KR950013255B1

KR950013255B1 - 신규 살리실산 말톨에스테르 유도체 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR950013255B1
Application number: KR1019890018275A
Authority: KR
Inventors: 한병훈
Original assignee: 한병훈
Priority date: 1989-12-11
Filing date: 1989-12-11
Publication date: 1995-10-26
Also published as: KR910011825A

Abstract

내용 없음.

Description

신규 살리실산 말톨에스테르 유도체 및 그 제조방법

제 1 도는 아세틸살리실산의 말톨에스테르의 NMR 챠트이며,

제 2 도는 살리실산의 말톨에스테르의 NMR 챠트이고,

제 3 도는 본 발명의 화합물의 해열효과를 나타낸 그라프이다.

본 발명은 다음의 일반 구조식을 가지는 신규 살리실산 말톨에스테르 유도체 및 그 제조방법에 관한 것이다.

식중 R 은 수소, 탄소수 1-4의 저급 알킬 또는 탄소수 1-5의 저급 알카노일기이며, R₁은 수소 또는 탄소수 1-5의 저급 알킬기이다. 아세틸살리실산(아스피린)은 해열, 진통 및 항산화작용과 혈소판응집억제작용을 가지고 있으나, 위궤양을 일으키는 큰 문제점이 있다. 말톨유도체는 인삼의 한 성분으로서 다음 구조식을 가진다.

식중 R 은 수소 또는 탄소수 1-4의 저급알킬이다. 말톨유도체도 항산화작용을 가진 것이 밝혀졌다. 살리실산은 각질용해제 또는 식품보존제로서 사용되어 왔다.

본 발명자는 살리실산유도체와 말톨유도체를 에스테르결합시켜면, 살리실산유도체들이 가지는 치명적인 문제점인 궤양생성효과는 전혀 없고, 항산화효과 및 혈소판응집효과는 아스피린 등의 살리실산유도체와 동등 이상의 효과를 나타내는 놀라운 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은 부작용이 거의 없고 약리활성작용을 가지는 상기 구조식(Ⅰ) 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 구조식(Ⅰ) 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 구조식(Ⅰ) 화합물과 다음 구조식(Ⅲ)의 살리실산유도체와 구조식(Ⅱ)의 말통유도체를 축합시켜서 제조한다.

식중 R 및 R₁은 전술한 바와 같으며, M은 수소 또는 알카리 금속이다. 구조식(Ⅱ) 화합물과 구조식(Ⅲ) 화합물과의 반응은 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 에틸렌디클로라이드 등과 같은 할로겐화 탄화수소, 포름아마이드, 아세트아마이드 등과 같은 아마이드류, 테트라하이드로푸란, 디옥산 등과 같은 에테르류 및 기타 유기용매중에서 반응시킬 수 있다. 구조식(Ⅲ)의 화합물은 카르복실기를 활성시켜서 반응 시킴이 바람직하다. 활성화 방법으로는 할로겐화제와 반응시켜서 산할라이드의 상태로 반응시키든가 또는 기타 합성화학에서 잘 알려진 활성화 방법으로 활성화 시킨다.

구조식(Ⅱ)의 화합물과 카르복실기를 가지는 구조식(Ⅲ)의 화합물을 반응시킬때에는 N, N-디사이클로헥실카르보이미드 등과 같은 디이미드류 및 기타 유기합성에서 통상으로 사용되는 축합제 존재하에 반응시킴이 바람직하다. 카르복실기의 활성화에 의하여 산성물질이 부생하는 경우에는 아민류, 알카리류 등과 같은 산결합제의 존재하에 반응시킴이 바람직하다. 반응은 0℃ 내지 사용되는 용매의 비점온도사이에서 반응시키며, 반응시간은 통상으로 30분 내지 48시간정도면 반응이 완결된다.

