bien establecido que los ácidos grasos ?3 pueden reducir el riesgo de ataques al corazón y las muertes debidas a una enfermedad del corazón. Todavía no se elucidan por completo los medios por los cuales estos ácidos grasos Omega-3 ejercen estos efectos, pero se tiene la hipótesis de que la presencia de estos ácidos grasos Omega-3 en las membranas de las células del corazón las hace resistentes a la fibrilación ventricular, la contracción arrítmica no coordinada de las células del corazón que precede a los ataques al corazón Los beneficios para la salud cardiovascular de los ácidos grasos ?3 se atribuyen en gran parte a EPA y DHA, cuya presencia en los tejidos se relaciona directamente con su captación en la dieta. De esta manera, la American Herat Association publicó recientemente una declaración científica de que los individuos que están en riesgo de la enfermedad coronaria del corazón se verían beneficiados con el consumo de pescado o de aceites de pescado que proporcionan EPA y DHA. Sin embargo, los individuos que están en riesgo de la enfermedad coronaria del corazón y el público en general, no se han apurado a suplementar sus dietas con pescado o con aceite de pescado. Esto se debe en parte a los hábitos alimenticios, y en parte se debe a las preocupaciones acerca de los contaminantes ambientales, como los metales pesados, metilmercurio, y organocloros que se encuentran en el pescado o en el aceite de pescado (Kris-Etherton et al. (2002) Circulation 106: 2747-57). Es imperativo encontrar fuentes alternativas con las cuales se pueda suplementar la dieta humana, para proporcionar la cantidad suficiente de EPA y DHA en el sistema cardiovascular. Una de estas fuentes alternativas seria un aceite vegetal que contuviera uno de los precursores que llevan a EPA y DHA. Por ejemplo, el ácido graso ?3 ALA fue contemplado como una de éstas fuentes debido a que puede ser convertido en SDA por una ?6-desaturasa. El SDA se puede convertir entonces en EPA por medio de la acción secuencial de una elongasa y una A5-desaturasa. A pesar de su abundancia en los aceites comerciales que se consumen ampliamente que son de origen vegetal, como los aceites de cañóla y de soya, el ALA que proviene de la captación en la alimentación regular, ha demostrado no ser efectivo en la elevación de las concentraciones en el tejido de EPA y DHA esto se debe probablemente a la ineficiencia del paso catalizado con ?6-desaturasa (Kelley et al. (1993) Lipids 28: 533-7). El SDA es el producto de reacción en el ALA catalizado por la ?ß-desaturasa. De está manera, al proporcionar SDA directamente en la dieta, uno podría evitar el paso limitador de proporción y suministrar el sustrato para la síntesis de EPA y DHA. La ingestión de aceites vegetales que son ricos en SDA puede llevar a un enriquecimiento de los tejidos con ácidos grasos poliinsaturados de cadena más larga como EPA, imitando de ésta manera los efectos benéficos que se asocian normalmente con el consumo de pescado o de aceites de pescado. Se ha reportado cierto número de aceites vegetales que contienen SDA en una cantidad suficiente. Por ejemplo, existen semillas naturales de la familia Boraginaceae que tienen un contenido de SDA de aproximadamente 17% de ácidos grasos totales, aunque actualmente estas son semillas de flores silvestres y semillas oleaginosas no cultivadas (patente de E.U.A. No. 6,340,485; Velasco y Goffman (1999) Phytochemistry 52: 423-6). Adicionalmente, también se ha encontrado que hubo un aceite comestible extraído de semillas de la planta Echium plantagineum (el aceite Echium) contiene SDA en cantidades sustanciales (aproximadamente 12.5% de los ácidos grasos totales). También se han encontrado aceites vegetales que contienen SDA en aceites de semilla de granos modificados genéticamente. Por ejemplo, la cañóla (patente de E.U.A. No. 6,459,018), maíz (Publicación de PCT WO2005102310), y semilla de soya (Publicación de PCT WO2005021761 ) se han modificado genéticamente para producir aceites de semilla que contienen SDA en más del 10% en peso de los ácidos grasos totales. Se