KR930006770B1

KR930006770B1 - 비스테로이드성 항염증제로서의 피라졸 유도체 및 그 제조방법

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Publication number: KR930006770B1
Application number: KR1019910000957A
Authority: KR
Inventors: 정해수; 최현웅; 함광수; 김재철
Original assignee: 태평양제약 주식회사; 정명진
Priority date: 1991-01-21
Filing date: 1991-01-21
Publication date: 1993-07-23
Also published as: KR920014784A

Abstract

내용 없음.

Description

비스테로이드성 항염증제로서의 피라볼 유도체 및 그 제조방법

제1도는 LON, LCA 및 LAA의 UV흡광 스펙트럼이다.

제2도는 LON 및 LAA의 IR흡광 스펙트럼이다.

제3도는 DMSO내ㅔㅇ서의 로나졸락의 1H-NMP스펙트럼이다.

제4도는 DMSO내에서의 로나졸락 아세트산 에스테르의 1H-NMP스펙트럼이다.

제5도는 LON 및 LAA의 DSC 열량 그래프이다.

제6도는 LAA의 질량스펙트럼을 나타내는 도표이다.

제7도는 37℃의 인동위액에서의 LCA 및 LAA의 용해그래프이다.

제8도는 37℃의 인동위액에서의 LCA 및 LAA의 용해그래프이다.

제9도는 Control, LCA 및 LAA의 부종증가율의 효과를 나타내는 그래프이다.

제10도는 LCA 및 LAA의 토끼의 경구투여 후의 혈중농도를 나타내는 그래프이다.

[발명의 분야]

본 발명은 신구의 비스테로이드성 항염증제(Non-Steroid Anti Inflammatory Drug ; NSAID)에 관한 것이다.

본 발명은 특히 30(4-클로로페닐)-1-페닐-1H-피라졸-4-아세트산(이하, '로나졸락(lonazolac)'이라 한다)과 벤질 2-브로모 아세테이트를 반응시켜 생성된 로나졸락 아세트산 에스테르에 관한 것이다.

본 발명은 또한 비스테로이드성 항엄증제로서의 로나조락 아세트산 에스테를 합성하는 방법도 포함한다.

[발명의 배경]

각종 염증성질환에 사용되는 항염증제는 스테로이드계와 비스테로이드계로 구분될 수 있는데 스테로이드계의 부신피질 호르몬제는 일시적인 효과에는 우수하나 그의 부작용과 약물의 장기 투여에 의한 부신질환때무넹 의료원상 질환을 유ㅏㄹ할 위험이 따른다.

반면에 비스테로이드성 항염증제(NSAID)는 부신피질 기능에 영향을 주지 않고 임상적으로 항염증효과를나타내는 약물로서 대부부이 생체내의 아라키도네이트 캐스케이드(arachidonate cascade)에서 리폭시게나제(lipoxygenase)나 포스폴리파제(phosl pholipase)A₂에 대한 저해작용은 거의 없으나 시클로옥시게나제(cyclooxygenase)를 저해하여 프로스타크란딘(prostaglandin)의 합성을 억제함으로서 항염증효과를 나타낸다.

또한 NSAID는 2∼3개의 방향족이나 헤테로(hetero)환을 가지고 있고, 경우에 다라서는 비평면구조의 알킬 또는 아릴구조로 되어 있어서 비교적 소수성이 크고 지용성이 높아 세포막을 중심으로 한 생체고분자의 상호작용이 강해 마스트셀(mastcell)이나 리소솜(lysosome)으로부터 유리되는 염증 유발인자드을 막과의 상호작용으로 억제함으로서 효과를 나타내다고 알려져 있다.

NSAID는 비산성 NSAID와 약산성 NSAID로 분류되는데 약물들간에 구조상 공통점이 없는 비산성 NSAID는 약산성 NSAID보다 비교적 강한 진통효과를 나타내나 항염증작용은 약산성 화합물에 비해 약하며 항류마티스 작용은 거이 없고 부작용도 약하게 나타나며, 프로스타크란딘의 합성억제작용이 없어서 그의 작용기전은 불분명하다고 알려져 있다.

반면 약산성 NSAID는 아스피린상 약물로 칭하는 일련의 화합물로 시클로옥시게나제의 저해에 의한 프로스타그란딘의 합성억제작용ㅇㄹ 갖고 있어 항염증효과를 나타내나 여러가지 부작용도 나타나고 있다. 그 부작용중에서 소화관 장해는 가장 빈발하는 부작용인데 이의 경감을 위하여 장용성제제, 서방화제제, 좌제, 주사제 및 경피흡수제 등의 제형변경이나 약물의 분자수식 또는 병소에 친화성이 높은 지질에 약물을 봉입하여 투여하는 타게팅(targeting) 요법제등에 의해 패어런트(parent) 약물의 약효를 증가시키면서 위장장해등의 부작용을 경감시키는 연구가 진행되고 있다.

