RO128692A0 - Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier - Google Patents
Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier Download PDFInfo
- Publication number
- RO128692A0 RO128692A0 ROA201200686A RO201200686A RO128692A0 RO 128692 A0 RO128692 A0 RO 128692A0 RO A201200686 A ROA201200686 A RO A201200686A RO 201200686 A RO201200686 A RO 201200686A RO 128692 A0 RO128692 A0 RO 128692A0
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- medium
- freezing
- sperm
- freezing medium
- glycerol
- Prior art date
Links
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 title abstract description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 15
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 7
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 4
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 4
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 claims 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 6
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 6
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008723 osmotic stress Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004783 oxidative metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie se referă la un mediu de congelare a materialului seminal de vier, destinat conservării de lungă durată, prin congelare. Mediul conform invenţiei este alcătuit din mediul A, care conţine 20% gălbenuş de ou în soluţie 11% lactoză, 100 UI/ml penicilină şi 100 mg/ml streptomicină, şi mediul B, având aceeaşi compoziţie, la care se adaugă 9% glicerol, 1,5% Equex STM, 200 μM acid ascorbic şi 400 μM Trolox.
Description
Invenția se referă la un „mediu de congelare pentru materialul seminal de vier”, utilizat în vederea conservării de lungă durată cu păstrarea principalilor parametrii morfologici și funcționali optimi fecundației in vivo și in vitro.
Se cunosc avantajele însămânțării artificiale (IA) cu spermă congelată la animalele de fermă, însă în ciuda eforturilor de a obține o fertilitate și o prolificitate acceptabilă rezultatele sunt consecvent mai scăzute la suine în comparație cu alte specii. Factorul limitant al succesului aplicării crioconservării în programele comerciale de IA la suine este reprezentat de diminuarea calității spermei post-congelare datorită socului termic, stresului osmotic, formării cristalelor de gheață, alterării integrității membranelor și a receptorilor, sau degradării ADN-ului. Dacă la acestea se adaugă predispoziția spermatozoizilor de vier la degradare/stres oxidativ datorată conținutului ridicat de acizi grași nesaturați și fosfolipide, nivelul relativ scăzut de antioxidanți din plasma seminală, efectul oxidativ a crioconservării și amplificarea efectului nociv al peroxidului de hidrogen în prezența gălbenușului de ou din diluant, rezultă o reală problemă reprezentată de speciile de oxigen reactiv (ROS).
în prezent se cunoaște și se aplică tehnica de congelare descrisă de Westendorf și modificată de diferiți autori, cu mediul „LEY” care conține lactoză, gălbenuș de ou, glicerol și Orvus es Paste (Westendorf P., L. Richter, H. Treu, 1975, Deutsche Tierarzt. Wschr., 82: 261-267), fără a atinge pragul comercial datorită problemelor menționate. în scopul reducerii acestora, adăugarea de antioxidanți la mediile de congelare a spermatozoizilor are efecte benefice, stresul oxidativ fiind considerat un factor major al infertilității, ca rezultat al dezechilibrului dintre ROS și antioxidanți. S-a demonstrat că ROS blochează mobilitatea și metabolismul oxidativ al spermatozoizilor, reducând totodată fuziunea inter-gametică și rata penetrării ovocitelor (Bailey J.L. et al. 2000, Journal of Andrology, 21, 1-7). Dintre antioxidanții studiați cele mai remarcabile efecte asupra calității spermatozoizilor de vier crioconservați le are vitamina E sau analogi ai acesteia, rezultatele obținute indicând o îmbunătățire a procentului mobilității, viabilității și a integrității acrosomale (Peria F.J. et al. 2004, Zigote, 12: 117-124; Breininger E. et al. 2005, Theriogenology, 63: 2126-2135; Satorre M.M. et al. 2007, Theriogenology, 68:
958-965; Yeon-Ji Jeong et al. 2009, Cryobiology, 58: 181-189).
/ ’Â .
1 ;n ·«“ « · '·· > Z'· Ί Ί <’·
T2 RECTORATEA fi fi
Ο 1 2 - Ο Ο 5 8 6 - 2 6 -09- 2012
Invenția constă în utilizarea unui amestec specific de antioxidanți care rezolvă problema tehnică de echilibrare a ROS din sperma crioconservată, cu efecte pozitive asupra parametrilor calitativi ai spermatozoizilor, crescând fertilitatea și prolificitatea consecutiv IA. Mediul de congelare cu acid ascorbic (vitamina C) și Trolox (analog al vitaminei E în formă hidrosolubilă) oferă o protecție spermatozoizilor prin detoxifierea și reducerea stresului oxidativ. Concentrațiile acestor antioxidanți permit creșterea procentului viabilității și mobilității totale și rectilinii, protejează membranele spermatice și acrozomale, precum și integritatea ADN-ului.
