KR20240110556A - Her3 항원-결합 분자를 사용한 암의 치료 및 예방 - Google Patents
Her3 항원-결합 분자를 사용한 암의 치료 및 예방 Download PDFInfo
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Abstract
본 개시내용은 암의 치료 또는 예방을 위한 HER3에 결합하는 항원-결합 분자, 상기 분자를 포함하는 조성물, 및 상기 분자를 사용한 치료 및 예방 방법을 제공한다.
Description
본 출원은 2021년 9월 3일에 출원된 제SG 10202109667X호로부터 우선권을 주장하며, 이의 내용 및 요소는 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 분자 생물학의 분야, 보다 구체적으로는 항체 기술 및 의학적 치료 및 예방 방법에 관한 것이다.
증가된 HER3 발현은 유방암, 위암, 두경부암, 췌장암, 난소암 및 폐암을 포함한 여러 고형 종양에서 예후가 좋지 않은 것과 관련이 있다. HER3-매개된 신호전달은 종양 진행에 부정적인 결과를 갖는다; HER3 상향조절은 항-HER2 및 항-EGFR 요법에 대한 내성과 관련이 있으며, 항-PD-1 요법에 불응성인 고형 종양은 항-PD-1 요법에 대한 반응자에 비해 HER3 발현이 더 높은 것으로 나타났다.
HER3-결합 항체는 예를 들어, 문헌[Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39-48]에 기재되어 있다. 항-HER3 항체 LJM-716은 HER3 세포외 도메인의 하위도메인 II 및 IV에 있는 에피토프에 결합하여 HER3를 비활성 형태로 고정한다(Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024-6035). MM-121(세리반투맙(seribantumab)이라고도 함)은 HER3에 대한 헤레굴린(heregulin, HRG)의 결합을 차단함으로써 HER3-매개된 신호전달을 억제하는 것으로 나타났다(Schoeberl et al., Sci. Signal. (2009) 2(77): RA31). 패트리투맙(Patritumab, U-1287 및 AMG-888로도 알려짐) 또한 HER3에 대한 헤레굴린의 결합을 차단한다(예를 들어, 참조; Shimizu et al. Cancer Chemother Pharmacol. (2017) 79(3):489-495). RG7116(룸레투주맙(lumretuzumab) 및 RO-5479599로도 알려짐)은 HER3 세포외 도메인의 하위도메인 I에서 에피토프를 인식한다(예를 들어, 참조; Mirschberger et al. Cancer Research (2013) 73(16) 5183-5194). KTN3379는 하위도메인 III(서열 번호 1의 다음 위치에 상응함: Gly476, Pro477, Arg481, Gly452, Arg475, Ser450, Gly420, Ala451, Gly419, Arg421, Thr394, Leu423, Arg426, Gly427, Lys356, Leu358, Leu358, Lys356, Ala330, Lys329 및 Gly337)의 아미노산 잔기 및 하위도메인 II의 Met310, Glu311 및 Pro328와의 상호작용을 통해 HER3에 결합한다(참조; Lee et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Oct 27; 112(43):13225). AV-203(CAN-017로도 알려짐)은 HER3에 대한 NRG1의 결합을 차단하고 HER3 분해를 촉진하는 것으로 나타났다(참조; Meetze et al., Eur J Cancer 2012; 48:126). REGN1400 또한 HER3에 대한 리간드의 결합을 억제한다(참조; Zhang et al., Mol Cancer Ther (2014) 13:1345-1355). RG7597(둘리고투주맙)은 HER3 및 EGFR 모두에 결합할 수 있는 이중 작용 Fab(DAF)이며, HER3의 하위도메인 III에 결합한다(참조; Schaefer et al., Cancer Cell (2011) 20(4):472-486). MM-111 및 MM-141은 HER3에 대한 HRG 리간드 결합을 억제하는 HER3-결합 암을 갖는 이중특이성 항체이다(참조; McDonagh et al. Mol Cancer Ther (2012) 11:582-593 and Fitzgerald et al., Mol Cancer Ther (2014) 13:410-425).
본 개시내용은, 부분적으로, HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 HER3를 발현하는 암 및 암세포의 치료에 사용된다.
따라서, 하나의 측면에서, 본 개시내용은 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변(VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 조성물은 다음을 포함한다:
(i) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 2% 내지 20% (w/v) 수크로스, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(ii) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 2% 내지 20% (w/v) 수크로스, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(iii) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(iv) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(v) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 아르기닌, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(vi) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 아르기닌, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(vii) 2 mM 내지 200 mM 아세테이트, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖는다.
일부 실시양태에서, 조성물은 다음을 포함한다:
(i) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(ii) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.1을 갖거나;
(iii) 20 mM 히스티딘, 4% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(iv) 20 mM 히스티딘, 2% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.3을 갖거나;
(v) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 6.1을 갖거나;
(vi) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(vii) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.5를 갖거나;
(viii) 20 mM 히스티딘, 150 mM 염화나트륨; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 6.5를 갖거나;
(ix) 20 mM 아세테이트, 150 mM 염화나트륨; 0.05% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.5를 갖는다.
일부 실시양태에서, 조성물은 20mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8을 갖는다.
일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 1.2 mg/mL의 항원-결합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 50 mg/mL 이하의 항원-결합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 1.2 mg/mL 내지 50 mg/mL의 항원-결합 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
서열 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성(sequence idnetity)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
다음 프레임워크 영역 (framework region; FR)을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
다음 프레임워크 영역 (FR)을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 120의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또한, 약제로서 사용하기 위한 본 개시내용에 따른 조성물이 제공된다.
또한, 대상체(subject)에서 암을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한 본 개시내용에 따른 조성물이 제공된다.
또한, 대상체에서 암을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 개시내용에 따른 조성물의 용도가 제공된다.
또한, 치료학적 또는 예방학적 유효량의 본 개시내용에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하여, 대상체에서 암을 치료하거나 예방하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 암은 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 NRG 유전자 융합을 갖는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 CLU - NRG1 , CD74- NRG1 , DOC4 - NRG1 , SLC3A2 - NRG1 , RBPMS - NRG1 , WRN-NRG1, SDC4 - NRG1 , RAB2IL1 - NRG1 , VAMP2 - NRG1 , KIF13B - NRG1 , THAP7 - NRG1 , SMAD4-NRG1, MDK - NRG1 , TNC- NRG1 , DIP2B - NRG1 , MRPL13 - NRG1 , PARP8 - NRG1 , ROCK1 -NRG1, DPYSL2 - NRG1 , ATP1B1 - NRG1 , CDH6 - NRG1 , APP- NRG1 , AKAP13 - NRG1 , THBS1 - NRG1 , FOXA1-NRG1, PDE7A - NRG1 , RAB3IL1 - NRG1 , CDK1 - NRG1 , BMPRIB - NRG1 , TNFRSF10B -NRG1, MCPH1-NRG1 및 SLC12A2-NRG2로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 폐, 유방, 머리, 목, 신장, 난소, 자궁경부, 췌장, 위, 간, 식도, 전립선, 자궁, 담낭, 결장, 직장, 방광, 연조직 또는 비인두로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암(lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma), 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma), 유방암(breast cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer), 유방 암종(breast carcinoma), 유방 침습성 암종(breast invasive carcinoma), 두경부암(head and neck cancer), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 신장암(renal cancer), 신장 투명세포 암종(renal clear cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 난소 장액성 낭선암종(ovarian serous cystadenocarcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinoma), 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma), 전립선암(prostate cancer), 전립선 선암종(prostate adenocarcinoma), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁 암육종(uterine carcinosarcoma), 담낭암(gallbladder cancer), 담관암종(cholangiocarcinoma), 결장직장암(colorectal cancer), RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 위암(gastric cancer), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma, HCC), 식도암(oesophageal cancer), 방광암(bladder cancer), 요로상피 방광암(urothelial bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 육종(sarcoma), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor) 및 비인두의 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor of the nasopharynx)으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에서 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암세포를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체로부터 세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 대상체로부터 수득되었다. 일부 실시양태에서, 검출 단계는 시험관내 샘플에 대해 수행되고/되거나 시험관내에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 대상체는 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암세포가 검출될 때 조성물로 치료를 위해 선택된다.
일부 실시양태에서, 조성물은 HER2-표적 요법, EGFR-표적 요법, 및/또는 안드로겐 수용체-표적 요법 중 하나 이상과 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 세툭시맙, 엔잘루타미드 및/또는 트라스투주맙 중 하나 이상과 조합하여 투여된다.
또한, 대상체에서 암을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위해 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자가 본 개시내용의 일부로서 제공되며, 여기서 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
또한, 대상체에서 암을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 용도가 제공되며, 여기서 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
또한, 대상체에서 암을 치료하거나 예방하는 방법에 제공되며, 여기서 상기 방법은 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 치료학적 또는 예방학적 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
(i) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
다음 프레임워크 영역 (FR)을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함한다:
다음 프레임워크 영역 (FR)을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 120의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 암은 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 NRG 유전자 융합을 갖는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 CLU - NRG1 , CD74- NRG1 , DOC4 - NRG1 , SLC3A2 - NRG1 , RBPMS - NRG1 , WRN-NRG1, SDC4 - NRG1 , RAB2IL1 - NRG1 , VAMP2 - NRG1 , KIF13B - NRG1 , THAP7 - NRG1 , SMAD4-NRG1, MDK - NRG1 , TNC- NRG1 , DIP2B - NRG1 , MRPL13 - NRG1 , PARP8 - NRG1 , ROCK1 -NRG1, DPYSL2 - NRG1 , ATP1B1 - NRG1 , CDH6 - NRG1 , APP- NRG1 , AKAP13 - NRG1 , THBS1 - NRG1 , FOXA1-NRG1, PDE7A - NRG1 , RAB3IL1 - NRG1 , CDK1 - NRG1 , BMPRIB - NRG1 , TNFRSF10B -NRG1, MCPH1-NRG1 및 SLC12A2-NRG2로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 암은 폐, 유방, 머리, 목, 신장, 난소, 자궁경부, 췌장, 위, 간, 식도, 전립선, 자궁, 담낭, 결장, 직장, 방광, 연조직 또는 비인두로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암(lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma), 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma), 유방암(breast cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer), 유방 암종(breast carcinoma), 유방 침습성 암종(breast invasive carcinoma), 두경부암(head and neck cancer), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 신장암(renal cancer), 신장 투명세포 암종(renal clear cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 난소 장액성 낭선암종(ovarian serous cystadenocarcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinoma), 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma), 전립선암(prostate cancer), 전립선 선암종(prostate adenocarcinoma), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁 암육종(uterine carcinosarcoma), 담낭암(gallbladder cancer), 담관암종(cholangiocarcinoma), 결장직장암(colorectal cancer), RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 위암(gastric cancer), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma, HCC), 식도암(oesophageal cancer), 방광암(bladder cancer), 요로상피 방광암(urothelial bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 육종(sarcoma), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor) 및 비인두의 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor of the nasopharynx)으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에서 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암세포를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체로부터 세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 대상체로부터 수득되었다. 일부 실시양태에서, 검출 단계는 시험관내 샘플에 대해 수행되고/되거나 시험관내에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암세포가 검출될 때 항원-결합 분자를 사용한 치료를 위해 선택된다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER2-표적 요법, EGFR-표적 요법, 및/또는 안드로겐 수용체-표적 요법 중 하나 이상과 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 세툭시맙, 엔잘루타미드 및/또는 트라스투주맙 중 하나 이상과 조합하여 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 조성물 또는 항원-결합 분자는 7일마다 1회, 14일마다 1회, 21일마다 1회 또는 28일마다 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 조성물 또는 항원-결합 분자는 28일마다 4회, 28일마다 2회, 또는 21일마다 3회, 예를 들어 21일 또는 28일의 기간에 걸쳐 1회 또는 다수회 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 조성물 또는 항원-결합 분자는 21일 또는 28일의 기간에 걸쳐 1, 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 투여당 및/또는 21일 또는 28일의 각 기간에 걸쳐 150 mg 내지 3000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 투여당 1800-2500 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 투여 사이클당, 예를 들어 21일 또는 28일마다 총 적어도 600 mg, 적어도 900 mg, 적어도 1200 mg, 적어도 1500 mg, 적어도 1800 mg, 적어도 2100, 적어도 2400 mg, 적어도 2700 mg, 적어도 3000 mg, 적어도 3300 mg, 적어도 3600 mg, 적어도 3900 mg, 적어도 4200 mg, 적어도 4500 mg, 적어도 4800 mg, 적어도 5100 mg, 적어도 5400 mg, 적어도 5700 mg, 적어도 6000 mg, 적어도 6300 mg, 적어도 6600 mg, 적어도 6900 mg, 적어도 7200 mg, 적어도 7500 mg, 적어도 7800 mg, 적어도 8100 mg, 적어도 8400 mg, 적어도 8700 mg, 적어도 9000 mg, 적어도 9300 mg, 적어도 9600 mg, 적어도 9900 mg, 적어도 10200 mg, 적어도 10500 mg, 적어도 10800 mg, 적어도 11100 mg, 적어도 11400 mg, 적어도 11700 mg 또는 적어도 12000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 21일마다 총 약 3600 mg의 항원-결합 분자 또는 28일마다 총 약 4800 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 21일마다 총 약 5400 mg의 항원-결합 분자 또는 28일마다 총 약 7200 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 21일마다 총 약 6300 mg의 항원-결합 분자 또는 28일마다 총 약 8400 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 21일마다 총 약 9000 mg의 항원-결합 분자 또는 28일마다 총 약 12000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다.
항원-결합 분자는 21일 또는 28일당 항원-결합 분자의 총량에 도달하기 위해 다중 용량(예를 들어, 일주일에 한 번)으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 적어도 150 mg, 적어도 300 mg, 적어도 600 mg, 적어도 900 mg, 적어도 1200 mg, 적어도 1500 mg, 적어도 1800 mg, 적어도 2100 mg, 적어도 2400, 또는 적어도 2800mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 1500 mg 내지 3000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 1800 mg 내지 2500 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 약 1200 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 약 1500 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 약 1800 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료는 7일 또는 14일마다(매주 1회 또는 2주마다 1회) 약 2100 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함한다.
일부 실시양태에서, 7일마다(예를 들어, 상기와 같음) 항원-결합 분자의 투여가 적어도 21일 또는 적어도 28일 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 7일마다(예를 들어, 상기와 같음) 항원-결합 분자의 투여가 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30주 또는 그 이상 동안 수행되거나, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30주 또는 그 이상 동안 수행된다.
설명
알려진 항-HER3 항체는 크게 두 부류로 나뉜다. 제1 부류의 항체는 HER3의 도메인 I 및/또는 III에 결합하고, 이에 따라 HER3에 대한 리간드 결합을 경쟁적으로 억제한다. 세리반투맙(MM-121)이 이 부류의 대표적인 구성원이며, 다른 구성원은 패트리투맙(U3-1287 또는 AMG-888), 룸레투주맙(RG-7116), AV-203, GSK2849330 및 REGN1400을 포함한다. 제2 부류의 항체는 도메인 II와 IV 사이 또는 도메인 II와 III 사이의 계면에 결합을 통해 HER3를 비활성 형태로 고정한다. LJM-716은 KTN3379와 마찬가지로 이 부류의 대표적인 예이다.
