KR920003804B1 - 3'-아지도뉴클레오시드의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

[발명의 명칭]

3'-아지도뉴클레오시드의 제조방법

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 3'-아지도-뉴클레오시드의 제조방법에 관한 것이다.

항 비루스 화학 치료분야에 있어서, 비전염 숙주세포를 손상시키지 않으면서 비루스를 공격해야 하는 어려움 때문에 비루스 자체만을 효과적으로 구제하는 약물은 거의 존재하지 않는다. 비루스의 매우 심한 기생 특성 때문에 비루스 복제에 필요한 모든 기술은 숙주세포에 의해 제공된다고 오랫동안 제시되어 왔다. 최근에 어떤 한 종에서 다른 종으로 변화하는 비루스의 생활환(life-cycle)에 있어서 어떤 단계는 비루스 자체에 의해 특이화되며, 이러한 단계들은 비루스가 상응하는 어떤 숙주-세포 기능과 상이한 곳을 공격하기 쉽다는 것이 입증되었다. 그러나, 비루스와 숙주 기능사이의 유사성이 매우 크므로 효과적인 치료 효과는 얻기 어려웠다.

이러한 이유 때문에, 비루스 감염의 치료에 적합한 것으로 확인된 화합물은 일반적으로 숙주에 대한 약간의 특성을 갖고 있다. 따라서, 이상적인 약물은 항비루스성 유효농도에서 비-독성이어야 하며, 이러한 치료의 부재하에서 상기 화합물은 우수한 치료 비율, 즉, 치료에 대해 독성인 농도는 항 비루스 활성이 관측되는 농도 보다 훨씬 큰 농도이어야 한다.

특히 중요하다고 추정되는 비루스중의 한 그룹으로 레트로비루스(retrovirus)를 들 수 있다. 레트로비루스는 복제되기 위해 비루스 게놈의 RNA를 DNA로 먼저 역전사해야 하는 RNA비루스의 서브 그룹이다("전사"란 주로 DNA로부터 DNA의 합성을 의미한다).

DNA형태의 비루스 게놈을 숙주 세포 게놈과 일단 결합시키면, 복제에 사용되는 하기 숙주 세포의 전사/번역 과정을 최대한 이용할 수 있게 된다. 일단 결합이 되면, 비루스 DNA는 숙주 DNA와는 실질적으로 구별되지 않으므로, 이런 상태에서 비루스는 세포가 살아있는한 지속될 것이다. 상기 형태의 비루스는 공격에 견딜 수 있으므로 비루스의 생활환의 또 다른 단계에서 치료가 이루어져야 하며 모든 비루스-감염세포가 죽을때까지 치료는 계속되어야 한다.

HTLV-I 및 HTLV-Ⅱ는 모두 레트로비루스이며, 사람에 있어서 백혈병의 유발 인자로 알려져 있다. HTLV-I 감염은 특히 세계 도처에 만연되어 있으며 매년 수많은 사람들이 죽어가고 있다.

레트로비루스종은 AIDS에 걸린 환자로부터 분리 증식될 수 있다. 매우 특징적이기는 하지만 레트로비루스는 아직도 비루스에 대해서 국제적으로 통용될 수 있는 이름에 관한 여러 이견이 있다. 최근 인체 T-세포임파추향성 비루스 Ⅲ(HTLV Ⅲ)으로서 AIDS 관련 레트로비루스(ARV) 또는 임파선중 관련 비루스(LAV)가 공지되어 있지만 국제적으로 통용되는 이름은 인체면역결핍 비루스(HIV)이다. 이러한 비루스(이후 HIV로서 지칭됨)는 우선적으로 OKT4표면아마커를 함유하는 T-세포를 감염시키고 파괴하며 AIDS의 병인제로서 일반적으로 받아들여지고 있다. 환자는 이러한 T- 세포 세트를 점차 잃어버리며 면역 시스템의 전반적인 균형이 파괴되어 기타 감염에 대항하는 능력이 감소되며 사람으로 하여금 매우 치명적인 2차 감염에 쉽게 걸리게 된다. AIDS환자에 있어서 사망에 이르는 일반적인 원인은 비루스에 의해 유발된 폐염 또는 암등의 2차 감염 때문이지 반드시 HIV감염이 직접적인 결과는 아니다. HIV감염과 관련된 기타 징후는 혈소판 감소증, 자반병 및 카포시 육종이다.

최근, HIV는 중추 신경계의 비-혈액 관련조직, 대식세포 및 T4마아커를 표현하는 B-세포를 비롯한 기타 조직 종류로부터 회수되었다. 중추신경계(CNS)의 이러한 감염은 종래의 AIDS와 반드시 관련되는 것은 아니지만 무중후성 HIV에 감염된 환자에게서 발견되었다. CNS의 HIV감염은 뇌질환, 진행성 눌어증, 운동실조증 및 부위 감각 상실과 같은 증후 및 수척을 유발하는 진행성 탈수와 관련된다. 또한, HIV감염과 관련되는 또 다른 증후는 무증후성 캐리어스테이트, 존속 일반화 임파선증(PGL)및 AIDS- 관련 컴플렉스(ARC)이다.

특정의 만성적, 신경 감염은 레트로비루스에 의해 유발된다고 생각되는 것이 있다. 이러한 감염은 사람의 다발성 경화증(예로, 카프린 관절염), 염소의 뇌염 비루스 감염, 및 양의 비스나-매디 감염등을 들 수 있다.

후랜드 백혈병 비루스(Friend Leukaemia Virus ; FLV), 쥐(murine)의 레트로비루스와 같은 다양한 레트로비루스에 대항하는 화합물을 시험한 결과가 보고되어 있다. 예를 들면 크리그등(Expo, Cell Res., 116(1978)21-29)은 실험실내 실험에서 FLV에 대해 활성을 지닌 3'-아지도-3'-데옥시티미딘을 발견했으며, 오스테르태그등(Proc. Nat. Acad. Sci. (1974)71, 4980-85)은 FLV와 관련된 항 비루스성 활성 및 세포간독성의 부족을 근거로해서 3'-아지도-3'-디데옥시티미딘을 DNA비루스에 의해 유발된 질병의 의학적 치료를 위한 브로모데옥시우리딘을 대신할 수 있다고 제시하고 있다. 그러나, 데클레르크등(Biochem. Pharm.(1980)29, 1849-1851)은 6년후 3'-아지도-3'-디데옥시티미딘이 우두, HSVI및 수두성 대상포진 비루스 (VZV)를 비롯한 시험에 사용된 비루스에 대해 기대할만한 활성을 갖지 않는다고 보고했다.

박테리아도 또한 치료면에서 문제를 야기시키는데, 즉 사용되는 모두 살아있는 미생물이 서로서로 동일한 수명을 지니고 있다면 어느것 하나에 대해 독성인 물질은 또 다른 미생물에 대해서도 독성일 가능성이 크다. 따라서, 일반적으로 사용되는 항 박테리아제에 대해 내성을 갖는 박테리아 균주로 증식됨을 알게 되었다.

후술되는 3'-아지도뉴클레오시드는 비루스 및 박테리아 감염, 특히 HIV 감염과 같은 레트로비루스 감염 및 주로 사용되는 항박테리아제에 대한 내성이 있는 그람-음성 박테리아의 특정균주와 같은 그람-음성 박테리아 감염에 대해 유용한 치료제라는 것을 밝혀냈다. 즉, 본 발명은 사람 또는 가축의 치료에 유용한 하기식(I)의 화합물 또는 약학적 허용염에 관한 것이다.

상기식에서, A는 9-또는 1-위치에 연결된, 치민 이외의 푸린 또는 피리미딘 염기이다.

상기식(I)의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체는 본 명세서에서 본 발명에 의한 화합물로서 지칭될 것이다.

레트로비루스 감염은 주로 중추신경계에 영향을 주는데, 본 발명에 의한 화합물의 장점은 실험을 통해 입증되었듯이 임상적으로 유효한 양으로 혈액-뇌 베리어를 통과하는 능력을 보유하는 것이다.

본 발명에 따른 화합물은 레트로비루스 감염 및 그람-음성 박테리아 감염에 대해 특히 우수한 활성을 갖는다고 밝혀졌다.

따라서, 본 발명에 따른 화합물은 레트로비루스 또는 그람-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방에 유용하게 사용할 수 있으며, 또한 본 발명에 의한 화합물은 레트로비루스 또는 그람-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방을 위한 의약품의 제조에 사용가능하다.

본 명세서에서, "레트로비루스 감염"은 레트로비루스 생활환의 전 부분에서 역전사효소(reverse transcriptase)를 사용하는 비루스를 의미하는 것이다.

본 발명에 따른 화합물은 하기 박테리아에 대해 특히 우수한 활성을 제공한다 : 이. 콜리, 살모넬라 듀블린, 살모넬라 티포사, 살모넬라 티피뮤륨, 시겔라 플렉스네리, 시트로박터 프렌디, 클렙시엘라 뉴모니아, 비브리오 콜레라, 비브리오 안퀼라럼, 엔테로박터 에로게니즈, 파스테렐라 물토시다, 헤모필러스 인플루엔자, 예르시니아 엔테로콜리티카, 파스테렐라 헤몰리티카, 프로테스 미라빌리스 및 프로테스 불가리스, 여행으로 인한 설사, 요로 감염, 시겔라증, 장티푸스 및 콜레라등의 인체 유발성 미생물 ; 송아지 장염, 돼지의 이유후 장염 및 닭의 장폐혈증등의 동물질병의 유발성 미생물.

본 발명에 따른 화합물은 하기 비루스에 대해 특히 우수한 활성을 보여준다 : 즉, 사람의 T-세포 임파추향성 비루(HTLV), 특히 HTLV-I, HTLV-Ⅱ 및 HTLV-Ⅲ(HIV) : 고양이의 백혈병 비루스, 말의 전염성 빈혈 비루스, 카프린 장염 비루스 및 기타 렌티 비루스 ; B형 간염 비루스, 엡스타인-바르비루스(EBV) 및 다발성 경화증(MS)등의 유발인자와 같은 기타 사람의 비루스를 들 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화합물은 카포시 육종(KS) 및 혈소판 감소증 자반증(TP)의 치료에 유용하다. MS, KS, TP 및 카프린 장염 비루스에 있어서, 본 발명은 A가 티민인 일반식(I)의 화합물을 포함하는데, 이러한 화합물은 상기 비루스 질병의 치료 또는 예방에 사용될 뿐 아니라 상기 질병 또는 예방용 의약품을 제조하는데 사용된다.

다양한 박테리아 및 비루스 감염에 대한 본 발명의 화합물의 활성은 의학에서 매우 유용하며, 상기 화합물을 배합하여 치료에 사용하는 경우 새로운 작용성에 의해 병의 진전을 감소시킨다. 즉, 3'-아지도뉴클레오시드는 후술되는 기타 치료제에 의해 상승 작용이 뚜렷해지므로 배합물로의 치료가 특히 유용하다.

3'-아지도뉴클레오시드는 기타 치료제와 상승적으로 협조하여 두 시약의 치료 역량을 향상시켜 준다는 것을 알게 되었다. 따라서, 각 화합물의 소량이 치료를 위해 필요하므로 치료비율(therapeutic ratio)는 상승되나 각 화합물에 대한 독성 위험을 감소된다.

또한, 본 발명은 적어도 하나의 기타 치료제와 혼합되는 배합 치료에 유용한 하기식(I) A의 화합물 또는 이것의 약학적 허용 유도체에 관한 것이다.

상기식에서, B는 9-또는 1-위치에 각각 결합된 푸린 또는 피리미딘 염기이다.

특히, 본 발명은 상술된 바의 배합 치료에 유용한 상기식(I) A의 화합물 또는 이것의 약학적 허용 유도체에 관한 것으로, 두 활성제는 상승비(potentiating ratio)로서 존재한다.

"상승비"란 각 성분의 치료유효량의 합 이상이 치료 효과를 제공하는, 상기식(Ⅰ) A의 화합물 또는 이것의 약학적 허용유도체와 또 다른 두번째 치료제와의 비이다.

최대 상승 효과를 제공하는 최적비가 있는 반면에, 하나의 시약중 소량이라도 어느정도 다른 시약의 치료효과를 충분히 상승시키므로 두 상승약제의 어떠한 비에서도 필요한 상승효과를 충분히 제공할 수 있다. 그러나, 가장 큰 상승효과는 두 약제가 500 : 1-1 : 500, 바람직하게는 100 : 1 내지 1 : 100, 특히 20 : 1 내지 1 : 20, 더욱 특히 10 : 1 내지 1 : 10일때이다.

따라서, 본 발명은 상기식(I) A의 화합물 또는 이것의 약학적 허용 유도체와 적어도 하나의 또 다른 치료제와의 치료 배합물(조성물)에 관한 것이다.

상술된 배합물은 본 발명에 의한 배합물로 이후 지칭될 것이다.

즉, 본 발명은 상술한 감염 또는 증상의 치료 또는 예방에 유용한 본 발명에 따른 배합물 또는 상술한 감염 또는 증상의 치료 또는 예방용 의약품 제조에 유용한 본 발명에 의한 배합물을 제공하는 것이다.

본 발명에 의한 배합물은 필요한 치료 효과를 달성하기 위해 주로 단위 형태의 약학적 제제로, 또는 개별적으로 예컨대 동시에 또는 서로 다른 시간에 투여되는 주사 및 정제의 배합물로서 투여된다.

항 비루스테스트에 있어서, 예를 들면 아지도뉴클레오시드는 인터페론, 뉴클레오시드 이동억제제, 글루쿠론산화 억제제, 신장분비 억제제 및 상기식(I) A의 화합물과 동일한 미생물에 대해 활성을 반드시 갖지는 않는 또 다른 치료성 뉴클레오시드와 같은 여러시약에 의해 상승된다는 것을 알게 되었다.

특히 바람직한 종류의 인터페론으로서, α,β및 γ를 들 수 있으며, 뉴클레오시드 이동 억제제로서 딜라제프, 디피리다몰, 6-[(4-니트로벤조일)티오]-9-(β-

-리보푸라노실)푸린, 파파바린, 미오플라진, 헥소벤딘, 인도플라진 또는 이것의 산부가염을 들 수 있다.

프로베네시드는 상기식(I) A의 3'-아지도뉴클레오시드와 배합되어 특히 유용한데, 이 화합물은 신장분비 억제활성 및 글루쿠론산화 억제활성을 가지고 있다. 배합물의 사용에 유용한 기타 화합물의 예는 아세트 아미노펜, 아스피린, 로라제팜, 시메티딘, 라니티딘, 조메프락크, 클로피브레이트, 인도메타신, 케토프로펜, 나프록센 및 글루쿠론산화에 필적하거나 충분한 글루쿠론산화를 수반하는 기타 화합물을 들 수 있다.

상기식(I) A의 3'-아지도뉴클레오시드 및 이것의 약학적 허용유도체는 상술된 바의 기타 치료 뉴클레오시드 유도체에 의해 상승되는데 이러한 종류의 비환식 뉴클레오시드는 영국 특허 명세서 제1,523,865호, 미합중국 특허 명세서 제4,360,522호, 유럽 특허 명세서 제74,306호, 제55,239호 및 제 146,516호, 및 유럽 특허 출원 제 434,393호 및 434,395에 기술되어 있으며, 특히 하기식 (A)의 화합물 및 이것의 약학적 허용유도체도 포함된다.

상기식에서, Z는 수소원자, 히드록시기 또는 아미노기이며 ; X는 (a)산소원자, 황원자 또는 메틸렌기이고 Y는 수소원자 또는 히드록시메틸렌기이거나 ; 또는 (b) 메틸렌옥시기(-OCH₂)이고 Y는 히드록시기이다.

상술한 유도체의 예는 염 및 에스테르인데, 알칼리금속(예 : 나트륨) 또는 알칼리토금속 염등의 염기염 ; 락트산, 아세트산, 말산 또는 p-톨루엔설폰산등의 유기산의 약학적 허용염 및 염산 또는 황산과 같은 무기산의 약학적 허용염도 포함된다.

본 발명에 있어서 주로 사용되는 상기식(A)의 화합물의 에스테르류의 예는 상기식 (A)의 화합물의 9-측쇄의 말단 위치중 하나 또는 모두에 포르밀옥시 또는 C_1-16(예 : C_1-6) 알카노일옥시(예 : 아세톡시 또는 프로피오닐옥시), 임의 치환된 아르알카노일옥시(예 : 페닐-아세톡시와 같은 페닐-C_1-4알카노일옥시), 또는 임의 치환된 아로일옥시(예 : 벤조일옥시 또는 나프토일옥시) 에스테르군을 함유한 화합물을 들 수 있다. 상술한 아르알카노일옥시 및 아로일옥시 에스테르기는 하나 또는 그 이상의 할로겐(예 : 염소 또는 브롬) 원자, 아미노, 니트릴 또는 설파미도에 의해 치환될 수 있는데, 상기 기들중 아릴 부분은 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서 유용한 상기식(A)의 화합물의 특히 바람직한 보기로서 9-[(2-히드록시-1-히드록시 메틸에톡시)메틸] 구아닌, 2-아미노-9-(2-히드록시에톡시메틸)푸린, 특히 9-(2-히드록시에톡시메틸)구아닌(아시클로비르)을 들 수 있다. 실시예에 기술된 바와 같이 상기식(I) A의 화합물이 3'-아지도-3'-데옥시티미딘일때 특히 아시클로비르는 우수한 상승 효과를 갖는다.

항박테리아의 분야에 있어서, 넓은 스펙트럼의 항생물질은 아지도뉴클레오시드의 활성을 상승시키는데 효과적이다. 이러한 물질의 보기로서 2,4-디아미노-5-(3',4',5'-트리메톡시벤질)피리미딘(트리메토프림)및 이것의 유사체와 같은 벤질 피리미딘 (영국 특허 명세서 제1,405,246호에 명시됨) ; 설파미딘과 같은 설폰아미드 ; 리팜피신 ; 토브라마이신 ; 푸시드산 ; 클로람페니콜 ; 클린다마이신 및 에리트로마이신등의 여러 시약을 들 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 제 2의 시약이 상술한 항비루스 시약, 항박테리아 시약 또는 종래의 시약중 적어도 하나인 본 발명에 의한 배합물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따라 사용하기 적합한 또 다른 배합물의 보기로서, 제 2의 시약이 인터로이킨 Ⅱ, 서라민, 포스포노포르메이트, HPA 23,2',3'- 디데옥시뉴클레오시드(예 : 2',3'- 디데옥시시티딘 및 2',3'- 디데옥시아데노신) 또는 임파구수 및/또는 기능을 적절하게 증가시킬 수 있는 레바미솔 또는 티모신등의 약물인 배합물을 들 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화합물 및 배합물은 골수이식 및 임파구 이식과 같은 면역 조절 치료에 유용하다.

AIDS와 같이 상술한 레트로비루스 감염은 2차적 감염과 주로 관련된다. 즉, 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT) 및 아시클로비르는 특히 2차적 헤르페스 감염을 지닌 AIDS환자의 치료에 특히 유용하며, AZT 및 9-[(2-히드록시-1-히드록시메틸 에톡시)메틸]구아닌의 배합물은 2차적 기대 세포 비루스 감염에 걸린 AIDS 환자의 치료에 유용하다.

본 발명에 따라 특히 바람직한 상기식(I) 및 (I) A의 피리미딘은 하기식(Ⅱ)의 화합물 또는 이것의 약학적 허용 유도체이다.

상기식에서, R¹은 히드록시, 메르캅토, 아미노, 알킬티오, 아르알콕시, 알콕시, 시아노, 알킬아미노, 또는 디알킬아미노인데, 알킬기는 임의 결합되어 헤테로싸이클을 형성하며 ; R²는 수소, 아실, 알킬, 아로일 또는 설포네이트이며 ; R³는 히드록시, 메르캅토, 아미노, 트리아졸릴, 알킬아미노, 디알킬아미노인데, 알킬기는 임의 결합되어 헤테로싸이클, 아르알콕시, 알콕시 또는 알킬티오를 형성하며 ; R⁴는 알킬, 치환된 알킬, 할로, 퍼할로메틸, 히드록시, 알콕시, 시아노, 니트로, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐 또는 수소이다.