Avantajele care se pot obține în urma aplicării invenției se regăsesc în:
- conservarea pe timp nelimitat, în azot lichid, a materialului spermatic de vier cu păstrarea calității morfologice și funcționale în parametrii optimi;
- utilizarea materialului spermatic crioconservat pentru întocmirea băncilor de germoplasmă la suine;
- folosirea materialului spermatic crioconservat în IA pe scară largă și în operațiunile de import-export (la nivel comercial);
- utilizarea materialului spermatic crioconservat în biotehnologiile de reproducție precum fecundația in vitro (FIV) și injecția intracitoplasmatică a spermatozoizilor (ICSI) în vederea producerii in vitro a embrionilor suini.
Mediul de congelare cuprinde mediul A și mediul B. Pentru constituirea mediului A se cântăresc 8,8 g lactoză și se adaugă apă pură până se obțin 80 ml (soluție 11 % lactoză) la care se adaugă 20 ml gălbenuș de ou proaspăt, 10.000 UI Penicilină și 10 mg Streptomicină. Mediul astfel obținut se utilizează atât pentru diluarea spermatozoizilor, cât și pentru prepararea mediului B. Pentru producerea a 100 ml mediu B, în 89 ml mediu A se adaugă 9 ml glicerol, 1,5 ml Equex STM (echivalent Orvus es Paste), 200 μΜ acid ascorbic și 400 μΜ Trolox. După recoltarea și analiza materialului seminal, aceasta se spală prin centrifugare, iar depozitul se resuspendă în părți egale în mediul A, apoi în mediul B (astfel încât concentrația finală a spermatozoizilor să fie de 1 x 109 per ml, iar cea a glicerolului de 3 %), se ambalează în paiete de 0,5 ml și se congelează conform protocolului descris de Westendorf (1975) și modificat de diferiți autori. Analiza calitativă a invenției a presupus efectuarea a două experimente de evaluare in vitro și in vivo a calității morfo-funcționale a spermatozoizilor.
(V 2 Ο 1 2 - O O s 8 6 - 2 6 -09- 2012
Pentru aceasta au fost prelucrate prin congelare un număr de 25 ejaculate, decongelarea realizându-se într-o baie marină la 50°C timp de 12 secunde. în primul experiment, după decongelare spermatozoizii au fost păstrați la termostat la 37°C timp de 30 minute, după care s-au determinat următorii parametrii: mobilitatea, integritatea membranei plasmatice și acrozomală. Potrivit rezultatelor, mobilitatea medie a spermatozoizilor post-congelare a fost de 63,62% în timp ce integritatea membranei plasmatice a fost de 33,5% iar cea acrozomală de 78,75%.
Al doilea experiment privind evaluarea in vivo prin însămânțare artificială a scroafelor cu doze reconstituite din materialul seminal crioconservat în șase paiete și diluat în 100 ml diluant BTS (având o concentrație de 3 x 109 spermatozoizi per doză), a condus la obținerea unui rate a fecundației de 80% și a unei prolificități medii de 8,25 purcei per scroafă.
Invenția poate fi utilizată pentru extinderea IA la suine cu material seminal congelat, permițând întreținerea în efectiv a unui număr mai mic de vieri și astfel un management mai eficient al sectorului industrial de creștere. Totodată se eficientizează comerțul internațional și fluxul de gene de mare valoare. în ameliorare, prin crioconservarea materialului seminal putem crește intervalul dintre generații al unor vieri utilizând spermatozoizii acestora mulți ani chiar după moartea lor și reducând astfel rata consangvinizării. Nu în ultimul rând invenția stimulează crearea și/sau dezvoltarea unor bănci de gene, prin intervenția directă asupra funcționalității etapei finale a acesteia.