[실시예 1]

아세틸살리실산 18.0g(0.1몰), N, N-디사이클로헥실카보디이미드 22.7 g(0.11몰), 말톨 13.9g(0.11몰) 및 4-디메틸아미노피리딘 1.1g(0.01몰)을 메틸렌디클로라이드 100㎖에 용해시키고 실온에서 6시간 교반한다. 석출된 N, N-디사이클로헥실 우레아를 여과하여 처리한 여액을 5% 초산용액 및 물로 순차적으로 세척한 후 Na₂SO₄건조한다. 여과후, 여액을 농축한 후 n-헥산/에탄올(1:3)의 용매로 재결정하여 아세틸살리실산의 말톨에스테르를 침상결정으로 얻는다. 이 얻어진 화합물의 H-NMR(CD₃OD)챠트는 제 1 도와 같다.

융점 약 105℃

MS m/z : 288(M+), 246(C₁₃H₁₀O₅), 121(C₇H₅O₂)

[실시예 2]

실시예 1의 방법으로 살리실산과 말톨을 반응시켜서 살리시리산의 말톨에스테르를 얻는다. 얻어진 화합물의 H-NMR(CD₃OD) 챠트는 제 2 도와 같다.

융점 약 99℃

[실시예 3]

살리실-말톨의 효소화학적인 제조법.

아세틸살리실산의 말톨에스테르 300mg을 10%-트윈-80 30ml에 현탁시키고 따로 쥐의 간장(Liver) 아세톤 분말 1.8g을 0.1M-인산염완충액(pH 7.4) 50ml에 현탁시킨 다음 저온실에서 12시간 동안 교반한 다음에 800rpm에서 5분간 원심분리하여 얻은 상등액 10ml를 넣고 37℃에서 1시간 동안 배양시킨 다음에 CHCl₃30ml씩 2회 추출하여 합하고 농축하여 얻은 잔사를 CD₃OD 5ml에 녹에 저온에 방치하면 살리실산의 말톨에스테르의 침상결정(융점 99℃)이 얻어진다. 여과하고 상법으로 후처리하면 200mg의 살리실산의 말톨에스테르가 얻어진다. 이 물질의 NMR-챠트는 실시예 2의 것과 같다.

[실험예 1]

황산화활성의 측정

실험동물 : 체중 20-25g의 웅성 ICR 마우스

실험물질 : 실시예 1에서 얻어진 화합물

대조약물 : 1. 말톨(10%을 DMF saline)

2. 아스피린(10% DMF saline)

TBA 시약 : 티오바르비탈산 0.3%, 소디움도데실설페이트 0.4%가 되도록 7.5% 초산 완충액(pH 4.0)에 용해하여 사용하였다.

실험방법 : 오까와 등의 방법으로 행한다. 「Oakawa, et al. : Biochemistry (Japan), 49(8), 829(1977)」마우스의 간을 적출하여 10배의 생리식염수와 함께 호모지네이션 한 뒤, 이 액 0.3ml와 검액 0.1ml를 섞어 37.5℃ 항온조에서 3시간 반응 후 TBA 시약 3.6ml를 가하고 98℃ 수욕상에서 1시간 동안 가열했다. 실온으로 식힌 후 부탄올 2ml 가하여 진탕하고 원심분리하여 부탄올층을 취하여 532nm에서 흡광도를 측정했다.

그 결과는 다음표 1과 같다.

[표 1 : 말톨, 아스피린 및 실시예 1의 화합물의 항산화 활성]

마우스간 호모지네이트에서 말론디알데히드형성의 억제 퍼 센트(in vitro)

실시예 1 화합물은 2.5×10^-4M 이상에서 항산화활성이 확인되었다.

[실험예 2]

해열작용의 측정

실험동물 : 체중 17-21g의 웅성 ICR 5마리를 1군

대조약물 : 아스피린 100mg/kg in 1% CMC)

검사약물 : 실시예1 화합물(160mg/kg, 500mg/kg in 1% CMC)

약물투여방법 : 경구투여

발열물질 : 타이포이드 백신(Typhoid vaccin)0.1ml/mouse i.p.

