KR960004449B1

KR960004449B1 - 결정성 trh·타르트레이트의 제조방법

Info

Publication number: KR960004449B1
Application number: KR1019880000022A
Authority: KR
Inventors: 지또시 하다나까; 마사히꼬 후지노
Original assignee: 다께다야꾸힝고오교 가부시끼가이샤; 우메모또 요시마사
Priority date: 1987-01-06
Filing date: 1988-01-06
Publication date: 1996-04-06
Also published as: KR880009042A; IT8819007A0; IT1215662B

Abstract

내용 없음.

Description

결정성 TRH·타르트레이트의 제조방법

제1도는 x선 회절형태인데, 이로부터 본 발명의 방법에 의해 수득된 정격의 시료가 결정 구조를 갖는 것이 명백해진다.

본 발명은의 결정성 TRH·타르트레이트의 제조방법에 관한 것이다. N-히드록시-5-노르보르넨-2,3-디카르복시이미드와 디시클로헥실카르보디이미드의 존재하에서 N-보호된 L-피로글루타밀 히스티딘과 L-프롤린아미드를 축합시키고, 생성된 N- 보호된 TRH를 촉매 환원시켜 보호기를 제거하고 생성된 반응용액에 타르타르산과 아세토니트릴을 가해 TRH·타르트레이트·아세토니트릴 결정을 침전시킨 후, 결정을 물-에탄올로부터 재결정시킴으로서 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트를 수득하는 것이 알려져 있다.

그러나 이 방법은 불편하게도 축합공정에 약 30시간이나 소요된다.

한편, N-보호된 TRH는 강산 존재하에서 디시클로헥실카르보디이미드를 이용하여 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드를 축합시켜 제조하는 것이 또한 알려져 있다.

본 발명자들은 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드의 축합에 요구되는 시간을 크게 단축시키고 이 축합공정 다음의 TRH·타르트레이트의 결정 제조에서 수득되는 결정의 순도를 높이기 위해 부지런히 연구한 결과 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히드스티딘과 L-프롤린아미드를 강산과 디시클로헥실카르보디이미드 존재하에서 축합시키는 단계의 공정과 TRH·타르트레이트·모노히드레이트를 수득하는 통상의 공정을 결합시킴으로써 전공정에 요구되는 시간이 상당히 단축됨과 동시에 생성된 결정의 순도가 매우 높다는 점 및 이 결정은 습도에 매우 안정하다는 점을 발견했다. 이런 발견에 기초하여 본 발명자들은 본 발명을 완성하기 위해 연구를 더 진행하였다.

본 발명은 강산 존재하에서 디알킬카르보디이미드를 이용하여 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드를 축합시키고, 생성된 N-보호된 TRH를 촉매 환원시켜 보호기를 제거하고, 반응용액에 타르타르산과 아세토니트릴을 가하여 TRH·타르트레이트·아세토니트릴 결정을 침전시킨 후 결정을 물에 용해시켜 TRH·타르트레이트·모노히드레이트 결정을 침전시킴으로써 결정성 TRH·타르트레이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에서는 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드를 감산 존재하에서 디알킬카르보디이미드를 이용하여 축합시킨다.

본 발명에서 사용된 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘은, 예를 들면 (1) 공지의 N-보호된 L-피로글루탐산과 N-히드록시-5-노르보르넨-2,3-디카르복시이미드를 디시클로헥실카르보디이미드 존재하에서 반응시켜 대응하는 활성에스테르를 수득하고, 그 활성 에스테르를 L-히스티딘의 칼륨염과 반응시킨후 생성물을 산성화시키는 방법, (2) 공지의 N-보호된 L-피로글루탐산클로라이드를 L-히스티딘과 반응시키는 방법, 그리고 (3) 공지의 N-보호된 L-피로글루탐산 클로라이드 또는 그 활성 에스테르를 히스티딘 에스테르와 반응시킨 후 탈에스테르화시키는 방법에 의해 수득된 것이다.

