LU85526A1 - REAGENT FOR DETERMINING THE NUMBER OF THROMBOCYTES AND LEUCOCYTES - Google Patents
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Description
La présente invention est relative à un réactif pour la détermination du nombre des thrombocytes et des leucocytes, et à un procédé pour sa préparation.The present invention relates to a reagent for determining the number of thrombocytes and leukocytes, and to a process for its preparation.
La présente invention a pour objet un réactif con- 5 tenant de l’acétone et du formaldéhyde ou du glutaraldêhyde, des sels minéraux et ces colorants, qui convient à la détermination simultanée du nombre des thrombocytes et des leucocytes dans le sang entier, par des méthodes normales d'observation au microscope optique.The present invention relates to a reagent containing acetone and formaldehyde or glutaraldehyde, mineral salts and these dyes, which is suitable for the simultaneous determination of the number of thrombocytes and leukocytes in whole blood, by normal methods of observation under an optical microscope.
10 II est connu que la détermination du nombre des thrombocytes et des leucocytes fait partie du domaine des méthodes fondamentales des laboratoires cliniques. La numération des thrombocytes peut s'effectuer selon différentes méthodes ï 15 1) Numération électronique des éléments au moyen d'appareils automatiques mis au point pour la numération des thrombocytes. Bien que cette méthode soit rapide et simple, il faut se procurer des instruments très coûteux. Cette méthode n'est pas toujours propre à remplacer la détermina- 20 tion au microscope. La reproductibilité de cette méthode est en outre moins bonne que celle des compteurs microscopiques.It is known that the determination of the number of thrombocytes and leukocytes is part of the field of fundamental methods of clinical laboratories. The thrombocyte counting can be carried out according to various methods. 1) Electronic counting of the elements by means of automatic apparatuses developed for the counting of the thrombocytes. Although this method is quick and simple, very expensive instruments are required. This method is not always suitable for replacing microscopic determination. The reproducibility of this method is also less good than that of microscopic counters.
2) Numération des thrombocytes à l'aide d'un microscope à contraste de phase avec utilisation d'une solution conte- 25 nant de la cocaïne ou de la novocaïne ou d'une autre so-s lution de numération des thrombocytes. Pour la mise en oeuvre de cette méthode, le microscope à contraste de “ phase est indispensable. Un autre inconvénient notable réside dans le fait que pour le personnel qui réalise les 30 essais, cette méthode est fatigante, pénible et nuisible pour la vue, en particulier dans le cas d’un grand nombre d'expériences.2) Thrombocyte count using a phase contrast microscope with the use of a solution containing cocaine or novocaine or another solution of thrombocyte count. For the implementation of this method, the phase contrast microscope is essential. Another notable drawback lies in the fact that for the personnel carrying out the 30 tests, this method is tiring, painful and detrimental to sight, in particular in the case of a large number of experiments.
3) Détermination du nombre des thrombocytes par une méthode de coloration. Cette méthode est la plus simple et peut 35 être mise en oeuvre à l'aide d'un microscope. Selon les 2 méthodes actuellement utilisées, on met en oeuvre comme colorant le violet cristallin (violet de gentiane ; non chimique : chlorhydrate d'hexaméthyl-p-rosaniline). On fait à ces méthodes le reproche justifié de causer une distor-5 sion comparativement à la détermination par contraste ce phase, parce que les thrombocytes ne se colorent pas tous d’une façon bien visible.3) Determination of the number of thrombocytes by a staining method. This method is the simplest and can be carried out using a microscope. According to the 2 methods currently used, crystalline violet (gentian violet; non-chemical: hexamethyl-p-rosaniline hydrochloride) is used as a dye. These methods are justifiably criticized for causing distortion compared to contrast determination in this phase, because not all thrombocytes stain in a conspicuous way.