로나졸락(lonazolac)은 아릴아세트산 게열에 속하는 약산성 NSAID로서 주작용 기전은 프로스타그란딘의 합성을 억제함으로서 약효를 나타내며 그 외에 리소솜막의 안정화, 혈과투과성 항진효소의 활성억제작용도 갖고 있다.

로나졸락의 칼슘염은 래트(Rat)의 부종억제실험에서 ED₅₀이 16.6mg/kg으로 디클로페낙(12.5mg/kg)과 비슷한 효과를 나타내며 인도메타신(indomethacin ; 5.4mg/kg)보다는 약하지만 페닐부타존(phenylbutazone : 65.9mg/kg)보다는 4배정도 효과가 강하게 나타난다. 또한 독성에 있어서 로나졸락 칼슘염의 LD₅₀가 마우스(Mouse)에서 670mg/kg으로 인도메타신(108mg/kg)보다 6배정도 독성이 약하고 페닐부타존(635mg/kg)과는 거의 비슷하며, 치료지수(therapeutic index : LD₅/ED₅₀)는 디클로페낙의 4, 인도메타신의 1보다 로나졸락 칼슘염이 32로 크게 나타났다.

로나졸락 칼슘염의 최대 혈중농도는 건강인에게서 2시간 후에 나타나며 혈중약물농고곡선에서 구한 흡수량은 63∼85% 정도이고, 반감기는 대략 6시간, 혈장단백과의 결합은 비교적 강하여 92∼99%로 나타난다.

사람에 있어서, 로나졸락 칼슘염은 급속히 그리고 대부분이 대사되는데 소변에서 발견되는 주 대사산물은 1-(p-히드록시 페닐) 유도체와 그의 황화물이며 투여량의 2∼3%가 3-(p-히드록시 페놀)유도체로서 배설된다. 약물의 대사 패턴은 연속토여시에도 비슷하고, 신장배설을 통해 전체 활성도(activity)의 40% 이상이 이루어지며, 72시간 후에 배설되는 약물의 양은 84%에 이른다.

한편 인도메타신에 초산을 도입한 아세메타신(acemetacin)은 래트Rat)의 부종억제실험에서 패어런트 약물인 인도메타신보다 높은 효과를 나타냈으며, 위장관 점막의 손상을 경감시켰고, 혈장에서 단백결합되지 않은 약물량이 60%가 증가되었다.

그리고 난용성의 산성 NSAID에 염기성 아미노산으로 염을 만들어 가용화에 의한 속효성 및 생체적응성의 개선을 꾀하는 방법이 아스피린, 이부프로펜, 디클로페낙, 케토프로펜 및 프라노프로펜 등에 이용되어 기존의 패어런트 약물보다 소염, 진통 및 족성에 좋은 결과를 나타내었다.

이렇나 연구에 착안하여 본 발명자는 로나졸락의 위장점막 장해등의 부작용을 경감시키며 한편으로 흡수성을 좋게 하여 항염증 효과를 높일 수 ㅇㅆ는 새로운 약물을 개발하고자 로나졸락에 아세트산기를 도입한 에스테르 호합물을 합성하였다.

[발명의 목적]

본 발며의 목적은 위장점막 장해등의 부작용을 경감시키는 로나졸락 아세트산 에스테르를 제고하기 위한 것이다.

본 발명의 다른 목적은 흡수성이 양호하고 항염증 효과를 높일 수 있는 신규의 로나졸락 아세트산 에스테르를 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 비스테로이드성 항염증제로서의 로나졸락 아세트산 에스테르를 합성하는 방법을 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 상기의 목적들은 하기 설명되는 상세한 설명, 실시예 및 특허청구범위를 통하여 실현될 수 있다.

[발명의 요약]

본 발명의 로나졸락 아세트산 에스테르로서 로나졸라고가 벤질 2-할로 아세테이트를 알칼리의 촉매하에서 반응시켜 벤질 로나졸락 아세테이트를 합성하고 팔라듐/탄소 촉매하에서 수소환원반응을 행하여 목적하는 로나졸락 아세트산 에스테르를 얻는 것으로 이루어진다.