ha estado trabajando en la suplementación alimenticia de los aceites que contienen SDA o SDA, se ha demostrado que la suplementación alimenticia con SDA aumenta las concentraciones de EPA y DPA en las fracciones de fosfolípido de los eritrocitos y el plasma (James et al. (2003) Am. J. Clin. Nutr. 77:1140-5). Una suplementación alimenticia con aceite Echium también aumentó las concentraciones en el tejido de EPA y DPA en el plasma y los neutrófilos (Surette et al. (2004) J. Nutr. 134: 1406- 1 ). Sin embargo, sigue habiendo muchas preguntas sin respuesta que incluyen, pero no están limitadas a, la conversión de SDA en ácidos grasos poliinsaturados de cadena más larga como EPA, DPA, y DHA en el tejido cardiaco, el potencial de los compuestos que contienen SDA como vehículos que imparten beneficios a la salud del corazón, y medios para suministrar dichos compuestos. Estas y otras cuestiones son tratadas por lo menos parcialmente por la presente descripción.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se refiere a medios alimenticios o farmacéuticos que aumentan las concentraciones de ácidos grasos poliinsaturados promotores de la salud del corazón del sistema cardiovascular de los mamíferos. En una modalidad de la invención, se proporciona una composición en donde dicha composición comprende un compuesto que contiene una porción de EPA y DPA para enriquecer los tejidos cardiacos de los mamíferos con SDA. Este compuesto se puede proporcionar como un ácido graso libre, un éster acílico graso, un monoglicérido, un diglicérido, un triglicérido, un éster etílico, un fosfolípido, un éster esterílico, un esfingolípido, o una combinación de los mismos. En una modalidad de la invención, la composición se provee como un aceite de semilla endógena proveniente de una planta que está modificada genéticamente para producir SDA. Un aspecto adicional de la invención es un producto alimenticio que comprende de 0.01 % a 99%, de preferencia de 10 a 50%, más preferiblemente de 20% a 40% en peso de una composición de la invención. También, la invención se refiere a un método para enriquecer los tejidos cardiovasculares de los mamíferos con EPA y DPA que comprende administrar oralmente una cantidad nutricional o terapéuticamente efectiva de un compuesto que contiene una porción de SDA. El compuesto se puede proporcionar como un ácido graso libre, un éster acílico graso, un monoglicérido, un diglicérido, un triglicérido, un éster etílico, un fosfolípido, un éster esterílico, un esfingolípido, o una combinación de los mismos. La administración de éste compuesto se puede realizar en dosis en una base equivalente para los humanos, por ejemplo de aproximadamente 0.1 mg/kg/día a 2 g/kg/día, de preferencia de aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 1 g/kg/día, y más preferiblemente de aproximadamente 20 mg/kg/día a aproximadamente 500 mg/kg/día. Otro aspecto de la invención es proporcionar un método para promover un producto para mejorar la salud del corazón de un mamífero, anunciando y/o etiquetando el producto por su contenido de SDA. El producto puede ser un producto alimenticio, un suplemento alimenticio, o un producto farmacéutico.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Los siguientes dibujos forman parte de la presente especificación y están incluidos para demostrar adicionalmente ciertos aspectos de la presente invención. La invención se podrá entender mejor haciendo referencia a uno o más de estos dibujos en combinación con la descripción detallada de las modalidades especificas que se presentan en la presente. La figura 1 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC - 2 semanas. La figura 2 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC - 4 semanas. La figura 3 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC - 8 semanas. La figura 4 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC - 12 semanas. La figura 5 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC -21 .4 mg/kg/día SDA. La figura 6 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC -64.2 mg/kg/día SDA.