=. Dans le diagnostic hématologique, la numération des leucocytes constitue la méthode la plus largement uti-10 lisée. La solution de Türk décrite dans la Pharmacopée hongroise (Ph. Hg. VI.) convient généralement à cet effet et a donné de bons résultats, mais elle ne convient cependant pas à la détermination du nombre des thrombocytes. C'est là un inconvénient important parce que l'exécution conjointe des 15 deux essais de laboratoire les plus répandus serait très souvent nécessaire. Pour déterminer le nombre des thrombocytes et des leucocytes dans le sang entier à l'aide d'un microscope optique normal, il est nécessaire de disposer d'une solution de colorant qui : 20 a) provoque l'hémolyse complète des érythrocytes sans diminution du nombre des thrombocytes et des leucocytes, b) fixe aussi bien les thrombocytes que les leucocytes, et c) contienne un colorant qui est fixé avec une grande affinité aux éléments figurés susdits et les fixe de cette 25 façon, en lumière normale.=. In hematological diagnosis, leukocyte count is the most widely used method. The Türk solution described in the Hungarian Pharmacopoeia (Ph. Hg. VI.) Is generally suitable for this purpose and has given good results, but it is however not suitable for determining the number of thrombocytes. This is a significant disadvantage because the joint execution of the two most common laboratory tests would very often be necessary. To determine the number of thrombocytes and leukocytes in whole blood using a normal light microscope, it is necessary to have a dye solution which: a) causes complete hemolysis of erythrocytes without decreasing the number of thrombocytes and leukocytes, b) fixes both thrombocytes and leukocytes, and c) contains a dye which is fixed with great affinity to the above-mentioned figurative elements and fixes them in this way in normal light.
^ Il est vrai que l'on connaît une solution qui répond aux deux premières conditions ci-dessus (Scand. J. Clin. Invest. 33^ 121 (1974)), mais on ne peut effectuer la numération des thrombocytes qu'en utilisant un microscope à con-30 traste de phase.^ It is true that a solution is known which meets the first two conditions above (Scand. J. Clin. Invest. 33 ^ 121 (1974)), but the thrombocyte count can only be carried out using a phase contrast microscope.
La présente invention a pour but de préparer une solution de colorant avec laquelle on puisse effectuer la détermination du nombre des thrombocytes et des leucocytes dans le sang entier en utilisant un microscope optique nor-35 mal et en supprimant les inconvénients susdits des réactifsThe object of the present invention is to prepare a dye solution with which the determination of the number of thrombocytes and leukocytes in whole blood can be carried out using a normal optical microscope and by eliminating the above-mentioned drawbacks of the reagents.
connus. Iknown. I
3 L'invention repose sur la caractéristique surprenante selon laquelle l'association de la solution d'hémolyse et de fixation avec un colorant basique de grande affinité, permet d'obtenir une solution de réactif convenant a la dé-5 termination conjointe du nombre des thrombocytes et des leucocytes à l'aide d'un microscope optique normal. Les deux conditions ci-dessus peuvent être remplies si la solution d'hé-4 molyse et de fixation n'est pas incompatible avec le colo rant, c'est-à-dire ne forme pas de précipité.3 The invention is based on the surprising characteristic according to which the combination of the solution of hemolysis and fixing with a basic dye of great affinity, makes it possible to obtain a solution of reagent suitable for the joint determination of the number of thrombocytes and leukocytes using a normal light microscope. The two above conditions can be fulfilled if the solution of he-4 molyse and fixing is not incompatible with the colourant, that is to say does not form a precipitate.
10 II faut éviter la formation de précipités micro scopiques ; en effet, de tels précipités peuvent présenter un caractère de thrombocytes et ainsi déformer le résultat de la détermination.The formation of microscopic precipitates must be avoided; in fact, such precipitates can have a thrombocyte character and thus distort the result of the determination.
Les solutions de colorant du type du violet crésyle 15 utilisées jusqu’à présent ne répondent que partiellement aux conditions ci-dessus ; en effet, les constituants colorants du type violet crésyle de la solution de numération présentent un caractère faiblement basique ; c'est pourquoi les thrombocytes ne prennent qu'une couleur pâle et les leuco-20 cytes ne sont pas nettement mis en évidence.The dye violet type 15 dye solutions used so far only partially meet the above conditions; in fact, the coloring components of the cresyl violet type of the counting solution have a weakly basic character; this is why the thrombocytes only take on a pale color and the leuco-20 cytes are not clearly highlighted.
On a trouvé, conformément à la présente invention, que les colorants dits à la thiazine conviennent très bien à cet usage. Les colorants du type thiazine sont caractérisés par la présence de deux groupes chromophores. Des com-25 posés du type thiazine ont déjà été utilisés dans la pratique médicale dans différents domaines (par exemple la coloration des bactéries, en histochimie), mais la littérature spécialisée et les brevets ne contiennent aucune allusion à la caractéristique qui fait l'objet de la présente inven-30 tion. Les représentants les plus importants de ce groupe de composés sont le bleu de toluidine (formule I), la thionine (formule II) et le bleu de méthylène (formule III).It has been found, in accordance with the present invention, that the so-called thiazine dyes are very suitable for this use. Thiazine-type dyes are characterized by the presence of two chromophoric groups. Compounds of the thiazine type have already been used in medical practice in various fields (for example the staining of bacteria, in histochemistry), but the specialized literature and the patents do not contain any allusion to the characteristic which is the subject of the present invention. The most important representatives of this group of compounds are toluidine blue (formula I), thionine (formula II) and methylene blue (formula III).
