MX2008009426A

MX2008009426A - Composiciones detergentes

Info

Publication number: MX2008009426A
Application number: MXMX/A/2008/009426A
Authority: MX
Inventors: Neil Joseph Lant; John Allen Burdis; Philip Frank Souter
Original assignee: The Procter & Gamble Company
Priority date: 2006-01-23
Filing date: 2008-07-22
Publication date: 2008-09-26

Abstract

Esta invención se refiere a composiciones que comprenden ciertas variantes de lipasa y un agente tonalizador de telas y a procesos para elaborar y usar esas composiciones. Incluye el uso de esas composiciones para limpiar o tratar un sitio.

Description

COMPOSICIONES DETERGENTES CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones que comprenden lipasas y agentes tonalizadores de telas y a procesos para fabricar y usar tales productos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La aparición de enzimas lipasas adecuadas para aplicaciones detergentes proporcionó al formulador un nuevo enfoque para mejorar la remoción de grasa. Esas enzimas catalizan la hidrólisis de los triglicéridos que constituyen un componente principal de muchas suciedades de grasa habituales, tales como sebo, grasas de origen animal (p. ej., manteca de cerdo, ghee, manteca) y aceites vegetales (p. ej., aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de cacahuate). Sin embargo, estas enzimas, por lo general, mostraron un rendimiento débil en el primer ciclo de lavado y despedían un mal olor que aparentemente provenía de la hidrólisis de grasas presentes en grasas lácteas como leches, crema, manteca y yogur. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que esas suciedades tienden a generar mal olor inducido por las lipasas ya que contienen triglicéridos que tienen grupos funcionales de unidades acilo graso de cadena corta (p. ej., C ) que liberan ácidos grasos volátiles de mal olor después de la lipólisis. Aunque el rendimiento de esas enzimas mejoró, no se pudo eliminar el problema del mal olor. Por consiguiente, se limitó el uso de esta tecnología. Hemos encontrado que la combinación entre un agente tonalizador de telas y ciertas variantes de lipasas produce un mayor beneficio del desempeño de limpieza y al mismo tiempo minimiza el mal olor. Sin desear limitarse por la teoría, se cree que los siguientes mecanismos probablemente produzcan tales beneficios: variantes de lipasas seleccionadas aumentan el nivel de remoción de grasa mejorando así la penetrabilidad del agente tonalizador de telas en la superficie de la tela y, por lo tanto, mejorando el depósito. La combinación entre la mejor remoción de suciedades aceitosas y el depósito de colorantes matizadores mejora el aspecto de la tela; aun cuando la suciedad aceitosa no se remueva adecuadamente, la hidrólisis de grasas en ácidos grasos y mono y diglicéridos más hidrófilos mejora el depósito del colorante matizador y, por lo tanto, la percepción de limpieza; y la presencia de moléculas de colorantes depositadas en las suciedades aceitosas presentes en las telas puede inhibir la actividad enzimática que da lugar al mal olor.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones que comprenden un agente tonalizador de telas y una variante de lipasa con poco potencial de generación de olor y un rendimiento relativo adecuado, sin la unión de una extensión C-terminal. La variante de lipasa se obtiene al incorporar mutaciones en una o más regiones identificadas en la lipasa de origen. La variante obtenida de ese modo debe tener una actividad de lipasa no menor que 80 % de la actividad de la lipasa de origen expresada como rendimiento relativo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra el alineamiento de lipasas.

LISTADO DE SECUENCIAS La SEC. con núm. de Id. 1 muestra la lipasa que codifica la secuencia de ADN de Thermomyces lanoginosus. La SEC. con núm. de Id. 2 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Thermomyces lanoginosus. La SEC. con núm. de Id. 3 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Absidia reflexa. La SEC. con núm. de Id. 4 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Absidia corymbifera. La SEC. con núm. de Id. 5 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Rhizomucor miehei. La SEC. con núm. de Id. 6 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Rhizopus oryzae.

La SEC. con núm. de Id. 7 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus niger. La SEC. con núm. de Id. 8 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus tubingensis. La SEC. con núm. de Id. 9 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Fusarium oxysporrum. La SEC. con núm. de Id. 10 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Fusarium heterosporum. La SEC. con núm. de Id. 11 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus oryzae. La SEC. con núm. de Id. 12 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Penicillium camemberti. La SEC. con núm. de Id. 13 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus foetidus. La SEC. con núm. de Id. 14 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus niger. La SEC. con núm. de Id. 15 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Aspergillus oryzae. La SEC. con núm. de Id. 16 muestra la secuencia de aminoácidos de una lipasa de Landerina penisapora.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Como se utiliza en la presente, el término "composición de limpieza" incluye, a menos que se indique de cualquier otra forma, agentes de lavado granulados o en forma de polvo para multiusos o "de gran rendimiento", especialmente detergentes para lavandería; agentes de limpieza líquidos, en gel, o en forma de pasta para multiusos, especialmente los llamados líquidos de gran rendimiento; detergentes líquidos para telas finas; agentes para el lavado manual de vajilla, o agentes de bajo rendimiento para el lavado de vajilla, especialmente aquellos de gran volumen de espuma; agentes para el lavado en lavavajillas, incluyendo los diversos tipos de tabletas, granulos, ayudantes y líquidos de enjuague, para el uso doméstico e institucional; agentes líquidos desinfectantes y de limpieza, incluyendo los del tipo antibacteriano para el lavado de las manos, barras de lavandería, enjuagues bucales, limpiadores de dentaduras postizas, champús para alfombras o carros, limpiadores para baños; champús y enjuagues para el cabello; geles para la ducha y espumas de baño y limpiadores de metal; así como auxiliares de limpieza como aditivos de blanqueador y "limpiamanchas en barra" o de los tipos de pretratamiento. Como se utiliza en la presente, el término 'agente tonalizador de telas' se refiere a colorantes o pigmentos que, cuando se formulan en composiciones detergentes, pueden depositarse sobre una tela al poner esa tela en contacto con un licor de lavado que comprende esas composiciones detergentes alterando así el tono de esa tela. Para los propósitos de la presente solicitud, los abrillantadores ópticos fluorescentes no se consideran como agentes tonalizadores de telas. Como se utiliza en la presente, la frase "se selecciona independientemente del grupo que comprende..." significa que las entidades o los elementos del referido grupo Markush que se seleccionen pueden ser los mismos, pueden ser diferentes, o cualquier mezcla de elementos. Se deben utilizar los métodos de prueba expuestos en la Sección de Métodos de Prueba de la presente solicitud para determinar los valores respectivos de los parámetros de las invenciones de los solicitantes. A menos que se especifique de otro modo, todos los niveles del componente o composición se expresan en referencia al nivel activo de ese componente o composición, y son exclusivos de impurezas, por ejemplo, solventes residuales o subproductos, los cuales pueden estar presentes en las fuentes comercialmente disponibles. Todos los porcentajes y proporciones están calculados en peso, a menos que se indique de otra manera. Todos los porcentajes y proporciones están calculados en base a la composición total, a menos que se indique de otra manera. Se debe entender que todo límite numérico máximo dado en esta especificación incluye todo límite numérico inferior, como si los límites numéricos inferiores se hubieran anotado en forma explícita en la presente.

Todo límite numérico mínimo dado en esta especificación incluirá todo límite numérico mayor, como si los límites numéricos mayores se hubieran anotado explícitamente en la presente. Todo intervalo numérico dado en esta especificación incluirá todo intervalo numérico menor que caiga dentro del intervalo numérico mayor, como si todos los intervalos numéricos menores se hubieran anotado explícitamente en la presente. Todos los documentos citados en la presente se consideran incorporados en su parte relevante como referencia. La mención de cualquier documento no deberá interpretarse como una admisión de que éste corresponde a una industria anterior con respecto a la presente invención. Composiciones Las composiciones de la presente invención pueden comprender de aproximadamente 0.00003 % a aproximadamente 0.1 %, de aproximadamente 0.00008 % a aproximadamente 0.05 % o incluso de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.04 % de agente tonalizador de telas, y de aproximadamente 0.0005 % a aproximadamente 0.1 %, de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 % o incluso de aproximadamente 0.002 % a aproximadamente 0.03 % de lipasa. Esas composiciones pueden presentarse en cualquier forma, por ejemplo, como una composición de limpieza o una composición de tratamiento. La csp de cualquiera de los aspectos de las composiciones limpiadoras antes mencionadas está conformada por uno o más materiales auxiliares.

Variantes de lipasa adecuadas La lipasa de la composición de la presente invención es una variante de la lipasa sin extensión C-terminal, pero con mutaciones introducidas en ciertas regiones de una lipasa de origen por medio de las cuales se reduce la tendencia a generar olor. Lipasa de origen La lipasa de origen puede ser una lipasa fúngica con una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 50 % de homología, como se define en la sección "Homología y alineamiento", con la secuencia de la lipasa T. lanuginosus mostrada en la SEC. con núm. de Id. 2. La lipasa de origen puede ser un polipéptido de levadura, tal como un polipéptido de Candida, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizosaccharomyces o Yarrowia; o con mayor preferencia, un polipéptido de un hongo filamentoso tal como un polipéptido de Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Cryptococcus, Filobasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Myceliophthora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Piromyces, Schizophyllum, Talaromyces, Thermoascus, Thielavia, Tolypocladium o Trichoderma. En un aspecto preferido, la lipasa de origen es un polipéptido con actividad de lipasa proveniente de Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces norbensis o Saccharomyces oviformis.