실험방법 : 윈터 등의 방법에 준하여 약간 변형하여 행한다. 「Winter. C. A., et. al., J. Pharmacol. Exptl Therap., 141, 369(1963)」발열물질 투여전과 투여 후 디지털직장 체온계를 이용하여 항문에 3cm 정도 삽입하여 체온을 측정하고 (-1hr, 0hr) 발열물질 투여 후 2시간에 약물을 투여한 뒤 1시간 간격으로 4시간 동안 체온을 측정하였다. 타이포이드 백신은 0시간에 복강내 주사한다. 체중상승 2시간 후 아스피린과 실시예 1의 화합물을 경구로 투여한다. 해열작용은 아스피린의 5배 용량에서 동등한 해열작용이 있었으며, 그 결과는 제 3 도와 같다.

[실험예 3]

소염활성의 측정

A. 카라기닌 부종법에 의한 소염활성 측정

실험동물 : 체중 약 170g의 웅성 Sprague Dawley 계 Rat 5마리를 1군

대조약물 : 페닐부타존(100/kg in 1 % CMC)

검사약물 : 실시예 1의 화합물(300mg/kg, 450mg/kg in 1% CMC)

약물투여방법 : 경구투여

실험방법 : 윈터 등의 방법으로 시행하였다. 「Winter, C. A., Risley, E. A., and Nuss, G. W. : J. Pharmacol. Exptl. Therap. 141. 369. (1963)」 카라기닌주사 6시간전 및 30분전에 대조약물과 검사약물을 투여하고 1% 생리식염수에 녹인 카라기닌을 렛트 발바닥에 피하주사였다. 카라기닌 주사한 후 매 1시간 마다 렛트발의 부종부피를 측정하였다.

B. 혈청알부민 열변성 억제 작용 측정

검사약물 : 실시예 1 의 화합물 1×10^-3M in 5% DMF soln.

실험방법 : 미즈시마 등의 방법으로 시행하였다. 「Mizushima, Y. : Lancet, 1, 169(1965)」 1/15M 인산 완충 생리식염액(pH 5.3)에 혈청알부민 0.75% 용액으로 만들어, 이 용액 2ml와 검액 0.3ml,. 1/15M 인산 완충 생리식염액 0.7ml를 넣고 실온에서 15분간 방치했다. 66.5℃ 승욕상에서 3분간 반응 후, 0℃에서 15분간 방치후 잘 흔들어 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

C. 혈소판 응집억제작용 측정

실험동물 : 체중 180-250g의 웅성 Sprague Dawley 계 Rat

검사약물 : 실시예1 의 화합물 1×10^-3M in 5% DMF soln.

실험방법 : 스미스, j. b., 들의 방법으로 시행하였다. 「Smith, J. B., et al. : J. of Lab. Clin. Med., 88, 167(1976)」렛트를 에테르 흡입 마취후 심장에서 3.12% 구연사소다(1 vol.)가 든 플라스틱 주사기로 혈액(9 vol.)을 취해 흔든 뒤 상온에서 12000rpm 으로 15분간 원심분리 한 뒤 상등액을 3000rpm에서 20분간 다시 원심분리하여 펠렛을 얻었다. 이 펠렛을 0.01M 인산염 완충 염류(PBS 7.4)에 현탁시켜 이 현탁액 1ml에 검액 0.1ml를 함께 30분간 37.5℃ 항온조에서 반응 후 트롬빈 10단위(50ul)를 가하고 계속 1시간 반응하였다. 응집생성여부를 육안 관찰하였다. 그 측정 결과는 다음표 Ⅱ와 같다.

[표 Ⅱ 실시예 1 화합물의 소염활성]

A. 카라기닌 부종법에 의한 소염활성 측정

실시예1 화합물 300mg/kg, 450mg/kg 용량에서 부종억제 효과가 없다고 판단된다.

