KR920702419A - 피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있는 산화환원 효소 시스템, 그것을 코오드화 하는 유전자의 세트 및 산화환원 효소 시스템 또는 그것을 코오드화 하는 유전자의 높은 항생물질 생산에의 이용 - Google Patents

피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있는 산화환원 효소 시스템, 그것을 코오드화 하는 유전자의 세트 및 산화환원 효소 시스템 또는 그것을 코오드화 하는 유전자의 높은 항생물질 생산에의 이용

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Abstract

내용 없음

Description

피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있는 산화환원 효소 시스템, 그것을 코오드화 하는 유전자의 세트 및 산화환원 효소 시스템 또는 그것을 코오드화 하는 유전자의 높은 항생물질 생산에의 이용
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 pPCH-1에 포함되어 있는 피. 크리소게늄 유래 DNA의 부분 제한지도의 개략도, 유전자의 5' -말단 위치 및 HMV유전자의 전사방향이 표시되어 있다(화살표), 제2도 피. 크리소게늄 HMW 유전자의 부분 뉴클레오티드 서열, N-말단 HMW아미노산 서열을 코오드화 하는 오픈 판독 프레임이 표시되어 있다(밑선), 인트론의 위치가 또한 표시되어 있다.

Claims (22)

  1. 환원된 전자 전달체의 존재하에서 디술피드 화합물을 환원시킬 수 있는 약 36KDa의 분자량을 가진 고분자량(HMW)폴리펩티드 및 약 12KDa의 분자량을 가진 저분자량(LMW)폴리펩티드의 제1 및 제2성분인 2개의 폴리펩티드 분리형태로 이루어진 것을 특징으로 하는 피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있는 산화환원 효소 시스템.
  2. 제1항에 있어서, 예를들면 비스-ACV인 산화된 형태의 ACV를 환원시킬수 있는 산화환원 효소 시스템.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1성분의 N-말단 아미노산 서열은 Met-Val-His-Ser-Lys-Vla-Val-Ile-Ile-Gly-Ser-Gly-Pro-Gly-Ala-His-Thr-Ala-Ala-Ile-Thr-Leu-Ser-Arg-Ala-Glu-Leu-Gin-Pro-Val-Leu-Tyr-Glu-Gly-Met-Leu-와 동일 또는 동형이고 상기 제2성분의 N-말단 아미노산 서열은 (Gly)-Val-Thr-Pro-Ile-Lys-Ser-Val-Ala-Glu-Tyr-Lys-Glu-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-(Thr)-(Gly)-Pro-Val-(Val)-(Val)-Asp-Phe- His-Ala-Thr-(Trp)-(Glu)-Gly -Pro- (Xaa)-(Lys)-(Ala)-(Ile)-(Ala)-(Pro)-(Glu)-와 동일또는 동형인 특징으로 하는 산화환원효소 시스템.
  4. 상기 제1및 제2성분을 코오드화 하는 DNA서열을 가지는 세포를 포함하고 각 서열을 상기 세포내에서 작용적인 발현신호의 조절 제어하에 두어 상기 효소시스템의 상기 성분을 발현시키는 미생물 배양을 성장시키고 상기 효소시스템을 분리하는 것으로 이루어진 것을 특징으로 하는 특허청구범위 제1항 내지 제3항에 의한 효소 시스템의 제조 방법.
  5. 제1항 내지 제3항중의 어느 한항에 있어서, 실질적으로 세포 찌꺼기 및 다른 미생물 단백질이 없는 것을 특징으로 하는 산화환원효소 시스템.
  6. 하기 시스템으로 이루어진 미생물의 무세포 추출액을 얻고, 크로마토 그라피단계에 의해 무세포 추출액을 분별 분리하고 하기 제1성분이나 제2성분의 크로마토그라피 단계후 활성 분열을 분리하며, 상기 단계는 적어도 하나의 (a)분자체 크로마토그라피; (b)음이온 교환 크로마토그라피 ; (c)양이온 교환 크로마토그라피; (d) 친화성 크로마토그라피를 포함하고, 여기서 상기 단계는 어느 서열에서도 행해질수 있고 앞선 단계에서 확인한 활성 분별에서 행해지고, 상기 (a)-(d)단계후 SDS-PAGE상에서 상기 (a0-9d)단계로 부터 선택적으로 활성 분별을 분리하는 것으로 이루어진 것을 특징으로 하는 특허청구범위의 제1항 내지 제3항 및 제5항중 의 어느 한항에 의한 산화환원효소 시스템을 분리하는 방법.