HER3의 과발현은 여러 종양 유형에서 자주 관찰되며 더 나쁜 임상 결과와 관련이 있다. HER3의 발현 증진은 결장직장 암종(colorectal carcinoma), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 흑색종, 유방암, 위암, 난소암, 전립선암, 및 방광암에서 발견된다. HER3 과발현의 영향은 HER2가 또한 과발현되는 암, 예를 들어 유방암, 위암 및 난소암에서 더 크다. HER3는 흑색종 및 췌장 암종에서 EGFR에 선호되는 이종이량체 파트너이다. HER3 발현 및 활성의 상향조절은 다중 경로 억제제에 대한 내성과 관련이 있으며 나쁜 예후와 관련이 있다.
본 발명은 알려진 항-HER3 항체에 비해 개선된 특성을 갖는 신규한 HER3-결합 분자에 관한 것이다.
본 발명자들은 HER3의 세포외 영역에서 특정 관심 영역에 결합하는 항원-결합 분자의 표적화된 생성을 수행하였다. 본 발명의 HER3-결합 분자는 선행 기술에 개시된 항원-결합 분자에 비해 바람직한 생물물리학적 및/또는 기능적 특성의 조합을 제공한다.
본 발명의 실시양태에서, 항원 결합 분자는 HER3(서열 번호 16)의 세포외 영역의 하위도메인 II에 결합할 수 있고, 결합된 HER3 분자와 상호작용 파트너의 결합을 억제한다.
특히, 본원에 기재된 HER3-결합 항원-결합 분자는 (i) 상호작용 파트너(예를 들어, EGFR, HER2)와 HER3의 결합에 대한 강력한 억제 및 (ii) NRG 리간드의 존재 및 부재 모두에서 HER3에 대한 고-친화성 결합을 제공하는 HER3의 에피토프에 결합하는 것으로 입증되었다. 이러한 독특한 특성의 조합은 다운스트림 신호전달의 강력한 억제 및 광범위한 암에 대한 탁월한 항암 활성을 제공한다.
HER3
HER3(예를 들어 ERBB3 LCCS2, MDA-BF-1로도 알려짐)는 UniProt P21860에 의해 식별된 단백질이다. 인간 ERBB3 유전자에 의해 암호화된 mRNA의 선택적 스플라이싱은 5가지 상이한 이소형을 생성한다: 이소형 1(UniProt: P21860-1, v1; 서열 번호 1); 위치 141로부터 서열 번호 1과 상이한 서열을 포함하고, 서열 번호 1의 위치 183 내지 1342에 상응하는 아미노산 서열이 결여된 이소형 2(UniProt: P21860-2; 서열 번호 2); 서열 번호 1에 대하여 치환 C331F를 포함하고, 서열 번호 1의 위치 332 내지 1342에 상응하는 아미노산 서열이 결여된 이소형 3(UniProt: P21860-3; 서열 번호 3); 서열 번호 1의 위치 1 내지 59에 상응하는 아미노산 서열이 결여된 이소형 4(UniProt: P21860-4; 서열 번호 4); 및 서열 번호 1의 위치 1 내지 643에 상응하는 아미노산 서열이 결여된 이소형 5(UniProt: P21860-5; 서열 번호 5).
서열 번호 1 내지 3의 N-말단 19개 아미노산은 신호 펩티드를 구성하고, 따라서 HER3 이소형 1, 2 및 3의 성숙한 형태(즉, 신호 펩티드를 제거하기 위한 처리 후)는 각각 서열 번호 6, 7 및 8에 나타낸 아미노산 서열을 갖는다.
HER3의 구조 및 기능은 예를 들어, 문헌[참조: Cho and Leahy Science (2002) 297 (5585):1330-1333, Singer et al., Journal of Biological Chemistry (2001) 276, 44266-44274, Roskoski et al., Pharmacol. Res. (2014) 79: 34-74, Bazley and Gullick Endocrine-Related Cancer (2005) S17-S27 and Mujoo et al., Oncotarget (2014) 5(21):10222-10236]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 전문이 본원에 참고로 포함된다. HER3는 2개의 류신-풍부 하위도메인(도메인 I 및 III, 서열 번호 15 및 17에 각각 나타냄) 및 2개의 시스테인-풍부 하위도메인(도메인 II 및 IV, 서열 번호 16 및 18에 각각 나타냄)을 포함하는 N-말단 세포외 영역(서열 번호 9)을 갖는 단일-패스 막관통 ErbB 수용체 티로신 키나제이다. 도메인 II는 다른 HER 수용체 분자와의 분자간 상호작용에 관여하는 β 헤어핀 이량체화 루프(서열 번호 19)를 포함한다. 세포외 영역은 막관통 영역(서열 번호 10)을 통해 세포질 영역(서열 번호 11)에 연결된다. 세포질 영역은 막근접 세그먼트(서열 번호 12), 단백질 키나제 도메인(서열 번호 13) 및 C-말단 세그먼트(서열 번호 14)를 포함한다.
HER3를 통한 신호전달은 수용체 동종이량체화(즉, 다른 HER3 수용체와 함께) 또는 이종이량체화(다른 HER 수용체, 예를 들어 HER2와 함께) 및 그에 따른 세포질 영역의 티로신의 단백질 키나제 도메인에 의한 자가인산화를 포함한다. 인산화된 티로신 잔기는 src 상동성 도메인 2(SH2) 또는 포스포티로신 결합(PTB) 도메인을 함유하는 어댑터/이펙터 단백질(예를 들어 Grb2 및 포스포리파제 Cγ(PLCγ))을 모집한다.
HER3를 통한 신호전달은 리간드-의존적 또는 리간드-비의존적 방식으로 활성화될 수 있다. 리간드의 부재하에서, HER3 수용체 분자는 일반적으로 하위도메인 II의 이량체화 루프가 하위도메인 IV의 포켓과 분자내 접촉하게 만드는 수용체 이량체화를 방지하는 구조를 가진 단량체로서 세포 표면에서 발현된다. 뉴레굴린(NRG), 예를 들어 NRG1(헤레굴린, HRG라고도 함) 또는 NRG2와 같은 HER3 리간드를 세포외 영역의 하위도메인 I 및 III에 결합하면 구조적 변화를 일으켜 하위도메인 II의 이량체화 루프의 노출이 초래되어 수용체 이량체화 및 신호전달을 촉진한다. HER3의 일부 암-관련 돌연변이는 비활성 '폐쇄' 형태의 형성에 필요한 하위도메인 II 및 IV의 상호작용을 방해할 수 있으며, 이에 따라 리간드 결합의 부재하에서 이량체화 루프의 구성적 제시 및 HER3-매개된 신호전달의 활성화를 유발할 수 있다(예를 들어, 참조; Jaiswal et al., Cancer Cell (2013) 23(5): 603-617).
본 명세서에서 "HER3"은 임의의 종으로부터의 HER3를 지칭하며, 임의의 종으로부터의 HER3 이소형, 단편, 변이체(돌연변이체 포함) 또는 상동체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 단백질의 "단편", "변이체" 또는 "상동체"는 임의로 기준 단백질(예를 들어, 기준 이소형)의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 90%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 기준 단백질의 단편, 변이체, 이소형 및 상동체는 기준 단백질에 의해 수행되는 기능을 수행하는 능력을 특징으로 할 수 있다.
"단편"은 일반적으로 기준 단백질의 분획을 지칭한다. "변이체"는 일반적으로 기준 단백질의 아미노산 서열에 대해 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입, 결실 또는 다른 변형을 포함하지만, 기준 단백질의 아미노산 서열에 대해 상당한 정도의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 60%)을 유지하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 지칭한다. "이소형(isoform)"은 일반적으로 기준 단백질의 종과 동일한 종에 의해 발현되는 기준 단백질의 변이체를 지칭한다(예를 들어, HER3 이소형 1 내지 5는 모두 서로의 이소형이다). "상동체"는 일반적으로 기준 단백질의 종과 비교하여 상이한 종에 의해 생산된 기준 단백질의 변이체를 지칭한다. 예를 들어, 인간 HER3 이소형 1(P21860-1, v1; 서열 번호 1) 및 레서스 마카크 HER3(UniProt: F7HEH3-1, v2; 서열 번호 20)은 서로의 상동체이다. 상동체는 오르소로그를 포함한다.
기준 단백질의 "단편"은 임의의 길이(아미노산의 수에 의해)일 수 있지만, 임의로 기준 단백질(즉, 단편이 유래되는 단백질)의 길이의 적어도 20%일 수 있고, 기준 단백질의 길이의 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 중 하나의 최대 길이를 가질 수 있다.
HER3의 단편은 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200개 아미노산 중 하나의 최소 길이를 가질 수 있고, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200 또는 1300개 아미노산 중 하나의 최대 길이를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3는 포유류(예를 들어, 영장류(레서스, 시노몰구스, 비인간 영장류 또는 인간) 및/또는 설치류(예를 들어, 래트 또는 뮤린)로부터의 HER3이다. HER3의 이소형, 단편, 변이체 또는 상동체는 임의로 주어진 종, 예를 들어 인간으로부터의 미성숙 또는 성숙 HER3 이소형의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.
이소형, 단편, 변이체 또는 상동체는 임의로, 기능적 특성/활성에 대한 적절한 검정에 의한 분석에 의해 결정되는 바와 같이, 예를 들어 기준 HER3(예를 들어, 인간 HER3 이소형 1)의 기능적 특성/활성을 갖는 기능적 이소형, 단편, 변이체 또는 상동체일 수 있다. 예를 들어, HER3의 이소형, 단편, 변이체 또는 상동체는 HER2, NRG1(유형 I, II, III, IV, V 또는 VI) 또는 NRG2(α 또는 β) 중 하나 이상과의 연관성을 나타낼 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3는 서열 번호 1 내지 8 중 하나에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, HER3의 단편은 서열 번호 9 내지 19 중 하나, 예를 들어 9, 16 또는 19 중 하나에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 포함하거나 이들로 구성된다.
표적 분자의 특정 관심 영역
본 발명의 항원-결합 분자는 특히 관심있는 HER3의 영역을 표적화하도록 특별히 설계되었다. 2단계 접근법에서는 예측된 항원성, 기능 및 안전성에 대한 분석에 따라 표적화할 HER3 영역을 선택하였다. 그후 HER3의 표적 영역에 특이적인 항체를 면역원으로 표적 부위에 상응하는 펩티드를 사용하여 제조하여 특이적 단클론 항체를 양성하고, 후속 스크리닝으로 네이티브 상태에서 HER3에 결합할 수 있는 항체를 식별하였다. 이 접근법은 항체 에피토프에 대한 정교한 제어를 제공한다.
본 발명의 항원-결합 분자는 이들이 결합하는 HER3의 영역을 참조하여 정의될 수 있다. 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3의 특정 관심 영역에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아미노산의 연속 서열(즉, 아미노산 1차 서열)로 구성되는 HER3의 선형 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아미노산 서열의 아미노산의 불연속 서열로 구성되는 HER3의 구조적 에피토프에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 세포외 영역(예를 들어, 서열 번호 9에 나타낸 영역)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 세포외 영역(예를 들어, 서열 번호 16에 나타낸 영역)의 하위도메인 II에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22에 나타낸 HER3의 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 HER3의 영역에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 HER3의 영역의 아미노산 잔기와 접촉하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역의 아미노산 잔기와 접촉하지 않는다.
항체가 결합하는 펩티드/폴리펩티드의 영역은 항체-항원 복합체의 X-선 공결정학 분석, 펩티드 스캐닝, 돌연변이 유발 맵핑, 질량 분석법에 의한 수소-중수소 교환 분석, 파지 디스플레이, 경쟁 ELISA 및 단백질 분해-기반 '보호' 방법을 포함하여, 당업계에 잘 알려진 다양한 방법을 사용하여 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, 문헌[Gershoni et al., BioDrugs, 2007, 21(3):145-156]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 본원에 기재된 항체 클론 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92, 10D1_c93, 10A6, 4-35-B2 또는 4-35-B4 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합된 HER3의 영역에 결합시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 항체 클론 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합된 HER3의 영역에 결합시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 항체 클론 10D1_c89의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합된 HER3의 영역에 결합시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산 단량체의 사슬을 지칭한다. 펩티드는 전형적으로 약 2 내지 50개 아미노산 영역의 길이를 갖는다. "폴리펩티드"는 2개 이상의 펩티드의 중합체 사슬이다. 폴리펩티드는 전형적으로 약 50개 이상의 아미노산의 길이를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 서열 번호 1, 3, 4, 6 또는 8 중 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드에 결합할 수 없다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드에 결합할 수 없다.
주어진 펩티드/폴리펩티드에 결합하는 항원-결합 분자의 능력은 ELISA, 면역블롯(예를 들어 웨스턴 블롯), 면역침전, 표면 플라즈몬 공명(SPR; 예를 들어, 참조; Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442) 또는 생물층 간섭법(예를 들어, 참조; Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)에 의한 분석을 포함하여 숙련가에게 잘 알려진 방법으로 분석할 수 있다.
항원 결합 분자가 기준 아미노산 서열을 포함하는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있는 양태에서, 펩티드/폴리펩티드는 기준 아미노산 서열의 한쪽 또는 양쪽 말단에 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드/폴리펩티드는 기준 아미노산 서열의 한쪽 또는 양쪽 말단에 예를 들어 1-5, 1-10, 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 5-10, 5-20, 5-30, 5-40, 10-20, 10-30, 10-40, 10-50, 20-30, 20-40 또는 20-50개의 추가 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 기준 서열의 한쪽 또는 양쪽 말단(즉, N-말단 및 C-말단 말단)에 제공되는 추가 아미노산(들)은 HER3의 아미노산 서열의 맥락에서 기준 서열의 말단에서의 위치에 상응한다. 예로서, 항원-결합 분자가 서열 번호 23의 서열 및 서열 번호 23의 C-말단에 있는 추가의 2개의 아미노산을 포함하는 펩티드에 결합할 수 있는 경우, 추가의 2개의 아미노산은 서열 번호 1의 위치 278 및 279에 상응하는 트레오닌 및 리신일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 본원에 기재된 항체 클론 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92, 10D1_c93, 10A6, 4-35-B2 또는 4-35-B4 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 항체 클론 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 항체 클론 10D1_c89의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다.
항원-결합 분자
본 발명은 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 제공한다.
"항원-결합 분자"는 표적 항원에 결합할 수 있는 분자를 지칭하며, 이들이 관련 표적 분자(들)에 대한 결합을 나타내는 한, 단클론 항체, 다클론 항체, 단일특이성 및 다중특이성 항체(예를 들어 이중특이성 항체) 및 항체 단편(예를 들어 Fv, scFv, Fab, scFab, F(ab')2, Fab2, 디아바디, 트리아바디, scFv-Fc, 미니바디, 단일 도메인 항체(예를 들어 VhH) 등)를 포함한다.
본 발명의 항원-결합 분자는 표적 항원(들)에 결합할 수 있는 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원에 결합할 수 있는 모이어티는 표적 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 항체 중쇄 가변 영역(VH) 및 항체 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원에 결합할 수 있는 모이어티는 표적 항원에 결합할 수 있는 앱타머, 예를 들어 핵산 앱타머를 포함하거나 이들로 구성된다(예를 들어, 문헌[Zhou and Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202]에서 검토됨). 일부 실시양태에서, 표적 항원에 결합할 수 있는 모이어티는 항원-결합 펩티드/폴리펩티드, 예를 들어, 펩티드 앱타머, 티오레독신, 모노바디, 안티칼린, 쿠니츠 도메인, 아비머, 노틴(knottin), 피노머, 아트리머, DARPin, 아피바디, 나노바디(즉, 단일-도메인 항체 (sdAb)), 아필린, 아르마딜로 반복 단백질 (ArmRP), OBody 또는 피브로넥틴을 포함하거나 이들로 구성된다 - 예를 들어 문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082-1101]에 검토되며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다(또한 예를 들어, 참조; Boersma et al., J Biol Chem (2011) 286:41273-85 and Emanuel et al., Mabs (2011) 3:38-48).