로나졸락 25g(0.08M)을 디메틸포름아미드 30ml에 넣어 녹은 후 촉매제로 탄산칼륨 6.1g(0.04M)을 넣고 여기에 벤질-2-브로모 아세테이트 20g(0.087M)을 서서히 적가하고 50℃에서 3시간 교반한다. 여기서 새엉된 벤질 로나졸락 아세테이트 5g에 에틸아세테이트 200ml를 넣어 녹이고 팔라듐/탄소(ㅔㅇ/ㅊ, 10%)1.8g을 가한 다음 수소환원반응기에서 수소 1.5ℓ를 사용하여 40℃에서 2시간 동안 반응시켜서 목적하는 로나졸락 아세트산 에스테르를 얻는다.

[발명의 상세한 설명]

로나졸락을 디메틸포르아미드에 넣어 녹이고 촉매제를 넣고 여기에 벤질-2-브로모아ㅔ테이트를 서서히 적가하면서 교반시킨다. 여기에 사용되는 반응용매로는 아세톤, 메틸에틸케톤, 아세토니트릴, N,N-디케틸포름아미드, 피리딘, 클로로포름, 테트라히드로퓨란, 에틸아세테이트 등으로서 알콜을 제외한 극성유기용매, 즉 반응에 관여치 않는 유기용매를 모두 사용될 수 잇다.

본 발며으이 합성과정에 사용되는 촉매제는 수산화칼륨, 수산화나트륨, 탄산칼륨, 타난나트륨 ㄷㅇ의 무기염기 및 트리에틸아민, 트리에탄올아민, 이소프로필아민, 디에티아민 등의 일반적인 유기염기등이 사용가능하다.

로나졸락과 반응하는 반응물질로는 벤질-2-할로아세테이트 즉 벤질-2-클로로아세테이트, 벤질-2-브로모앗테이트, 벤질-2-요도아세테이트 등을 사용할 수 있다.

본 발명에서의 로나졸락 및 벤질-2-브로모아세테이트를 반응시켜 벤질 로나졸락 아세테이트를 합성하고 이를 수소환원시켜 로나졸락 아세트산 에스테르를 합성하는 화학반응식은 다음과 같다.

본 발명의 벤질 로나졸락 아세테이트를 합성하는 반응에서의 반응온도는 30∼100℃이며 바라직한 온도는 40∼60℃이다. 이 반응이ㅔ서의 반응시간은 1-5시간이며 바람직하기로는 3시간 전후이다. 로나졸락과 벤질2-브로모아세테이트의 반응물질의 투입비율은 로나졸락 1몰에 대하여 벤질 할로아세테이트 1.1 내지 1.3배가 바람직하며 알카리인 촉매제의 투입량도 벤질 할로아세테이트와 같은 몰비로 사용된다.

벤질 로나졸락 아세테이트가 합성된 반응액에 물을 넣어 혼합시킨 후 적당량의 에테르로 추출하고 그추출액을 물 및 탄산나트륨액으로 세척한 다음 다시 물로 세척하여 디메틸포름아미드를 제거한다.

추출한 에테르층은 합하여 무수 황산나트륨으로 탈수시킨 다음 여과하고 그 여과액을 증발농축시켜 조제춤을 얻은 다음 이것을 메틴올에 가하여 용해시키고 재결정하여 순수한 미황색 결정의 벤질 로나졸락 아세테이트를 얻는다.

이 벤질 로나졸락 아세테이트에 에틸아ㅔ테이트를 넣어 용해시키고 촉매로서 팔라듐/탄소를 가한 다음 수소환원반응기에서 수소를 사용하여 반응시킨다.

이때 사용되는 용매도 앞에서 사용한 것과 같이 반응에 관여치 않는 유기용매는 모두 사용가능하다. 팔라듐/탄소의 투입량은 벤질 로나졸락 아세테이트에 대하여 중량비로 1-10%가 가능하며 바람직하기로는 4-6% 정도이다. 이때의 반응온도는 20∼50℃가 바람직하다. 반응시간은 1∼3시간이다. 이렇게 생성된 액을 여과한 후 그 여과액을 증발농축하고 여기에 에테르를 넣고 교반한 다음 다시 여과한다. 그 여과액을 5% 탄산수소나트륨액으로 추출한다. 추출액은 모아 10% 염산용액으로 중화시켜 생성되는 침전물을 감암여과시킨다. 이 침전물을 다시 아세톤에 용해시키고 여기에 활성탄을 적당량 넣어 교반하고 여과하여 증발농축시킨 백색분말의 로나졸락 아세트산 에스테르를 얻는다.

