KR840004276A - 진핵세포를 형질 전환시키기 위한 보조 dna 함유 벡터계 - Google Patents
진핵세포를 형질 전환시키기 위한 보조 dna 함유 벡터계 Download PDFInfo
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
Claims (105)
- 이형 DNA를 진핵 세포에 도입시키기 위하여 사용한 생성 유전자와 보조 DNA로 이루어진 벡터계.
- 제1항에 있어서, 보조 DNA가 해독 활성화제를 코드화한 유전자, 트랜스-활성 전사 활성화제를 코드화한 유전자, 또는 형질전환될 진핵세포로 부터의 게노믹 DNA 분절로 이루어짐을 특징으로 한 벡터계.
- 제1항에 있어서, 선택유전자가 또한 함유되어 있는 벡터계.
- 제3항에 있어서, 생성 유전자, 선택 유전자 및 보조 DNA가 공유적으로 연결되어 있지 않은 벡터계.
- 제1항에 있어서, 보조 DNA가 담체 DNA가 아닌 벡터계.
- 제1항에 있어서, 생성 및 선택유전자가 공유적으로 연결되어 있지 않는 벡터계.
- 제2항에 있어서, 보조 DNA는 해독 활성화제를 코드화 한 유전자로 이루어진 것임을 특징으로 하는 벡터계.
- 제1항에 있어서, 프로모터가 생성 유전자를 적절히 함유하는 있는 벡터내에 존재하여 생성 유전자의 발현을 조절함을 특징으로 하는 벡터계.
- 제8항에 있어서, 프로모터가 해독활성화제를 코드화한 유전자로 이루어진 보조 DNA와 삼련 리더를 함유하고 있는 아테노비루스 주요 후기 프로모터임을 특징으로 하는 벡테계.
- 제9항에 있어서, 프로모터가 아데노비루스 VA 유전자인 해독 활성화제를 코드화한 유전자와 삼련리더를 함유하고 있는 아데노비루스 주요 후기 프로모터임을 특징으로 하는 벡터계.
- 제10항에 있어서, 생성 및 선택 유전자가 프로모터의 조절하에 결합되어 있는 반면에 해독 활성화제를 코드화한 유전자는 생성 또는 선택 유전자에 결합되어 있지 않는 선택유전자를 함유하고 있는 벡터계.
- 제2항에 있어서, 보조 DNA가 형질 전환될 진핵 세포로 부터의 게노믹 DNA 분절임을 특징으로 하는 벡터계.
- 제12항에 있어서, 다수의 무작위 상이한 분절들로 이루어져 있는 벡터계.
- 제13항에 있어서, 분절들이 생성 및/또는 선택 유전자들을 함유하고 있는 벡터에 결착되어 있는 벡테계.
- 제14항에 있어서, 분절들이 생성 및/또는 선택 유전자들을 함유하고 있는 벡터의 5' 및 3' 말단에 결착되어 있는 벡터계.
- 제2항에 있어서, 보조 DNA가 트랜스-활성 전사 활성화제를 코드화 한 유전자로 이루어져 있음을 특징으로 하는 벡터계.
- 제7항에 있어서, 보조 DNA가 트랜스-활성 전사 활성화제를 위한 와일드-형 프로모터로 이루어져 있음을 특징으로 하는 벡터계.
- 제6항에 있어서, 유전자가 E1A 폴리오마 거대 T 안티겐, SV40 거대 T 안티겐 또는 myc 유전자인 벡터계.
- 제18항에 있어서, 트랜스-활성 전사 활성화 유전자가 생성 및/또는 선택 유전자를 함유하고 있는 벡터에 결착되어 있지 않은 벡터계.
- 제1항에 있어서, 생성 유전자는 인간 조직인 플라스미드 활성화제를 코드화한 것임을 특징으로 하는 벡터계.
- 세포를 형질전환 시키기에 적절한 조건하에서 제1항의 벡터계를 진핵 세포에 도입시키는 방법.
- 제21항에 있어서 세포가 골수세포인 방법.
- 제21항의 방법에 의해 제조된 형질전환체.
- 생성물이 축재될 때까지 제23항의 형질전환체를 배양시킨 후, 이로부터 생성물을 회수함을 특징으로 하는 생성물의 제조방법.
- 플라스미드 P91023(B).
- 제25항에 있어서, 생성유전자를 함유하고 있는 플라스미드.
- 제26항의 플라스미드로 형질전환된 진핵세포.
