MD1171Y - Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare - Google Patents
Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare Download PDFInfo
- Publication number
- MD1171Y MD1171Y MDS20160156A MDS20160156A MD1171Y MD 1171 Y MD1171 Y MD 1171Y MD S20160156 A MDS20160156 A MD S20160156A MD S20160156 A MDS20160156 A MD S20160156A MD 1171 Y MD1171 Y MD 1171Y
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- liver
- decellularized
- matrix
- decellularized liver
- cell adhesion
- Prior art date
Links
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title claims abstract description 31
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 6
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 claims abstract description 4
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims abstract description 4
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 abstract 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 abstract 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 8
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 5
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000005161 hepatic lobe Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la medicina regenerativă şi ingineria tisulară şi poate fi utilizată pentru prelucrarea matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare.Esenţa invenţiei constă în aceea că se spală matricea decelularizată a ficatului prin injectarea în vena portă a unui amestec de soluţie tampon fosfat salin, streptomicină 100 µg/ml, penicilină 100 U/ml şi amfotericină B 0,25 µg/ml, în cantitate de 20 ml/10 g de ficat decelularizat, apoi se injectează soluţie de colagen tip I, obţinut din tendonul Achile de bovină în concentraţie de 0,01%, dizolvat în 0,1M de acid acetic, în cantitate de 160...240 ml/10 g de ficat decelularizat, după care matricea hepatică se perfuzează cu soluţie tampon fosfat salin cu un pH 7,4 în cantitate de 300 ml/10 g de ficat cu o viteză de 5 ml/min.
Description
Invenţia se referă la medicina regenerativă şi ingineria tisulară şi poate fi utilizată pentru prelucrarea matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare.
Cu aceeaşi destinaţie, în condiţii de laborator matricea decelularizată a unui lob al ficatului este recelularizată cu câte 1,5x107 hepatocite la fiecare 10 min până se ajunge la 2x108 celule [1]. În timpul procesului de recelularizare nu se utilizează suplimentar nici o substanţă pentru mărirea aderării celulelor la matricea extracelulară a ficatului decelularizat.
Dezavantajul constă în aceea că în timpul procesului de recelularizare are loc pierderea excesivă de hepatocite din cauza adeziunii insuficiente a hepatocitelor injectate de matricea hepatică decelularizată.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în utilizarea unei metode noi, ce ar permite amplificarea adeziunii hepatocitelor de matricea decelularizată a ficatului şi ar împiedica pierderea lor excesivă după injectare.
Esenţa invenţiei constă în aceea că se spală matricea decelularizată a ficatului prin injectarea în vena portă a unui amestec de soluţie tampon fosfat salin, streptomicină 100 µg/ml, penicilină 100 U/ml şi amfotericină B 0,25 µg/ml, în cantitate de 20 ml/10 g de ficat decelularizat, apoi se injectează soluţie de colagen tip I, obţinut din tendonul Achile de bovină în concentraţie de 0,01%, dizolvat în 0,1M de acid acetic, în cantitate de 160...240 ml/10 g de ficat decelularizat, după care matricea hepatică se perfuzează cu soluţie tampon fosfat salin cu un pH 7,4 în cantitate de 300 ml/10 g de ficat cu o viteză de 5 ml/min.
Avantajele metodei revendicate constau în aceea că este simplă, economă şi eficientă. Metoda propusă ameliorează şi majorează viteza procesului de recelularizare a ficatului prin sporirea adeziunii matricei extracelulare hepatice.
Rezultatul constă în aceea că respectiva metodă - eficientă, sigură, economă şi uşor de implementat, permite o adeziune mai rapidă, evitându-se pierderi excesive de hepatocite injectate în matricea hepatică decelularizată în timpul procesului de recelularizare.
În scopul creşterii adeziunii hepatocitelor de matricea extracelulară a ficatului decelularizat şi evitării pierderii lor excesive, s-a utilizat soluţie de colagen tip I obţinut din tendon Achile de bovină cu o concentraţie de 0,01% dizolvat în 0,1 M de acid acetic, care se injectează foarte încet în matricea hepatică decelularizată prin vena portă.
