MX2007000704A - Metodo y aparato para formar una dilucion por dispersion del fluido. - Google Patents

Abstract

De acuerdo con un aspecto de la invencion, se proporciona un metodo para la creacion de una serie de diluciones. Los metodos pueden incluir proporcionar un primer recipiente que incluye una muestra, y aspirar al menos una porcion de la muestra desde el primer recipiente hacia un primer conducto imprimado con el solvente de tal modo que la muestra se disperse en el solvente. Al menos una porcion de la muestra dispersada es distribuida dentro de un segundo recipiente mientras que, substancialmente de manera simultanea, un solvente es distribuido dentro del segundo recipiente desde un segundo conducto. Alternativamente, el segundo recipiente puede contener ya el solvente y el primer conducto puede distribuir la muestra dispersada dentro del segundo recipiente que contiene el solvente. De acuerdo con un aspecto de la invencion, un sistema para crear una serie de diluciones es provisto. El sistema puede incluir un primer conducto configurado para aspirar y distribuir una muestra que va a ser diluida y un segundo conducto configurado para distribuir un solvente. La primera y segunda fuentes de presion pueden ser provistas para mover el fluido a traves del primer y segundo conductos respectivos. El sistema tambien puede incluir un controlador configurado para instruir a la primera y segunda fuentes de presion para distribuir una muestra aspirada y el solvente substancialmente al mismo tiexipo.

Description

MÉTODO Y APARATO PARA FORMAR UNA DILUCIÓN POR DISPERSIÓN DEL FLUIDO Campo de la Invención La presente invención se refiere al manejo y transferencia automática de los fluidos, y más particularmente a la formación automática de una serie de diluciones por la dilución por dispersión. Antecedentes de la Invención Las placas de dilución son preparadas generalmente ya sea por dilución en serie o por depósito directo. En una placa de 96 cavidades que tiene 12 columnas, con dos columnas que son las columnas de control en blanco, se pueden crear series de diluciones, por ejemplo series de diluciones 2:1. Esto significa que 10 columnas que contienen la muestra serán provistas finalmente, en donde cada columna contiene la mitad o el cincuenta por ciento tanto de la muestra como la columna precedente . En una dilución en serie, un compuesto de interés que tiene una concentración conocida a un volumen fijo es diluido en un solvente. En este ejemplo, previo al inicio de la dilución, la columna 1 podría contener el compuesto de interés a una concentración conocida y de un volumen dado, por ejemplo, 200 µl y las columnas restantes (que no son de control) podrían contener cada una 100 µl del solvente puro, por ejemplo, sulfóxido de dimetilo (DMSO) . La dilución en Ref .178901 serie empieza aspirando 100 µl de la muestra desde la columna 1 y distribuyendo la muestra aspirada hacia la columna 2. La solución resultante en la columna 2 (100 µl de la muestra y 100 µl del solvente) es mezclada por transferencia repetida con una pipeta (es decir, aspiración y distribución) . Después del mezclado, 100 µl son aspirados desde la columna 2. La columna 2 contiene ahora una solución en la cual la concentración de la muestra es la mitad de aquella de la concentración de la muestra en la columna 1. Los 100 µl aspirados desde la columna 2 son distribuidos hacia la columna 3 y son mezclados. El proceso es repetido en todo el resto de la placa (saltando las columnas de control y desechando 100 µl de la columna final) para lograr series de diluciones 2:1 en 100 µl totales. Preferentemente, las puntas de las pipetas pueden ser cambiadas entre cada columna. Como se sabe en el arte, las diferentes series de diluciones, por ejemplo, 3:1, 5:1, requieren la aspiración y distribución de diferentes volúmenes de la muestra. La creación de las series de diluciones puede ser efectuada manualmente o puede ser un proceso automático, efectuado por ejemplo, por un aparato Tecan Génesis RSP 200. Cuando se efectúa a mano, el proceso consume mucho tiempo y es fatigoso para el operador. Existe una inconsistencia entre los usuarios, y los formatos de densidad más elevada son extremadamente difíciles tanto en el mezclado como en las cavidades potencialmente erróneas o perdidas. Sin embargo, este método se considera el estándar de oro. Cuando se efectúa de manera automática, el proceso es lento porque el mismo requiere el llenado de todas las cavidades con el solvente previo a efectuar la dilución, así como el tiempo necesario para los cambios de las puntas. Además, las diluciones en serie son susceptibles a la propagación de errores, porque cada dilución subsiguiente es dependiente de la concentración de la columna precedente, por consiguiente un error en una columna será propagado por todo el resto de las columnas. En una dilución de depósito directo, una cantidad precisa del compuesto de interés/muestra es depositada en cada cavidad. Cada cavidad es tapada entonces completamente con el solvente, de tal modo que cada cavidad contenga el mismo volumen, por ejemplo, 100 µl . Por consiguiente, para empezar una serie de diluciones 2:1, por ejemplo, la primera columna podría contener 100 µl de la muestra, la segunda columna podría contener 50 µl de la muestra y 50 µl del solvente, la tercera columna podría contener 25 µl de la muestra y 75 µl del solvente, con cada columna, después de esto, que contiene la mitad de tanto contenido de la muestra que la columna precedente y 50 % de tanta cantidad más del solvente que la columna precedente, de tal modo que la décima columna pudiera contener 0.195 µl de la muestra y 99.805 µl del solvente. A diferencia de las diluciones en serie, la concentración en cada cavidad es independiente de la concentración en cada una de las otras columnas. Esto reduce los errores de transporte y hace a las diluciones más exactas que la dilución en serie. Existe el potencial de error de la muestra adicional que se adhiere al lado externo de las puntas de suministro. La muestra que va a ser agregada a cada columna es tomada de la columna 1, que contiene la muestra a una concentración elevada. Cualquier transporte desde la punta podría alterar significativamente la concentración en una de las cavidades posteriores, especialmente las cavidades en las columnas 9 ó 10, que tienen una concentración muy baja de la muestra. Además, para el volumen de las series de dilución descritas anteriormente, (100 µl), un manipulador del líquido podría ser requerido para distribuir exactamente entre 195 ni y 100 µl . Tal intervalo está más allá de la mayoría de los manipuladores de líquidos. Además, los volúmenes requeridos para la dilución directa del depósito se extienden a un intervalo más prolongado de lo que se incrementa el factor de dilución, por ejemplo, hasta una dilución 5:1. Si los distribuidores de volúmenes pequeños son utilizados, podrían ser necesarios intervalos grandes de tiempo para lograr volúmenes grandes y podrían requerir distribuciones múltiples.

