MD1835Z - Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27 - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la microbiologie şi biotehnologie, în particular un mediu de cultivare a tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum, ce posedă proprietăţi antimicrobiene şi fitostimulatoare şi poate fi utilizată în agricultură pentru protecţia biologică şi pentru stimularea plantelor de cultură.Mediul nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27, conform invenţiei, conţine, g/L: sirop de porumb 20,0, glucoză 10,0, KH2PO4 1,0, MgSO4x7H2O 1,0, NaNO3 1,0, CaCO3 1,0, apă restul, cu pH 6,0-6,2.Rezultatul tehnic al invenţiei constă în reducerea duratei de cultivare a tulpinii şi obţinerea unui biopreparat cu proprietăţi antifungice şi stimulatoare mai pronunţate.

Description

Invenţia se referă la microbiologie şi biotehnologie, în particular un mediu de cultivare a tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum, ce posedă proprietăţi antimicrobiene şi fitostimulatoare şi poate fi utilizată în agricultură pentru protecţia biologică şi pentru stimularea plantelor de cultură.

Este cunoscut mediul nutritiv de cultivare submersă a tulpinii de fungi Trichoderema sp. MG-97, producătoare de trihodermin, care conţine, g/L: zaharoză 25,4; extract de porumb 31,8; KH2PO4 3,14; MgSO4x7H2O 0,6; apă restul [1]. Cultivarea se efectuează pe mediul solid timp de 15 zile la temperatura de 28°C, apoi pelicula micelială obţinută se usucă şi se mărunţeşte până la forma de praf.

Dezavantajul acestui mediu constă în conţinutul de zaharoză, preţul căreia este înalt, perioada îndelungată de cultivare a tulpinii, numărul impunător de etape pentru obţinerea preparatului şi forma acestuia (praf), care este greu de utilizat.

Este cunoscut mediul nutritiv de cultivare submersă a tulpinii de fungi Trichoderma virens CNMN-FD-13, ce posedă proprietăţi antifungice faţă de un spectru mai larg de fitopatogeni, care conţine, g/L: sirop de glucoză 20,0; zaharoză 10,0; KH2PO4 1,0; MgSO4x7H2O 1,0; NaNO3 1,0; extract de drojdii 10,0; CaCO3 2,0; apă restul; pH 5,5-6,0, cultivarea timp de 5 zile la temperatura de 28-30°C cu agitare continuă [2].

Dezavantajul acestui mediu nutritiv constă în componenţa acestuia ce conţine sirop de glucoză, extract de drojdii şi zaharoză, care sunt costisitoare şi durata lungă de cultivare a tulpinii.

În calitate de soluţie proximă s-a utilizat mediul nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14, ce posedă proprietăţi antifungice şi fitostimulatoare, care conţine, g/L: melasă de sfeclă 20,0; zaharoză 10,0; KH2PO4 2,0; MgSO4x7H2O 1,0; NaNO3 2,0; CaCO3 2,0; apă restul; pH 5,5 - 6,0 [3].

Biopreparatul obţinut la cultivarea submersă a tulpinii Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27 pe mediul menţionat, la temperatura de 28-30°C, în condiţii de agitare continuă, manifestă cea mai înaltă activitate antifungică după 4 zile de cultivare faţă de Fusarium sporotrichiella şi Botrytis cinerea, diametrul zonei de inhibiţie constituind respectiv 27,0 mm şi 40,3 mm, iar faţă de Sclerotinia sclerotiorum şi Alternaria alternata după 6 zile de cultivare. De asemenea, biopreparatul stimulează creşterea plantulelor de floarea soarelui.

Dezavantajul soluţiei proxime constă în preţul înalt al mediului, ce conţine zaharoză, melasă, o cantitate mare de săruri minerale, dar şi durata lungă de cultivare de 4-6 zile.

Problema tehnică pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în micşorarea duratei de cultivare a tulpinii Trichoderma longibraciatum CNMN-FD-27, obţinerea unui biopreparat cu proprietăţi antifungice şi fitostimulatoare sporite, ieftin, cu componente accesibile, săruri minerale în cantităţi mici.

Problema se rezolvă prin mediul nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27, care conţine, g/L: sirop de porumb 20,0, glucoză 10,0, KH2PO4 1,0, MgSO4x7H2O 1,0, NaNO3 1,0, CaCO3 1,0, apă restul, cu pH 6,0-6,2.

Pe mediul nutritiv optimizat propus tulpina de fungi Trichoderma longibraciatum CNMN- FD-27 manifestă cea mai înaltă activitate antifungică după 4 zile de cultivare.

Rezultatul tehnic al invenţiei constă în reducerea duratei de cultivare a tulpinii, obţinerea unui biopreparat cu proprietăţi antifungice şi stimulatoare mai pronunţate faţă de soluţia proximă şi reducerea preţului mediului nutritiv de 2-3 ori.