- 제27항에 있어서, 세포가 CHO 세포임을 특징으로 하는 세포.
- 플라스미드 pRK1-4.
- 제29항에 있어서, 생성 유전자를 함유하고 있는 플라스미드.
- 제30항의 플라스미드로 형질 전환시킨 진핵세포.
- 제31항에 있어서, 세포가 CHO 세포임을 특징으로 하는 세포.
- 제1항에 있어서, 면역 글로불린인핸서를 함유하고 있는 벡터계.
- 제33항의 벡터계를 함유하는 세포.
- 제34항에 있어서, 세포가 골수세포임을 특징으로 하는 세포.
- 제1항에 있어서, SV40 인핸서, 아데노비루스 주요 후기 프로모터, 아데노비루스 삼련리더, SV40 폴리아데닐화부 및 아데노비루스 VA 유전자를 함유하고 있는 박테리아성 플라스미드로 이루어져 있음을 특징으로 하는 벡터계.
- 제36항에 있어서, 상기 박테리아성 플라스미드가 SV40 복제근원인 벡터계.
- 제36항에 있어서, 박테리아성 플라스미드가 인트론을 형성하기 위하여 3' 및 5' 접합부를 함유하고 있는 벡터계.
- 제36항에 있어서, 박테리아성 플라스미드가 생성유전자의 3' 위치에 있는 코드화되지 않은 DHFR 3' 서열을 이루고 있는 벡터계.
- 제36항에 있어서, 박테리아성 플라스미드가 DHFR 발현 가능한 DHFR 전사서열로 이루어져 있는 벡터계.
- 제39항에 있어서, DHFR 전자 서열이 SV 40 초기 프로모터, SV 40 초기 플리아데닐화부 및 DHFR 유전자로 이루어져 있는 벡터계.
- (a) 세포군내의 다른 세포보다 생성물을 보다 바람직한 형태로 발현하는 하나이상의 세포를 세포군으로부터 선택하고, (b) 선택된 세포를, 표현형의 발현의 변화에 따라 선택할 수 있도록 한 조건하에, 연속되는 세포군으로 배양시키고, (c) 연속된 군내의 다른 세포보다 생성물을 보다 바람직한 형태로 발현하는 하나 이상의 세포를 연속된 세포군으로 부터 선택함을 특징으로 하여 선택성 표현형 및 생성물이 발현되도록 형질전환시키고 표현형의 발현에 따라 선택할 수 있도록한 조건하에 세포군으로 배양시킨 진핵 세포를 서브클로우닝 하는 방법.
- 제42항에 있어서, (a) 단계의 선택유전자가 클로운이며, 각각의 클로운은 단일 형질 전환된 세포로 성장함을 특징으로 하는 방법.
- 제42항에 있어서, 약 2 내지 약 500개의 세포 클로운이 (a) 단계에서 선택된 방법.
- 제42항에 있어서, 다수의 클로운이 (a) 단계에서 선택되며, 이 클로운들은 혼합되어 (b) 단계에서 함께 성장하며, 단계(b)의 세포군을 희석한 후, 통계적으로 각 콘테이너당 하나의 세포가 분포되도록, 다수의 콘테이너에 분배한 다음, 이 콘테이너들을 배양시켜 생성물의 최대 수득율을 기준으로 콘테이너 내에 있는 클로운을 선택함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 생성물이 선택성 표현형을 나타내는 방법.
- 제1항에 있어서, 생성물이 선택성 표현형을 나타내지 않는 방법.
- 제1항에 있어서, 단계(b)의 조건이 선택성 표현형의 증가된 발현이 선택되도록 계획됨을 특징으로 하는 방법.
- 제46항에 있어서, 진핵세포가 동물세포 또는 이 계통의 세포인 방법.
- 제49항에 있어서, 동물세포가 척추동물 세포이거나 척추동물세포로 부터 유도된 세포인 방법.
- 제49항에 있어서, 척추동물 세포가 차이니스 햄스터 난소 세포인 방법.
- 제48항에 있어서, 단계 (a),(b) 및 (c)가 연속적으로 반복되는 방법.
- 제50항에 있어서, 연속 세포 집단으로 부터 선택한 세포를, 선택 유전자의 발현이 증가되도록 선택하지 않은 조건하에서 더 배양시킴을 특징으로 하는 방법.
- 제53항에 있어서, 단계 (a),(b) 및 (c)를 선택 유전자의 발현이 증가되도록 선택하지 않은 조건하에서 배양시킨 후 반복 수행하는 방법.