상기식(Ⅱ)의 화합물에서 2-6 위치의 점선은 상기 위치에 단일 또는 이중결합의 존재를 나타내는 것으로, 단일 및 이중결합의 상대적인 위치는 치환체 R¹및 R²의 케토-에놀 토오토머 형성 여부에 따라 결정된다.

본 발명에 의한 바람직한 종류의 피리미딘 뉴클레오시드는 R³가 아미노 또는 알킬아미노인 화합물, 특히 3'아지도기가 에리트로배열("다운 아지도" : down azido")인 화합물과 같은 시티딘 유도체 ; 3'-아지도가 에리트로 또는 트레오("업 아지도 ; up azido")배열을 이루는 티미딘 및 우리딘 유도체(예 : R³가 아미노 또는 알킬아미노기 이의의 기를 나타내는 상기식(I)의 화합물) ; 5C와 6C 위치 사이가 불포화된 뉴클레오시드등이다.

본 발명에 따라 유용한 상기식(I) 및 (I) A의 바람직한 푸린은 하기식(Ⅱ) A의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체이다.

상기식에서, R⁶및 R⁷은 서로 동일하거나 상이하며, 아미노, 수소, 히드록시, 메르캅토, 알킬티오, 알콕시, 아르알콕시, 시아노 또는 알킬아미노로부터 선택된다.

본 발명에 따른 바람직한 푸린 유도체는 R⁶이 아미노 또는 치환된 아미노인 상기식(Ⅱ)A의 화합물과 같은 마데닌 유도체, R⁶은 아미노 또는 치환된 아미노 이외에는 상기 정의된 기이고 R⁷은 아미노 또는 치환된 아미노인 상기식(Ⅱ) A의 화합물과 같은 구아닌 유도체이다.

상기의 아실기는 후술되는 알킬 또는 아릴기를 포함한다. 상기식(Ⅱ) 및 (Ⅱ) A의 화합물에 있어서, 후술되는 바와 같이, 상술한 알킬기는 1-8의 탄소원자, 바람직하게는 1-4의 탄소원자(예 : 메틸 또는 에틸기)를 함유하는 것이 바람직한데 상기 알킬기는 하나 또는 그 이상의 적합한 치환체로 임의 치환될 수 있다. 아르알콕시와 같은 기를 아릴부분에 포함되는 아릴기는 후술되는 하나 또는 그 이상의 적합한 치환체에 의해 임의 치환된 페닐기인 것이 바람직하다.

상술된 바의 알케닐 및 알키닐기는 바람직하게 2 내지 8개의 탄소, 2 내지 4개의 탄소를 포함하는 것으로서, 예로, 에테닐 또는 에티닐이며, 이들은 후술되는 하나 또는 그 이상의 적합한 치환체에 의해 임의 치환될 수 있다.

상술한 알킬, 알케닐, 알키닐 및 아릴기상의 적합한 치환체는 바람직하게 할로겐, 히드록시, C_1-4알콕시, C_1-4알킬, C_6-12아릴, C_6-12아르알콕시, 카르복시, 아미노 및 치환된 아미노로부터 선택되는데 상기 아미노는 C_1-4알킬에 의해 단일 또는 이중으로 치환되며, 이중으로 치환될때 알킬기는 임의로 결합되어 헤테로 싸이클을 형성한다.

상기식(Ⅱ)의 바람직한 화합물은 R¹, R², R³및 R⁴중 하나 또는 그 이상의 기가 하기와 같을 때, 즉 R¹은 히드록시, 메르캅토, C_1-4알콕시 또는 아미노이며 ; R²는 수소, 메틸, C_1-2알카노일 또는 벤조일이며 ; R³는 히드록시, 메리캅토, 아미노 또는 치환된 아미노이며; R⁴는 R³가 아미노 또는 치환된 아미노일때 수소이고, R³가 아미노 또는 치환된 아미노기 이외의 기일때는 할로겐, 퍼할로메틸, C_2-3알킬, C_2-3알케닐또는 치환된 에테닐인 화합물인데, 이러한 화합물의 5' 유도체는 카르복시기로 임의 치환된 측쇄 또는 직쇄의 알킬 에스테르(예 : 석시네이트), C_1-6티오에스테르, 임의치환된 아릴 에스테르, 메실레이트, 글루쿠로나이드 또는 모노- , 디- 또는 트리- 포스페이트등이다.

상기식(Ⅱ) A의 바람직한 화합물은 R⁶이 아미노, C_1-4알킬 아미노, 메르캅토, 히드록시 또는 C_1-4알콕시이고, R⁷이 아미노, C_1-7알킬아미노 또는 수소인 화합물인데, 이러한 화합물의 5' 유도체는 카르복시기로 임의 치환된 직쇄 또는 측쇄의 알킬 에스테르(예 : 석시네이트), C_1-6티오 에스테르, 임의 치환된 아릴 에스테르, 메실레이트, 글루쿠로나이드 또는 모노-, 디-, 또는 트리-포스페이트등이다.

비루스 감염의 치료 또는 예방에 유용한 상기식(I)의 바람직한 화합물은 일반식(Ⅱ)의 화합물 및 그것의 약학적 허용 유도체인데, 상기식에서 R¹이 히드록시, 메르캅토, C_1-5알콕시, 아미노, C_6-12아르알콕시 또는 2 및 5' 위치를 연결하는 o-안하이드로 결합이고 ; R²가 수소, 메틸 또는 벤조일이며 ; R³가 히드록시, 메르캅토, 아미노, 치환 아미노 또는 C_6-12아르알콕시이며 ; R⁴는 상기식(I)의 A가 티미딘잔기가 아닐 때 상기에서 정의한 바와 같다. 아지도기는 바람직한 에리트로로 배열된다.

특히 바람직한 화합물은 티미딘 잔기를 갖는 화합물로부터 피리미딘링의 R¹-R⁴치환체중 단지 한기에 의해 변화한 상기 정의된 바의 화합물이다(R¹및 R³는 히드록시이고, R²는 수소이며 R⁴는 메틸이다). 비루스감염의 치료 또는 예방에 유용한 상기 식(I)A의 바람직한 화합물은 상기 식(I)에 대한 상기 정의와 동일하고 특히 상기 화합물이 3'-아지도-3'-데옥시티미딘일때 B가 티민잔기인 상기식(I) A의 화합물을 포함한다.

박테리아 감염의 치료 또는 예방에 유용한 바람직한 상기 식(I)의 화합물 및 그것의 약학적 허용 유도체는 R¹이 산소, 황, 벤조일옥시 또는 메톡시이고 ; R²가 수소 또는 벤조일이며 ; R³가 상기 정의된 바와 같으며 ; 상기 식(I)에서 A가 티민잔기가 아닐때 R⁴는 메틸 또는 할로겐인 상기식(Ⅱ)의 화합물이다. 3'-아지도기는 에리트로 또는 트레오 배열을 갖는데, 에리트로 배열을 갖는 것이 특히 바람직하며, 바람직한 약학적 허용 유도체는 단순 유기산(바람직하게는 C_1-18산)의 5' 에스테르 화합물이다. 티민잔기를 지닌 화합물로부터 피리미딘 링의 R¹-R⁴치환체중 단지 한 기에 의해 변화한 상기 정의된 바의 화합물이 특히 바람직하다(R¹및 R³는 히드록시이고, R²는 수소이며, R⁴는 메틸이다).

박테리아 감염의 치료 또는 예방에 유용한 상기식(I) A의 바람직한 화합물은 상기식(I)에서 정의된 바와 같은 화합물이며, 또한 특히 상기 화합물이 3'-아지도-3'-데옥시티미딘일때 B가 티민잔기인 상기식(I) A의 화합물이 포함된다.

"약학적 허용 유도체"란 수용체에게 투여되자마자 3'-아지도뉴클레오시드 또는 이것의 치료학적 유효대사 산물 또는 그 잔기를 제공할 수 있는(직접 또는 간접적으로) 약학적 허용 염, 에스테르, 그 에스테르염 또는 기타 화합물을 의미한다. 비-에스테르 화합물의 보기는 5'-C-및 2-C-원자가 산소원자에 의해 결합되어 안하이드로(무수)기를 형성하는 유도체이다.

상기식(I)의 화합물의 바람직한 에스테르는, 에스테르의 비-카르보닐부분이 직쇄 또는 측쇄 알킬, 알콕시알킬(예 : 메톡시메틸), 아르알킬(예 : 벤질), 아릴옥시알킬(예 : 펜옥시메틸), 아릴(예 : 할로겐, C_1-4알킬 또는 C_1-4알콕시에 의해 임의 치환된 페닐)의 카르복실산 에스테르 ; 알킬- 또는 아르알킬 설포닐(예 : 메탄 설포닐)과 같은 설포네이트 에스테르 ; 및 모노-, 디- 또는 트리포스페이트 에스테르로부터 선택된다. 이러한 화합물의 또 다른 보기로 이것의 약학적 허용염도 포함된다.

상술된 에스테르에 있어서, 특별한 언급이 없는 한 알킬부분은 바람직하게 1-19개의 탄소원자, 특히 1-4의 탄소원자를 함유하는 것이다. 이러한 에스테르에 존재하는 아릴부분은 페닐기를 포함한다.

상기식(I)의 화합물의 약학적 허용 염 및 이것의 약학적 허용유도체는 알칼리 금속(예 : 나트륨), 알칼리 토금속(예 : 마그네슘), 암모늄 및 NX₄ ⁺(X는 C_1-4알킬)로부터 유도된 염기염 및 염산염등의 무기산염등이다.

본 발명의 사용되는 상기식(I)의 화합물의 약학적 허용 유도체의 예는 모노-나트륨 염 및 모노포스페이트 ; 디소듐 모노포스페이트 ; 디포스페이트 ; 트리포스페이트 ; 아세테이트 ; 3-메틸-부티레이트 ; 옥타노에이트 ; 팔미테이트 ; 3-클로로벤조에이트 ; 벤조에이트 ; 4-메틸 벤조에이트 ; 하이드로겐 석시네이트 ; 피발레이트 및 메실레이트등의 5' 에스테르이다.

본 발명에 의한 어떠한 화합물도 신규한 것이다. 그러므로, 본 발명은 또한 하기식(I) B의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체를 제공한다.

상기 식에서, C는 각각 9- 또는 1- 위치에 결합된 푸린 또는 피라미딘 염기이다. 단, 하기의 화합물은 제외한다.

(a) C가 아데닌, 구아닌, 우리딘, 시티딘 또는 티민 염기인 상기식(I) B의 화합물 및 이것의 5'-모노-또는 5'-트리포스페이트에스테르 ; (b) c가 우리딘 염기이고 3'-아지도기가 에리트로 배열인 상기식(I) B의 화합물의 5'-o-아세테이트, 5'-o-트리틸 및 5'-o-(4-메틸벤젠설포네이트)유도체 ; (c) C가 ⅰ) 5-브로모비닐 우리딘 또는 5-트리플루오로메틸 우리딘 잔기이고, 3'-아지도기가 에리트로 배열이며 ; ⅱ) 우리딘 잔기 및 3'-아지도기가 트레오 배열이며 ; ⅲ) 5-아이오도 또는 5-플루오로우리딘 잔기 및 3'-아지도기가 에리트로 또는 트레오 배열인 상기식 (I) B의 화합물 및 이것의 5'-o-트리틸유도체, (d) C가 ⅰ) 5-브로모비닐우리딘 또는 시티딘 잔기이고, 3'-아지도기가 트레오 배열이며 ; ⅱ) 5-플루오로시리딘 잔기 및 3'-아지도기가 에티드로 배열이며 ; 또는 ⅲ) 5-메틸시리딘잔기 및 3'-아지도기가 트레오 또는 에리트로 배열인 상기식 (I) B의 화합물 ; (e) C가 4-클로로-2(1H)피리미디논 또는 4-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)-2(1H)피리미디논 (플루오로 또는 메틸에 의해 5-위치가 임의 치환될 수 있음)이며, 3'-아지도기가 에리트로 배열인 상기식(I) B의 화합물의 5'-o-아세테이트 에스테르 ; (f) C가 시티딘 잔기이며 3'-아지도기가 에리트로 배열인 상기식(I) B의 화합물의 5'-o-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]유도체 ; 및 (g) C가 아데닌잔기이고 3'-아지도기가 트레오 배열인 상기식(I) B의 화합물의 5'-o-트리틸유도체, 바람직한 화합물은 치료에 용이한 상기 정의된 화합물로서, 상기 제외된 화합물은 예외이다.

본 명세서에서 활성 성분으로 간주되는 상기식(I) 및 (I) A의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체는 치료를 목적으로 경구, 직장, 비강, 국소(구강 및 설하), 질 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내 및 피부내)와 같은 적합한 경로를 통해 투여된다. 바람직한 경로는 수용체의 상태 및 나이, 감염의 특성 및 선택된 활성 성분에 따라 다르다.

일반적으로 적합한 1일 투여량은 수용체의 kg 체중당 3.0 내지 120 mg, 바람직하게는 kg 체중당 6 내지 90mg, 가장 바람직하게는 kg 체중당 15 내지 60mg이다. 하룻동안에 적당한 간격을 두고서 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 횟수로 분할 투여되는 것이 바람직하다. 이러한 분할-투여는 단위 용량 형태로, 예를들면 단위 용량 형태당 10내지 1500mg(바람직하게는 20 내지 1000mg, 가장 바람직하게는 50 내지 700mg)의 활성 성분을 함유한 형태로 투여된다.

3'-아지도-3'-데옥시티미딘으로 행한 실험으로부터 활성성분의 피이크 플라스마 농도가 약 1 내지 75μM(바람직하게는 약 2 내지 50μM, 가장 바람직하게는 약 3 내지 30μM에 도달할 정도로 투여되어야 한다는 것을 알았다. 예를 들면, 식염수중의 0.1-5% 활성성분 용액의 정맥내 주사에 의해, 또는 약 1-100mg/kg의 활성 성분을 함유한 기환 형태의 경구적 투여에 의해 달성된다. 바람직한 혈액 레벨은 약 0.01내지 5.0mg/kg/시간을 제공하는 연속 주입에 의해, 혹은 약 0.4 내지 15mg/kg의 활성성분을 함유한 간헐적 주입에 의해 유지된다.

본 발명에 따른 배합물은 활성 성분의 바람직한 치료 용량 및 관련된 또 다른 제 2 치료제를 제공하도록 상술된 바의 방식에 의해 투여된다. 배합물의 투여 용량은 치료되는 상태, 활성 성분, 또 다른 제 2 치료제, 기타 임상 요소, 환자의 체중 및 상태, 배합물의 투여 경로등에 따라 죄우된다. 상술된 바와 같이, 활성 성분 및 또 다른 제 2 치료제는 동시에(예 : 단위 약학적 제제), 또는 개별적으로 분리해서(예 : 분리된 약학적 제제)투여될 수 있으며, 배합물은 국소, 직장, 경구 또는 비경구(예 : 정맥내, 피하 또는 근육내)에 의해 투여된다.

특히, 제 2 치료제가 뉴클레오시드 운반 억제제인 경우 본 발명에 따른 배합물은 관련 분야의 종래 방식에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 경구 투여에 있어서, 1 내지 200mg/kg/일, 바람직하게는 5 내지 50mg/kg/일의 활성성분의 투여가 일반적이다. 비경구 투여에 있어서, 1 내지 100mg/kg/일, 바람직하게는 2 내지 30mg/kg/일의 활성 성분의 투여가 일반적이다. 배합물에서 뉴클레오시드 운반 억제제의 함량은 상기의 활성 성분의 함량에 따라 다른데, 뉴클레오시드 운반을 효과적으로 억제할 수 있어야 하며, 일반적으로 0.1 내지 100mg/kg/일, 특히 1-20mg/kg/일이 바람직하다.

제 2 치료제가 신장 분비 억제제 또는 글로쿠론 산화 억제제이거나 신장 분비 및 글루쿠론 산화 억제제인 본 발명에 따른 배합물은 관련 분야의 종래 방법에 의해 투여된다. 그러나, 경구 투여에 있어서 1 내지 200mg/kg/일, 바람직하게는 5 내지 50mg/kg/일의 활성 성분의 투여가 일반적이다. 비경구투여 있어서, 1 내지 100mg/kg/일, 바람직하게는 2 내지 30mg/kg/일의 활성 성분의 투여가 바람직하다. 배합물에서 신장분비/글루쿠론 산화 억제제의 함량은 활성 성분의 함량에 따라 다르며, 4-100mg/kg/일, 바람직하게는 5-60mg/kg/일, 가장 바람직하게는 10~40mg/kg/일이 일반적이다.

제 2 치료제가 인터페론인 본 발명에 의한 배합물은 5 내지 250mg/kg/일의 활성 성분을 함유하는 것이 바람직한데, 인터페론의 적합한 유효 용량은 3×10⁶내지 10×10⁶IU/체표면 면적/일, 바람직하게는 4×10⁶내지 6×10⁶IU/㎡/일이다. 활성 성분 및 인터페론은 일반적으로 5mg/kg/일의 활성 성분 : 3×10⁶IU/㎡일의 인터페론 내지 250mg/kg/일의 활성 성분 : 10×10⁶IU/㎡/일의 인터페론비를 갖으며, 약 5mg/kg/일의 활성 성분 : 4×10⁶IU/㎡/일의 인터페론 내지 약 100mg/kg/일의 활성 성분 : 6×10⁶IU/㎡일의 인터페론의 비를 갖는 것이 바람직하다.

인터페론은 주사(예 : 근육내 또는 정맥내)에 의해 투여되는 것이 바람직한 반면,활성성분은 경구 또는 주사에 의해 투여되는 것이 바람직하지만 상술한 바의 어떠한 경로에 의해서도 투여될 수 있다. 인터페론 및 활성 성분은 함께 또는 개별투여되며, 각각의 1일 투여는 분할 용량으로 투여되는 것이 바람직하다.

제 2 치료제가 또다른 치료성 뉴클레오시드인 본 발명에 따른 배합물에 있어서, 활성성분의 효과적인 경구 투여 용량 범위는 2.5 내지 50mg/kg/체중/일, 바람직하게는 5내지 10mg/kg/체중/일이며, 제2의 치료성 뉴클레오시드의 적합한 효과적인 경구 투여 용량범위는 5 내지 100mg/kg/체중/일, 바람직하게는 15내지 75 mg/kg/체중/일이다. 활성성분:제 2 치료성 뉴클레오시드의 경구 투여비는 1 : 1 내지 1 : 10, 더욱 바람직하게는 1 : 2 내지 1 : 8이다.

활성 성분의 정맥내 투여 유효량은 약 1.5 내지 15 mg/kg/일이며, 제 2의 치표성 뉴클레오시드의 정맥 치료성 뉴클레오시드의 정맥내 투여비는 2 : 1 내지 1 : 20, 더욱 바람직하게는 1:2 내지 1:10이다.

활성 성분의 정맥내 투여 유효량은 약 1.5 내지 15mg/kg일이며, 제 2 의 치료성 뉴클레오시드의 정맥내 투여 유효량은 5 내지 30mg/kg/일이다. 활성 성분 : 제2의 치료성 뉴클레오시드의 정맥내 투여비는 2 : 1 내지 1 : 20, 더욱 바람직하게는 1 : 2내지 1 : 10이다.

배합물중의 두성분은 경구 또는 주사에 의해 투여되는 것이 바람직하며, 함께 또는 분리해서 투여될 수 있다. 각 성분의 1일 투여는 분할 용량으로 투여될 수 있다.

제 2 치료제가 항박테리아제인 본 발명에 따른 배합물에 있어서, 활성 성분의 적합한 투여 유효량은 2.5 내지 50mg/kg/일, 바람직하게는 5 내지 10mg/kg/일이며, 바람직하게는 5 내지 500mg/kg/일이다. 활성성분 : 항박테리아제의 바람직한 비는 20 : 1내지 1 : 500, 특히 2 : 1 내지 1 : 125이다.