[실시예]

로나졸락 25g(0.08M)을 디메틸포름아미드 30ml에 넣어 녹이고 교반하면서 촉매제로 탄산칼륨 6.1g(0.04M)을 넣고 여기에 벤질-2-브로모 아세테이트 20g(0.087M)을 서서히 적가하고 50℃에서 3시간 교반한다.

이 반응액에 물을 넣어 섞은 후 적당량의 에테르로 5회 추출하고 추출액을 합하여 물로 2회, 55 탄산나트륨용액으로 2회 세척한 다음 다시 물로 세척하여 디메틸포름아미드를 제거한다.

추출한 에테르층은 합하여 무수 황산나트륨으로 탈수시킨 다음 여과하고 여액을 증발노욱하여 조제품을 얻은 다음 이것을 메탄올에 가하여 녹이고 재결정하여 순수한 미황색 결정의 벤질 로나졸락 아ㅔ테이트를 얻는다.

이 벤질 로나졸락 아세테이트 35g에 에틸아세테이트 200ml를 넣어 녹이고 팔라듐/탄소910%) 1.8g을 가한 다음 수소환원바능기에서 수소 1.5ℓ를 사용하여 40℃에서 2시간 반응시켰다.

이 반응액을 여과 후 여액을 증발농축하고 여기에 에테르를 넣고 30분간 교반한 다음 다시 여과하고 여액은 5% 탄산수소나트륨용액으로 3회 추출한다. 추출액은 모아 10% 염산용액으로 중화시켜 생성되는 침전율 ㄱ마압여과 하여 얻은 다음 이 침전을 아세톤에 녹이고 여기에 활성탄을 적당량 넣은 후 40℃에서 30분간 교반하고 여과하여 증발농축하고 얻어진 조제품을 이소프로필알콜로 재결정시켜 밸색분말의 로나졸락 아세트산 에스테르 21.1g을 얻었다.

이때 얻어진 로나졸락 아세트산 에스테르이 물성은 다음과 같다.

수율 : 84.7%

mP : 168~170℃

Rf : 0.05(클로로포름 : 에틸아세테이트 : 메탄올=6 : 2 : 1)

UV

㎚: 280

IR

: 1721, 1730(카르보닐, C=0), 1600, 1500, 1412(방향족, C=C), 1208(C-0)

NMR(DMSO) τ : 3.85(s,2H,CH₂-C00), 4.7(s,2H-C00-CH₂), 7.0-8.0(m,10H, 방향족), 8.5(S,1H-COOH)

MS(m/e) : 370

DSC(흡열 피이크) : 155℃

시험(Tests)

이하의 시험 및 그 결과를 간략히 하기 위하여 로나졸락(LON), 로나졸락 칼슘염(LCA) 및 로나졸락 아세트산 에스테르(LAA)의 약자를 사용하였다.

(1) UV흡광도

제1도에 나타난 바와 같이, LON, LCA 및 LAA을 각각 20㎍/ml의 농도가 되도록 메틴올에 용해시켜 UV를 측정한 결과 모든 약물은 281nm에서 흡수극대를 나타내었으며, 각 약무르이 흡수대들은 LON의 기본패턴과 유사함을 확안하였다.

(20IR흡광도

LON 및 LAA에 대하여 KBr 디스크법(disk method)으로 측정하였다.

IR스펙트럼에서 LON의 경우 카르보닐기의 C=0 피이크(peak)가 1721cm^-1에서, 방향족 C=C 피이크는 1600, 1500, 1421cm^-1에서 신축진동흡수대가 나타났다. 이에비해 LAA는 1700-1730cm^-1에서 2개의 카르보닐 C=O 피이크가 겹쳐서 나타났으며 1200cm^-1부근에서 2개의 에스테르 C-O 피이크가 나타남으로써 LON에 초산이 이ㅔ스테르결합을 이루었음을 확인하였다. 제2도에 그래프가 도시되었다.

(3) NMR스펙트로스코피(spectroscopy)

LON 및 LAA를 디메틸 술폭시드에 용해하여 측정하였다. NMR스펙트럼을 고찰하면 LON은 제3도와 같고 합성된 LAA의 경우에는 도입된 초산의 -CH₂CO에 의한 시그날이 4.7ppm에서 나타났으며, 방향족에 결합되어 있는 -CH₂CO 시그날은 높은 영역 방향을 이동되면서 3.85ppm에서 나타났다. 나머지 방향족 H와 -COOH의 스그날은 LON과 같이 각각 7.0-8.0ppm, 8.5ppm에서 나타났다. LAA에 대한 결과는 제4도에 도시되어 있다.