본 발명에서 사용된 L-프롤린아미드는 N-보호된 L-프롤린아미드의 보호기를 제거하여 수득된 것이다.

상술한 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 N-보호된 L-프롤린아미드의 보호기로는, 아미노기를 보호하기 위해 통상적으로 사용되는 보호기, 예를 들면 포르밀, 아세틸, 벤조일 등과 같은 아실, p-톨루엔술포닐, P-메톡시벤젠술포닐등과 같은 방향족술포닐, 벤질옥시카르보닐, t-부틸옥시카르보닐, t-아실옥시카르보닐등의 알킬옥시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐, o-니트로술페닐기 등이 포함된다.

축합반응에 사용되는 강산에는, 예를 들면 염산, 황산, p-톨루엔술포산, p-메톡시벤젠술폰산, 벤젠술폰산, 메탄술폰산, 불소화수소산, 브롬화수소산, 요오드화수소산등의 산뿐만 아니라 앰버라이트 120B

, 다우엑스 50

, 애머리스트 15W

, 애머리스트 1005

, 디아이온 SK 1B

등과 같은 술폰산을 갖는 이온-교환수지도 포함된다.

디알킬카르보디이미드로는 디시클로헥실카르보디이미드, 디이소프로필카르보디이미드, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드, 1-시클로헥실-3-(2-모르폴리노에틸)카르보디이미드, 1-시클로헥실-3-(4-디에틸아미노시클로헥실)카르보디이미드, 그의 히드로클로라이드 등을 포함하는 탈수축합제를 사용할 수 있다.

반응에 사용할 수 있는 용매로는 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘을 부분적으로 또는 완전히 용해시킬 수 있는 것으로서, 이들 용매의 실제에는 디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 디옥산, 아세토니트릴, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 에틸아세테이트, 에테르, 아세톤, 피리딘, t-부틸알콜 또는 이들의 임의의 혼합물 또는 이들과 물과의 임의의 혼합물 등이다. L-프롤린아미드의 양은 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘 몰 중량의 0.5~10배, 바람직하게는 0.8~2배이고, 강산의 양은 L-프롤린아미드의 몰 중량의 0.01~2배, 바람직하게는 0.5~1.5배이다.

반응온도는 약 -30℃~90℃, 바람직하게는 약 -50℃~30℃이고 반응은 교반 또는 정치하에서 수행한다.

이렇게 수득된 N-보호된 TRH를 촉매 환원시켜 보호기를 제거한다. 촉매환원은 예를 들어 정상압 또는 상승압하에서, 바람직하게는 전자에서 수행한다. 촉매의 예로서는 팔라듐 블랙, 팔라듐-탄소, 콜로이드성 백금, 산화백금, 니켈-포함 레이니촉매, 코발트, 철 등이 포함된다. 본 발명에 사용할 수 있는 용매의 예로는 물, 메탄올, 에탄올 등의 알콜, 디메틸포름아미드, 아세트산 또는 이들의 임의의 혼합물 등이 포함된다.

상술된 반응에서 수득될 수 있는 반응용액에 타르타르산과 아세토니트릴을 가하여 TRH·타르트레이트·아세토니트릴 결정을 침전시킨다.

타르타르산의 양은 특별히 제한되지는 않지만 TRH1몰에 대해 약 0.5몰 또는 그이상, 바람직하게는 약 0.8~1.4몰이다. 아세토니트릴의 양은 TRH1몰에 대해 약 1몰 또는 그 이상, 바람직하게는 약 2~100배의 몰이다.

결정을 침전시키기 위해서는 공지된 결정의 침전방법, 예를 들면 반응계에 TRH와 타르타르산을 용해시키지 않거나 또는 거의 용해시키지 않는 용매, 예를 들면 아세트산, 포름산 등을 가하여 반응용매에서 TRH·타르트레이트의 용해도를 낮추는 방법, 용매의 온도차에 기인한 용질의 용해도 차이를 이용하여 포화된 용액을 냉각시키는 방법, 그리고 용액중 용매를 증류제거하는 방법등을 적절히 사용할 수 있다. 용액으로부터 침전된 결정은 공지의 방법에 따라 수거한다. 결정을 수거하는 방법으로는 여과, 원심분리 등을 예로 들 수 있다.

이렇게 수득된 결정은 물에 용해시켜 TRH·타르트레이트·모노히드레이트 결정을 침전시킨다.

물의 부피는 1몰의 TRH에 대해 등몰~100배의 몰, 바람직하게는 약 2~30배의 몰이다.

결정을 침전시키기 위해서는 공지의 결정 침전방법, 예를 들면 반응계에 TRH·타르트레이트를 용해시키지 않는 용매, 예를 들면 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, 아세톤, 디옥산등을 가하여 반응계에서 TRH·타르트레이트의 용해도를 낮추는 방법, 용매의 온도차에 기인한 용질의 용해도 차이를 이용하여 포화 용액을 냉각시키는 방법, 용액중 용매를 증류제거하는 방법, 씨결정을 가하는 방법등이 통상적으로 이용된다. 결정을 수확하는 방법으로는 여과, 원심 분리 등을 예로 들 수 있다.

본 발명의 방법에 의해 수득한 결정성 TRH·타르트레이트는 등몰비의 물이 더 연합된 등몰비의 TRH 및 타르타르산의 분자 화합물의 균질결정이다.

위의 방법에 의해 수득된 결정의 융점이 127℃~129℃인 경우에는 이 결정에 물을 뿌리거나 고습도(예. 상대습도 90%)하에서 장시간 방치하여 수분함량을 약 8~10%로 높인 후 건조시킴으로써 융점이 187℃~189℃인 결정을 쉽게 수득한다.

본 발명에 따르면 축합공정에 요구되는 시간을 통상의 공정에 요구되는 시간의 1/4~1/5로 줄일 수 있다. 게다가 TRH를 타르타르산 존재하에서 결정시키면 순수 생성물로 수득할 수 있어서 본 발명의 방법은 TRH의 정제방법으로도 우수하다. 더 구체적으로 설명하면, 합성에 의해 수득된 조 TRH는 크로마토그래피와 같은 통상의 정제방법을 이용하지 않고 본 발명 방법에 의해 정제할 수 있다. 이렇게 수득된 결정은 장시간 방치한 후에도 습윤되지 않는다. 그러므로 그 결정은 안정성이 매우 높아 장시간 저장할 수 있다.

본 발명의 더 자세한 설명을 위해 다음 실시예를 제시한다. 실시예에서 아미노산 또는 펩티드의 아미노산 잔기는 특별한 명시가 없는한 L-형태이고 다음의 약자로 나타낸다.

pGlu : 피로글루탐산

His : 히스티딘

Pro : 프롤린

ProNH₂: 프롤린아미드

Z : 벤질옥시카르보닐

DCC : N,N'-디시클로헥실카르보디이미드

pTsOH : p-톨루엔술폰산

DMF : 디메틸포름아미드

[실시예]

DMF에서 10.9g(44mmol)의 Z-ProNH₂를 5% Pd-C 존재하에서 촉매환원시켰다. 여액에 17.1g(40mmol)의 Z-pGlu-His-OH·1.5H₂O, 7.6g(40mmol)의 p-톨루엔술폰산과 9.9g(48mmol)의 DCC를 가했다. 혼합물을 15~18℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응 용액에 5.6ml(40mmol)의 트리에틸아민을 가한후 불용성 물질을 여과했다. 감압하에서 여액으로부터 대부분의 DMF 부분을 증류제거했다. 농축된 잔류물에 에틸아세테이트를 가해 조분말을 수득했다. 이렇게 얻은 Z-TRH 12.9g을 아세트산 135ml에 용해시켰다. 용액에 5% 팔라듐-탄소 13g을 가하고, 혼합물을 촉매환원시켰다. 촉매를 여과한 후 감압하에서 대부분의 아세트산 부분을 증류제거했다. 잔류물에 L-타르타르산 3.75g을 가하고 용해시켰다. 용액에 아세토니트릴을 가했다. 그런뒤 침전된 결정을 여과로 수거하여 융점 145~147℃인 결정성 TRH·타르트레이트·아세토니트릴 118g(85%)을 수득했다.