B. 혈청알부민 열변성 억제작용

실시예1 화합물은 혈청알부민 열변성 억제작용이 없었다.

C. 혈소판 응집억제작용

실시예 1 화합물 1×10^-3M 농도에서 혈소판 응집억제활성이 없었다.

[실험예 4]

위자극 실험

실험동물 : 체중 160-210g의 웅성 Sprague-Dawlay 계 Rat 6마리를 1군

대조약물 : 아스피린(200mg/kg in 1% CMC)

검사약물 : 실시예 1 화합물 (100mg/kg, 200mg/kg, 800mg/kg in 1% CMC)

약물투여방법 : 경구투여

실험방법 : 엠. 무라카미들의 방법에 준하여 실시하였다. 「M. Murakami, et al. : Jap. J. Pharmacol. 32, 299(1982)」실험동물을 24시간동안 물은 자유로이 섭취케 하면서 절식시켰다. (단, 약물투여 2시간전 부터는 물도 제거했음)절식 후 약물을 투여하고, 5시간 후 실혈서사시킨 후 위를 적출한 다음 분문부를 결봉하고, 유문부로 2% 포르마틴을 주입한 뒤 10분간 2% 포르말린 용액내에 침윤시킨 후 위를 절개하였다. 분무부의 병소 부위의 길이를 측정하였다.

[표 Ⅲ 렛트에서 위궤양에 대한 아스피린과 실시예 1 화합물의 영향]

괄호안은 처리 동물중 궤양을 일으킨 동물수를 나타낸다. 이 실험결과도 실시예1 화합물은 아스피린의 4배 용량에서도 위자극이 없었음을 나타낸다.

[실험예 5]

출혈시간의 측정

실시예1 화합물을 아스피린과 동일용량을 10일 연속투여시에 출혈시간을 50% 연장시켰으며, 그 결과는 다음표(Ⅳ)와 같다.

[표 Ⅳ 렛트에서 아스피린과 실시예1 화합물의 출혈시간에의 영향]

( ) 증가%

* P 〈 0.05에서 현저함.

[실험예 6]

급성독성실험

실시예1 화합물을 마우스에 경구투여한 결과 LD₅₀은 2.14g/kg으로 독성이 거의 없었다.

이상의 실험예에서 확인되는 바와같이 본 발명의 화합물은 1×10^-4M 이상에서 항산화 활성을, 아스피린과 동용량에서 50%의 출혈시간 연장효과를, 아스피린의 5배 용량에서 대등한 해열효과를 나타내었다. 반면 부작용측면에서는 아스피린이 위자극을 하는 용량의 4배 용량에서도 위자극을 거의 하지 않는 것으로 나타났다. 본 발명의 화합물들은 말톨유도체의 항산화작용을 유지하며, 해열작용, 출혈시간 연장효과가 있는 새로운 아세틸살리실산 유도체이다.

Claims

다음 구조식의 화합물

식중 R은 수소, 탄산소수 1-4의 저급알킬 또는 탄소수 1-5의 저급알카노일이며, R₁은 수소, 또는 탄소수 1-4의 저급알킬기이다.
다음 구조식(Ⅱ)의 화합물 또는 그 활성화 유도체를 다음 구조식(Ⅲ)의 화합물 또는 그 활성화 유도체와 반응시켜서 다음 구조식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.

식중 R은 수소, 탄소수 1-4의 저급알킬, 또는 탄소수 1-5의 저급알카노일이며, R₁은 수소 또는 탄소수 1-4의 저급알킬이다.
R이 저급 알카노일기인 다음 구조식(Ⅰ)의 화합물을 효소에 의한 분해방법으로 처리하여 R이 H인 구조식(Ⅰ)화합물을 제조하는 방법.

R : 탄소수 1-5의 저급알카노일

R : H