본 발명의 항원-결합 분자는 일반적으로 표적 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 VH 및 VL을 포함하는 항원-결합 도메인을 포함한다. VH 및 VL에 의해 형성된 항원-결합 도메인은 또한 본원에서 Fv 영역으로 지칭될 수 있다.
항원-결합 분자는 항원-결합 폴리펩티드, 또는 항원-결합 폴리펩티드 복합체일 수 있거나, 이를 포함할 수 있다. 항원-결합 분자는 함께 항원-결합 도메인을 형성하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 공유 결합 또는 비공유 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 폴리펩티드를 포함하는 더 큰 폴리펩티드의 일부를 형성한다(예를 들어, VH 및 VL을 포함하는 scFv의 경우, 또는 VH-CH1 및 VL-CL을 포함하는 scFab의 경우).
항원-결합 분자는 하나 이상의 폴리펩티드(예를 들어, 2, 3, 4, 6, 또는 8개의 폴리펩티드)의 비-공유 또는 공유 복합체, 예를 들어 2개의 중쇄 폴리펩티드 및 2개의 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 IgG-유사 항원-결합 분자를 지칭할 수 있다.
본 발명의 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 단클론 항체(mAb)의 서열을 사용하여 설계되고 제조될 수 있다. 단쇄 가변 단편(scFv), Fab 및 F(ab')2 단편과 같은 항체의 항원-결합 영역이 또한 사용/제공될 수 있다. "항원-결합 영역"은 주어진 항체가 특이적인 표적에 결합할 수 있는 항체의 임의의 단편이다.
항체는 일반적으로 6개의 상보성-결정 영역 CDR을 포함한다; 중쇄 가변(VH) 영역에 3개: HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3, 경쇄 가변(VL) 영역에 3개: LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3. 6개의 CDR은 함께, 표적 항원에 결합하는 항체의 일부인 항체의 파라토프(paratope)를 정의한다.
VH 영역 및 VL 영역은 각 CDR의 양쪽에 프레임워크 영역(FR)을 포함하며, 이는 CDR에 대한 스캐폴드를 제공한다. N-말단에서 C-말단까지, VH 영역은 다음의 구조를 포함하고: N 말단-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C 말단; VL 영역은 다음의 구조를 포함한다: N 말단-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C 말단.
문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 기재된 것 및 문헌[Retter et al., Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1): D671-D674]에 기재된 바와 같은 VBASE2와 같은 항체 CDR 및 FR을 정의하기 위한 몇 가지 상이한 관례가 있다. 본원에 기재된 항체 클론의 VH 영역 및 VL 영역의 CDR 및 FR은 문헌[Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77]에 기술된 바와 같은 IMGT V-DOMAIN 번호지정 규칙을 사용하는 국제 IMGT(ImMunoGeneTics) 정보 시스템(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D 413-22)에 따라 정의하였다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 FR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 CDR 및 FR을 포함한다. 즉, 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 본원에 기재된 HER3-결합 항체 클론(즉, 항-HER3 항체 클론 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92, 10D1_c93, 10D1, 10A6, 4-35-B2 또는 4-35-B4; 예를 들어 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91; 예를 들어 10D1_c89)의 VH/VL 영역이거나 이로부터 유래된 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 하기 (1) 내지 (10) 중 하나에 따른 VH 영역을 포함한다:
(1) (10D1 유래된) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(2) (10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c87, 10D1_c92, 10D1_c93) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(3) (10D1_c85v1, 10D1_c85v2) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(4) (10D1_c85o1) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(5) (10D1_c85o2) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(6) (10D1_c89, 10D1_c90) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(7) (10D1_c91) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(8) (10A6) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 158의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 159의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 160의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(9) (4-35-B2) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 128의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 129의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 130의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(10) (4-35-B4) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 144의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 145의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 146의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3,
또는 HC-CDR1, HC-CDR2, 또는 HC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 하기 (11) 내지 (24) 중 하나에 따른 VH 영역을 포함한다:
(11) (10D1) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(12) (10D1_c75, 10D1_c92) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(13) (10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(14) (10D1_c78v2) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(15) (10D1_11B) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 224의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(16) (10D1_c85v1) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(17) (10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(18) (10D1_c87, 10D1_c93) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(19) (10D1_c89) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(20) (10D1_c90) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(21) (10D1_c91) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(22) (10A6) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 161의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 162의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 163의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(23) (4-35-B2) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 131의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 132의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 133의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 134의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(24) (4-35-B4) 다음 FR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 147의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 148의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 149의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4,
또는 HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3, 또는 HC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 상기 (1) 내지 (10) 중 하나에 따른 CDR, 및 상기 (11) 내지 (24) 중 하나에 따른 FR을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 하기 (25) 내지 (41) 중 하나에 따른 VH 영역을 포함한다:
(25) (1)에 따른 CDR 및 (11), (12), (13), (14), (15), (16), (17), (18), (19), (20) 또는 (21)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(26) (2)에 따른 CDR 및 (11)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(27) (2)에 따른 CDR 및 (12)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(28) (2)에 따른 CDR 및 (13)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(29) (2)에 따른 CDR 및 (14)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(30) (2)에 따른 CDR 및 (15)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(31) (2)에 따른 CDR 및 (18)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(32) (3)에 따른 CDR 및 (16)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(33) (3)에 따른 CDR 및 (17)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(34) (4)에 따른 CDR 및 (17)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(35) (5)에 따른 CDR 및 (17)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(36) (6)에 따른 CDR 및 (19)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(37) (6)에 따른 CDR 및 (20)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(38) (7)에 따른 CDR 및 (21)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(39) (8)에 따른 CDR 및 (22)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(40) (9)에 따른 CDR 및 (23)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
(41) (10)에 따른 CDR 및 (24)에 따른 FR을 포함하는 VH 영역.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 하기 (42) 내지 (61) 중 하나에 따른 VH 영역을 포함한다:
(42) 서열 번호 24의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(43) 서열 번호 25의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(44) 서열 번호 26의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(45) 서열 번호 27의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(46) 서열 번호 28의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(47) 서열 번호 29의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(48) 서열 번호 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(49) 서열 번호 31의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(50) 서열 번호 32의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(51) 서열 번호 33의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(52) 서열 번호 34의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(53) 서열 번호 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(54) 서열 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(55) 서열 번호 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(56) 서열 번호 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(57) 서열 번호 39의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(58) 서열 번호 40의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(59) 서열 번호 127의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(60) 서열 번호 143의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
(61) 서열 번호 157의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 하기 (62) 내지 (71) 중 하나에 따른 VL 영역을 포함한다:
(62) (10D1 유래된) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(63) (10D1, 10D1_c75, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c91, 10D1_c93) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(64) (10D1_c76) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(65) (10D1_c77) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(66) (10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(67) (10D1_c90) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(68) (10D1_c92) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(69) (10A6) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 165의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 166의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 167의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(70) (4-35-B2) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 136의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 137의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 138의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(71) (4-35-B4) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 151의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 152의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 153의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3;
또는 LC-CDR1, LC-CDR2 또는 LC-CDR3 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 하기 (72) 내지 (86) 중 하나에 따른 VL 영역을 포함한다:
(72) (10D1) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 106의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 113의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 123의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 126의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(73) (10D1_c75) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 107의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 114의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(74) (10D1_c76) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 101의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 108의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 115의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(75) (10D1_c77) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 102의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 108의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 116의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(76) (10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 103의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 108의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 117의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(77) (10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 103의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 108의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 118의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(78) (10D1_c87) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 103의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 109의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 119의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(79) (10D1_c89) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 120의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4 ,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(80) (10D1_c90) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 105의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 121의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(81) (10D1_c91) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 111의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 122의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(82) (10D1_c92) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 100의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 112의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 114의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(83) (10D1_c93) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 103의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 108의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 119의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 124의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(84) (10A6) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 168의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 169의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 170의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 142의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(85) (4-35-B2) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 139의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 140의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 141의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 142의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
(86) (4-35-B4) 다음 FR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 154의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 155의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 156의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 142의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4,
또는 LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3, 또는 LC-FR4 중 하나 이상에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 상기 (62) 내지 (71) 중 하나에 따른 CDR, 및 상기 (72) 내지 (86) 중 하나에 따른 FR을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 하기 (87) 내지 (102) 중 하나에 따른 VL 영역을 포함한다:
(87) (62)에 따른 CDR 및 (72), (73), (74), (75), (76), (77), (78), (79), (80), (81), (82), 또는 (83)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(88) (63)에 따른 CDR 및 (72)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(89) (63)에 따른 CDR 및 (73)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(90) (63)에 따른 CDR 및 (76)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(91) (63)에 따른 CDR 및 (78)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(92) (63)에 따른 CDR 및 (79)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(93) (63)에 따른 CDR 및 (81)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(94) (63)에 따른 CDR 및 (83)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(95) (64)에 따른 CDR 및 (74)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(96) (65)에 따른 CDR 및 (75)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(97) (66)에 따른 CDR 및 (77)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(98) (67)에 따른 CDR 및 (80)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(99) (68)에 따른 CDR 및 (82)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(100) (69)에 따른 CDR 및 (84)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(101) (70)에 따른 CDR 및 (85)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
(102) (71)에 따른 CDR 및 (86)에 따른 FR을 포함하는 VL 영역.
일부 실시양태에서 항원-결합 분자는 하기 (103) 내지 (119) 중 하나에 따른 VL 영역을 포함한다:
(103) 서열 번호 74의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(104) 서열 번호 75의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(105) 서열 번호 76의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(106) 서열 번호 77의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(107) 서열 번호 78의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(108) 서열 번호 79의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(109) 서열 번호 80의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(110) 서열 번호 81의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(111) 서열 번호 82의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(112) 서열 번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(113) 서열 번호 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(114) 서열 번호 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(115) 서열 번호 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(116) 서열 번호 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(117) 서열 번호 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(118) 서열 번호 150의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
(119) 서열 번호 164의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 상기 (1) 내지 (61) 중 어느 하나에 따른 VH 영역, 및 상기 (62) 내지 (119) 중 어느 하나에 따른 VL 영역을 포함한다.
하나 이상의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환되는 본 발명에 따른 실시양태에서, 치환은 예를 들어 하기 표에 따른 보존적 치환일 수 있다. 일부 실시양태에서, 중간 컬럼의 동일 블록 내의 아미노산이 치환된다. 일부 실시양태에서, 가장 우측 컬럼의 동일 라인에 있는 아미노산이 치환된다:
일부 실시양태에서, 치환(들)은 기능적으로 보존적일 수 있다. 즉, 일부 실시양태에서, 치환은 등가의 비치환된 분자에 비해 치환을 포함하는 항원-결합 분자의 하나 이상의 기능적 특성(예를 들어, 표적 결합)에 영향을 미치지 않을 수 있다(또는 실질적으로 영향을 미치지 않을 수 있다).
항체의 항원-결합 영역의 VH 및 VL 영역이 함께 Fv 영역을 구성한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 항원-결합 분자는 HER3에 결합하는 Fv 영역을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, Fv의 VH 및 VL 영역은 링커 영역에 의해 결합된 단일 폴리펩티드, 즉 단일 쇄 Fv(scFv)로서 제공된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 면역글로불린 중쇄 불변 서열의 하나 이상의 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 중쇄 불변 서열은 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgA(예를 들어, IgA1, IgA2), IgD, IgE 또는 IgM의 중쇄 불변 서열이거나, 이로부터 유래된다.
일부 실시양태에서, 면역글로불린 중쇄 불변 서열은 인간 면역글로불린 G1 불변 서열(IGHG1; UniProt: P01857-1, v1; 서열 번호 171)이다. 서열 번호 171의 위치 1 내지 98은 CH1 영역을 형성한다(서열 번호 172). 서열 번호 171의 위치 99 내지 110은 CH1 영역과 CH2 영역 사이의 힌지 영역을 형성한다(서열 번호 173). 서열 번호 171의 위치 111 내지 223은 CH2 영역을 형성한다(서열 번호 174). 서열 번호 171의 위치 224 내지 330은 CH3 영역을 형성한다(서열 번호 175).
예시된 항원-결합 분자는 CH3 영역에서 치환 D356E, L358M(EU 넘버링에 따라 번호가 매겨진 위치)을 포함하는 pFUSE-CHIg-hG1을 사용하여 제조할 수 있다. pFUSE-CHIg-hG1에 의해 암호화된 CH3 영역의 아미노산 서열은 서열 번호 176에 나타내어져 있다. CH3 영역은 본원에 기재된 바와 같은 항원-결합 분자의 Fc 영역에 대한 변형에 따라 추가의 치환이 제공될 수 있음을 인지할 것이다.
일부 실시양태에서, CH1 영역은 서열 번호 172의 서열, 또는 서열 번호 172의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, CH1-CH2 힌지 영역은 서열 번호 173의 서열, 또는 서열 번호 173의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, CH2 영역은 서열 번호 174의 서열, 또는 서열 번호 174의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, CH3 영역은 서열 번호 175 또는 176의 서열, 또는 서열 번호 175 또는 176의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 면역글로불린 경쇄 불변 서열의 하나 이상의 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 경쇄 불변 서열은 인간 면역글로불린 카파 불변(IGKC; Cκ; UniProt: P01834-1, v2; 서열 번호 177)이다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 경쇄 불변 서열은 인간 면역글로불린 람다 불변(IGLC; Cλ), 예를 들어 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6 또는 IGLC7이다. 일부 실시양태에서, CL 영역은 서열 번호 177의 서열, 또는 서열 번호 177의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
항체의 항원-결합 영역의 VL 및 경쇄 불변(CL) 영역, 및 VH 영역 및 중쇄 불변 1(CH1) 영역이 함께 Fab 영역을 구성한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 VH, CH1, VL 및 CL(예를 들어, Cκ 또는 Cλ)을 포함하는 Fab 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fab 영역은 VH 및 CH1을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, VH-CH1 융합 폴리펩티드), 및 VL 및 CL을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, VL-CL 융합 폴리펩티드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fab 영역은 VH 및 CL을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, VH-CL 융합 폴리펩티드) 및 VL 및 CH를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, VL-CH1 융합 폴리펩티드)를 포함한다; 즉, 일부 실시양태에서, Fab 영역은 CrossFab 영역이다. 일부 실시양태에서, Fab 또는 CrossFab의 VH, CH1, VL 및 CL 영역은 링커 영역에 의해 결합된 단일 폴리펩티드로서, 즉, 단일 쇄 Fab(scFab) 또는 단일 쇄 CrossFab(scCrossFab)으로서 제공된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3에 결합하는 Fab 영역을 포함하거나, 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 분자는 HER3에 결합하는 전체 항체를 포함하거나, 이들로 구성된다. 본원에 사용된 바와 같이, "전체 항체"는 면역글로불린(Ig)의 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는 항체를 지칭한다. 다양한 종류의 면역글로불린 및 이들의 구조가 예를 들어 문헌[Schroeder and Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
타입 G의 면역글로불린(즉, IgG)은 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 포함하는 ~150kDa 당단백질이다. N-말단에서 C-말단까지, 중쇄는 VH에 이어 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 유사하게 경쇄는 VL에 이어 CL을 포함한다. 중쇄에 따라 면역글로불린은 IgG(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgA(예를 들어 IgA1, IgA2), IgD, IgE 또는 IgM으로 분류될 수 있다. 경쇄는 카파(κ) 또는 람다(λ)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 분자는 HER3에 결합하는 IgG(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgA(예를 들어 IgA1, IgA2), IgD, IgE, 또는 IgM을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3에 대해 적어도 1가 결합이다. 결합 원자가는 주어진 항원 결정인자에 대한 항원-결합 분자의 결합 부위의 수를 지칭한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 적어도 하나의 결합 부위를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 하나 이상의 결합 부위, 예를 들어 2, 3 또는 4개의 결합 부위를 포함한다. 결합 부위는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 예를 들어 HER3에 대해 2가, 3가 또는 4가이다.