En otro aspecto preferido, la lipasa de origen es un polipéptido de Aspergillus aculeatus, Aspergillus awamori, Aspergillus fumigatus, Aspergillus foetidus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus turbigensis, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookweilense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Humicola insolens, Thermomyces lanoginosus (sinónimo: Humicola lanuginose), Mucor miehei, Myceliophthora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpurogenum, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei o Trichoderma viride. En otro aspecto preferido, la lipasa de origen es una lipasa de Thermomyces. En un aspecto más preferido, la lipasa de origen es una lipasa de Thermomyces lanuginosus. En una modalidad aún más preferida, la lipasa de origen es la lipasa de SEC. con núm. de Id. 2. Identificación de regiones y sustituciones. Las posiciones mencionadas en las siguientes regiones, Región I a Región IV, son las posiciones de los residuos de aminoácidos en la SEC. con núm. de Id. 2. Para encontrar las posiciones correspondientes (u homologas) en una lipasa diferente se usa el procedimiento descrito en "Homología y alineamiento". Sustituciones en la Región I La Región I consiste en residuos de aminoácidos que rodean el residuo E1 N-terminal. En esta región se prefiere sustituir un aminoácido de la lipasa de origen con un aminoácido más positivo. Los residuos de aminoácidos que corresponden a las posiciones siguientes están comprendidos por la Región I: 1 a 11 y 223-239. Las siguientes posiciones son de especial interés: 1 , 2, 4, 8, 11 , 223, 227, 229, 231 , 233, 234 y 236. En particular, se han identificado las siguientes sustituciones: X1 N/*, X4V, X227G, X231 R y X233R. En una modalidad preferida, la lipasa de origen tiene al menos 80 %, tal como 85 % ó 90 %, tal como al menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ó 99 % de identidad con la SEC. con núm. de Id. 2. En una modalidad más preferida, la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2. Sustituciones en la Región II La Región II consiste en residuos de aminoácidos en contacto con el sustrato en un lado de la cadena de acilo y un lado de la parte de alcohol. En esta región se prefiere sustituir un aminoácido de la lipasa de origen con un aminoácido más positivo o con un aminoácido menos hidrófobo. Los residuos de aminoácidos que corresponden a las posiciones siguientes están comprendidos por la Región II: 202 a 211 y 249 a 269. Las posiciones siguientes son de especial interés: 202, 210, 211 , 253, 254, 255, 256, 259. En particular, se han identificado las siguientes sustituciones: X202G, X210K??//A, X255Y?//A, X256K/R y X259G/M/Q/V. En una modalidad preferida, la lipasa de origen tiene al menos 80 %, tal como 85 % ó 90 %, tal como al menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ó 99 % de identidad a la SEC. con núm. de Id. 2. En una modalidad más preferida, la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2. Sustituciones en la Región III La Región III consiste en residuos de aminoácidos que forman una estructura flexible y, por consiguiente, permiten que el sustrato entre en el sitio activo. En esta región se prefiere sustituir un aminoácido de la lipasa de origen con un aminoácido más positivo o un aminoácido menos hidrófobo. Los residuos de aminoácidos que corresponden a las posiciones siguientes están comprendidos por la Región III: 82 a 102. Las posiciones siguientes son de especial interés: 83, 86, 87, 90, 91 , 95, 96, 99. En particular, se han identificado las siguientes sustituciones: X83T, X86V y X90A/R. En una modalidad preferida, la lipasa de origen tiene al menos 80 %, tal como 85 % ó 90 %, tal como al menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ó 99 % de identidad con la SEC. con núm. de Id. 2. En una modalidad más preferida, la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2. Sustituciones en la Región IV La Región IV consiste en residuos de aminoácidos que se unen electrostáticamente a una superficie. En esta región se prefiere sustituir un aminoácido de la lipasa de origen con un aminoácido más positivo. Los residuos de aminoácidos que corresponden a las posiciones siguientes están comprendidos por la Región IV: 27 y 54 a 62. Las posiciones siguientes son de especial interés: 27, 56, 57, 58, 60. En particular se han identificado las siguientes sustituciones: X27R, X58N/AG/T/P y X60V/S/G/N/R/K/A/L. En una modalidad preferida, la lipasa de origen tiene al menos 80 %, tal como 85 % ó 90 %, tal como al menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ó 99 % de identidad con la SEC. con núm. de Id. 2. En una modalidad más preferida, la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2. Aminoácidos en otras posiciones La lipasa de origen puede comprender opcionalmente sustituciones de otros aminoácidos, en particular, menos de 10 o menos de 5 sustituciones. Algunos ejemplos son sustituciones que corresponden a una o más de las posiciones 24, 37, 38, 46, 74, 81 , 83, 115, 127, 131 , 137, 143, 147, 150, 199, 200, 203, 206, 211 , 263, 264, 265, 267 y 269 de la lipasa de origen. En una modalidad particular, existe una sustitución en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 81 , 143, 147, 150 y 249. En una modalidad preferida, al menos una sustitución se selecciona del grupo que comprende X81Q/E, X143S/C/N/D/A, X147M/Y, X150G/K y X249R/I/L. La variante puede comprender sustituciones fuera de las Regiones I a IV definidas; la cantidad de sustituciones fuera de las Regiones I a IV definidas es, preferentemente, menor que seis, menor que cinco, menor que cuatro, menor que tres o menor que dos, tal como cinco, cuatro, tres, dos o uno. Alternativamente, la variante no comprende una sustitución fuera de las Regiones I a IV definidas. Otras sustituciones pueden hacerse, por ejemplo, de conformidad con los principios conocidos en la industria, por ejemplo, sustituciones descritas en las patentes WO 92/05249, WO 94/25577, WO 95/22615, WO 97/04079 y WO 97/07202. Variantes de la lipasa de origen En un aspecto, esa variante, cuando se compara con esa lipasa de origen, comprende en total al menos tres sustituciones; esas sustituciones se seleccionan de uno o más de los siguientes grupos de sustituciones: a) Al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco o al menos seis, tales como dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituciones en la Región I, b) al menos una, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco o al menos seis, tales como una, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituciones en la Región II, c) al menos una, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco o al menos seis, tales como una, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituciones en la Región III, d) o al menos una, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco o al menos seis, tales como una, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituciones en la Región IV.

La variante, comparada con la lipasa de origen de la variante, puede comprender sustituciones que corresponden a las sustituciones enunciadas más adelante en el Cuadro 1.

Cuadro 1 : Algunas variantes específicas.

En una modalidad más específica, la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2 y, por consiguiente, las variantes del Cuadro 1 serán las siguientes: Cuadro 2: Algunas variantes específicas de la SEC. con núm. de Id. 2 Nomenclatura para las modificaciones de los aminoácidos Al describir las variantes de la lipasa de conformidad con la invención, se usa la siguiente nomenclatura para facilitar la referencia: Aminoácido(s) original(es):posición(es):aminoácido(s) sustituido(s) De conformidad con esta nomenclatura, por ejemplo, la sustitución de ácido glutámico por glicina en la posición 195 se muestra como G195E. La supresión de glicina en la misma posición se muestra como G195* y la inserción de un residuo adicional de aminoácido, tal como lisina, se muestra como G195GK. En comparación con otras lipasas, cuando una lipasa específica contiene una "supresión" y en esa posición se hace una inserción, esto se indica como *36D para el caso de inserción de ácido aspártico en la posición 36. Las mutaciones múltiples están separadas por signos de adición (+), es decir: R170Y+G195E; esto representa mutaciones en las posiciones 170 y 195 en donde la tirosina y el ácido glutámico se sustituyen por arginina y glicina, respectivamente.

X231 indica el aminoácido en un polipéptido de origen que corresponde a la posición 231 , cuando se aplica el procedimiento de alineamiento descrito. X231 R indica que el aminoácido se reemplaza por R. Para la SEC. con núm. de Id. 2 X es T y, por consiguiente, X231 R indica una sustitución de T por R en la posición 231. Cuando el aminoácido en una posición (p. ej., 231) puede sustituirse con otro aminoácido seleccionado de un grupo de aminoácidos, por ejemplo, el grupo formado por R, P e Y, esto se indicará como X231R/P/Y. En todos los casos se usa la abreviatura del aminoácido compuesta de una o tres letras aceptada por IUPAC. Agrupamiento de aminoácidos En esta especificación los aminoácidos están clasificados como de carga negativa, de carga positiva o eléctricamente neutros de conformidad con su carga eléctrica en pH 10. Por consiguiente, los aminoácidos negativos son E, D, C (cisteína) e Y, particularmente E y D. Los aminoácidos positivos son R, K y H, particularmente R y K. Los aminoácidos neutros son G, A, V, L, I, P, F, W, S, T, M, N, Q y C cuando forman parte de un puente disulfuro. Una sustitución con otro aminoácido en el mismo grupo (negativo, positivo o neutro) se denomina sustitución conservadora. Los aminoácidos neutros pueden dividirse en hidrófobos o no polares (G, A, V, L, I, P, F, W y C como parte de un puente disulfuro) e hidrófilos o polares (S, T, M, N, Q).

