MD4513C1 - Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci - Google Patents

Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci Download PDF

Info

Publication number
MD4513C1
MD4513C1 MDA20160126A MD20160126A MD4513C1 MD 4513 C1 MD4513 C1 MD 4513C1 MD A20160126 A MDA20160126 A MD A20160126A MD 20160126 A MD20160126 A MD 20160126A MD 4513 C1 MD4513 C1 MD 4513C1
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
cryopreservation
protective medium
spermatozoa
semen
ram
Prior art date
Application number
MDA20160126A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD4513B1 (ro
Inventor
Григорие ДАРИЙ
Василе ХАРЯ
Елена ЧИБОТАРУ
Нина БРАДУ
Ирина ДЖЕНДЖЕРА
Валериу РУДИК
Олег КИСЕЛИЦА
Татьяна КИРИЯК
Светлана ДЖУР
Original Assignee
Общественное Учреждение "Научно-Практический Институт Биотехнологий В Зоотехники И Ветеринарной Медицине"
Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общественное Учреждение "Научно-Практический Институт Биотехнологий В Зоотехники И Ветеринарной Медицине", Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы filed Critical Общественное Учреждение "Научно-Практический Институт Биотехнологий В Зоотехники И Ветеринарной Медицине"
Priority to MDA20160126A priority Critical patent/MD4513C1/ro
Publication of MD4513B1 publication Critical patent/MD4513B1/ro
Publication of MD4513C1 publication Critical patent/MD4513C1/ro

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la criobiologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci.Mediul de protecţie, conform invenţiei, conţine 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 7 ml glicerină, 0,05 mg antibiotic Spermosan-3 de 50 mii unităţi, 5…10 ml soluţie de BioR de 5 mg/ml şi apă bidistilată până la 100 ml.Rezultatul constă în păstrarea parametrilor calitativi ai spermatozoizilor după crioconservare şi decongelare.

