KR960004028B1

KR960004028B1 - 면역증강제 조성물

Info

Publication number: KR960004028B1
Application number: KR1019920015854A
Authority: KR
Inventors: 고광호; 정진호; 김병각; 유성열; 고경환; 조철구; 강명승; 최정숙
Original assignee: 강명승
Priority date: 1992-09-01
Filing date: 1992-09-01
Publication date: 1996-03-25
Also published as: KR940006593A

Abstract

내용 없음.

Description

면역증강제 조성물

제 1 도는 본 발명의 면역증강제 조성물을 환자에 투여한 후의 혈색소량과 Ht치의 변동을 나타낸 그라프이며,

제 2 도는 본 발명의 면역증강제 조성물을 환자에 투여한 후의 적혈구와 백혈구수의 변동을 나타낸 그라프이며,

제 3 도는 본 발명의 면역증강제 조성물을 환자에 투여한 후의 적혈구 침강속도의 변동을 나타낸 그라프이며, 그리고

제 4 도는 본 발명의 면역증강제 조성물을 환자에 투여한 후의 혈중 뇨소, 질소 및 BUN의 변동을 나타낸 그라프이다.

본 발명은 면역증강제 조성물에 관한 것이다.

특히 본 발명은 인삼알카로이드 엑기스, 파극엑기스, 모려분말 및 복령분말을 포함하는 면역증강제 조성물에 관한 것이다.

척추동물은 외부에서 침입한 균이나 외부물질에 대하여 비적응적인(nonadaptive) 방어기능을 가지고 있다. 생체에는 비적응적인 방어기능을 하는 피부조직과 방어세포들과 방어기능을 가지는 단백질이 존재하고 있다. 방어세포로는 파고사이트(phagocytes)가 있는데 이 세포는 생체에 침입한 모든 병원체들에 결합하여 이들을 먹어치우고 분해하는 기능을 가지고 있다. 또한 내추럴 킬러세포(natural killer cells : NK 세포)는 기생균이나 암세포를 감지하고 신속히 제거하는 기능을 가진다. 또한 외부에서 침입한 박테리아. 바이러스나 기생균(parasite) 또는 자신내에서 생겨나는 변형된 세포, 즉 암세포에 대하여 또는 외부에서 들어오는 독성물질(이들을 이물질로 칭한다.)로부터 자신을 보호하기 위하여 비적응적인 방어기전외에 방어기능으로서 면역반응을 나타낸다. 면역반응은 척추동물에서만 관찰되는데 척추동물은 두 형태의 면역반응을 나타낸다. 즉, 단백질이 항체를 형성하는 항체중재면역반응(Ab-mediated immune reaction) 또는 면역세포로 하여금 세포중재면역반응(cell-mediated immune reaction)을 나타내어 파괴제거하고 있다. 이들 면역반응들을 특이성이 있는 면역반응이라 한다. 특이성이 있는 면역반응이 적응력(adaptive)이라는 것은 생체가 살아가는 환경에 대하여 후천적으로 생겨나는 기능이기 때문이다. 에이즈(AIDS)는 후천성면역결핍증(acquired immune deficient)의 약자로 면역기능이 결핍되어 인체의 방어작용을 할 수 없기 때문에 치료가 불가능하며 수년내에 사망하는 무서운 질병이다.

면역을 지배하는 두 종류의 면역 즉 세포와 체액면액은 외형적으로는 구별되지 않는 두 종류의 림포이드(lymphoid)세포들로부터 생겨난다. 즉 체액 또는 세포면역반응 모두에서 특성을 결정하는 세포를 임파구(lymphocytes)라 부른다. 이 세포들은 온몸에 퍼져 있으며 조직세포를 통하여 이동하거나 혈액이나 림프를 통하여 순환하다가 비장이나 림프절과 같은 림프기관에서 일시적으로 축적되기도 한다. 1950년 버어네트(Burnet)에 의하여 제안된 크로날 선택(clonal selection)가정에 의하면 각 림포사이트는 면역세포로서의 기능에 따라 B-임파구(B-lymphocyte)와 T-임파구(T-lymphocyte)로 구별된다. B-임파구는 포유동물의 경우 골수에서 또는 새의 경우 패브리커스 버사(Fabricus vursa)에서 성장하고 T-임파구는 타이무스(thymus)에서 성장한다.