(4) 시차주사 열량측정(Differential Scanning Calorimetry)

LON 및 LAA 약 3mg에 상당하는 시료를 10℃/min의 승온속도로 50∼300℃ 온도범위에서 알루미늄팬을 사용하여 측정하였다.

제5도에서 보는 바와같이 LON의 흡열 피이크가 150℃에서 나타난데 비해 LAA는 155°에서 새로운 흡열 피이크가 나타났다.

(5) 질량 스펙트로스코피

LAA를 디메닐 술폭시드에 용해하고 측정하였다. ㅔㅈ6도와 같이 질량 스펙트럼에서 얻은 분자량은 LAA의 이론분자량인 370을 나타냄으로써 LAA가 합성되었음을 확인할 수 있었다.

(6) 용출속도

대한약전 용출시험법의 회전검체통법에 따라 100호체를 통과한 LCA 및 LAA을 검체로 사용하여 실험하였다. LON 20mg에 해당하는 LCA, 21.2mg 및 LAA 23.7mg을 정확하게 달아 각각 검체통에 넣고 pH1.2 인공위액 및 pH 6.8 인공장액(약전) 각 900mg씩을 용매로 사용하여 회ㅈ너속도 100rpm, 용매온도 37±0.5℃에서 실험하였다.

시료는 5, 10, 20, 30, 40, 60, 90 및 120분마다 일정한 위치에서 용출액 5.0ml를 정확히 취하여 0.45㎛ 멤브레인 필터로 여과한 다음 최대 흡수파장인 281nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 치ㅜ할 때 마다 같은 양의 용매를 추가하여 용적을 일장하게 하였으며 따로 작성한 검량선에 의하여 농도를 산추라형ㅆ다.

LCA 및 LAA를 단계별로 희석하여 만든 ㄱ머액을 이용하여 작성한 검량선은 1.0㎍에서 30.0㎍ 구간까지 양호한 직선성을 나타내었고 이때의 회귀방정식과 상고나계수는 LCA ; y=00.0666x0.0006(r=0.999), LAA ;y=0.0591x+0.006(r=0.99)이었다.

각 용매별로 용출속도를 보면 인공위액(pH 1.2)에서는 제7도와 같이 LAA 및 LCA는 시간이 경과함에 따라 용출이 서서히 증가하였으나 용출력은 매우 낮았다. 인공장액(pH 6.8)에서의 용출속도는 제8도와 같이 LAA는 20분, LCA는 60분대에 평형에 도달하였다. 이것은 각 약물이 용매의 pH에 따라 용해성의 차이를 나타냄으로써 기인된 기인된 기인된 것으로 생각된다.

한편, 각 용매에 따라 약물이 60% 용출되는데 요하는 시간(T_60%, min)을 보면 표 1과 같다.

즉, LCA는 인공장액에서 10분 후에 T_60%에 도달하였고, LAA는 인공장액에서 2분대부터 T_60%에 도달하였으나 인공위애겡서는 용출속도가 낮아 120분대에 이상이었다.

[표 1]

용매에 따른 LCA 및 LAA의 60% 용해에 소요되는 시간

(7)유수분배계수

호그벤(Hogben)의 방법인 플라스크 요동법을 이용하여 수상으로 pH 6.8완충액(약전)을 미리 유상으로 포화시킨 것을 사용하여 여기에 LON으로써 20㎍/ml의 농도에 해당하는 LCA 및 LAA의 양을 정확히 취해 용매시켰다. 이를 마개달린 시험관에 10ml를 정확히 취하여 넣고 수상으로 포화시킨 클로로포름, n-헥산, 벤젠, 카아본테트라클로랄이드를 각각 10ml씩 가한 다음 27℃에서 1시간 진탕시키고 3시간 방치하여 수상을 취한 것을 파장 281nm에서 그 흡광도를 측정하였다.

유수분배계수(Ko/w)는 다음 식에 따라 계산하였다.

표 Ⅱ와 같이 유기용매로 클로로포름, n-헥산, 벤젠, 카아본테트라클로라이ㄷ를 사용하여 분재계수를 측정한 결과 pH 1.2완충액 및 pH 6.8완충액에서 LAA는 n-헥산에서만 분재게수가 높았고 나머지 유기용매에서는 낮은 분배게수를 나타내었다.

실제적으로 LAA는 다른 약물에 비해 지용성 성질이 크나 pH 6.9완충액에서는 염을 형성하여 유기용매층으로의 약물이행이 어려워짐으로써 분배게수가 낙게 나타난 것으로 생각된다.

