KR920000932A - 효소 및 이를 암호화하는 dna - Google Patents

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히로코 시모이
켄지 스즈키
기살바 오레스테
요시키 니시카와
다카시 가와하라
겐지 간가와
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Abstract

내용 없음

Description

효소 및 이를 암호화하는 DNA
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (21)

  1. 하기 반응을 촉매함을 특징으로 하는 , 펩티딜하이드록시글리신 N-C리아제 (PHL)활성을 갖는 폴리펩타이드.
    R-GlyOH→R-NH2
    상기 식에서 , R은 펩타이드 잔기를 나타내고, GlyOH는 아미드 결합에 의하여 상기 펩타이드 R의 C-말단에 결합된 α-하이드록시글리신 잔기를 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, 제노푸스 래비스(Xenopus laevis)로 부터 수득하는 폴리펩타이드.
  3. 제2항에 있어서, (1) 하기 반응을 촉매하고 ;
    R-GlyOH→R-NH2
    (여기에서, R은 펩타이드 잔기를 나타내고, GlyOH는 상기 펩타이드 R의 C-말단에 결합된 α-하이드록시글리신 잔기를 나타낸다) (2) SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 측정하여 약 37KDa의 분자량을 가지며 ; (3) 최적 작용pH가 약 5.4이고 ; (4) pH에 대한 안정성에 있어서, 4℃에서 24시간 동안 정치시키는 경우, 약 pH8.5에서 가장 안정하며 ; (5) 활성에 대한 온도의 영향에 있어서, 활성을 30℃, 37℃ 및 42℃에서 측정하는 경우, 30℃ 및 42℃에서도 실질적인 활성은 나타나나, 37℃에서 최대 활성을 나타내고, (6) 글리세롤 및 에티렌 글리콜에 의해 안정화되는 특성을 갖는 폴리펩타이드.
  4. 제2항에 있어서, 서열 확인 번호 1을 갖는 DNA서열 및 이의 단편 또는 이의 돌연변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드.
  5. 제4항에 있어서, 아미노산 위치 약 1 내지 약 383에서 부터 아미노산 위치 약 706 내지 935까지 연장된 폴리펩타이드.
  6. 제5항에 있어서, 아미노산 위치 383에서 부터 위치 706, 713 또는 935까지 연장된 폴리펩타이드.
  7. 제4항에 있어서, 아미노산 1 내지 60 및 363 내지 760을 함유하고 벡터 pVL-PHL의 삽입물에 의해 암호화되는 폴리펩타이드.
  8. 제1항에 따른 폴리펩타이드 또는 이의 전구체를 암호화하는 DNA서열 함유하는 재조합 DNA분자.
  9. 제8항에 있어서, 서열 확인 번호 1을 갖는 DNA서열, 또는 이의 단편 또는 이의 돌연변이체를 함유하는 DNA분자.
  10. 제8항에 있어서, 하이브리드 벡터인 DNA분자.
  11. 제10항에 있어서, 벡터 pAE-Ⅲ-202-4(FERM BP-3174), pVL-AE-Ⅲ, AcAE-Ⅲ, pVL-PHL인 DNA분자.
  12. 제10항에 있어서, 발현 벡터인 DNA분자.
  13. 제8항에 따른 재조합 DNA분자를 함유하는 형질전환된 숙주.
  14. 제13항에 있어서, pAE-Ⅲ-202-4(FERM BP-3174)로 형질전환된 이. 콜라이(E. coli)HB 101인 형질전환된 숙주.
  15. PHL 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 이의 전구체를 암호화하는 구조 유전자를 제13항에 따른 적합한 형질전환된 숙주내에서 발현시키고 생성된 폴리펩타이드를 분리시킴을 특징으로 하는 제1항에 따른 PHL활성을 갖는 폴리펩타이드의 제조방법.
  16. (a) 게놈성 DNA를 적합한 세포로부터 분리시키고, 목적하는 DNA를, 예를 들어 DNA 탐침 또는 적합한 발현 시스템을 사용하여 선별한 후, 목적하는 폴리펩타이드의 발현에 대해 스크리닝하거나, (b) 적합한 세포로부터 mRNA를 분리시키고, 목적하는 mRNA를, 예를 들어 DNA 탐침과의 하이브리드화 또는 적합한 발현 시스템에서의 발현에 의해 선별한후, 목적하는 폴리펩타이드의 발현에 대해 스크리닝하고, 목적하는 mRNA에 대해 상보적인 일본쇄 cDNA를 제조한 후, 이로부터 이본쇄 cDNA를 제조하거나, (c) cDNA라이브러리로부터 cDNA를 분리시키고, 목적하는 cDNA를, 예를들어 DNA탐침 또는 적합한 발현 벡터를 사용하여 선별한 후, 목적하는 폴리펩타이드의 발현에 대해 스크리닝하거나 , (d) 단계 (a), (b) 또는 (c)의 이본쇄 DNA를 적합한 벡터내에 삽입시키고, 적합한 숙주 세포를 수득된 하이브리드 벡터로 형질전환시킨후, 형질전환되지 않은 숙주세포로부터 목적하는 DNA를 함유하는 형질전환된 숙주세포를 선별하고, 형질전환된 숙주 세포를 증식시키며, 이어서 목적하는 DNA를 분리시키거나, (e) 본 발명의 하이브리드 벡터로부터 PHL활성을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA단편을 임의로 벡터로 부터 유도된 플랭킹(flanking)서열 또는 링커 서열과 함께 절단시키거나, (f) PHL활성을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA분자를 화학적 합성에 의해 시험관내에서 합성함을 특징으로 하는, 제1항에 따른 재조합 DNA분자의 제조방법.
  17. 형질전환 조건하에서 적합한 숙주 세포를 임의로 선별 표지물 유전자와 함께, 제8항의 재조합 DNA분자로 처리하고, 형질전환체를 선별함을 특징으로 하는, 제13항에 따른 형질전환된 숙주의 제조방법.
  18. 통상의 방법에 따라서 제1항에 따른 폴리펩타이드를 제조하는 방법.
  19. C-말단에 글리신을 갖는 펩타이드를 펩티딜글리신 α-아미드화 모노옥시게나제(PAM)와 PHL활성을 갖는 폴리펩타이드 모두와 반응시킴을 특징으로 하는, 아미드화된 C-말단을 갖는 펩타이드의 제조방법.
  20. C-말단에 하이드록시글리신을 갖는 펩타이드를 PHL활성을 갖는 폴리펩타이드와 반응시킴을 특징으로 하는 아미드화된 C-말단을 갖는 펩타이드의 제조방법.
  21. C-말단에 추가의 하이드록시글리신 단위를 갖는 사람 칼시토닌.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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