KR960037837A - 비(b)형 간염 바이러스 표면항원 프리-에스1의 제조방법 - Google Patents

비(b)형 간염 바이러스 표면항원 프리-에스1의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 B형 간염 바이러스(hepatits B virus, HBV)의 표면항원인 프리-S1 단백질과 대장균의 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase, GST)의 융합단백질, 상기 융합단백질을 코드하는 유전자를 포함하는 발현벡터, 상기 발현벡터로 형질전환된 대장균 및 이를 배양하는 것을 포함하는 HBV 프리-S1 단백질의 제조 방법에 관한 것으로, 본 발명의 프리-S1 단백질들은 대장균에서 수용성 형태로 생산되며 항원성과 면역유발능을 나타낸다.

Description

비(B)형 간염 바이러스 표면항원 프리-에스1의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 preS1-119 및 preS1-56 단백질의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 유전자의 염기 서열을 나타내고, 제2A도는 preS1-119 단백질과 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase, GST)의 융합단백질을 제조하기 위한 발현벡터의 구조를 나타내고, 제2B도는 preS1-56 단백질과 GST의 융합단백질을 제조하기 위한 발현벡터의 구조를 나타내고, 제3A도는 본 발명이 발현벡터들로 각각 형질전환된 대장균에서 단백질 발현을 IPTG로 유도한 경우와 유도하지 않은 경우의 각 배양액, 및 IPTG로 유도된 경우의 세포추출물을 원심분리한 상충액 및 침전물의 12.5％ SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동(SDS-PAGE)한 결과이고, 제3B도는 제3A도의 젤을 웨스턴 블롯팅한 결과이고, 제4A도는 preS1-119 단백질과 GST의 융합단백질, 이 융합단백질을 트롬빈으로 처리한 시료 및 정제된 preS1-119를 전기영동한 결과이고, 제4B도는 preS1-56가 GST의 융합단백질, 이 융합단백질을 트롬빈으로 처리한 시료 및 정제된 preS1-56을 전기영동한 결과이고, 제5A도는 정제된 preS1-119 단백질의 항원성을 나타내고, 제5B도는 정제된 preS1-56 단백질의 항원성을 타나낸다.

Claims (12)

  1. 대장균의 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase, GST)를 코드하는 유전자의 3'만단에 B형 간염 바이러스(HBV)의 프리-S1단백질을 코드하는 폴리뉴클레오티드를 연결시켜 재조한 융합 유전자를 포함하는, 대장균내에서 작동가능한 발현벡터로 대장균을 형질전환시킨 후 상기 융합 뉴클레오티드의 발현을 가능하게 하는 조건하에서 상기 형질전환된 대장균을 배양한 다음 세포 파쇄액으로부터 수용성 GST와 HBV 프리-S1 단백질의 융합단백질을 분리함을 포함하는, GST와 HBV 프리-S1 단백질의 융합단백질을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 형질전환된 대장균이 대장균 DH5@/pGSTpreS1-119(KCTC 8646P) 또는 대장균 BL21(DE3)/pGSTpreS1-56(KCTC 8645P)임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 형질전환된 대장균의 배양 후 세포를 파쇄한 다음 원심 분리하여 얻은 상충액을 글루타티온 친화성 프로마토그래피하여 상기 융합단백질을 정제하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  4. 상기 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 융합단백질을 트롬빈으로 절단시킨 후 글루타티온 친화성 크로마토그래피하여 글라타티온-S-전이효소를 제거하고 프르-S1 단백질만을 분리하는 것을 특징으로 하는 B형 간염 바이러스 프리-S1 단백질의 제조 방법.
  5. 글루타이온-S-전이효소에 B형 간염 바이러스의 프리-S1 단백질이 융합된 융합단백질.
  6. 제5항에 있어서, 상기 프리-S1 단백질이 하기 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 융합단백질:
    ;또는
  7. 글루타이온-S-전이효소와 B형 간염 바이러스의 프리-S1 단백질의 융합단배질을 코드하는 융합유전자.
  8. 제7항에 있어서, 상기 B형 간염 바이러스의 프리-S 단백질을 코드하는 전자가 하기 염기 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 융합유전자:
  9. 제7항의 융합유전자를 포함하는 발현벡터.
  10. 제9항에 있어서, 플라스미드 pGSTpreS1-119 또는 pGSTpreS1-56.
  11. 제9항의 발현벡터로 형질전환된 대장균.
  12. 제11항에 있어서, 대장균 DH5@/pGSTpreS1-119(KCTC 8646P) 또는 대장균 BL21(DE3)/pGSTpreS1-56(KCTC 8645P).
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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