KR970059184A - 효모에서 봉입체로 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자의 정제방법 - Google Patents

효모에서 봉입체로 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자의 정제방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 효모에서 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자를 정제하는 방법에 관한 것으로, 인 과립구 콜로니 자극인자(rhG-CSF)가 봉입체로 발현된 효모 세포를 파쇄하여 봉입체를 수득하고, 상기 봉입체를 용해하고, 용해된 봉입체를 산화시켜 이황 결합을 형성시키고, 이황 결합이 형성된rhG-CSF를 침전시켜 분리한 후 재용해하여 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피 및 겔 여과 크로마토그래피를 수행함으로써 고순도의 활성을 갖는 G-CSF를 고수율로 정제할 수 있다.

Description

효모에서 봉입체로 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자의 정제방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 효모에서 봉입체로 발현된 재조합 인 과립구 콜로니 자극인자(이하,rhG-CSF라함)의 발형 정도를 전기영동으로 확인한 결과이고,

Claims (8)

  1. 인 과립구 콜로니 자극인자(rhG-CSF)가 봉입체로 발현된 효모 세포를 파쇄하여 봉입체를 수득하고, 상기 봉입체를 용해하고, 용해된 봉입체를 산화시켜 이황 결합을 형성시키고, 이황 결합이 형성된 rhG-CSF를 침전시켜 분리한 후 재용해하여 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피 및 겔 여과 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는, 효모에서 rhG-CSF를 분리 정제하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단백질 봉입체를 4내지 6M 구아니딘 염 또는 6 내지 8M 요소를 이용하여 용해시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 구아니딘 염이 6M 농도이고, 상기 요소가 8M 농도인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 용해된 단백질 봉입체를 구리 이온으로 산화시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 베타-머캡토에탄올을 최종 농도가 0.2mM이하가 되도록 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법
  6. 제1항에 있어서, 상기 양이온 교환 크로마토그래피에서 SP-세파로즈 수지를 사용하여 60mM초산 나트륨 완충액으로 pH5.8내지 6.2에서 단계 구배하여 단백질을 용출시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 소수성 크로마토그래피에서 페닐세파로즈 수지를 사용하여 요소의 농도를 1에서 4M의 선형 구배로 단백질을 용출시키는 것을 특징으로 하는방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 겔 여과 크로마토그래피에서 세파크릴 S-100수지를 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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