본 발명의 측면은 다중특이성 항원-결합 분자에 관한 것이다. "다중특이성(multispecific)"이란 항원-결합 분자가 하나 이상의 표적에 특이적 결합을 나타낸다는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 이중특이성 항원-결합 분자이다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 적어도 2개의 상이한 항원-결합 도메인(즉, 예를 들어 비-동일한 VH 및 VL을 포함하는 적어도 2개의 항원-결합 도메인)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3 및 다른 표적(예를 들어, HER3 이외의 항원)에 결합하고, 따라서 적어도 이중특이성이다. 용어 "이중특이성(bispecific)"은 항원-결합 분자가 적어도 2개의 별개의 항원 결정인자에 특이적으로 결합할 수 있음을 의미한다.
본 발명에 따른 항원-결합 분자(예를 들어, 다중특이성 항원-결합 분자)는 항원-결합 분자가 특이적인 표적에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자 및 HER3 이외의 항원은 다음을 포함한다: (i) HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자, 및 (ii) HER3 이외의 항원에 결합할 수 있는 항원-결합 분자.
또한, 본 발명에 따른 항원-결합 분자(예를 들어, 다중특이성 항원-결합 분자)는 항원-결합 분자가 특이적인 표적에 결합할 수 있는 항원-결합 폴리펩티드 또는 항원-결합 폴리펩티드 복합체를 포함할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항원-결합 분자는 예를 들어, (i) 경쇄 폴리펩티드(구조 VL-CL을 포함함) 및 중쇄 폴리펩티드(구조 VH-CH1-CH2-CH3를 포함함)를 포함하는, HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 폴리펩티드 복합체, 및 (ii) 경쇄 폴리펩티드(구조 VL-CL을 포함함) 및 중쇄 폴리펩티드(구조 VH-CH1-CH2-CH3를 포함함)를 포함하는, HER3 이외의 항원에 결합할 수 있는 항원-결합 폴리펩티드 복합체를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 더 큰 항원-결합 분자(예를 들어, 다중특이성 항원-결합 분자)의 성분 항원-결합 분자는 예를 들어 더 큰 항원-결합 분자의 "항원-결합 도메인" 또는 "항원-결합 영역"으로 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자, 및 HER3 이외의 항원에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 면역 세포 표면 분자이다. 일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 암세포 항원이다. 일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 수용체 분자, 예를 들어 세포 표면 수용체이다. 일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 세포 신호전달 분자, 예를 들어, 사이토카인, 케모카인, 인터페론, 인터루킨 또는 림포카인이다. 일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 성장 인자 또는 호르몬이다.
암세포 항원은 암세포에 의해 발현되거나 과발현되는 항원이다. 암세포 항원은 임의의 펩티드/폴리펩티드, 당단백질, 지단백, 글리칸, 당지질, 지질 또는 이들의 단편일 수 있다. 암세포 항원의 발현은 암과 연관될 수 있다. 암세포 항원은 암세포에 의해 비정상적으로 발현될 수 있거나(예를 들어, 암세포 항원이 비정상적인 국소화로 발현될 수 있음), 암세포에 의해 비정상적인 구조로 발현될 수 있다. 암세포 항원은 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 암세포의 세포 표면에서 발현된다(즉, 암세포 항원은 암세포 표면 항원이다). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 분자에 의해 결합된 항원의 일부는 암세포의 외부 표면 상에 표시된다(즉, 세포외이다). 암세포 항원은 암-관련 항원인 수 있다. 일부 실시양태에서, 암세포 항원은 그 발현이 암의 증상의 발생, 진행 또는 중증도와 연관되는 항원이다. 암-관련 항원은 암의 원인 또는 병리와 연관될 수 있거나, 암의 결과로서 비정상적으로 발현될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암세포 항원은 예를 들어 필적하는 비-암성 세포(예를 들어 동일한 조직/세포 유형으로부터 유래된 비-암성 세포)에 의한 발현 수준과 비교하여, 암의 세포에 의해 발현이 (예를 들어, RNA 및/또는 단백질 수준에서) 상향조절되는 항원이다. 일부 실시양태에서, 암-관련 항원은 암성 세포에 의해 우선적으로 발현될 수 있고, 필적하는 비-암성 세포(예를 들어, 동일한 조직/세포 유형으로부터 유래된 비-암성 세포)에 의해 발현되지 않을 수 있다. 일부 실시양태에서, 암-관련 항원은 돌연변이된 종양유전자 또는 돌연변이된 종양 억제 유전자의 산물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암-관련 항원은 과발현된 세포 단백질, 종양성 바이러스에 의해 생성된 암 항원, 종양태아 항원, 또는 세포 표면 당지질 또는 당단백질의 산물일 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3 이외의 항원은 HER3-관련 암의 세포에 의해 발현되는 항원이다. HER3-관련 암은 HER3를 발현하는 암(예를 들어, 세포 표면에서 HER3 단백질을 발현)일 수 있고; 이러한 암은 "HER3-양성" 암으로 지칭될 수 있다. HER3-관련 암은 HER3 유전자/단백질 발현이 암 증상의 발병, 발달, 진행 또는 중증도 및/또는 전이에 대한 위험 인자이고/이거나 양성과 관련이 있는 암을 포함한다. HER3-관련 암은 문헌[Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1):39-48 and Sithanandam and Anderson Cancer Gene Ther (2008) 15(7):413-448]에 기술된 암을 포함하며, 이들 모두는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, HER3-관련 암은 폐암(예를 들어, NSCLC), 흑색종, 유방암, 췌장암, 전립선암, 난소암, 위암, 결장암 또는 구강암일 수 있다.
면역 세포 표면 분자는 면역 세포의 세포 표면에서 또는 세포 표면 상에 발현되는 임의의 펩티드/폴리펩티드, 당단백질, 지단백, 글리칸, 당지질, 지질 또는 이들의 단편일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자에 의해 결합된 면역 세포 표면 분자의 일부는 면역 세포의 외부 표면 상에 있다(즉, 세포외이다). 면역 세포 표면 분자는 임의의 면역 세포의 세포 표면에서 발현될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 조혈 기원의 세포, 예를 들어, 호중구, 호산구, 호염기구, 수지상 세포, 림프구, 또는 단핵구일 수 있다. 림프구는 예를 들어 T 세포, B 세포, 자연 살해(NK) 세포, NKT 세포 또는 선천성 림프구 세포(ILC), 또는 이의 전구체(예를 들어 흉선세포 또는 pre-B 세포)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포 표면 분자는 공동자극 분자(예를 들어, CD28, OX40, 4-1BB, ICOS 또는 CD27) 또는 이들의 리간드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포 표면 분자는 체크포인트 분자(예를 들어, PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, VISTA, TIGIT 또는 BTLA) 또는 이들의 리간드일 수 있다.
본 발명에 따른 다중특이성 항원-결합 분자는 문헌[Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2):182-212]에 기재된 형식과 같은 임의의 적합한 형식으로 제공될 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 적합한 형식은 문헌[Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212]의 도 2에 나타낸 것: 항체 접합체, 예를 들어 IgG2, F(ab')2 또는 CovX-Body; IgG 또는 IgG-유사 분자, 예를 들어 IgG, 키메라 IgG, κλ-바디 공통 HC; CH1/CL 융합 단백질, 예를 들어 scFv2-CH1/CL, VHH2-CH1/CL; '가변 도메인 단독' 이중특이성 항원 결합 분자, 예를 들어 탠덤 scFv(taFV), 삼중체, 디아바디(Db), dsDb, Db(kih), DART, scDB, dsFv-dsFv, tandAbs, 삼중 헤드, 탠덤 dAb/VHH, 4가 dAb.VHH; 비-Ig 융합 단백질, 예를 들어 scFv2-알부민, scDb-알부민, taFv-알부민, taFv-독소, 미니항체, DNL-Fab2, DNL-Fab2-scFv, DNL-Fab2-IgG-사이토카인2, ImmTAC (TCR-scFv); 변형된 Fc 및 CH3 융합 단백질, 예를 들어 scFv-Fc(kih), scFv-Fc(CH3 전하쌍), scFv-Fc(EW-RVT), scFv-fc(HA-TF), scFv-Fc(SEEDbody), taFv-Fc(kih), scFv-Fc(kih)-Fv, Fab-Fc(kih)-scFv, Fab-scFv-Fc(kih), Fab-scFv-Fc(kih), Fab-scFv-Fc(BEAT), Fab-scFv-Fc(SEEDbody), DART-Fc, scFv-CH3(kih), TriFabs; Fc 융합, 예를 들어 Di-디아바디, scDb-Fc, taFv-Fc, scFv-Fc-scFv, HCAb-VHH, Fab-scFv-Fc, scFv4-Ig, scFv2-Fcab; CH3 융합, 예를 들어 Dia-디아바디, scDb-CH3; IgE/IgM CH2 융합, 예를 들어 scFv-EHD2-scFv, scFvMHD2-scFv; Fab 융합 단백질, 예를 들어 Fab-scFv(바이바디), Fab-scFv2(트라이바디), Fab-Fv, Fab-dsFv, Fab-VHH, 직교 Fab-Fab; 비-Ig 융합 단백질, 예를 들어 DNL-Fab3, DNL-Fab2-scFv, DNL-Fab2-IgG-사이토카인2; 비대칭 IgG 또는 IgG-유사 분자, 예를 들어 IgG(kih), IgG(kih) 공통 LC, ZW1 IgG 공통 LC, Biclonics 공통 LC, CrossMab, CrossMab(kih), scFab-IgG(kih), Fab-scFab-IgG(kih), 직교 Fab IgG(kih), DuetMab, CH3 전하 쌍 + CH1/CL 전하 쌍, 힌지/CH3 전하 쌍, SEED-body, Duobody, four-in-one-CrossMab(kih), LUZ-Y 공통 LC; LUZ-Y scFab-IgG, FcFc *; 부가된 및 Fc-변형된 IgG, 예를 들어 IgG(kih)-Fv, IgG HA-TF-Fv, IgG(kih)scFab, scFab-Fc(kih)-scFv2, scFab-Fc(kih)-scFv, 반 DVD-Ig, DVI-Ig(four-in-one), CrossMab-Fab; 변형된 Fc 및 CH3 융합 단백질, 예를 들어 Fab-Fc(kih)-scFv, Fab-scFv-Fc(kih), Fab-scFv-Fc(BEAT), Fab-scFv-Fc-SEEDbody, TriFab; 부가된 IgG - HC 융합, 예를 들어 IgG-HC, scFv, IgG-dAb, IgG-taFV, IgG-CrossFab, IgG-직교 Fab, IgG-(CαCβ) Fab, scFv-HC-IgG, 탠덤 Fab-IgG(직교 Fab), Fab-IgG(CαCβ Fab), Fab-IgG(CR3), Fab-힌지-IgG(CR3); 부가된 IgG - LC 융합, 예를 들어 IgG-scFv(LC), scFv(LC)-IgG, dAb-IgG; 부가된 IgG - HC 및 LC 융합, 예를 들어 DVD-Ig, TVD-Ig, CODV-Ig, scFv4-IgG, Zybody; Fc 융합, 예를 들어 Fab-scFv-Fc, scFv4-Ig; F(ab')2 융합, 에를 들어 F(ab')2-scFv2; CH1/CL 융합 단백질, 예를 들어 scFv2-CH1-힌지/CL); 변형된 IgG, 예를 들어 DAF(two-in one-IgG), DutaMab, Mab2; 및 비-Ig 융합(예를 들어 DNL-Fab4-IgG를 포함한다.
숙련가는 이중특이성 항원-결합 분자를 설계하고 제조할 수 있다. 이중특이성 항원-결합 분자를 제조하기 위한 방법은 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16]에 기술된 바와 같이, 예를 들어 환원성 디설파이드 또는 비-환원성 티오에테르 결합을 사용한 항원-결합 분자 또는 항체 단편의 화학적 가교결합을 포함한다. 예를 들어, N-숙신이미딜-3-(-2-피리딜디티오)-프로피오네이트(SPDP)를 사용하여 힌지 영역 SH-그룹을 통해 예를 들어 Fab 단편을 화학적으로 가교결합하여 디설파이드-결합된 이중특이성 F(ab)2 이종이량체를 생성할 수 있다.
이중특이성 항원-결합 분자를 생산하기 위한 다른 방법은, 예를 들어, 문헌[D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16]에 기술된 바와 같이, 이중특이성 항체를 분비할 수 있는 쿼드로마 세포를 생산하기 위해 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 항체-생산 하이브리도마를 융합시키는 것을 포함한다.
본 발명에 따른 이중특이성 항원-결합 분자는 또한 예를 들어 문헌[Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition (Humana Press, 2012), at Chapter 40: Production of Bispecific Antigen-binding molecules: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Frber-Schwarz), or French, How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339]에 기재된 바와 같이, 예를 들어 항원-결합 분자에 대한 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 작제물로부터의 발현에 의해 재조합적으로 생산될 수 있으며, 상기 문헌 둘 다의 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다. 예를 들어, 2개의 항원-결합 단편에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인(즉, HER3과 결합할 수 있는 항원-결합 단편에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인, 및 다른 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원-결합 단편에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인)을 암호화하고, 항원-결합 단편 사이의 적절한 링커 또는 이량체화 도메인을 암호화하는 서열을 포함하는 DNA 작제물은 분자 클로닝 기술에 의해 제조할 수 있다. 그 후, 재조합 이중특이성 항체는 적합한 숙주 세포(예를 들어, 포유류 숙주 세포)에서 작제물의 발현(예를 들어, 시험관내)에 의해 생산될 수 있고, 발현된 재조합 이중특이성 항체는 그후 임의로 정제될 수 있다.
Fc 영역
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 Fc 영역을 포함한다.
IgG, IgA 및 IgD 이소타입에서 Fc 영역은 한 폴리펩티드로부터의 CH2 및 CH3 영역 및 다른 폴리펩티드로부터의 CH2 및 CH3 영역으로 구성된다. 두 폴리펩티드로부터의 CH2 및 CH3 영역은 함께 Fc 영역을 형성한다. IgM 및 IgE 이소타입에서 Fc 영역은 3개의 불변 도메인(CH2, CH3 및 CH4)을 포함하며, 2개의 폴리펩티드로부터의 CH2 내지 CH4가 함께 Fc 영역을 형성한다.