Description

Invenţia se referă la criobiologie, şi anume la un mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci.
Invenţia poate fi aplicată pentru crioconservarea, păstrarea, studierea şi utilizarea eficientă a genofondului animal autohton de interes ştiinţific şi biotehnologic.
Sunt cunoscute medii de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci (ГЦЖ) ce conţin glucoză, citrat de sodiu, gălbenuş de ou şi antibiotice [ГОСТ 14746-69. Среда глюкозо-цитратно-желточная для хранения спермы (ГЦЖ)].
Însă, neajunsul acestor medii de protecţie constă în mobilitatea şi mişcarea rectilinie scăzută a spermatozoizilor. Este demonstrat că crioconservarea afectează mobilitatea şi capacitatea de fecundare a spermatozoizilor, reduce fuziunea intercelulară şi rata penetrării ovocitelor.
Se cunoaşte tehnica de congelare cu mediul LEY care conţine lactoză, gălbenuş de ou, glicerol şi Orvus es Paste [Westendorf P., L. Richter, H. Treu, 1975, Deutsche Tierarzt. Wschr., 82, 261-267]. S-a demonstrat că speciile de oxigen reactive (ROS) blochează mobilitatea şi metabolismul oxidativ al spermatozoizilor, reducând fuziunea intergametică şi rata penetrării ovocitelor [Bailey J.L. et al. 2000 Jurnal of Andrology, 21, p.1-7]. Dintre antioxidanţii studiaţi cele mai bune efecte asupra calităţii spermatoziilor crioconservaţi le are vitamina E sau analogi ai acesteia, rezultatele obţinute indicând o îmbunătăţire a mobilităţii, viabilităţii şi a integrităţii acrosomale [Breininger E. et al. 2005, Theriogenology, 63, p. 2126-2135].
Se cunosc avantajele însămânţării artificiale cu spermă congelată la animalele de interes zootehnic, însă la berbeci e complicat de a obţine o viabilitate şi fecunditate acceptabilă a spermatozoizilor comparativ cu alte specii.
Cea mai apropiată soluţie pentru mediul de protecţie revendicat pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci este mediul cu următoarea compoziţie: 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 5 ml glicerină, 0,05 mg antibiotice - 50 mii de unităţi, până la 100 ml apă distilată [1].
La crioconservarea materialului seminal de berbeci pe acest mediu de protecţie, în condiţii proxime, numărul spermatozoizilor mobili cu mişcare rectilinie după crioconservare şi decongelare constituie 42,2±9,5% şi, respectiv, 19,7±6,6%.
Dezavantajul acestui mediu constă în faptul că compoziţia chimică a mediului nu asigură o protecţie adecvată materialului seminal de berbeci. Din cauza deteriorării integrităţii membranelor şi degradării ADN-ului pe durata crioconservării şi decongelării, scade esenţial numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie, ce diminuează calitatea spermei.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci care să asigure sporirea numărului spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie după crioconservare şi decongelare.
Mediul de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci, conform invenţiei, conţine 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 7 ml glicerină, 0,05 mg antibiotic Spermosan-3 de 50 mii unităţi, 5…10 ml soluţie de BioR de 5 mg/ml şi apă bidistilată până la 100 ml.
Antibioticul (Spermosan) - 50 mii de unităţi [ГОСТ-22636-77. Спермосан-3. Технические условия. Denumirea eng. Spermosan-3. Specifications (reţeta nr.5)].
Preparatul BioR (5 mg/ml) [MD 545 F1 1996.05.31].
Efectul pozitiv se datorează suplinirii mediului de protecţie cunoscut cu BioR, care manifestă acţiune antioxidantă, de stabilizare a membranelor celulare şi de stimulare a regenerării ţesuturilor, ce oferă spermatozoizilor o protecţie suplimentară, contribuind astfel la majorarea numărului spermatozoizilor mobili şi a celor cu mişcare rectilinie după crioconservare şi decongelare. Substanţa dată influenţează pozitiv asupra parametrilor calitativi ai spermatozoizilor.
Rezultatul constă în păstrarea parametrilor calitativi ai spermatozoizilor după crioconservare şi decongelare, şi anume sporirea cu 22,0…37,4% a numărului spermatozoizilor mobili şi cu 16,7…35,5% a celor cu mişcare rectilinie faţă de cea mai apropiată soluţie (tab.1), datorită includerii în mediul crioprotector a BioR-ului, ce conţine amestec de aminoacizi şi oligopeptide, posedă acţiune antioxidantă, de stabilizare a membranelor celulare şi de stimulare a regenerării ţesuturilor, ce anihilează efectul negativ al temperaturilor joase şi formelor reactive de oxigen, care afectează spermatozoizii în timpul crioconservării şi decongelării.
Implementarea invenţiei va permite:
- păstrarea eficientă şi durabilă în azot lichid a materialului seminal de berbeci cu menţinerea fecundităţii, funcţionalităţii şi morfologiei spermatozoizilor la parametrii optimi;
- utilizarea materialului seminal crioconservat pentru crearea băncilor de spermă de berbeci din rase autohtone;
- folosirea materialului seminal crioconservat autohton în biotehnologiile de reproducţie in vitro, în vederea producerii embrionilor;
- producerea şi comercializarea materialului seminal de berbeci în Republica Moldova.
Exemple de realizare a invenţiei
Exemplul 1
Se recoltează şi se analizează materialul seminal, fiecare probă constituind ejaculat recoltat de la berbeci reproducători. Materialul seminal se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă: 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 7 ml glicerină, 0,05 mg antibiotic (Spermosan-3) - 50 mii de unităţi, 5…7 %/V BioR (5 mg/ml), apă bidistilată până la 100 ml. Suspensia obţinută cu activitatea spermatozoizilor de minim 80% se divizează câte 0,2 ml pe plăci de fluorpolimer şi timp de 1 min se prelucrează cu vapori de azot. Probele se congelează brusc în formă de granule la temperatura de minus 196°C. Decongelarea probelor se realizează în fiole sterile pe baia de apă la +42°C, timp de 15 s. După decongelare materialul seminal se păstrează în termostat la temperatura de +37°C şi la anumite intervale de timp (după necesitate) se apreciază numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie [Замораживание и использование спермы баранов-производителей (рекомендации). Под ред. Г. Зайцева. Москва, Агропромиздат, 1989, р. 19] cu ajutorul programului ”CEROS” [Version 12 CEROS - Sperm Analysis System. Hamilton Thorne Biosciences. suport@hamiltonthorne.com].
În varianta martor numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie este de 42,2±9,5% şi, respectiv, 19,7±6,6%, iar în varianta propusă de 51,5...58,0% şi, respectiv, 24,0...26,3%, adică cu 22,0...37,4% şi, respectiv, 21,8...33,5% mai mult faţă de martor.
Exemplul 2
Se recoltează şi se analizează materialul seminal, fiecare probă constituind ejaculat recoltat de la berbeci reproducători. Materialul seminal se transferă în mediul de protecţie lichid cu următoarea componenţă: 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 7 ml glicerină, 0,05 mg antibiotic (Spermosan-3) - 50 mii de unităţi, 8…10 %/V BioR (5 mg/ml), apă bidistilată până la 100 ml. Suspensia obţinută cu activitatea spermatozoizilor de minim 80% se divizează câte 0,2 ml pe plăci de fluorpolimer şi timp de 1 min se prelucrează cu vapori de azot. Probele se congelează brusc în formă de granule la temperatura de -196°C. Decongelarea probelor se realizează în fiole sterile pe baia de apă la +42°C, timp de 15 s. După decongelare materialul seminal se păstrează în termostat la temperatura de +37°C şi la anumite intervale de timp (după necesitate) se apreciază numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie [Замораживание и использование спермы баранов-производителей (рекомендации). Под ред. Г. Зайцева. Москва, Агропромиздат, 1989, р. 19] cu ajutorul programului ”CEROS” [Version 12 CEROS - Sperm Analysis System. Hamilton Thorne Biosciences. suport@hamiltonthorne.com].
În varianta martor numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie este de 42,2±9,5% şi, respectiv, 19,7±6,6%, iar în varianta propusă de 55,0...56,0% şi, respectiv, 23,0...26,7%, adică cu 30,3...32,7% şi, respectiv, 16,7...35,5% mai mult faţă de martor.
Numărul spermatozoizilor mobili şi al celor cu mişcare rectilinie se exprimă în procente faţă de valorile iniţiale.
Tabel 1
Numărul spermatozoizilor de berbec mobili şi al celor cu mişcare rectilinie după crioconservare şi decongelare pe mediul de protecţie cu BioR (5 mg/ml) în diferite concentraţii
Spermatozoizi mobili, % Spermatozoizi cu mişcare rectilinie, % Mediu + BioR (5 mg/ml) în diferite concentraţii, (%/V) Martor 42,2±9,5 19,7±6,6 1% 45,5±13,5 16,0±6,0 2% 55,3±5,7 22,7±3,3 3% 49,0±23,0 17,5±9,5 4% 52,3±10,4 21,3±7,6 5% 53,0±12,0 24,0±7,0 6% 58,0±2,1 26,3±2,7 7% 51,5±4,5 24,5±0,5 8% 55,0±6,1 26,7±5,6 9% 56,0±7,0 23,0±3,0 10% 56,0±4,4 26,7±8,1
1. Милованов В. К. Биология воспроизведения и исскусственное осеменение сельскохозяйственых животных. Москва, Издательство сельскохозяйственой литературы, 1962, р. 499-503