근래에 암, 에이즈, 방사능 및 기타 대부분의 질병에 대한 생체면역계의 반응에 관하여 더욱 진전된 이해와 폭이 넓은 분석으로 숙주의 방어방식을 여러 가지 기전으로 설명할 수 있게 되었다. 한편 종양세포에 직접 작용하여 성장억제 또는 사멸을 초래하거나 생체의 면역반응을 강화시키거나 방어체계를 활성화하는 중계자에 작용하여 숙주의 이러한 질병에 대한 방어능력을 증가시키는 기전 및 각종의 종양세포나 기타 숙주 면역체계에 대한 감수성을 높여 숙주의 항종양효과를 나타내거나 종양세포 또는 이종의 세포에 작용하여 변이세포의 변이도를 낮추거나, 미분화된 종양세포를 촉진시켜 분열하지 않은 성숙된 세포로 만드는 기전이외에도 종양에 대한 항암 화학요법 및 방사전 요법에 따르는 생체의 세포독성에 대한 피해를 경감시킴으로서 종양치료효과를 증가시키는 기전 등이 발표되었다. 이러한 기전을 나타내는 물질을 통털어 생체반응조절물질(Biological response modifier : BRM)이라 칭하고 있으며 이들은 합성된 화학요법제와는 달리 생체의 생물학적 반응에 영향을 미쳐 암에 대한 억제효과를 나타냄으로서 치료시 부작용을 줄일 수 있을 뿐만 아니라 그 효과도 증가시킬수 있다.

또한 면역증강효과를 발휘함으로써 후천성면역결핍증, 방사선피폭 등에도 좋은 효과를 기대할 수 있는 것으로 사료된다.

이러한 면역증강효과는 면역세포인 대식세포, B-임파구 및 T-임파구의 기능에 미치는 영향 및 기타 실험을 행함으로서 본 발명의 조성물이 탁월한 면역 증강효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 인삼일카로이드 엑기스20∼70중량부, 파극엑기스 15-45중량부, 모려분말 2-5중량부 및 복령분말 10-25부를 혼합하여 제조된 면역증강제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 생약에 관하여 오랜 연구를 행하여 오고 있다. 특히 본 발명자들은 생약을 주제로한 면역 증강제에 관하여 오랜연구를 행하여 오고 있다.

인삼은 고래로부터 자양강장제로서 사용되어 오고 있으면, 인삼에 관하여 집중적인 연구가 행하여지고 있다.

파극은 꼭두선이과에 속하는 상록관목으로 그 상세한 성분은 알려지지 않았다.

모려는 심해 바다에 사는 굴조개의 일종으로 이의 껍질에는 탄산칼슘, 규산, 동성분, 요드성분 및 기타 미량성분이 함유되어 있다고 알려져 있으나 그 상세한 약리작용은 밝혀진 바 없다.

복령은 한방에서 이뇨, 지사 등의 용도로 사용되고 있다.

그런 이들 성분 각각이 면역증강제로서의 효과가 있는지는 밝혀진 바 없다.

본 발명자들은 이들 성분을 혼합하여 포유동물에 투여하면 탁월한 면역증강효과가 있는 놀라운 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 실시예로써 상세히 설명한다.

[제조실시예 1]

1. 인삼을 석유에테르로 통상의 방법으로 추출한 후 감압농축시켜서 얻어진 잔류물을 5% 염산으로 가수분해시켜서 얻어진 가수분해물의 암모니아수로 중화시키고 이 액을 클로로포름으로 추출하고 감압농축시켜서 인삼의 특정 알카로이드 성분의 분획을 얻는다.

2. 모려(Ostrea gigas thunburg)의 껍질을 태운 후 분말화 한다.

3. 파극(Morinda Officinalis How)를 에탄올로 통상의 침출방법으로 침출하고 감압농축하여 파극엑기스를 제조한다.

4. 복령(Polia cocas walf)를 분말화한다.

상기에서 얻어진 각 성분을 인삼엑기스 20-70중량부, 파극엑기스 15-45중량부, 모려 2-5중량부 및 복령 10-25중량부를 긴밀히 혼합하여 본 발명의 면역증강제 조성물을 제조한다.