본 개시내용의 다양한 측면에 따른 바람직한 실시양태에서, Fc 영역은 2개의 폴리펩티드를 포함하고, 각각의 폴리펩티드는 CH2 영역 및 CH3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 Fc 영역의 결합을 촉진하는 CH2 및 CH3 영역 중 하나 이상의 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 항원-결합 분자의 구성요소인 폴리펩티드의 재조합 공동-발현 및 후속 결합은 몇 가지 가능한 조합을 야기한다. 재조합 생산에서 항원-결합 분자 내의 폴리펩티드의 목적하는 조합의 수율을 개선하기 위해, 중쇄 폴리펩티드의 목적하는 조합의 결합을 촉진하는 Fc 영역 변형(들)을 도입하는 것이 유리하다. 변형은 예를 들어 상이한 폴리펩티드 쇄의 CH2 및/또는 CH3 영역 사이의 소수성 및/또는 정전기 상호작용을 촉진할 수 있다. 적절한 변형은 예를 들어, 문헌[Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 문헌[Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394]의 표 1에 나타낸 바와 같이, 하기 형식 중 하나에 따라 Fc 영역의 CH3 영역에 쌍을 이루는 치환을 포함하는 Fc 영역을 포함한다: KiH, KiHs -s, HA-TF, ZW1, 7.8.60, DD-KK, EW-RVT, EW-RVTs-s, SEED 또는 A107.
일부 실시양태에서, Fc 영역은 예를 들어 미국 제7,695,936호 및 문헌[Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)]에 기재된 바와 같은 "노브-인투-홀(knob-into-hole)" 또는 "KiH" 변형을 포함한다. 이러한 실시양태에서, Fc 영역의 CH3 영역들 중 하나는 "노브" 변형을 포함하고, 다른 CH3 영역은 "홀" 변형을 포함한다. "노브" 및 "홀" 변형은 각각의 CH3 영역 내에 위치하여, 폴리펩티드의 이종이량체화를 촉진(및 동종이량체화를 억제)하고/하거나 이종이량체를 안정화하기 위해 "노브"가 "홀"에 위치할 수 있다. 노브는 작은 쇄를 가진 아미노산을 더 큰 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어 티로신 또는 트립토판)으로 치환함으로써 작제된다. 홀은 큰 측쇄를 가진 아미노산을 더 작은 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어 알라닌 또는 트레오닌)으로 치환함으로써 생성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자의 Fc 영역의 CH3 영역 중 하나는 치환 (본원의 Fc, CH2 및 CH3 영역에서의 위치/치환의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은 EU 넘버링 시스템에 따른다) T366W를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 Y407V를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자의 Fc 영역의 CH3 영역 중 하나는 치환 T366W를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 T366S 및 L368A를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자의 Fc 영역의 CH3 영역 중 하나는 치환 T366W를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 Y407V, T366S 및 L368A를 포함한다.
일부 실시양태에서, Fc 영역은 예를 들어 제WO 2014/131694 A1호에 기재된 바와 같은 "DD-KK" 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환물 K392D 및 K409D를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 E356K 및 D399K를 포함한다. 변형은 CH3 영역 간의 정전기 상호작용을 촉진한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 문헌[Labrijn et al., Proc Natl Acad Sci U S A. (2013) 110(13):5145-50]에 기재된 바와 같이 변형된 Fc 영역을 포함하며, 이는 '듀오바디(Duobody)' 형식으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 K409R을 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 K405L을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 문헌[Strop et al., J Mol Biol. (2012) 420(3):204-19]에 기재된 바와 같은 "EEE-RRR" 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 D221E, P228E 및 L368E를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 D221R, P228R 및 K409R을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 문헌[Choi et al., Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748-59]에 기재된 "EW-RVT" 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 K360E 및 K409W를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 Q347R, D399V 및 F405T를 포함한다.
일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 S354C를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 Y349C를 포함한다. 이들 시스테인 잔기의 도입은 Fc 영역의 2개의 CH3 영역 사이에 디설파이드 다리의 형성을 초래하여, 이종이량체를 더욱 안정화시킨다(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15).
일부 실시양태에서, Fc 영역은 "KiHS -S" 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 T366W 및 S354C를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 T366S, L368A, Y407V 및 Y349C를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 문헌[Davis et al., Protein Eng Des Sel (2010) 23(4):195-202]에 기재된 바와 같은 "SEED" 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함하며, 여기서 인간 IgG1 CH3 및 IgA CH3의 β-가닥 세그먼트가 교환된다.
일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 S364H 및 F405A를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 Y349T 및 T394F를 포함한다(예를 들어, 참조; Moore et al., MAbs (2011) 3(6):546-57).
일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 T350V, L351Y, F405A 및 Y407V를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 T350V, T366L, K392L 및 T394W를 포함한다(예를 들어, 참조; Von Kreudenstein et al., MAbs (2013) 5(5):646-54).
일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 K360D, D399M 및 Y407A를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 E345R, Q347R, T366V 및 K409V를 포함한다(예를 들어, 참조; Leaver-Fay et al., Structure (2016) 24(4):641-51).
일부 실시양태에서, CH3 영역 중 하나는 치환 K370E 및 K409W를 포함하고, Fc 영역의 다른 CH3 영역은 치환 E357N, D399V 및 F405T를 포함한다(예를 들어, 참조; Choi et al., PLoS One (2015) 10(12):e0145349).
Fc-매개된 기능은 Fc 수용체 결합, 항체-의존성 세포 독성(ADCC), 항체-의존성 세포-매개 식균작용(ADCP), 보체-의존성 세포독성(CDC), 막 공격 복합체(MAC)의 형성, 세포 탈과립, 사이토카인 및/또는 케모카인 생산, 및 항원 처리 및 제시를 포함한다.
예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73]에 기술된 것과 같은 Fc-매개된 기능에 영향을 미치는 항체 Fc 영역에 대한 변형은 당업계에 공지되어 있다. 항체 이펙터 기능에 영향을 미치는 것으로 알려진 예시적인 Fc 영역 변형은 문헌[Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73]의 표 1에 요약되어 있다.
치환 F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L의 조합은 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 ADCC를 향상시키는 것으로 문헌[Stavenhagen et al. Cancer Res. (2007)]에 기재되어 있다. 치환 S239D/I332E 또는 S239D/I332E/A330L의 조합은 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 ADCC를 증가시키는 것으로 문헌[Lazar et al., Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005-4010]에 기재되어 있다. 치환 S239D/I332E/A330L의 조합은 또한 FcγRIIb에 대한 결합을 감소시키고, 이에 따라 ADCC를 증가시키는 것으로 기재되어 있다. 치환 S298A/E333A/K334A의 조합은 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 ADCC를 증가시키는 것으로 문헌[Shields et al., J Biol Chem. (2001) 276:6591-6604]에 기재되어 있다. 하나의 중쇄에서 치환 L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A의 조합 및 다른 중쇄에서 치환 D270E/K326D/A330M/K334E의 조합은 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 ADCC를 증가시키는 것으로 문헌[Mimoto et al., MAbs. (2013): 5:229-236]에 기재되어 있다. 치환 G236A/S239D/I332E의 조합은 FcγRIIa에 대한 결합을 증가시키고 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키며, 이에 따라 ADCP를 증가시키는 것으로 문헌[Richards et al., Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517-2527]에 기재되어 있다.
치환 K326W/E333S의 조합은 C1q에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 CDC를 증가시키는 것으로 문헌[Idusogie et al. J Immunol. (2001) 166(4):2571-5]에 기재되어 있다. 치환 S267E/H268F/S324T의 조합은 C1q에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 CDC를 증가시키는 것으로 문헌[Moore et al. MAbs. (2010) 2(2):181-9]에 기재되어 있다. 문헌[Natsume et al., Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72]에 기재된 치환의 조합은 C1q에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 CDC를 증가시키는 것으로 보고되어 있다. 치환 E345R/E430G/S440Y의 조합은 헥사머화를 증가시키고, 이에 따라 CDC를 증가시키는 것으로 문헌[Diebolder et al. Science (2014) 343(6176):1260-3]에 기재되어 있다.
치환 M252Y/S254T/T256E의 조합은 pH 6.0에서 FcRn에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 항원-결합 분자 반감기를 증가시키는 것으로 문헌[Dall'Acqua et al. J Immunol. (2002) 169:5171-5180]에 기재되어 있다. 치환 M428L/N434S의 조합은 pH 6.0에서 FcRn에 대한 결합을 증가시키고, 이에 따라 항원-결합 분자 반감기를 증가시키는 것으로 문헌[Zalevsky et al. Nat Biotechnol. (2010) 28:157-159]에 기재되어 있다.
중쇄 불변 영역/Fc 영역/CH2-CH3 영역/CH2 영역/CH3 영역이 기준 위치(들)/치환(들)에 "상응하는" 위치(들)/치환(들)을 포함하는 것으로 본원에 기재된 경우, 상동성 중쇄 불변 영역/Fc 영역/CH2-CH3 영역/CH2 영역/CH3 영역에서의 등가 위치(들)/치환(들)이 고려된다.
Fc 영역이 특정 위치(들)/치환(들)을 포함하는 것으로 기재된 경우, 위치(들)/치환(들)은 함께 Fc 영역을 형성하는 폴리펩티드 쇄 중 하나 또는 둘 다에 존재할 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본원의 위치들은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같이 EU 넘버링 시스템에 따라 번호가 매겨진 인간 면역글로불린 불변 영역 아미노산 서열의 위치를 지칭한다. 예시로서, 인간 IgG1에서의 치환 L242C 및 K334C는 서열 번호 171에 따라 번호가 매겨진 인간 IgG1 불변 영역의 위치 125에서의 L>C 치환, 및 위치 217에서의 K>C 치환에 상응한다.
상동성 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1의 중쇄 불변 영역(즉, 서열 번호 171에 나타낸 아미노산 서열)에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역이다. 상동성 Fc 영역은 인간 IgG1의 CH2-CH3 영역(즉, 서열 번호 174 및 175에 나타낸 아미노산 서열)에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로 구성된 Fc 영역이다. 상동성 CH2 영역은 인간 IgG1의 CH2 영역(즉, 서열 번호 174에 나타낸 아미노산 서열)에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CH2 영역이다. 상동성 CH3 영역은 인간 IgG1의 CH3 영역(즉, 서열 번호 175에 나타낸 아미노산 서열)에 대해 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CH3 영역이다.
인간 IgG1에서 식별된 위치에 상응하는 위치는 예를 들어 ClustalOmega(Soding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)와 같은 서열 정렬 소프트웨어를 사용하여 수행될 수 있는 서열 정렬에 의해 식별될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 Fc-매개된 기능을 증가시키기 위한 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 ADCC를 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 ADCP를 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 CDC를 증가시키기 위한 변형을 포함한다. Fc-매개된 기능(예를 들어, ADCC, ADCP, CDC)을 증가시키기 위한 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 상응하는 변형되지 않은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자와 비교하여 관련 이펙터 기능의 증가된 수준을 유도한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 하나 이상의 Fc 수용체(예를 들어, FcγRIIa, FcγRIIIa)에 대한 친화성을 증가시키기 위한 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. Fc 수용체에 대한 친화성을 증가시키는 변형은 항체-의존성 세포 독성(ADCC) 및/또는 항체-의존성 세포 식균작용(ADCP)과 같은 Fc-매개된 이펙터 기능을 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 C1q에 대한 친화성을 감소시키기 위한 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함하고; 이러한 변형은 보체-의존성 세포독성(CDC)을 감소시키며, 이것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 헥사머 형성을 증가시키기 위한 변형을 포함하는 Fc 영역을 포함한다. 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 친화성을 증가시키고, C1q에 대한 친화성을 감소시키고/시키거나 헥사머 형성을 증가시킬 수 있는 Fc 영역에 대한 변형은 예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580]에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 문헌[Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580]의 표 1에 나타낸 치환 중 하나 이상을 포함하는 CH2/CH3를 포함하는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 Fc 수용체에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함하는 Fc를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 Fcγ 수용체에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa 및 FcγRIIIb 중 하나 이상에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 FcγRIIIa에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 FcγRIIa에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 FcγRIIb에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 FcRn에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 보체 단백질에 대한 결합을 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 C1q에 대한 결합을 증가시키거나 감소시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 항원-결합 분자의 헥사머화를 촉진하기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 항원-결합 분자 반감기를 증가시키기 위한 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 공동-관여(co-engagement)를 증가시키기 위한 변형을 포함한다.