Por consiguiente, existe una necesidad de un método de creación de diluciones en serie que sea relativamente rápido, que trabaje dentro de los intervalos de los manipuladores de líquidos convencionales, y que reduzca la cantidad del error de transporte. Breve Descripción de la Invención De acuerdo con la invención, un aparato y método para crear una serie de diluciones utilizando la dispersión del fluido, son provistos. De acuerdo con un aspecto de la presente invención, un método para crear una serie de diluciones es provisto. El método incluye proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra, aspira al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un primer conducto imprimado con el solvente de tal modo que la muestra se disperse en el solvente, dispersando al menos una porción de la muestra dispersada desde al menos un primer conducto hacia al menos un segundo recipiente, y distribuyendo substancialmente de manera simultánea un solvente en al menos el segundo recipiente desde al menos un segundo conducto. De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona un sistema para crear una serie de diluciones. El sistema incluye al menos un primer conducto configurado para aspirar y distribuir una muestra que va a ser diluida, una primera fuente de presión, configurada para preparar al menos un primer conducto con un solvente y configurada para aspirar una muestra dentro del primer conducto imprimado, en donde la primera fuente de presión proporciona condiciones de flujo laminar que provocan que la muestra se disperse en el solvente en al menos un primer conducto, al menos un segundo conducto configurado para distribuir un solvente, una segunda fuente de presión para distribuir un solvente desde al menos un segundo conducto, y un controlador configurado para instruir a la primera y segunda fuentes de presión para distribuir la muestra aspirada y el solvente substancialmente al mismo tiempo. De acuerdo con todavía otro aspecto de la presente invención, un método para crear una serie de diluciones incluye proporcionar una pluralidad de recipientes, proporcionar una muestra en al menos un primer recipiente, aspirar al menos una porción de la muestra hacia al menos un primer conducto, permitir que la muestra aspirada se disperse en el solvente contenido dentro de al menos un primer conducto, en donde la dispersión de la muestra ocurre al menos por convección, distribuyendo una porción de la muestra dispersada desde al menos un primer conducto hacia al menos un segundo recipiente, y distribuyendo un solvente hacia al menos el segundo recipiente desde al menos un segundo conducto .

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, un método para crear una serie de diluciones incluye proporcionar una pluralidad de recipientes, proporcionando una muestra en al menos un primer recipiente, aspirando al menos una porción de la muestra dentro de al menos un primer conducto, permitiendo que la muestra aspirada se disperse dentro del solvente contenido dentro de al menos un primer conducto, distribuyendo una porción de la muestra dispersada desde al menos un primer conducto hacia al menos un segundo recipiente, y lavando una punta de al menos un primer conducto distribuyendo substancialmente de manera simultánea un solvente dentro de al menos el segundo recipiente desde al menos un segundo conducto que rodea al menos un primer conducto. De acuerdo con todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para crear una serie de diluciones utilizando un manipulador de líquidos a base de una jeringa de bombeo impulsada por presión. El método incluye proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra y al menos un segundo recipiente incluye un diluyente, aspirar un diluyente dentro de al menos un conducto, aspirar al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un conducto que contiene el diluyente aspirado de tal modo que la muestra se disperse en el diluyente, y distribuir al menos una porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto hacia al menos el segundo recipiente que contiene el diluyente para formar una dilución de la muestra. De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, un método para crear una serie de diluciones utilizando un manipulador de líquidos a base de una jeringa de bombeo impulsada por la presión, comprende proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra y al menos un segundo recipiente incluye un diluyente, aspirar al menos una porción de la muestra en al menos un conducto, permitir que la muestra aspirada se disperse dentro del diluyente contenido dentro de al menos un conducto, distribuir una primera porción de la muestra distribuida desde al menos un conducto dentro del receptáculo de desecho, y distribuir una segunda porción de la muestra distribuida desde al menos un conducto hacia al menos el segundo recipiente. Los objetos y ventajas adicionales de la invención serán descritos en parte en la descripción que sigue, y en parte serán obvios de la descripción, o pueden ser aprendidos por la práctica de la invención. Los objetos y ventajas de la invención serán realizados y obtenidos por medio de los elementos y combinaciones puntualizados particularmente en las reivindicaciones anexas.

Se va a entender que tanto la descripción general precedente como la siguiente descripción detallada son ejemplares y explicativas solamente y no son restrictivas de la invención, como está reivindicado. Las figuras anexas, que están incorporadas en, y que constituyen una parte de esta especificación, ilustran una modalidad de la invención y junto con la descripción, sirven para explicar los principios de la invención. Breve Descripción de las Figuras La figura 1 es una vista isométrica de un sistema para crear automáticamente una serie de diluciones, de acuerdo con la presente invención; la figura 2 es una vista isométrica de una porción del sistema de la figura 1; la figura 3 es una vista isométrica del colector que contiene el primer y segundo tubos del sistema de la figura 1, de acuerdo con la presente invención; la figura 4 es una vista superior de la porción del sistema mostrado en la figura 2; la figura 5 es una vista frontal de la porción del sistema mostrado en la figura 2; la figura 6A es una vista en sección transversal de un tubo que contiene el solvente previo a la aspiración de una muestra; la figura 6B es una vista en sección transversal del tubo de la figura 6A que contiene un solvente en el cual una muestra ha sido aspirada y dispersada, de acuerdo con un aspecto de la presente invención; la figura 6C es la vista en sección transversal del tubo de la figura 6B, en donde se han agregado líneas para representar el volumen separado de la curva de dispersión (es decir, la muestra dispersada) ; la figura 7 es una vista superior de una modalidad de una pluralidad de recipientes, de acuerdo con un aspecto de la presente invención; y la figura 8 es una vista isométrica de una modalidad alternativa de un colector y la porción de distribución de un sistema que va a ser utilizado para practicar un método de acuerdo con la presente invención. Descripción Detallada de la Invención Se hará referencia ahora de manera detallada a las presentes modalidades de la invención, los ejemplos de las cuales son ilustrados en las figuras que se anexan. En donde sea posible, los mismos números de referencia serán utilizados de principio a fin de las figuras para referirse a las mismas partes o a partes semejantes. La presente invención proporciona un método y sistema para la formación de una serie de diluciones. Cuando se utilice aquí, el término "serie" de diluciones puede abarcar una sola dilución o varias diluciones creadas a partir de una muestra. El método reduce el tiempo necesario para crear una serie de diluciones. El método y sistema dispersan la muestra y el solvente de manera simultánea, eliminando la necesidad de "tapar completamente" de manera separada las cavidades después de que la muestra ha sido colocada en las cavidades. Adicionalmente, el sistema puede utilizar una configuración única del tubo de la muestra que se encaja dentro del tubo del solvente. Este diseño encajado mezcla el solvente y la muestra, eliminando la necesidad del mezclado secuencial del solvente y la muestra y proporciona un efecto de lavado, retirando por lavado cualesquiera gotas de la muestra que podrían permanecer sobre el extremo del tubo de la muestra dentro de la cavidad. Esto tiene tres beneficios, el lavado con un chorro reduce el error que puede ser provocado por la muestra que permanece sobre la tubería, permite que sean distribuidos volúmenes mucho más pequeños, y hace innecesario el intercambio de las puntas entre las cavidades . El método de la presente invención aspira una muestra una vez y luego distribuye la muestra aspirada (y diluida) repetidamente, por ejemplo, nueve veces para una dilución de 10 puntos. El tiempo para crear tal serie de diluciones de acuerdo con la presente invención es de aproximadamente 90 segundos. Este tiempo es significativamente más breve que los métodos del arte previo, que pueden tomar hasta ocho minutos. Además, la exactitud de la serie de dilución formada por un método de acuerdo con la presente invención ha sido verificada contra la serie de dilución calibrada manualmente. La exactitud de la serie de diluciones creada de acuerdo con el método de la presente invención puede variar de los