3 또는 그 이상의 치료제를 함유한 배합물은 본 명세서에 상세하게 기술되지는 않았으나 이러한 배합물도 본 발명의 일부를 구성한다. 예를 들면 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)과 아시클로비르 및 프로베네시드와의 배합물은 AZT의 활성을 상승시키고 AZT의 이용가치를 증가시키는 2가지 장점을 제공한다. 마찬가지로, 상기식 (I) A의 화합물과 2 또는 그 이상의 제 2 치료제와의 배합물(예 : AZT와 설파디미딘 및 트리메토프림과의 배합물)도 또한 본 발명의 일부를 형성한다.

활성 성분을 단독으로 투여할 수 있지만, 약학적 제제로 존재하는 것이 바람직하다. 본 발명의 제제는 적어도 하나의 상술된 활성 성분, 하나 또는 그 이상의 허용 가능한 담체 및 임의의 기타 치료제를 포함한다. 허용 가능한 개개의 담체는 제제의 기타 성분과 잘 부합되어야 하며, 환자에게 해를 주어서는 안된다. 제제의 보기는 경구, 직장, 비강, 국소(예 : 구강 및 설하), 질 또는 비경구(예 : 피하, 근육내, 정맥내 및 피부내)투여에 적합한 제제등이다. 이러한 제제는 단위 용량 형태로 존재하는 것이 편리하며 약학 분야에 공지된 방법에 의해 제조된다. 이러한 공지된 방법은 하나 또는 그 이상의 보조 성분들 함유하는 담체와 활성성분을 서로 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 액체 담체 또는 마분된 고형 담체 또는 액체 및 고형 담체 둘다와 활성 성분을 균질하게 잘 혼합하고 필요에 따라 생성물을 형상화 함으로써 제조된다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 활성 성분의 소정량을 함유한 캡슐, 세쉐이 또는 정제와 같은 분리성 단위 : 분말 또는 과립 : 수용성 또는 비수용성 액체중의 용액 또는 현탁액 ; 오일-물 액체 유탁액 또는 물-오일 액체 유탁액으로서 존재한다. 활성 성분은 거환, 지약(electuary) 또는 페이스트로서 제공된다.

정제는 하나 또는 그 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형(moulding)에 의해 만들어진다. 압축된 정제는 결합제(예 : 포비돈, 젤라틴, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스),윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 팽화제(예 : 나트륨 전분 클리클레이트, 가교화 포비돈, 가교화 나트륨 카브복시메틸 셀룰로오스), 계면활성제 또는 분산제 등이 임의 혼합된 자유-유동성형태(예 : 분말 또는 과립)의 활성 성분을 적합한 기계에서 압축함으로써 만들어진다. 성형제는 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말과 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 만들어진다. 정제는 선택적으로 피복 또는 스코어되거나 바람직한 방출 프로필을 제공하는 다양한 함량의 히드록시프로필메틸 셀룰로오스등을 사용함으로써 활성 성분의 조절 즉, 서방성 정제로 제조된다.

구강내 국소 투여에 적합한 제제의 예는 슈크로오스 및 아카시아 또는 트타가 칸트와 같은 향미기재에 활성 성분을 포함한 로젠지 : 젤라틴과 글리세린 또는 슈크로오스와 아카시아등의 불활성 기재에 활성 성분을 포함한 파스틸 : 적합한 액체 담체에 활성 성분을 포함한 함수제등을 들 수 있다.

직장 투여용 제제는 코코아 버터 또는 살리실레이트와 같은 적합한 기재와 혼합된 좌약으로 제공된다.

질 투여에 적합한 제제는 당분야에 바람직하게 공지된 바와 같이 담체 및 활성 성분을 함유한 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스, 포옴 또는 스프레이 제형으로서 제공된다.

비경구 투여에 적합한 제제의 예는 수용체의 혈액과 등장성이 되도록 제제에 등장성을 부여하는 산화-방지제, 완충용액, 세균 억제제 및 용질을 함유하는 수용성 및 비수용성의 등장성 무균 주사 용액 ; 현탁제 및 농후제를 함유한 수용성 및 비수용성 무균 현탁액등을 들 수 있다. 이러한 제제는 단위-용량형 또는 다-용량형 밀폐용기(예. 앰플 및 바이알)에 존재하며, 사용 직전에 주사용물과 같은 무균 액체 담체만을 필요로 하는 동결-건조 상태로 보관된다. 즉시 주사용 용액 및 현탁액은 전술된 바의 무균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다.

바람직한 단위 용량형 제제는 상술된 바와 같이 활성 성분의 1일 투여량 또는 단위 용량, 1일 분할 투여량 또는 활성 성분의 적합한 분량을 함유한 형태이다.

본 발명에 따른 화합물은 수의학용 제제 형태로 사용되기도 하는데 이러한 제제는 관련 분야의 종래 방법에 따라 제조된다. 수의학용 제제의 보기는 하기와 같다.

(a) 경구투여- 음악(예 : 수용성 또는 비-수용성 용액 또는 현탁액 : 정제 또는 거환: 사료와 혼합된 과립, 분말 또는 펠릿 : 혀에 사용되는 페이스트 ; (b) 비경구 투여-무균용액 또는 현탁액과 같은 피하, 근육내 또는 정맥내 주사용액 ; 또는 현탁액 또는 용액이 유두를 통해 유방속으로 주입되는 유선내 주사용액(적합 하다면) ; (c) 국소 투여-피부에 사용되는 스프레이(분무), 연고 또는 크림 ; 또는 (d) 질내 투여-페사리, 크림 또는 포옴.

상술된 바와 상기 제제들은 본 발명에 따라 단위용량형 제제 또는 분할 제제의 배합물 형태로 존재할 수 있으며, 유사한 방법에 의해 제조된다.

상기 언급된 성분 이외에, 본발명의 제제는 대상되는 제제종류에 따라 그 분야에서 공지된 종래의 시약을 함유할 수 있다. 예를들면 경구 투여에 적합한 제제에는 감미제, 농후제 및 향미제등이 포함될 수 있다.

상기식(I) A의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체는 통상적인 방법(본 명세서에 참고로 기술함) 또는 본 명세서에 기술된 것과 유사한 방법을 사용하여 제조 가능하다[참고 : Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry(1, 321(1986), T. A. Krenitsky et al.,) J.Med.Chem. (26, 981(1983)) ; Nucleic Acid Chemistry, Improved and New Synthetic Processes, Methods and Techniqurs (Parts 1 and 2, Ed. L. D Townsend, R. S. Tipson, (J. Wiley)1978) ; J. R. Horwitz et al. (J. Org. Chem.29, (July 1964) 2076-78) ; M.Imazawa et al. (J.Org.Chem, 43(15)(1978) 3044-3048) ; K. A Watanabe et al. (J.Org.Chem., 45, 3274(1980)); and R.P.Glinski et al.(J.Chem., Soc., Chem.Commun., 915(1970))].

또한 본 발명은 상기식(I)의 화합물 및 이것의 약학적 허용 유도체의 제조 방법에 관한 것으로 , 그 방법은 (A) 하기식 (Ⅲ)의 화합물 또는 그 유도체(예 : 에스테르 또는 염)를 상기 화합물의 전구기를 원하는 기로 전환시킬 수 있는 시약과, 또는 그러한 조건하에서 반응시키거나

(상기식에서, A는 상기 정의된 바와 같으며, M은 3'-아지기도의 전구기임) ; (B)하기식(IVa)화합물 또는 하기식(IVb)의 화합물을 상기 화합물의 전구기를 원하는 기로 전환시킬 수 있는 시약과, 또는 그러한 조건하에서 반응시키거나 ;

(상기식에서, R_a ¹, R_a ², R_a ³, R_a ⁴, R_a ⁶및 R_a ⁷은 각각 R¹, R², R³, R⁴, R⁶및 R⁷기 또는 그들의 전구기를 나타내는데, 단, 상기식(IVa)에서 R_a ¹, R_a ², R_a ³및 R_a ⁴중 적어도 하나, 또는 상기식(IVb)에서 R_a ⁶및 R_a ⁷중 적어도 하나는 그 전구기를 나타냄) ; (C) 하기식 (Va) 또는 (Vb)의 화합물을 상기식(Ⅳa)의 화합물의 1-위치 또는 상기식(IVb)의 9-위치에 바라는 바의 리보푸라노실링을 도입할 수 있는 화합물과 반응시키거나

(상기식에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁶및 R⁷은 상기식에서 정의된 바와 같음) ; (D) 상기식(Ⅱ)의 화합물을 제조하기 위해, 상기식(Vb)의 푸린을 하기식(Ⅵ)이 피리미딘환과 반응시키고

(상기식에서 Py는 1-피리미디닐기를 나타냄) ; 그후, 또는 동시에 ⅰ) 상기식(Ⅰ)의 화합물이 형성되었을때 그 화합물을 약학적 허용유도체로 전환시키고 ; ⅱ) 상기식(I)의 화합물의 약학적 허용유도체가 형성된 경우 그 유도체를 상기식(I)의 화합물로, 또는 상기식(Ⅰ)의 화합물의 또 다른 약학적 허용 유도체로 전환시키는 단계로 구성된다.

본 발명의 상기 방법에 있어서, 방법(A)-(D)의 전구 화합물의 선택은 제조되는 화합물에 따라 크게 달라지며, 상기 시약 및 조건은 뉴클레오시드 합성 화학 분야의 공지된 방법으로 부터 선택된다.

상기 전환 방법의 예들은 이후 참고로 기술될 것이며, 이러한 전환 방법들은 바라는 화합물에 따라 변형이 가능하다. 예를 들면, 전환시 불안전한 거의 원치 않는 반응이 일어나는 경우 그러한 기를 종래 방법에 따라 보호한 후 전환이 완결된 다음 보호기를 제거한다.

즉, 예를 들면 방법(A)에 있어서, 상기식(Ⅲa)또는 (Ⅲb)의 화합물에 있어서 M은 할로겐(예 : 염소), 히드록시 또는 오르가노설포닐옥시(예 : 트리플루오로메틸설포닐옥시, 메탄설포닐옥시 또는 p-톨루엔설포닐옥시)라디칼이다.

3'-아지도기가 트레오 배열인 상기식(1)의 화합물의 제조를 위해 M이 에리트로 배열을 갖는 히드록시기인 상기식(Ⅲa) 또는 (Ⅲb)의 화합물(5'-히드록시기는 트리틸기와 같은 기에 의해 보호되는 것이 바람직함)은 트리페닐포스핀, 카본테트라브로마이드(사브롬화 탄소)및 리튬 아지드로 처리된다. 또한 M은 리튬 또는 나트륨 아지드 등에 의한 처리에 의해 트레오 배열의 아지도기로 전환될 수 있는 에리트로 배열이 오르가노설포닐옥시이탈기를 나타내는데, 5'-히드록시기는 상기와 유사한 방법에 의해 보호된다. 5'-트리틸 보호기는 완만한 산성 조건하에서, 또는 브롬화 아연의 처리에 의해 제거될 수 있다.

3'-이지드기가 에리트로 배열을 이루는 상기식(I)의 화합물의 제조를 위하여, M기가 트레오 배열의 할로겐(예 : 클로로)기인 상기식(Ⅲa)또는 (Ⅲb)의 화합물(5'히드록시는 트리틸기등에 의해 보호되는 것이 바람직하다)은 리튬 또는 나트륨 아지드등에 의해 처리된다. 3'-트레오-할로겐(예 : 염소) 출발물질은 대응하는 3'-에리트로-히드록시 화합물을 트리페닐포스핀 및 사염화 탄소와 반응시키거나, 혹은 오르가노 설포닐 할라이드(예 : 트리플루오로메탄설포닐 클로라이드)로 처리하여 대응하는 3'-에리트로 -오르가노설포닐옥시 화합물을 형성한 후 상술된 방법에 의해 할로겐화 함으로써 제조된다. 또한 상기식(Ⅲa) 또는 (Ⅲb)의 3'-트레오-히드록시 또는 오르가노설포닐옥시 화합물은 트리페닐포스핀, 카본 테트라브로마이드 또는 리튬 아지드등의 처리에 의해 대응하는 3'-에리트로 아직도 화합물을 형성한다.

상기 방법(B)에 있어서, 상기식(IVa)의 화합물에서 전구기를 바라는 바의 R¹, R², R³및 R⁴기를 전환시키는 여러가지 방법은 다음과 같다.

(a) R¹이 알콕시(예 : 메톡시 또는 에톡시)기일때, 상기 화합물은 R_a ¹이 2,5-o-안하이드로결합인 상기식(IVa)의 대응하는 화합물을 탄산 칼륨의 존재하에서 적합한 친핵체(예 : 알콕사이드)로 처리함으로써 제조되며 ; (b) R¹이 메르캅토기일때, 상기 화합물은 R_a ¹이 알콕시(예 : 에톡시)기인 상기식(IVa)의 대응하는 화합물을 하이드로겐설파이드로 처리함으로써 제조되며 ; (c) R²가 알킬기일때, 상기 화합물은 R_a ²가 수소원자인 상기식(Ⅳa)의 대응하는 화합물을 알킬화제(예 : N,N-디메틸 포름아미드 디메틸아세탈)로 처리함으로써 제조되며 ; (d) R³가 메르캅토기 일때 상기 화합물 R_a ³가 적절한 이탈기(예 : 1,2,4-트리아졸일)인 상기식(IVa)의 대응하는 화합물을 알칼리 금속(예 : 나트륨)메트캅탄으로 처리함으로써 제조되며 ; (e) R³가 아미노기일때, 상기 화합물은 R_a ³가 히드록시기인 상기식(IVa)의 대응하는 화합물을 봄(bomb)에서 아민화제(예 : 헥사메틸 디실라잔 및 암모늄 설페이트)로 처리함으로써 제조되며 ; (f) R⁴가 할로(예 :클로로)라디칼일때, 상기 화합물은 R_a ⁴가 수소원자인 상기식(IVa)의 대응하는 화합물을 할로겐화제(예 : m- 클로로벤조산)로 처리함으로써 제조된다.

상기식(IVb)의 화합물에서 전구기를 바라는 바의 R⁶및 R⁷기로 전환하기 위해 상기와 유사한 방법 및 상기 언급된 바의 참조 문헌에 기술된 방법이 이용되고 있다.

상기 방법(C)에 있어서, 그 방법은 상기식(Va) 또는 (Vb)피리미딘 또는 푸린, 또는 그 염, 또는 그것의 보호된 유도체를 하기 화합물로 처리한후 보호기를 제거하는 것이다.

(상기식에서, Y는 이탈기 즉, 아세톡시 또는 벤조일옥시 또는 할로(예 : 클로로)기이며, 5'히드록실기는 p-톨루엔 설포닐옥시기에 의해 선택적으로 보호된다)

상기 방법(D)에 있어서, 상기식(Vb)의 화합물과 상기식(Vz)의 화합물과의 반응은 포스포틸화 효소의 존재하에서 용이하게 실시되며, 필요에 따라 통상적인 방법으로 3'-이지도 아노머들을 분리할 수 있다

상기식(I)의 화합물이 형성되었을때, 그 화합물은 상기식(I)의 화합물과 포스포릴화제(예 : POCl₃) 또는 적합한 에스테르화제(예 : 산 할라이드 또는 무수물)과의 각각의 반응에 의해 약학적으로 허용 가능한 포스페이트 또는 기타 에스테르로 전환될 수 있다.

상기식(I)의 화합물(이것의 에스테르 포함)은 적당한 염기로 처리하는 등의 통상적인 방법으로 약학적 허용염으로 전환될 수 있다.

상기식(I)의 화합물의 유도체가 형성되었을때, 그 화합물은 가수분해등의 방법에 의해 그 모(母) 화합물로 전환될 수 있다.

하기 실시예는 단지 본 발명을 설명하고자 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 실시예에서 "활성성분"이란 상기식(I)또는 (IA)화합물 또는 이것의 약학적 허용유도체를 의미하는 것이다.

[실시예 1]

[정제용 제제]

하기 제제 A 및 B는 포비돈 용액으로 성분들을 습윤 과립화한 후 마그네슘 스테아레이트를 첨가하고 압축함으로써 제조된다.

[제제 A]

[제제 B]

[제제 C]

하기 제제 D 및 E는 혼합된 성분을 직접 압축함으로써 제조된다. 제제 E에 사용된 락토오스는 직접적으로 압축된 형태(Dairy Crest-"Zeparox")이다.

[제제 D]

[제제 E]

[제제 F(서방성 제제)]

본 제제는 포비돈 용액으로 하기 성분들을 습윤 과립화한 후 마그네슘 스테아데이트를 첨가하고, 압축함으로써 제조된다.

[실시예 2]

[캡슐용 제제]

[제제 A]

캡슐용 제제는 상기 실시예 1의 제제 D의 성분들을 혼합한 후 2-부분의 경질 젤라틴 캡슐에 충진함으로써 제조된다. 제제 B도 이와 유사한 방법에 의해 제조된다.

[제제 B]

[제제 C]

상기 캡슐들은 마크로골 4000BP를 용융시키고, 그 용융물에 활성 성분을 분산시킨 후 그 용융물을 2-부분 경질 젤라틴 캡슐에 충진함으로써 제조된다.

[제제 D]

상기 캡슐들은 레시틴 및 아라키스 오일에서 활성 성분을 분산시키고 그 분산액을 연성의 탄성 젤라틴 캡슐에 충진함으로써 제조된다.

[제재 E(서방성 캡슐)]

하기 서방성 캡슐용 제제는 압출기를 사용하여 성분 a, b 및 c를 압출시키고 그 압출물을 구형화하여 건조시킴으로써 제조된다. 건조된 펠릿을 서방성 멤브레인(d)로 피복하고, 2-부분의 경질 젤라틴 캡슐에 충진시킨다.

[실시예 3]

[주사용 제제]

[제제 A]

활성성분을 대부분의 물(35℃-40℃)에 용해하고 pH를 염산 또는 수산화 나트륨으로 적절하게 4.0 내지 7.0으로 조절한다. 다음, 배치를 물로 그 예정된 부피까지 채운 후 무균의 미세 가공필터로 여과하여 무균의 10ml의 호박색 유리 바이알(제 1 형)에 채우고 무균의 덮개로 봉한다.

[제제 B]

[실시예 4]

[근육내 주사 용액]

활성 성분을 글리코푸롤에 용해시킨다. 벤질 알콜을 첨가한 후 용해시키고 물을 첨가하여 총량이 30ml가 되게 한다. 혼합물을 무균의 미소 기공필터로 여과시킨후 3ml 호박색 유리 바이알(제 1 형)에 넣고 봉한다.

[실시예 5]

[시럽]

[제제 A]

활성 성분을 글리세롤과 다량의 정제수 혼합물에 용해시킨다. 나트륨 벤조 에이트의 수용액을 상기 용액에 첨가한 후 소르비톨 용액과 향미제를 계속해서 첨가한다. 정제수로 일정부피까지 채우고 잘 혼합한다. 활성 성분이 잘 용해되지 않을때는 하기 제제(B)를 이용한다.

[제제 B]

소르비톨, 글리세롤 및 소량의 정제수를 혼합한다. 정제수에 나트륨 벤조에이트를 용해시키고, 그 용액을 상기 혼합물에 첨가한다. 분산성 셀룰로오스 및 향미제를 첨가하고 분산시킨다. 활성성분을 첨가하고 분산시킨다. 정제수로 일정 부피까지 채운다.

[실시예 6]

[좌약]

* 활성성분은 적어도 90%의 입자가 63㎛ 직경 이하인 분말로서 사용된다.

1/5의 Witepsol H15를 최대 45℃에서 스팀-자켓된 팬에 용해한다. 활성 성분을 200㎛시브를 통해서 시프트한 후 부드러운 분산액이 형성될때까지 절삭 헤드가 장착된 실버존(silverson)을 사용하여 혼합하면서 용융된 기재에 첨가한다. 혼합물을 45℃로 유지한 후 나머지의 Witepsol H15를 현탁액에 첨가하고 균일한 혼합이 이루어지도록 교반한다. 현탁액 전체를 250㎛ 스테인레스 강 스크린을 통해 통과시키고 계속 교반하면서 40℃로 냉각시킨다. 38℃ 내지 40℃의 온도에서 2.02g의 혼합물을 적절한 20ml의 플라스틱 주형기에 충진한다. 좌약을 실온으로 냉각한다.