Modalitatea de creştere a adeziunii hepatocitelor de matricea extracelulară a ficatului decelularizat constă în injectarea soluţiei colagen tip I obţinut din tendon Achile de bovină, cu concentraţia de 0,01% dizolvat în 0,1 M de acid acetic, după o spălare prealabilă cu soluţie PBS şi un compus antibiotic-antimicotic (streptomicină 100 µg/ml, penicilină 100 U/ml, amfotericină B 0,25 µg/ml). Cantitatea de soluţie de colagen injectată este direct proporţională cu masa ficatului. La 10 g de masă umedă de ficat se utilizează 200 ml ±40 ml de soluţie de colagen, acesta se injectează foarte lent pentru a permite ataşarea fibrelor de colagen de matricea hepatică decelularizată evitând formarea conglomeratelor şi obturarea vaselor intrahepatice. Pentru a verifica dacă vasele matricei decelularizate nu sunt obturate de fibrele de colagen şi a aduce pH-ul la unul normal de 7,2…7,4 pentru a asigura viabilitatea celulelor, matricea hepatică se perfuzează cu PBS în volum de 300 ml/10 g ficat decelularizat, cu o viteză de 5 ml/min şi un pH egal cu 7,4. Totodată se urmăreşte umplerea şi extravazarea uniformă a lichidului din matricea hepatică decelularizată.
Exemplu
Prin vena portă matricea extraxelulară a 10 g de ficat decelularizat se spală cu 20 ml soluţie PBS şi antibiotic antimicotic. Apoi cu viteza de 1 ml/min se injectează 200 ml de soluţie de colagen tip I de 0,01%, obţinut din tendon Achile de bovină dizolvat în acid acetic de 0,1 M. Ulterior, matricea decelularizată se spală cu o viteză de 5 ml/min cu 300 ml soluţie PBS cu pH-ul de 7,4.
Metoda corespunde cerinţelor şi normelor sanitare, necesită utilizarea soluţiei de colagen de 0,01% şi a matricei hepatice decelularizate şi se efectuează în condiţii sterile.
Această metodă se utilizează pentru mărirea adeziunii hepatocitelor în timpul recelularizării ficatului decelularizat în cadrul Laboratorului de Inginerie Tisulară şi Culturi Celulare.
1. Uygun B., Price G., Saeidi N., Izamis M., Berendsen T., Yarmush M., Uygun K. Decellularization and Recellularization of Whole Livers. JoVE, 48, 2011. http://www.jove.com/details.php?id=2394
Claims (1)
- Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare, care constă în aceea că se spală matricea decelularizată a ficatului prin injectarea în vena portă a unui amestec de soluţie tampon fosfat salin, streptomicină 100 µg/ml, penicilină 100 U/ml şi amfotericină B 0,25 µg/ml, în cantitate de 20 ml/10 g de ficat decelularizat, apoi se injectează soluţie de colagen tip I, obţinut din tendonul Achile de bovină în concentraţie de 0,01%, dizolvat în 0,1M de acid acetic, în cantitate de 160...240 ml/10 g de ficat decelularizat, după care matricea hepatică se perfuzează cu soluţie tampon fosfat salin cu un pH 7,4 în cantitate de 300 ml/10 g de ficat cu o viteză de 5 ml/min.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160156A MD1171Z (ro) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160156A MD1171Z (ro) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD1171Y true MD1171Y (ro) | 2017-07-31 |
| MD1171Z MD1171Z (ro) | 2018-02-28 |
Family
ID=59383904
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20160156A MD1171Z (ro) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Metodă de prelucrare a matricei decelularizate a ficatului pentru sporirea adeziunii celulare |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD1171Z (ro) |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU952958A1 (ru) * | 1980-08-01 | 1982-08-23 | Институт проблем онкологии им.Р.Е.Кавецкого | Способ получени изолированных клеток печени |
| SU1053803A1 (ru) * | 1981-11-05 | 1983-11-15 | 2-Й Московский Ордена Ленина Государственный Медицинский Институт Им.Н.И.Пирогова | Способ консервировани изолированных клеток печени |
| SU1289437A1 (ru) * | 1984-08-20 | 1987-02-15 | Казахский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии им.А.Н.Сызганова | Способ консервации изолированных клеток печени |
| SU1310426A1 (ru) * | 1985-06-17 | 1987-05-15 | Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР | Способ получени изолированных клеток печени |
| SU1564550A1 (ru) * | 1986-02-06 | 1990-05-15 | Харьковский научно-исследовательский институт терапии | Способ выделени изолированных клеток из печени и миокарда |