'4 5 3HCx'4 5 3HCx
ÎHC N CH JÎHC N CH J
10 . (I) 15 XXXX « 2o zm (H) 25 £ηΛν^CXsX^n (Ch3)210. (I) 15 XXXX "2o zm (H) 25 £ ηΛν ^ CXsX ^ n (Ch3) 2
Cl (ni) ·Cl (ni) ·
35 I35 I
JJ
La présente invention a pour objet un réactif pour la détermination simultanée du nombre des thrombocytes et des leucocytes par une méthode normale d’observation au microscope optique, caractérisé par le fait qu’il contient 0,1 à 5 5 parties en poids d’acétone, 0,05 à 2,0 parties en poids de formaldéhyde et/ou de clutaraldéhyde, 0,001 à 0,1 partie en poids d'un colorant de thiazine - avantageusement le bleu de toluidine - 0,1 à 2,0 parties en poids d'un sel minéral, de préférence le chlorure de sodium, et de l’eau en quantité suf-10 fisante pour atteindre 100 parties en poids.The subject of the present invention is a reagent for the simultaneous determination of the number of thrombocytes and leukocytes by a normal method of observation under an optical microscope, characterized in that it contains 0.1 to 5 5 parts by weight of acetone , 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde and / or clutaraldehyde, 0.001 to 0.1 parts by weight of a thiazine dye - advantageously toluidine blue - 0.1 to 2.0 parts by weight a mineral salt, preferably sodium chloride, and water in sufficient amount to reach 100 parts by weight.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le réactif est constitué par 0,1 à 5,0 parties en poids d'acétone, 0,05 à 2,0 parties en poids de formaldéhyde, 0,001 à 0,1 partie en poids de bleu de toluidine et 0,1 à 15 2 parties en poids de chlorure de sodium.According to an advantageous embodiment of the invention, the reagent consists of 0.1 to 5.0 parts by weight of acetone, 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde, 0.001 to 0.1 parts in weight of toluidine blue and 0.1 to 2 parts by weight of sodium chloride.
L'avantage particulier des colorants utilisés conformément à la présente invention réside dans le fait que ceux-ci présentent aussi une très grande affinité pour les macromolécules acides des thrombocytes et des leucocytes et 20 présentent par conséquent une visibilité très intense et très marquée.The particular advantage of the dyes used in accordance with the present invention lies in the fact that they also have a very great affinity for the acid macromolecules of thrombocytes and leukocytes and therefore exhibit very intense and very marked visibility.
L'avantage le plus important des réactifs conformes à la présente invention réside dans le fait que ceux-ci sur- ___passent notablement la sensibilité des réactifs connus. Ce 25 fait peut être démontré par les essais suivants :The most important advantage of the reagents according to the present invention lies in the fact that these significantly exceed the sensitivity of known reagents. This fact can be demonstrated by the following tests:
Les résultats obtenus à partir d'échantillons com- -----portant un nombre inconnu de thrombocytes et de leucocytes sont obtenus au cours de vingt déterminations successives du nombre des thrombocytes et des leucocytes. La précision 30 de la méthode de numération des cellules est satisfaisante lorsque l'écart-type est inférieur à 10 %. Pour un nombre de thrombocytes de 218,8 G/l, l'écart-type ET est de : ET = + 5,0 et en appliquant ces valeurs, le coefficient de variation (exprimé en tant qu'écart-type, en %) est de 35 2,28 (figure 1). Il faut encore signaler que la valeur G/l .The results obtained from samples containing an unknown number of thrombocytes and leukocytes are obtained during twenty successive determinations of the number of thrombocytes and leukocytes. The precision of the cell counting method is satisfactory when the standard deviation is less than 10%. For a number of thrombocytes of 218.8 G / l, the standard deviation ET is: ET = + 5.0 and by applying these values, the coefficient of variation (expressed as standard deviation, in% ) is 35 2.28 (Figure 1). It should also be noted that the value G / l.