인삼알카로이드 엑기스 250mg, 파극엑기스 150mg, 복령분말 75mg, 모려분말 15mg, 유당 100mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충진하여 캡슐제를 제조한다.

[제조실시예 2]

1. 인삼을 석유에테르로 통상의 방법으로 추출한 후 감압농축시켜서 얻어진 잔류물을 5% 염산으로 가수분해시켜서 얻어진 가수분해물을 암모니아수로 중화시키고 이 액을 클로로포름으로 추출하고 감압농축시켜서 인삼의 특정 알카로이드 분획을 얻는다.

2. 모려(Ostrea gigas gigas thunburg)의 껍질을 건조시키고 분말화한다.

3. 파극(Morinda Officinalis How)를 에탄올로 통상의 방법으로 침출하고 감압농축시켜서 파극엑기스를 제조한다.

4. 복령을 분말화한다.

상기에서 얻어진 각 성분을 인삼엑기스 20-70중량부, 파극엑기스 15-45중량부, 모려분말 2-5중량부 및 복령분말 10-25중량부를 긴밀히 혼합하여 본 발명의 면역증강제 조성물을 얻는다.

인삼알카로이드 엑기스 100mg, 파극엑기스 60mg, 복령분말 30mg, 모려분말 5mg, 유당 100mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 긴밀히 혼합하고 통상의 정제의 제조방법으로 타정하여 정제를 제조한다.

[실험실시예 1]

1. 면역학적 실험 :

1) 면역관련 장기중량의 변화

ICR 마우스를 4군으로 나누어 실험하였다. 대조군(N군), 정상마우스에 시료를 투여한 군(NS군), 사르코마 180세포를 왼쪽 서혜부에 피하 이식한 군(T군) 그리고 사르코마 180 세포를 왼쪽 서혜부에 피하이식한 후 실시예 1에서 제조된 본 발명의 조성물을 투여한 군(TS군)으로 분류 실험하였다. 각 군은 5마리의 마우스를 사용하였고, NS군과 TS군에는 시료 20, 50 및 100mg/kg/day의 량으로 5일간 연속으로 복강내 투여하였고, N군과 T군에는 생리식염수를 투여하였다. 시료투여 후 7일 후에 실험동물의 중량을 측정한 후 치사시켜, 간, 비장 및 흉선을 적출하여 중량을 측정하였다.

2) 마우스의 대식세포(macrophage)활성화에 대한 작용

(A) 수퍼옥사이드 음이온(superoxide anion(SOA))량의 측정

대식세포의 활성화 여부를 알아보기 위하여 수퍼옥사이드 음이온량을 측정하였다.

(a) 실험동물

ICR 마우스(응성, 20-25g)을 사용하였다.

(b) 시약 및 재료

(ⅰ) 인산염 완충 염류용액(Phosphate buffered saline : PBS, pH 7. 3)

(ⅱ) 페리사이토크롬 C(Ferricytochrome C Ⅳ)(Sigma Chem. Co., U.S.A.)

(ⅲ) 인체혈청(Human serum)(Sigma Chme. Co., U.S.A.)

(ⅳ) RPMI 1640 medium(Sigma Chem. Co., U.S.A.)

: RPMI 1640 medium 16.4g, NaHCO₃2g, L-글루타민 0.292g을 3차 증류수 900ml에 녹인 후 페니실린-스트렙토마이신-암포테리신 B를 1ml 가하여 멸균여과후 56도에서 30분간 불활성화시킨 송아지태아혈청(fetal calf serum) 100ml를 가하였다.

(ⅴ) 세포배양 다중웰(Cell culture multiple well)(Falcon Co., U.S.A.)

(ⅵ) 옵소나이즈화 지모산(Opsonozed zymosan)

: 지모산 A(Zymosan A)(Sigma Chem. Co., U.S.A.)를 10mg/ml로 PBS에 넣고 1시간 끓인 후 원심분리 세척하고 50mg/ml 농도로 PBS에 녹인 후 지모산과 사람 혈청을 1 : 4의 비율로 혼합하여 37도에서 30분간 배양 후 원심분리하여 지모산 침전물에 PBS로 최종농도가 10mg/ml되도록 제조하였다.