또한 LAA의 경우 대체적으로 LCA보다 유수분배계수가 작게 나타나 소화고나에서의 흡수속도가 늦어질 가능성이 있다.

[표 2]

27℃에서 LCA 및 LAA의 유수분배계수

(8) 안정성 시험

표 Ⅲ에서와 같이 LAA의 분말상태에서의 안정성을 검토하기 위하여 각 약물의 분말을 바이알(vial)에 밀봉하여 35℃ 및 55℃의 가혹조건하에서 2개월간 보관한 결과 둘 다 안정하였다.

[표 3]

고체상태에서의 LAA의 잔류%

(9) 진통효고시험

0.7% 초산으로 일으킨 리팅(writhing)에 대한 억제작용을 측정한 결과는 표 Ⅳ와 같다. 20mg/kg의 LCA에 해당하는 LAA의 통증억제율은 54.28%로서 LCA의 통증억제율 30.27%보다 약 1.8배 강하게 나타났다.

[표 4]

마우스(Mouse)에서의 LCA 및 LAA의 진통효과

a : 평균치 ±S.E.

* : P＜0.05대 샐린(Saline)에서 유효치

(10) 부종억제시험

제9도에 나타난 바와 같이 대조군의 부종증가율은 시간이 경과함에 따라 증가되어 3시간 후에는 80%를 나타내고 그 이후에는 서서히 증가되어 5ㅣ간대에 890%의 증가를나타냈으나, 약물투여군의 부종증가율은 2시간대에서 평균 23%, 5시간대에서 46%정도의 억제효과를 나타내고 있다.

각 약물간의 억제율을 대조군과 비교하면 표 Ⅴ에서와 같이 5시간 후까지 LAA가 LCA보다 억제율이 크게 나타났으며, 시간이 경과할수록 억제율이 좋았다.

[표 5]

래트(Rat)에서의 LCA 및 LAA의 부종억제효과

a : 평균치±S.E.

* : P＜0.05대 LCA에서 유효치

* : P＜0.01대 LCA에서 유효치

(11) 급성독성시험

표 Ⅵ와 같이, 약물투여 3일후의 차사량으로 리치필드-윌콕손(Litchfield-Wilcoxon)법에 따라 수치를 처리한 결과 LD₅₀가 LAA의 302.6mg/kg보다 LD₅₀치가 1.45배 높게 나타나 유의성 있는 안정성을 나타내었다.

[표 6]

마우스(Mouse)의 경구투여후의 LCA 및 LAA의 급성독성효과

(12) 위점막 장해시험

표 Ⅶ와 같이 래트(Rat)에서의 LCA 및 LAA에 대한 위궤양 발생 정도는 LCA로써 50mg/kg 해당량에서는 LCA로써 100mg/kg 해당량과 150mg/kg 해당량에서는 각각 LCA 3.5, 3.67 및 LAA 및 2.5, 3.0의 점수가 나와 LCA보다 1.2배 정도 위점막 장해가 막소하였다.

[표 7]

래트(Rat)의 경구투여 후의 LCA 및 LAA의 위점막 장해시험

(13) 혈장단백질 결합측정

LON, LCA 및 LAA을 LON으로서 100㎍/ml의 농도가 되도록 pH 7.4완충액(약전)에 넣어 녹이고 절식시킨 래비트(Raddit)의 혈액을 채취하여 얻은 혈장 500μl씩을 넣어 섞어 37℃에서 1시간 동안 진탕하여 인큐베이션 시킨다음 이 액 500μl씩을 정확히 취하여 센트리프리 디스포자블마이크로파티숀 시스템(centrifree disposable micropartition system)인 아미콘 세트(Amicon Set)에 넣고 3.00rpm으로 10분간 원심분리하여 얻어 여액에 대하여 HPLC로 정량하였다.

따로 아미콘 세트(Amicon Set)를 통고시킨 비단백질 혈장(protein free serum)에 각 약물을 단계적으로 희석하여 일정농도로 조제한 검량선용액과 동량혼합하여 이하 같은 방법으로 실험하여 검량선을 작성하엿다.

얻어진 검량선에서 각 약물은 0.1㎍/ml에서 3.0㎍/ml구간까지 양호한 직선성을 나타내었으며 이때의 희귀방정식과 상관계수는 LON ; y=4.817x-0.07(r=0.99), LCA ; y=4.585x-0.07(r=0.99), LAA ; y=4.449x-0.04(r=0.99), LAR ; y=4.786x-0.08(r=0.99)로 나타났다.