« 6 signifie le nombre de thrombocytes et de leucocytes, indiqué dans le Système International (G/l : giga-(nombre de cellu- 9 les) = nombre de cellules x 10 ) (figure 1).“6 means the number of thrombocytes and leukocytes, indicated in the International System (G / l: giga- (number of cells 9) = number of cells x 10) (Figure 1).
L'erreur optimale de la numération des leucocytes, 5 pour une moyenne de 5,08 G/l est ET = + 0,042 , ce qui correspond à un coefficient ce variation de 0,8 % (figure 3).The optimal error of the leukocyte count, 5 for an average of 5.08 G / l is ET = + 0.042, which corresponds to a coefficient of this variation of 0.8% (Figure 3).
Aux fins de comparaison, on compare la solution de - réactif conforme à la présente invention, dans le domaine de la numération des thrombocytes, avec la composition de numé-10 ration des thrombocytes mise sur le marché sous la marque déposée "THROMBOFIX" par la Société Gödecke et dans le domaine de la numération des leucocytes, avec une solution de Türk.For comparison purposes, the solution of the reagent according to the present invention, in the field of thrombocyte counting, is compared with the composition for counting thrombocytes placed on the market under the registered trademark "THROMBOFIX" by the Company Gödecke and in the field of leukocyte counting, with a Türk solution.
On effectue les essais comparatifs avec le sang de 41 patients, en déterminant parallèlement le nombre des thrombocytes et des 15 leucocytes.The comparative tests are carried out with the blood of 41 patients, by determining in parallel the number of thrombocytes and leukocytes.
Les résultats sont indiqués dans le système de coordonnées cartésiennes (figures 2 et 4). La corrélation entre les deux méthodes et les paramètres normalisés (a, b) de la fonction y = ax + b qui définit les corrélations se 20 déterminent à l'aide d'une calculatrice Hewlett-Packard HP-90.The results are shown in the Cartesian coordinate system (Figures 2 and 4). The correlation between the two methods and the normalized parameters (a, b) of the function y = ax + b which defines the correlations is determined using a Hewlett-Packard HP-90 calculator.
Lors de la numération des thrombocytes, la corrélation est (r) = 0,927 ; la corrélation fonctionnelle linéaire entre les deux méthodes peut être définie par l'équation 25 y = 1,05 x - 0,94 ; y = le résultat obtenu avec la solution de numération des thrombocytes conforme à la présente invention ; x = le résultat obtenu avec le"THROMBOFIX"(figure 2).When counting thrombocytes, the correlation is (r) = 0.927; the linear functional correlation between the two methods can be defined by the equation 25 y = 1.05 x - 0.94; y = the result obtained with the thrombocyte counting solution in accordance with the present invention; x = the result obtained with the "THROMBOFIX" (figure 2).
On peut constater que le nombre de thrombocytes obtenu en utilisant la solution de réactif conforme à la présente in-30 vention est supérieur d'environ 5 % au nombre obtenu à partir du même échantillon, en utilisant le "THROMBOPIX”.It can be seen that the number of thrombocytes obtained using the reagent solution according to the present invention is approximately 5% higher than the number obtained from the same sample, using the "THROMBOPIX".
Compte tenu du caractère de la détermination, une mesure en excès n'est pas à envisager. La différence obtenue peut être attribuée au fait que le composant colorant de la 35 solution de réactif conforme à l'invention présente une af- 7 finité notablement plus grande pour les groupes acides des macromolécules des thrombocytes, c'est pourquoi l'image présente de plus grands contrastes et peut être mieux observée. Ainsi, en utilisant la solution de réactif conforme à l’invention, on peut éliminer la mesure par défaut systématique 5 obtenue avec les solutions de colorant connues.Given the character of the determination, an excess measure is not to be considered. The difference obtained can be attributed to the fact that the coloring component of the reagent solution according to the invention has a markedly greater affinity for the acid groups of the macromolecules of thrombocytes, which is why the image presents greater contrasts and can be better observed. Thus, by using the reagent solution according to the invention, it is possible to eliminate the systematic default measurement 5 obtained with the known dye solutions.
Il faut encore signaler que le "THROMBOFIX" présentait une mesure par défaut similaire même lorsqu'on utilisait un microscope à contraste de phase.It should also be noted that the "THROMBOFIX" presented a similar default measurement even when using a phase contrast microscope.
