KR790001865B1 - 인돌초산(醋酸)의 검출법 - Google Patents

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내용 없음.

Description

인돌초산(醋酸)의 검출법

제 1 도는 메귀리속 자엽초의 만곡시험.

제 2 도는 인간 식도암에 있어서의 인돌초산의 량.

제 3 도는 S자형 결장암.

제 4 도는 암환자에 있어서의 뇨중의 인돌초산의 량.

본 발명은 인돌초산의 검출법에 관한 것이다. 일반으로 고등동물 생체내에서 일어나는 담백대사, 특히 트리프토판 대사는 여러가지 원인에 의하여 그 대사 경로가 다른 것으로 알려져 왔다. 즉 정상적인 생체에 있어서는 트리프토판 피로라제가 관계하여 다음표에서 나타내는 대사경로를 거치는 것으로 알려졌다.

한편 담암생체(擔癌生體)에 있어서는 암변성 세포의 증식에 수반하여 트리프로판 피로라제의 활성이 저하하고 대신 생체방어 반응으로서 트리프로판-5-히드록시라제를 위시하여 여러가지의 특이적 담백분해 요소가 대사에 크게 관여하며, 그 결과 담암세포주변부 및 뇨중에 정상적인 건강인에서는 전혀 존재하지 아니하거나 또는 극히 미량으로 밖에 존재하지 아니한 비정형적 담백분해산물이 산생되는 것은 아브델할덴(Abderhalden)에 의하여 연구추정되어 왔으며 다음표와 같은 이상(異常)대사 경로를 거치는 것이 추정된다.

이들 이상 대사 산물은 뇨중에 배설되는 것으로서 본 발명자등은 악성종양과 관련이 있는 물질을 다음의 방법으로 검색하였다.

먼저 담암세포중의 인돌초산을 아베하칼베츄어 시험(Avehacarveture test) 도면(Ⅰ)에 의하여 도면(2), 도면(3)과 같이 정량적 파악에 성공하여 정상세포와 담암세포와의 사이에 명백히 양적 유의차(有意差)를 발견하였다.

또 여러가지의 인돌유도체는 또한 뇨중으로 이행하는 담암세포중의 인돌초산으로 대표되는바 극히 미량이며 또한 뇨중에는 화학적 활성을 보유하는 다른 많은 물질이 여러가지로 복잡하게 용해되어 존재하고 있기 때문에 암세포증식에 의한 이들의 특이적 산생물을 검출, 확인, 정량하는 것은 극히 곤란하였으나 특수한 방법으로서 뇨를 사전 처리하여 뇨중에 극히 미량용해 존재하고 있는 인돌초산을 대표로하는 담암세포의 대사이상 산물인 수종의 인돌유도체를 담암세포중의 인돌초산 정량법의 준용에 의하여 정량하고 동일하게 하여 암환자의 뇨와 정상건강인의 뇨와의 사이에 유의차를 확인하였다. (도면 4) 즉 건강 생체 및 악성종양 생체에서 배설된 뇨를 각각 증발 농축하고 석유에테르 및 에테르의 순서로 세정한후 pH를 8.5-9.0으로 하고, 또한 다시 에테르로 씻어서 알카리성 이행(移行)물질을 제거하고, 주석산소다를 가하여 pH를 3.5-4.0으로 조정하고 에테르로 산성 이행물질은 추출한다.

이 에테르에 의한 추출은 수회 반복하여 에테르 추출액을 시료로 한다. 이와같이하여 조제된 시료에 대하여 분광학적 방법과 여지(濾紙)크로마토 그라프법 및 아베나 신장 테스트를 행하였다.

따로 악성 종양부의 절제 또는 생검 재료의 호모지네이드를 검체로하고 뇨의 경우와 마찬가지의 조작을 행하여 시료를 조제하고 절기와 같은 시험을 행하였다.