표 Ⅶ와 같이, 각 약물에 대하여 시험관 내에서 혈장과의 단백결합율을 측절한 결과 단백결합되지 않은 약물의 농도가 LON 1.42㎍/ml, LCA 1.22㎍/ml, LAA 1.92㎍/ml, LAR 0.13㎍/ml정도 단백결합되지 않은 약물의 양이 증가하였다.

[표 8]

LON, LCA 및 LAA의 혈장단백질결합도(LON 100㎍/㎖)

a : 평균치±S.E.

* : P＜0.05대 LCA에서 유효치

(14) 혈중농도

체중 3kg내외의 건강한 래비트(Rabbit)를 자웅 구별없이 1군 5마리로 하여 사용하였다. LCA 및 LAA를 LCA로써 300mg/5ml의 농도가 되도록 0.25% sod. CMC 용액에 현탁하고 100mg.kg을 24시간 절식시킨 래비트(Rabbit)에 경구 투여하였다. 약물은 투여한 다음에도 절식을 계속시켰으나 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다.

약물투여 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5, 2, 3, 4, 6 및 8시간 후에 헤파린으로 처리한 주사기를 사용하여 귀정맥으로부터 2ml식 채혈하고 7,000rpm으로 10분동안 우너심분리하여 혈장을 얻는다. 혈장 1ml를 정확히 취하여 여기이ㅔ 메틴올 2ml를 가하고 진탕한 뒤 3,00rpm으로 10분 동안 원심분리한 다음 상등액을 0.45㎛ 멤브레인 필터로 여과하고 그 여액을 검액으로 하여 HPLC로 정량하였다.

따로 약물을 투여하지 않은 토끼의 혈정을 취하여 여기에 LON을 단계적으로 희석하여 일정한 농도로 조제한 시료를 가지고 검액의 조작과 동일하게 실험하여 검량선을 작성하였다.

혈중농도 측정법에 따라 실험하여 얻은 LON의 검량선은 1.0㎍/ml에서 10.0㎍/ml 구간까지 양호한 직선성을 나타내었으며 이때의 희귀방정식과 상관게수는 y=0.8283x+0.021(r=0.99)로 나타났다.

제10도와 같이, LCA 및 LAA를 래비트(Rabbit)에 경구투여한 후의 시간별 혈중농도를 측정한 결과 LCA에 비해 LAA는 높은 AUC를 보여주었다.각 시간별로 정량한 혈중약물농도치를 2-컴파트먼트(compartment)모델에 적용시켜 각종 파마코키네틱파라메타(pharmacokinetic parameter)을 표 Ⅸ에 나타내었다.

이때의 흡수속도정수, Kab는 LCA 0.034313min.^-1에 비해 LAA는 0.017374min.^-1fh dir 0.5배 정도 흡수가 너ㅈ어졌다. 배출속도정수, Kel은 LCA투여군의 0.012129min.^-1에 비하여 LAA 0.008283로서 LAA는 0.68배 정도 배출속도가 너ㅈ어졌다. 흡수와 배출속도로부터 구한 반감기는 분포상에서 LCA 22.5min, LAA 43min, 으로 나타났고 분포후상에는 LCA 241min, LAA 624min, 으로 나타나 LAA는 LCA보다 어느정도 지속효과가 잇음을 알 수 있었다.

약물의 최고혈중농도 Cmax 및 최고농도에 도달하는 시간 Tmax를 구한 결과, Cmax는 ㅣㅊㅁ 5.66㎍/min, 및 LAA 6.05㎍/min로 나타났으며 Tmax에 있어서는 LCA 35.2min, 및 LAA 63.5min으로 나타났다. 또한 혈중약물농도-시간곡선하면적, AUC(Area Under Concentration)에 있어서 LCA에 있어서 LCA와 비교하여 고찰할 때 LAA는 1.65배로 크게 유의성 있게 증가였다.

[표 9]

래비트(Rabbit)의 LCA 및 LAA의 단일경구 투여후의 파마코키네틱 파라메타

K_ab: 흡수속도상수

Kel : 배출속도상수

K₁₂, K₂₁: 분포속도상수

: 분포상 반감기

: 분포후상 반감기

AUC_o-m: 혈중약물농도-시간곡선하면적

C(t) : 2-컴파트먼트(compartment)모델에서 혈장내 약물 농도식

이상의각종 시험으로부터 검토된 본 발명의 로나절락 아세트산 에스테르의 물리화학적 성질 밀 생물약제 화학적 특성을 요약하면 다음과 같다.