(c)실험방법

(ⅰ) 암이식 및 시료투여

40마리의 마우스를 4 실험군으로 나누어 2군은 사르코마 180을 마우스의 왼쪽 서혜부에 이식하고 다른 2군은 정상으로 하여 그들 각각을 다시 대조군과 시료투여군으로 나누어 생리식염수와 실시예 1의 조성물을 20, 50 및 100mg/kg/day를 매일 5일간 연속 투여하였다.

(ⅱ) 복강세포중의 대식세포 제조

최종 시료투여일로부터 5일째 되는 날 마우스를 치사시펴 PBS로 복강세포를 취하고 1200rpm에서 10분간 원심분리하여 침전된 세포를 1×10⁶cell/ml로 RPMI 1640배지에 부유시키고 37도에서 2시간 배양 후 플레이트에 부착된 대식세포를 취하였다.

(ⅲ) 수퍼옥사이드 음이온(Superoxide anion : SOA)량의 측정

대식세포, 10mM의 글루코오스 80uM의 페리사이토크롬 C(ferricychrome C)와 0.2mg/ml의 옵소나이즈드 지모산(Opsonized zymosan)을 함유한 BPS 1.5ml를 가하고 37도에서 90분간 배양한후 1200rpm에서 10분간 원심분리하여 상징액은 냉시험관에 옮겨 500nm에서 흡광도를 측정하여 대식세포 1×10⁶cell당 SOA량을 산출하였다. 그 공정은 다음의 스킴 1과 같다.

Scheme 1 : 수퍼옥사이드 음이온(SOA) 분석공정 :

3) 마우스 B-임파구 활성화에 대한 작용

(A) 마우스의 용혈반 형성 세포(Plaque forming cell) : PFC)수의 측정

B-임파구의 면양 적혈구(Sheep red blood cell)에 대한 항체생성능을 알아보기 위해 커닝햄(Cunningham)등의 방법(1973)을 수정하여 용혈반 형성세포를 측정하였다.

a) 실험동물

ICR 마우스(웅성, 20-25g)을 사용하였다.

b) 시약 및 재료

(ⅰ) PBS(pH 7.3)

(ⅱ) 0.83% NH₄Cl 용액

(ⅲ) DEAE 덱스트란(Sigma Chem. Co., U.S.A.)

(ⅳ) 한천(Difco, U.S.A.)

(ⅴ) 면양 적혈구(Sheep red blood cells)(SRBC : Korea media, Korea)

(ⅵ) 보체(Complement)(Sigma Chem. Co., U.S.A.)

(ⅶ) 세포배양 플레이트(Green Cross Manufacture Co., Korea)

(ⅷ) 현미경 커버글라스(4.5×50mm, Fisher Co., U.S.A.)

c) 실험방법

(ⅰ) 시료투여 및 면역화

40마리의 마우스를 4실험군으로 나누어 2군은 사르코마 180을 마우스의 왼쪽 서헤부에 이식하고, 다른 2군은 정상으로 하여 그들 각각을 다시 대조군과 시료투여군으로 나누어 생리식염수와 실시예 1의 조성물을 20, 50 및 100mg/kg/day를 매일 1회 5일간 연속적으로 복강내에 투여하였다. 최종 시료투여일로부터 7일 후에 1×10⁷SRBC를 복강내에 투여하여 면역화시켰다.

(ⅱ) 비장세포 부유액 제조

면역시킨지 5일 후에 마우스를 치사시켜 비장을 적출하였다. 빙냉의 PBS를 가하면서 100메쉬에서 비장을 분쇄하여 얻은 비장세포를 5분간 방치하여 조직 파편을 제거한 후 세포 부유액을 1500rpm에서 5분간 원심분리하여 상징액을 제거한 후 37도의 0.83% NH₄Cl 용액에 부유시켜 적혈구를 용해시키고 다시 원심분리한후 빙냉의 PBS에 부유시켜 적혈구가 제거된 비장세포수를 측정하였다.

(ⅲ) 50% SRBC를 PBS로 3회 원심분리 세척하고 50% SRBC가 되도록 PBS에 부유시켰다.

(ⅳ) 한천 용액의 제조

PBS에 0.5% agar와 0.05% DEAE 덱스트란을 가해 중탕하여 완전히 녹인 후 이 용액을 47도에서 유지시켰다.