Lors de la numération des leucocytes, la méthode 10 conforme à la présente invention présente avec la solution de Türk une corrélation r = 0,959 ; la corrélation peut être exprimée par la fonction linéaire y = 0,97 x + 0,23. Cela porte â croire qu'il n'y a pas de différence significative entre les deux méthodes.When counting leukocytes, the method according to the present invention has a correlation r = 0.959 with Türk's solution; the correlation can be expressed by the linear function y = 0.97 x + 0.23. This suggests that there is no significant difference between the two methods.
15 D’autres particularités de la préparation et de l'application de la solution de réactif conforme à la présente invention ressortiront des exemples qui vont suivre.Other features of the preparation and application of the reagent solution according to the present invention will emerge from the examples which follow.
Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples de mise en oeuvre, sont donnés uniquement à titre d’il-20 lustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.It should be understood, however, that these examples of implementation are given solely by way of illustration of the subject of the invention, of which they do not in any way constitute a limitation.
EXEMPLE 1 —Solution de numérationEXAMPLE 1 —Solution of numeration
On mélange 200 ml d'une solution â 0,9 % de chlo-25 rure de sodium dans de l'eau distillée avec 5 ml de formal-"dehyde à 35 % et 770 ml d'eau distillée ayant subi un échange d'ions. Après avoir agité énergiquement, on dissout dans la solution 100 mg de colorant bleu de toluidine. On filtre la solution sur un filtre en verre G-4. Après addition de 25 ml 30 d'acétone, la solution doit être limpide et exempte de particules .200 ml of a 0.9% solution of sodium chloride in distilled water are mixed with 5 ml of 35% formaldehyde and 770 ml of distilled, exchange water. After vigorous stirring, 100 mg of toluidine blue dye are dissolved in the solution and the solution is filtered through a G-4 glass filter. After addition of 25 ml of acetone, the solution must be clear and free of particles.
EXEMPLE 2 Détermination du nombre des thrombocytes et des leucocytes dans du sang veineux traité par un anticoagulant.EXAMPLE 2 Determination of the number of thrombocytes and leukocytes in venous blood treated with an anticoagulant.
35 On traite avantageusement le sang par l'acide éthy- .The blood is advantageously treated with ethyl acid.
ε lènediaminetëtracétique comme anticoagulant car en présence d'acide ëthylènediaroinetétracétique il ne se produit pas un dépôt minimal des thrombocytes. Après prélèvement du sang sur de l'acide éthylènediaminetëtracétique, on ajuste la con-5 centration de l'acide éthylènediaminetëtracétique à 2 mg/ml par évaporation préalable d'une solution-mère d'éthylène-diaminetétracëtique disodique dans un petit tube en matière plastique. On peut aussi empêcher la coagulation du sang en utilisant une solution ä 3,3 % de citrate trisodique dans 10 l'eau distillée ; lors du prélèvement du sang dans une canule en matière plastique, le rapport est de 9. parties de sang pour 1 partie de citrate.ε lènediaminetëtracétique as anticoagulant because in the presence of ethylenedediaroinetetracetic acid there is no minimal deposit of thrombocytes. After sampling the blood on ethylenediaminetetracetic acid, the concentration of the ethylenediaminetetracetic acid is adjusted to 2 mg / ml by prior evaporation of a stock solution of ethylene diaminetetracetic disodium in a small plastic tube. . Blood clotting can also be prevented by using a 3.3% solution of trisodium citrate in distilled water; when drawing blood from a plastic cannula, the ratio is 9. parts of blood to 1 part of citrate.
Mise en oeuvre de la méthode : A 25 yl de sang veineux rendu incoagulable, on 15 ajoute, dans un petit tube à essai en matière plastique,475 pl de la solution de numération et on laisse reposer le mélanae â la température ambiante pendant 15 minutes sans aqitation.Implementation of the method: To 25 μl of venous blood made incoagulable, 475 μl of the counting solution are added to a small plastic test tube and the melana is left to stand at room temperature for 15 minutes. without aqitation.
La numération des thrombocytes et des leucocytes doit s'effectuer en l'espace de 6 heures. Avant la numération, on agite 20 à nouveau la solution, on l'introduit goutte-à-goutte dans une chambre de Bürker et on la laisse déposer pendant 10 minutes dans la chambre humide.The thrombocyte and leukocyte count should be done within 6 hours. Before counting, the solution is again stirred, introduced dropwise into a Bürker chamber and allowed to settle for 10 minutes in the humid chamber.
a) Numération des thrombocytes.a) Thrombocyte count.