본 명세서에서 "Fcγ 수용체"는 임의의 종으로부터 유래될 수 있고, 임의의 종으로부터의 이소형, 단편, 변이체(돌연변이체 포함) 또는 상동체를 포함한다. 유사하게, "FcγRI", "FcγRIIa", "FcγRIIb", "FcγRIIc", "FcγRIIIa" 및 "FcγRIIIb"는 각각 임의의 종으로부터의 FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb를 지칭하며, 임의의 종으로부터의 이소형, 단편, 변이체(돌연변이체 포함) 또는 상동체를 포함한다. 인간은 6가지 상이한 부류의 Fc γ 수용체를 갖는다(마우스 오르소로그는 괄호 안에 표시된다): FcγRI (mFcγRI), FcγRIIa (mFcγRIII), FcγRIIb (mFcγRIIb), FcγRIIc, FcγRIIIa (mFcγRIV) 및 FcγRIIIb. 변이체 Fcγ 수용체는 예를 들어 인간 FcγRIIIa의 158V 및 158F 다형체, 및 인간 FcγRIIa의 167H 및 167R 다형체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 다음 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)을 포함하는 (예를 들어 중쇄 불변 영역, 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다: 위치 242에 상응하는 위치에 C; 위치 334에 상응하는 위치에 C; 위치 236에 상응하는 위치에 A; 위치 239에 상응하는 위치에 D; 위치 332에 상응하는 위치에 E; 위치 330에 상응하는 위치에 L; 위치 345에 상응하는 위치에 K; 및 위치 430에 상응하는 위치에 G.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 하기 치환(또는 상응하는 치환) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)을 포함하는 (예를 들어 중쇄 불변 영역, 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다: L242C, K334C, G236A, S239D, I332E, A330L, E345K 및 E430G.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 242에 상응하는 위치에 C를 포함하는 (예를 들어 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 334에 상응하는 위치에 C를 포함한다 (예를 들어 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 242에 상응하는 위치에 C를 포함하고 위치 334에 상응하는 위치에 C를 포함한다 (예를 들어 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 236에 상응하는 위치에 A를 포함하는 (예를 들어 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 239에 상응하는 위치에 D를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 236에 상응하는 위치에 A, 및 위치 239에 상응하는 위치에 D를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 332에 상응하는 위치에 E를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 및 위치 332에 상응하는 위치에 E를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 330에 상응하는 위치에 L을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 위치 332에 상응하는 위치에 E, 및 위치 330에 상응하는 위치에 L을 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 345에 상응하는 위치에 K를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 430에 상응하는 위치에 G를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 위치 345에 상응하는 위치에 K, 및 위치 430에 상응하는 위치에 G를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 242에 상응하는 위치에 C, 위치 334에 상응하는 위치에 C, 위치 236에 상응하는 위치에 A, 및 위치 239에 상응하는 위치에 D를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 242에 상응하는 위치에 C, 위치 334에 상응하는 위치에 C, 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 및 위치 332에 상응하는 위치에 E를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 242에 상응하는 위치에 C, 위치 334에 상응하는 위치에 C, 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 위치 332에 상응하는 위치에 E, 및 위치 330에 상응하는 위치에 L을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 위치 242에 상응하는 위치에 C, 위치 334에 상응하는 위치에 C, 위치 345에 상응하는 위치에 K, 및 위치 430에 상응하는 위치에 G를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변의 영역, 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 L242C(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 K334C(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 L242C(또는 등가 치환) 및 치환 K334C(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 G236A(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 S239D(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 G236A(또는 등가 치환) 및 치환 S239D(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 I332E(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 G236A(또는 등가 치환), 치환 S239D(또는 등가 치환), 및 치환 I332E(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 A330L(또는 등가 치환)을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 G236A(또는 등가 치환), 치환 S239D(또는 등가 치환), 치환 I332E(또는 등가 치환), 및 치환 A330L(또는 등가 치환)을 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 E345K(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 E430G(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다). 일부 실시양태에서, Fc 영역은 치환 E345K(또는 등가 치환) 및 치환 E430G(또는 등가 치환)를 포함한다 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함한다).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 L242C(또는 등가 치환), 치환 K334C(또는 등가 치환), 치환 G236A(또는 등가 치환), 및 치환 S239D(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 L242C(또는 등가 치환), 치환 K334C(또는 등가 치환), 치환 G236A(또는 등가 치환), 치환 S239D(또는 등가 치환) 및 치환 I332E(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 L242C(또는 등가 치환), 치환 K334C(또는 등가 치환), 치환 G236A(또는 등가 치환), 치환 S239D(또는 등가 치환), 치환 I332E(또는 등가 치환) 및 치환 A330L(또는 등가 치환)을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, CH2-CH3 영역, 또는 CH2 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환 L242C(또는 등가 치환), 치환 K334C(또는 등가 치환), 치환 E345K(또는 등가 치환), 및 치환 E430G(또는 등가 치환)를 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변의 영역, 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12)을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역, 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다: 위치 243에 상응하는 위치에 L, 위치 292에 상응하는 위치에 P, 위치 300에 상응하는 위치에 L, 위치 305에 상응하는 위치에 I 및 위치 396에 상응하는 위치에 L; 위치 239에 상응하는 위치에 D 및 위치 332에 상응하는 위치에 E; 위치 239에 상응하는 위치에 D, 위치 332에 상응하는 위치에 E 및 위치 330에 상응하는 위치에 L; 위치 298에 상응하는 위치에 A, 위치 333에 상응하는 위치에 A 및 위치 334에 상응하는 위치에 A; 위치 234에 상응하는 위치에 Y, 위치 235에 상응하는 위치에 Q, 위치 236에 상응하는 위치에 W, 위치 239에 상응하는 위치에 M, 위치 268에 상응하는 위치에 D, 위치 270에 상응하는 위치에 E 및 위치 298에 상응하는 위치에 A; 위치 270에 상응하는 위치에 E, 위치 326에 상응하는 위치에 D, 위치 330에 상응하는 위치에 M 및 위치 334에 상응하는 위치에 E; 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D 및 위치 332에 상응하는 위치에 E; 위치 326에 상응하는 위치에 W 및 위치 333에 상응하는 위치에 S; 위치 267에 상응하는 위치에 E, 위치 268에 상응하는 위치에 F 및 위치 324에 상응하는 위치에 T; 위치 345에 상응하는 위치에 R, 위치 430에 상응하는 위치에 G 및 위치 440에 상응하는 위치에 Y; 위치 252에 상응하는 위치에 Y, 위치 254에 상응하는 위치에 T 및 위치 256에 상응하는 위치에 E; 및 위치 428에 상응하는 위치에 L 및 위치 434에 상응하는 위치에 S.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 치환(또는 상응하는 치환)의 하기 조합 중 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12)을 포함하는 (예를 들어, 중쇄 불변 영역 또는 CH2-CH3 영역을 포함하는 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는) Fc 영역을 포함한다: F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L; S239D/I332E; S239D/I332E/A330L; S298A/E333A/K334A; L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A; D270E/K326D/A330M/K334E; G236A/S239D/I332E; K326W/E333S; S267E/H268F/S324T; E345R/E430G/S440Y; M252Y/S254T/T256E; 및 M428L/N434S.
폴리펩티드
본 발명은 또한 항원-결합 분자의 폴리펩티드 구성분을 제공한다. 폴리펩티드는 단리되거나 실질적으로 정제된 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 항원-결합 분자는 폴리펩티드의 복합체일 수 있거나, 이를 포함할 수 있다.
본 명세서에서, 폴리펩티드가 하나 이상의 도메인 또는 영역을 포함하는 경우, 복수의 도메인/영역은 바람직하게는 동일한 폴리펩티드 쇄에 존재하는 것으로 인지될 것이다. 즉, 하나 이상의 도메인 또는 영역을 포함하는 폴리펩티드는 도메인/영역을 포함하는 융합 폴리펩티드이다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 VH를 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 VL을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 하나 이상의 항체 중쇄 불변 영역(CH)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 하나 이상의 항체 경쇄 불변 영역(CL)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 면역글로불린(Ig)의 CH1, CH2 영역 및/또는 CH3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 면역글로불린 중쇄 불변 서열의 하나 이상의 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CH1 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CH1-CH2 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CH2 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CH3 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CH2-CH3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 하기 아미노산 치환/아미노산 치환의 조합 중 어느 하나를 포함하는 CH3 영역을 포함한다(예를 들어, 상기 참고로 포함된 문헌[Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394]의 표 1에 나타냄: T366W; T366S, L368A 및 Y407V; T366W 및 S354C; T366S, L368A, Y407V 및 Y349C; S364H 및 F405A; Y349T 및 T394F; T350V, L351Y, F405A 및 Y407V; T350V, T366L, K392L 및 T394W; K360D, D399M 및 Y407A; E345R, Q347R, T366V 및 K409V; K409D 및 K392D; D399K 및 E356K; K360E 및 K409W; Q347R, D399V 및 F405T; K360E, K409W 및 Y349C; Q347R, D399V, F405T 및 S354C; K370E 및 K409W; 및 E357N, D399V 및 F405T.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드의 CH2 및/또는 CH3 영역은 CH2 및/또는 CH3 영역을 포함하는 다른 폴리펩티드와 폴리펩티드의 결합을 촉진하기 위한 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 면역글로불린 경쇄 불변 서열의 하나 이상의 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 CL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 다음 중 하나에 따른 N--내지 C-말단의 구조를 포함한다:
(i) VH
(ii) VL
(iii) VH-CH1
(iv) VL-CL
(v) VL-CH1
(vi) VH-CL
(vii) VH-CH1-CH2-CH3
(viii) VL-CL-CH2-CH3
(ix) VL-CH1-CH2-CH3
(x) VH-CL-CH2-CH3
본 발명의 폴리펩티드로 구성된 항원-결합 분자가 또한 본 발명에 의해 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 하기 폴리펩티드의 조합 중 하나를 포함한다:
(A) VH + VL
(B) VH-CH1 + VL-CL
(C) VL-CH1 + VH-CL
(D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL
(E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1
(F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL
(G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1
(H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3
(I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 상기 (A) 내지 (I)에 나타낸 조합의 폴리펩티드 중 하나 이상을 포함한다. 예로서, 상기 (D)와 관련하여, 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 구조 VH-CH1-CH2-CH3를 포함하는 2개의 폴리펩티드, 및 구조 VL-CL을 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 하기 폴리펩티드의 조합 중 하나를 포함한다:
(J) VH (항-HER3) + VL (항-HER3)
(K) VH (항-HER3)-CH1 + VL (항-HER3)-CL
(L) VL (항-HER3)-CH1 + VH (항-HER3)-CL
(M) VH (항-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VL (항-HER3)-CL
(N) VH (항-HER3)-CL-CH2-CH3 + VL (항-HER3)-CH1
(O) VL (항-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VH (항-HER3)-CL
(P) VL (항-HER3)-CL-CH2-CH3 + VH (항-HER3)-CH1
(Q) VH (항-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VL (항-HER3)-CL-CH2-CH3
(R) VH (항-HER3)-CL-CH2-CH3 + VL (항-HER3)-CH1-CH2-CH3
여기서: "VH(항-HER3)"는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 상기 (1) 내지 (61) 중 하나에 정의된 바와 같이, HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 VH를 지칭하고; "VL(항-HER3)"은 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 상기 (62) 내지 (119) 중 하나에 정의된 바와 같이, HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 VL을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열 번호 187 내지 223 중 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
링커 및 추가 서열
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시예들에서, 힌지 영역은 CH1 영역과 CH2 영역 사이에 제공된다. 일부 실시양태에서, 힌지 영역은 CL 영역과 CH2 영역 사이에 제공된다. 일부 실시양태에서, 힌지 영역은 서열 번호 173의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 아미노산 서열 사이에 하나 이상의 링커 서열을 포함한다. 링커 서열은 항원-결합 분자/폴리펩티드의 VH, VL, CH1-CH2 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역 중 하나 이상의 한쪽 또는 양쪽 말단에 제공될 수 있다.
링커 서열은 숙련가에게 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 가요성 링커 서열일 수 있다. 가요성 링커 서열은 링커 서열에 의해 연결된 아미노산 서열의 상대적 이동을 허용한다. 가요성 링커는 숙련가에게 알려져 있으며, 몇 가지는 문헌[Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369]에서 확인된다. 가요성 링커 서열은 종종 높은 비율의 글리신 및/또는 세린 잔기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 링커 서열은 적어도 하나의 글리신 잔기 및/또는 적어도 하나의 세린 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 글리신 및 세린 잔기로 구성된다. 일부 실시양태에서, 링커 서열은 1-2, 1-3, 1-4, 1-5 또는 1-10개 아미노산의 길이를 갖는다.
본 발명의 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 추가 아미노산 또는 아미노산의 서열을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 항원-결합 분자/폴리펩티드의 발현, 접힘, 트래피킹, 처리, 정제 또는 검출을 용이하게 하기 위해 아미노산 서열(들)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항원-결합 분자/폴리펩티드는 임의로 항원-결합 분자/폴리펩티드의 N- 또는 C- 말단에 His, (예를 들어, 6XHis), Myc, GST, MBP, FLAG, HA, E, 또는 비오틴 태그를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자/폴리펩티드는 검출 가능한 모이어티, 예를 들어, 형광, 발광, 면역-검출, 방사선, 화학, 핵산 또는 효소 표지를 포함한다.
본 발명의 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 신호 펩티드(리더 서열 또는 신호 서열로도 알려짐)를 추가로 포함할 수 있다. 신호 펩티드는 일반적으로 단일 알파 나선을 형성하는 5-30개의 소수성 아미노산의 서열로 구성된다. 분비된 단백질 및 세포 표면에서 발현되는 단백질은 종종 신호 펩티드를 포함한다.
신호 펩티드는 항원-결합 분자/폴리펩티드의 N-말단에 존재할 수 있고, 새로 합성된 항원-결합 분자/폴리펩티드에 존재할 수 있다. 신호 펩티드는 항원-결합 분자/폴리펩티드의 효율적인 트래피킹 및 분비를 제공한다. 신호 펩티드는 종종 절단에 의해 제거되며, 따라서 항원 결합 분자/폴리펩티드를 발현하는 세포로부터 분비되는 성숙한 항원-결합 분자/폴리펩티드에 포함되지 않는다.
신호 펩티드는 많은 단백질에 대해 알려져 있으며, GenBank, UniProt, Swiss-Prot, TrEMBL, Protein Information Resource, Protein Data Bank, Ensembl, 및 InterPro와 같은 데이터베이스에 기록되고/되거나, 예를 들어 SignalP(Petersen et al., 2011 Nature Methods 8:785-786) 또는 Signal-BLAST(Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)과 같은 아미노산 서열 분석 도구를 사용하여 확인/예측될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자/폴리펩티드의 신호 펩티드는 서열 번호 178 내지 186 중 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
표지 및 접합체
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 검출 가능한 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 검출 가능한 모이어티, 예를 들어, 형광 표지, 인광 표지, 발광 표지, 면역-검출 가능 표지(예를 들어 에피토프 태그), 방사선 표지, 화학물질, 핵산 또는 효소 표지를 포함한다. 항원-결합 분자는 검출 가능한 모이어티로 공유 또는 비공유 표지될 수 있다.
형광 표지는 예를 들어 플루오레세인, 로다민, 알로피코시아닌, 에오신 및 NDB, 유로퓸(Eu), 테르븀(Tb) 및 사마륨(Sm)과 같은 희토류의 녹색 형광 단백질(GFP) 킬레이트, 테트라메틸 로다민, 텍사스 레드, 4-메틸 움벨리페론, 7-아미노-4-메틸 쿠마린, Cy3 및 Cy5를 포함한다. 방사성 표지는 요오드123, 요오드125, 요오드126, 요오드131, 요오드133, 브롬77, 테크네튬99m, 인듐111, 인듐113m, 갈륨67, 갈륨68, 루테늄95, 루테늄97, 루테늄103, 루테늄105, 수은207, 수은203, 레늄99m, 레늄101, 레늄105, 스칸듐47, 텔루륨121m, 텔루륨122m, 텔루륨125m, 툴륨165, 툴륨167, 툴륨168, 구리67, 불소18, 이트륨90, 팔라듐100, 비스무트217 및 안티몬211과 같은 방사성 동위원소를 포함한다. 발광 표지는 방사선 발광, 화학 발광(예를 들어 아크리디늄 에스테르, 루미놀, 이소루미놀) 및 생물발광 표지를 포함한다. 면역-검출 가능한 표지는 합텐, 펩티드/폴리펩티드, 항체, 수용체 및 리간드, 예를 들어 비오틴, 아비딘, 스트렙타비딘 또는 디곡시제닌을 포함한다. 핵산 표지는 앱타머를 포함한다. 효소 표지는 예를 들어 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 글루코스 옥시다제, 베타-갈락토시다제 및 루시퍼라제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 화학적 모이어티에 접합된다. 화학적 모이어티는 치료 효과를 제공하기 위한 모이어티일 수 있다. 항체-약물 접합체는 예를 들어 문헌[Parslow et al., Biomedicines. 2016 Sep; 4(3):14]에 검토되어 있다. 일부 실시양태에서, 화학적 모이어티는 약물 모이어티(예를 들어, 세포독성제)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 약물 모이어티는 화학요법제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 약물 모이어티는 칼리케아마이신, DM1, DM4, 모노메틸아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸아우리스타틴 F(MMAF), SN-38, 독소루비신, 듀오카마이신, D6.5 및 PBD로부터 선택된다.
항원-결합 분자의 특정 예시적인 실시양태
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 187의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 188의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 189의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 191의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 192의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 193의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 195의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 194의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 195의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 196의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 195의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 197의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 199의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 198의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 199의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 200의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 201의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 202의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 203의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 204의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 205의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 206의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 207의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 208의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 209의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 210의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 211의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 212의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 213의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 214의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 215의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 216의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 218의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 219의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 220의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 221의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 222의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 223의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 225의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 207의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 226의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 207의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 227의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하거나 이들로 구성된다:
(i) 서열 번호 228의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드; 및
(ii) 서열 번호 217의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 두 개의 폴리펩티드.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함된 제GB 2108449.6호에 기재된 바와 같이 ATCC 특허 기탁 번호 PTA-127062로서 2021년 5월 7일에 기탁된 세포주에 의해 생성된다.