[실시예 7]

[페사리]

상기 성분들을 직접 혼합한 후 수득한 혼합물을 직접 압축함으로써 페사리는 제조된다.

하기 실시예 8-10은 상기식(I)A의 화합물(활성 성분) 및 전술된 바의 치료성 뉴클레오시드를 함유한 제제의 제조에 관한 것이다.

[실시예 8]

[주사용액]

[제제 A]

[제제 B]

상기 제제에 있어서, 치료성 뉴클레오시드를 1M의 NaOH 용액에 첨가한 후 용해될때까지 교반시킨다. 활성 성분을 첨가하고 용해시킨다. 무균수를 첨가하여 10ml가 되게 한다. 무균의 필터로 여과한 후 무균의 바이알에 충진시킨다. 동결 건조시킨다.

[실시예 9]

[정제]

[제제 A]

[제제 B]

상기 제제 A 및 B에 있어서, 치료성 뉴클레오시드 및 활성 성분을 나트륨 전분 글리콜레이트와 혼합한 후 포비돈 용액으로 과립화 한다. 건조후, 과립을 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 압축시킨다.

[실시예 10]

[캡슐]

[제제 A]

활성성분을 혼합하고 경질 젤라틴 캡슐에 충진한다.

[제제 B]

성분들을 혼합하고 경질 젤라틴 캡슐에 충진한다.

하기 실시예 11은 상기식(I)A 화합물(활성 성분) 및 인터페론을 함유한 제제에 관한 것이다.

[실시예 11]

[주사용액]

무균수에 활성 성분 및 인터페론을 용해시킨다. 무균 필터로 여과한 후 무균 바이알에 충진한다.

하기 실시예 12-15는 상기식 I (A)의 화합물(활성 성분 ; 예 ; 3'-아지도-3'-데옥시티미딘)및 이와 배합된 뉴클레오시드 운반 억제제(예 : 디피리다몰)를 함유한 제제의 제조에 관한 것이다

[실시예 12]

[정제]

활성 화합물을 락토오스 및 잔여분과 혼합한 후 폴리비닐피롤리디논의 용액으로 습윤 과립화 한다. 과립을 건조하고 시프트한 후 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 정제 형태로 압축한다.

[실시예 13]

[캡슐]

활성 화합물을 락토오스 및 나트륨 전분 글리콜리에트와 혼합한 후 폴리비닐 피롤리디논의 용액으로 과립화한다. 과립을 건조하고 시프트한 후 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 경질 젤라틴 캡슐에 충진한다.

[실시예 14]

[크림]

활성 성분을 정제수 및 글리세롤의 혼합물에 용해한 후 70℃로 가열한다. 나머지 성분을 함께 70℃에서 가열한다. 상기 두 용액을 함께 혼합하여 유탁시킨다. 혼합물을 냉각하고 용기에 충진한다.

[실시예 15]

[정맥내 주사 용액]

글리세롤을 약간의 주사용 물에 첨가한다. 두 활성 화합물을 수산화 나트륨 용액에 첨가하여 용액의 pH를 7.0-7.5로 조절한다. 용액에 나머지의 주사용 물을 일정 부피까지 첨가한다. 무균 조건하에서, 용액을 여과에 의해 무균화하고 멸균의 앰플에 충진한 후 그 앰플을 봉한다.

활성 화합물 및 만니톨을 일부분의 주사용 물에 용해한다. 수산화나트륨 용액으로 pH를 8.0~9.0으로 조절한후 나머지의 주사용 물을 일정 부피까지 채운다. 무균 조건하에서 용액을 여과에 의해 무균화하고 무균의 바이알에 충진한 후 동결-건조에 의해 물을 제거한다. 바이알을 질소대기하에서 봉한 후 무균마개 및 금속 칼라로 밀폐시킨다.

하기 실시예 16-18은 상기식 I (A)의 화합물(활성 성분 ; 예를 들면 3'-아지도-3'-데옥시티미딘) 및 이와 배합된 글루쿠론 산화/신장 분비 억제제(예 : 프로베네시드)를 함유하는 제제의 제조에 관한 것이다.

[실시예 16]

[정제]

활성 화합물을 락토오스 및 전분과 혼합한 후 폴리비닐피롤리디논의 용액으로 습윤 과립화 한다. 과립을 건조 및 시프트하고 마그네슘 스테아레이트와 혼합한 후 정제형으로 압축한다.

[실시예 17]

[캡슐]

활성 화합물을 락토오스 및 나트륨 전분 글리콜레이트와 혼합한 후 폴리비닐 피롤리디논 용액으로 습윤과립화 한다. 과립을 건조 및 시프트하고 마그네슘 스테아레이트와 혼합한 후 경질 젤라틴 켑슐에 충진한다.

[실시예 18]

[정맥내 주사 용액]

글리세롤을 약간의 주사용 물에 첨가한다. 두 활성 화합물을 첨가하고 수산화 나트륨 용액으로 pH를 7.0-7.5로 조절한다. 용액에 주사용 물을 첨가하여 일정 부피까지 채운다, 무균 조건하에서, 용액을 여과에 의해 무균화한 후 무균 앰플에 충진하고 그 앰플을 봉한다.

활성 화합물 및 만니톨을 소량의 주사용 물에 용해한다. 수산화나트륨 용액으로 pH를 8.0-9.0-으로 조절한 후 주사용 물로 일정 부피까지 채운다. 무균 조건하에서, 용액을 여과에 의해 무균화한 한후 무균의 바이알에 충진하고 동결 건조시켜 물을 제거한다. 바이알을 질소 대기하에서 봉하고, 무균 덮개 및 금속 칼라로 밀폐한다.

[수의학용 제제(실시예 19-22)]

[실시예 19]

[작은 동물에 사용하기 위한 정제]

활성 성분, 미세 결정질 셀룰로오스 및 옥수수 전분을 혼합한다. 충분한 전분 용액을 계속 혼합하면서 첨가하여 습윤제로 만든 후 시브를 통과시켜 과립을 체크한다. 마그네숨 스테아레이트를 시브한다. 과립을 직접적으로 압축하여 정제를 만든다.

[실시예 20]

[사료내 의약용 그래뉼]

활성성분을 락토오스와 혼합한다. 그 혼합물에 용해된 포비돈을 함유한 수용성 알콜을 첨가한다. 충분량의 수용성 알콜을 첨가하여 습윤제를 제조한 후 시브를 통과시켜 과립을 제조하고 건조시킨다.

[실시예 21]

[경구 페이스트]

폴리소르베이트 80 및 메틸 히드록시 벤조에이트를 물에 용해한다. 크산탄검을 첨가하고 분산시킨 후 팽윤시킨다. 활성 성분을 첨가하고 분산시켜 일정 부피까지 희석한다.

[실시예 22]

[연고]

화이트 연성 파라핀을 60℃에서 용해한다. 활성 성분을 첨가하고 분산시킨후 냉각시키고 접는식 금속 튜브에 충진한다.

[실시예 23]

3-아지도-3',5'-디데옥시-5'-[( N,N-디메틸티오 카르바모일)티오]티미딘

(a) 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(3.0g, 11.2mMol)의 5'-히드록실기를 무수 피리딘(20ml)에 용해된 3'-아지도-데옥시티미딘 용액에 메탄설포닐 클로라이드(2.7ml)를 첨가함으로써 메실화 한다. 5℃에서 1시간 동안 반응을 진행시킨 후 얼음물에 붓는다. 침전물을 여과하여 회수한다. 상기 단계에서 산출된 3'-아지도-3'-데옥시-5'-메실티미딘과 DMF(75ml)중의 탄산 칼륨(0.78g, 5.6mMol)과 반응시켜 원하는 생성물을 얻는다. 6시간 동안 80℃의 오일 배스에서 반응물을 가열한 후 얼음물에 붓는다. 생성물을 물과 에틸 아세테이트로 추출한다. 용매를 진공하에서 제거하고 수득한 오일을 CHCl₃: MeOH(9 : 1v/v)의 용출에 의해 실리카 겔상에서 플래쉬 크로마토그래피화한다. 생성물의 수율은 낮다(융점=184-186℃).

(b) MeOH에 용해된 3.58ml의 1 N 테트라부틸 암모늄 히드록사이드 및 디메틸디티오카르밤 산 디하이드레이트(0.64g, 3.58mMol)의 나트륨 염을 25ml의 DMF에 첨가한다. 용액을 비등시켜 물 및 MeOH를 제거한다. 냉각후, 15㎖의 DMF에 용해된 2,5'-O-안하이드로-3'-데옥시티미딘(0.85g, 3.4 mMol)을 첨가한다. 반응물을 55℃의 오일 배스에서 하룻밤 동안 가열한다. 반응물을 얼음물에 부은 후, 침전물을 여과에 의해 제거한다. 에틸 아세테이트로 여액을 추출하여 생성물을 수득한다. 에틸 아세테이트를 진공하에서 제거한 수 수득한 오일을 CHCl₃: MeOH(95 : 5v/v)로의 용출에 의해 실리카 겔상에서 플래쉬 크로마토그래피화하여 정제한다. 크로마토그래피를 실리카 겔상에서 다시 반복한다. 두번째의 용출액은 CHCl₃: MeOH(98 : 2v/v)이다. 최종 정제는 물 : 메탄올(3 : 7)로의 용출에 의해 C₁₈상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 실시된다. 수율은 2.5%이다.

[실시예 24]

3'-아지도-3'-데옥시-5'-O-아세틸 -4

3'-아지도-3'-데옥시-5'-O-아세틸-4-(1,2,4-트리아졸)티미딘 (Lin 등의 J.Med.Chem.26, 1691(1983) (1.41g : 3.9mMol)을 100ml 아세톤 및 30ml 의 H₂O에 용해한 후, 0.39g의 NaSH·xH₂O(Sung, J.Chem. Soc. Chem. Comm 522, (1982))로 처리한다. 혼합물을 30분동안 교반한 후, 부피를 반으로 감소시키고 200ml의 CHCl₃로 추출한다. CHCl₃를 100ml 물로 세척한 후 황산 나트륨으로 탈수시킨다. 용매를 진공하에서 건조시키고 수득한 오일을 실리카 겔 패드(6.5×3㎝)상에 놓은 후 750ml의 CHCl₃로 용출시킨다. 용매를 진공하에서 제거하여 황색 오일을 얻은 후, i-PrOH로 재결정화하여 0.64g(1.9mMol : 48.7%)의 생성물을 얻는다(융점 : 75-78℃).

[실시예 25]

3'-아지도-3'-데옥시-4-티오티미딘

3'-아지도-3'-데옥시-5'-O-아세틸-4-티오티미딘(0.25g : 0.76mMol, 실시예 21)을 35ml의 디옥산 및 5ml의 진한 NH₄OH의 혼합물에 용해하고 18시간동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 제거하고 잔사를 실리카겔 칼럼상에 위치시킨 후 CHCl₃/EtOAc(3 : 1v/v)로 용출시킨다. 적합한 분획물들을 모아서 용매를 진공하에서 제거하여 황색 오일을 얻고 Et₂O에 용해시켜 결정체를 얻는다(0.16g, 0.56mMol : 74%)(융점=116-118℃).

[실시예 26]

3- N-메틸-3'-아지도-3'-데옥시티미딘

3'-아지도-3'-데옥시티미딘(0.5g : 1.9mMol) 및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세탈(Zemlicka,Coll.Czech.Chem.Comm.35, 3572(1972)(0.9ml ;7.5mMol)을 48시간동안 20ml의 CHCl₃에서 환류시킨다. 용매를 진공에서 제거하고 물질을 실리카 칼럼상에 위치시킨다. EtOAc/CHCl₃(1 : 1v/v)로 용출시키면 점성질 오일로서 순수한 물질이 산출된다(0.26g, 0.9mMol, 47%).

[실시예 27]

3'-아지도-3'-데옥시-2-티오티미딘

3'-아지도-2-티오티미딘의 합성은 2,3'-O-안하이드로-5'-트리틸티미딘(J.J. Fox, J.Org.Chem, 28, 936, (1963))을 출발물질로 5단계의 연속반응에 의해 실시된다.

2,3'-O-안하이드로-5'-트리틸티미딘(10.5g, 22.4mMol을 무수 에탄올(1.21)중의 나트륨(0.52g, 22.4mMol)의 용액에 첨가하고 반응을 6시간동안 환류시킨다. 반응을 냉각시키고 1N의 HCl로 중화시킨다. 용매를 진공에서 제거하고, 수득한 오일을 CHCl₃: MeOH(96 : 4v/v)의 용출에 의한 실리카겔상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 수율이 30%인 1-(2'-데옥시-5'-트리틸-D-릭소푸라노실)-2-에톡시티미딘이 산출된다. 2-에톡시티미딘 유도체(3.5g, 16.8mMol)을 2.2ml의 트리에틸아민을 함유한 35ml의 DMF에 용해한다. 냉각 용액을 H₂S로 포화시킨다. 반응물을 스틸 봄에 위치시킨 후 95℃로 가열한다. 27시간후, TLC에 의해 출발물질의 잔존여부를 확인한다. 반응을 수시간동안 N₂로 세정하고 얼음물에 붓는다. 생성물을 여과에 의해 모아서 CHCl₃: MeOH(97 : 3v/v)로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 1-(2'-데옥시-5'-트리틸-β-D-리소푸라노실)-2-티오티미딘이 산출된다(수율 : 37%). 277nm의 pH 1 및 241nm의 pH 11의 UVmax에 의해 2-티오티미딘이 형성되었음을 알 수 있다.

티오티미딘 유도체의 3'-히드록실기는 하기와 같이 메실화한다 : 즉, 메탄설포닐 클로라이드(665ml, 3.5당량)를 5℃의 무수피리딘(15ml)에 용해된 1-(2'-데옥시-5'-트리틸-β-D-릭소푸라노실)-2-티오티미딘(1.25g)용액에 6시간동안 4번에 나누어 첨가한다. 반응을 5℃에서 하룻밤동안 유지시킨다. 반응물을 얼음물에 부은 후 생성물을 여과에 의해 모은다. 에틸아세테이트 : 헥산(1 : 1v/v)로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 수율은 50%이다.

리튬 아지드(0.3g, 6mMol)을 20ml의 무수 DMF에 용해하고 1-(2'-데옥시-3'-메실-5'-트리틸-β-D-릭소푸라노실)-2-티오티미딘(0.72g, 1.2mMol)을 첨가한다.

DMF 용액을 85℃에서 2.5시간동안 가열한다. 반응물을 얼음물에 붓고 생성물을 여과에 의해 회수한다. CHCl₃: MeOH(98 : 2v/v)로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 수율은 78%이다. 2100CM^-1의 IR밴드에 의해 알킬 아지드가 존재함을 확인할 수 있다. 또한 UV에 의해 2-티오티미딘이 존재함을 확인할 수 있다.

스팀 배스의 80%의 아세트산 (5ml)중에서 3'-아지도-3'-데옥시-2-티오-5'-트리틸티미딘(0.1g) 의 5'-히드록실기를 45분동안 탈블록킹함으로써 최종 생성물을 제조한다. CHCl₃: MeOH(96 : 4v/v)로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 크로마토그래피에 의해 3'-아지도-3'-데옥시-2-티오티미딘(0.021g)이 산출된다(수율=37%).

[실시예 28]

3'-아지도-3'-데옥시-2-에톡시티미딘

3'-아지도-3'-데옥시-2-에톡시티미딘은, 무수 에탄올(25ml)에 용해된 3'-아지도-3'-데옥시-5'-메실티미딘(2.6g, 7.5mMol)을 2당량의 탄산칼륨 (1.08g, 7.5mMol)과 함께 5시간동안 환류함으로써 제조된다. 환류후, 상기 용액을 중화시키고 진공하에서 오일을 취한다. 에틸 아세테이트 : 메탄올로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 상기 오일을 정제한다. 원하는 생성물을 유리시킨다(수율 : 39% ; 융점 98-100℃).

[실시예 29]

3'-아지도-3'-데옥시-2-메톡시티미딘

3'-아지도-3'-데옥시-2-메톡시티미딘을 상기 실시예 25의 방법에 따라 3'-아지도-3'-데옥시-5'-메실티미딘(1.6g, 4.6mMol)로부터 제조한다.

[실시예 30]

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-메틸이소시티딘

2,5'-O-안하이드로-3'-아지도-3'-데옥시티미딘(0.35g ; 1.4mMol)을 암모니아로 미리 포화된 15ml의 MeOH에 용해시키고, 48시간동안 77℃의 오일 배스 봄에 위치시킨다. Skaric 및 Matulic- Academic, Helr.Chim. Acta.63, 2179(1980)). TLC(6 : 1v/v의 CHCl₃/MeOH)에 의해 반응이 완결 여부를 확인한다. 용매를 진공하에서 제거한 후, 수득한 오일을 실리카겔 칼럼상에 놓은 후 CHCl/MeOH(6 : 1v/v)로 용출시킨다. 적합한 분획물을 모아서 3.14g(0.53mMol ; 38%)상기 표제 화합물을 얻는다(융점=107-108℃).

[실시예 31]

3'-아지도-5-클로로-2',3'-디데옥시우리딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘(0.25g ; 1mMol)을 2ml의 무수 디메틸 아세트아미드(DMAC)에 용해하고 0℃로 냉각시킨후 DMAC에 용해된 2ml의 0.5M HCl을 첨가한다. m-클로로퍼벤조산(0.277g : 1.6mMol)을 10분동안 2회에 걸쳐 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에 방치한다. 32시간후, 4ml의 H₂O를 첨가하고 용액을 여과한다. 수용성의 DMAC 용액을 Et₂O(3×3ml)로 수출하고 Et₂O를 진공하에서 증발시켜 실리카겔 칼럼에 부착된 오일을 얻는다. CHCl₃/MeOH(15 : 1v/v)로 용출하고 적합한 분획물을 모아서 진공하에서 용출시켜 오일을 얻은 후 Et₂O로 결정화하여 585mg(0.2mMol, 20%)의 생성물을 얻는다(융점=169-170℃).

UV(nm) : pH 1

max=276(ε=7400), λmin=239(ε=500) ;

pH 13

max=274(ε=6400), λmin=249(ε=3800)

H¹NMR(DMSO-d)δ8.29(s, 1H,H6), 6.04(t, 1H, H1', J=5.5Hz), 5.49-5.29(m, 1H, 5'-OH), 4.44-4.20(m, 1H, H3'), 3.88-3.71(m, 1H,H4'), 3.71-3.53(m, 2H, H5'), 2.63-2.31(m, 2H, H2').

원소분석:C₉H₁₀N₅O₄Cl

이론치 : C ; 37.58, H ; 3.50, N ; 24.35 Cl ; 12.32

실측치 : C ; 37.67, H ; 3.54, N ; 24.39 Cl ; 12.40

[실시예 32]

3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘

3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘은 공지된 3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘(T.A.Krenitsky. 등의 J.Med.Chem.,26,891, (1983))로부터 제조되는데, 먼저 5'-히드록실기를 아세트산 무수물(15ml)로 아세틸화한 후 아세트산(0.5ml) 및 브롬(0.566g)을 첨가하여 5-위치를 브롬화한다. 반응물을 진공하에서 오일로 만든 후 에틸에테르로 연화한다. 오일을 메탄올 암모니아에 용해한후 에틸기를 제거한다. 목적하는 바 생성물을 CHCl₃: MeOH(95 : 5v/v)로의 용출에 의한 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 분리한다. 수율은 32%이다(융점=148-149℃).

[실시예 33]

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-아이오도우리딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-아이오도우리딘은 2',3'-디데옥시-5-아이오도우리딘(10g, 28mmol)로부터 문헌(T.A.Krenitsky등의 J.Med.Chem., 26, 891(1983))에 명시된 4단계의 반응에 의해 제조된다(융점=126-130℃).