La figura 7 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC -192.9 mg/kg/dia SDA. La figura 8 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC -42.9 mg/kg/día EPA. La figura 9 es un contenido de ácido graso omega-3 de RBC - Aceite de girasol. La figura 10 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 4 semanas. La figura 1 1 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 8 semanas. La figura 12 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 12 semanas. La figura 13 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 21 .4 mg/kg/día SDA. La figura 14 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 64.2 mg/kg/día SDA. La figura 15 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 192.9 mg/kg/día SDA. La figura 16 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - 42.9 mg/kg/día EPA. La figura 17 es un contenido de ácido graso omega-3 del corazón - Aceite de girasol.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION El ácido estearidónico (SDA) es un ácido graso omega-3 de 18 carbonos con cuatro enlaces dobles en todas las posiciones cis 6, 9, 12, y 15. Se encuentra presente en el suministro de alimentos en cantidades de miligramos/porción, principalmente en las fuentes de pescado. Actualmente las fuentes alimenticias de otros ácidos grasos omega-3 incluyen pescado y aceite de pescado, que proporcionan ácido eicosapentaenoico (EPA) y ácido docosahexaenoico (DHA), y semillas oleaginosas y nueces que proporcionan ácido alfa-linolénico (ALA). Las típicas captaciones alimenticias de EPA y DHA están por debajo de las captaciones recomendadas ya que el pescado, especialmente el pescado graso rico en omega-3, no se consume mucho o con frecuencia. Las autoridades de la salud reconocen que EPA y DHA están asociados con los efectos en la salud del corazón; específicamente, se ha demostrado que el consumo de estos ácidos grasos omega-3 reduce el riesgo de ataques al corazón repentinos y fatales. Se ha dicho que es adecuada la captación alimenticia típica de ALA cuando cumple con las necesidades nutricionales básicas, pero no se ha demostrado que el ALA ejerza efectos en la salud del corazón que estén asociados con EPA y DHA. El ALA en su mayor parte es ß-oxidado o metabolizado en otros productos del metabolismo de ácido graso; muy poco se convierte en el cuerpo en EPA y DHA. Esto se debe a que la primera enzima en la bioconversión de ALA a EPA y DHA, ?6 desnaturasa, es limitadora de proporción. El SDA es el producto de la reacción en ALA catalizado por ?6 desnaturasa. Así, al proporcionar directamente SDA en la dieta, se evita el paso limitante de proporción y proporciona el sustrato para la síntesis de EPA y DHA. Como se indicó antes, ahora esta bien establecido que los ácidos grasos omega-3 EPA y DHA, que se encuentran en el pescado y en el aceite de pescado, pueden reducir el riesgo de ataques al corazón y de muertes debidas a una enfermedad cardiaca. Todavía no se ha establecido bien el medio por el cual estos ácidos grasos omega-3 ejercen estos efectos, pero se tiene la hipótesis de que la presencia de estos ácidos grasos omega-3 en las membranas de las células del corazón hace que éstas resistan a la fibrilación ventricular, la contracción arrítmica no coordinada de las células del corazón, que precede a los ataques al corazón. Por lo tanto un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición, en donde dicha composición comprende un compuesto que contiene una porción de SDA para enriquecer los tejidos cardiacos de los mamíferos con EPA y DHA. Este compuesto se puede proporcionar como un ácido graso libre, un éster acílico graso, un monoglicérido, un diglicérido, un triglicérido, un éster etílico, un fosfolípido, un éster esterílico, un esfingolípido, o una combinación de los mismos. La preparación de una composición que contiene un compuesto con una porción de SDA, sola o en combinación con otros suplementos, será conocida para los expertos en la técnica a la luz de la presente descripción. Normalmente dichas composiciones se pueden prepara como líquidos o cápsulas; en forma sólidas o suspensiones; las preparaciones también pueden ser emulsificadas. Las composiciones de la invención de preferencia son adecuadas para usarlas en un producto alimenticio. Las composiciones se pueden consumir por si mismas, pero normalmente se incorporan en un producto alimenticio o en un suplemento nutricional antes del consumo. Por lo tanto, otro aspecto de la invención es un producto alimenticio que comprende de 0.01 % a 99% de preferencia de 10 a 50%, más preferiblemente de 20% a 40% en peso de una composición de la invención. Los productos alimenticios que se pueden utilizar para practicar la presente invención incluyen, pero no están limitados a: bebidas (que incluyen bebidas suaves, bebidas carbonatadas, listas para mezclarse con bebidas, y similares), alimentos infundidos (por ejemplo frutas y vegetales), salsas, condimentos, aderezos para ensalada, jugos de frutas, jarabes, postres (incluyendo pudines, gelatina, halados y rellenos, alimentos orneados, postres congelados como helados y sorbetes) chocolates, dulces, productos congelados suaves (como cremas congeladas suaves, helados congelados suaves y yogurt, recubrimientos congelados suaves, como recubrimientos batidos lácteos o no lácteos), aceites y productos emulsificados (como manteca, margarina, mayonesa, mantequilla, aceite para hornear y aderezos para ensalada), carnes preparadas (como salsa), alimentos de humedad intermedia (por ejemplo arroz y alimentos para perro) y similares.