- 제49항에 있어서, 세포가 선택유전자 및 생성유전자와의 공형질 전환에 의해 형질전환되는 방법.
- 제42항에 있어서, 표현형이 약제 또는 세포 표피 마커의 존재에 내성인 방법.
- 제42항에 있어서, 표현형이 형질 전환전의 세포에 의해 유용하지 않는 영양물을 가동화할 수 있게 하는 방법.
- 제55항에 있어서, 공형질전환 유전자가 공유적으로 결합되어 있지 않는 방법.
- 제55항에 있어서, 공형질 전환된 유전자가 인핸서, 인핸서-종속 프로모터 및 서열순서에서 프로모터로 부터 하향 위치에 있는 생성유전자, 선택유전자 및 폴리아데닐화부를 함유하고 있는 벡터내에서 공유적으로 결여되어 있는 방법.
- 제59항에 있어서, 생성 유전자에 대한 최후의 뉴클레오티드 정지코돈과 선택 유전자에 대한 첫번째 뉴클레오티드 개시 코돈이 직접적으로 결착되는 방법.
- 제55항에 있어서, 공혈질전환된 유전자가 공유적으로 결합되어 있지 않는 방법.
- 제61항에 있어서, 생성 유전자가 세포에 의해 인지된 인핸서, 프로모터 및 프로모터로 부터 서열적으로 하향 위치에 있는 생성유전자 및 풀리아데닐화부를 함유하고 있는 벡터내에서 존재하는 방법.
- 제62항에 있어서, 인핸서가 폴리아데닐화부와 생성유전자 사이의 프로모터중 5'에 위치하거나 폴리아데닐화부로 부터 3'에 위치하는 방법.
- 제63항에 있어서, 인핸서가 비루스성 인핸서인 방법.
- 제64항에 있어서, 인핸서가 수득되는 것으로 부터, 세포가 비루스에 대해 정상적으로 허용되는 방법.
- 제63항에 있어서, 인핸서가 비루성이 아닌 진핵성 인핸서인 방법.
- 제66항에 있어서, 인핸서가 면역 글로불린 인핸서이고, 세포가 면역글로불린 분비 골수세포선인 방법.
- 제62항에 있어서, 벡터가 복제 비루스근원을 함유하고 있는 방법.
- 제64항에 있어서, 인핸서가 원숭이의 비루스 40, 폴리오마 비루스, 소과의 유두종 비루스, 아데노비루스, 로오스 사르코 마루비스 또는 헤르페스 심플렉스 비루스로 부터 수득된 것인 방법.
- 제62항에 있어서, 반복체내의 벡터내에 존재하는 방법.
- 제70항에 있어서, 인핸서 반복체가 탠뎀인 방법.
- 제42항에 있어서, 세포가 생성물을 발현하는 선택적 패션이 더 많은 양이나 활성의 생성물을 발현시키는 방법.
- 제42항에 있어서, 생성물이 효소, 호르몬, 전효소, 효속억제제 또는 효소 활성화제인 방법.
- 제42항에 있어서, 생성물이 이황화물 브리지를 함유하고 있는 글리코실화된 단백질인 방법.
- 제42항에 있어서, 생성물이 혈액 응고물과 섬유소용해 단백질로 부터 선택한 인간 단백질인 방법.
- 제75항에 있어서, 단백질이 조직 플라스미노겐 활성화제인 방법.
- 제47항에 있어서, 선택성 표현형이 메토트렉세이트에 내성이거나 하이포산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 함유하고 있는 매질내에서 성장 가능한 것인 방법.
- 제46항에 있어서, (c)단계에서 선택한 세포를 생성 단백질이 유전자형적으로 상이한 선천성 숙주에 접종시킴을 특징으로 하는 방법.
- 제78항에 있어서, 세포가 인간의 간세포인 방법.
- 제42항에 있어서, 가장 큰 작용이나 가장 많은 양의 생성물을 제조하는 세포를 위한 세포 매질내에서 적어도 일부의 세포를 분석한 후, 이러한 세포의 전형적인 염색체 DNA를 생성유전자로 혼성화할 수 있는 라벨된 DNA 프로브로 라벨시킨 다음, 이 전형적인 염색체들을 관찰하여 생성물에 대한 DNA 코딩이 세포매질 내에 있는 다른 세포들과 비교하여 볼때 비교적 소량의 염색체 부위에서 발견되는 세포를 선택하는 방법에 의해 세포를 선택함을 특징으로 하는 방법.