그 결과 악성 종양생체로 부터의 배설뇨 및 악성 종양부의 양자에 공통된 물질로서 이상 대사 산물중의 하나인 인돌초산(醋酸)이 확인되었다. 기타 R_f치 0.7부근에 미확인 물질의 존재도 아울러 인정되었다.

또 악성 종양부 절제후의 뇨중의 인돌초산량을 전기와 같이 하여서 측정하였던 바 절제후 약 2주간으로 건강 생체의 뇨중 인돌 초산량과 동량으로 되는 것이 인정되었다.

본 발명자 등은 이들의 시험결과에서 뇨중의 인돌초산 또는 미확인 물질을 정량에 의하여 용이하게 소화기관계 악성 종양을 진단할 수 있음을 알고서 인돌초산의 간이하고 또 확실한 시험법을 탐구하였다.

또한 본 발명은 암환자의 뇨중에서 극히 간편하며 또한 적확한 화학적 반응에 의한 인돌초산의 확인의 목표로하여 강산성하에서 예컨대 황산 산성하에 있어서 치옥소테트라 히드로피리딘 및 그유도체 또는 치옥소피페리진 또는 그 유도체와의 화학적 반응에 의해서 안정된 정색(呈色)이 얻어지는 시약을 발명하였다.

그 결과 3, 3-디 에칠(혹은 디메칠)치옥소 테트라 히드로피리딘 또는 치옥소 피페리진을 황산과 알콜의 혼액에 용해한 용액을 인돌초산의 용액에 가하면 담도색 내지 적자색을 나타내는 것을 발견하였다.

본 발명은 이와 같은 것에 기초를 둔것으로 황산과 알콜의 혼액중에 치옥소 테트라 히드로피리딘 혹은 그 유도체 또는 치옥소 피페리진 혹은 그 유도체를 용해한 인돌초산 검출용 시약을 이용한 검출법이다.

또한 본 발명은 황산과 알콜의 혼액중에 치옥소 테트라 히드로피리딘 혹은 그 유도체 또는 치옥소 피페리진 혹은 그 유도체를 용해한 인돌초산 검출용 시약에 인돌초산 함유액을 가하여 반응시킨 후 반응액을 비색(比色)하는 것을 특징으로 하는 인돌초산의 검출법이다.

즉 담암세포의 이상대사에 의하여 산생되며 뇨중에 이행하는 5-히드록시 인돌황산, 5-히드록시 인돌초산, 인돌초산 등의 인돌 골핵(骨核)의 C-2의 활성 메칠렌과 본원 검출시약의 활성 메칠렌이 산화적 커플링(coupling)을 이르키고 또한 분자내 안정화로서 수소 결합이 행하여져서 그들의 함량(암세포의 진행도)에 의하여 담도색(桃色)-적자색(赤色)을 띄우는 것이 확인되었다.

본 발명을 실시함에 즈음하여서는 알콜 100ml중에 치옥소테트라 히드로 피리딘 혹은 그 유도체 또는 치옥소 피페리진 혹은 그 유도체 3-8g을 용해하고, 별도로 pH-2.2이하의 황산 약 890ml에 피리딘 약 0.3-0.8g을 용해하고 양용액을 균일하게 혼합하여 전량을 1ℓ로 하여 검출액으로 한다.

또한 피리딘은 정색(呈色)에 첨여하는 물질을 안정시키며, 또한 정색물질의 아밀 알콜층으로서의 이행을 용이하게하기 때문에 사용되는 것으로 발색기구에는 관계가 없고 다른 용매를 대용할 수도 있다.

이 검출액 2ml를 될 수 있으면 이른 아침에 체취한 뇨 18ml에 가하여 잘 흔들어 합치고 될수 있으면 실온에서 24시간 방치한후 항온층 중에서 약 10분간 가끔가끔 흔들어 합치면서 40-45℃로 가온한다. 실온에서 빙냉후 아밀알콜 2-3ml을 가하여 천천히 흔들어 섞어서 상층에 분리한 아밀 알콜층의 색조를 판정한다.