[실시예 34]

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-트리플루오로메틸우리딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-트리플루오로메틸우리딘은 하기 4단계의 연속 반응에 의해 제조된다 : 디클로로메탄(1.4ml), 피리딘(70ml) 및 3Å 분자 시브(55g)의 현탁액중의 개시 물질에 트리페닐메틸 클로라이드(5.65g, 20.3mMol)를 첨가함으로써 2',3'-디데옥시-5-트리플루오로메틸우리딘(5.0g, 16.9mMol)의 5'-히드록실기를 트리틸화한다. 4시간동안 실온에서 반응물을 교반시킨다. 진공에서 여과 및 증발후, 오일 생성물을 CH₂Cl₂: MeOH(95 : 5v/v)의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피화한다. 생성물을 포함하는 분획물을 모아서 용매를 진공에서 제거한다. 수득한 오일을 물로 저작하여 형성된 고체를 여과에 의해 회수한다. 3'-히드록실을 트리페닐포스핀(3.27g)을 함유한 디메틸아세트아미드(30ml)에 5'-보호된 우리딘 (3.0g)을 용해하고 사염화탄소(51ml)를 첨가함으로써 염소화한다. 반응을 하룻밤 동안 실온에서 교반시킨다. 1ml의 에탄올을 첨가한다. 반응결과 얻은 오일을 CH₂Cl₂; EtOAc(9 : 1v/v)로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피한다. 바라는 바의 생성물을 오일로서 회수한다. 상기 오일형태의 1-(3'-클로로-2'-데옥시-5'-트리틸-트레오-β-D-리보푸라노실)-5-트리플루오로메틸우라실을 V.Kohli등의 방법(Tetrahedron Letters, 21, P 2683,1980)에 의해 니트로메탄(80ml)에 용해시키고 니트로메탄(80ml)에 용해된 브롬화 아연(4.45g)을 첨가함으로써 탈블록화한다. 반응을 실온에서 하룻밤 동안 교반시킨다. 다시 브롬화아연(3.0g)을 그 다음날에 첨가하고 반응을 하룻밤 동안 방치시킨다. 천천히 가열하면서 브롬화 아연(3.7g)을 다시 반응물에 정지점(stopping point)까지 첨가한다. 반응물을 1M의 암모늄 아세테이트에 붓는다. 생성물을 디클로로메탄으로 추출한다. 디클로로메탄을 진공에서 제거하고 수득한 오일을 CH₂Cl₃: MeOH(95 : 5v/v)로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피한다. 1-(3'-클로로-2'-데옥시-β-D-리보푸라노실)-5-트리플루오로메틸우라실(0.48g, 1.53mMol)을 디메틸아세트아미드(4.8ml)에서 리튬 아지드(0.19g, 3.8mMol)로 처리하여 최종 생성물을 얻는다. 그반응을 4시간동안 90℃에서 가열한다. 반응결과 얻은 오일을 CHCl₃: MeOH(95 : 5v/v)로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피한다. 크로마토그래피 정제를 반복한다. CH₂Cl₂: MeOH(97 : 3v/v)로의 실리카겔상에의 용출에 의해 거의 순수한 생성물이 산출된다. 톨루엔으로 재결정화하면 순수한 생성물이 생성된다(수율=10%).

[실시예 35]

3'-아지도-2',3'-디데옥시시티딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시시티딘은 T.A.Krenitsky 등의 방법(J.Med. Chem., 26, 891, (1983))에 의해 HCl염으로서 3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘(2.2g, 7.9mMol)로부터 제조된다. 수율은 40%이며 융점은 174.5-176.5℃이다.

[실시예 36]

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-메틸시티딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-메틸시티딘은 상기 실시예 35의 방법에 의해 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(0.8g, 3.0mMol)로부터 제조된다. 수율은 19%이다.

[실시예 37]

트레오 3'-아지도-2',3'-디데옥시시티딘

트레오 3'-아지도-2',3'-디데옥시시티딘의 합성은 2'-데옥시우리딘으로부터 4단계의 반응에 의해 실시된다.

2'-데옥시우리딘의 5'-히드로실기는 헥산 화학(Synthelic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, 1, 321, (1968))의 합성 방법에 명시된 방법에 의해 트리틸화된다.

트레오 3'-아지도-2',3'-디데옥시-5'-트리틸우리딘은 2'-데옥시-3'-트리틸우리딘(5.0g, 10.6mMol)을 DMF(80ml)에 용해된 리튬 아지드(5.21g, 106mMol, 10당량), 트리페닐 포스핀(3.07g, 11.7mMol, 1.1당량) 및 카본 테트라브로마이드 (3.88g, 11.7mMol, 1.1당량)과 반응시킴으로써 제조된다. 카본 테트라브로마이드는 제일 나중에 첨가된다. 다음, 반응을 실온에서 하룻밤동안 방치시킨다. 메탄올(5ml)을 첨가한다. 오일 형태의 산출물을 취한 후 에틸 아세테이트로의 용출에 의해 실리카겔상에서 플래쉬 크로마토그래피화한다. 20분동안 스팀 배스상에서 80%아세트산으로 가열하여 5'-히드록실 위치를 탈블록시킨다. 냉각되자마자 침전으로 가라앉은 트리틸카르비놀을 여과한다. 여액을 건조시키고 에틸 에테르에서 슬러리화한다. 생성물인

3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘은 더 이상의 정제없이 사용될 수 있다. HCl 염으로서의

3'-아지도-2',3'-디데옥시시티딘의 최종 생성물은 우리딘 유사물로부터

이성질체의 제조방법에 사용되었던 방법(T.A.Krenitsky 등의 J.Med, Chem., 26, 891, (1983))에 의해 제조된다. 수율은 0.021g이다(7%).

[실시예 38]

9-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-α-D-리보푸라노실)아데닌

9-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-α-D-리보푸라노실)아데닌은 N₆-옥타노일아데닌(2.0g, 7.7mMol) 및 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(1.13g, 4.2mMol)로 부터 M.Imazawa 및 F.Eckstein(J.Org. Chem., 43,3044 (1978))에 명시된 방법에 따라 2단계 반응에 의해 제조된다(융점=120-122℃).

UV(nm) : pH 1- λmax=258nm, λmin-=230nm

pH 13-λmax=260nm, λmin=229nm

원소분석 : C₁₀H₁₂N₈O₂

이론치 : C ; 43.48, H ; 4.38, N ; 40.56

실측치 : C ; 43.28, H ; 4.45, N ; 40.38

[실시예 39]

9-(3'-아지도-2',2'-디데옥시-β-D-리보푸라노실)아데닌

9-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-리보푸라노실)아데닌은 M.Imazawa 및 F.Eckstein(J.Org. Chem,43, 3044(1978))의 방법에 의해 N₆-옥타노일아데닌(2.0g, 7.7mMol) 및 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(1.13g, 4.2mMol)로부터 2단계 반응으로 제조된다.

융점=184-185℃

UV(nm) : pH 1-λmax=257nm, λmin=230nm

pH 13-λmax=260nm, λmin=228nm

원소분석 : C₁₀H₁₂N₈O₂

이론치 : C ; 43.48, H ; 4.38, N ; 40.56

실측치 : C ; 43.33, H ; 4.45, N ; 40.41

[실시예 40]

5'-아세틸-3'-아지도-3-벤조일-3'-데옥시티미딘

5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시티미딘(0.75g, 2.4mMol)을 피리딘(5ml)에 용해한 후 벤조일 클로라이드(1.4ml, 12mMol, 5당량)를 실온에서 첨가한다. 반응을 하룻반동안 교반한 후 얼음물(250ml)에 붓는다. 수용성 용액의 pH를 1로 조절한다. 생성물을 클로로포름으로 추출한다. 유기층을 물로 세척한 후, MgSO₄로 탈수시키고 여과시킨다. 클로로포름을 제거하고 오일 생성물을 클로로포름으로의 용출에 의해서 실리카겔상에서 플래쉬 크로마토그래피화한다. 생성물을 오일로서 회수한다.

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ8.04-7.50(m, 6H ; 3N-벤조일 및 6H), δ6.12(dd, 1H, J_{1', 2a'}=5.6Hz, J_{1', 2b'}=6.7Hz, 1'H), δ4.55-3.96(m, 4H ; 3'H, 4'H, 5'H), δ2.62-2.38(m, 2H, 2'H), δ2.07(s, 3H, 5' 아세틸 CH₃), δ1.90(d, 3H, J_{5, 6}=1.0Hz, 5CH₃)

원소분석 : C₁₉H₁₉N₅O₆

이론치 : C ; 55.20, H ; 4.63, N ; 16.94

실측치 : C ; 55.29, H ; 4.64, N ; 16.93

[실시예 41]

트레오 3'-아지도-5-브로모-2'.3'-디데옥시우리딘

3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘은 5단계의 연속 반응에 의해 2'-데옥시우리딘으로부터 제조된다.

트리페닐 메틸기를 갖는 2'-데옥시우리딘의 5'-히드록실기를 일반적인 방법으로 보호한다. 3'-히드록실기를 메실화한다. 80℃에서 디메틸포름아미드(380ml)에 용해된 나트륨 아지드(7.84g, 120mMol, 3당량)의 용액에 2'-데옥시-3'-메틸-5'-트리틸우리딘(22g, 40mMol)를 첨가함으로써 3'-아지도기를 정확하게 입체화학적으로 도입한다. 반응을 35시간동안 계속한다. 용액을 얼음물(2ℓ)에 부은후, 여과에 의해 침전물을 회수한다. 생성물을 클로로포름 : 메탄올(1 : 1, v/v)로의 용출에 의한 실리카겔상에서의 크로마토그래피에 의해 분리한다(수율=51%). 5'-히드록실 위치를 스팀 배스에서 25분동안 80%의 아세트산으로 탈블록한다. 냉각후, 트리틸카르비놀로 여과한다. 여액을 진공하에서 두꺼운 오일로 만든다. 생성물은 클로로포름 : 메탄(85 : 15v/v)으로의 용출에 의한 실리카겔상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 분리된다(수율=51%). 트레오-3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘의 5-위치는 에리트로-3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘의 브롬화 방법과 동일 방법에 의해 브롬화된다.

UV(nm) : pH 1-λmax=280, ε=9400, λmin=244, ε=2600

pH 13-λmax=276, ε=6700, λmin=251, ε=3700

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ11.86(s, 1H, 3-NH), δ8.02(s, 1H, 6H), δ5.99(dd, 1H, J_{1', 2a'}=3.0Hz : J_{1', 2b'}=7.5Hz,1'H),δ5.1(t, 1H,

, 5'OH=5.4Hz, 5'OH), δ4.49(m, 1H, 3'H), δ4.505(m, 1H, 4'H), δ3.71(m, 2H, 5'H),δ2.72(m, 1H, 2b'),δ2.18(m, 1H, 2a')

원소분석 : C₉H₁₀BrN₅O₄-0.25 H₂O-0.1 C₂H₄O₂

이론치 : C ; 32.25, H ; 3.21, N ; 20.44, Br ; 23.32

실측치 : C ; 32.17, H ; 3.21, N ; 20.33, Br ; 23.19

[실시예 42]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-에리트로-펜토푸라노실)-2-(벤질옥소)-5-메틸-4-(1H)-피리미디논 나트륨(0.4g, 17.4mMol, 2.6당량)을 무수 벤질 알콜(10ml)과 실온에서 1시간동안 반응시킨다. 2,5'-O-안하이드로-3'-아지도-3'-데옥시티미딘(1.65g, 6.6mMol)을 첨가한다. 반응을 1시간동안 계속 유지시킨다. 얼음물(250ml)에 부은 후, pH를 7로 조절하고 수성층은 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기층은 물로 추출한다(4회). 황산 마그네슘으로 탈수한 후, 에틸 아세테이트를 진공하에서 제거한다. 수득한 오일을 처음에는 에틸 아세테이트로, 다음에는 에틸 아세테이트 : 메탄올(9 : 1v/v)로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피화한다. 생성물을 함유한 분획물을 모아서 용매를 진공하에서 제거하여 오일을 얻는다. 수득한 오일을 에틸 에테르로 결정화한다(융점=125-126.5℃).

UV(nm) : pH 1-불안정

pH 13-λmax=256, ε=10700, λmin=240, ε=8900

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ7.8(d, 1H, J₆₅=1.2Hz, 6H), δ7.49-7.38(m, 5H, 2-페닐), δ6.08(dd, 1H, J_{1', 2a'}=7.0Hz, 1'H), δ5.37(s, 2H, 2CH₂), δ5.25(t, 1H,

=5.4Hz, 5'OH), δ4.36-4.32(m, 1H, 3'H), δ3.85-3.81(m, 1H, 4'H), δ3.7-3.58(m, 2H, 5'H), δ2.53-2.34(m, 2H, 2H'), δ1.82(d, 3H, J_{5, 6}=1.0Hz, 5CH₃).

원소분석 : C₁₇H₁₉N₅O₄

이론치 : C ; 57.14, H ; 5.36, N ; 19.60

실측치 : C ; 57.02, H ; 5.43, N ; 19.53

[실시예 43]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-트레오-펜토푸라노실)-2-에톡시-5-메틸-4-(1H)-피리미디논

트레오 3'-아지도-5'-O-메실티미딘(1.08g, 3.13mMol)[트레오-3'-아지도티미딘]을 100ml의 EtOH에 용해한 후, NaHCO₃(0.26g, 3.13mMol)로 환류하에서 18시간동안 처리한다. 반응을 냉각하고 여과한다. 용매를 진공하에서 제거하고 잔사를 실라카겔 칼럼상에 위치시킨 후 9 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 용출시킨다. 적합한 분획물을 모아서 진공하에서 용매를 제거하여 0.7g(2.4mMol, 75.7%)의 생성물을 얻는다(융점=120-122℃).

UV(nm) : pH 1-λmax=260(ε=9300), λmin=237(ε=5500), λ숄더=221(ε=7500) ;

pH 13-λmax=256(ε=10000), λmin=240(ε=7700).

H¹NMR(DMSO-d₆)δ7.58(s, 1H, H6), δ6.0(dd, 1H, H1', J=2.9, 56Hz), δ5.06(t, 1H, 5'OH, J=4.91Hz), δ4.51-4.47(m, 1H, H3'), δ4.34(q, 2H, -OCH₂-, J=7.14Hz), δ4.10-4.05(m, 1H, H4'), δ3.73(t, 2H, H5', J=5.62Hz), δ2.82-2.73(m, 1H, H2'b),δ2.21-2,14(m,1H, H2'a), δ1.82(s, 3H, 5CH₃), δ1.31(t, 3H, -CH₂-CH₃, J=6.65Hz)

원소분석 : C₁₂H₁₇N₅O₄

이론치 : C ; 48.81, H ; 5.80, N ; 23.72

실측치 : C ; 48.59, H ; 5.86, N ; 23.64

[실시예 44]

트레오 3'-아지도 -2',3'-디데옥시-4-티오티미딘

트레오 3'-아지도-5'-O-트리틸-3'-데옥시-4-(1,2,4-트리아졸)티미딘(1.25g, 2.2mMol)(W.Sung, Nucleic Acids Research(1981), 9, 6139의 방법에 따라 제조)을 100ml의 아세톤 및 30ml의 H₂O에 용해한후 0.22g의 NaSH·xH₂O로 처리한다. 혼합물을 3시간동안 교반한다. 부피를 반으로 감소시킨 후 300㎖의 CHCl₃로 추출한다. CHCl₃를 500㎖의 H₂O로 세척한 후, 황산나트륨상에서 탈수시키고, 진공하에서 제거하여 오일을 산출한다. 5'-O-트리틸기는 100ml의 80% HOAc에 상기 오일을 용해함으로써 제거된다. 용액을 2시간동안 스팀배스 상에서 가열하고 냉각한 후 100ml의 H₂O로 희석하고 여과한다. 용매를 진공하에서 제거하고 오일을 실리카겔 칼럼상에 위치시킨다. 20 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 용출하고 적합한 분획물을 모아서 진공하에서 용매를 제거하여 0.18g의 생성물을 산출한다(0.62mMol : 28%)(융점=65-67℃).

UV(nm) : pH 1-λmax=337(ε=20700), λmin=280(ε=1200), λ숄더=238(ε=3400) ;

pH 13-λmax=320(ε=18400), λmin=257(ε=1700);

H¹NMR(DMSO-d₆)δ7.63(s, 1H, H1', J=2.93, 4.89Hz), δ5.06(s, 1H, 5'OH), δ4.50-4.46(m, 1H, H3'), δ4.10-4.04(m, 1H, H4'), δ3.73(d, 2H, H5', J=5.61Hz), δ2.78-2.68(m, 1H, H2'b), δ2.20-2.14(m, 1H, H2'a), δ2.00(s, 3H, 5CH₃)

원소분석 : C₁₀H₁₃N₅O₃S 0.1 C₂H₆0-0.25 H₂O

이론치 : C ; 41.90, H ; 4.86, N ; 23.95, S ; 10.97

실측치 : C ; 41.99, H ; 4.73, N ; 23.88, S ; 10.91

[실시예 45]

4-아미노-3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘을 아세틸화한 후 Visser의 방법(헥산 화학에서의 합성 방법 ; Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry Vol.1p.410)에 따라 브롬화함으로써 5'-아세틸-3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘을 브롬화한다. 상기 물질을 무수 피리딘에서 5당량의 1,2,4-트리아졸 및 2당량의 4-클로로페닐 디클로로포스페이트와 주위 온도에서 7일동안 반응시켜 황색 오일의 5'-아세틸-3'-아지도-5-브로모-4-(1,2,4-트리아졸일)-2',3'-디데옥시우리딘을 얻는다(중간 정도의 수율). 주위 온도에서 0℃의 암모니아 포화 메탄올로 18시간동안 처리하고, 에틸 아세테이트로 재결정화하고 수득한 결정체를 여과하면 4-아미노-3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘(173mg, 0.5mMol, 6.3%)이 산출된다(융점=162-165℃(분해)).

UV(nm) : pH 1-λmax=300,215(ε=10700, 12100), λmin = 253(ε=1500) ;

pH 13-λmax=288(ε=7300) , λmin=260(ε=3900)

H¹NMR(DMSO-d₆)δ8.3(s, 1H, H6), δ7.85(넓은 s, 1H, 4-NH₂), δ7.05(넓은 s, 1H, 4-NH₂), δ6.0(t, 1H, H1', J=5.94Hz), δ5.33(t, 1H, 5'-OH, J=5.01Hz), δ4.4-4.3(m, 1H, H3'), δ3.9-3.5(m, 3H, H4', H5'), δ2.31(t, 2H, H2', J=6.27Hz)

원소분석: C₉H₁₁N₆O₃Br

이론치 : C ; 32.64, H ; 3.35, N ; 25.38, Br ; 24.13

실측치 : C ; 32.52, H ; 3.41, N ; 25.32, Br ; 24.04

[실시예 46]

3'-아지도-5-브로모비닐-2', 3'-디데옥시우리딘

5-브로모비닐-2'-데옥시우리딘(BVDU)은 Jones 등의 방법(Tetrahedron Letters 45, 4415(1979))으로 유사한 수율로 합성된다. BVDU는 Horwitz 등의 J. Org. Chem, 31, 205 (1996)의 방법에 따라 트리틸화되고 메실화된다. 그 생성물을 동량의 탄산수소나트륨으로 환류하는 메탄올에서 처리하여 3',2-O-안하이드로-5-브로모비닐-2'-데옥시우리딘을 얻는다. 그 생성물을 130℃의 3당량의 리튬 아지드로 1% 물/디메틸 포름아미드에서 처리한다. 미정제 생성물을 실리카겔로 크로마토그래피화한 후 적합한 분획물을 모아서 증발시켜 금색 오일로서 3'-아지도-5-브로모비닐-2',3'-디데옥시우리딘을 얻는다.