Claims (1)
- REVENDICĂRIMediul de congelare a materialului seminal de vier care conține lactoză, gălbenuș de ou, glicerol, Orvus es Paste, vitamina C și vitamina E și este caracterizat prin aceea că este constituit din mediul A având următoarea compoziție: 80 ml soluție 11% lactoză în apă pură, 20 ml gălbenuș de ou, 10000 Ul Penicilină, 10 mg Streptomicină; și mediul B, având următoarea compoziție: 89 ml mediu A, 9 ml glicerol, 1,5 ml Equex STM (echivalent Orvus es Paste), 200 μΜ acid ascorbic și 400 μΜ Trolox (analog al vitaminei E).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200686A RO128692A0 (ro) | 2012-09-26 | 2012-09-26 | Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200686A RO128692A0 (ro) | 2012-09-26 | 2012-09-26 | Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO128692A0 true RO128692A0 (ro) | 2013-08-30 |
Family
ID=49029990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201200686A RO128692A0 (ro) | 2012-09-26 | 2012-09-26 | Mediu de congelare pentru materialul seminal de vier |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO128692A0 (ro) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4513C1 (ro) * | 2016-11-21 | 2018-04-30 | Общественное Учреждение "Научно-Практический Институт Биотехнологий В Зоотехники И Ветеринарной Медицине" | Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci |
-
2012
- 2012-09-26 RO ROA201200686A patent/RO128692A0/ro unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4513C1 (ro) * | 2016-11-21 | 2018-04-30 | Общественное Учреждение "Научно-Практический Институт Биотехнологий В Зоотехники И Ветеринарной Медицине" | Mediu de protecţie pentru crioconservarea materialului seminal de berbeci |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sun et al. | Poultry genetic heritage cryopreservation and reconstruction: advancement and future challenges | |
| Bucak et al. | Protective effect of taurine, glutathione and trehalose on the liquid storage of ram semen | |
| Hiemstra et al. | The potential of cryopreservation and reproductive technologies for animal genetic resources conservation strategies. | |
| Prieto et al. | Sperm cryopreservation in wild animals | |
| Amini et al. | Effects of supplementation of Tris-egg yolk extender with royal jelly on chilled and frozen-thawed ram semen characteristics | |
| Moghbeli et al. | Effect of sperm concentration on characteristics and fertilization capacity of rooster sperm frozen in the presence of the antioxidants catalase and vitamin E | |
| Mphaphathi et al. | Comparison of slow freezing and vitrification methods for Venda cockerel’s spermatozoa | |
| Sarıözkan et al. | The effects of different sugars on motility, morphology and DNA damage during the liquid storage of rat epididymal sperm at 4 C | |
| CN103141471B (zh) | 一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制方法 | |
| Silva et al. | Cryopreservation of collared peccaries (Tayassu tajacu) semen using a powdered coconut water (ACP-116c) based extender plus various concentrations of egg yolk and glycerol | |
| Rakha et al. | Comparison of extenders for liquid storage of Indian Red Jungle Fowl (Gallus gallus murghi) spermatozoa | |
| Zarepourfard et al. | Pomegranate seed in diet, affects sperm parameters of cloned goats following freezing-thawing | |
| Viudes-De-Castro et al. | Effect of freezing extender composition and male line on semen traits and reproductive performance in rabbits | |
| O’Brien et al. | Preservation of beluga (Delphinapterus leucas) spermatozoa using a trehalose-based cryodiluent and directional freezing technology | |
| Valdivia et al. | Rescue and conservation of male adult alpacas (Vicugna pacos) based on spermatogonial stem cell biotechnology using atomized Black Maca as a supplement of cryopreservation medium | |
| López-Saucedo et al. | Sperm characteristics and heterologous in vitro fertilisation capacity of Iberian ibex (Capra pyrenaica) epididymal sperm, frozen in the presence of the enzymatic antioxidant catalase | |
| KR101546487B1 (ko) | 저밀도 지질단백질과 항산화제를 포함하는 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
| Tirpak et al. | Effect of taurine on bovine spermatozoa motility parameters following cryopreservation | |
| Taskin et al. | Effect of different extenders on sperm motility and vitality in goose semen cryopreservation | |
| Han et al. | Testicular tissue cryopreservation and transplantation as a strategy for feline conservation: a review of research advances | |
| Ramukhithi et al. | Cryopreservation of South African indigenous goat semen | |
| Perumal et al. | Effect of addition of trehalose on the liquid storage (5 C) of mithun (Bos frontalis) semen | |
| Sonseeda et al. | Effects of sericin supplementation on the sperm survival of cooled stored chicken semen | |
| Xu et al. | Slow-controlled freezing versus speed-cooling for cryopreservation of whole guinea pig ovaries | |
| Shaikh et al. | 4. TREHALOSE AS SEMEN DILUENT ADDITIVE FOR CRYOPRESERVATION OF KANKREJ BULL’ S SEMEN by KQ SHAIKH, HC NAKHASHI1, BN SUTHAR2, PT SUTARIA3 AND VK SHARMA4 |