항원-결합 분자의 기능적 특성
본원에 기재된 항원-결합 분자는 특정 기능적 특성을 참조하여 특성화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 분자는 하기 특성 중 하나 이상을 가질 수 있다:
HER3(예를 들어 인간, 마우스, 래트 또는 시노몰구스 마카크 HER3)에 결합하고;
EGFR 및/또는 HER2에 결합하지 않으며;
HER3-발현 세포에 결합하고;
HER3의 세포외 영역의 하위도메인 II에 결합하고;
HER3이 개방 및 폐쇄 형태일 때 HER3에 결합하고;
NRG와 무관하게 HER3에 결합하고;
HER3에 결합하기 위해 MM-121 및/또는 LJM-716과 경쟁하지 않고;
HER3에 결합하기 위해 M-05-74 및/또는 M-08-11과 경쟁하지 않고;
HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너(예를 들어 HER3, HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R 및/또는 cMet) 사이의 상호작용을 억제하고;
HER3-매개된 신호전달을 억제하고;
(예를 들어 NRG로의 자극에 대한 반응으로) HER3-발현 세포의 증식을 억제하고.
(예를 들어 NRG로의 자극에 대한 반응으로) HER3-발현 세포에 의한 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달을 억제하고;
NRG1의 존재 및/또는 부재하에 HER3 및/또는 AKT의 인산화를 억제하고;
활성적 Fcγ 수용체(예를 들어 FcγRIIIa)에 결합하고;
활성적 Fcγ 수용체에 대한 결합을 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 활성적 Fcγ 수용체에 대한 결합을 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 억제성 Fcγ 수용체에 대한 결합을 감소시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 억제성 Fcγ 수용체에 비해 활성적 Fcγ 수용체에 대한 결합을 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 보체 단백질(예를 들어, C1q)에 대한 결합을 증가시키거나 감소시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 헥사머화를 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 ADCC 활성을 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 ADCP 활성을 증가시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 CDC 활성을 증가시키거나 감소시키고;
서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 구성된 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자와 비교하여 열안정성이 유사하거나 증가하고;
HER3-발현 세포의 사멸을 증가시키고;
HER3-발현 세포의 수/비율을 감소시키고;
종양 세포 증식을 (예를 들어, MM-121 및/또는 LJM-716에 비해 더 큰 범위로) 억제하고;
생체내에서 암의 발생 및/또는 진행을 억제한다.
본원에 기재된 항원-결합 분자는 바람직하게는 HER3에 대한 특이적 결합을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적 결합"은 항원에 대해 선택적인 결합을 지칭하며, 비-표적 항원에 대한 비특이적 결합과는 구별될 수 있다. 표적 분자에 특이적으로 결합하는 항원-결합 분자는 바람직하게는 다른 비-표적 분자에 결합하는 것보다 더 큰 친화성, 및/또는 더 긴 지속시간으로 표적에 결합한다.
주어진 분자에 특이적으로 결합하는 주어진 폴리펩티드의 능력은 당업계에 공지된 방법에 따른 분석, 예를 들어 ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR; 예를 들어, 참조; Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442), 생물층 간선법(예를 들어, 참조; Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4)): 498-507), 유세포 분석 또는 방사선 표지된 항원-결합 분석(RIA) 효소-결합 면역흡착 분석에 의해 결정될 수 있다. 이러한 분석을 통해 주어진 분자에 대한 결합을 측정하고 정량화할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합은 주어진 분석에서 검출된 반응일 수 있다.
일부 실시양태에서, 비-표적 분자에 대한 항원-결합 분자의 결합의 정도는 예를 들어 ELISA, SPR, 생물층 간섭법 또는 RIA에 의해 측정된 바와 같이, 표적 분자에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 대안적으로, 결합 특이성은 항원-결합 분자가 비-표적 분자에 대한 항원-결합 분자의 KD보다 적어도 0.1 자릿수(즉, 0.1 x 10n, 여기서 n은 자릿수를 나타내는 정수임) 큰 해리 상수(KD)로 결합하는 결합 친화도의 관점에서 반영될 수 있다. 이것은 임의로 적어도 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5 또는 2.0 중 하나일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 인간 HER3, 마우스 HER3, 래트 HER3 및/또는 시노몰구스 마카크(Macaca fascicularis) HER3에 대한 결합을 나타낸다. 즉, 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 인간 HER3, 마우스 HER3, 래트 HER3 및/또는 시노몰구스 마카크 HER3에 대해 교차-반응성이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 비인간 영장류의 HER3과 교차-반응성을 나타낸다. 모델 종에서 HER3에 대한 교차-반응성은 대리 분자에 의존하지 않고 합성 모델에서 효능의 생체내 탐색을 가능하게 한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 인간 HER3, 마우스 HER3, 래트 HER3 및/또는 시노몰구스 마카크 HER3에 결합하고; HER2 및/또는 EGFR(예를 들어 인간 HER2 및/또는 인간 EGFR)에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 EGFR(예를 들어, 인간 EGFR)에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER2(예를 들어, 인간 HER2)에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3 이외의 단백질의 EGFR 계열의 구성원에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는다(즉, 교차-반응하지 않는다). 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 EGFR, HER2 및/또는 HER4에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 10 μM 이하, 바람직하게는 ≤5 μM, ≤2 μM, ≤1 μM, ≤500 nM, ≤400 nM, ≤300 nM, ≤200 nM, ≤100 nM, ≤95 nM, ≤90 nM, ≤85 nM, ≤80 nM, ≤75 nM, ≤70 nM, ≤65 nM, ≤60 nM, ≤55 nM, ≤50 nM, ≤45 nM, ≤40 nM, ≤35 nM, ≤30 nM, ≤25 nM, ≤20 nM, ≤15 nM, ≤12.5 nM, ≤10 nM, ≤9 nM, ≤8 nM, ≤7 nM, ≤6 nM, ≤5 nM, ≤4 nM ≤3 nM, ≤2 nM, ≤1 nM, ≤900 pM, ≤800 pM, ≤700 pM, ≤600 pM, ≤500 pM, ≤400 pM, ≤300 pM, ≤200 pM, ≤100 pM, ≤90 pM, ≤80 pM, ≤70 pM, ≤60 pM, ≤50 pM, ≤40 pM, ≤30 pM, ≤20 pM, ≤10 pM, ≤9 pM, ≤8 pM, ≤7 pM, ≤6 pM, ≤5 pM, ≤4 pM, ≤3 pM, ≤2 pM, ≤1 pM 중 하나의 KD로 HER3(예를 들어 인간 HER3)에 결합한다.
본 발명의 항원-결합 분자는 HER3의 특정 관심 영역에 결합할 수 있다. 본 발명에 따른 항원-결합 분자의 항원-결합 영역은 아미노산의 연속 서열(즉, 아미노산 1차 서열)로 구성되는 HER3의 선형 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아미노산 서열의 아미노산의 불연속 서열로 구성되는 HER3의 구조적 에피토프에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 세포외 영역(예를 들어, 서열 번호 9에 나타낸 영역)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3의 세포외 영역(예를 들어, 서열 번호 16에 나타낸 영역)의 하위도메인 II에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22에 나타낸 HER3의 영역에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22에 나타낸 HER3 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기와 접촉한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 서열 번호 1, 3, 4, 6 또는 8 중 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230 및 231의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 230의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 231의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 펩티드/폴리펩티드에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 HER3의 영역에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 HER3 영역의 아미노산 잔기와 접촉하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3의 영역에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23에 나타낸 HER3 영역의 아미노산 잔기와 접촉하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 1의 위치 260 내지 279에 상응하는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드에 결합할 수 없다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 서열 번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드에 결합할 수 없다.
본원에 사용된 바와 같이, "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산 단량체의 쇄를 지칭한다. 펩티드는 전형적으로 약 2 내지 50개 아미노산 영역의 길이를 갖는다. "폴리펩티드"는 2개 이상의 펩티드의 중합체 쇄이다. 폴리펩티드는 전형적으로 약 50개 이상의 아미노산의 길이를 갖는다.
주어진 펩티드/폴리펩티드에 결합하는 항원-결합 분자의 능력은 ELISA, 면역블롯(예를 들어 웨스턴 블롯), 면역침전, 표면 플라즈몬 공명 및 생물층 간섭법에 의한 분석을 포함하여 숙련가에게 잘 알려진 방법으로 분석할 수 있다.
HER3에 대한 리간드 결합은 HER3이 동종이량체화 또는 이종이량체화될 수 있도록 하는 구조적 변화를 촉진하여 다운스트림 경로의 활성화를 초래한다. HER3은 '폐쇄' 형태 및 '개방' 형태를 입증한다. 폐쇄 형태란 HER3이 테더링된 형태에 있으며 수용체 동종이량체화 또는 이종이량체화를 위해 이용 가능하지 않음을 의미한다. 개방 형태란 HER3이 확장된 형태에 있으며 수용체 동종이량체화 또는 이종이량체화를 위해 이용 가능함을 의미한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3이 개방 형태일 때 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3이 폐쇄 형태일 때 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3이 개방 및/또는 폐쇄 형태일 때 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3이 개방 및/또는 폐쇄 형태일 때 HER3 엑토도메인에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3이 개방 및/또는 폐쇄 형태일 때 HER3 이량체화 암에 결합할 수 있다. 이량체화 암에 결합하는 것은 항원-결합 분자가 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용을 방지할 수 있게 한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 리간드의 존재 및/또는 부재하에서 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 리간드와 무관하게 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 리간드는 NRG, NRG-1 및/또는 NRG-2이다. HER3는 HER3이 동종이량체화 또는 이종이량체화할 수 있도록 하는 구조적 변화를 촉진하는 이의 세포외 도메인에 대한 리간드 결합에 의해 활성화된다. 리간드 결합과 무관하게 항원-결합 분자를 HER3에 결합하면 항원-결합 분자가 리간드-부재 및 리간드-존재 형태 상태 모두에서 HER3의 작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 리간드 결합과 경쟁하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 리간드 결합 부위에서 HER3에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 리간드의 존재 또는 부재하에서(즉, HER3이 리간드-결합된 또는 결합되지 않은 형태로 제공되는지의 여부와 무관하게) HER3에 유사하게 잘 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3에 대한 리간드의 부재하에서 HER3에 대한 항원-결합 분자의 결합의 친화도와 유사한 친화도로 HER3에 대한 리간드의 존재하에서 HER3에 결합한다. 본 개시내용의 실시예 8.10 및 도 78a 및 도 78b는 HER3이 NRG1-결합된 형태로 제공될 때 및 NRG1의 부재하에서 둘 다 10D1F가 피코몰-이하의 친화도로 인간 HER3에 결합한다는 것을 입증한다.
본원에서, 참조 결합 친화도와 '유사한' 결합 친화도는 필적하는 조건하에서 결정된 바와 같이, 참조 결합 친화도의 50% 이내, 예를 들어 40%, 45%, 30%, 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 중 하나 이내의 결합 친화도를 의미한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 (필적하는 조건하에서 결정된 바와 같이) 리간드의 부재하에서 HER3에 결합하기 위한 항원-결합 분자의 KD의 50% 이내, 예를 들어 40%, 45%, 30%, 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 중 하나 이내의 KD로 HER3에 대한 리간드(예를 들어, NRG1 또는 NRG2)의 존재하에서 HER3에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 (필적하는 조건하에서 결정된 바와 같이) 리간드의 부재하에서 HER3에 결합하기 위한 항원-결합 분자의 Kon의 50% 이내, 예를 들어 40%, 45%, 30%, 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 중 하나 이내의 Kon로 HER3에 대한 리간드(예를 들어, NRG1 또는 NRG2)의 존재하에서 HER3에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 (필적하는 조건하에서 결정된 바와 같이) 리간드의 부재하에서 HER3에 결합하기 위한 항원-결합 분자의 Koff의 50% 이내, 예를 들어 40%, 45%, 30%, 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 중 하나 이내의 Koff로 HER3에 대한 리간드(예를 들어, NRG1 또는 NRG2)의 존재하에서 HER3에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 클론 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92, 10D1_c93, 10A6, 4-35-B2 또는 4-35-B4 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 HER3의 영역에 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 결합시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 클론 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91 중 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 HER3의 영역에 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 결합시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 클론 10D1_c89의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체에 의해 결합되는 HER3의 영역에 HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역을 결합시킬 수 있다.
항체가 결합하는 펩티드/폴리펩티드의 영역은 항체-항원 복합체의 X-선 공결정학 분석, 펩티드 스캐닝, 돌연변이 유발 맵핑, 질량 분석법에 의한 수소-중수소 교환 분석, 파지 디스플레이, 경쟁 ELISA 및 단백질-분해 기반 '보호' 방법을 포함하여, 당업계에 잘 알려진 다양한 방법을 사용하여 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, 문헌[Gershoni et al., BioDrugs, 2007, 21(3):145-156]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 이러한 방법은 또한 항원-결합 분자가 다른 형태의 단백질에 결합할 수 있는지 여부를 결정하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 항-HER3 항체 클론 MM-121(예를 들어, 문헌[Schoeberl et al., Sci. Signal. (2009) 2(77): ra31]에 기재된 바와 같음) 및/또는 LJM-716(예를 들어, 문헌[Garner et al., Cancer Res (2013) 73:6024-6035]에 기재된 바와 같음)의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체로서, HER3의 동일한 영역, 또는 HER3의 중첩 영역에서 HER3에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 예를 들어 SPR 분석에 의해 결정된 바와 같이, HER3에 결합하기 위해 항-HER3 항체 클론 MM-121 및/또는 LJM-716의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체와의 경쟁을 나타내지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3이 세포 표면(즉, 세포막 내 또는 세포막에서) 발현될 때 항원-결합 분자(즉, 세포외 항원-결합 분자)에 접근할 수 있는 영역에서 HER3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3를 발현하는 세포의 세포 표면에서 발현된 HER3에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포(예를 들어, HER3+ 세포, 예를 들어 HER3+ 암세포)에 결합할 수 있다.
주어진 세포 유형에 결합하는 항원-결합 분자의 능력은 세포를 항원-결합 분자와 접촉시키고, 예를 들어 결합되지 않은 항원-결합 분자를 제거하기 위한 세척 단계 후, 세포에 결합된 항원-결합 분자를 검출함으로써 분석될 수 있다. 면역 세포 표면 분자-발현 세포 및/또는 암세포 항원-발현 세포에 결합하는 항원-결합 분자의 능력은 유세포 분석 및 면역형광 현미경과 같은 방법으로 분석할 수 있다.
본 발명의 항원-결합 분자는 HER3의 길항제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3 및/또는 HER3에 대한 결합 파트너(예를 들어, HER3(즉, 동종이량체화의 경우), HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R 및/또는 cMet)에 의해 매개되는 기능 또는 과정(예를 들어 상호작용, 신호전달 또는 다른 활성)을 억제할 수 있다. 본원에서, '억제'는 대조군 조건에 비한 감소, 저하 또는 약화를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. HER3에 대한 상호작용 파트너는 HER3과 동일한 세포에 의해 발현될 수 있다. 상호작용 파트너 또는 HER3는 세포 표면에서(즉, 세포막 내에 또는 세포막에서) 발현될 수 있다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 상호작용 파트너는 EGFR 계열의 단백질, 예를 들어, HER3, HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R 및/또는 cMet의 구성원일 수 있다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 상호작용 파트너는 IGF1R 및/또는 cMet일 수 있다. HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용은 폴리펩티드 복합체의 형성을 초래할 수 있다. 폴리펩티드 복합체를 형성하기 위한 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용은 다량체화(multimerisation)로 지칭될 수 있다. 폴리펩티드 단량체 사이에 다량체화가 있는 경우, 다량체화는 이량체화로 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3 단량체 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER2 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 EGFR 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER4 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HGFR 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 IGF1R 사이의 상호작용을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 cMet 사이의 상호작용을 억제할 수 있다.