(ⅴ) 배양혼합액의 제조

25㎕ 50% SRBC, 25㎕ 보체(complement), 350㎕ 한천 용액과 150㎕ 비장세포 부유액을 즉시 혼합하여 배양플레이트(culture plate)에 이 혼합액 150㎕씩을 가하여 현미경 커버글라스를 덮었다.

(ⅵ) 용혈반 형성 세포수 측정

상기의 한천플레이트(agar plate)를 37도, 5% CO₂배양기에서 4시간 배양한 후 생성된 용혈반 형성 세포(Plaque forming cell : PEC)수를 측정하였다. 그 공정은 스킴 Ⅱ에 나타내었다.

스킴 Ⅱ : 용혈반 형성 세포 분석공정(procedure for hemolytic plaque forming cells assay)

N : number of plaque abserved in one cover glass

C : count of spleen cells in 1ml of spleen cell suspension

Vm : volume of incubation mixture filled into one cover glass(ml)

Vs : total volume of spleen cell suspension(ml)

4) 마우스의 T-임파구의 활성화에 대한 작용

(A) 지연형 과민반응(Delayed type hypersensitivity : DTH)의 측정

Lagrange 등(1974)의 방법에 준하여 SRBC에 대한 지연형 과민반응을 측정하였다.

a) 실험동물

ICR 마우스(웅성, 20-25g)을 사용하였다.

b) 실험방법

(ⅰ) 암이식 및 시료투여

40마리의 마우스를 4실험군으로 나누어 2군은 사르코마 180세포를 마우스의 왼쪽 서혜부에 이식하고, 다른 군은 정상으로 하여 그들 각각을 다시 대조군과 시료투여군으로 나누어 암이식 다음날부터 생리식염수와 실시예 1의 조성물을 20, 50 및 100mg/kg/day를 매일 5일간 연속적으로 복강내에 투여하였다.

(ⅱ) 지연형 과민반응측정

시료투여 마지막날 5×10⁵SRBC를 마우스의 꼬리정맥에 투여하여 감작시킨다음 5일후 5×10⁵SRBC를 마우스의 오른쪽 발바닥에 투여하였다. 이때 왼쪽 발바닥에는 생리식염수를 투여하여 비교치로 삼았다. 24, 48, 72시간 후의 발두께(발바닥과 발등사이)를 마이크로메터(micrometer)(Mitzutody Co., Japan)을 사용하여 측정하였다. 오른쪽 발두께에서 왼쪽 발두께를 뺀 발부종 두께를 지연성 과민반응의 척도로 삼았다. 그 공정은 다음의 스킴 Ⅲ와 같다.

스킴 Ⅲ : 지연형 하이퍼센서티비티 분석공정(Procedure for delayed type hypresensitivity assay)

2. 실험결과

(A) 체중의 변화

각 실험군의 체중을 다음 표 1에 요약하였으며, 그 체중은 크게 변동되지 않았다.

(B) 간중량의 변화

간중량은 특히 NS 100mg/kg/day 투여군이 N군에 비하여 21% 증가하였으며 TS 100mg/kg/day 투여군에서는 T군에 비해 약 40% 정도 증가하였다.

(C) 비장중량의 변화

N과 NS투여군간에는 비장중량에 큰 차이를 보이지 않았으나 TS 50 및 100mg/kg/day 투여군에서는 T군에 비해 약 40%정도 증가하였다.

(D) 흉선중량의 변화

각 실험군의 흉선의 중량에는 큰 변화가 없었다.

표 1 : Effects of sample on the immunoorgam weight

2. 마우스에 대한 대식세포 활성화에 대한 효과

시험동물의 대식세포가 활성화되어 분비되는 수퍼옥사이드 음이온(superoxide anion)량을 측정한 결과, 본 발명의 실시예 1의 조성물 100mg/kg./day 투여군에서 대주군에 비해 약 1.4배의 증가가 있었다.

그 결과는 다음의 표 2와 같다.

표 2 : Effects of sample on the release of superoxide anion in normal and tumor bearing ICR, mice peritoneal macrophages

3. 마우스의 B-임파구 활성화에 대한 면양 적혈구(SRBC)에 대한 용혈반 형성 세포수는 특히 100mg/kg/day 투여군에서 대조군에 비하여 약 2.6배의 증가가 있었다.

그 결과는 다음 표 3과 같다.