Claims (1)

  1. Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci, care conţine 0,8 g glucoză, 2,8 g citrat de sodiu, 20 ml gălbenuş de ou, 7 ml glicerină, 0,05 mg antibiotic Spermosan-3 de 50 mii unităţi, 5…10 ml soluţie de BioR de 5 mg/ml şi apă bidistilată până la 100 ml.
MDA20160126A 2016-11-21 2016-11-21 Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci MD4513C1 (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160126A MD4513C1 (ro) 2016-11-21 2016-11-21 Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20160126A MD4513C1 (ro) 2016-11-21 2016-11-21 Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD4513B1 MD4513B1 (ro) 2017-09-30
MD4513C1 true MD4513C1 (ro) 2018-04-30

Family

ID=59974072

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20160126A MD4513C1 (ro) 2016-11-21 2016-11-21 Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD4513C1 (ro)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1540817A1 (ru) * 1987-12-08 1990-02-07 Институт Зоологии И Физиологии Ан Мсср Криозащитна среда
SU1708327A1 (ru) * 1990-02-08 1992-01-30 Институт биохимии АН БССР Среда дл разбавлени спермы хр ков
JPH05328964A (ja) * 1991-05-16 1993-12-14 Nippon Shinyaku Co Ltd 培 地
EA200200593A1 (ru) * 1999-11-24 2002-12-26 Кси, Инк. Способ криоконсервирования отобранных клеток спермы
MD3035F1 (ro) * 2005-07-18 2006-04-30 Institutul National Pentru Zootehnie Si Medicina Veterinara Mediu pentru diluarea materialului seminal de vier
UA55196U (ru) * 2010-05-18 2010-12-10 Институт Разведения И Генетики Животных Уаан Способ приготовления желтковой криопротекторной составляющей среды для криоконсервации спермы жеребцов
RO127804A0 (ro) * 2011-12-06 2012-09-28 Universitatea"Ovidius" Constanţa Produs seminal refrigerat de berbec şi ţap cu viabilitate de 5 zile
RO128692A0 (ro) * 2012-09-26 2013-08-30 Universitatea De Ştiinţe Agricole Şi Medicină Veterinară Din Cluj-Napoca Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1540817A1 (ru) * 1987-12-08 1990-02-07 Институт Зоологии И Физиологии Ан Мсср Криозащитна среда
SU1708327A1 (ru) * 1990-02-08 1992-01-30 Институт биохимии АН БССР Среда дл разбавлени спермы хр ков
JPH05328964A (ja) * 1991-05-16 1993-12-14 Nippon Shinyaku Co Ltd 培 地
EA200200593A1 (ru) * 1999-11-24 2002-12-26 Кси, Инк. Способ криоконсервирования отобранных клеток спермы
MD3035F1 (ro) * 2005-07-18 2006-04-30 Institutul National Pentru Zootehnie Si Medicina Veterinara Mediu pentru diluarea materialului seminal de vier
UA55196U (ru) * 2010-05-18 2010-12-10 Институт Разведения И Генетики Животных Уаан Способ приготовления желтковой криопротекторной составляющей среды для криоконсервации спермы жеребцов
RO127804A0 (ro) * 2011-12-06 2012-09-28 Universitatea"Ovidius" Constanţa Produs seminal refrigerat de berbec şi ţap cu viabilitate de 5 zile
RO128692A0 (ro) * 2012-09-26 2013-08-30 Universitatea De Ştiinţe Agricole Şi Medicină Veterinară Din Cluj-Napoca Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bailey J.L. et al. 2000 Jurnal of Andrology, 21, p.1-7 *
Breininger E. et al. 2005, Theriogenology, 63, p. 2126-2135 *
Version 12 CEROS - Sperm Analysis System. Hamilton Thorne Biosciences. suport@hamiltonthorne.com *
Westendorf P., L. Richter, H. Treu, 1975, Deutsche Tierarzt. Wschr., 82, 261-267 *
Замораживание и использование спермы баранов-производителей (рекомендации). Под ред. Г. Зайцева. Москва. Агропромиздат, 1989, р. 19 *
Милованов В. К. Биология воспроизведения и исскусственное осеменение сельскохозяйственых животных. Москва, Издательство сельскохозяйственой литературы, 1962, р. 499-503 *