  7. 피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있고 환원된 전자도오너의 존재하에 디술피드 화합물을 환원시킬수 있는 산화환원효소 시스템의 풀리펩티드 성분의 적어도 작용 위치를 코오드화 하는 DNA서열.
  8. 제7항에 있어서, 코오드화 된 HMW폴리펩티드 성분은 Met-Val-His-Ser-Lys-Val-Val-Ile-Ile-Gly-Ser-Gly-Pro-Gly-Ala-His-Thr-Ala-Ala-Ile-Thr-Leu-Ser-Arg-Ala-Glu-Leu-Gln-Pro-Val-Leu-Tyr-Glu-Gly-Met-Leu-의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 DNA서열.
  9. 제7항에 있어서, 코오드화 된 LMW 폴리펩티드 성분은 (Gly)-Val-Thr-Pro-Ile-Lys-Ser-Val-Ala-Glu-Tyr-Lys-Glu-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-(Thr)-(Gly)-Pro-Val-(Val)-(Val)-Asp-Phe-His-Ala-Thr-(Trp)-(Glu)-Gly-Pro-(Xaa)-(Lys)-(Ala)-(Ile)-(Ala)-(Pro)-(Glu)-.의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 DNA서열.
  10. 제7항 내지 제9항중 어느 한 항에 있어서, 페니실리움 크로소게늄으로 부터 분리된 것을 특징으로 하는 DNA 서열.
  11. 특허청구범위 제10항에서 지시한 DNA서열의 발현신호.
  12. 제7항 내지 제10항중 어느 한 항에 있어서, 동일 또는 다른 시스템으로 부터 얻은 발현신호의 컨트롤하에 있는 것을 특징으로 하는 DNA 서열.
  13. 적어도 하나의 특허청구범위 12항에 의한 DNA서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 DNA 구조.
  14. 특허청구범위 제13항에 의한 DNA구조로 이루어진 것을 특징으로 하는 형질전환된 숙주세포.
  15. 제14항에 있어서, 상기 세포가 전핵세포, 바람직하게는 이, 콜라이 또는 스트렙토 마이시트인 것을 특징으로 하는 형질전환된 숙주세포.
  16. 제14항에 있어서, 상기 세포가 전핵세포, 바람직하게는 페닐실린움 크리소게늄, 아스퍼질러스, 니둘란스 또는 아크레모니움 크리소게늄인 것을 특징으로하는 형질전환된 숙주세포.
  17. 특허청구범위 제14항 내지 제16항중 어느 한 항에서 지시한 형질전화된 숙주세포의 β-락탐 화합물 생산의 획득 및 향상에의 이용.
  18. 각 DNA서열이 상기 세포내에서 작용적인 전사 및 번역 조절신호의 조절컨트롤 하에 있는 특허청구범위 제14항 내지 제16항중 어느 한항에 의한 형질환된 숙주세포, 또는 제1및 제2 성분 또는 티오레톡신 시스템의 그것의 작용위치를 코오드화 하는 DNA서열을 가진 형질환된 숙주세포를 성장시키고, 상기 미생물 숙주 보다 높은 수준의 상기 β-락탐 화합물을 생산하는 상기 형질전환체의 클론을 동정하고, 그리고 상기 β-락탐 화합물을 분리하는 것으로 이루어진 것을 특징으로 하는 미생물 숙주내에서 β-락탐화합물의 생산을 획득 또는 향상시키는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 미생물 숙주는 곰팡이, 바람직하게는 페니실리움 크리소게늄, 아스퍼질러스 니둘란스 또는 아크레모니움 크리소게늄 또는 스트렙토 마이시스인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 환원된 전자전달체 존재하에 환원된 화합물을 HMW 폴리펩티드 및 LMW 포리펩티드로 이루어지고 디술피드화합물을 환원시킬수 있는 산화환원된 효소 시스템으로이루어진 조성물, 또는 예를들면 DTT인 화원제 존재하에 LMW 폴리텝티드와 접촉시키는 것으로 이루어진 것을 특징으로 하는 시험관내에서 디술피드화합물 및 β-락탐 화합물의 생산에 관계되는 화합물을 환원시키는 방법.
  21. 제20항에서, ACV가 시험관내에서 환원되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 피. 크리소게늄으로 부터 얻을 수있는 산화환원효소 시스템의 시험관내에서의 환원시스템으로 이용.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019920700368A 1990-06-18 1991-06-18 피. 크리소게늄으로 부터 얻을수 있는 산화환원 효소 시스템, 그것을 코오드화 하는 유전자의 세트 및 산화환원 효소 시스템 또는 그것을 코오드화 하는 유전자의 높은 항생물질 생산에의 이용 KR920702419A (ko)

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