표 3 : Effects of sample on the hemolytic plaque forming cells in the spleen of nomal ICR mice immunized with SRBC

4. 마우스 T-임파구 활성화에 대한 효과

본 발명의 실시예 1의 조성물을 투여한 군의 면양 적혈구(SRBC)에 대한 지연형 과민반응에는 거의 영향을 나타내지 않았다

그 결과는 다음 표 4와 같다.

표 4 : Effects of sample on UTH response to SRBC

이상의 실험에서 확인되는 바와 같이 본 발명의 면역증강제 조성물은 간과 비장의 무게를 증가시켰으며, 마우스의 복강내에 존재하는 대식세포에 대한 활성화 정도는 대조군에 비하여 수퍼옥사이드 음이온의 량을 약 1.4배로 증가시켰다. 또한 마우스의 비장내 B-임파구에 대한 영향은 면양 적혈구에 대한 용혈반 형성 세포수를 2.6배 증가시켰다. 이상의 실험결과는 본 발명의 조성물이 면역세포인 대식세포와 B-임파구 및 T-임파구의 기능을 크게 활성화시킴으로서 탁월한 면역증강효과가 있음이 증명되었다.

[실험실시예 2]

1. 실험재료

본 발명의 실시예 1의 조성물

2) 실험대상

모 종합병원에서 우신종양(右腎腫瘍)으로 판명된 55세의 환자

3) 투여방법

갑자기 암홍색(포도색)으로 된 혈뇨를 다량 배뇨하여 우신종양으로 판명되어 모 종합병원에서 광범성우신적제술 및 곽청술을 받은 환자의 병리조직진단은 그라벳즈 종양으로 판명됨. 수술 후 방사선치료(Linac)개시, 총량 4,000R, 제암제로 푸트라풀 800mg/day, 프로제스테론 75mg/day를 경구투여로 치료를 행하고 퇴원하였음. 그후 양쪽의 폐하부(肺下部)에 암전이소(癌轉移巢)로 보여지는 음영(陰影)이 인정되어 다시 입원하였음. 입원 후 시스프라스티눔(Cis platinum)요법이 진행되었다. 시스프라티눔 400mg+브레오마이신 15mg 점적을 2회, 시스프라티눔 40mg+브레오마이신 15mg 점적 1회의 3회 요법을 3주간 간격으로 행하여 약 2개월 이상 치료 후 퇴원하였다. 그후 일상생활로 들어갔으나, 화학요법이 끝남과 더불어 부작용으로서 식욕부진, 빈뇨, 하퇴부종, 빈혈, 피로감, 탈력감 등이 분명하게 나타남. 그후 실시예 1에서 제조되 본 발명의 조성물 1.5g/day를 경구투약하여 3개월간 임상경과에 대하여 혈액화학적 검사를 중심으로 관찰하였다.

4) 관찰결과

1) 혈색소(量), Hematocrit(値)의 변동

본 발명의 조성물의 복용과 동시에 혈색소량은 증가일변도이었고, 10.8g/dl에서 13.4g/dl로 상승하였다.

Hematocrit치(Ht치)는 혈색소량과 더불어 증가하였는데, 특히 복용시부터 1개월까지의 구배(勾配)가 약간 높고, 3개월까지에는 32.5%가 39.7%로 증가하였다. 그 결과는 제 1 도에 나타내었다. 제 1 도에서 혈색소량은 실선으로 표시되었고, Ht치는 파선으로 표시되었다.

2) 적혈구 및 백혈구의 변동

적혈구(RBC)는 287만개가 367만개로 증가하고, 백혈구(WBC)는 6000이 1개월뒤에는 4,300개로 감소하였다가 그 뒤 점증하여 4,900개 까지로 증가하였다. 그 결과는 제 2 도에 나타내었다. 제 2 도에서 적혈구수는 실선으로, 백혈구수는 파선으로 나타내었다.

3) 혈소판의 변동

혈소판의 변동은 21.3만이 22.2만으로 점증하는 경향을 보였지만, 현저한 증감은 보이지 않았다.

4) 임파구의 변동

임파구는 복용 3개월만에 1,568으로 되어, 정상범위로 증가하였다.

5) 적혈구침강속도(血沈 : ESR)의 변동

염증의 활동성을 진단할 수 있는 하나의 측정법인 ESR치(1시간치)는 저하의 일변도를 거쳐서 78이 37 까지 반감되었다. 그결과는 제 3 도에 나타내었다.