valores calibrados manualmente en menos de + 4 %. Esto es significativamente más exacto que los métodos del arte previo. Finalmente, la técnica de dispersión utilizada por el método de la presente invención es altamente reproducible tanto entre los canales como desde placa a placa. El método y aparato de la presente invención también permiten la variación del factor de dilución dentro de una serie dada de diluciones o una pluralidad de recipientes. Tal capacidad es útil para proporcionar puntos de datos adicionales dentro de una porción seleccionada de la serie de diluciones. Tal variación del factor de dilución puede ser lograda dispersando una porción de la muestra dispersada en un primer factor de dilución, cambiando subsiguientemente el factor de dilución (por ejemplo, eliminando una porción de la muestra dispersada) , y luego distribuyendo la muestra dispersada en el nuevo factor de dilución. De acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un sistema para formar automáticamente una serie de diluciones. Como se muestra en las figuras 1-4 y como está comprendido aquí, el sistema 100 puede incluir un apilador de placas verticales, una pluralidad de canales de fluido, un primer conjunto de bombas de jeringa, un segundo conjunto de bombas de jeringa, una estación de lavado, y medios para controlar el sistema. Como se muestra en las figuras 1-4, el sistema 100 puede incluir un apilador vertical 102. El apilador vertical puede ser cualquier apilador convencional adecuado para la recepción/almacenamiento, y la distribución de una pluralidad de recipientes, por ejemplo, placas de microtitulación que contienen una pluralidad de cavidades. El apilador también debe tener una plataforma sobre la cual se manipulen las placas en la dirección X para dirigirlas hacia las columnas individuales de las cavidades. En una modalidad, se utilizó un aparato PerkinElmer PlateStak™. Alternativamente, se pueden utilizar placas fijas articuladas por un manipulador robótico y un colector movible. Como está contemplado aquí, el apilador 102 incluye un área de entrada 104 para recibir y almacenar una pluralidad de placas 106, cada placa 106 incluyendo una pluralidad de recipientes o cavidades 106a, cada placa que contiene una muestra en, por ejemplo, la primera columna o la primera hilera de recipientes 106a. Las placas 106 pueden ser cualquier placa de microtitulación convencional, tal como una placa de 96 cavidades o una placa de 384 cavidades. Las placas 106 son movidas desde el área de entrada 104 hasta una porción de rastreo 108 sobre la cual las mismas son trasladadas mientras que son llenadas. Después de ser llenadas, las placas 106 son movidas • desde la porción de rastreo 108 hasta una área de salida 110 en donde las mismas son almacenadas para uso posterior. El apilador debe ser configurado para almacenar, distribuir, y manipular las placas de microtitulación SBS-footprint estándares (Society for Biomolecular Screening, www. sbsonline . org/msdc/pdf/ANSÍ SBS 1-200 . pdf ) . Cualquier placa de microtitulación convencional puede ser utilizada con este sistema. Por ejemplo, las placas de microtitulación de 96 cavidades y de 384 cavidades pueden ser utilizadas. Alternativamente, las placas con una densidad mayor o menor de cavidades pueden ser utilizadas . En una modalidad, el apilador 102 almacena las placas 106 que fueron preparadas previamente de manera separada con una(s) muestra (s) de interés en cada cavidad de una primera columna de cavidades. Si así se desea, un aparato que llena las cavidades en la primera columna (o la primera hilera, u otra(s) columna (s) o hilera (s) ) con la muestra puede ser agregado al sistema 100 para llenar las cavidades y para que sea controlado por el controlador del sistema que va a ser transportado hasta el apilador 102 para almacenamiento hasta que sea necesario para una serie de diluciones. Aunque la invención es descrita posteriormente en el contexto de crear una dilución en serie utilizando placas de microtitulación que tienen cada una, una pluralidad de recipientes, se debe entender que cualquier tipo de estructura adecuada para contener un líquido podría ser utilizada, tal como, por ejemplo, gradillas de tubos o microtubos de prueba, o revestimientos desechables que contienen una pluralidad de depresiones. En cada uno de estos ejemplos, la pluralidad de recipientes puede ser arreglada en hileras y columnas como se muestra en la figura 7. De acuerdo con otro aspecto de la invención, el sistema 100 puede incluir una pluralidad de canales para el fluido (no mostrados). Como está comprendido aquí y mostrado en las figuras 1-5, la pluralidad de canales para el fluido puede estar en un bloque común, o colector 112. En una modalidad, el colector 112 incluye ocho (8) canales para el fluido. Los canales para el fluido adicionales o en una cantidad menor pueden ser utilizados para adaptar la función del dispositivo a varias aplicaciones. El colector 112 puede ser movible en una dirección Z (es decir, de altura ajustable). El movimiento puede ser provisto por cualquier medio adecuado, tal como por un motor de funcionamiento gradual. El colector 112 también puede ser movido desde un lado hasta el otro lado, en la dirección Y. El movimiento desde un lado hasta el otro lado puede ser provisto por cualesquiera medios adecuados, tales como por un motor de funcionamiento gradual. El movimiento en la dirección Y permite que el sistema sea utilizado para llenar los recipientes espaciados lejos entre sí o colocados muy estrechamente entre sí, tales como por ejemplo, los recipientes en una placa de 384 cavidades (no mostrada) . El espaciado entre los canales para el fluido puede ser tal que, por ejemplo, cada canal de fluido esté configurado para revestirse con una cavidad en una columna dada de una placa de 96 cavidades. En una placa de 384 cavidades, cada canal para el fluido puede revestirse con cada otra de las cavidades en una columna dada de la placa. Por consiguiente, para llenar todas las cavidades en una columna dada de una placa de 384 cavidades, es necesario proporcionar un medio para que el colector 112 se traslade en una dirección transversal con respecto al curso del apilador 108 de modo que el mismo se revista con las cavidades restantes en una columna dada. Cada canal para el fluido incluye un primer conducto, por ejemplo, un primer tubo 116 hecho de un material adecuado, tal como PEEK. Cada primer tubo 116 está centralizado y puede ser encajado dentro de un segundo conducto, por ejemplo un segundo tubo 118. El segundo tubo 118 puede estar hecho de acero inoxidable o cualquier otro material adecuado. El primer tubo 116 puede tener cualquier diámetro interno adecuado. En una modalidad, los primeros tubos 116 tienen cada uno un diámetro interno de 0.05 cm (0.02 pulgadas) y un diámetro externo de 0.16 cm (0.063 pulgadas). La selección de los diámetros externos alternativos no afectará la calibración del sistema, sin embargo, los diámetros internos alternativos pueden requerir la recalibración del sistema a partir de los parámetros que serán descritos aquí. Tal recalibración debe estar dentro de la experiencia ordinaria en el arte. El diámetro interno de los segundos tubos 118 debe ser de un tamaño suficiente para contener el primer tubo 116 y para permitir que el fluido pase entre el lado interno del segundo tubo 118 y el lado externo del primer tubo 116, como será descrito posteriormente. En una modalidad, los segundos tubos 118 tienen cada uno, un diámetro interno de 0.18 cm (0.071 pulgadas) y los primeros tubos 116 tienen un diámetro externo de 0.16 cm (0.063 pulgadas), dejando un hueco de 0.010 cm (0.004 pulgadas) entre el primer y segundo tubos. Tanto los primeros tubos 116 como los segundos tubos 118 deben ser de longitud suficiente para alcanzar desde el colector 112 hasta una bomba respectiva. El primer y segundo conductos pueden tener secciones transversales de una variedad de formas y tamaños, aunque las secciones transversales redondas pueden ser preferidas. Además, el primer y segundo conductos pueden ser de una geometría recta, curva, en espiral o de otra geometría adecuada. El conducto que contiene la muestra dispersada debe ser de longitud suficiente para contener toda la muestra de modo que la parábola de dilución no sea perturbada por el mecanismo de bombeo. Como se muestra en la figura 2, los primeros tubos 116 se extienden a través y hacia afuera de los segundos tubos 118, por ejemplo, en aproximadamente 0.38 cm (0.15 pulgadas) hasta 0.762 cm (0.3 pulgadas) y en una modalidad en 0.599 cm (0.236 pulgadas). La diferencia en alturas entre la base o la punta 116a del primer tubo 116 y la base o la punta 118a del segundo tubo 118 fue seleccionada para prevenir que las puntas 118a de los segundos tubos 118 lleguen a estar en contacto con cualquier solución en las cavidades de las placas 106 o con cualquier solución en una estación de lavado, que va a ser descrita posteriormente. Otras distancias adecuadas entre la punta 118a y la punta 116a pueden ser utilizadas. Alternativamente, el primer conducto puede no ser encajado dentro del segundo conducto, y en lugar de esto puede ser colocado cerca del segundo conducto. En tal modalidad, el segundo conducto está colocado con relación al primer conducto, de tal modo que el fluido que sale desde el segundo conducto sea dirigido alrededor de al menos una porción de la punta del primer conducto.