- 제42항에 있어서, 염색체 특성이 형질전환되기 전에 세포내에 있는 염색체의 특성과 가장 유사한 세포를 선택하여 수행하는 방법.
- 제81항에 있어서, 특성이 형색체의 길이에 있으며, 이중 소형 염색체, 브로우큰 염색체, 또는 전위 염색체를 함유하고 있는 세포를 선택하지 않는 방법.
- 선택 및 생성 유전자가 세포 염색체에 결착되어 있는 제47항의 방법에 의해 제조된 형질 전환된 세포.
- 제48항의 형질전환된 세포를 배양한 후, 이로부터 생성물을 회수하는 것으로 이루어진 생성물을 합성하는 방법.
- 진핵 세포에 의해 인지된 프로모터 및 서열적으로 하향 위치에 있는 프로모터의 조절하에 생성 유전자의 해독 말단 코돈에 있는 최종 뉴클레오 티드로부터 선택유전자의 해독 개시 코든에 있는 첫번째 뉴클레오티드로 연장되는 포스포디에스테르 의해 선택 유전자에 직접적으로 결찰된 생성유전자에 직접적으로 결찰된 생성 유전자를 함유하고 있는 벡터.
- 제85항에 있어서 생성 유전자가 인간조직의 플라스미노겐 활성화제를 코드화한 것인 벡터.
- 제85항에 있어서, 인핸서와, 하향위치에 있는 선택유전자 중의 3', 프로모터 부재시의 진핵 유전자 및 폴리아데닐화부를 함유하고 있는 벡터.
- 진핵세포를 제85항의 벡터로 형질 전환시키는 방법.
- 제88항에 있어서, 세포가 골수 또는 색소 세포선인 방법.
- 제88항의 방법에 의해 제조된 형질 전환된 세포.
- 제89항의 세포를 배양시킨 후, 이로 부터 생성물을 회수함을 특징으로 하여 생성물을 제조하는 방법.
- 하향위치에 있으며 인핸서, 인핸서-종속 프로모터, 생성유전자, 해독되지 않은 DNA부 및 폴리아데닐화 부위로 이루어진 제1벡터와 이 첫번째 벡터에 결착되지 않았으며 하향 위치에 있는 인핸서-종속프로모터, 선택유전자 및 폴리아데닐화 부위로 이루어진 제2벡터로 이루어진 벡터계.
- 생성 유전자가 인간 조직의 플라스미노겐 활성화제를 코드화한 것인 제42항에 의한 벡터계.
- 진핵 면역글로불린 유전자 인핸서, 면역글로불린 유전자 이외의 생성유전자 및 선택유전자를 함유하고 있는 벡터계.
- 생성 유전자를 선택 유전자에 비해 대과량의 몰량으로 사용한 제92항의 벡터계를 이용한 형질전환 방법.
- 세포를 형질전환 시키기에 적절한 조건하에서 진핵세포를 제92항 내지 제94항의 벡터계를 사용하여 형질전환시키는 방법.
- 제96항에 있어서, 세포가 흑색소 세포인 방법.
- 제95항의 방법에 의해 제조된 형질전환체.
- 생성물의 축재될 때까지 제98항의 형질전환체를 배양시킨 후, 이로 부터 생성물을 회수하여 생성물을 제조하는 방법.
- 제42항에 있어서, 세포를 다수의 선택유전자로 형질 전환시키는 방법.
- 인핸서와 이 인핸서의 영향하에 전사되는 생성 유전자를 함유하고 있는 제1벡터와, 인핸서의 영향하에 전사되지 않는 선택 유전자를 함유하고 있는 제1벡터에 결합되어 있지 않는 제2벡터로 이루어진 공형질전환 벡터계.
- 제88항 또는 제96항에 있어서, 형질전환되기 전에 세포가 생성물을 발현하지 않는 방법.
- 진핵 세포를 생성 유전자와 선택 유전자로 형질 전환시켜 그의 표현형을 변화시키는 공형질전환방법에 있어서, 상기 세포를 다수의 선택유전자(이들은 각각 표현형의 일부분을 나타낸다)로 공형질 전환시키는 개선된 방법.
- 진핵세포를 인간의 tPA의 존재하에 플라스민이 생성되지 않도록 배양 매질내에서 성장시킴을 특징으로 하여 인간의 tPA 합성하기 위하여 형질 전환된 진핵세포를 배양시키는 방법.
- 제104항에 있어서, 배양매질에 플라스미노겐이 거의 존재하지 않는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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