Los productos alimenticios pueden ser enriquecidos con una composición que contiene SDA mediante métodos convencionales como la obtención de la composición y la distribución uniforme a través del producto alimenticio, al cual se agrega por disolución o por suspensión, o en una emulsión. Por ejemplo, la composición se puede disolver en un agente soluvilizante comestible, o se puede mezclar con un agente soluvilizante comestible, una cantidad efectiva de un dispersante, y opcionalmente una cantidad efectiva de una antioxidante. Ejemplos de antioxidantes útiles incluyen, pero no están limitados a, tocoferoles, como a-tocoferol, ácido ascórbico, antioxidantes sintéticos baratos, y mezclas de los mismos. Los productos alimenticios también se pueden prepara a partir de plantas transgénicas modificadas para un contenido incrementado de SDA. Ejemplos de dichas plantas que tiene un contenido incrementado de SDA que se pueden utilizar con la invención, se describen en la patente de E.U.A. No. 6,459,018, cuya descripción se incorpora en la presente como referencia. Los portadores efectivos para prepara las emulsiones o suspensiones incluyen agua, alcoholes, polioles y mezclas de los mimos. Ejemplos de dispersantes útiles incluyen, pero no están limitados a, lecitina, otros fosfolípidos, lauril sulfato de sodio, ácidos grasos, sales de ácidos grasos, ésteres de ácido graso, otras moléculas de tipo detergente y mezclas de los mismos. Alternativamente los productos alimenticios se pueden hacer con un método que comprende obtener una composición que contiene SDA y mezclarla con un agente de solubilización comestible y una cantidad efectiva de un dispersante. De nuevo , el agente de solubilización comestible puede incluir, pero no está limitado a, monoglicéridos, diglicéridos, triglicéridos, aceites vegetales, tocoferoles, alcoholes, polioles, o mezclas de los mismos, y el dispersante puede incluir, pero no está limitado a, lecitina, otros fosfolípidos, laurel sulfato de sodio, ácidos grasos, sales de ácidos grasos, ésteres de ácido graso, otras moléculas de tipo detergente, y mezclas de los mismos. Una modalidad adicional de la invención se refiere a un método para enriquecer los tejidos cardiacos de mamíferos con EPA y DPA que comprende administrar oralmente una cantidad nutricional o terapéuticamente efectiva de un compuesto que contiene una porción de SDA. El compuesto se puede proporcionar como un ácido graso libre, un éster acílico graso, un monoglicérido, un diglicérido, un triglicérido, un éster etílico, un fosfolípido, un éster esterílico, un esfingolípido, o una combinación de estos. La administración de este compuesto se puede realizar en dosis en una base equivalente humana, por ejemplo, de aproximadamente 1 mg/kg/día a 2g/kg/día, de preferencia de aproximadamente 1 g/kg/día a aproximadamente 1 g/kg/día, y más preferiblemente de aproximadamente 20 mg/kg/día a aproximadamente 500 mg/kg/día. La frase "nutricionalmente efectiva" como se utiliza en la presente indica la capacidad de un agente de afectar la estructura o la función del cuerpo, o de reducir el riesgo de una enfermedad. La frase "terapéuticamente efectiva" como se utiliza en la presente indica la capacidad de un agente de prevenir, o de mejorar la severidad, del trastorno, al mismo tiempo que evita los efectos laterales adversos que se asocian normalmente con las terapias alternativas. La frase "terapéuticamente efectiva" se entenderá como equivalente de la frase "efectiva para el tratamiento o la prevención", y ambas califican, por ejemplo, la cantidad de ácido estearidónico que se utiliza en los métodos de la presente invención que logrará la meta de mejorar la severidad de un trastorno o de evitar el trastorno al mismo tiempo que evita los efectos laterales adversos que normalmente se asocian con las terapias alternativas. Para el uso farmacéutico (humano o veterinario), las composiciones generalmente de administran en forma oral, pero se pueden administrar a través de cualquier ruta por medio de la cual pueda ser absorbidas exitosamente, por ejemplo, parenteralmente (es decir, en forma subcutánea, intramuscular o intravenosa), rectar o vaginalmente, o tópicamente, por