En esta especificación los aminoácidos están clasificados como de carga negativa, de carga positiva o eléctricamente neutros de conformidad con su carga eléctrica en pH 10. Por consiguiente, los aminoácidos negativos son E, D, C (cisteína) e Y, particularmente E y D. Los aminoácidos positivos son R, K y H, particularmente R y K. Los aminoácidos neutros son G, A, V, L, I, P, F, W, S, T, M, N, Q y C cuando forman parte de un puente disulfuro. Una sustitución con otro aminoácido en el mismo grupo (negativo, positivo o neutro) se denomina sustitución conservadora. Los aminoácidos neutros pueden dividirse en hidrófobos o no polares (G, A, V, L, I, P, F, W y C como parte de un puente disulfuro) e hidrófilos o polares (S, T, M, N, Q). Identidad de los aminoácidos La relación entre dos secuencias de aminoácidos o entre dos secuencias de nucleótidos se describe por medio del parámetro "identidad". Para los propósitos de la presente invención, el alineamiento de dos secuencias de aminoácidos se determina utilizando el programa Needle del paquete EMBOSS (http://emboss.org) versión 2.8.0. El programa Needle implementa el algoritmo de alineamiento global descrito en Needleman, S. B. y Wunsch, C. D. (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453. La matriz de sustitución usada es BLOSUM62, con una penalidad del GAP para la creación de brechas de 10 y una penalidad del GAP por extensión de brechas de 0.5. El grado de identidad entre una secuencia de aminoácidos de la presente invención ("secuencia de la invención"; p. ej., aminoácidos 1 a 269 de SEC. con núm. de Id. 2) y una secuencia de aminoácidos diferente ("secuencia extraña") se calcula como el número de concordancias exactas en un alineamiento de las dos secuencias dividido entre la longitud de la "secuencia de la invención" o la longitud de la "secuencia extraña", la que sea más corta. El resultado se expresa en porcentaje de identidad. Una concordancia exacta se produce cuando la "secuencia de la invención" y la "secuencia extraña" tienen residuos idénticos de aminoácidos en las mismas posiciones de la superposición). La longitud de una secuencia es el número de residuos de aminoácidos en la secuencia (p. ej., la longitud de la SEC. con núm. de Id. 2 es 269). La lipasa de origen tiene una identidad de aminoácidos de al menos 50 % con la lipasa T. lanuginosus (SEC. con núm. de Id. 2), particularmente al menos 55 %, al menos 60 %, al menos 75 %, al menos 85 %, al menos 90 %, más de 95 % o más de 98 %. En una modalidad específica, la lipasa de origen es idéntica a la lipasa T. lanuginosus (SEC. con núm. de Id. 2). El procedimiento anterior puede usarse para calcular la identidad y también la homología y el alineamiento. En el contexto de la presente invención, la homología y el alineamiento se han calculado como se describe más adelante. Homología y alineamiento Para los propósitos de la presente invención, el grado de homología puede determinarse adecuadamente por medio de programas informáticos conocidos en la industria, tal como el programa GAP incluido en el paquete GCG (Program Manual for the Wisconsin Package (Manual del programa para el paquete Wisconsin), Versión 8, agosto de 1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711) (Needleman, S.B. and Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology (Revista de biología molecular), 48, 443-45), configurando el GAP de la siguiente manera para la comparación de secuencias de polipéptidos: penalidad del GAP para la creación de brechas: 3.0 y penalidad del GAP por extensión de brechas: 0.1. En la presente invención, las posiciones correspondientes (u homologas) en las secuencias de las lipasas de Absidia reflexa, Absidia corymbefera, Rhizmucor miehei, Rhizopus delemar, Aspergillus niger, Aspergillus tubigensis, Fusarium oxysporum, Fusarium heterosporum, Aspergillus oryzea, Penicilium camembertii, Aspergillus foetidus, Aspergillus niger, Thermomyces lanoginosus (sinónimo: Humicola lanuginose) y Landerína penisapora están definidas por el alineamiento ilustrado en la Figura 1. Para encontrar las posiciones homologas en secuencias de lipasas no ilustradas en el alineamiento, la secuencia de interés está alineada a las secuencias ilustradas en la Figura 1. La nueva secuencia se alinea al alineamiento presente en la Figura 1 usando el alineamiento del GAP a la secuencia más homologa encontrada por el programa GAP. El programa GAP está incluido en el paquete GCG (Program Manual for the Wisconsin Package (Manual del programa para el paquete Wisconsin), Versión 8, agosto de 1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711) (Needleman, S.B. and Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology (Revista de biología molecular), 48, 443-45). Para comparar las secuencias de los polipéptidos se usan las siguientes configuraciones: penalidad del GAP para la creación de brechas: 3.0 y penalidad del GAP por extensión de brechas: 0.1. La lipasa de origen tiene una homología de al menos 50 % con la lipasa T. lanuginosus (SEC. con núm. de Id. 2), particularmente al menos 55 %, al menos 60 %, al menos 75 %, al menos 85 %, al menos 90 %, más de 95 % o más de 98 %. En una modalidad específica, la lipasa de origen es idéntica a la lipasa T lanuginosus (SEC. con núm. de Id. 2). Hibridación La presente invención se refiere también a polipéptidos aislados que tienen actividad de lipasa y que están codificados por polinucleótidos que se hibridan bajo condiciones de muy baja astringencia, preferentemente, condiciones de baja astringencia, con mayor preferencia, condiciones de astringencia media, con mayor preferencia, condiciones de astringencia media-alta, todavía con mayor preferencia, condiciones de alta astringencia y, con la máxima preferencia, condiciones de muy alta astringencia con (i) nucleótidos 178 a 660 de SEC. con núm. de Id. 1 , (ii) la secuencia del ADNc contenida en nucleótidos 178 a 660 de SEC. con núm. de Id. 1 , (iii) una subsecuencia de (i) o (ii), o (iv) una cadena complementaria de (i), (ii) o (iii) (J. Sambrook, E.F. Fritsch, y T. Maniatus, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (Clonación molecular, Manual de laboratorio), 2° edición, Cold Spring Harbor, New York). Una subsecuencia de SEC. con núm. de Id. 1 contiene al menos 100 nucleótidos contiguos o, preferentemente, al menos 200 nucleótidos contiguos. Además, la subsecuencia puede codificar un fragmento polipeptídico que tiene actividad de lipasa. Para sondas extensas de al menos 100 nucleótidos de largo, las condiciones de astringencia muy baja a muy alta se definen como prehibridación e hibridación a 42 °C en SSPE 5X, SDS 0.3 %, ADN desnaturalizado de esperma de salmón 200 µg/ml y formamida 25 % para condiciones de astringencia muy baja y baja, formamida 35 % para condiciones de astringencia media y media-alta, o formamida 50 % para condiciones de astringencia alta y muy alta, siguiendo procedimientos estándar de técnica de Southern Blot, de manera óptima por 12 a 24 horas. Para sondas extensas de al menos 100 nucleótidos de largo, el material portador se lava finalmente tres veces, cada vez durante 15 minutos, usando 2X SSC, SDS 0.2 %, preferentemente, al menos a 45 °C (astringencia muy baja), con mayor preferencia, al menos a 50 °C (baja astringencia), con mayor preferencia, al menos a 55 °C (astringencia media), con mayor preferencia, al menos a 60 °C (astringencia media-alta), todavía con mayor preferencia, al menos a 65 °C (astringencia alta) y, con la máxima preferencia, al menos a 70 °C (astringencia muy alta). Secuencia de ADN. vector de expresión, célula huésped, producción de lipasa La invención proporciona una secuencia de ADN que codifica la lipasa de la invención, un vector de expresión que contiene la secuencia de ADN y una célula huésped transformada que contiene la secuencia de ADN o el vector de expresión. Éstos pueden obtenerse por métodos conocidos en la industria. La invención proporciona también un método para producir la lipasa por medio del cultivo de la célula huésped transformada bajo condiciones propicias para la producción de la lipasa y para recuperar la lipasa del caldo obtenido. El método puede practicarse de acuerdo con los principios conocidos en la industria. Actividad de lipasa - Actividad de lipasa en tributirina a pH neutro (LU) Se prepara un sustrato para la lipasa por medio de la emulsificación de la tributirina (tributirato de glicerina) usando goma arábiga como emulsionante. La hidrólisis de la tributirina a 30 °C, a pH 7 ó 9 continúa en un experimento de titulación a pH estático. Una unidad de actividad de lipasa (1 LU) es igual a la cantidad de enzima capaz de liberar 1 micro mol de ácido butírico/min a pH 7. - Beneficio-Riesgo El factor Beneficio-Riesgo que describe el rendimiento comparado con el riesgo menor de olor se define como: BR = RPavg / R- Las variantes de lipasas descritas en la presente pueden tener un BR mayor que 1 , mayor que 1.1 o incluso mayor que 1 a aproximadamente 1000. - Rendimiento relativo promedio El procedimiento para calcular el rendimiento relativo promedio (RPavg) se encuentra en el Ejemplo 5 de la presente especificación. Las variantes de las lipasas descritas en la presente pueden tener un (RPavg) de al menos 0.8, al menos 1.1 , al menos 1.5 o incluso de al menos 2 a aproximadamente 1000. Agentes tonalizadores de telas adecuados Los abrillantadores ópticos fluorescentes emiten al menos un poco de luz visible. Por el contrario, los agentes tonalizadores de telas pueden alterar el tono de una superficie a medida que absorben al menos una porción del espectro de luz visible. Los agentes tonalizadores de telas adecuados incluyen colorantes, conjugados de colorante y arcilla y pigmentos que cumplen los requerimientos del Método de prueba 1 de la sección de métodos de prueba de la presente especificación. Los colorantes adecuados incluyen colorantes de moléculas pequeñas y colorantes poliméricos. Los colorantes de moléculas pequeñas incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende: (1) Colorantes trisazo azul directo de la fórmula en donde al menos dos de los anillos de naftilo A, B y C están sustituidos con un grupo sulfonato; el anillo C puede estar sustituido en la posición 5 con un grupo NH2 o NHPh, X es un anillo de bencilo o naftilo sustituido con hasta 2 grupos sulfonato y puede estar sustituido en la posición 2 con un grupo OH y también puede sustituirse con un grupo NH2 o NHPh. (2) Colorantes bisazo violeta directo de la fórmula: en donde Z es H o fenilo; el anillo A está, preferentemente, sustituido con un grupo metilo y metoxi en las posiciones indicadas por las flechas, el anillo A también puede ser un anillo de naftilo, el grupo Y es un anillo de bencilo o naftilo, que está sustituido con un grupo sulfato y puede estar mono o disustituido con grupos metilo. (3) Colorantes ácidos azul o rojo de la fórmula en donde al menos X o Y debe ser un grupo aromático. En un aspecto, los dos grupos aromáticos pueden ser un grupo bencilo o naftilo sustituido, que puede estar sustituido con grupos no solubles en agua, tales como grupos alquilo, alquiloxi o ariloxi, X e Y pueden no estar sustituidos con grupos solubles en agua tales como sulfonatos o carboxilatos. En otro aspecto, X es un grupo bencilo nitro sustituido e Y es un grupo bencilo (4) Colorantes ácidos rojos de la estructura en donde B es un grupo naftilo o bencilo que puede estar sustituido con grupos no solubles en agua, tales como grupos alquilo, alquiloxi o ariloxi, B puede no estar sustituido con grupos solubles en agua tales como sulfonatos o carboxilatos. (5) Colorantes disazo de la estructura en donde X e Y son, independientemente uno del otro, hidrógeno, alquilo de C-1-C4 o alcoxi de C-1-C4, Ra es hidrógeno o arilo, Z es alquilo de C-?-C ; alcoxi de C-1-C4; halógeno; hidroxilo o carboxilo, n es 1 ó 2 y m es 0, 1 ó 2, además de las sales y mezclas correspondientes de éstos (6) Colorantes de trifenilmetano de las siguientes estructuras y mezclas de éstos. En otro aspecto, los colorantes de moléculas pequeñas adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende colorantes con las siguientes clasificaciones del índice de Colores (Cl, por sus siglas en inglés) (Society of Dyers and Colourists, Bradford, Reino Unido): Violeta Directo 9, Violeta Directo 35, Violeta Directo 48, Violeta Directo 51 , Violeta Directo 66, Azul Directo 1 , Azul Directo 71 , Azul Directo 80, Azul Directo 279, Rojo Ácido 17, Rojo Ácido 88, Rojo Ácido 150, Violeta Ácido 15, Violeta Ácido 17, Violeta Ácido 24, Violeta Ácido 49, Azul Ácido 15, Azul Ácido 17, Azul Ácido 29, Azul Ácido 40, Azul Ácido 75, Azul Ácido 80, Azul Ácido 83, Azul Ácido 90 y Azul Ácido 113, Violeta Básico 1 , Violeta Básico 3, Violeta Básico 4, Violeta Básico 10, Violeta Básico 35, Azul Básico 3, Azul Básico 16, Azul Básico 22, Azul Básico 47, Azul Básico 66, Azul Básico 75, Azul Básico 159 y mezclas de éstos. Los colorantes poliméricos adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende polímeros que contienen cromógenos conjugados (conjugados de colorante y polímero) y polímeros con cromógenos copolimerizados en la cadena principal del polímero y mezclas de éstos. En otro aspecto, los colorantes poliméricos adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende colorantes sustantivos para las telas comercializados con el nombre Liquitint® (Milliken, Spartanburg, South Carolina, EE.UU.), conjugados de colorante y polímero formados a partir de al menos un colorante reactivo y un polímero seleccionado del grupo que comprende polímeros que comprenden una entidad seleccionada del grupo que comprende una entidad hidroxilo, una entidad amina primaria, una entidad amina secundaria, una entidad tiol y mezclas de éstas. En aún otro aspecto, los colorantes poliméricos adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende Liquitint® (Milliken, Spartanburg, South Carolina, EE.UU.) Violeta CT, carboximetilcelulosa (CMC) conjugada con un colorante azul reactivo, violeta reactivo o rojo reactivo tal como CMC conjugada con Cl Azul Reactivo 19, comercializado por Megazyme, Wicklow, Irlanda con el nombre de producto AZO-CM-CELLULOSE, código de producto S-ACMC y mezclas de éstos. Los conjugados de colorante y arcilla adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende al menos un colorante catiónico/básico y una arcilla de esmectita, y mezclas de éstos. En otro aspecto, los conjugados de colorante y arcilla adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende un colorante catiónico/básico seleccionado del grupo que comprende Cl Amarillo Básico 1 a 108, Cl Naranja Básico 1 a 69, Cl Rojo Básico 1 a 118, Cl Violeta Básico 1 a 51 , Cl Azul Básico 1 a 164, Cl Verde Básico 1 a 14, Cl Marrón Básico 1 a 23, Cl Negro Básico 1 a 11 y una arcilla seleccionada del grupo que comprende arcilla montmorilonita, arcilla hectorita, arcilla saponita y mezclas de éstas. En aún otro aspecto, los conjugados de colorante y arcilla adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende conjugado de montmorilonita y Azul Básico B7 Cl 42595, conjugado de montmorilonita y Azul Básico B9 Cl 52015, conjugado de montmorilonita y Violeta Básico V3 Cl 42555, conjugado de montmorilonita y Verde Básico G1 Cl 42040, conjugado de montmorilonita y Rojo Básico R1 Cl 45160, conjugado de montmorilonita y Cl Negro Básico 2, conjugado de hectorita y Azul Básico B7 Cl 42595, conjugado de hectorita y Azul Básico B9 Cl 52015, conjugado de hectorita y Violeta Básico V3 Cl 42555, conjugado de hectorita y Verde Básico G1 Cl 42040, conjugado de hectorita y Rojo Básico R1 Cl 45160, conjugado de hectorita y Cl Negro Básico 2, conjugado de saponita y Azul Básico B7 Cl 42595, conjugado de saponita y Azul Básico B9 Cl 52015, conjugado de saponita y Violeta Básico V3 Cl 42555, conjugado de saponita y Verde Básico G1 Cl 42040, conjugado de saponita y Rojo Básico R1 Cl 45160, conjugado de saponita y Cl Negro Básico 2 y mezclas de éstos. Los pigmentos adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende flavantrona, indantrona, indantrona clorada que contiene de 1 a 4 átomos de cloro, pirantrona, dicloropirantrona, monobromodicloropirantrona, dibromodicloropirantrona, tetrabromopirantrona, diimida de ácido perileno-3,4,9,10-tetracarboxílico, en donde los grupos imida pueden no estar sustituidos o sustituirse con alquilo de C1-C3 o con un radical fenilo o heterocíclico, y en donde los radicales fenilo y heterocíclico adicionalmente pueden contener sustituyentes que no confieren solubilidad en agua, amidas de ácido antrapirimidinacarboxílico, violantrona, isoviolantrona, pigmentos de dioxazina, ftalocianina de cobre que puede contener hasta 2 átomos de cloro por molécula, policloro ftalocianina de cobre o polibromocloro ftalocianina de cobre que contiene hasta 14 átomos de bromo por molécula y mezclas de éstos.