UV(nm) : pH 1- λmax=292,247, λmin=270,238 ;

pH 13-λmax=253, λmin=238, λ숄더=284 ;

H¹NMR(DMSO-d₆)δ8.06(s, 1H, H₆), δ7.25(d, 1H,-CH=CHBr, J=13.4Hz),δ6.85, (d, 1H=CHBr, J=13, 7Hz), δ6.07(t, 1H, H_1', J=6.3Hz), δ5.30(넓은 s, 1H, 5'-OH), δ4.42(q, 1H, H_3', J=6.3, 6.1Hz),δ3.86-3.82(m, 1H, H_4'),δ3.68-3.59(m, 2H, H_5',),δ2.47-2.32(m, 2H, H_2')

원소분석 : C₁₁H₁₂N₅O₄Br

이론치 : C ; 36.89, H ; 3.38, N ; 19.55

실측치 : C ; 36.86, H ; 3.41, N ; 19.51

[실시예 47]

3'-아지도-5-클로로-2',3'-디데옥시우리딘

본 표제의 화합물은 3'-아지도-5-클로로-2',3'-디데옥시우리딘(실시예 31)의 제조 방법과 유사한 방법에 따라 제조된다(수율=0.15%, 0.5mMol, 25%)(융점=65℃).

UV(nm) ; at pH 1λmax=278,212(ε=8900), λmin=240(ε=1600) ; at pH 13λmax=275(ε=6600), λmin=248(ε=3300) ;

H¹-NMR(DMSO-d₆)δ11.89(s, 1H, NH), δ7.94(s, 1H, H₆),δ6.00(dd, 1H, H₁, J=2.93, 4.64Hz), δ5.1(t, 1H, 5'OH, J=5.1Hz), δ4.50-4.46(m, 1H, H_3'), δ4.08-4.03(m, 1H, H₄), δ3.71(t, 2H, H_5', J=5.32Hz), δ2.77-2.67(m, 1H, H_2'b), δ2.32-2.16(m, 1H, H_2'a)

원소분석 : C₉H₁₀N₅O₄Cl 0.1 H₂O-0.1 C₄H₈O₂

이론치 : C ; 37.85, H ; 3.72, N ; 23.48, Cl ; 11.89

실측치 : C ; 37.94, H ; 3.91, N ; 23.23, Cl ; 11.86

[실시예 48]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸-2-(펜틸옥소)4-(1H)-피리미디논

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸-2-(펜틸옥소)-4(1H)-피리미디논은 1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-에리트로-펜타푸라노실)-2-(벤질옥소)-5-메틸-4-(1H)-피리미디논(실시예 42)의 제조방법에 따라 제조된다. 물 : 메탄올(3 : 7)로 용출되는 C₁₈의 HPLC에 의해 최종 정제를 실시한다. 용매를 증발시켜 오일로서 생성물을 수취한다.

UV(nm) ; pH 1λmax 258nm(ε=9400), λmin 232(ε=5900)

pH 13 λmax 256nm(ε=10600), λmin 239nm(ε=8200)

NMR taken in DMSO-d6.

NMR : δ7.81(s, 1H, 6H), δ6.04(t, 1H, J1', 2'=6.7Hz, 1'H), δ5.28(t, 1H, J5'CH2', 5'OH=5.1Hz, 5'OH), δ4.43-4.47(m, 1H, 3'H), δ4.27(t, 2H, J2-0(1CH₂2CH₂)=6.6Hz, 2-0(CH₂)₁), δ3.88-3.84(m, 1H, 4'H), δ3.70-3.50(m, 2H, 5'CH₂) δ2.50-2.34(m, 2H, 2'H), δ1.80(s, 3H, 5H₃), δ1.72-1.68(m, 2H, 2-0(CH₂)₂), δ1.38-1.30(m, 4H, 2-0(CH₂)₃및₄), δ0.92-0.87(m, 3H, 2-0(CH₃)₅)

원소분석 : C₁₅H₂₃N₅O₄1/4H₂O

이론치 : C ; 52.70, H ; 6.93, N ; 20.48

실측치 : C ; 52.63, H ; 6.92, N ; 20.48

[실시예 49]

3'-아지도-3-벤조일-3'-데옥시-5'-메실티미딘

3'-아지도-3-벤조일-3'-데옥시-5-메실티미딘 5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시티미딘부터 5'-아세틸-3'-아지도-3-벤조일-3'-데옥시티미딘의 제조방법(실시예 40)과 유사한 방법으로 3'-아지도-3'-데옥시-5'-메실티미딘으로부터 제조된다(융점=86-88℃).

UV(nm) : pH 1λmax 259nm(ε=21200), λmin 230nm(ε=6400)

pH 13λmax 265nm(ε=9600), λmin 248nm(ε=8000)

H¹NMR(DMSO-d6) : 88.00-7.58(m, 6H, 6H 및 페닐), 66.15(t, 1H, J1', 2'=6.1Hz, 1H), δ4.55-4.47(m, 3H, 3H 및 5'CH₂), δ4.12-4.10(m, 1H, 4H), 3.28(s, 3H , 5'-SO₂CH₃), δ2.65-2.4(m, 2H, 2'H), δ1.89(d, 3H, J5, 6=1.3Hz, 5CH₃)

원소분석 : C₁₈H₁₉N₅O₇S

이론치 : C ; 48.1, H ; 4.26, N ; 15.58, S ; 7.13

실측치 : C ; 48.00, H ; 4.23, N ; 15.39, S ; 7.10

[실시예 50]

트레오-3'-아지도-2'-3'-디데옥시-5-요오도우리딘

5-아이오도-2'-데옥시우리딘은 Horwitz등의 방법(J. Org. Chem, 31(1996), 205)에 따라 트리틸화되고 메실화된다. 그생성물을 무수 디메틸포름 아미드에 용해된 3당량의 리튬 아지드로 74℃에서 48시간 동안 가열한다. 20 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 반응혼합물을 실리카겔상에서 크로마토그래피화한 후 적합한 분획물을 모아서 증발시켜 트레오 3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-요오드-5'-트리틸우리딘을 얻는다. 5'-히드록실을 0℃에서 포화된 브롬화아연/니트로메탄 용액으로 탈블록한다. 9 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH를 사용하여 상기 미정제 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피한 후 적합한 분획물을 모아서 증발시켜 트레오 3'-아지도-2',3'-디데옥시-5-요오도우리딘(고체)을 얻는다(융점=80℃).

UV(nm) : at pH 1 λmin=247

at pH 13 λmax=277, λmin=252

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ8.37(s, 1H, 6H), δ6.00(t, 1H, H1', J=6.17Hz), δ5.4-5.3(m, 1H, 5'H3'), δ4.4-4.3(m, 1H, H3'), δ3.9-3.8(m, 1H, H4'), δ3.7-3.6(m, 2H, H5')

원소분석 : C₉H₁₀N₅I_0.4C₄H₈O₂

이론치 : C ; 30.73, H ; 3.21, N ; 16.90, I ; 30.63

실측치 : C ; 30.93, H ; 3.09, N ; 16.61, I ; 30.94

[실시예 51]

1-(5'-0-아세틸-3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸-4-(1, 2, 4-트리아졸-1일)-2(1H)-피리미디논

5'-아세틸-3-아지도-3'-데옥시티미딘을 무수피리딘 중에서 2당량의 4-클로로메닐 디클로로포스페이트 및 5당량의 1,2,4-트리아졸과 주위온도에서 20일 동안 반응시킨다. 1 : 1(v/v)의 EtOAc/헥산을 사용하여 미정제 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피화한 후 적합한 화합물을 모아서 증발시킨다. EtOAc로 결정화하여 고체로서 상기 문제 분획물을 얻는다(2.7g, 7.5mMol ; 60%)(융점=143-145℃).

UV(nm) : at pH 1 λmax=324,245,215(ε=9300,10000,205000), λmin=282,233(ε=2100, 8200)

at pH 13 λmax=276(ε=6000), λmin=242(ε=2000)

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ9.34-8.40(2s, 2H, 트리아졸릴), δ8.23(s, 1H, H6), δ6.12(t, 1H, H1', J=6.16Hz), δ4.48-4.17(m, 4H, H3', H4', H5'), δ2.35(s, 3H, 5'-아세틸), δ2.07(s, 3H, 5CH₃).

원소분석 : C₁₄H₁₆N₈O₄

이론치 : C ; 46.67, H ; 4.48, N ; 31.10

실측치 : C ; 46.58, H ; 4.51, N ; 31.02

[실시예 52]

1-(3'-아지도-2',3'-디에옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-4-디메틸아미노-5-메틸-2-(1H)-피리미디논

5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시-4-(1,2,4-트리아졸릴)티미딘을 주위온도, 질소 대기하에서 무수아세토니트릴에 용해한다. 20당량의 디메틸아민을 한꺼번에 모두 첨가하고 반응을 30분동안 교반시킨다.용매를 제거하고 잔사를 암모니아-포화메탄올에 용해한후 용액을 30분동안 교반시킨다. 용매를 제거한 후 자사를 EtOAc에 용해한다. 상기 표제 화합물을 용액으로부터 천천히 침전시킨후 여과하여 백색 고체를 얻는다(융점=157-159℃).

UV(nm) : at pH 1 λmax=299, 224(λ=149000, 7900), λmin=254(ε=2500)

at pH 13λmax=287(ε=14000), λmin=243(ε=6800)

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ7.63(s, 1H, H6),δ6.06(t, 1H, H1', J=6.53Hz), δ5.22(t, 1H, 5'OH, J=5.2Hz), δ4.37-4.34(m, 1H, H3'), δ3.83-3.80(m, 1H, H4'), δ3.65-3.60(m, 2H, H5'),δ3.06(s, 6H, N(CH₃)₂), δ2.29-2.23(m, 2H, H2'), δ2.11(s, 3H, 5-CH₃)

원소분석 : C₁₂H₁₈N₆O₃

이론치 : C ; 48.97, H ; 6.16 N ; 28.56

실측치 : C ; 49.06, H ; 6.20, N ; 28.50

[실시예 53]

1-(3'-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸-2-(이소펜틸옥소)-4-(1H)-피리미디논

상기 표제 화합물은 1-(3'-아지도-2',3'-디메옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-2-(벤질옥소)-5-메틸-40(1H)-피리미디논(실시예 42)을 제조하기 위해 사용된 방법과 유사한 방법에 따라 제조한다.

UV(nm) : pH 1(nm) λmax 258(ε=9000), λmin 237(ε=6000)

pH 13(nm) λmax 255(ε=11000), λmin (ε=8000)

H¹NMR(CMSO-d₆) :δ7.79(s, 1H, 6H), δ6.02(t, 1H, J1', 2'=6.3Hz, 1H'), δ5.23(t, 1H, J5'OH, 5'H=5.2Hz, 5'OH), δ4.4-4.3(m, 3'H 및 2-O-CH₂-CH(CH₃)₂), δ3.9-3.8(m, 1H, 4'H), δ3.7-3.5(m, 2H, 5'H), δ2.5-2.3(m, 2'H), δ1.78(s, 3H, 5CH₃), δ1.7-1.5(m, 3H, 2-OCH₂-CH₂-CH(CH₃)₂), δ0.92 및 0.89(d, 6H, J=6.3Hz, 2-O(CH₂)₂)CH(CH₃)₂)

원소분석 : C₁₅H₂₃N₅O₄

이론치 : C ; 53.40, H ; 6.87, N ; 20.76

실측치 : C ; 53.14, H ; 6.92, N ; 20.62

[실시예 54]

3-아세틸-3'-아지도-5'-0-(3-클로로벤조일)-3'-데옥시티미딘

3'-아지도-5'-0-(4-클로로벤조일)-3'-데옥시티미딘(0.3g, 0.74mMol), 시안화은(0.4g, 3.0mMol) 및 20ml의 벤젠의 혼합물에 과량의 아세틸클로라이드(2.6g, 33mMol)을 분할 첨가한다. 혼합물을 출발물질이 사라질때까지 실온에서 교반시키고 TLC, CHCl₃/MeOH(20 : 1v/v)에 의해 크로마토그래피화한다. 반응을 여과하고 여액을 감압하에서 건조될때까지 증발시킨다. 결과의 오일 잔사를 클로로포름/헥산 1 : 1(v/v)및 클로로포름으로 계속해서 용출시켜 실리카겔상에서 크로마토그래피한 후 오일 형태로 바라는 바의 생성물을 얻는다.(0.21g, 64%)

UV(nm) : at pH 1λmax 273(ε=9000), λmin 251(ε=6200)

pH 13λ max 256(ε8800), λmin247(ε=7000)

H¹NMR(DNSO-d₆) : δ1.68(s, 3H, 5-CH₃), δ2.47(s, 3-COCH₃), δ2.3-2.5(m, 2'H) δ4.1-4.2 및 4.4-4.7(m, 4H, 3'H, 4'H 및 5'H), δ6.1(t, 1H, J1', 2'=6.3Hz, 1'H), δ7.5-8.0(m, 5H, 6H 및 페닐)

원소분석 : C₁₉H₁₈N₅O₆Cl-0.2CHCl₃

이론치 : C ; 48.89, H ; 3.89, N ; 14.85, Cl ; 12.03

실측치 : C ; 49.05, H ; 3.94, N ; 14.79, Cl ; 12.56

[실시예 55]

3'-아지노-5-시아노-2',3'-디데옥시우리딘

5-아이오도-2',3'-디데옥시우리딘을 피리딘에서 무수아세트산(2.1 당량)과 습기를 베제시키면서 주위온도에서 2시간동안 반응시켜 2',3'-디데옥시-3', 5'-디아세틸-4-아이오도우리딘을 얻는다. 뉴클레오시드(1당량), 시안화칼륨(1.3당량) 및 포타슘 아세테이트(1.3당량)을 무수 DMSO에서 배합하고 2시간동안 질소 대기하에서 97℃로 가열한다. 용매를 진공하에서 제거하고, 잔사의 오일을 실카겔 상에서 위치시킨 후 1 : 1(v/v)의 CHCl₃/EtOAc로 용출시킨다. 적합한 분획물을 회수하여 모아서 증발시켜 5-시아노-2',3'-디데옥시-3',5'-디아세틸우리딘을 얻는다. 화합물을 암모니아-포화메탄올에 용해시킨후 18시간동안 0℃에서 교반시킨다. 용매를 주위온도에서 진공하에서 제거하여 상기 표제 결정체를 얻는다(융점=160-162℃).

UV(nm) : at pH 1λmax=276, 215(ε=135000, 11200), λmin=238(ε=1700)

at pH 13λmax=276(ε=10100), λmin=240(ε=340)

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ8.81(s, 1H, H6), δ6.00(t, 1H, H1', j=5.94Hz), δ5.3-5.21(m, 2H, 5'OH, 3'OH), δ4.28-4.15(m, 1H, H3'), δ3.82-3.77(m, 1H, H4'), δ3.7-3.5(m, 2H, H5'), δ2.18(t, 2H, H2'J=5.75Hz)

원소분석 : C₁₀H₁₁N₃O₅0.25H₂O

이론치 : C ; 46.61, H ; 4.50, N ; 16.31

실측치 : C ; 46.67, H ; 4.71, N ; 16.54

[실시예 56]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-트레오-펜토푸라노실)-5-메틸-2-펜틸옥시-4-(1H)-피리미디논

2,5'-0-안하이드로-1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-트레오-펜토푸라노실)티미딘을 펜탄-1-올에 용해된 칼륨 t-부톡사이드(0.5당량)용액에 첨가한다. 반응을 2시간 동안 주위온도, 질소 대기하에서 교반시킨다. 용매를 진공하에서 제거한 후 잔사를 실리카겔 칼럼에 위치시킨다. 20 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 용출시킨 후 적합한 분획물을 모아서 증발시켜 깨끗한 오일을 얻고 방치시키면 서서히 형성되는 상기 표제 화합물의 결정체를 얻는다(융점=110-111℃).

UV(nm) : at pH1λmax=255(ε=10200), λmin=237(ε=6200), λsh=222(ε=9000)

at pH13 λmax=251, 226(ε=11600, 9600), λmin=238(ε=8600)

H¹NMR(DMSO-d₆) :δ7.58(s, 1H, H6), δ5.98(dd, 1H, H1', J=2.98, 4.88Hz) δ5.07(t, 1H, 5'OH, J=5.42Hz), δ4.5-4.47(m, 1H, H3'), δ4.31-4.25(m, 2H, -OCH₂-), δ4.1-4.06(m, 1H, H4'), δ373(t, 2H, H4', J=5.62Hz), δ2.82-2.72(1H, H2'), δ2.2-2.14(m, 1H, H2'), δ1.82(s, 3H, 5-CH₃) δ1.75-1.65(m, 2H, 펜틸), δ1.4-1.3(m, 4H, 펜틸), δ0.92-0.87(m, 3H, 펜틸)

원소분석 : C₁₅H₂₃N₄O₄

이론치 : C ; 53.40, H ; 6.87, N ; 20.76

실측치 : C ; 53.31, H ; 6.90, N ; 20.70

[실시예 57]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실-2-벤질옥시-5-메틸-4-(1H)-피리미디논

상기 표제 화합물은 펜탄-1-올 대신에 벤질알콜을 사용하여 1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸-2-펜틸옥시-4-(1H)-피리미디논(실시예 56)을 제조하는데 사용되었던 방법과 유사한 방법에 따라 제조된다(융점=137-139℃).

UV(nm) : at pH1 λmax=266(ε=9100), λmin=235(ε=3000)

at pH13 λmax=256(ε=11500), λmin=240(ε=9600)

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ7.6(s, 1H, H6), δ7.49-7.37(m, 5H, 페닐), δ6.01(dd, 1H, H1', J=2.52, 5.OHz), δ5.35(s, 2H, 벤질), δ5.1-5.0(m, 1H, 5'OH), δ4.5-4.4(m, 1H, H3'), δ4.1-4.0(m, 1H, H4'), δ3.77-3.67(m, 2H, H5'), δ2.82-2.70(m, 1H, H2'), δ2.25-2.15(m, 1H, H2'), δ1.83(s, 3H, 5-CH₃).

원소분석 : C₁₇H₁₉N₅O₄0.25H₂O

이론치 : C ; 56.43, H ; 5.43, N ; 19.35

실측치 : C ; 56.51, H ; 5.37, N ; 19.36

[실시예 58]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-4-메톡시-5-메틸-2(1H)-피리미디논

5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시-4-(1,2,4-트리아졸릴) 티미딘을 메탄올중에 용해된 0.5N의 나트륨 메톡사이드로 실온에서 24시간 동안 처리한다. 그 용액을 설폰산 수지(DOW 50W, H^-)로 pH 7로 중화한 후, 그 수지를 여과하고 여액을 진공하에서 고체로 증발시킨다. 그 고체를 소량의 CHCl₃에 용해하고 실리카겔 칼럼상에 위치시킨후 CHCl₃중의 2% MeOH로 용출시킨다. 적합한 분획물을 모아서 건조될때까지 증발시켜 백색 고체를 얻는다(융점=119-123℃).

UV(nm) : at pH1 λmzx=279(ε7500), λmin=239(ε=1700)

at pH13 λmax=279(ε=6400), λmin=243(ε=1300).

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ8.02(s, 1H, H6), δ6.08(t, 1H, H1', J=5.86Hz), δ5.29(t, 1H, 5'OH, J=5.48Hz), δ4.41-4.33(m, 1H, H3'), δ3.9-3.86(t, 1H, H4'), δ3.86(s, 3H, 4-OCH₃), δ3.75-3.58(m, 2H, H5'), δ2.4-2.3(m, 2H, H2'), δ1.89(s, 3H, 5-CH₃).

원소분석 : C₁₁H₁₅N₅O₄

이론치 : C ; 46.97, H ; 5.38, N ; 24.90

실측치 : C ; 47.06, H ; 5.40, N ; 24.86

[실시예 59]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실-5-메틸-4-(1-피롤리디닐)-2-(1H)-피리미디논

5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시-4-(1,2,4-트리아졸릴)티미딘을 무수아세토니트릴에서의 질소 대기하의 주위온도에서 용해한다. 5당량의 피롤리딘을 5분 동안 적가한 후 반응물을 2시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 제거하여 오일을 산출한다. 오일을 주위온도에서 암모니아-포화메탄올에 용해한 후 4시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 제거한 후 실리카겔 칼럼에 위치시킨다. 20 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 용출한 후 적합한 분획물을 모아서 증발시키면 백색 고체의 상기 표제 화합물이 산출된다(융점=168-171℃).

UV(nm) : at pH1 λmzx=295, 233(ε=15700, 9500), λmin=253(ε=2600)

at pH13 λmax=285(ε=1500), λmin=241(ε=7900).