Aunque es menos preferido, es posible practicar un método de acuerdo con la presente invención con un sistema que no incluya un segundo conducto. Tal modalidad es menos preferida a causa de que el proceso es más prolongado y puede requerir la elevación del lado externo de las puntas. Sin embargo, tal modalidad proporciona el beneficio de permitir que el método de la presente invención sea practicado utilizando manipuladores de líquidos a base de una jeringa de bombeo impulsada por presión, comerciales, convencionales, tales como los aparatos de Tecan Génesis RS 200, sin modificación. Como está comprendido aquí y mostrado en la figura 8, el manipulador convencional puede incluir un bloque común o colector 212. El colector 212 incluye una pluralidad de canales para el fluido (no mostrados). El número de los canales para el fluido puede ser seleccionado cuando sea necesario para adaptar la función del dispositivo a varias aplicaciones. El colector 212 puede ser movible y puede ser impulsado como se describió anteriormente, o por otros medios convencionales. Cada canal para el fluido incluye un prímer conducto, por ejemplo, un primer tubo 216 compuesto de un material adecuado, tal como PEEK. El primer tubo 216 puede tener cualquier diámetro interno adecuado como se describió anteriormente. La selección de los diámetros internos alternativos puede requerir la recalibración del sistema a partir de los parámetros que serán provistos aquí. Tal recalibración debe estar dentro de la experiencia ordinaria en el arte. Los primeros tubos 216 deben ser de longitud suficiente para alcanzar desde el colector 212 hasta una bomba respectiva. Los primeros conductos 216 pueden tener secciones transversales de una variedad de formas y tamaños, aunque las secciones transversales redondas pueden ser preferidas. Además, los primeros conductos 216 pueden ser de cualquier geometría adecuada. El primer conducto 216 contendrá la muestra dispersada y por lo tanto debe ser de suficiente longitud para que contengan la totalidad de la muestra de modo que la parábola de dilución no sea perturbada por el mecanismo de bombeo. De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, el sistema 100 puede incluir primera y segunda fuentes de presión. Cualquier tipo adecuado de fuente de presión, tal como por ejemplo, bombas impulsadas por presión, puede ser utilizado. En una modalidad preferida, el primer y segundo bancos 120, 122 de bombas impulsadas por presión pueden incluir bombas de jeringa acopladas. Como está comprendido y mostrado aquí en las figuras 1-5, los primeros tubos 116, 216 pueden ser conectados a las salidas respectivas de un primer banco 120 de bombas de jeringa acopladas, la salida de cada bomba de jeringa está conectada a uno de los primeros tubos, 116, 216. Los segundos tubos 118 pueden ser conectados a las salidas respectivas de un segundo banco 122 de bombas de jeringa acopladas, la salida de cada bomba de jeringa está conectada a uno de los segundos tubos 118. El tamaño de las jeringas limita el volumen distribuido en las cavidades. Por consiguiente, mientras más pequeñas sean las jeringas, más pequeño será el volumen final potencial de la serie de diluciones. La entrada de cada bomba de jeringa del primer y segundo bancos 120, 122 de las bombas está conectada a una alimentación del solvente, tal como un recipiente de DMSO. El primer y segundo bancos 120, 122 de las bombas de jeringa acopladas se hacen funcionar por motores internos, tales como motores de funcionamiento gradual, que son controlados por una computadora 130. De acuerdo con un aspecto de la presente invención, el sistema 100 puede incluir una estación de lavado 126. La estación de lavado puede ser configurada para recibir las puntas 116a de los primeros tubos 116. El primer y segundo tubos pueden ser lavados por la inundación del sistema con el solvente desde la alimentación del solvente 124, de tal modo que el solvente sea distribuido desde el primer y segundo tubos 116, 118 dentro de la estación de lavado. Cuando el solvente fluye fuera de los segundos tubos 118, el mismo lava las puntas 116a de los primeros tubos 116. De manera coincidente o alternativa, la estación de lavado bombea de manera activa el fluido a través de sus cavidades para mantener el fluido de lavado sin contaminar. La estación de lavado es drenada entonces por medio de vacío dentro de un receptáculo para los desechos por el drenaje 128. La estación de lavado 126 y el primer y segundo tubos se pueden mover de manera relacionada entre sí para colocar la estación de lavado bajo los primeros tubos. En una modalidad, la estación de lavado 126 puede ser movida para que sea extendida a través de la porción de rastreo 108 para lavar las puntas 116a. Después del lavado, la estación de lavado 126 es retraída desde la porción de rastreo 108 para permitir la manipulación de las placas de cavidades sobre la porción de rastreo 108. De acuerdo con un aspecto de la invención, un controlador para el sistema 100 es provisto. Como está comprendido aquí, el controlador puede incluir una computadora 130 u otro medio de control del instrumento, adecuado. La computadora 130 puede ser provista con una pluralidad de protocolos a partir de los cuales un usuario del sistema puede seleccionar el tipo de series de dilución que va a ser creado. Por ejemplo, un factor variable es el factor de dilución: un usuario puede seleccionar entre, por ejemplo, una serie de diluciones 2:1, 3:1, 5:1, 800:1, 1600:1, 2400:1, y 25000:1. Alternativamente, es posible programar la computadora para la intercalación entre los factores de dilución en una serie de dilución única. Por ejemplo, una porción de una serie de diluciones puede ser preparada como una dilución 2:1 y el resto puede ser imprimado como una dilución 5:1. Otro factor variable es el volumen final de la serie de diluciones. En los ejemplos provistos aquí, el volumen final es de 100 µl . Sin embargo, otros volúmenes finales, tales como, por ejemplo, 50 µl y 10 µl pueden ser seleccionados por un usuario. Otra variable es el solvente utilizado. Por ejemplo, un usuario puede seleccionar entre DMSO y un solvente acuoso, tal como un amortiguador. Otros tipos adecuados de solventes pueden ser utilizados. Otra variable es el tamaño y el tipo de la pluralidad de recipientes utilizados. Por ejemplo, un usuario puede seleccionar entre una placa de microtitulación de 96 cavidades y una placa de microtitulación de 384 cavidades. Los recipientes de otros tamaños y/o formas, tales como por ejemplo, gradillas de tubos o microtubos de prueba, o revestimientos desechables que contienen una pluralidad de depresiones. Para cada conjunto de variables seleccionadas, la computadora puede contener una base de datos que lista la cantidad de la muestra dispersada y la cantidad del solvente que va a ser distribuido en cada punto en la dilución. Las tablas de las bases de datos ejemplares son mostradas enseguida.