En otro aspecto, los pigmentos adecuados incluyen aquellos seleccionados del grupo que comprende Azul Ultramar (Cl Pigmento Azul 29), Violeta Ultramar (Cl Pigmento Violeta 15) y mezclas de éstos. Los agentes tonalizadores de telas mencionados anteriormente pueden utilizarse combinados (se puede usar cualquier mezcla de agentes tonalizadores de telas). Los agentes tonalizadores de telas adecuados pueden adquirirse de Aldrich, Milwaukee, Wisconsin, EE.UU.; Ciba Specialty Chemicals, Basel, Suiza; BASF, Ludwigshafen, Alemania; Dayglo Color Corporation, Mumbai, India; Organic Dyestuffs Corp., East Providence, Rhode Island, EE.UU.; Dystar, Frankfurt, Alemania; Lanxess, Leverkusen, Alemania; Megazyme, Wicklow, Irlanda; Clariant, Muttenz, Suiza; Avecia, Manchester, Reino Unido, o se pueden elaborar de conformidad con los ejemplos incluidos en la presente. Materiales auxiliares Aunque no es esencial para los propósitos de la presente, la lista no limitante de componentes adicionales incluidos más adelante es adecuada para utilizarse en las composiciones instantáneas de la presente y se pueden incorporar convenientemente en ciertas modalidades preferidas de la invención, por ejemplo, para facilitar o mejorar el rendimiento de limpieza, para tratar el sustrato que se limpiará o para modificar la estética de la composición limpiadora, como en el caso de los perfumes, colorantes, tintes o lo similar. La naturaleza precisa de estos componentes adicionales y los niveles de su incorporación dependerán de la forma física de la composición y del tipo de operación de limpieza en la que se utilizarán. Los materiales adicionales adecuados incluyen, pero no se limitan a, surfactantes, aditivos, agentes quelantes, agentes inhibidores de transferencia de colorantes, dispersantes, enzimas adicionales y estabilizadores de enzimas, materiales catalíticos, activadores de blanqueador, peróxido de hidrógeno, fuentes de peróxido de hidrógeno, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoción/antiredepósito de suciedad de arcilla, abrillantadores, supresores de espuma, colorantes, perfumes, agentes elastizantes de estructuras, suavizantes de telas, portadores, hidrótropos, auxiliares de procesamiento, solventes y/o pigmentos. Además de la exposición siguiente, los ejemplos adecuados de estos auxiliares adicionales y concentraciones de uso se incluyen en las patentes de los EE.UU. núms. ,576,282; 6,306,812 B1 ; y 6,326,348 B1 , incorporadas aquí como referencia. Como se mencionó anteriormente, los ingredientes adicionales no son esenciales para las composiciones de los solicitantes. De este modo, ciertas modalidades de las composiciones de los solicitantes no contienen uno o más de los siguientes materiales adicionales: surfactantes, aditivos, agentes quelantes, agentes inhibidores de transferencia de colorantes, dispersantes, enzimas adicionales y estabilizadores de enzimas, materiales catalíticos, activadores de blanqueador, peróxido de hidrógeno, fuentes de peróxido de hidrógeno, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoción/antiredepósito de suciedad de arcilla, abrillantadores, supresores de espuma, colorantes, perfumes, agentes elastizantes de estructuras, suavizantes de telas, portadores, hidrótropos, auxiliares de procesos, solventes y pigmentos. Sin embargo, cuando la composición contiene uno o más componentes adicionales, ese o esos componentes deben estar presentes como se especifica a continuación: Agentes blanqueadores. Las composiciones limpiadoras de la presente invención pueden comprender uno o más agentes blanqueadores.