6) 혈청담백의 변동

혈청총담백의 변동은 8.6-8.2사이에서, 정상범위에서 일정한 안정성을 나타내었다.

7) 간기능의 변동

총빌리루빈치는 3개월째에 0.8에서 1.5로 약간 상승을 보인 외에는, S-GOT치, S-GPT치 그리고, ALP에 대해서는 각각 일정한 정상범위내에서 안정치를 보였지만, LDP치에 관하여는 저하경향을 나타내었다.

8) 신기능(腎氣能)의 변동

혈중 뇨소, 질소 및 BUN에 대한 변동을 보면, 본 발명의 조성물의 사용전에 제암화학요법, 특히 시스프라티눔요법에 대한 영향일 것으로 생각되며, 어느 수치도 정상치보다는 훨씬 높은 치를 보여주었으며, 본 발명의 조성물 투여후에도 처음에는 고가를 나타내었으나, 3개월째에는 정상치로 접근하였다. 그 결과는 제 4 도에 나타내었다.

9) 혈청전해질의 변동

혈청 Na치, K치에서도 특별한 변동은 없고 정상범위 내에 있으며, Na의 증가, K의 저하는 없었다.

10) 기타의 소견

본 발명의 조성물을 투여하는 당초에는 하지는 상당한 부종을 보였지만, 양 하지의 슬개골 하단(膝蓋骨下端) 6cm하에서 하퇴위측정치에 관하여 현저한 감소를 보였다.

그 결과는 다음 표 5에 나타내었다.

표 5 : 하퇴위 및 체중의 변동

본 실험에서는 이미 그결과에서 확인되는 바와 같이 제암제의 투여, 방사선 조사에 의하여 야기되었다고 생각되는 골수조혈기능장해에 의한 빈혈, 식욕부진 등의 소화기 장해, 신독성에 의한 핍뇨, 원인불명의 부종 등이, 본 발명의 조성물의 투여에 의하여 빈혈의 현저한 개선, 식욕증진 및 하지부종의 소실 등의 임상증상의 개선이 있었으며, 또한 혈액화학적 검사에 의하여서도 개선이 뒷받침되었다.

체중은 당초에는 60kg이었는데 투여후에도 60kg을 유지하였다. 본 발명의 조성물의 2개월간의 투여에 있어서도 이와 같이 혈청 전해질의 평형을 손상시키는 일이 없어 부종이 없어졌으며, 그럼에도 불구하고 일정치의 체중을 유지한 것은 생리적 항상성(Homeostasis)의 이상을 초래하지 않고, 식욕증진, 대사활성화 등에 의하여 실질적인 체중의 증가를 보인 것으로 판단된다.

[실험실시예 3]

[급성독성실험]

1) 실험방법

국립보건원안전연구원의 "의약품 등의 독성시험기준(1988. 10. 29)"에 준하여 실시하였다.

2) 실험결과

본 발명의 실시예 1의 조성물의 급성경구독성을 조사하기 위하여 ICR 계통의 마우스 암수 각각에 1.8, 2.5, 3.5, 5.0 및 7.0g/kg의 용량으로 일일 1회 경구투여하여 14일간 사망률, 일반증상, 체중변화 및 부검소견을 조사하였다. 그 결과는 다음과 같다.

(1) 사망동물은 수컷 5g/kg군에서 1례가 발견되었으며, 주요 일반증상으로는 수컷 5 및 7g/kg군에서는 활동성 증가, 호흡촉박 및 활동성 감소가 관찰되었고 암컷 7g/kg군에서는 활동성 증가가 나타났다.

(2) 암수 모두 전 군에서 정상적인 체중 증가가 관찰되었다.

(3) 암수 모두 전 군에서 특이한 부검소견이 나타나지 않았다.

따라서, 본 발명의 조성물은 마우스에 있어서 경구 노출시 LD₅₀치는 암수 공히 7g/kg 이상이라고 사료된다.

이상의 실험결과에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 탁월한 면역증강 효과가 있는 것이 확인되었다.

Claims

인삼알카로이드 엑기스 20-70중량부, 파극엑기스 15-45중량부, 모려분말 2-5중량부 및 복령분말 10-25중량부로 이루어진 면역증강제 조성물.