Exemple de realizare a invenţiei

Exemplul 1

Tulpina Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27 s-a cultivat în baloane Erlenmeyer de 0,5 L în care s-au introdus 100 mL de mediu nutritiv, g/L: melasă de sfeclă 20,0; zaharoză 10,0; KH2PO4 2,0; MgSO4x7H2O 1,0; NaNO3 2,0; CaCO3 2,0; apă restul; pH 5,5 - 6,0 şi paralel în baloane de 0,5 L cu 100 mL de mediu nutritiv, g/L: sirop de porumb 20,0; glucoză 10,0; KH2PO4 1,0; MgSO4x7H2O 1,0; NaNO3 1,0; CaCO3 1,0; apă până la 1 litru; pH 6,0-6,2 în condiţii de agitare continuă (180 rpm) la temperatura de 28-30°C, timp de 6 zile. Biopreparatul reprezintă lichidul cultural obţinut la separarea mediului de cultivare de biomasă prin filtrare. Culturile fitopatogene au fost însămânţate în cutii Petri pe mediul malţ-agar. La mijlocul cutiei s-au făcut godeuri de 0,8 mm în care s-au introdus câte 0,1 mL de biopreparat. Difuzia biopreparatului s-a produs la temperatura de 4°C timp de 24 de ore, după care cutiile au fost amplasate în termostat, la temperatura de 28-30°C, pentru incubare. Peste 4 zile de la incubare s-au efectuat măsurările zonei de inhibiţie a fungilor fitopatogeni.

Tabelul 1

Activitatea antifungică a biopreparatului în dependenţă de durata de cultivare

a tulpinii Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27

Test culturile Durata de cultivare, zile Diametrul zonei de inhibiţie, mm Mediul proxim Mediul optimizat 3 4 5 6 3 4 5 6 Alternaria alternata 27,3 ± 2,8 26,7 ± 1,7 25, 3 ± 0,7 28,0 ±2,3 28,3 ±1,7 36, 0 ± 2,0 25, 0 ± 3,4 18,0 ± 2,3 Sclerotinia sclerotiorum 30,7 ± 1,3 28,0 ± 2,0 30,7 ± 3,5 34,7 ± 3,5 31,0 ± 4,1 32,3 ± 2,8 31,7 ± 2,3 30,7 ± 1,3 Fusarium sporotrichiella 26,0 ± 2,0 27,0 ± 2,0 24,4 ± 2,4 22,0 ± 2,3 26,7 ± 3,3 27,7 ± 2,8 21,3 ± 1,3 18,7 ± 1,7 Botrytis cinerea 38,7 ± 1,3 40,3 ± 0,7 34,3 ± 1,3 38,3 ± 3,3 40,0 ± 1,1 41,7 ± 0,7 27,7± 2,8 25,3 ± 0,7

Maximul activităţii antifungice a biopreparatului faţă de Fusarium sporotrichiella şi Botrytis cinerea a fost obţinut pe mediul proxim după 4 zile de cultivare (diametrul zonei de inhibiţie - 27,0 mm, respectiv 40,3 mm), iar faţă de Alternaria alternata şi Sclerotinia sclerotiorum după 6 zile de cultivare (diametrul zonei - 28 mm, respectiv 34,7 mm).

Biopreparatul obţinut la cultivarea tulpinii Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27 pe mediul propus a demonstrat activitatea maximă faţă de toţi fitopatogenii testaţi după 4 zile de cultivare (diametrul zonelor de inhibiţie variază în limitele 27,7- 41,7 mm).

Astfel, durata de cultivare a tulpinii T. longibrachiatum CNMN-FD-27 pe mediul propus pentru obţinerea biopreparatului cu activitate antifungică înaltă faţă de toţi fitopatogenii testaţi este cu 2 zile mai mică faţă de activitatea biopreparatului obţinut pe mediul proxim.

Exemplul 2

Seminţele de floarea soarelui au fost tratate cu biopreparatele obţinute (pe mediul proxim şi pe mediul propus) timp de 1 oră, apoi introduse în sol şi cultivate. După 14 zile de cultivare la temperatura camerei de 20-22°C au fost determinaţi indicii: lungimea plantulei, masa a 100 de plantule, masa rădăcinilor la 100 de plantule.

Tabelul 2

Activitarea stimulatoare a biopreparatului la floarea soarelui în dependenţă de mediul de cultivare a tulpinii Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27

Indicii corporali Tratarea seminţelor cu biopreparat proxim Tratarea seminţelor cu biopreparat optimizat Lungimea plantulei, cm 18,0± 0,3 19,3 ± 0,28 Masa a 100 de plantule, gr 124,2±4,5 148,6±3,2 Masa rădăcinilor la 100 de plantule, gr 22,4±0,4 24,8±0,45

Masa a 100 de plantule şi masa rădăcinilor la 100 de plantule de floarea soarelui sub influenţa biopreparatului obţinut pe mediul optimizat a sporit cu 20,0% şi respectiv 10,7%, iar lungimea plantulelor cu 7,2% faţă de preparatul obţinut pe mediul proxim.

1. RU 2171580 C1 2001.08.10

2. MD 4249 B1 2013.08.31

3. MD 4251 B1 2013.09.30

Claims (1)

1. Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma longibrachiatum CNMN-FD-27, care conţine, g/L: sirop de porumb 20,0, glucoză 10,0, KH2PO4 1,0, MgSO4x7H2O 1,0, NaNO3 1,0, CaCO3 1,0, apă restul, cu pH 6,0-6,2.