- Los agentes blanqueadores adecuados distintos a los catalizadores de blanqueado incluyen fotoblanqueadores, activadores de blanqueador, peróxido de hidrógeno, fuentes de peróxido de hidrógeno, perácidos preformados y mezclas de éstos. Por lo general, cuando se usa un agente blanqueador, las composiciones de la presente invención pueden comprender de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 50 % o incluso de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 25 % del agente blanqueador en peso de la composición limpiadora. Los ejemplos de agentes blanqueadores adecuados incluyen: (1) fotoblanqueadores, por ejemplo, ftalocianina de zinc sulfonada; (2) perácidos preformados: Los perácidos preformados adecuados incluyen, pero no se limitan a, compuestos seleccionados del grupo que comprende sales y ácidos percarboxílicos, sales y ácidos percarbónicos, sales y ácidos perimídicos, sales y ácidos peroximonosulfúricos, por ejemplo, Oxzone ®, y mezclas de éstos. Los ácidos percarboxílicos adecuados incluyen perácidos hidrófobos e hidrófilos que tienen la fórmula R-(C=O)O-O-M, en donde R es un grupo alquilo, opcionalmente ramificado, que tiene, cuando el perácido es hidrófobo, de 6 a 14 átomos de carbono, o de 8 a 12 átomos de carbono y, cuando el perácido es hidrófilo, tiene menos de 6 átomos de carbono o incluso menos de 4 átomos de carbono; y M es un contraión, por ejemplo, sodio, potasio o hidrógeno; (3) fuentes de peróxido de hidrógeno, por ejemplo, sales inorgánicas de perhidrato que incluyen las sales de metales alcalinos como sales sódicas de perborato (generalmente mono o tetrahidrato), percarbonato, persulfato, perfosfato, sales de persilicato y mezclas de éstos. En un aspecto de la invención, las sales inorgánicas de perhidrato se seleccionan del grupo que comprende sales sódicas de perborato, percarbonato y mezclas de éstas. Cuando se utilizan, las sales inorgánicas de perhidrato están presentes, por lo general, en cantidades de 0.05 a 40 % en peso, o de 1 a 30 % en peso de la composición total y, por lo general, se incorporan en las composiciones como un sólido cristalino que puede recubrirse. Los recubrimientos adecuados incluyen sales inorgánicas, tales como sales de silicato, carbonato o borato de metal alcalino o mezclas de éstas, o materiales orgánicos, tales como polímeros solubles o dispersables en agua, ceras, aceites o jabones grasos; y (4) los activadores de blanqueador que tienen R-(C=O)-L, en donde R es un grupo alquilo, opcionalmente ramificado, que tiene, cuando el activador de blanqueador es hidrófobo, de 6 a 14 átomos de carbono, o de 8 a 12 átomos de carbono y, cuando el activador de blanqueador es hidrófilo, menos de 6 átomos de carbono o incluso menos de 4 átomos de carbono; y L es el grupo saliente. Los ejemplos de grupos salientes adecuados son ácido benzoico y derivados de éste, en especial el bencenosulfonato. Los activadores de blanqueador adecuados incluyen dodecanoil oxibenceno sulfonato, decanoil oxibenceno sulfonato, ácido decanoil oxibenzoico o sales de éste, 3,5,5-trimetilhexanoiloxibencenosulfonato, tetraacetiletilendiamina (TAED) y nonanoiloxibencensulfonato (NOBS). Los activadores de blanqueador adecuados también se exponen en la patente WO 98/17767. Si bien se puede emplear cualquier activador de blanqueador adecuado, en un aspecto de la presente invención la composición limpiadora puede comprender NOBS, TAED o mezclas de éstos. Cuando están presentes, el perácido o activador de blanqueador se encuentra, generalmente, presente en la composición en cantidades de aproximadamente 0.1 % en peso a aproximadamente 60 % en peso, de aproximadamente 0.5 % en peso a aproximadamente 40 % en peso o todavía de aproximadamente 0.6 % en peso a aproximadamente 10 % en peso en función de la composición. Uno o más de éstos perácidos hidrófobos o precursores pueden utilizarse en combinación con uno o más de éstos perácidos hidrófilos o precursores. Las cantidades de fuentes de peróxido de hidrógeno y perácido o activador de blanqueador se pueden seleccionar de manera tal que la proporción molar del oxígeno disponible (de la fuente de peróxido) y el perácido sea de 1 :1 a 35:1 , o aun de 2:1 a 10:1. Surfactantes: las composiciones limpiadoras de conformidad con la presente invención pueden comprender un surfactante o sistema de surfactantes, en donde el surfactante puede seleccionarse de surfactantes no iónicos, surfactantes aniónicos, surfactantes catiónicos, surfactantes anfolíticos, surfactantes zwitteriónicos, surfactantes no iónicos semipolares y mezclas de éstos. Por lo general, cuando se utiliza un surfactante, su concentración varía de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 60 %, de aproximadamente 1 % a aproximadamente 50 % o todavía de aproximadamente 5 % a aproximadamente 40 % en peso de la composición. Aditivos: las composiciones limpiadoras de la presente invención pueden comprender uno o más aditivos o sistemas aditivos detergentes. Por lo general, cuando se utiliza un aditivo, la composición comprenderá, al menos, aproximadamente 1 %, de aproximadamente 5 % a aproximadamente 60 % o, aun, de aproximadamente 10 % a aproximadamente 40 % del aditivo, en peso de la composición. Los aditivos incluyen, pero no se limitan a, sales de metales alcalinos, amonio y alcanolamonio de polifosfatos, silicatos de metales alcalinos, carbonatos de metales alcalinotérreos y alcalinos, aditivos de aluminosilicato y compuestos de policarboxilato, hidroxipolicarboxilatos de éter, copolímeros de anhídrido maleico con etileno o vinil metil éter, ácido 1 , 3, 5-trihidroxibenceno-2, 4, 6-trisulfónico, y ácido carboximetiloxisuccínico, las diversas sales de metales alcalinos, amonio y amonio sustituido de ácidos poliacéticos, tales como ácido etilendiaminotetraacético y ácido nitrilotriacético, y también los policarboxilatos, tales como ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidisuccínico, ácido polimaléico, ácido benceno 1 ,3,5-tricarboxílico, ácido carboximetiloxisuccínico, y sales solubles de éstos. Agentes quelantes: las composiciones limpiadoras de la presente pueden contener un agente quelante. Los agentes quelantes adecuados incluyen agentes quelantes de cobre, hierro o manganeso y mezclas de éstos. Cuando se utiliza un agente quelante, la composición puede comprender de aproximadamente 0.005 % a aproximadamente 15 % o todavía de aproximadamente 3.0 % a aproximadamente 10 % del agente quelante en peso de la composición. Agentes inhibidores de transferencia de colorantes: las composiciones limpiadoras de la presente invención también pueden incluir uno o más agentes inhibidores de transferencia de colorantes. Los agentes poliméricos inhibidores de transferencia de colorantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de poliamina N-óxido, copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas y polivinilimidazoles o mezclas de éstos. Cuando se utiliza un agente inhibidor de transferencia de colorante, su concentración puede variar de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 10 %, de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 5 % o, aun, de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 3 % en peso de la composición. Abrillantadores: las composiciones limpiadoras de la presente invención pueden también comprender componentes adicionales que pueden teñir los artículos que se limpian, por ejemplo, abrillantadores fluorescentes. Las concentraciones inferiores adecuadas de los abrillantadores fluorescentes pueden ser de aproximadamente 0.01 , de aproximadamente 0.05, de aproximadamente 0.1 o todavía de aproximadamente 0.2 % en peso a 0.5 o todavía 0.75 % en peso. Dispersantes: las composiciones de la presente invención también pueden contener dispersantes. Los materiales orgánicos solubles en agua adecuados incluyen los ácidos homo o copoliméricos o sus sales, en las cuales el ácido policarboxílico comprende al menos dos radicales carboxilo separados entre sí por no más de dos átomos de carbono. Enzimas adicionales: las composiciones de limpieza pueden comprender una o más enzimas que proporcionan un rendimiento de limpieza o beneficios de cuidado de telas. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, hemicelulasas, peroxidasas, proteasas, celulasas, xilanasas, lipasas, fosfolipasas, esterasas, cutinasas, pectinasas, mananasas, pectato Nasas, queratinasas, reductasas, oxidasas, fenoloxidasas, lipoxigenasas, ligninasas, pululanasas, tanasas, pentosanasas, malanasas, ß-glucanasas, arabinosidasas, hialuronidasa, condroitinasa, laccasa y amilasas, o mezclas de éstas. Una combinación típica es una mezcla de enzimas que comprende, por ejemplo, una proteasa y lipasa junto con amilasa. Cuando están presentes en una composición de limpieza, la concentración de las enzimas adicionales antes mencionadas puede variar de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 2 %, de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 1 %, o incluso de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.5 % de enzima proteica en peso de la composición. Estabilizadores de enzimas: las enzimas para detergentes pueden estabilizarse por diversas técnicas. Las enzimas empleadas aquí pueden estabilizarse por la presencia de fuentes de iones de magnesio o calcio solubles en agua en las composiciones terminadas que proporcionen los iones a las enzimas. Cuando las composiciones acuosas comprenden proteasa, puede añadirse un inhibidor reversible de la proteasa, tal como un compuesto de boro, para mejorar aún más la estabilidad. Complejos catalíticos de metales: las composiciones de los solicitantes pueden incluir complejos catalíticos de metales. - Un tipo de catalizador de blanqueador a base de metal es un sistema catalizador que comprende un catión de metal de transición de actividad catalizadora blanqueadora definida, tales como cationes de cobre, hierro, titanio, rutenio, tungsteno, molibdeno o manganeso, un catión auxiliar de metal de poca actividad o sin actividad catalizadora blanqueadora, tal como cationes de zinc o aluminio, y un secuestrante con constantes definidas de estabilidad para los cationes de metal catalíticos y auxiliares, en especial ácido etilendiaminotetraacético, ácido etilendiaminotetra(metilen)fosfónico y sales solubles en agua de éstos. Estos catalizadores se describen en la patente de los EE.UU. núm. 4,430,243. Si se desea, las composiciones en la presente pueden catalizarse por medio de un compuesto de manganeso. Los compuestos y las concentraciones de uso son muy conocidas en la industria e incluyen, por ejemplo, los catalizadores a base de manganeso descritos en la patente de los EE.UU. núm. 5,576,282. Los catalizadores blanqueadores de cobalto útiles en la presente son conocidos y se describen, por ejemplo, en las patentes de los EE.UU. núms. 5,597,936; 5,595,967. Los catalizadores de cobalto ya se preparan mediante procedimientos conocidos, como se muestra, por ejemplo, en las patentes de los EE.UU. núms. 5,597,936 y 5,595,967. Las composiciones de la presente también pueden incluir adecuadamente un complejo de metal de transición de ligandos, tales como bispidonas (WO 05/042532 A1 ) o ligandos rígidos macropolicíclicos, abreviados como MRL (por sus siglas en inglés). Por una cuestión práctica y no por vía de limitación, las composiciones y los procesos de la presente pueden ajustarse para proporcionar como mínimo una parte por cien millones de las especies activas de MRL en el medio de lavado acuoso y, por lo general, preferentemente, proporcionarán de aproximadamente 0.005 ppm a aproximadamente 25 ppm, de aproximadamente 0.05 ppm a aproximadamente 10 ppm, o aun, de aproximadamente 0.1 ppm a aproximadamente 5 ppm del MRL en el líquido de lavado. Los metales de transición adecuados en el catalizador de blanqueador de metal de transición incluyen, por ejemplo, manganeso, hierro y cromo. Los MRL adecuados incluyen 5,12-dietil-1 ,5,8,12-tetraazobiciclo[6.6.2]hexadecano. Los MRL de metales de transición adecuados se preparan fácilmente mediante procedimientos conocidos, como se describen, por ejemplo, en la patente WO 00/32601 , y la patente de los EE.UU. núm. 6,225,464. Solventes: los solventes adecuados incluyen agua y otros solventes como fluidos lipofílicos. Los ejemplos de fluidos lipofílicos adecuados incluyen siloxanos, otras siliconas, hidrocarburos, glicoléteres, derivados de glicerina, tales como éteres de glicerina, aminas perfluoradas, solventes perfluorados y de hidrofluoroéter, solventes orgánicos no fluorados poco volátiles, solventes a base de dioles, otros solventes compatibles con el medio ambiente y mezclas de éstos. Procesos para preparar composiciones Las composiciones de la presente invención pueden formularse en cualquier forma adecuada y prepararse por cualquier proceso elegido por el formulador; los ejemplos no limitantes de éstos se describen en los ejemplos de los solicitantes y en la patente de los EE.UU. núm. 4,990,280; la patente de los EE.UU. núm. 20030087791 A1 ; la patente de los EE.UU. núm. 20030087790A1 ; la patente de los EE.UU. núm. 20050003983A1 ; la patente de los EE.UU. núm. 20040048764A1 ; la patente de los EE.UU. núm. 4,762,636; la patente de los EE.UU. núm. 6,291 ,412; la patente de los EE.UU. núm. 20050227891 A1 ; la patente europea núm. 1070115A2; la patente de los EE.UU. núm. 5,879,584; la patente de los EE.UU. núm. 5,691 ,297; la patente de los EE.UU. núm. 5,574,005; la patente de los EE.UU. núm. 5,569,645; la patente de los EE.UU. núm. 5,565,422; la patente de los EE.UU. núm. 5,516,448; la patente de los EE.UU. núm. 5,489,392 y la patente de los EE.UU. núm. 5,486,303, las cuales están incorporadas en la presente como referencia. Método de uso La presente invención incluye un método para limpiar o tratar un sitio entre otros una superficie o tela. Estos métodos incluyen las etapas de poner en contacto una modalidad de la composición limpiadora de los solicitantes, en forma pura o diluida en un líquido de lavado, con al menos una porción de una superficie o tela para luego, opcionalmente, enjuagar la superficie o tela. La superficie o tela se pueden lavar antes de la etapa de enjuague. Para los propósitos de la presente invención, el lavado incluye, pero no se limita a, restregado y agitación mecánica. Como apreciará un experimentado en la industria, las composiciones limpiadoras de la presente invención son ideales para el lavado. En consecuencia, la presente invención incluye un método para el lavado de telas. El método comprende el contacto entre la tela que se lavará y la solución limpiadora que contiene al menos una modalidad de la composición limpiadora o aditivo de limpieza de los solicitantes o una mezcla de éstos. Se puede utilizar cualquier tela que el consumidor habitualmente lavé en condiciones normales. La solución tiene, preferentemente, un pH que varía de aproximadamente 8 a aproximadamente 10.5. La concentración de la composición en la solución varía de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 15,000 ppm. La temperatura del agua, por lo general, varía de aproximadamente 5 °C a aproximadamente 90 °C. La proporción del agua a la tela es, por lo general, de aproximadamente 1 :1 a aproximadamente 30:1. Método de prueba 1 A continuación se proporciona un protocolo para determinar si para los propósitos de la invención un material colorante o pigmento es un agente tonalizador de telas: 1.) Se llenan dos recipientes de un tergómetro con 800 mi de agua potable dureza total de Newcastle upon Tyne, Reino Unido (-0.21 g/L (12 granos por galón americano), suministrada por Northumbrian Water, Pity Me, Durham, Co. Durham, Reino Unido). 2) Los recipientes se insertan en el tergómetro, la temperatura del agua se controla a 30 °C y la agitación se configura en 4.2 rad/s (40 rpm) para la duración del experimento 3) En cada recipiente se añaden 4.8 g de detergente IEC-B (Detergente base de referencia para lavadoras automáticas, tipo B, IEC 60456), suministrado por wfk, Brüggen-Bracht, Alemania. 4) Después de dos minutos, se añaden 2.0 mg de colorante activo en el primer recipiente. 5) Después de un minuto, en cada recipiente se añaden 50 g de algodón plano (suministrado por Warwick Equest, Consett, County Durham, Reino Unido), cortado en muestras de 5 cm x 5 cm. 6) Después de 10 minutos, los recipientes se vacían y se llenan nuevamente con agua potable fría de Newcastle upon Tyne (16 °C) 7) Después de enjuagar por 2 minutos, se retiran las telas 8) Se repiten los pasos 3-7 por otros tres ciclos usando los mismos tratamientos 9) Las telas se retiran y se secan bajo techo por 12 horas ) Las muestras se analizan con un espectrómetro Hunter Miniscan equipado con una fuente luminosa D65 y un filtro de corte de luz UV para obtener los valores Hunter a (eje rojo-verde) y Hunter b (eje amarillo-azul). 11) Los valores Hunter a y Hunter b se promedian para cada conjunto de telas. Si las telas tratadas con colorante que se están evaluando tienen una diferencia promedio en el tono mayor que 0.2 unidades en el eje a o b; se considera, para los propósitos de la invención, que el colorante es un agente tonalizador de telas.