Also Published As

Publication number Publication date
MD4513B1 (ro) 2017-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bucak et al. Protective effect of taurine, glutathione and trehalose on the liquid storage of ram semen
Grötter et al. Recent advances in bovine sperm cryopreservation techniques with a focus on sperm post‐thaw quality optimization
Bucak et al. The influence of trehalose, taurine, cysteamine and hyaluronan on ram semen: microscopic and oxidative stress parameters after freeze–thawing process
Moradi et al. Royal Jelly improves the sperm parameters of ram semen during liquid storage and serves as an antioxidant source
Buranaamnuay Protocols for sperm cryopreservation in the domestic cat: A review
Tuncer et al. Effect of glutamine and sugars after bull spermatozoa cryopreservation
Athurupana et al. Trehalose in glycerol-free freezing extender enhances post-thaw survival of boar spermatozoa
Zhang et al. Effects of trehalose supplementation on cell viability and oxidative stress variables in frozen-thawed bovine calf testicular tissue
Mphaphathi et al. Comparison of slow freezing and vitrification methods for Venda cockerel’s spermatozoa
Sarıözkan et al. The effects of different sugars on motility, morphology and DNA damage during the liquid storage of rat epididymal sperm at 4 C
Uysal et al. The role of different trehalose concentrations and cooling rates in freezing of ram semen
Kubovicova et al. Factors affecting rabbit sperm cryopreservation: a mini-review
Kutluyer et al. Cryopreservation of goldfish (Carassius auratus) spermatozoa: Effects of extender supplemented with taurine on sperm motility and DNA damage
Aljaser Cryopreservation Methods and Frontiers in the Art of Freezing
Proaño et al. In vitro fertilizations with cryopreserved sperm of Rhinella marina (Anura: Bufonidae) in Ecuador
Elkhawagah Effect of honey supplementation on Egyptian buffalo semen
Mehr et al. Effect of different levels of l-Glutamine and glycerol on freezing of ram spermatozoa
De Leon et al. Cryopreservation of immature equine oocytes, comparing a solid surface vitrification process with open pulled straws and the use of a synthetic ice blocker
Mphaphathi et al. The current status of semen and oocytes cryopreservation
Stănescu et al. Freezing of dog’s sperm: a review
Verma et al. Methionine as a semen additive to improve Murrah buffalo (Bubalus bubalis) semen cryopreservation
El-Nady et al. Influence of Honey Addition As a Natural Energy Source On Cooled Camel Spermatozoa
Arunpandian et al. Impact of Cysteine as a Semen Additive on Mitigating the Decline in Sperm Quality due to Summer Stress in Riverine Buffaloes (Bubalus bubalis).
KR101413081B1 (ko) 조류 정자의 보존용 조성물 및 이를 이용한 정자의 보존방법
Shaikh et al. 4. TREHALOSE AS SEMEN DILUENT ADDITIVE FOR CRYOPRESERVATION OF KANKREJ BULL’ S SEMEN by KQ SHAIKH, HC NAKHASHI1, BN SUTHAR2, PT SUTARIA3 AND VK SHARMA4

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued
KA4A Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees