KR920006420B1 - 광학활성이 있는 류코보린칼슘염의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

광학활성이 있는 류코보린칼슘염의 제조방법

본 발명은 메토트렉세이트 또는 5-플루오르우라실과 같은 항암제 투여시의 부작용을 경감시키고, 항암효과를 증강시킬 목적으로, 이들 항암제와 함께 사용하는 류코보린(일명 폴린산) 및 그 칼슘염의 광학이성질체의 새로운 제조방법에 관한 것이다.

류코보린은 다음과 같은 구조의 화합물로서 일반적인 합성방법으로 제조한 화합물은 모두 6번 탄소의 위치에서 각각 (R)과 (S)의 입체구조를 가진 (6R)-류코보린과 (6S)-류코보린의 라세믹체로 되어 있다.

현재 미국약전에는 (6R,S)-류코보린이 류코보린 칼슘으로 수재되어 있다. 이중(6S)-류코보린은 생체내에 존재하는 ℓ-류코보린과 동일한 광학이성질체이다.

또한 (6R)-류코보린, 일명 d-류코보린은 항암제와 함께 사용시 효과가 없는 물질로 알려져 있다. 그러므로 항암제의 독성을 경감시키기 위한 보조요법제로 투여시 (6R,S)-류코보린 대신에 ℓ-류코보린만을 투여하는 것이 훨씬 효과적인 치료효과를 기대할 수 있다.

한편, (6S) -류코보린, (6R) -류코보린의 제조방법에 관한 특허로서 유럽공개특허 EP 0266042('87.09.03.)와 국제특허인 WO 88-08844(88.11.17)가 있다. 이중 EP 0266042의 특허의 제법을 간단히 설명하면 다음과 같다.

공지의 방법에 따라 쉽게 합성할 수 있는 하기 일반식(I)로 나타낸 합성중간체인 테트라하이드로폴산에 일반식(II)의 (-) 멘틸클로로포로메이트 또는 (-) 보오닐클로로포르메이트 또는 (-) 이소보오닐 클로로포르메이트 등을 반응시켜 일반식(III)의 화합물을 합성하고, 일반식(III)의 화합물로 부탄올로 추출하여, 난용물과 가용물 부분을 각각 분리하였다.

이들 각각의 화합물(IV)와 (V)로부터 일반식(VI)와 (VII)의 화합물을 거쳐 (6R)-류코보린인 일반식(VIII)의 화합물과 (6S)-류코보린인 일반식(IX)의 화합물을 합성하였다.

그러나 이 방법은 매우 유독하고, 고가의 화합물인 (-) 멘틸 클로로포르메이트 등의 알킬클로로포르메이트 등을 사용하므로 안전성이 문제되고, 고가의 원료를 사용하므로 공업적 합성에는 부적합한 것으로 생각된다.

한편 국제특허인 WO 88-08844에서는 라세믹체인, d,ℓ-류코보린 칼슘으로부터 /ℓ-류코보린을 재결정법으로 분리하는 방법을 사용하고 있다.

이 방법에서는 d,ℓ -류코보린 칼슘을 온수(50-60℃)에 녹이고 염화칼슘을 넣고, 냉각시킨 후 암모니아수를 넣어 pH를 10으로 맞추고 18℃에서 ℓ -류코보린의 결정을 생성시킨다. 이 온도로 방치후 생성된 고체를 수득하여 수회 재결정을 반복하여 ℓ -류코보린을 얻는다. 이 방법은 EP 0266042의 방법에 비하여 간편하고 경제적인 ℓ -류코보린의 제조방법이라고 할 수 있다.

그러나 WO 88-08844의 방법은 고가인 d,ℓ -류코보린을 원료로 사용하는 제조방법이므로 역시 공업적인 방법으로 부적합하다.

본 발명에서는 상기의 기존방법에서 사용한 원료인 d,ℓ -류코보린, 칼슘대신에 공지의 방법으로 쉽게 합성할 수 있는 류코보린의 합성 중간제인 일반식(X)의 무수 루코보린(일명, 5,10-메테닐-테트라히드로폴산의 산염)을 출발물질로 사용하였다.

본 발명에 의한 ℓ-류코보린의 합성공정을 간단히 도시하면 다음의 그림과 같다.

위에 도시한 제조공정을 설명하면 다음과 같다.

1) 산소제거 비등수에 5,10-메테닐테트라히드로폴산의 염산염을 넣고 가열하여 용해시킨다.

여기에 3.7N-수산화나트륨 수용액을 적량 넣어 pH를 6.5-6.9로 조정한후 염화칼슘, 2수화물을 2-15당량을 넣고 용해시킨다.

1N-수산화나트륨 수용액 적량을 넣어 용액의 pH를 6.5-6.9로 조정한 후, 약 11시간 동안 질소기체하에서 환류시킨다.

2) 55℃로 냉각시킨 후, 염화칼슘을 소량 추가로 투입하거나, 그대로 암모니아수(28%)를 넣어, 용액의 pH를 9.5-11로 조정하여 18℃부근으로 냉각시키고 방치하면,(6S)-류코보린 칼슘이 얻어진다.