H¹NMR(DMSO-d₆) : δ7.57(m, 1H, H6), δ6.02(t, 1H, H1'), δ6.02(t, 1H, H1', J=6.5Hz), δ5.22(t, 1H, 5'OH, J=5.15Hz), δ4.4-4.3(m, 1H, H3'), δ3.84-3.77(m, 1H, H4'), δ3.67-3.51(m, 6H, H5', 4, 피롤리딘 H'S), δ2.24(t, 2H, H2', J=6.08Hz), δ2.14(s, 3H, 5-CH₃), δ1.87-1.78(m, 4H, 피롤리딘).

원소분석 : C₁₄H₂₀N₆O₃

이론치 : C ; 52.49, H ; 6.29, N ; 26.23

실측치 : C ; 52.37, H ; 6.33, N ; 26.17

[실시예 60]

1-(3'-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-4-벤질옥시-5-메틸-2-(1H)-피리미디논 5'-아세틸-3'-아지도-3'-데옥시-4-(1,2,4-트리아졸릴) 티미딘을 무수 아세토니트릴에 용해한 후 주위온도 및 질소 대기하에서 무수 아세토니트릴중의 카륨 t-부톡사이드(2당량)및 벤질알콜(5당량)의 현탁액에 5분에 걸쳐 적가한다. 잔사를 실리카겔 칼럼상에 위치시킨 후 3 : 1(v/v)의 CHCl₃/EtOAc로 용출시킨다. 적합한 분획물을 모아서 증발시켜 고체를 얻는다. 고체를 1 : 1(v/v)의 CHCL₃/EtOAc로 재결화하여 수득한 결정체를 여과하여 상기 표제 화합물을 얻는다(융점=133-134℃).

UV(nm) : at pH1 λmzx=276(ε=8000), λmin=237(ε=2000)

at pH13 λmax=281(ε=8100), λmin237(ε=1600)

H¹NMR(DMSO-d₆) :δ8.05(s, 1H, H6), δ7.45-7.35(m, 5H, 페닐), δ6.07(t, 1H, H1', J=5.94Hz), δ5.35(s, 2H, 벤질), δ5.27(t, 1H, 5'CH, J=5.20Hz), δ4.41-4.31(m, 1H, H3'), δ3.91-3.83(m, 1H, H4'), δ3.7-3.6(m, 2H, H5', δ2.4-2.3(m, 2H, H2'), δ1.9(s, 3 H, 5-CH₃)

원소분석 : C₁₉H₂₁N₅O₅

이론치 : C ; 57.14, H ; 5.36, N ; 19.60

실측치 : C ; 57.06, H ; 5.37, N ; 19.58

[실시예 61]

5'-아세틸-3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘

3'-아지도-2',3'-디데옥시우리딘올을 Visser의 방법(Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, 1, 410)에 따라 아세틸화하고 브롬화하여 상기 표제 화합물을 얻는다(융점=112-114℃).

UV(nm) : at pH1 λmax=279, 210(ε=9500, 10600),λmin=243(ε=2000)

at pH13 λmax=276(ε=700),λmin=250(ε=4000)

H¹NMR(DMSO-d₆) :δ11.88(s, 1H, NH), δ8.02(s, 1H, H6),δ6.08-6.01(m, 1H, H1'), δ4.47-4.40(m, 1H, H3'),δ4.27-4.24(m, 2H, H5'), δ4.03-4.00(m, 1H, H4') δ2.41-2.34(m, 2H, H2'), δ2.09(s, 3H, 아세틸).

원소분석 : C₁₁H₁₂N₅O₅Br

이론치 : C ; 35.31, H ; 3.23, N ; 18.72, Br ; 321.36

실측치 : C ; 35.29, H ; 3.25, N ; 18.66, Br ; 21.45

[실시예 62]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-(트리플루오로메틸)우라실

5-트리플루오로메틸-2'-데옥시우리딘의 5'-히드록실기를 트리페닐 메틸기로 보호한 후 3'-히드록실기를 메실화한다. 생성물(3.0g, 4.9mMol)을 약 6시간 동안 50ml의 DMF중의 0.7g LiN₃와 70℃에서 반응시킨다. 냉각된 반응물을 교반하면서 얼음에 붓는다. 고체를 분리한 후 H₂O로 세척하고 헥산/에틸아세테이즈(2 : 1v/v)를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피로 정제한다. 적합한 분획물을 모아서 용매를 제거하여 0.83g의 트리틸화 생성물을 얻는다. 수득한 생성물을 아세토니트릴중의 브롬화 아연의 포화 용액에 용해한 후 0℃에서 하룻밤 동안 교반시킨다. 100ml의 암모늄 아세테이트 (1M)를 첨가한 후, 유기층을 분리하고 진공하에서 건조시킨다. 잔사를 CHCl₃/CH₃OH(20 : 1v/v)를 사용한 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 분획물을 모아서 진공하에서 건조시킨다. 상기 표제 화합물의 수율은 0.25g(0.8mMol, 5.3%)이다(융점=118-120℃).

원소분석 : C₁₀H₁₀F₃N₅O₄

이론치 : C ; 37.39, H ; 3.14, N ; 21.80, F ; 17.84

실측치 : C ; 37.31, H ; 3.23, M ; 21.75, F ; 17.60

[실시예 63]

1-(3'-아지노-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)우라실

2'-데옥시우리딘의 5'-히드록실기를 보호하고 3'-히드록실기를 메실화한다. 3'-메실기를 24시간동안 리튬 아지드(3당량)와 함께 80℃의 디메틸포름아미드에서 가열함으로써 배열을 전환시킨다. 반응물을 얼음물에 붓고, 생성물을 침전시킨다. 여과후 습윤성 생성물을 탈블록시킨다. 클로로포름/메탄올(95 : 5)로 용출하는 실리카겔상에서 크로마토그래프에 의해 최종 정제한다. 적합한 분획물을 모아서 용매를 제거하여 고체 상태의 상기 표제 화합물을 얻는다(융점=142-145℃).

[실시예 64]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토루라노실)우라실

2'-데옥시우리딘(30g, 0.13몰)의 5'-히드록시릭를 Horwitz등의 방법(J.Org. Chem., 31, 205(1996))에 따라 크리틸화한다. 3'-히드록실기(12.6g, 0.027)몰 실시예 62의 방법에 따라 염화시킨다. 디메틸아세트 아미드를 진공하에서 제거하고 두꺼운 오일을 물(500ml)에 붓는다. 생성물을 에테르로 3회 추출한다. 용매를 제거한 후 수득한 오일을 실리카겔상의 위치시킨 후 처음에는 디클로로메탄으로, 다음에는 디클로로메탄중 의 1%메탄올로 용출시킨다. 생성물을 함유하는 분획물을 모아서 용매를 진공하에서 제거한다. 5'-히드록실기를 더 이상의 정제없이 20분 동안 스팀 배스로 80%아세트산에서 가열하여 탈블록시킨다. 냉각 후, 트리틸카르비놀을 침전시켜 여과시킨다. 여액을 진공하에서 농축시키고 에틸아세테이트로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피화한다. 3'-클로로를 90℃에서 하룻밤동안 리튬 아지도(3당량)과 함께 HMPA에서 가열시켜 치환시킨다. 반응물을 물에 부은 후 클로로포름을 추출한다. 클로로포즘은 생성물을 함유하는데, 그 생성물을 황산마그네슘으로 탈수시킨다. 클로로포름을 제거한 후 처음에는 에틸아세테이트/메탄올로, 다음에는 물로 재결정하여 고체를 산출시킨다. 재결정화된 고체를 물에 용해시킨 후 XAO의 칼럼상에서 부착시킨다. 물로 세척한후, 상기 표제 화합물을 에탄올로 용출시킨다. 에탄올을 진공하에서 제거하여 고체상태로 상기 표제 화합물을 얻는다(융점=166.5-168.5℃).

[실시예 65]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-에리트로-β-

-

-5-에틸)우라실.

5-클로로수은-2'-데옥시우리딘은 Bergstron 및 Ruth의 방법(J.Carb Nucl, 및 Nucl., 4,257(1977)에 의해 2'-데옥시우리딘(10g, 0.04몰)로부터 제조된다. 2'-5-에틸우리딘은 Berstrom등의 방법(J.Am. Chem. Soc., 100,8106, (1978))에 의해 제조된다. 5'-히드록실기는 상기 실시예 62의 방법에 의해 보호된다. 상기 실시예 64의 방법에 의해 3'-히드록실기는 염화되고, 5'-히드록실기는 보호기 제거된다. 트레오 3'-클로로-2', 3'-디데옥시 우리딘을 1시간 동안 55℃에서 리튬아지드(5 당량)와 함께 HMPA에서 가열하여 배열을 전환시킨다. 에틸아세테이트로의 용출에 의해 실리카겔상에서 크로마토그래피하여 상기 표제 화합물을 정제한다. 적합한 분획물로부터 용매를 제거하여 바라는 바의 화합물을 얻는다(융점=112.5-115℃).

[실시예 66]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-(2-브로모비닐)우라실

5-브로모비닐=2'-데옥시우리딘(BVDU)을 Jones등의 방법(Tetahedron Letter 45, 4415(1979))에 의해 합성한다(수율은 거의 유사함). BVDU를 Horowitz등의 방법(J.Org. Chem., 31, 205(1966))에 의해 트리틸화하고 메실화한다. 생성물(4.25g, 6.6mMol)을 0.955(19.5nMol)의 LiN₃를 함유한 100ml DMF에 용해한다. 반응을 교반하면서 600ml의 얼음에 붓는다. 형성된 고체를 분리하고 검(2.48g)형태의 산출물을 크로마토그래피에 의해 정제한다. 100ml의 80% 아세트산에 용해하고 스팀 배스에서 3시간 동안 가열하여 화합물을 탈블록시킨다. 냉각된 반응을 물로 희석하고 여과하여 트리틸 카르비놀을 제거한다. 여액을 감소시켜 오일을 얻은 후 CHCl₃/CH₃OH(9 : 1 v/v)의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 적합한 분획물을 모아서 용매를 제거하여 고체를 얻은 후 수용성 메탄올로 2번 결정화한다(수율=0.66g, 1.8mMol, 27.7% ; 융점=165-166℃).

원소분석 : C₁₁H₁₂BrH₅O₄-0.5H₂O

이론치 : C ; 35.98, H ; 3.57, N ; 19.07, Br ; 21.85

실측치 : C ; 35.98, H ; 3.57 N ; 19.07, Br ; 21.76

[실시예 67]

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-5-메틸이소시토신

1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-2-메톡시-5-메틸-4(H)-피리미디논(0.5g, 2mMol)을 봄에서 암모니아로 포화된 15ml의 메탄올과 배합한다. 주위온도에서 6일 동안 방치한 후 봄을 4일 동안 65℃의 오일배스에서 가열시킨다. 반응을 건조시킨 후 CHCl₃/CH₃OH(9 : 1 v/v)로 재결정화하여 정제시킨다. 고체를 CHCl₃로 세척하고 공기 건조시켜 0.16g (0.6mMol, 30%)의 생성물을 얻는다(융점=158-160℃).

원소분석 : C₁₀H₁₄N₆O₃1/4H₂O

이론치 : C ; 44.36, H ; 5.40, N ; 31.04

실측치 : C ; 44.42, H ; 5036, N ; 31.04

[실시예 68]

1(3'-아지도- 2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-3-메틸티민

5'-트리틸-3'-트레오-3'-아지도-3'-데옥시티미딘(1.0g, 1.95mMol)및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세틸(Zemlicka, Coll. Czech. Chem. Comm., 35, 3572(1972)) (0.93g, 7.9mMol)을 96시간 동안 50ml의 CHCl₃중에서 환류시킨다. 용매를 제거하여 오일을 얻은 후 CHCl₃를 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 한다. 용매를 제거하여 0.54g의 포옴을 얻는다. 스팀 배스상에서 2시간 동안 50ml의 80%아세트산에서 포옴을 가열하여 탈블록시킨다. 반응을 H₂O로 희석한 후 트리틸 카르비놀을 여과에 의해 제거한다. 여액을 진공하에서 오일을 얻은 후 그 오일을 CHCl₃/EtOAc(2 : 1v/v)를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다. 용매를 제거하여 오일로서 상기 표제 화합물을 얻는다(0.20g).

UV(nm) : pH 1-λmzx267(ε=8100), λ(숄더)209(ε=8500)

pH 13-λmax267(ε=8000)

H¹NMR(DMSO-d₆) :δ7.56(s, 1H, H6), δ6.07(dd, 1H, H1), δ3,17(s, 3H, N-CH₃), δ1.86(s, 3H, 5-CH₃)

원소분석 : C₁₁H₁₅N₅O₄-0.4HOAc-0.3H₂O

이론치 : C ; 45.62, H ; 5.58, N ; 22.54

실측치 : C ; 45.67, H ; 5.60, N ; 22.57

[실시예 69]

(E)-3-(1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-1,2,4-테트라하이드로-2,4-디옥소-5-피리미디닐)-2-프로페노익산

2'-데옥시우리딘을 Bergstrom 및 Ruth의 방법(J.Carb. Nucl., 4,267(1977))dp 및 5-클로로 수은 유도체로 전환시킨다(수율=96%). 그 생성물(50g,1.04몰)을 (1040ml) 중의 0.1N의 Li₂PdCl₄용액 및 에틸아세테이트(104g, 1.04몰)를 함유한 800ml의 무수 MeOH에 용해시킨다. 용액을 4시간 동안 교반시킨 후 2분동안 H₂S로 처리한다. 현탁액을 셀라이트패드를 통해 여과한 후 여액을 진공하에서 건조될 때까지 증발시킨다. 잔사를 MeOH로 저작하여 고체를 얻은 후 여과 및 건조시켜 22g의 백색 고체를 얻는다. 그 생성물을 Horowitz등의 방법(J.Org. Chem., 31,205(1966))에 따라 트리틸화하고 메실화한다. 결과의 물질 중 일부(7.06g, 10.9mMol)를 NaCHO₃(0.92g, 10.9mMol)를 함유한 100ml의 무수 MeOH에 용해시킨후 6시간 동안 환류시킨다. 용매를 진공하에서 제거한 후, 잔사를 H₂O와 함께 휘젓고 여과 및 공기 건조시켜 6.1g의 백색 고체를 얻는다. 그 생성물을 LiN₃(1.63g, 33.2mMol)을 함유한 50ml DMF/1ml H₁O에 용해한 후 125℃에서 4시간 동안 가열시킨다. 반응을 200ml의 얼음에 붓고 침전물을 회수한 후 H₂O로 세척한다. 수득한 물질을 100ml의 80% HOAc에 용해한 후 4시간 동안 100℃에서 가열한다. 반응을 H₂O로 희석하고 침전물을 제거한다. 여액을 건조될때까지 증발시켜 800g의 오일을 얻는다. 수득한 오일을 20ml의 0.5N의 NaOH에 용해시킨 후 2시간동안 주위온도에서 교반시킨다. 용액의 pH를 3으로 조절한 후 침전물을 여과 및 공기 건조시켜 550mg(1.7mMol)의 표제 화합물을 얻는다(융점〉250℃).

UV(nm) : at pH1 λmax=300(ε=20400), λmin230(ε=3900), λmin=262(ε=13100)

at pH13 λmax=297, 266(ε=15600, 14800), λmin=281, 288(ε=13600, 8600)

H¹NMR(DMSO-d₆) ; δ8.37(s, 1H, H6), δ7.30(s, 1H,-CH=, 5=15.57Hz),δ6.78(d, 1H, =CH-COOH, 5=15.93HHz), δ6.1-6.06(m, 1H, 5'CH),δ4.47-4.39(m, 1H, H3'), δ3.87-3.83(m, 1H, H4),δ3.74-3.58(m, 2H, H5'),δ2.54-2.81(m, 2H, H2')

원소분석 : C₁₂H₁₃O₅N₆

이론치 : C ; 44.59, H ; 4.05, N ; 21.67

실측치 : C ; 44.45, H ; 4.06, N ; 21.60

[실시예 70]

(E)-3-[1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-1,2,3,4,-테트라하이드로-2,4-디옥소-5-피리미디닐]-2-프로페노익산

2'-데옥시우리딘을 Bergstrom 및 Ruth 방법(J.Carb.Nucl.Nucl, 4,257(1977))에 따라 5-클로로 수은 유도체로 전환시킨다(수율=96%). 생성물(50g, 1.04mol)을 MeOH(10.04ml)중의 0.1N의 Li₂PdCl₄용액 및 에틸 아세테이트 (10.4g,1.04몰)를 함유한 800ml의 무수 MeOH에 용해시킨다. 그 용액을 4시간동안 교반시킨 후 2분동안 H₂S로 처리한다. 현탁액을 셀라이트패드를 통해 여과하고 여액을 진공하에서 건조될때까지 증발시킨다. 잔사를 MeOH로 저작하여 고체를 얻은 후 여과 및 공기 건조시켜 22g의 백색고체를 얻는다. 생성물을 Horowitz등의 방법(J.Org.Chem., 31, 205(1966))에 의해 트리틸화하고 메실화한다. 상기 물질의 일부(2.7g ; 4.2mMol)을 LiN₃(0.62g ; 12.7mMol)을 함유한 무수 DMF(55ml)중에 용해한 후 24시간동안 N₂하에서 79℃로 가열한다. 반응을 400ml의 얼음에 부은 후, 침전물을 회수하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제한다.

50 : 1(v/v)의 CHCl₃/MeOH로 용출시켜 1.48g의 아지도 중간물질을 얻는다. 수득한 물질을 50%의 아세트산(100ml)으로 100℃에서 3시간동안 처리한다. H₂O로 희석하고, 수득한 현탁액을 여과한 후 진공하에서 여액을 증발시켜 710mg의 오일을 얻는다. 그 결과 얻은 오일을 50ml의 NaOH에 용해한 후 주위 온도에서 2시간동안 교반시킨다. 용액의 pH를 3으로 조절한 후 침전물을 여과하고 공기 건조시켜 240mg(0.7mMol, 50%)의 표제 화합물을 얻는다(융점=250℃).

UV(nm)at pH1λmax=301(ε=19500), λmin=230(ε=3600)λ(숄더=249(ε=12700)

at PH 13λmax=299, 267(ε=1400,13200), λmin=232, 239(ε=1200,7560)

H¹NMR(DMSO-d₆), δ3.13(s, 7H, H6), δ7.32(d, 1H,-CH=, δ=15.87Hz)δ6.78(d, 1H,

, J=15.62Hz), δ6.01-5.98(m, 1H, H1'), δ5.11-5.98(m, 1H, 5'OH), δ4.50-4.43(m, 1H, H3'),δ4.13-4.08(m, 1H, H4')δ3.80-3.75(m, 2H, H5'), δ2.77-3.67(m. 1H, H3') δ2.30-2.20(m, 1H, H2')

원소분석 : C₁₂H₁₃H₅O₆-1.5H₂O

이론치 : C ; 41.15, H ; 4.60, N ; 19.99

실측치 : C ; 41.38, H ; 4.50, N ; 20.01

[실시예 71]

(E)-3-[1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-

-

-펜토푸라노실)-1,2,3,4,-2,4,-디옥소-5-피리미디닐]-2-프로파노익산

5'-트리틸-3'-메실-5-프로페노에이트-2'-데옥시우리딘을 상기 실시예 69의 방법에 따라 제조한다. 상기 물질을 EtOH중의 10% Pd/C로 수소화하여 프로파노에이트 유도체를 얻는다. 수득한 생성물을 상기 기술된 방식에 따라 처리하여 상기 표제 화합물을 얻는다(융점=118-120℃).