Ejemplos Ejemplos de variantes de lipasas Los químicos usados como amortiguadores y sustratos son productos comerciales de un grado al menos reactivo. - Medios y soluciones: LAS (Surfac PS™) y zeolita A (Wessalith P™). Otros ingredientes usados son reactivos estándar de laboratorio. - Materiales: EMPA221 de EMPA St. Gallen, Lerchfeldstrasse 5, CH-9014 St. Gallen, Suiza Ejemplo 1 : Producción de enzima Se forma un plásmido que contiene el gen que codifica la lipasa y se transforma en una célula huésped adecuada usando métodos estándar en la industria. La fermentación se realiza como una fermentación de alimentación por lote con un medio de temperatura constante de 34 °C y un volumen inicial de 1.2 litros. El pH inicial del medio se establece en 6.5. Una vez que el pH aumenta hasta 7.0, ese valor se mantiene a través de la adición de 10 % de H3PO4. El nivel de oxígeno disuelto en el medio se controla por medio de la variación de la velocidad de agitación y usando una velocidad fija de aireación de 1.0 litro de aire por litro de medio por minuto. La velocidad de adición de la alimentación se mantiene a un nivel constante durante toda la fase de alimentación por lote. El medio del lote contenía jarabe de maltosa como fuente de carbono, urea y extracto de levadura como fuente de nitrógeno y una mezcla de metales traza y sales. La alimentación añadida continuamente durante la fase de alimentación por lote contiene jarabe de maltosa como fuente de carbono mientras que el extracto de levadura y la urea se añaden para asegurar un suministro suficiente de nitrógeno. La lipasa puede purificarse usando métodos estándar conocidos en la industria, por ejemplo, filtración del sobrenadante de fermentación y la posterior cromatografía hidrófoba e intercambio aniónico, por ejemplo, como se describe en la patente europea núm. 0 851 913, Ejemplo 3.