ejemplo, como un linimento o loción para la piel. Las composiciones de la presente invención se pueden administrar solas o en combinación con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Cuando estén disponibles, las cápsulas de gelatina pueden ser la forma preferida para la administración oral. El suplemento alimenticio, como se mencionó antes, también puede proporcionar una ruta de administración oral. La cantidad del compuesto que contiene una porción de SDA que es nutricional o terapéuticamente efectiva depende de múltiples factores, como el estado nutricional y fisiológico previo del consumidor, la seriedad del trastorno del corazón que será tratado, Los hábitos alimenticios de un paciente, la edad del paciente, la presencia de condiciones adicionales, etcétera. Una persona que consume cantidades relativamente pequeñas del compuesto en su dieta normal, necesitará una cantidad más grande que la de alguien que típicamente consume una cantidad mayor de SDA. Un experto en la técnica reconocerá cómo determinar la cantidad terapéuticamente efectiva para un paciente basándose en estas consideraciones. Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método de negocios para promover la venta de un producto anunciando que el producto contiene SDA y que mejora la salud del corazón de un mamífero, después de la ingestión del producto. El producto de preferencia es un producto alimenticio, un producto nutracéutico, o un producto farmacéutico. Al informar al público a cerca de los beneficios para la salud del corazón como se indica en la presente, uno se puede dar cuenta, por ejemplo del beneficio de las ventas incrementadas del producto. Con este propósito se pueden utilizar los canales de publicidad tradicionales, incluyendo, pero no limitados a la radio, TV y publicaciones impresas. También se contempla en este contexto un nuevo medio electrónico que está surgiendo, para hacer la publicidad. El siguiente ejemplo se incluye para demostrar las modalidades preferidas de la invención. Los expertos en la técnica podrán apreciar que las técnicas descritas en los ejemplos siguientes, representan técnicas descubiertas por el inventor para funcionar bien en la práctica de la invención, y por lo tanto pueden ser consideradas como constituyentes de modos preferidos para su practica. Sin embargo, los expertos en la técnica deberán apreciar a la luz de la presente descripción, que se pueden hacer muchos cambios en las modalidades especificas que se describen, y seguir obteniendo un resultado parecido o similar sin apartarse del espíritu y el alcance de la invención.

EJEMPLO Antecedes y objetivos Existen numerosos beneficios en la salud asociados con los ácidos grasos n=3 alimenticios de cadena larga, el ácido eicosapentaenoico (EPA) y el ácido docosahexaenoico (DHA). Específicamente, ambos EPA y DHA, que se encuentran comúnmente en el pescado y en los aceites de pescado, se han visto muy implicados como benéficos en la reducción del riesgo de una enfermedad cardiovascular. (Ismail (2005) Frontiers in Bioscience 2005, 10: 1079-88). Las percepciones negativas del consumidor comprenden los posibles contaminantes en el pescado, el mal sabor de los aceites de pescado y las referencias generales alimenticias de la población que se encuentran en las áreas que no tiene salida al mar, limitan la posibilidad de suplementar ácido graso n=3 alimenticio usando las Fuentes comunes (Verbeke et al. (2005) Public Heath Nutrition ((4): 422-9). El ácido estearídónico (SDA), una alternativa viable para los ácidos grasos n=3 de cadena larga, que se encuentra en el pescado, se deriva de fuente vegetales y se puede incorporar en los alimentos comunes. Anteriormente se ha demostrado que el SDA se convierte efectivamente en EPA y DPA en los eritrocitos y el plasma cuando se administra por medio de la dieta humana. Para evaluar adicionalmente la eficacia del (James et al. 2003) con respecto al enriquecimiento del tejido cardiaco con SDA, se inició un estudio alimenticio para determinar si la alimentación con EPA, DPA y DHA daría como resultado el enriquecimiento del tejido cardiaco con SDA en perros EPA, DPA y DHA durante un período de 3 meses.