로나졸락에 벤질 2-브로모아세테이트를 반응시켜 로나졸락 아세트산 에스테르를 84.7%의 수율로 합성하였으며 이들 화합물은 TLC, UV, IR, DSC, NMR, MS등에 의해 목적물질임을 확인하였다.

용출속도는 T₆₀에 요하는 로나졸락 칼슘염은 인공장액에서 10분쟁;고 로나졸락 아세트산 에스테르는 인공장액에서 2분대에 도달하였으나 인공위액에서는 모든 약물이 120분대에 도달하지 못하였다.

유수분배게수는 PH 1.2 및 6.8완충액의 클로로포름, 벤젠, 카아본테트라클로라이드에서 로나졸락 아세트산 에스테르가 다른 약물에 비해 작았다.

분말상태에서의 안정성은 35°및 55°에서 2개월동안 보관하였을대 모두안정하였다. 진통효과는 억제유리로나졸락 칼슘염 30.3%, 로나졸락 아세트산 에스테르 54.3%로 나타났다.

부종억제효과에서 5시간 동안의 평균역제율은 로나졸락 칼슘염보다 로나졸락 아세트산 에스테르가 49%정도 유의성 있게 증가하였다.

마우스(Mouse)에 있어 LD₅₀치는 로나졸락 칼슘염 302.59mg/kg, 로나졸락 아세트산 에스테르 438.78mg/kg으ㅗ 로나졸락 칼슘염에 비해 낮은 도서을 나타내었다.

래비트(Rabbit)의 위점막 장해시험에서 50mg/kg 투여시 로나졸락 칼슘염에 비해 로나졸락 아세트산 에스테르2.42배나 위점막 장해가 감소하였다.

생체내에서 단백결합하지 않은 약무의 양은 로나졸락 칼슘염보다 로나졸락 아세트산 에스테르가 57.4%증가하였다.

약물의 혈중농도 측정결과, Kab는 노라졸락 칼슘염비해 로나졸락 아세트산 에스테르는 0.5배로 흡수속도가 늦어졌으며 Tmax는 로나졸락 칼슘염 35.2분, 로나졸락 아세트산 에스테르 63.5분이었다.

AUC는 로나졸락 칼슘염 959mg/ml^-1.min, 로나졸락 아세트산 에스테르 1579mg/ml^-1.., 으로 로나졸락 아세트산 에스테르가 다른 약물에 비해 높게 나타났다.

이상을 종합하여 볼 때 로나ㅏ졸락 아세트산 에스테르는 로나졸락과 비교하여 위점막 장해와 독성을 감소시키고 흐수의 지속성을 갖는 생체이용 효율이 향상된 화합물임을 알 수 있다.

본 발명의 단순한 변형 또는 변경은 본 발명의 영역에 속하는 것으로 이는 다으므이 특허청구범위에 의하여 명확해 질 것이다.

Claims

3-(3-클롤페닐)-1-페닐-1H-피라졸-4-아세트산과 벤질-2-할로아세테이트를 유기용매내에서 알카리촉매제를 사용하여 합성된 벤질 로나졸락 아세테이트를 팔라듐/탄소촉매하에서 수소환원시킴으로써 생성된 로나졸락 아세트산 에스테르.
제1항에 있어서, 상기 벤질-2-할로아세테이트가 벤질 2클로로 아세테이트, 벤질 2-브로모 아세테이트 및 벤질 2요드 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 하나인 것을 특징으로 하는 로나졸락 아세트산 에스테르.
제1항에 있어서, 상기 유기용매가 디메틸포름아미드, 아세톤, 메틸에틸케톤, 아세토니트릴, 피리딘, 클로로포름, 테트라히드로퓨란 및 에틸라엣테이트로 이루어진 군을부터 선택된 하나인 특징으로 하는 로나졸락 아세트산 에스테르.
제1항에 있어서, 상기 알카리촉매제가 수산화칼륨, 수산화나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼슘, 트리에틸아민, 트리에탄올아민, 이소프로필ㅇ민 및 디에틸아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나인 특징으로 하는 로나졸락 아세트산 에스테르.
3-(4-클로로페닐)-1-페닐-1H-피라졸-4-아세트산과 벤질-2-할로아세테이트를 유기용매내에서 알카리촉매제를 사용하여 벤질 로나졸락 아ㅏ세테이트를 합성하는 단계 ; 및 상기 재결정된 벤질 로나졸락 아세테이트에 유기용매와 팔라ㄷㅁ/탄소촉매를 가한 다음 수소환원반응기에서 환원반응시키는 단계로 구성되는 특징으로 하는 로나졸락 아세트산 에스테르.