----------- On multiplie le nombre total de thrombocytes compté 25 dans les 10 rectangles de la chambre de Bürker par 2 (coagulation évitée par l'acide éthylènediaminetëtracétique) ou par 2,2 (coagulation évitée par le citrate). On obtient le nombre de thrombocytes en G/l.----------- The total number of thrombocytes counted 25 in the 10 rectangles of the Bürker chamber is multiplied by 2 (coagulation avoided by ethylenediaminetetracetic acid) or by 2.2 (coagulation avoided by citrate). The number of thrombocytes in G / l is obtained.
b) Numération des leucocytes.b) Leukocyte count.
30 On divise par 18 (ou on multiplie par 0,055) le nom bre des leucocytes trouvé dans quatre carrés délimités par trois lignes, dans le cas de l'inhibition de la coagulation par le citrate, ou bien on le divise par 20 (ou on le multiplie par 0,05) si l'inhibition de la coagulation a été effec-35 tuée au moyen d'acide éthylènediaminetétracêtique. On obtient 9 le nombre de leucocytes en G/l.30 The number of leukocytes found in four squares delimited by three lines is divided by 18 (or multiplied by 0.055), in the case of inhibition of coagulation by citrate, or else it is divided by 20 (or multiplies it by 0.05) if the inhibition of coagulation has been effected by means of ethylenediaminetetracetic acid. We obtain 9 the number of leukocytes in G / l.
EXEMPLE 3 Détermination du nombre des thrombocytes et des leucocytes dans le sang capillaire, 5 On pique après désinfection le bout d'un doigt ou un talon, on essuie la première goutte de sang et on aspire 25 μΐ de sang dans une pipette au moyen d'une seringue en - matière plastique (type : par exemple pipette Finn, Gilson ou Eppendorf etc..)· On introduit cette quantité de sang 10 dans un petit tube en matière plastique qui contient 25 μΐ d'une solution d'acide éthylènediaminetétracétique à 2 mg/ml et on la mélange bien à l'anticoagulant. Après addition de 450 μΐ de la solution de numération et agitation énergique, on laisse reposer la solution à la température au moins 15 15 minutes, après l'avoir agitée à nouveau on l'introduit goutte-à-goutte dans une chambre de Bürker et on la laisse déposer pendant 10 minutes dans la chambre humide.EXAMPLE 3 Determination of the Number of Thrombocytes and Leukocytes in the Capillary Blood, 5 The tip of a finger or a heel is pricked after disinfection, the first drop of blood is wiped and 25 μΐ of blood are aspirated in a pipette using '' a plastic syringe (type: for example Finn, Gilson or Eppendorf pipette, etc.) · This quantity of blood 10 is introduced into a small plastic tube which contains 25 μΐ of a solution of ethylenediaminetetraacetic acid at 2 mg / ml and mixed well with the anticoagulant. After adding 450 μΐ of the counting solution and vigorous stirring, the solution is left to stand at temperature for at least 15 to 15 minutes, after having been stirred again, it is introduced dropwise into a Bürker chamber and it is left to deposit for 10 minutes in the humid chamber.
On détermine le nombre des thrombocytes et celui des leucocytes de façon analogue à ce que l'on fait pour un 20 sang traité par un anticoagulant ; dans le cas de la numération des thrombocytes, le facteur de multiplication est 2 ; dans le cas de la numération des leucocytes, il faut diviser par 20.The number of thrombocytes and that of leukocytes are determined in a similar manner to that for blood treated with an anticoagulant; in the case of thrombocyte count, the multiplication factor is 2; in the case of leukocyte count, divide by 20.
EXEMPLE 4 25 On opère comme dans l'Exemple 1, avec cette diffé rence qu'au lieu de formaldéhyde, on utilise 80 g d'un glu-—taraldéhyde à 25 %.EXAMPLE 4 The procedure is as in Example 1, with the difference that instead of formaldehyde, 80 g of a 25% glu-taraldehyde are used.
Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise 'en oeu-30 vre de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée,de la présente invention. ^As is apparent from the above, the invention is in no way limited to those of its modes of implementation and implementation which have just been described explicitly; on the contrary, it embraces all the variants which can come to the mind of the technician in the matter, without departing from the framework or the scope of the present invention. ^
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