UV(nm) : at pH1λmax=265(ε=9900)λmin=235(ε=3100) : at pH13λmax=265(ε=7400),λmin=247(ε=5400);

H¹NMR(DMSO-d₆)δ7.68(s, 1H, H6),δ6.11-6.06(m, 1H, H1'),δ4.45-4.35(m, 1H, H3'), δ3.85-3.80(m, 1H, H4')δ3.68-3.53(m, 1H, H5')

원소분석 : C₁₂H₁₅H₅O₆

이론치 : C ; 44.31, H ; 4.65, N ; 21.53

실측치 : C ; 44.26, H ; 4.68, N ; 21.49

[실시예 72]

[임상연구]

3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)를 2mg/kg 의 용량으로 8시간마다 1일과 2일째에 두명의 AIDS환자에게 경구 투여한다. 2일 및 3일째에 6시간마다 500mg의 프로베네시드(PB)를 투여하고 3일째에 AZT를 1회 투여한다. 3일째(프로베네시드 투여후)에 AZT의 피크(Cmax)및 골(Cmin)준위는 1일째의 대응하는 준위보다 높아 PB처리동안 AZT의 평균 반감기(t1/2)를 연장(0.88에서 1.73시간으로)하고 신체의 총 정화치(C1/F)를 3배로 감소시킨다. AZT글루쿠로나이드/우린에서의 AZT의 평균비는 PB처리후 7.3에서 2.4로 크게 감소했다. PB의 공투여전 후의 AZT의 약물 운동 파라미터를 하기표 1에 요약했다.

[표 1]

[실시예 73]

[항비루스 활성]

뉴클레오시드 운반 억제제 디피리다몰, 딜라제프 및 6-[(4-니트로벤질)티오]-9-β-

-리보푸라노실)푸린에 의한 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)의 항-프리드 백혈병 비루스(FLV)활성의 향상은 하기표 2에 기술되어 있다. FG-10 세포들은 그 세포들이 FLV로 감염되기 하루전에 플레이트상에 시드된다. 감염 1시간후 농도를 아는 테스트 화합물 또는 그 배합물을 첨가한다. 플레이트를 3일동안 항온, 배양한후, 그 배지를 새로운 McCoy의 5A배지로 치환시켜 다시 3일동안 항은 배양시킨다. 혈소판을 50%억제하는 테스트 화합물/배합물의 농도가 하기표 2에 측정되어 있다. 디피리다몰(10μM)또는 딜라제프(5μM)단독으로는 그 어떠한 것도 항 비루스 효과를 나타내지 못했다.

[표 2]

[실시예 74]

3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)의 항-ITP활성 38,000mm^-3의 소판을 지닌 환자를 트롬보시토패니아 자반중(소판수 100,000mm^-2)으로서 진단하고, 소판수가 140,000mm^-3로 증가할 때 매 6시간마다 5mg/kg의 AZT를 6주일 동안 정맥내에 투여한다. 투여후 4주일 동안 5mg/kg/4시간으로 다시 경구 투여하고, 4주일 동안 투여를 중지하면 2주일 후에는 소판의 수가 93,000mm^-3로, 4주일후에는 소판의 수가 70,000mm^-3으로 감소함을 볼 수 있다. 5주일 동안 5mg/kg/4시간 용량으로 경구 투여가 권장되는데, 이런 경우 소판의 수는 194,000mm^-3으로 증가한다. 2.5mg/kg/4시간으로 경구 투여를 감소시키면 소판의 수가 약간 감소하지만, 진단할 수 있을 정도의 ITP는 발생하지 않았다.

[실시예 75]

3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)로 카포시육종의 치료

카포시육종(KS)에 걸린 9명의 환자를 AZT로 치료하면 하기 효과가 관찰된다.

1명의 환자는 완전히 치료가 되었다.

3명의 환자는 병변이 퇴행했다.

2명의 환자에게는KS가 안전하게 남아있었다.

3명의 환자에게는 병변이 진행되었다.

약 50%의 응답은 KS에 대한 현재의 바람직한 치료제(재조합 a-인터페론)로의 치료에서 산출된 응답에 견줄만 하다.

[실시예 76]

[실험실내에서 HIV에 대한 AZT/아시클로비트 배합물의 효과]

실시예 79의 유사방법에 따라 AZT 및 아시클로비트 (ACV)의 배합물을 실험실내에서 HIV에 대한 약물 효능에 대해 테스트했다

ACV 단독으로는 거의 활성을 나타내지 않았지만(테스트된 중에서 가장 높은 16μg/ml의 농도에서는 30%이하의 보호 효과를 나타냄), 8μM의 AZT 는 100%의 보호 효과가 산출되었다

하기 표 3은 100%의 보호를 얻은데 필요한 상기 두 약물의 배합 농도이다.

[표 3]

이러한 결과는 ACV가 AZT의 항 비루스 활성을 약 3배로 증가시킨다는 것을 보여주는 것이다.

[실시예 77]

[실험실내에서 HIV에 대한 AZT/인터페론 배합물의 효과]

HIV 혈청 음성 지원자로부터 말초 혈액 단핵 세포들 (PBMC)을 헤파린화 혈액의 피콜-하이팩크(Ficoll-Hypaque)침강에 의해 산출한다. 상기 세포들을 10μg/ml의 식물성 혈구 응집소(PHA)로 처리한후, 20%의 송아지 혈청(FCS), 항생제, 1-글리타민 및 10%의 인터로이킨-2-(IL-2)를 함유한 PRMI 1640배지(Electronucleonics, Bethesda, MD)에서 성숙시킨다. PHA에 노출시킨후 4 내지 6일이 경과한 후, 세포들을 5ml의 배지를 함유한 25㎤플라스크에 4×10⁵세포/ml의 농도로 시약하고 후술되는 바에 따라 약제 및 비루스에 노출시킨다. 비루스 항은 배양의 날은 0일로서 지칭된다. 4일째에 새로운 배지를 첨가한다. 3 내지 4일바다 세포 현탁액의 일부를 분석용으로 하고 세포가 없는 배지로 치환시킨다. 14일후 실험 2와 4를 종결하고 16일후 실험 1과 3을 종결한다.

비루스 스타크(stock)는 -70℃에서 동결된 HIV-감염 H9세포들의 세포가 없는 상청 유등액이다. 비루스 스타크의 50% 조직 배양 감염 용량(TCID₅₀)은 10⁵/ml이다.

4개의 분리된 실험은 다른 지원자로부터 PBMC를 사용하여 실시되었다(표 4)실험 1에서 세포가 비루스에 노출된 후 두 약제가 첨가되었다. 40×10⁶의 세포 부분 표본(aliquots)를 10⁵의 TCID₅₀비루스가 함유된 20ml의 배지에 1시간 동안 현탁시킨후 3번 세척하고 비루스가 없는 배지에 다시 현탁시킨다. 실험 2 내지 4에 있어서, 세포들은 재조합α인터페론(rIFNαA)가 있거나 없는 배지에서 24시간동안 항온, 배양시킨후 AZT 및 비루스에 노출시킨다. 비루스를 직접적으로 소량의 배지에 첨가한 후 세척하지 않는다. 비루스 접종물은 실험2, 3 및 4에 있어서 각각 4×10³, 10³및 2×10³TCID₅₀이다. 약제 농도는 원래의 농도가 유지되도록 각 배지에서 변화시킨다.

모든 실험에 있어서, rIFNαA 및 AZT의 고정배합물을 2배로 희석하면서 연구되었다. 배합물에 사용된 rIFNαA 및 AZT의 각 농도는 또한 기준점을 제공하기 위해 단독으로 연구되었다.

모든 실험에 있어서, 중복배양은 각 농도에 대해, 감염 및 비감염된 대조에 대해 유지되었다. 실험 1에 있어서, 3.2μM의 AZT, 128유닛/ml(U/ml)의 rIFNαA 및 이러한 배합물의 5배 희석액에 대해 연구했다.

실험 2및 3에 있어서, 0.16μM AZT, 128U/ml의 rIFNαA 및 이러한 배합물의 3-4 2배 희석액을 3-4개 사용했다. 실험 4에 있어서, 128U/ml의 rIFNαA와 함께 0.08μM AZT 및 이러한 배합물의 2배 희석액을 2개 사용했다.

약 1주일 후, 비루스의 존재하에서 3 내지 4일마다 배양을 평가했다. 간접 면역 형광에 의해 세포들은 HIV항원에 대해 평가하며, 상청 유동액은 역전사(RT)활성, 비루스 수율 및 방사선 면역에 의해 HIV p24 항원에 대해 평가했다.

Chou 및 Taladay(Advances in Enzyme Regulation, (1984), 22, 27-55)의 다중약제 효과분석을 사용하여 배합된 약제 효과를 산출한다.

약제 상호 작용 평가에 대한 기하학적 방법, 즉 이소불로그람(isobologram)기술에 의해 데이타를 평가한다. 바라는바(예 : 50% 억제도)의 효과를 산출하는 AZT의 농도를 수평축에 플롯하고, 같은 정도의 효과를 산출하는 rIFNαA의 농도를 수직축에 플롯했다. 이러한 점들을 연결해서 선을 그리는데, 동일한 효과를 나타내는 배합물에서의 시약의 농도가 플롯된다. 점이 상기 선의 아래에 위치하는 경우 그 배합물은 상승효과를 나타낸다.

실험 1에 있어서, AZT의 모든 농도는 완전히 억제되어 배합된 효과를 심사하는 것은 불가능하다. 실험 2-4에 있어서, 두 약물의 상승작용은 하기표 4-9에서 볼 수 있다. 상승력의 계산은 다중 약제 효과 분석을 실험 2-4에서의 RT 데이타, 실험 2 및 3에서의 비루스 수율 데이타 및 실험 4에서의 RIA 데이타에 적용함으로써 실시된다. 이소불로그람 방법에 의해 상승 작용이 있음을 알 수 있다.

[표 4]

(a) 방법 A : 세포를 37℃에서 1시간 동안 10⁵TCID₅₀을 함유한 200ml의 배지에 현탁시킨후 세정하고 재현탁한다.

방법 B : 지정된 양의 비루스를 배지중의 2×10⁶세포에 첨가하는데 세포들은 그후 세정하지 않는다.

[표 5]

[표 6]

[표 7]

[표 8]

[표 9]

a : HIV p24 준위는 ng 단백질/ml로서 표시된다.

[표 10]

배합 지수(C. I. 값)은 상이한 퍼센트의 RT 억제도에 대한 방정식으로 계산된다. C. I 값이 1이하인 경우 상승 작용을 나타낸다. 주어진 C.I값은 방정식의 상호 비-배타 형태(mutually non-exclusive from)를 사용함으로써 계산되는데, 상호배타형태를 사용하여 산출된 값은 거의 항상 약간씩 낮은 값을 갖는다.

[실시예 78]

[실험실내의 항박테리아 상승 작용 연구]

3'-아지도-3'-데옥시티미딘 및 8개의 공지된 항박테리아 시약(표 11에 기술됨)을 각각 30분동안 N,N-디메틸포름아미드로 치료한다. 미소역가(microtiter)희석액은 Wellcotest 육즙을 사용하여 제조된다.

상승작용을 테스트하기 전에, MIC 측정은 테스트 미생물 (E. coli CN 314)에 대한 각각의 화합물에 대해 이루어졌다. 표 11은 E.coli CN 314의 각 약물에 대한 MIC종말점을 보여주는 것이다.

테스트 약물 또는 3'-아지도-3'-데옥시티미딘의 일련의 2배 희석액은 "평평한-바닥(flat-bottom)" 또는 "전이"미소역가 플레이트에서 각각 제조한다. 적합한 희석액을 함유한 플레이트를 조합하여 일련의 희석액/배합물을 얻는다. 단지 화합물만으로 구성된 대조용 테스트를 또한 포함시킨다. 사용된 약제의 가장 높은 농도는 MIC값의 2배이다(표)

테스트 플레이트를 약 5×10⁵CFU/ml를 함유한 박테리아시드 배양액으로 접종시키고 18시간동안 27℃에서 항온, 배양시킨다. 웰을 성장된 박테리아나 또는 성장되지 않은 박테리아에 대해 계수하고 MIC를 측정한다. "분율 억제 농도"(FIC)는 배합물에서의 MIC를 각 단일 시약의 MIC로 나눔으로써 MIC값으로부터 계산된다, 각 분율의 합 (분율억제 농도의 합)이 다음 계산된다. 결과의 값이 약 0.5 또는그 이하인 경우 상승 작용을 나타내는 것이다.

[표 11]

상승 작용 실험 결과는 하기표 12에 나타나 있다.

[표 12]

[실시예 79]

[실험실내에서의 3 : 아지도뉴클레오시드의 항-HIV활성]

3'-아지도뉴클레오시드(약제)의 실험실내 활성은 두개의 셀-라인, 즉, H9(OKT4⁺T-셀라인, HIV 복제인 허용되지만 HIV의 세포병리학 효과에 대해 부분적으로 내성이 있음) 및 TM3(T-세포클론, 파상풍-톡소이드에 대한 특이성이며, 치사 조사된 HTLV-I에 의해 불사되며 HIV의 세포 병리학적 효과에 대해 민감하고 성장이 빠른 것을 선택한다)에서 어세이 된다.

억제 시험은 하기 방법에 따라 실시된다. TM3세포를 항원 +조사된 (4000rad : 40Gy) 말초 혈액 단핵 세포(PBM)에 의해 자극하고, 시험하기 6일전에 15%(v/v)의 인터로이킨 2(IL-2, 렉틴-소모됨 : Cellular Products, Buffalo, NY)을 함유한 완전한 배지에 배양시킨다. ATH8세포들은 항원 자극 없이 사용되었다. 1ml당 2μg의 폴리브렌에 30분 동안 예비노출시킨후, 타게트 T-세포(2×10⁵)를 펠릿화하고, 45분동안 HHIV에 노출시킨후, 2ml의 새로운 배니에 재현탁하고 5%의 CO₂가 함유된 습윤 공기하에서 37℃의 배양 튜브에서 황온, 배양시킨다. 대조용 세포들은 상기와 유사하게 처리하지만 비루스에 노출시키지 않는다. 세포들은 IL-2 및 약제에 계속해서 노출시킨다. ATH8세포가 이러한 분석 시스템에 사용될때 세포당 5개의 비루스 입자들은 최소 세포 병리학적 용량의 비루스를 갖게 된다. 세포 공배양 실험에 있어서, 5×10⁴치사적 조사(10,000rad)HIV RF-Ⅱ-산출 H9세포 또는 비감염 H9 세포들을 2×10⁵타게트 T세포에 첨가한다. 여러시간 지점에서 살아있는 층 세포들을 트립한 청색 염료 배제 방법에 의해 현미경하의 아헤모사이로미터(ahaemocytometer)에서 계수한다.

결과가 하기표 13에 기술되어 있다.

[표 13]

[실시예 81]

3'-아지도 뉴클레오시드의 실험실내의 항박테리아 활성

하기표 14는 여러 박테리아종에 대한 3'-아지도뉴클레오시드의 실험실내의 항박테리아 활성을 최소 억제농도(MIC)로서 설명한 것이다.

사용된 표준 물질은 트레메토프림(TMP)이고, 사용된 배지는 Wellocotest 감응 테스트 아가+7%의 용균화 말혈액이다.

[표 14]

사용된 화합물은 하기와 같다 :

1) 3'-아지도-3'-데옥시-4-티오티미딘

2) 3'-아지도-3'-데옥시 -5'-O-아세틸-4-티오티미딘

3) 3'-아지도-3'-데옥시-2-데옥시-2-티오티미딘

4) 5'--아세틸-3'-아지도-3-벤조일-3'-데옥시티미딘

5) 1-(5'-0-아세틸-3'-아지도-2',3'-데옥시-β-D-에리트로-펜토푸라노실)-5-메틸-4-(1,2,4-트리아졸-1-일)-2(1H)-피리미디논

6) 1-(3'-아지도-2',3'-디데옥시-β-D-에리트로-펜토푸라노실)-2-(벤질옥소)-5-메틸-4-(1H)-피리미디논

7) 3'-아지도-3'-데옥시-2-메톡시티미딘

8) 3'-아지도-5-브로모-2',3'-디데옥시우리딘.

Claims (6)

1. R¹⁶가 2,5¹-O-안하이드로 결합인 하기식(IVa)의 화합물 또는 그 에스테르를 탄산칼슘의 존재하에 알콜사이드와 반응시키고, 가수 분해하여 R¹이 C_1-8-알콕시인 하기식(Ⅱ)의 3'-아지도 뉴클레오시드를 제조하는 방법.

   

   상기식에서, R²는 수소이고; R³는 히드록시, 메르캅토, 아미노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8-알킬-아미노, 아릴-C_1-8-알콕시, C_1-8-알콕시, 또는 C_1-8-알킬티오이며 ; R⁴는 C_1-8-알킬, 할로, 퍼할로메틸, 히드록시, C_1-8-알콕시, 시아노, 니트로, C_2-8-알케닐, C_2-8-알키닐, 또는 수소이다.

   

   상기식(IVa)에서, R^1a, R^2a, R^3a및 R^4a는 각각 R¹, R², R³, R⁴또는 이들의 전구기를 나타낸다.
2. R^1a가 C_1-8-알콕시기인 상기식(IVa)의 화합물 또는 그 에스테르를 하이드로겐 설파이드와 반응시키고, 가수분해하여 R¹이 메르캅토기인 하기식(Ⅱ)의 3'-아지도뉴클레오시드를 제조하는 방법. (식 (Ⅱ) 및 (IVa)와 기정의는 제 40 항과 동일함)
3. R^3a가 1,2,4-트리아졸일기인 상기식(IVa)의 화합물 또는 그 에스테르를 알칼리금속 메르캅탄과 반응시키고, 가수분해하여 R³가 메르캅토기인 하기식(Ⅱ)의 3'-아지도 뉴클레오시드를 제조하는 방법. (식(Ⅱ)및 (IVa)와 기정의 R², R⁴, R^1a, R^2a, R^3a및 R^4a는 제 40 항과 동일하며 R¹는 히드록시, 메르캅토, 아미노,C_1-8-알킬티오, 아릴-C_1-8-알킬, C_1-8알콕시, 시아노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8알킬아미노이다)
4. R^3a가 히드록시기인 상기식(IVa)의 화합물 또는 그 에스테르를 아민화제와 반응시키고, 가수분해하여 R³가 아미노기인 하기식(Ⅱ)의 3'-아지도뉴클레오시드를 제조하는 방법. (식(Ⅱ) 및 (IVa)와 기정의 R², R⁴, R^1a, R^1a, R^2a, R^3a및 R^4a는 제 40 항과 동일하며 R¹는 히드록시, 메르캅토, 아미노 C_1-8-알킬티오, 아릴-C_1-8알킬티오, 아릴-C_1-8-알킬, C_1-8-알콕시, 시아노, C_1-8-알콕시, 시아노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8알킬아미노이다)
5. R^1a가 수소원자인 상기식(IVa의 화합물 또는 그 에스테르를 할로겐화제와 반은시키고, 가수분해하여 R⁴가 할로인 하기식(Ⅱ)의 3'-아지도 뉴클레오시드를 제조하는 방법. (식(Ⅱ)및 (IVa)와 기정의 R², R³, R^1a, R^2a, R^3a및 R^4a는 제 40 항과 동일하며 R¹는 히드록시, 메르캅토, 아미노, C_1-8-알킬티오, 아릴-C_1-8-알킬, C_1-8-알콕시, 시아노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8알킬아미노이다)
6. 하기식(IVa') 화합물 또는 그 에스테르와 알카리 금속 아지드를 반응시키고, 가수분해시켜 하기식(II)의 3'-아지도 뉴클레오시드를 제조하는 방법.

   

   상기식(II)에서, R¹은 히드록시, 메드캅토, 아미노, C_1-8-알킬티오, 아릴-C_1-8-알킬, C_1-8알콕시, 시아노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8알킬아미노이며 ; R²는 수소이고 ; R³는 히드록시, 메르캅토, 아미노, C_1-8-알킬아미노, 디-C_1-8-알킬-아미노, 아릴-C_1-8-알콕시, C_1-8-알콕시, 또는 C_1-8-알킬티오이며 ; R⁴는 C_1-8-알킬, 할로, 퍼할로메틸,히드록시, C_1-8-알콕시, 시아노, 니트로, C_2-8-알케닐, C_2-8-알키닐, 또는 수소이다.

   

   상기식(IVa')에서, R¹, R², R³및 R⁴는 전술한 바와같고 M은 할로겐, 히드록시 또는 오르가노설포닐 옥시기를 나타낸다.