Diseño de estudio El artículo de prueba, SDA se administró en la dieta una vez al día, 7 días a la semana, hasta por 90 días a tres grupos (grupos 1 -3) de perros beagle macho. El artículo de referencia, el ácido eicosapentaenoico (EPA), fue administrado al grupo 4 en el mismo régimen de dosificación. Los dos SDA y EPA fueron suministrados como ésteres etílicos. El artículo de control, aceite de girasol (SFO) altamente oleico de grado alimenticio fue administrado al grupo 5 en el mismo régimen de dosificación. También se añadió SFO al alimento de los grupos 1 a 4, de tal manera que todos los animales recibieron un volumen similar de aceite por kilogramo de peso corporal. Se añadió a todas las dietas un suplemento alimenticio, vitamina E. Los niveles de dosificación fueron de 21.4, 64.2 y 192.9 mg/kg/día SDA, 42.9 mg/kg/día EPA y se calcularon para cada animal basándose en el peso corporal para los grupos 1 , 2, 3 y 4, respectivamente. Cada grupo consistía de 15 machos.

Se programaron 5 animales/grupo por cada necropsia de ínterin (semanas 4 y 8 del estudio) y la necropsia primaria al final del período de tratamiento de 12 semanas. Además, se sacrificaron 5 animales antes de la aleatorización y la administración del artículo de prueba para establecer los niveles de línea de base de ácidos grasos (necropsia anterior a la prueba). Los animales fueron observados dos veces al día para la mortandad y el estado de agonía. Se realizaron nuevamente exámenes clínicos, y cada semana se realizaron exámenes físicos detallados. Se registraron cada semana los pesos corporales individuales. Se registró diariamente el consumo de alimentos y se reportó cada semana. Se recogieron pruebas de sangre para los análisis de ácidos grasos a partir de los 5 perros programados para la necropsia anterior a la prueba y de todos los perros sobrevivientes durante las semanas de estudio 2, 4, 8 y 12. Se sacrificaron todos animales, y además de hacer secciones del hígado y del riñon, se recogieron dos muestras del tejido del corazón, un conjunto se analizó para ver el contenido de ácido graso y la otra muestra fue retirada para un análisis microscópico en las necropsias programadas. Las secciones provenientes del corazón, el hígado y los ríñones fueron examinadas microscópicamente en los cinco animales durante el tiempo anterior a la prueba y de 5 animales/grupo (solamente los grupos 3 a 5) en la necropsia de la semana 12 del estudio.

Análisis de ácido graso Se recogieron muestras de sangre de los 5 perros seleccionados para la necropsia anterior a la prueba y de todos los perros sobrevivientes en las semanas 2, 4, 8 y 12. Las muestras fueron recogidas a partir de la vena yugular de los perros, en tubos que contenían EDTA antes del régimen de alimentación/dosificación. Se separaron las células rojas de la sangre (RBC) del plasma mediante centrifugado a 1500x durante aproximadamente 20 minutos a 4°C. El plasma se transfirió a tubos de polipropileno y se almacenó a aproximadamente -70°C para un análisis futuro. Se removió la capa leuco-plaquetaria de las RBC empacadas, y las RBC se dividieron aproximadamente igual en dos tubos. Se llevó a cabo la preparación de tejido, la extracción de lipidos y el análisis, de acuerdo con un protocolo convencional. El resumen, primero fueron liofilizados los tejidos del corazón durante una noche, y después se pulverizaron moliéndolos entre dos correderas de vidrio molido. El tejido molido fue suspendido en una solución salina y se sometió durante 10 a 15 segundos a sonicación. Se extrajeron los lipidos con metanol y cloruro de metileno, y se evaporó el solvente bajo nitrógeno. Las RBC descongeladas fueron extraídas con isopropanol y hexano. Después del centrifugado del estroma, el solvente fue transferido y evaporado bajo nitrógeno. Los fosfolípidos extraídos del corazón y las muestras de RBC fueron metilados con BF3, a 100°C durante 10 minutos. Estas condicionan los FA de glicerofosfolípido transmetilado, pero no los FA de esfingolípido. Después del calentamiento, se extrajeron todas las muestras con hexano y agua. Se removió la capa de hexano, se secó bajo nitrógeno, y se reconstituyeron los ésteres metílicos de FA en hexano para el análisis por cromatografía de gases de ionización de flama. Los FA fueron identificados por comparación con estándares conocidos, y las composiciones de FA fueron reportadas como porcentaje en peso del total de FA.

Examen macroscópico Se sacrificaron animales por inyección intravenosa de pentobarbital de sodio seguido por desangramientos. Se recogieron dos muestras de aproximadamente 200 mg de tejido del corazón del ventrículo izquierdo, se enjuagaron en una solución salina helada, se envolvieron en una hoja de aluminio, se sometieron a congelación instantánea en nitrógeno líquido, y se almacenaron a aproximadamente -70°C. Las muestras fueron analizadas para las anormalidades patológicas.

