Claims (13)
(a) (ⅰ)D,L-카르티닌 및/또는 크로토노베타인을 함유하는 배양액중에서 염기성 조건하에 균주를 배양하고,(ⅱ)배양된 엔테로박테리아세 세포를 분쇄하여 조 단백질 추출액을 수득하고,(ⅲ)소수성 음이온 교환수지를 지지체로 하는 칼럼으로 조 단백질 추출액을 크로마토그라피 처리하여 지지체상에 카르티닌 히드롤리아제를 분리 고정시킨후 단백질 획분 및 효과발생제를 용출시키고,(ⅳ)용출액을 한외여과하고 효과발생제 함유 여액을 수득하여, 단백질 및 카르티닌히드롤리아제를 분리하고,(b) 크로토노베타인 또는 크로토노베타인 유도체를 효과발생제 존재하에 카르티닌히드롤리아제로 반응시켜, L(-)-카르티닌을 생성시키고, (c)미반응크로토노베타인 및 효과발생제로부터 L(-)-카르티닌을 분리시킴을 특징으로 하여, 크로토노베타인 또는 크로토노베타인 유도체를 입체특성 수화반응시켜, L(-)-카르티닌을 제조하는 방법.(a) culturing the strain under basic conditions in a culture solution containing (iii) D, L-cartinine and / or crotonobine, (ii) culturing the cultured enterobacteriaceae cells to obtain a crude protein extract, (Iii) chromatographically treat the crude protein extract with a column with a hydrophobic anion exchange resin as a support to separate and fix the cartinine hydrolase on the support, elute protein fractions and effect generators, and Filtration to obtain an effector-containing filtrate to separate the protein and the carotenoid hydrolase, and (b) a crotonobbetaine or crotonobbetaine derivative to react with a cartinine hydrolase in the presence of the effector, Produces L (-)-cartinine and (c) separates L (-)-cartinine from unreacted crotonobbetaine and effector, thereby producing crotonobbetaine or crotono By the three-dimensional characteristics Hydration the other derivatives, L process for preparing a non-Cartier - (-).
제1항에 있어서, 사용균주가 에세리히아(Escherichia) 프로테우스(Proteus) 시트로박터(Citrobacter) 및 살모낼라(Salmonella)속의 균주인 제조방법.The method according to claim 1, wherein the strain to be used is a strain of the genus Escherichia Proteus Citroacter and Salmonella.
제2항에 있어서, 균주를 대장균(Escherichia coli), 프로테우스 불가리스 (Proteus vulgaris), 프로테우스 미라비리스(Proteus mirabilis), 시트로박터 프로인디(Citrobacter freundii) 살모넬라 티피무륨(Salmonella typhimurium), 살모넬라 아나툼(Salmonella anatum) 및 살모넬라 코트부스(Salmonella cottbus)종의 균주로부터 선택하는 제조방법.The strain according to claim 2, wherein the strain is Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii Salmonella typhimurium, Salmonella anatum (Salmonella anatum) and Salmonella cottbus (Salmonella cottbus) species of production method selected from.
제3항에 있어서, 대장균 종의 균주가 대장균 044K74, 대장균 055K79, 대장균 0111K58 또는 대장균 0114K90인 제조방법.The method according to claim 3, wherein the strain of E. coli species is E. coli 044K74, E. coli 055K79, E. coli 0111K58 or E. coli 0114K90.
제1항에 있어서, (a)(ⅲ)과정의 지지체가 페닐세파로스, 히드록시아파타이트, DEAE-세파로스 또는 DEAE-셀루로스인 제조방법.The method according to claim 1, wherein the support of (a) (iii) is phenylsepharose, hydroxyapatite, DEAE-sepharose or DEAE-cellulose.
제1항에 있어서, (b)과정을 수행하기전에 카르티닌히드롤리아제를 강화시키는 제조방법.The method according to claim 1, wherein the cartinine hydrolyase is fortified prior to the process (b).
제1항에 있어서, 지지체가 고정시킨 카르티닌히드롤리아제를 효과발생제 함유용액과 접촉시켜 활성화하는 제조방법.The method according to claim 1, wherein the carotenoid hydrolase to which the support is immobilized is activated by contact with a solution containing the effector.
제1항에 있어서, 지지체에 고정시킨 카르티닌히드롤리아제를 효과발생제와, 크로토노베타인 또는 그 유도체를 함유하는 용액과 접촉시켜 활성화하는 제조방법.The method according to claim 1, wherein the carotenoid hydrolase immobilized on the support is activated by contact with a solution containing an effect generator and crotonobine or a derivative thereof.
제1항에 있어서, (b)과정에서 1내지 10m㏖의 크로토노베타인 또는 그 유도체를 함유하는 용액을 24°내지 40℃,pH6 내지 9에서 카르티닌히드롤리아제와 접촉시키는 제조방법.The method according to claim 1, wherein the solution containing 1 to 10 mmol of crotonobibetaine or a derivative thereof is contacted with a cartinine hydrolase at 24 ° C to 40 ° C, pH 6-9 in step (b).
제9항에 있어서, 5m㏖/1의 크로토노베타인 용액을 37℃,6㎖/시간의 유속, pH7.5의 상태에서 효과발생제 존재하에 고정된 카르티닌히드롤리아제 함유 칼럼에 도입하는 제조방법.10. The method according to claim 9, wherein a 5 mmol / 1 crotonovebetaine solution is introduced into a fixed cartinine hydrolase-containing column in the presence of an effector at a flow rate of 37 DEG C, 6 mL / hour, and pH 7.5. Manufacturing method.
제1항 또는 제9항에 있어서, 과정을 연속적으로 실시하는 제조방법.The method according to claim 1 or 9, wherein the process is carried out continuously.
제1항 또는 제9항에 있어서, 미반응크로토노베타인을 L(-)-카르티닌으로 부터 분리하여 재사용하는 제조방법.The method according to claim 1 or 9, wherein the unreacted crotonobine is separated from L (-)-cartinine and reused.
제1항 또는 제9항에 있어서, 크로토노베타인 유도체가 크로토노베타인염, 크로토노베타인니트릴, 크로토노베타인의 에스테르 또는 크로토노베타인의 아미드인 제조방법.10. The method according to claim 1 or 9, wherein the crotonobine derivative is a crotonobine salt, crotonobbetanitrile, an ester of crotonobtaine or an amide of crotonobbetaine.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.