Volúmenes Distribuidos Para Crear Diluciones IC50 (los volúmenes distribuidos son en microlitros) Solvente = DMSO (placa de 96 cavidades) ^mezclado = distribuir 20 ul del amortiguador de la parte superior/DMSO en la cavidad y aspirar 10 uL en los tubos de muestra para re-dispersar el perfil de la muestra.

Solvente = DMSO (placa de 384 cavidades) Solvente = acuoso (placa de 96 cavidades) Solvente = acuoso (placa de 384 cavidades) *mezclado = distribuir 20 ul del amortiguador superior/DMSO en la cavidad y aspirar 10 ul en los tubos de muestra para re-dispersar el perfil de la muestra. El principio de operación para el método de la presente invención está basado en la dispersión de una muestra en una corriente portadora. El fenómeno de dispersión está basado en al menos dos componentes, las corrientes de convección introducidas por la bomba de jeringa impulsada por presión y la difusión de la muestra. Para empezar, la muestra es aspirada hacia los primeros tubos, imprimados con el solvente, desde los recipientes arreglados en una primera columna o hilera. Cuando la muestra aspirada es extraída hacia el primer tubo imprimado con el solvente, la convección conduce a que el bolo de la muestra se toma sobre un perfil de flujo substancialmente parabólico cuando el mismo se mueve a través del primer tubo 116, con el fluido adyacente a las paredes del tubo que se mueve a una velocidad más lenta (debido a la fricción con las paredes) que el fluido en el centro del tubo debido a la influencia del flujo laminar. Cuando la muestra atraviesa el tubo y llega a ser alargada debido a su perfil de flujo parabólico, la concentración original de la muestra llega a ser diluida en el solvente. La difusión también desempeña un papel en la dispersión de la muestra en el solvente dentro del tubo. Las moléculas migrarán desde un área de concentración más elevada hasta un área de concentración inferior por el proceso de difusión. Por consiguiente, cuando la muestra se toma sobre las moléculas de perfil de flujo parabólico de la muestra, puede difundirse entre las capas diferentes del perfil de flujo, incrementado el efecto de dispersión. La difusión desempeña un papel relativamente pequeño en la dispersión de la muestra cuando se compara con la convección que es impulsada por el bombeo presurizado. El plegado laminar irreversible, las corrientes parásitas, las interacciones con la superficie del tubo y la geometría del conducto pueden ser otros factores que afectan la cantidad de dispersión observada por el sistema. La muestra que ha sido aspirada en los primeros tubos 116 es diluida en el solvente (DMSO) dentro del tubo cuando la misma es dispersada en un perfil de flujo parabólico. El método de la presente invención está basado en las fracciones de volumen de la curva de dispersión de la muestra provocadas por los dos perfiles de flujo dentro y fuera del tubo (véanse las figuras 6B y 6C) . Esta muestra diluida puede ser distribuida (en volúmenes que han sido predeterminados por calibración, como se muestra en las tablas anteriores) en las columnas o hileras restantes de recipientes para crear la serie de diluciones. Por consiguiente, a diferencia de la dilución en serie y el depósito directo, existe solamente una etapa de aspiración seguida por al menos una etapa de distribución, y generalmente entre 1 y 40 etapas de distribución. Por ejemplo, en una serie de diluciones de 10 puntos, existe una etapa de aspiración seguida por nueve etapas de distribución. No existe necesidad de desperdiciar el tiempo en el mezclado en las cavidades a causa de que los depósitos subsiguientes son independientes de las cavidades previas. Alternativamente, también es posible fabricar una serie de diluciones que incluye solamente la muestra y una dilución única. En tal caso, existe una etapa de aspiración y al menos una etapa de distribución. Dependiendo de la dilución deseada, puede ser necesario distribuir una porción de la muestra aspirada en los desechos antes de la distribución de una porción de la muestra aspirada en la cavidad de dilución de destino. Un ejemplo de un método de producción de una serie de diluciones 2:1, de volumen final de 100 µl, de diez puntos, en una placa de microtitulación utilizando el sistema 100 de acuerdo con la presente invención será descrito ahora. Para empezar, una placa de 96 cavidades con 200 µl de la muestra en cada cavidad de una primera columna, es decir, la columna 1, es colocada en el área de entrada 104 del apilador vertical 102. Una serie de diluciones 2:1, de diez puntos, de volumen final de 100 µl es seleccionada de una lista de protocolos sobre una computadora conectada al sistema. La computadora proporciona los parámetros apropiados a los motores que impulsan los bancos de las bombas de las jeringas. La estación de lavado es extendida bajo las primeras puntas 116a de los tubos. Las puntas 116a de los primeros tubos son descendidas hacia la estación de lavado. El primer y segundo bancos 120, 122, de las bombas de jeringa aspiran 500 µl del solvente (DMSO) desde la alimentación de solventes 124, las válvulas de 2 vías hacen un cambio y las jeringas se vacían a través del primer y segundo tubos 116, 118, preparándolas así. Las puntas 116a de los primeros tubos son elevadas y la estación de lavado 126 es retraída. La placa 106 es movida por el apilador sobre la porción de rastreo 108 hasta el colector de fluido 112. El primer banco 120 de bombas de jeringa aspira 400 µl del solvente (DMSO) desde la alimentación del solvente 124. El segundo banco 122 de bombas de jeringa aspira 500 µl del solvente (DMSO) desde la alimentación del solvente 124. Los primeros tubos 116 son descendidos hacia la primera columna de la placa 106. El primer banco 120 de las bombas de jeringa aspira 100 µl de la muestra desde cada una de las cavidades en la columna 1 de la placa 106 hacia los primeros tubos 116. Cuando la muestra es aspirada dentro de los tubos 116, la misma es diluida porque es dispersada en el solvente por el movimiento a través de DMSO en los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos son elevadas fuera de las cavidades en la columna 1 y el apilador 102 mueve la placa 106 hasta la posición de una segunda columna, es decir, la columna 2, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 2 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye una porción, fracción, o "rebanada" de la muestra dispersada (56 µl) hacia las cavidades en la columna 2 a través de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (44 µl) hacia las cavidades en la columna 2 por medio de los segundos tubos 118. Cuando el solvente es distribuido a través de los segundos tubos 118, el mismo hace el lavado sobre las puntas 116a de los primeros tubos 116. Cuando el mismo hace el lavado sobre las puntas 116a, el solvente ayuda a remover las gotitas colgantes que contribuyen a un error de transporte. Los primeros tubos 116 son elevados entonces fuera de las cavidades en la columna 2 y el apilador 102 mueve la placa 106 para colocar una tercera columna, es decir, la columna 3, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 3 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye algo de la muestra dispersada (40 µl) dentro de las cavidades en la columna 3 por medio de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (60 µl) dentro de las cavidades en la columna 3 por medio de los segundos tubos 118 sobre las puntas 116a de los primeros tubos 116. A continuación, los primeros tubos 116 son elevados fuera de las cavidades en la columna 3 y el apilador 102 mueve la placa 106 o la porción de rastreo 108 para colocar una cuarta columna, es decir, la columna 4, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 4 de la placa 106; la muestra dispersada (37 µl) es distribuida dentro de las cavidades en la columna 4 por medio de los primeros tubos 116 cuando el solvente (63 µl) es distribuido substancialmente de manera simultánea dentro de las cavidades en la columna 4 por medio de los segundos tubos 118. Los primeros tubos 116 son elevados entonces fuera de las cavidades en la columna 4 y el apilador 102 mueve la placa 106 sobre la porción de rastreo 108 para colocar una quinta columna, es decir, la columna 5, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 5 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye la muestra dispersada (33 µl) dentro de las cavidades en la columna 5 a través de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (67 µl) dentro de las cavidades en la columna 5 por medio de los segundos tubos 118. Los primeros tubos 116 son elevados fuera de las cavidades en la columna 5 y el apilador mueve la placa 106 para colocar una sexta columna, es decir, la columna 6, abajo de los primeros tubos 116. El segundo banco 122 de las bombas de jeringa aspira 500 µl de DMSO desde la alimentación del solvente. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 6 de la placa 106 y la siguiente "rebanada" de la muestra distribuida (24 µl) es distribuida hacia las cavidades en la columna 6 por medio de los primeros tubos 116. Substancialmente de manera simultánea, el segundo banco 122 distribuye el solvente (76 µl) dentro de las cavidades en la columna 6 por medio de los segundos tubos 118. A continuación, los primeros tubos 116 son elevados entonces fuera de las cavidades en la columna 6 y el apilador 102 mueve la placa 106 para colocar una séptima columna, es decir, la columna 7, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 7 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye la muestra dispersada (16 µl) dentro de las cavidades en la columna 7 por medio de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (84 µl) dentro de las cavidades en la columna 7 por medio de los segundos tubos 118. Los primeros tubos 116 son elevados entonces fuera de las cavidades en la columna 7 y el apilador 102 mueve la placa 106 para colocar una octava columna, es decir, la columna 8, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 8 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye la siguiente "rebanada" de la muestra dispersada (10.5 µl) dentro de las cavidades en la columna 8 por medio de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (89.5 µl) dentro de las cavidades en la columna 8 por medio de los segundos tubos 118. Los primeros tubos 116 son elevados fuera de las cavidades en la columna 8 y el apilador 102 mueve la placa 106 para colocar una novena columna, es decir, la columna 9, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 9 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye la muestra dispersada (6 µl) en las cavidades en la columna 9 por medio de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye substancialmente de manera simultánea el solvente (94 µl) hacia las cavidades en la columna 9 por medio de los segundos tubos 118. Finalmente, los primeros tubos 116 son elevados fuera de las cavidades en la columna 9 y el apilador 102 mueve la placa 106 para colocar una décima columna, es decir, la columna 10, abajo de los primeros tubos 116. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hasta una altura apropiada en las cavidades en la columna 10 de la placa 106. El primer banco 120 distribuye la muestra dispersada (3.2 µl) dentro de las cavidades en la columna 10 por medio de los primeros tubos 116 cuando el segundo banco 122 distribuye de manera substancialmente simultánea el solvente (96.8 µl) en las cavidades en la columna 10 por medio de los segundos tubos 118. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son elevadas fuera de las cavidades en la columna 10 y el apilador 102 mueve la placa 106 hasta el área de salida 110 del apilador 110. Una estación de lavado 126 es extendida entonces a través de la porción de rastreo 108 del apilador 102 y colocada debajo del colector 112. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hacia la estación de lavado 126 y todas las jeringas de tanto el primero como el segundo bancos 120, 122 de las bombas de jeringa son llenadas con el solvente y inundadas con el fluido cuatro veces. Los desechos en la estación de lavado son removidos por vacío (no mostrado) hasta un receptáculo de colección de los desechos (no mostrado) por medio de una línea de drenaje 128. Aunque los ejemplos provistos aquí efectúan la serie de diluciones a través de las columnas de los recipientes, también es posible que la serie de diluciones pueda ser efectuada a través de las hileras de recipientes. Además, aunque los ejemplos sugieren la aspiración de una mitad del volumen de la muestra en los recipientes, la invención permite la aspiración de suficiente muestra para repetir la etapa de distribución al menos una vez sin repetir la etapa de aspiración. Preferentemente, suficiente muestra es aspirada para permitir el complemento de la serie de diluciones sin aspirar muestra adicional y la presente invención ha sido utilizada para fabricar entre 1 y 40 etapas de dilución. Un ejemplo de un método de producción de una serie de diluciones en una placa de 384 cavidades utilizando el sistema 100 de acuerdo con la presente invención será descrito ahora. El intervalo de volumen total, por cavidad, para una placa de 384 cavidades es mucho más pequeño que para una cavidad de una placa de 96 cavidades, porque las cavidades son aproximadamente 4 veces más grandes en el formato de 96 cavidades (96 cavidades = 300 ul totales y 384 = 80 uL totales) . Muchas diluciones en serie pueden ser construidas, pero dos ejemplos son mostrados aquí: una serie de diluciones de 10 puntos y una serie de diluciones de 22 puntos . Para empezar una serie de diluciones de 10 puntos en una placa de 384 cavidades, la muestra es agregada a cada cavidad de la columna 1, (para un total de 16 muestras cuando una placa de 384 cavidades es de 16 hileras por 24 columnas) . En este ejemplo, la muestra también es agregada a cada cavidad en la columna 13 para un total de la placa de 32 muestras. Se debe señalar que los números de columna (es decir, columna 1, columna 13) pueden cambiar dependiendo del número y la colocación de las columnas de control utilizadas, si es que existe alguna. Las muestras en la columna 1 son diluidas entonces reduciendo las puntas 116a de los primeros tubos 116 en la columna 1 y aspirando la muestra en los primeros tubos 116, que han sido imprimados con el solvente. El conjunto de ocho puntas 116a está espaciado para una placa de 96 cavidades, lo cual significa que cada una de las puntas 116a es descendida dentro de cada una de las otras cavidades en la columna 1, por ejemplo, en las cavidades Al, Cl, El, Gl, II, Kl, Ml, 01. La serie de diluciones es creada entonces por la dilución de cada muestra a través de la placa. Por ejemplo, la muestra encontrada en la columna 1, hilera A (cavidad Al), será diluida en las cavidades A2 , A3 , A4, A5, A6, A7 , A8, A9, AlO. Las puntas 116a son lavadas entonces y el eje Y del colector 112 es desplazado para hacer descender las puntas hacia las cavidades alternas (por ejemplo, las cavidades Bl, Di, Fl, Hl, Jl, Ll , Ni, Pl) . La dilución es llevada a cabo entonces a través de la placa como se describió anteriormente. Este proceso es continuado utilizando la columna 13 como la columna de la fuente de la muestra para la segunda mitad de la placa. En esencia, este formato produce el mismo arreglo de la serie de diluciones que el formato de 96 cavidades, pero a una densidad 4X. Como se mencionó anteriormente, durante el complemento de la placa, ciertas columnas (las columnas 11, 12, 23 y 24 en este ejemplo) pueden ser el blanco para la adición subsiguiente de los controles de ensayo. El método puede diferir ligeramente para la serie de diluciones utilizando una placa de 384 cavidades (de aquella utilizada para una placa de 96 cavidades) porque, después de cada etapa de distribución, las puntas 116a pueden ser descendidas nuevamente para tocar la superficie del fluido en las cavidades para remover cualesquiera gotas sobre las puntas 116a. Para empezar una serie de diluciones de 22 puntos en una placa