=-47.6°(c=1,물)

원소분석 : C₁₆H₂₂O₄N₆·C₄H₆O₆·CH₃CN

계산측 : C; 47.74, H; 5.65, N; 17.72.

실측치C; 47.70, H; 5.77, N; 17.58.

물 130ml에 결정성 TRH·타르트레이트·아세토니트릴 24.3g을 용해시켰다. 용액에 활성탄 1g을 첨가하고 혼합물을 여과하였다. 여과액을 약 50g의 부피로 농축시켰다. 농축액에 에탄올 130ml와 TRH·타르트레이트·모노히드레이트(고융점형) 0.5g을 가했다. 혼합물은 약 30℃에서 3시간 동안 교반한 후 에탄올 70ml를 적가하였다. 혼합물을 하룻밤 방치한 뒤 여과하여 결정을 수거하고 진공중에서 건조시켜 융점 187~188℃(분해)의 TRH·타르트레이트·모노히드레이트 22.1g을 수득하였다.

=-47.6°(c=1,물)

원소분석 : C₁₆H₂₂O₄N₆·C₄H₆O₆·H₃O

계산측 : C; 45.28, H; 5.70, N; 15.84.

실측치 : C; 45.07, H; 5.69, N; 15.84.

덧붙여, 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트를 침전시키는 상기 공정에서, 고융점형의 씨결정을 첨가하지 않고 공정을 실시하여, 융점 127~129℃의 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트를 수득했다. 10g의 TRH·타르트레이트·모노히드레이트위에 약 10ml의 물을 뿌리고 실온에서 하룻밤 방치한 뒤, 50~60℃의 진공중에서 건조시켜 융점이 187~188℃인 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트(고융점형) 10g을 수득했다.

Claims

강산 존재하에서 디알킬카르보디이미드를 이용하여 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드를 축합시키고, 생성된 N-보호된 TRH를 촉매환원시켜 보호기를 제거하고, 생성된 반응용액에 타르타르산과 아세토니트릴을 가하여 결정성 TRH·타르트레이트·아세토니트릴을 침전시킨 뒤 결정을 물에 용해시켜 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트를 침전시킴을 특징으로 하는 결정성 TRH·타르트레이트의 제조방법.
제1항에 있어서, TRH·타르트레이트·아세토니트릴 결정을 1몰의 TRH에 대해 등몰~100배 몰 부피의 물에 용해시킴을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, 결정성 TRH·타르트레이트·모노히드레이트의 침전공정을 반응계에 TRH·타르트레이트를 용해시키지 않는 용매를 가하여 반응계에서 TRH·타르트레이트의 용해도를 낮추도록 함으로써 실시함을 특징으로 하는 제조방법.
제3항에 있어서, TRH·타르트레이트를 용해시키지 않는 용매가 에탄올임을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드의 축합에 있어, L-프롤린아미드의 양이 N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘의 몰 중량의 약 0.5~10배 몰임을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드의 축합반응을 약 -30~90℃의 온도에서 실시함을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, N-보호된 L-피로글루타밀-L-히스티딘과 L-프롤린아미드의 축합을 p-톨루엔술폰산 존재하에서 실시함을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, 타르타르산과 아세토니트릴을 가하여 결정성 TRH·타르트레이트·아세토니트릴을 침전시킴에 있어, 타르타르산의 양이 TRH 1몰에 대해 약 0.5몰 또는 그 이상 및 아세토니트릴의 양이 TRH 1몰에 대해 1몰 또는 그 이상임을 특징으로 하는 제조방법.
제1항에 있어서, 보호기를 제거하기 위한 N-보호된 TRH의 촉매 환원 반응을 정상압하에서 실시함을 특징으로 하는 제조방법.