KR970070205A - 표면 발현 벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물 표면 발현 방법 - Google Patents

표면 발현 벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물 표면 발현 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 그람음성 세균인 슈도모나스 시링게(Pseudomonas syringae)에서 유래한 세포외막 단백질인 빙핵활성 단백질(Ice Nucleation Protein, INP)을 이용하여, 외래 단백질을 세포 표면에 안정적으로 발현시키는 새로운 벡터, 세균의 표면에 외래단백질을 다량 발현시키는 제조방법 및 표면 발현된 외래단백질을 사용하는 용도를 제공함에 관한 것이다.

Description

표면 발현 벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물 표면 발현 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 빙핵활성 단백질 유전자와 그의 C-말단에 제한효소 부위를 포함하는 표면 발현 벡터, pGINP21M의 유전자 지도를 나타낸다. 제2도는 빙핵활성 단백질 유전자와 카복시메칠셀룰라제 유전자를 포함하는 표면발현 전환벡터, pASCM1의 유전자 지도를 나타낸다. 제3도는 표면 발현된 카복시메칠셀룰라아제의 활설을 세척된 세포, 배양액 및 파쇄된 세포액에서 비교하여 나타낸다. 제4도는 표면 발현된 리파제의 활성을 이상계에서의 지질 분해 정도로 나타낸다. 제5도는 표면 발현된 단선항체와 이에 대한 항원의 결합 정도를 엘리자방법으로 측정하여 나타낸다.

Claims (19)

  1. 빙핵활성 단백질 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  2. 제1항에 있어서, 빙핵활성 단백질은 슈도모나스 시링게(Pseudomonas syringae) KCTC 1832에서 유래한 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  3. 제2항에 있어서, 빙핵활성 단백질의 N-말단 분비신호와 C-말단 표적신호를 사용하는 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  4. 제3항에 있어서, 빙핵활성 단백질 유전자의 중간 반복구간의 길이를 조절하여 제조하는 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  5. 제2항에 있어서, 빙핵활성 단백질 유전자의 C-말단에 외래 유전자를 삽입할 수 있는 제한 효소 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  6. 제5항에 있어서, 벡터는 pGINP21M인 것을 특징으로 하는 표면 발현 벡터.
  7. 제6항의 벡터는, pGINP21M으로 대장균을 형질전환하여 얻는 형질전환체(수탁번호 : 0239 BP).
  8. 제1항의 빙핵활성 단백질의 발현 벡터에 외래단백질의 유전자를 연결시켜 제조하는 것을 특징으로 하는 표면 발현 전환벡터.
  9. 제8항에 있어서, 외래단백질이 카복시메칠셀룰라제인 것을 특징으로 하는 pASCM1 표면 발현 전환벡터.
  10. 제8항에 있어서, 외래단백질이 리파제인 것을 특징으로 하는 pASLP1 표면 발현 전환벡터.
  11. 제8항에 있어서, 외래단백질이 인간화된 단선항체인 것을 특징으로 하는 pASIg1 표면 발현 전환벡터.
  12. 제8항의 전환벡터로 숙주세포를 형질전환하여 제조하는 것을 특징으로 하는 형질전환체.
  13. 제12항에 있어서, 숙주세포는 대장균, 초산균, 슈도모나스속 균주, 잔토모나스속 균주, 어위니아속 균주 또는 자이모모나스속 균주에서 선택되는 것을 특징으로 하는 형질전환체.
  14. 제12항에 있어서, 제9항의 전환벡터, pASCM1으로 대장균을 형질전환하여 얻은 형질전환체(수탁번호 : KCTC 0237 BP).
  15. 제12항에 있어서, 제10항의 전환벡터, pASLP1으로 대장균을 형질전환하여 얻은 형질전환체.
  16. 제12항에 있어서, 제11항의 전환벡터, pASIg1으로 대장균을 형질전환하여 얻은 형질전환체.
  17. 제12항의 형질전환체를 배양하여 외래단백질을 빙핵활성 단백질과 융합단백질 형태로 세균의 표면에 발현시켜 제조하는 것을 특징으로 하는 외래 단백질의 제조방법.
  18. 제17항에 있어서, 빙핵활성 단백질 유전자의 중간 반복구간의 길이를 조절함에 의해 외래 단백질의 크기에 제한받지 않는 것을 특징으로 하는 단백질의 제조방법.
  19. 제17항의 방법으로 제조한 외래단백질을 항체, 효소, 항원, 부착 단백질, 흡착 단백질 및 펩티드 라이브러리로 사용하는 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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