Eiemplo 2: AMSA - Ensayo automático de esfuerzo mecánico - para calcular el rendimiento relativo (RP, por sus siglas en inglés). Las pruebas de las variantes de enzimas de la presente solicitud se hacen con el Ensayo automático de esfuerzo mecánico (AMSA, por sus siglas en inglés). Con el AMSA se puede analizar el desempeño de lavado de una gran cantidad de soluciones detergentes que tienen enzimas de volumen reducido. La placa del AMSA tiene una cantidad de ranuras para soluciones de prueba y una tapa que aprieta firmemente la muestra de tela que se va a lavar contra todas las aberturas de la ranura. Durante el lavado, se agita vigorosamente la placa, las soluciones de prueba, la tela y la tapa para poner la solución de prueba en contacto con la tela y para aplicar esfuerzo mecánico. La patente WO 02/42740, en particular el párrafo "Modalidades de métodos especiales" en las páginas 23-24 incluye una descripción más detallada. Los recipientes, que contienen la solución detergente de prueba, consisten en orificios cilindricos (6 mm de diámetro, 10 mm de profundidad) en una placa metálica. La tela manchada (material de prueba) se coloca en la parte superior de la placa metálica y se usa en los recipientes como tapa y sello. Para evitar derrames, se coloca otra placa metálica en la parte superior de la tela manchada de cada recipiente. Se aplica vibración arriba y abajo de las dos placas metálicas junto con la tela manchada a una frecuencia de 30 Hz con una amplitud de 2 mm. El ensayo se realiza bajo las condiciones experimentales especificadas a continuación: Cuadro 3 Se preparan muestras de crema-cúrcuma mezclando 5 g de cúrcuma (Santa Maria, Dinamarca) con 100 g de crema (38 % de grasa, Arla, Dinamarca) a 50 °C; la mezcla se deja a esta temperatura por aproximadamente 20 minutos y se filtra (50 °C) para eliminar cualquier partícula no disuelta. La mezcla se enfría hasta 20 °C; las muestras de algodón tejido, EMPA221 , se sumergen en la mezcla de crema-cúrcuma, se dejan secar a temperatura ambiente durante la noche y se congelan hasta el momento de usarlas. La preparación de muestras de crema y cúrcuma se describe en la solicitud de patente PA 2005 00775 presentada el 27 de mayo de 2005. El rendimiento de la variante enzimática se mide como el brillo del color de las muestras de tela lavadas con esa variante enzimática específica. El brillo se puede expresar también como la intensidad de la luz reflejada por la muestra de tela cuando se ilumina con luz blanca. Cuando la tela está manchada, la intensidad de la luz reflejada es menor que la de una tela limpia. Por ello, la intensidad de la luz reflejada puede usarse para medir el rendimiento de lavado de una variante enzimática. Las mediciones del color se realizan con un escáner de cama plana (PFU DL2400pro) que se usa para capturar una imagen de las muestras de telas lavadas. Las exploraciones se realizan con una resolución de 200 dpi y con una profundidad de salida de color de 24 bits. Para obtener resultados precisos, el escáner se calibra frecuentemente con un objetivo reflectante IT8 de Kodak. Para extraer un valor para la intensidad de la luz a partir de las imágenes exploradas se usa una aplicación de software diseñada especialmente (Novozymes Color Vector Analyzer). El programa recupera los valores de 24 bits por pixel de la imagen y los convierte en valores para rojo, verde y azul (RGB). El valor de la intensidad (Int) se calcula sumando los valores RGB juntos como vectores y tomando luego la longitud del vector resultante: Int. =¡ r2 + g2 + b2 El rendimiento de lavado (P) de las variantes se calcula de conformidad con la fórmula: P = lnt(v) - lnt(r) en donde lnt(v) es el valor de la intensidad de la luz de una superficie de tela lavada con la enzima probada e lnt(r) es el valor de la intensidad de la luz de la superficie de la tela lavada sin la enzima probada. El puntaje del rendimiento relativo se proporciona como el resultado del lavado AMSA de conformidad con la definición: los puntajes de Rendimiento relativo (RP) se obtienen sumando los rendimientos (P) de las variantes de las enzimas probadas con respecto a la enzima de referencia: RP = P(enzima de prueba)/P(enzima de referencia). RPavg indica el rendimiento relativo promedio comparado con la enzima de referencia en las cuatro concentraciones de enzimas (0.125, 0.25, 0.5, 1.0 mg ep/l) RPavg = avg(RP(0.125), RP(0.25) RP(0.5), RP(1.0)) Se considera que el rendimiento de lavado de una variante es mejor si su rendimiento es mejor que el de la referencia. En el contexto de la presente invención, la enzima de referencia es la lipasa de SEC. con núm. de Id. 2 con las sustituciones T231 R + N233R.

Eiemplo 3: GC - Cromatografía de gases - para calcular el factor de riesgo. La liberación de ácido butírico de las muestras lavadas con lipasa se mide por medio de Microextracción en fase sólida y Cromatografía de gases (SPME-GC, por sus siglas en inglés) usando el siguiente método. Se transfieren cuatro pedazos de tela (5 mm de diámetro) lavada en la solución especificada en el Cuadro 3 que contiene 1 mg/l de lipasa a un frasco de Cromatografía de gases (GC). Las muestras se analizan en un Cromatógrafo de gases Varían 3800 equipado con una columna Stabilwax-DA w/Integra-Guard (30 m, 0.32 mm DI y 0.25 micro-m df) y una fibra de SPME Carboxen PDMS (75 micro-m). Cada muestra se preincuba por 10 min a 40 °C seguida de un muestreo de 20 minutos con la fibra de SPME en el espacio vacío sobre los pedazos de tela. La muestra luego se inyecta en la columna (temperatura del inyector = 250 °C). Flujo de la columna = 2 mi helio/min. Gradiente de temperatura del horno de la columna: 0 min = 40 °C, 2 min = 40 °C, 22 min = 240 °C, 32 min = 240 °C. El ácido butírico se detecta por medio de detección FID y la cantidad de ácido butírico se calcula en base a una curva estándar del ácido butírico.

El Riesgo de desarrollo de olor, R, de una variante de lipasa es la relación entre la cantidad de ácido butírico liberado por la variante de lipasa de la muestra de tela lavada y la cantidad de ácido butírico liberado de la muestra de tela lavada con la lipasa de SEC. con núm. de Id. 2 con las sustituciones T231 R + N233R (enzimas de referencia), después de que se han corregido los dos valores para la cantidad de ácido butírico liberado de una muestra lavada sin lipasa. El riesgo (R) de las variantes se calcula de conformidad con la siguiente fórmula: Olor = medido en micro g de ácido butírico producido por 1 mg de enzima proteica / 1, corregido por blanco Qenzima de prueba = lor enzima de prueba ~ olanCO Qenzima de referencia = lor enzima de referencia — cilanco H = Qenzima de prueba ' Genzima de referencia Se considera que el olor de una variante es reducido en comparación con la referencia, si el factor R es menor que 1.

Eiemplo 4: Actividad (LU) relativa a la absorbancia a 280 nm La actividad de una lipasa relativa a la absorbancia a 280 nm se determina por medio del siguiente ensayo LU/A280: La actividad de lipasa se determina como se describió anteriormente en la sección actividad de la lipasa. Se mide la absorbancia de la lipasa a 280 nm (A280) y se calcula la relación LU/A280. La LU/A280 relativa se calcula como la LU/A280 de la variante dividida entre la LU/A280 de una enzima de referencia. En el contexto de la presente invención, la enzima de referencia es la lipasa de SEC. con núm. de Id. 2 con las sustituciones T231R + N233R.

Ejemplo 5: BR - Beneficio-Riesgo El factor Beneficio-Riesgo que describe el rendimiento comparado con el riesgo menor de olor por consiguiente se define como: BR = RPavg / R Se considera que el rendimiento de lavado de una variante es mejor y el olor de la variante es menor, si el factor BR es mayor que 1. Al aplicar los métodos anteriores se obtienen los siguientes resultados: Cuadro 4 La lipasa de referencia y las variantes 7 y 8 del Cuadro 4 se describen en la patente WO 2000/060063.

Ejemplo 6 BR - Beneficio-Riesgo El Beneficio-Riesgo se midió para las variantes enunciadas en el Cuadro 5. El factor Beneficio-Riesgo se midió de igual manera a la descrita en el Ejemplo 5 y se determinó que era mayor que 1 para todas las variantes enunciadas. 86 I90G+ I202L+ T231 R+ N233R+ I255S 87 S58G+ V60G+ T231 R+ N233R Cuadro 5 La lipasa de referencia se describe en la patente WO 2000/060063.

Ejemplos de composiciones A menos que se indique de otro modo, los materiales pueden obtenerse de Aldrich, P.O. Box 2060, Milwaukee, Wl 53201 , EE.UU.

Ejemplos 1-6 Composiciones detergentes granulares para lavandería diseñadas para el lavado a mano o en lavadoras de carga superior.

Cualquiera de las composiciones anteriores se usa para lavar telas a una concentración de 600 - 10,000 ppm en agua, con condiciones medias típicas de 2500 ppm, 25 °C y una relación de 25:1 agua:tela.

Ejemplos 7-10 Composiciones detergentes granulares para lavandería diseñadas para lavadoras automáticas de carga frontal.

Cualquiera de las composiciones anteriores se utiliza para lavar telas a una concentración de 10,000 ppm en agua, 20-90 °C y una relación agua:tela de 5:1. El pH típico es de aproximadamente 10.