de 384 cavidades, la muestra es agregada a cada cavidad de la columna 1 (para un total de 16 muestras) . Las muestras en la columna uno son diluidas haciendo bajar las puntas 116a de los tubos 116 en la columna 1 para tener acceso a cada una de las otras cavidades, y las muestras son aspiradas hacia los tubos 116, diluyéndose las muestras por dispersión en los tubos 116. La placa de dilución es creada entonces por la distribución de la muestra dispersada/diluida a través de la placa en las columnas 2-22 de la placa de 384 cavidades. Se debe señalar que los números de la columna pueden cambiar dependiendo del número y la colocación de las columnas de control utilizadas, si es que existe alguna. En este ejemplo, las columnas 23 y 24 pueden ser el blanco izquierdo para la adición subsiguiente de los controles de ensayo. El proceso continúa con el lavado de las puntas 116a, el desplazamiento del colector 112 a lo largo del eje Y, y diluyendo las muestras en las cavidades que fueron perdidas o extraviadas la primera vez. La estación de lavado 126 es extendida entonces a través de la porción de rastreo 108 del apilador 102 y colocada debajo del colector 112. Las puntas 116a de los primeros tubos 116 son descendidas hacia la estación de lavado 126 y todas las jeringas de tanto el primero como el segundo bancos 120, 122 de las bombas de jeringa son llenadas con el solvente e inundadas dos veces. Los desechos en la estación de lavado son removidos por vacío hasta un receptáculo de colección de los desechos. Un método de producción de una serie de diluciones de acuerdo con la presente invención y el uso de un manipulador de líquidos comercial, convencional, tal como el aparato Tecan Génesis RS 200 serán descritos ahora. Como se describió previamente, los manipuladores de líquido comerciales, convencionales, no incluyen un segundo conducto. La ausencia de un segundo conducto requiere la pre-distribución del diluyente en la placa de microtitulación previo a la fabricación de las diluciones como lo opuesto a la distribución simultánea del diluyente con la muestra dispersada. Cuando se utilicen aquí, los términos "amortiguador", "solvente", y "diluyente" están propuestos para ser intercambiables. Para empezar, una placa de microtitulación es provista y una primera columna de cavidades incluye, por ejemplo, aproximadamente 100 µl de la muestra en cada cavidad. La cantidad de la muestra puede variar siempre que exista suficiente muestra para que sea aspirada y para complementar la serie de diluciones. La serie de diluciones deseada y el volumen final son seleccionados de una lista de protocolo sobre una computadora conectada al sistema. La computadora proporciona los parámetros apropiados a los motores que impulsan los bancos de las bombas de jeringa. Utilizando los primeros tubos 216 (véase la figura 8) , el solvente/amortiguador es transferido desde un depósito de suministro (no mostrado) hacia las columnas de las cavidades de la placa de microtitulación que contendrán la serie de diluciones (cavidades de destino) para que actúen como el diluyente. Por ejemplo, cada cavidad puede ser llenada con aproximadamente 99 µl hasta aproximadamente 100 µl del solvente/amortiguador. La cantidad real del solvente/amortiguador colocado en las cavidades de destino variará dependiendo de la dilución final deseada. Mientras mayor sea la dilución deseada, más grande será la cantidad de solvente/amortiguador que debe ser agregada a las cavidades de destino. Nuevamente utilizando los primeros tubos 216, el solvente/amortiguador es transferido desde el depósito de suministro hacia una columna de cavidades de tal modo que cada cavidad contenga, por ejemplo, aproximadamente 100 µl de solvente/amortiguador que va a ser utilizado como un enjuague o para lavar por sumergimiento el lado externo de los tubos 216. Se puede utilizar una cantidad mayor o menor del solvente/amortiguador cuando sea necesario. Para empezar la dilución, los primeros tubos 216 son imprimados por aspiración, por ejemplo, de aproximadamente 50 µl del diluyente en los tubos 216 desde el depósito de suministro. Dependiendo de la dilución deseada, se pueden aspirar diferentes cantidades del diluyente. A continuación, desde la primera columna de cavidades, la muestra es aspirada hacia los tubos 216, por ejemplo, aproximadamente 5 µl hasta aproximadamente 10 µl de la muestra son aspirados. La cantidad de la muestra aspirada dependerá del factor de dilución seleccionado. Cuando la muestra es aspirada hacia los tubos 216, la misma es diluida cuando la misma es dispersada en el solvente/amortiguador por el movimiento a través del diluyente en los primeros tubos 216. Subsiguientemente, una porción de la muestra dispersada (es decir, la muestra aspirada y el diluyente) es distribuida hacia una bandeja de desechos, por ejemplo, aproximadamente 10 µl hasta aproximadamente 15 µl son distribuidos hacia los desechos. La cantidad exacta distribuida hasta los desechos también variará dependiendo del factor de dilución seleccionado. Mientras más grande sea la dilución deseada, más grande será la cantidad de la muestra dispersada que será distribuida hasta los desechos. Después de la distribución de una porción de la muestra dispersada a los desechos, las puntas de los primeros tubos 216 son sumergidas en la columna de cavidades designada como una bandeja de enjuague y que contiene el solvente/amortiguador para lavar por enjuague la parte externa de los tubos 216 y cualesquiera gotas externas de la muestra/diluyente que pueden estar sobre el lado externo de los tubos 216. Después del enjuague, los tubos 216 distribuyen una porción de la muestra dispersada en la primera columna de las cavidades de destino para formar la primera columna de diluciones. Por ejemplo, entre aproximadamente 0.5 µl y aproximadamente 1.0 µl de la muestra dispersada pueden ser distribuidos dentro de cada cavidad en la primera columna de las cavidades de destino. Subsiguientemente, la etapa de distribución es repetida, por ejemplo tres veces, para crear cada dilución adicional en la serie de diluciones (es decir, desde 1 hasta n diluciones en la serie, en donde n = 4 en el ejemplo anterior) para crear diluciones adicionales en la serie de diluciones. Se debe señalar que n puede representar un número muy pequeño de diluciones o un número muy grande de diluciones. Después de crear la serie de diluciones, los tubos 216 son inundados y sus puntas son lavadas. Otras modalidades de la invención serán evidentes para aquellos expertos en el arte a partir de la consideración de la especificación y la práctica de la invención descrita aquí. Está propuesto que la especificación y los ejemplos sean considerados solamente como ejemplares, con el alcance y espíritu verdadero de la invención que están indicados por las siguientes reivindicaciones. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (31)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un método para crear una serie de diluciones, caracterizado porque comprende: proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra; aspirar al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente dentro de al menos un primer conducto imprimado con el solvente de tal modo que la muestra se disperse en el solvente; distribuir al menos una porción de la muestra dispersada desde al menos un primer conducto hacia al menos un segundo recipiente; y distribuir substancialmente de manera simultánea un solvente dentro de al menos un segundo recipiente desde al menos un segundo conducto.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque al menos un segundo conducto está colocado con relación al menos a un primer conducto de tal modo que el fluido que sale de al menos un segundo conducto sea dirigido alrededor de al menos una porción de la punta de al menos un primer conducto, y en donde la distribución substancialmente de manera simultánea de un solvente incluye permitir que el solvente fluya sobre al menos la porción de la punta de al menos un primer conducto .