Examen microscópico Se colocaron secciones del corazón, hígado y ríñones en formalina neutral-de pH regulado al 10%. Los tejidos fueron cortados y colocados en bloques de parafina, se seccionaron de 4 a 8 micronios, se montaron en portaobjetos para microscopio de vidrio y se mancharon con hematoxilina y eosina. Las muestras fueron analizadas para las anormalidades patológicas.

Análisis estadístico. Los datos de peso corporal, cambio de peso corporal y consumo de alimentos se sometieron a una prueba ANOVA de una vía para determinar las diferencias entre los grupos. Si el ANOVA revelaba una significativa variación entre los grupos (p<0.05), se utilizó la prueba de Dunnett (Dunnett, 1964) para comparar los grupos tratados con el artículo de prueba con el grupo de control.

Resultados Todos los animales sobrevivieron a las necropsias programadas.

No hubo descubrimientos o efectos clínicos relacionados con el artículo de prueba en el peso corporal o en el consumo de alimentos. No hubo descubrimientos microscópicos atribuidos a la administración del artículo de prueba. El contenido de ácido graso en los glóbulos rojos de la sangre omega-3 de perros tratados con (RBC) SDA demostró aumentar de una manera dependiente de la dosis en las semanas 2, 4, 8 y 12 del estudio. El contenido de ácido graso RBC omega-3 de los perros tratados con EPA (artículo de referencia) fue de aproximadamente 3 a 10 veces más alto que los perros tratados con SFO (control negativo) entre la semana 2 y 12 del estudio (figuras 1 y 4). El tratamiento con 21.4 mg/kg/día SDA demostró un aumento general en el contenido total de ácido graso omega-3 (RBC) sobre los niveles de pretratamiento desde la semana 2 del estudio, teniendo su punto máximo en aproximadamente 4 semanas y disminuyendo después (figura 5). El tratamiento con 192.9 mg/kg/día SDA (Grupo 3) demostró un aumento general en el contenido total de ácido graso omega-3 (RBC) por encima de los niveles de pretratamiento desde la semana 2 del estudio y siguió elevado (aproximadamente 2 veces sobre el pretratamiento) durante 12 semanas (figura 7). Aunque es ligeramente inferior, el aumento general en el contenido de ácido graso omega-3 (RBC) en el grupo 192.9 mg/kg/día SDA con el tiempo fue comparable con el aumento que se ve en el grupo 42.9 mg/kg/día EPA (figura 7 y 8). El tratamiento con aceite de girasol (control negativo) no demostró un aumento en el contenido de ácido graso RBC omega-3 con el tiempo, sino más bien una disminución de casi el 50% entre las semanas 2 y 12 del estudio (figura 9). En forma similar a las RBC, el contenido de ácido graso omega-3 en el tejido del corazón de perros probados con SDA- aumentó de una manera dependiente de la dosis en las semanas 4, 8 y 12 del estudio (figuras 10 a 12). El contenido de ácido graso omega-3 en los tejidos del corazón de perros tratados con EPA (artículo de referencia) fue aproximadamente de 3 a 5 veces más alto que en los animales tratados con aceite de girasol (control negativo) entre las semanas 4 y 12 del estudio (figura 10 a 12). El tratamiento con 21.4 mg/kg/día SDA demostró un aumento insignificante en el contenido de ácido graso omega-3 en el corazón sobre los niveles de pretratamiento en la semana 4 del estudio y llegó a su máximo punto (aproximadamente 1 .5 veces sobre los niveles de pretratamiento) en la semana 8 del estudio. Se obtuvieron resultados similares para el grupo de 64 mg/kg (figura 13). El tratamiento con 192.9 mg/kg/dia demostró un aumento más dramático en el contenido de ácido graso omega-3 en el corazón, aproximadamente 3 veces más alto que los niveles de pretratamiento en la semana 12 del estudio (figura 15). El tratamiento con aceite de girasol (control negativo) no demostró ningún cambio significativo en el contenido de ácido graso omega-3 en el corazón entre las semanas 4 y 12 del estudio (figura 17).