Ejemplos 11-16 Composiciones detergentes líguidas de gran rendimiento para lavandería Materias primas y notas para las composiciones de los Ejemplos 1-16 Alquilbencenosulfonato lineal que tiene una extensión promedio de cadena alifática carbonada de Cn-C?2, suministrado por Stepan, Northfield, Illinois, EE.UU. Cloruro de dimetilhidroxietil amonio de C12-14, suministrado por Clariant GmbH, Sulzbach, Alemania AE3S es alquil etoxi (3) sulfato de C?2-15? suministrado por Stepan, Northfield, Illinois, EE.UU. AE7 es etoxilato de alcohol de C-?2.?5 con un grado promedio de etoxilación de 7 suministrado por Huntsman, Salt Lake City, Utah, EE.UU. El tripolifosfato de sodio es suministrado por Rhodia, París, Francia La zeolita A es suministrada por Industrial Zeolite (UK) Ltd, Grays, Essex, Reino Unido El 1.6R silicato es suministrado por Koma, Nestemica, República Checa El carbonato de sodio es suministrado por Solvay, Houston, Texas, EE.UU. El poliacrilato PM 4500 es suministrado por BASF, Ludwigshafen, Alemania La carboximetilcelulosa es Finnfix® BDA suministrada por CPKelco, Arnhem, Países Bajos Savinase®, Natalase®, Termamyl®, Mannaway® son suministradas por Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca Variantes de lipasa 1 a 5 descritas en el Ejemplo 5, Cuadro 4, y combinaciones de éstas. El abrillantador fluorescente 1 es Tinopal® AMS, el abrillantador fluorescente 2 es Tinopal® CBS-X, ftalocianina de zinc sulfonada y el colorante Violeta Directo 9 es Pergasol® Violeta BN-Z, todos suministrados por Ciba Specialty Chemicals, Basel, Suiza El ácido dietilentriaminapentaacético es suministrado por Dow Chemical, Midland, Michigan, EE.UU. El percarbonato de sodio es suministrado por Solvay, Houston, Texas, EE.UU. El perborato de sodio es suministrado por Degussa, Hanau, Alemania NOBS es nonanoiloxibencensulfonato de sodio suministrado por Eastman, Batesville, Arkansas, EE.UU. TAED es tetraacetiletilendiamina suministrada con el nombre comercial de Peractive® por Clariant GmbH, Sulzbach, Alemania S-ACMC es carboximetilcelulosa conjugada con Cl Azul Reactivo 19, comercializada por Megazyme, Wicklow, Irlanda con el nombre de producto AZO-CM-CELLULOSE, código de producto S-ACMC. El Azul Ultramar es suministrado por Holliday Pigments, Kingston upon Hull, Reino Unido El agente para desprendimiento de manchas es Repel-o-tex® PF, suministrado por Rhodia, París, Francia El copolímero de ácido acrílico/ácido maleico tiene un peso molecular de 70,000 y una relación acrilato:maleato de 70:30 y es suministrado por BASF, Ludwigshafen, Alemania La proteasa es FN3 suministrada por Genencor International, Palo Alto, California, EE.UU. La sal sódica del isómero (S,S) del ácido etilendiamina-N.N'-disuccínico (EDDS) es suministrada por Octel, Ellesmere Port, Reino Unido El hidroxietano difosfonato (HEDP) es suministrado por Dow Chemical, Midland, Michigan, EE.UU. El aglomerado supresor de espuma es suministrado por Dow Corning, Midland, Michigan, EE.UU. HSAS es alquilsulfato ramificado a media cadena como se describe en las patentes de los EE.UU. núms. 6,020,303 y 6,060,443 El óxido de dimetilamina de C?2- es suministrado por Procter & Gamble Chemicals, Cincinnati, Ohio, EE.UU. El material no iónico es, preferentemente, un etoxilato de C-?2-C-i3, preferentemente, con un grado promedio de etoxilación de 9. La proteasa es suministrada por Genencor International, Palo Alto, California, EE.UU.

El Liquitint® Violeta CT es suministrado por Milliken, Spartanburg, South Carolina, EE.UU. * Los números son mencionados en mg de enzima/100 g 1 Como se describe en la patente de los EE.UU. núm. 4,597,898. 2 Disponible con el nombre comercial de LUTENSIT® de BASF y como los descritos en la patente WO 01/05874 f Lipasa descrita en la presente especificación. Aunque se han ilustrado y descrito modalidades particulares de la presente invención, será evidente para los experimentados en la industria que se pueden hacer diversos cambios y modificaciones sin alejarse del espíritu y el alcance de la invención. Se ha pretendido, por consiguiente, abarcar en las reivindicaciones anexas todos los cambios y modificaciones dentro del alcance de la invención.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un agente tonalizador de telas y una variante de una lipasa de origen; la variante, cuando se compara con la lipasa de origen, comprende al menos tres sustituciones en total; las sustituciones se seleccionan de uno o más de los siguientes grupos de sustituciones: a.) al menos dos sustituciones en la Región I, b) al menos una sustitución en la Región II, c) al menos una sustitución en la Región III, y d) al menos una sustitución en la Región IV.

2. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que al menos dos sustituciones en la Región I de la lipasa de origen comprenden sustituciones en las posiciones que corresponden a las posiciones 231 y 233.

3. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que los aminoácidos de la lipasa de origen en las posiciones que corresponden a las posiciones 231 y 233 se sustituyen con R.

4. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque la variante comprende una sustitución en la posición que corresponde a la posición 4 de SEC. con núm. de Id. 2.

5. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque la sustitución en la posición que corresponde a la posición 4 de SEC. con núm. de Id. 2 es V.

6. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque la variante comprende una sustitución en la posición que corresponde a la posición 227 de SEC. con núm. de Id. 2.

7. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada además porque la sustitución en la posición que corresponde a la posición 227 de SEC. con núm. de Id. 2 es G.

8. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que al menos una sustitución en la Región II de la lipasa de origen comprende sustituciones seleccionadas del grupo que comprende sustituciones en las posiciones que corresponden a las posiciones 202, 211 , 255 y 256.

9. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que al menos una sustitución en la lipasa de origen se selecciona del grupo que comprende X202G, X211 L, X255Y/V y X256K.

10. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque al menos una sustitución en la Región II comprende una sustitución en la posición que corresponde a la posición 210.

11. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque la posición correspondiente a la posición 210 comprende X210K.

12. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que al menos una sustitución en la Región III de la lipasa de origen comprende sustituciones seleccionadas del grupo que comprende sustituciones en las posiciones que corresponden a las posiciones 86 y 90.

13. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza en que al menos una sustitución en la lipasa de origen se selecciona del grupo que comprende X86V y X90A/R.

14. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque al menos una sustitución en la Región III comprende una sustitución en la posición que corresponde a la posición 83.

15. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque la posición que corresponde a la posición 83 comprende X83T.

16. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que al menos una sustitución en la Región IV de la lipasa de origen comprende sustituciones seleccionadas del grupo que comprende sustituciones en las posiciones que corresponden a las posiciones 27, 58 y 60.

17. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que al menos una sustitución en la lipasa de origen se selecciona del grupo que comprende X27R, X58N/A/G/P/T y X60S?//G/N/R/K/A/L.

18. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que la lipasa de origen comprende al menos una sustitución fuera de las Regiones I a IV definidas.

19. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que al menos una sustitución en la lipasa de origen se selecciona del grupo que comprende sustituciones en las posiciones que corresponden a las posiciones 81 , 147, 150 y 249.

20. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que al menos una sustitución en la lipasa de origen se selecciona del grupo que comprende X81Q/E, X147M/Y, X150G y X249R/I/L.

21. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque la lipasa se caracteriza también en que la lipasa de origen es al menos 90 % idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2.

22. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2 y la variante comprende uno de los siguientes grupos de sustituciones: a)T231 R + N233R + I255Y b) I202G + T231 R + N233R c) l86V + L227G + T231 R + N233R + P256K d) Q4V + S58N + V60S + T231 R + N233R e) S58N + V60S + I90R + T231 R + N233R f) I90A + T231 R + N233R + I255V g) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231 R + N233R + P256K h) S58N + V60S + L147M + F211 L + T231 R + N233R Í) Q4V + S58A + V60S + S83T + I86V + A150G + E210K + L227G + T231 R + N233R + P256K J) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231 R + N233R + P256K.

23. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la lipasa de origen es idéntica a la SEC. con núm. de Id. 2 y la variante comprende uno de los siguientes grupos de sustituciones: a)Q4V + S58A + V60S + S83T + I86V + A150G + E210K + L227G + T231 R + N233R + P256K b) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231 R + N233R + P256K.

24. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la variante de la lipasa se caracteriza en que el Beneficio-Riesgo es mayor que 1 cuando se mide según lo establecido en la especificación.

25. Una composición detergente que comprende un agente tonalizador de telas y un polipéptido que tiene actividad de lipasa y que además tiene un Rendimiento relativo promedio de al menos 0.8 y un Beneficio-Riesgo de al menos 1.1 en las condiciones de prueba establecidas en la especificación.

26. La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque comprende de 0.1 a 40 % de surfactante aniónico.

27. La composición de conformidad con la reivindicación 26; caracterizada además porque la composición es una composición de limpieza 0 de tratamiento.

28. Un proceso para limpiar o tratar una superficie o tela que comprende los pasos de lavar o enjuagar opcionalmente la superficie o tela, poner la superficie o tela en contacto con la composición de la reivindicación 1 y, opcionalmente, lavar o enjuagar luego la superficie o tela.

29. La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la variante de lipasa es una variante de SEC. con núm. de Id. 2 que comprende al menos una de las mutaciones Q4V, S58N/A/G/P T, I90R O Q249I/L.