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque al menos un primer conducto pasa a través de al menos un segundo conducto, y en donde la distribución substancialmente de manera simultánea de un solvente incluye permitir que el solvente fluya sobre una punta de al menos un primer conducto .
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende repetir las etapas de distribución y de distribución substancialmente de manera simultánea sin repetir la etapa de aspiración.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque aspirar al menos una porción de la muestra incluye aspirar una cantidad de la muestra suficiente para efectuar una serie de diluciones completa.
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la aspiración de al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un primer conducto imprimado con el solvente de tal modo que la muestra se disperse en el solvente, incluye que la muestra tome un perfil de flujo substancialménte parabólico cuando la misma se mueve a través de al menos un primer conducto.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la aspiración de al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un primer conducto imprimado con el solvente de tal modo que la muestra se disperse en el solvente, incluye dispersar al menos parcialmente la muestra en el solvente al menos por convección y difusión.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de distribución de una porción de la muestra dispersada es efectuada en un primer factor de dilución, y además comprende las etapas de: cambiar el factor de dilución; y de manera subsiguiente al cambio del factor de dilución, distribuir otra porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto hacia al menos un tercer recipiente.
9. 9. Un sistema para crear una serie de diluciones, caracterizado porque comprende: al menos un primer conducto configurado para aspirar y distribuir una muestra que va a ser diluida; una primera fuente de presión, configurada para preparar al menos un primer conducto con un solvente y configurada para aspirar una muestra dentro del primer conducto imprimado, en donde la primera fuente de presión proporciona condiciones de flujo laminar que provocan que la muestra se distribuya en el solvente en al menos un primer conducto; al menos una segundo conducto configurado para distribuir un solvente; una segunda fuente de presión para distribuir un solvente desde al menos un segundo conducto; y un controlador configurado para instruir a la primera y segunda fuentes de presión para distribuir la muestra aspirada y el solvente substancialmente al mismo tiempo .
10. 10. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque al menos un segundo conducto es colocado con relación al menos a un conducto de tal modo que el fluido que sale de al menos un segundo conducto sea dirigido alrededor de al menos una punta de al menos un primer conducto.
11. 11. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque al menos un primer conducto pasa a través de al menos un segundo conducto.
12. 12. El sistema de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque una punta de al menos un primer conducto se extiende abajo de una punta de al menos un segundo conducto, de tal modo que el fluido que sale de al menos un segundo conducto se mueva sobre al menos la punta de al menos un primer conducto.
13. 13. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque al menos un primer conducto incluye una pluralidad de primeros conductos y al menos un segundo conducto incluye una pluralidad de segundos conductos, y en donde cada primer conducto es encajado dentro de un segundo conducto respectivo.
14. 14. Un método de creación de una serie de diluciones, caracterizado porque comprende: proporcionar una pluralidad de recipientes; proporcionar una muestra en al menos un primer recipiente; aspirar al menos una porción de la muestra hacia al menos un primer conducto; permitir que la muestra aspirada se disperse en el solvente contenido dentro de al menos un primer conducto, en donde la dispersión de la muestra ocurre al menos por convección; distribuir una porción de la muestra dispersada desde al menos un primer conducto hacia al menos un segundo recipiente; y distribuir un solvente dentro de al menos el segundo recipiente desde al menos un segundo conducto.
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque además comprende repetir las etapas de distribuir una porción de la muestra dispersada y distribuir un solvente sin repetir la etapa de aspiración.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la repetición de las etapas de distribuir una porción de la muestra dispersada y distribuir un solvente sin repetir la etapa de aspiración incluye la repetición de las etapas una pluralidad de veces.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la etapa de permitir que la muestra aspirada se disperse en el solvente contenido dentro de al menos un conducto al menos por convección incluye además, dispersar al menos parcialmente la muestra en el solvente por difusión.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la etapa de permitir que la muestra aspirada se disperse en el solvente contenido dentro de al menos un conducto al menos por convección incluye que la muestra tome un perfil de flujo substancialmente parabólico cuando la misma se mueve a través de al menos un primer conducto .
19. 19. Un método para crear una serie de diluciones utilizando un manipulador de líquidos basado en una jeringa de bombeo impulsada por presión, caracterizado porque comprende : proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra y al menos un segundo recipiente incluye un diluyente; aspirar un diluyente en al menos un conducto; aspirar al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un conducto que contiene el diluyente aspirado de tal modo que la muestra se disperse en el diluyente; y distribuir al menos una porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto hacia al menos el segundo recipiente que contiene el diluyente para formar una dilución de la muestra.
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque además comprende repetir la etapa de distribución sin repetir las etapas de aspiración.
21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la repetición de la etapa de distribución sin repetir las etapas de aspiración incluye repetir la etapa de distribución una pluralidad de veces.
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque aspirar al menos una porción de la muestra incluye aspirar una cantidad de muestra suficiente para efectuar una serie de diluciones completa.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la aspiración de al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un conducto que contiene el diluyente aspirado de tal modo que la muestra se disperse en el diluyente, incluye que la muestra tome un perfil de flujo substancialmente parabólico cuando la misma se mueve a través de al menos un conducto.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la aspiración de al menos una porción de la muestra desde al menos el primer recipiente hacia al menos un conducto que contiene el diluyente aspirado de tal modo que la muestra se disperse en el diluyente, incluye dispersar al menos parcialmente la muestra en el diluyente al menos por convección y difusión.
25. 25. Un método de creación de una serie de diluciones utilizando un manipulador de líquidos a base de una jeringa de bombeo impulsada por presión, caracterizado porque comprende : proporcionar una pluralidad de recipientes, en donde al menos un primer recipiente incluye una muestra y al menos un segundo recipiente incluye un diluyente; aspirar al menos una porción de la muestra hacia al menos un conducto; permitir que la muestra aspirada se disperse en el diluyente contenido dentro de al menos un conducto; distribuir una primera porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto hacia un receptáculo para desecho; y distribuir una segunda porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto dentro de al menos el segundo recipiente.
26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque además comprende repetir la etapa de distribuir una segunda porción de la muestra dispersada sin repetir la etapa de aspiración.
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la aspiración de al menos una porción de la muestra incluye aspirar una cantidad de la muestra suficiente para repetir la etapa de distribución de al menos una segunda porción de la muestra dispersada al menos una vez sin repetir la etapa de aspiración.
28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la etapa de permitir que la muestra aspirada se disperse en el diluyente contenido dentro de al menos un conducto incluye dispersar al menos parcialmente la muestra en el diluyente por difusión.
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la etapa de permitir que la muestra aspirada se disperse en el diluyente contenido dentro de al menos un conducto incluye dispersar al menos parcialmente la muestra en el diluyente por convección.
30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la etapa de distribuir una segunda porción de la muestra dispersada es efectuada en un primer factor de dilución, y además comprende las etapas de: cambiar el factor de dilución; y de manera subsiguiente al cambio del factor de dilución, distribuir una tercera porción de la muestra dispersada desde al menos un conducto hacia al menos un tercer recipiente.
31. 31. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque además comprende aspirar el diluyente hacia al menos un conducto previo a la aspiración de la muestra.