| SU1673969A1 (ru) * | 1986-04-08 | 1991-08-30 | Научно-исследовательский институт физико-химической медицины | Способ получени суспензии дл реконструкции мембран клеток печени |
| SU1463757A1 (ru) * | 1987-04-02 | 1989-03-07 | Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР | Способ получени изолированных клеток печени |
| SU1513390A1 (ru) * | 1987-10-28 | 1989-10-07 | Тюменский государственный медицинский институт | Способ исследовани клеток печени |
| SU1578192A1 (ru) * | 1988-04-26 | 1990-07-15 | Институт проблем онкологии им.Р.Е.Кавецкого | Способ выращивани клеток печени |
| MD1015Z (ro) * | 2015-05-12 | 2016-10-31 | ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА | Metodă de decelularizare a ficatului la animalele experimentale |
-
2016
- 2016-12-23 MD MDS20160156A patent/MD1171Z/ro not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD1171Z (ro) | 2018-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nascimento et al. | Human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells attenuate remodeling after myocardial infarction by proangiogenic, antiapoptotic, and endogenous cell-activation mechanisms | |
| Gao et al. | The use of chitosan based hydrogel for enhancing the therapeutic benefits of adipose-derived MSCs for acute kidney injury | |
| Tao et al. | Proangiogenic features of mesenchymal stem cells and their therapeutic applications | |
| Jha et al. | Enhanced survival and engraftment of transplanted stem cells using growth factor sequestering hydrogels | |
| Park et al. | Human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells prevent diabetic renal injury through paracrine action | |
| Yu et al. | Human adipose-derived stem cells enriched with VEGF-modified mRNA promote angiogenesis and long-term graft survival in a fat graft transplantation model | |
| Wang et al. | Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium | |
| O’Loughlin et al. | Topical administration of allogeneic mesenchymal stromal cells seeded in a collagen scaffold augments wound healing and increases angiogenesis in the diabetic rabbit ulcer | |
| Rustad et al. | Enhancement of mesenchymal stem cell angiogenic capacity and stemness by a biomimetic hydrogel scaffold | |
| Zhang et al. | Autophagy mediates the beneficial effect of hypoxic preconditioning on bone marrow mesenchymal stem cells for the therapy of myocardial infarction | |
| Xinaris et al. | In vivo maturation of functional renal organoids formed from embryonic cell suspensions | |
| US10105395B2 (en) | Microvesicles (MVs) derived from adult stem cells for use in the therapeutic treatment of a tumor disease | |
| Zhang et al. | Mesenchymal stem cells: potential application for the treatment of hepatic cirrhosis | |
| Wu et al. | The roles of mesenchymal stem cells in tissue repair and disease modification | |
| Aggarwal et al. | Concise review: stem/progenitor cells for renal tissue repair: current knowledge and perspectives | |
| Saito et al. | Homing effect of adipose‐derived stem cells to the injured liver: the shift of stromal cell‐derived factor 1 expressions | |
| Xu et al. | hiPS-MSCs differentiation towards fibroblasts on a 3D ECM mimicking scaffold | |
| Dao et al. | Comparing the angiogenic potency of naïve marrow stromal cells and Notch-transfected marrow stromal cells | |
| Chen et al. | Sphingosine 1-phosphate promotes mesenchymal stem cell-mediated cardioprotection against myocardial infarction via ERK1/2-MMP-9 and Akt signaling axis | |
| Mayhew et al. | Tumor dormancy in bone | |
| Gomzikova et al. | Cytochalasin B-induced membrane vesicles convey angiogenic activity of parental cells | |
| Jia et al. | Bone marrow mesenchymal stromal cells ameliorate angiogenesis and renal damage via promoting PI3k-Akt signaling pathway activation in vivo | |
| Shou et al. | Enhancement of bone‐marrow‐derived mesenchymal stem cell angiogenic capacity by NPWT for a combinatorial therapy to promote wound healing with large defect | |
| Yu et al. | Human umbilical cord mesenchymal stem cell attenuates renal fibrosis via TGF-β/Smad signaling pathways in vivo and in vitro | |
| Hou et al. | Stem/progenitor cells and their therapeutic application in cardiovascular disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| KA4Y | Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) |