별법으로는 검체 18ml에 검출액 2ml를 가하여 즉시 항온조중에서 40-45℃로 약 10분간 가온하고 실온에서 방냉후 아밀알콜 2-3ml를 가하여 천천히 흔들어 섞어서 24시간 실온으로 방치한후 아밀 알콜의 색조를 판정한다.

전기한 아밀 알콜층이 담도색 내지 적자색을 나타낼 경우에는 뇨중에 일정량 이상의 인돌초산 혹은 미확인 물질의 존재를 표시하고 양성으로 판정한다. 아밀 알콜층이 무색이나 또는 검체의 색과 변하지 않을 경우에는 뇨중에 인돌 초산 혹은 미확인 물질이 존재하지 아니하는 것을 표시하는 것으로 음성으로 판정한다.

판정에는 분광 광도계를 이용할 수가 있다.

반응 양성의 경우에는 500mμ전후로 흡수의 극대를 볼수가 있으나 음성의 경우에는 대강 평평한 우하(右下)의 곡선을 얻을수가 있으며 흡수극대도견형(肩形)을 이루는 것도 볼수가 없다.

또 검체가 색소 계통 약제의 복용이나 당뇨병등 때문에 현저하게 착색하고 있을 경우에는 검출액을 가하기 전에 미리 벤젠을 가하여 흔들어 섞고 벤젠층에 색소를 이행시켜서 제거한후 조작하면 좋다.

본 발명에 사용되는 치옥소 테트라 히드로 피리딘의 유도체로서는 예를 들면 2, 4-치옥소 테트라 히드로 피리딘의 3, 3-디메칠 또는 3, 3 디에칠 이외의 저급 알킬화합물을 들수가 있다.

치옥소 피페리진 또는 그 유도체로서는 예를들면 2, 4-치옥소 피페리진, 2-6-치옥소 피페리진 등의 외에 3, 3-디메칠-2, 4-치옥소 피페리진과 3, 3-디에칠-2, 4치옥소 피페리진 및 3 페닐-3-디에칠 아미노-2, 5 치옥소 피페리진 등의 저급알킬기와 알킬 아미노 알킬기 및 페닐기등에 의하여 치환된 화합물을 들수가 있다.

알콜로서는 예를 들면 메탄올과 에탄올 및 푸로판올 등이 사용된다.

[실시예]

메탄올 100ml에 2, 4-치옥소 테트라히드로 피리딘 5g을 용해하고, 따로히 pH 1이하의 황산 890ml에 피리딘 0.5g을 용해한다. 양액을 혼합하여 전량을 1ℓ로 하고 이것을 검출시액으로 한다. 소화관 암환자 100명 및 건강자 248명의 이른 아침의 뇨를 검체로하고, 각각 18ml를 받아서 전기 검출시액 2ml를 가하여 가만히 혼화한후 실온으로 24시간 방치한다.

이어서 40℃로서 10분간 가온한후 실온으로 방냉하고, 아밀 알콜 3ml를 가하여 잘 혼합한후 정치하고, 상층의 아밀 알콜층을 분리하여 그 색조를 육안 및 흡광도계로서 판정하였다.

그 결과는 제 1 및 제 2 표에 표시하는 바와 같다.

[제 1 표]

[제 2 표]

Claims (1)

1. 황산과 알콜의 혼액중에 치옥소 테트라 히드로 피리딘 혹은 그 유도체 또는 치옥소 피페리진 혹은 그 유도체를 용해한 인돌초산 검출용 시약에 인돌초산 함유액을 가하여 실온내지 45℃에서 반응시킨후 아밀알콜을 가하여 잘 흔든후 분리된 아밀 알콜층의 색조를 비색하는 것을 특징으로한 인돌초산의 검출법.

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