Conclusiones El ácido estearidónico (SDA) administrado a través de la dieta diaria durante 12 semanas consecutivas a perros beagle macho se convirtió efectivamente en EPA y DPA y se encontró que se incorporó a las membranas celulares cardiacas y los glóbulos rojos. Además, la administración de SDA hasta 192.9 mg/kg/día durante 12 semanas no mostró ningún efecto clínico adverso y no causó ningún cambio microscópico significativo en los tejidos del corazón, el hígado y los ríñones. Este es el primer estudio para demostrar de manera concluyente que la administración oral de SDA a un mamífero puede enriquecer el tejido cardíaco con EPA y DPA, mejorando de esta manera la salud del corazón del mamífero. Todas las composiciones y/o métodos que se describen y se reclaman en la presente se pueden hacer y ejecutar sin ninguna experimentación indebida a la luz de la presente descripción. Aunque las composiciones y los métodos de esta invención han sido descritos en términos de las modalidades preferidas, será evidente para los expertos en la técnica que se pueden aplicar muchas variaciones a las composiciones y/o métodos, y en los pasos o en la secuencia de pasos del método que se describe en la presente, sin apartarse del concepto, el espíritu y el alcance de la invención. Más específicamente, será evidente que ciertos agentes que están tanto química como fisiológicamente relacionados pueden ser sustituidos por los agentes que se describen en la presente, mientras se sigan logrando los mismos resultados o similares. Todos estos sustitutos y modificaciones similares son evidentes para los expertos en la técnica y estarán dentro del espíritu, el alcance y el concepto de la invención que está definida por las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones y solicitudes de patente que se citan en esta especificación se incorporan en la presente como referencia, como si cada publicación o solicitud de patente individual estuviera incorporada específica e individualmente como referencia.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- El uso de un aceite de semilla endógena de un grano genéticamente modificado, en donde dicho aceite de semilla tiene el suficiente ácido estearidónico para enriquecer el tejido cardiaco o los glóbulos rojos de la sangre con ácido eicosapentaenoico (20:5, ?3) y ácido docosapentaenoico (22:5, co3), para la fabricación de un agente farmacéutico o un producto alimenticio útil para alimentar a un mamífero, en donde dicho agente o producto alimenticio está adaptado para ser administrable oralmente. 2 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho mamífero es un humano. 3 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho mamífero es una mascota. 4.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho aceite de semilla está adaptado para ser administrable en una cantidad de aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 5000 mg/kg/día en una base equivalente humana. 5.- El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde dicho aceite de semilla está adaptado para ser administrable en una cantidad de aproximadamente 20 mg/kg/día a aproximadamente 2000 mg/kg/día. 6. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho aceite de semilla se selecciona del grupo que consiste en aceite de soya, aceite de maíz, y aceite de cañóla. 7. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho producto alimenticio se selecciona del grupo que consiste en productos de panadería, productos a base de aceite, productos lácteos, fórmulas infantiles y bebidas no lácteas. 8. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho producto alimenticio se selecciona de pan, bizcochos o galletas, barras de cereal, leche, productos de leche reconstítuible, salsas, aderezos para ensaladas, helado y jugo de frutas. 9. - El uso de un aceite de semilla endógena de un grao genéticamente modificado, en donde dicho aceite de semilla endógena contiene ácido estearidónico de por lo menos 5% de los ácidos grasos totales, para la fabricación de un agente farmacéutico útil para tratar la enfermedad coronaria del corazón o dislipidemia de un mamífero. 10. - El uso como se reclama en la reivindicación 9, en donde dicha enfermedad coronaria del corazón comprende arritmia, trombosis, hipertensión, arteriosclerosis/aterosclerosis, e infarto al postmiocardio. 1 1.- Un método para promover un producto como mejorador de la salud del corazón de un mamífero, que comprende el paso de anunciar o etiquetar dicho producto como un producto que contiene ácido estearidónico. 12. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque la promoción de un producto comprende intentar aumentar la venta del producto. 13. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque dicho producto se selecciona del grupo que consiste en un producto alimenticio, un producto de suplemento alimenticio, y un producto farmacéutico. 14. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque dicho anuncio se logra por medios que comprenden etiquetas del producto, publicación impresa, radio, televisión y otros medios electrónicos.