3) 본 발명에서는 염화칼슘의 투입량을 5,10-메테닐-태트라히드로폴산의 염산염에 대하여 2-15당량까지 변화시키고, pH를 9.5-11로 하였을때, 약 18℃ 부근에서 ℓ -류코보린 칼슘이 선택적으로 수득되었다.

본 발명의 방법과 WO 88-08844의 방법을 비교하였을때, WO의 방법에서는 염화칼슘, 2수화물을 d,ℓ -류코보린의 용액증에 넣고 ℓ -류코보린·칼슘의 재결정을 시키고 있으나, 본 발명에서는 d,ℓ -류코보린의 합성 반응중간체인 5,10-메테닐-테트라히드로폴산의 산염에 직접 염화칼슘, 2수화물을 넣고, 반응시켜, ℓ -류코보린의 합성과 분리공정을 동시에 실시하는 매우 간편한 제법이다.

[실시예 1]

산소를 제거한 비등증류수 약 0.5-1.5리터를 취한다.

여기에 질소내기하에서 5,10-메테닐-테트라히드로폴산의 염산염을 809을 넣어 녹인다.

4N-수산화나트륨 수용액으로 pH를 약 6으로 맞추고, lN-수산화나트륨 수용액으로 pH를 6.5-6.9로 조정한다. 염화칼슘·2수화물을 45-340g을 넣고 잘 녹인다.

1N-수산화나트륨 수용액을 넣어 pH를 6.5-6.9로 조정한 후, 약 10시간 동안 환류시킨다.

환류시킨 용액울 55℃로 냉각시키고, 염화칼슘, 2수화물을 넣지 않거나, 3-10g을 가하여 용해시키고,이어서 30℃까지 냉각시킨다. 활성탄 40g과 마그네슘 실리케이트(플로리실) 40g을 넣어 슬러리와 같은 반응액을 여과하여 여액을 취한다.

이 여액의 온도를 30℃로 유지하면서 암모니아수(28%)을 적량 넣어 pH를 9.5로 조정한다. 천천히 냉각시켜서 용액의 온도가 약 18℃가 되었을때, 1-류코보린·칼슘의 침전이 생성된다. 이 온도를 유지하며 약 24시간 방치시킨 후, 생성된 1-류코보린·칼슘을 수득한다.

이렇게 수득한 1-류코보린·칼슘을 감압하에서 오산화인을 건조제로 사용하여 약 1일 동안 건조시켜서 건조중량으로 79.2g을 얻는다.

HPLC 분석함량(%): 80%(무수류코보린·칼슘으로서)

=-10.76(C=1.82, 무수류코보린·칼슘)

(90%의 (6S)-류코보린·칼슘과,10(%)의 (6R)-류코보린·칼슘을 함유)

[실시예 2]

실시예 1의 방법으로 얻은 광학순도 90%의 (6S)-류코보린·칼슘 60g을 55-60℃에서 물에 녹이고, 염산수용액(약 20%)을 천천히 넣어서 pH를 6,0-6.5로 맞춘다. 염화칼슘·2수화물을 79-318g 넣는다.

55℃에서 수산화나트륨 수용액을 넣어 용액의 pH를 7-7.5로 조정하고, 35℃에서 (6S)-류코보린·칼슘의 표준품울 소량 주입하고, 천천히 냉각시키면서 18-20℃ 결정화가 일어난다.

약 1-2일 결과후, 결정이된 생성물을 여과하여, 물이 포함된 에탄올로 세척하여 건조시킨다. 건조후 46.5g의 (6S)-류코보린·칼슘을 얻었다.

동품의

=-14.2(C=1.82, 무수류코보린·칼슘으로서)

(98%)의 (6S)-류코보린·칼슘과 2%의 (6R)-류코보린·칼슘함유)

[실시예 3]

광학순도 98%로 얻은 (6S)-류코보린·칼슘, 10g을 뜨거운 물에 녹이고 53-79g의 염화칼슘·2수화물을넣었을때, pH가 7.0-7.5였다. 천천히 냉각시키면 l8-20℃에서 결정화가 일어난다. 3-4시간 후 생성된결정을 여과하고, 소량의 물과 수분이 소량 함유된 에탄올로 세척하여 건조시켰다.

이런 방법으로 (6S)-류코보린·칼슘을 32g을 얻었다.

이때의[

] = -15(C=1.82, 무수류코보린·칼슘으로서)이었으며, 광학순도는 99-100%이었다.

동품의 적외선 흡수 스펙트라와 프로톤-핵자기 공명스펙트라는 공지의 데이타와 일치하였다.

Claims (1)

1. (6R,S)-5,10-메테닐-테트라 히드로폴산의 염산염을 pH 6.5-6.9에서 (6R,S)-5,10-메테닐-테트라히드로폴산의 염산염에 대하여 2-15당량의 염화칼슘. 2수화물로 가수분해 반응을 시킨 후, 30℃로 냉각시키면서 알카리를 넣어 pH9.5-11로 조정하고 계속하여 18℃로 냉각하여 반응액중에서 직접 (6S)-류코보린·칼슘을 결정화함을 특징으로 하는 (6S)-류코보린·칼슘의 제조방법.