상호작용의 억제는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용에 필요한 HER3의 영역에 대한 항원-결합 분자의 결합에 의해 달성될 수 있다(예를 들어, 서열 번호 19에 나타낸 HER3의 이량체 루프). 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용에 필요한 HER3의 하나 이상의 잔기와 접촉하고; 이러한 방식으로 항원-결합 분자는 해당 영역을 사용할 수 없게 만들어 상호 작용을 억제한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용을 억제/방지하는 방식으로 HER3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용에 필요한 HER3의 영역에 대한 HER3의 상호작용 파트너의 접근을 억제/방지하고; 이는 항원-결합 분자가 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용에 필요한 HER3의 영역과 접촉하지 않는 경우에도, 예를 들어, HER3과 상호작용 파트너 사이의 상호작용에 필요한 HER3의 영역으로의 HER3에 대한 상호작용 파트너의 접근의 입체 억제를 통해 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3 단량체의 동종이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER2 사이의 이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 EGFR 사이의 이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER4 사이의 이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HGFR 사이의 이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 IGF1R 사이의 이량체화를 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 cMet 사이의 이량체화를 억제할 수 있다.
두 인자 사이의 상호작용을 억제하는 항원-결합 분자의 능력은 예를 들어, 항체/단편과의 상호작용 파트너들 중 하나 또는 둘 다의 존재하에서, 또는 이들의 배양 후 상호작용의 분석에 의해 결정될 수 있다. 주어진 항원-결합 분자가 두 상호작용 파트너 간의 상호작용을 억제할 수 있는지 여부를 결정하기 위한 분석은 경쟁 ELISA 분석 및 SPR에 의한 분석을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용의 경쟁적 억제제이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너(예를 들어, HER3, HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R 및/또는 cMet) 사이의 상호작용을 적절한 분석에서 항원-결합 분자의 부재하에서(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 부재하에서) HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 사이의 상호작용 수준의 1배 미만, 예를 들어 ≤0.99배, ≤0.95배, ≤0.9배, ≤0.85배, ≤0.8배, ≤0.75배, ≤0.7배, ≤0.65배, ≤0.6배, ≤0.55배, ≤0.5배, ≤0.45배, ≤0.4배, ≤0.35배, ≤0.3배, ≤0.25배, ≤0.2배, ≤0.15배, ≤0.1배, ≤0.05배, 또는 ≤0.01배까지 억제할 수 있다.
상호작용 파트너 사이의 상호작용을 억제하는 항원-결합 분자의 능력은 또한 이러한 상호작용의 다운스트림 기능적 결과의 분석에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너 간의 상호작용의 다운스트림 기능적 결과는 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달을 포함한다. 예를 들어, HER3 및 HER3에 대한 상호작용 파트너의 상호작용을 억제하는 항원-결합 분자의 능력은 항원-결합 분자의 존재하에서 NRG로 처리한 후 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달의 분석에 의해 결정될 수 있다. PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달은 예를 들어 신호 전달 경로의 인산화된 구성원을 검출할 수 있는 항체를 사용하여 검출 및 정량화할 수 있다.
HER3과 HER3에 대한 상호작용 파트너의 상호작용을 억제하는 항원-결합 분자의 능력은 항원-결합 분자의 존재하에서 NRG로 처리 후 HER3를 발현하는 세포의 증식을 분석함으로써 결정될 수 있다. 세포 증식은 예를 들어, 시간에 따른 세포 수의 변화를 검출하거나, 3H-티미딘의 혼입의 시험관내 분석에 의해, 또는 CFSE 희석 분석에 의해, 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6):559-564]에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 BRAF V600에 대한 돌연변이를 보유하는 세포, 예를 들어 BRAF V600E 또는 V600K 돌연변이를 포함하는 세포의 증식을 억제할 수 있다(실시예 10 참조).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 HER3-매개된 신호전달을 억제한다. HER3-매개된 신호전달은 예를 들어 HER3-매개된 신호전달의 상관관계 분석, 예를 들어 세포 증식 및/또는 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호 전달 경로의 하나 이상의 신호 전달 분자의 인산화를 사용하여 분석할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포에 의한 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달을 억제할 수 있다. PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달의 수준은 예를 들어 NRG로 자극 후, PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 경로의 하나 이상의 성분의 인산화 수준의 검출 및 정량화에 의해 분석될 수 있다(실시예 4.3 참조).
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 예를 들어 NRG에 의한 자극에 반응하여 HER3-발현 세포의 증식을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포의 증식을 적절한 분석에서 항원-결합 분자의 부재하에서(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 존재하에서) HER3-발현 세포의 증식 수준의 1배 미만, 예를 들어 ≤0.99배, ≤0.95배, ≤0.9배, ≤0.85배, ≤0.8배, ≤0.75배, ≤0.7배, ≤0.65배, ≤0.6배, ≤0.55배, ≤0.5배, ≤0.45배, ≤0.4배, ≤0.35배, ≤0.3배, ≤0.25배, ≤0.2배, ≤0.15배, ≤0.1배, ≤0.05배 또는 ≤0.01배까지 억제할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포에 의한 PI3K/AKT/mTOR 및/또는 MAPK 신호전달을 적절한 분석에서 항원-결합 분자의 부재하에서(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 존재하에서) HER3-발현 세포에 의한 신호전달 수준의 1배 미만, 예를 들어 ≤0.99배, ≤0.95배, ≤0.9배, ≤0.85배, ≤0.8배, ≤0.75배, ≤0.7배, ≤0.65배, ≤0.6배, ≤0.55배, ≤0.5배, ≤0.45배, ≤0.4배, ≤0.35배, ≤0.3배, ≤0.25배, ≤0.2배, ≤0.15배, ≤0.1배, ≤0.05배 또는 ≤0.01배까지 억제할 수 있다.
HER3-매개된 신호전달은 예를 들어 실시예 8.9에 기술된 바와 같이 시험관내에서 또는 예를 들어 실시예 11에 기술된 바와 같이 생체내에서 조사할 수 있다.
ADCC 활성은 예를 들어, 문헌[Yamashita et al., Scientific Reports (2016) 6:19772 (전문이 본원에 참고로 포함됨)]에 기재된 방법에 따라, 또는 예를 들어, 문헌[Jedema et al., Blood (2004) 103:2677-82 (전문이 본원에 참고로 포함됨)]에 기재된 바와 같은 51Cr 방출 분석에 의해 분석될 수 있다. ADCC 활성은 또한 제조업체의 지침(본원의 실시예 5에 기재된 바와 같음)에 따라 Pierce LDH 세포독성 분석 키트를 사용하여 분석될 수 있다.
ADCP는 예를 들어, 문헌[Kamen et al., J Immunol (2017) 198 (1 Supplement) 157.17 (전문이 본원에 참고로 포함됨)]에 기재된 방법에 따라 분석될 수 있다.
예를 들어, 문헌[Schlothauer et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466 (전문이 본원에 참고로 포함됨)]에 기술된 바와 같이, CDC를 유도하는 능력은 예를 들어 C1q 결합 분석을 사용하여 분석될 수 있다.
항원-결합 분자의 열안정성은 시차 주사 형광측정법(Differential Scanning Fuorimetry) 및 시차 주사 열량측정법(Differential Scanning Calorimetry, DSC)을 포함하여, 숙련가에게 잘 알려진 방법에 의해 분석될 수 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[He et al., J Pharm Sci. (2010)]에 기재되어 있다. 열안정성은 용융 온도(Tm), 풀림 온도(unfolding temperature) 또는 분해 온도(예를 들어 ℃ 또는 F°로 표시)의 측면에서 반영될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자에 의한 활성화성 Fcγ 수용체에 대한 결합 친화도의 1배 초과, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15배 초과, 또는 20배 초과의 결합 친화도로 활성화성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIa(예를 들어 hFcγRIIa167H, hFcγRIIa167R), hFcγRIIIa(예를 들어 hFcγRIIIa158V, hFcγRIIIa158F), mFcγRIV, mFcγRIII)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 활성화성 Fcγ 수용체에 결합하기 위한 본원에 기재된 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자의 KD는 활성화성 Fcγ 수용체에 대한 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자의 KD의 1배 미만, 예를 들어 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.09, 0.08, 0.07, 0.06배 미만 또는 0.05배 미만이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 1000 nM 이하, 바람직하게는 ≤500 nM, ≤100 nM, ≤75 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤15 nM, ≤12.5 nM, ≤10 nM, ≤9 nM, ≤8 nM, ≤7 nM, ≤6 nM, ≤5 nM, ≤4 nM ≤3 nM, ≤2 nM 또는 ≤1 nM 중 하나의 KD로 활성화성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIa(예를 들어 hFcγRIIa167H, hFcγRIIa167R), hFcγRIIIa(예를 들어 hFcγRIIIa158V, hFcγRIIIa158F), mFcγRIV, mFcγRIII)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가 항원-결합 분자에 의한 FcRn에 대한 결합 친화도의 1배 초과, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15배 초과 또는 20배 초과인 결합 친화도로 FcRn(예를 들어, hFcRn, mFcRn)에 결합한다. 일부 실시양태에서, FcRn에 결합하기 위한 본원에 기재된 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자의 KD는 FcRn에 대한 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자의 KD의 1배 미만, 예를 들어 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.09, 0.08, 0.07, 0.06배 미만 또는 0.05배 미만이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 1000 nM 이하, 바람직하게는 ≤500 nM, ≤100 nM, ≤75 nM, ≤50 nM, ≤40 nM, ≤30 nM, ≤20 nM, ≤15 nM, ≤12.5 nM, ≤10 nM, ≤9 nM, ≤8 nM, ≤7 nM, ≤6 nM, ≤5 nM, ≤4 nM ≤3 nM, ≤2 nM 또는 ≤1 nM 중 하나의 KD로 FcRn(예를 들어, hFcRn, mFcRn)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자에 의한 억제성 Fcγ 수용체에 대한 결합 친화도의 1배 미만, 예를 들어 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2배 미만, 또는 0.1배 미만인 결합 친화도로 억제성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIb mFcγRIIb)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 억제성 Fcγ 수용체에 결합하기 위한 본원에 기재된 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자의 KD는 억제성 Fcγ 수용체에 대해 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자의 KD의 1배 초과, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9배 초과 또는 10배 초과이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 1 nM 이상, 바람직하게는 ≥ 5nM, ≥ 10nM, ≥ 50nM, ≥ 100nM, ≥ 500nM, ≥ 1000nM, ≥ 2000nM, ≥ 3000nM, ≥ 4000 nM 또는 ≥ 5000 nM 중 하나의 KD로 억제성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIb mFcγRIIb)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자에 대한 억제성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIb)에 비한 활성화성 Fcγ 수용체(예를 들어 hFcγRIIa)에 대한 결합의 선택도는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자에 의해 표시되는 결합 선택도의 1배 초과, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15배 초과, 또는 20배 초과이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자에 의해 표시되는 ADCC의 1배 초과, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15배 초과 또는 20배 초과인 ADCC를 나타낸다.
일부 실시양태에서, ADCC 활성의 분석에서 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자에 대해 측정된 EC50 (ng/ml)은 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자에 대해 결정된 EC50 (ng/ml)의 1배 미만, 예를 들어 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2 또는 0.1배 미만이다.
일부 실시양태에서, ADCC 활성의 분석에서 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자에 대한 EC50(ng/ml)은 500ng/ml 이하, 바람직하게는 ≤400ng/ml, ≤300ng/ml, ≤200ng/ml, ≤100ng/ml, ≤90ng/ml, ≤80ng/ml, ≤70ng/ml, ≤60ng/ml, ≤50ng/ml, ≤40ng/ml, ≤30ng/ml, ≤20ng/ml 또는 ≤10ng/ml 중 하나이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 항원-결합 분자는 서열 번호 174-175의 아미노산 서열을 갖는 CH2-CH3로 이루어진 Fc 영역을 갖는 등가의 항원-결합 분자의 용융 온도, 풀림 온도 또는 분해 온도의 ≥ 0.75배 및 ≤ 1.25배, 예를 들어 ≥ 0.8배 및 ≤ 1.2배, ≥ 0.85배 및 ≤ 1.15배, ≥ 0.9배 및 ≤ 1.1배, ≥ 0.91배 및 ≤ 1.09배, ≥ 0.92배 및 ≤ 1.08배, ≥ 0.93배 및 ≤ 1.07배, ≥ 0.94배 및 ≤ 1.06배, ≥ 0.95배 및 ≤ 1.05배, ≥ 0.96배 및 ≤ 1.04배, ≥ 0.97배 및 ≤ 1.03배, ≥ 0.98배 및 ≤ 1.02배 또는 ≥ 0.99배 및 ≤ 1.01배인 용융 온도, 풀림 온도 또는 분해 온도를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포의 사멸을 증가시킬 수 있다. HER3-발현 세포의 사멸은 항원-결합 분자의 이펙터 기능을 통해 증가할 수 있다. 항원-결합 분자가 Fc 영역을 포함하는 실시양태에서, 항원-결합 분자는 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 및 항체-의존성 세포 식세포작용(ADCP) 중 하나 이상을 통해 HER3-발현 세포의 사멸을 증가시킬 수 있다.
HER3-발현 세포의 사멸을 증가시킬 수 있는 항원-결합 분자는 적절한 분석에서 항원-결합 분자의 부재하에(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 존재하에) 검출된 세포 사멸 수준과 비교하여, 항원-결합 분자의 존재하에서 - 또는 HER3-발현 세포의 배양 후 - HER3-발현 세포의 증가된 수준의 사멸을 관찰함으로써 확인할 수 있다. CDC, ADCC 및 ADCP의 분석은 숙련가에게 잘 알려져 있다. HER3-발현 세포의 사멸 수준은 또한 다양한 치료 조건에 노출된 후 생존 가능한 및/또는 생존 불가능한 HER3-발현 세포의 수/비율을 측정함으로써 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포(예를 들어 HER3-발현 암세포)의 사멸을 항원-결합 분자의 부재하에서(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 존재하에서) 관찰된 사멸 수준의 1배 이상, 예를 들어 ≥1.01배, ≥1.02배, ≥1.03배, ≥1.04배, ≥1.05배, ≥1.1배, ≥1.2배, ≥1.3배, ≥1.4배, ≥1.5배, ≥1.6배, ≥1.7배, ≥1.8배, ≥1.9배, ≥2배, ≥3배, ≥4배, ≥5배, ≥6배, ≥7배, ≥8배, ≥9배 또는 ≥10배로 증가시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 세포(예를 들어 HER3-발현 암세포)의 수를 필적하는 분석에서 항원-결합 분자의 부재하에(또는 적절한 대조 항원-결합 분자의 존재하에 배양 후) 검출된 HER3-발현 세포(예를 들어 HER3-발현 암세포)의 수의 1배 미만, 예를 들어 ≤0.99배, ≤0.95배, ≤0.9배, ≤0.85배, ≤0.8배, ≤0.75배, ≤0.7배, ≤0.65배, ≤0.6배, ≤0.55배, ≤0.5배, ≤0.45배, ≤0.4배, ≤0.35배, ≤0.3배, ≤0.25배, ≤0.2배, ≤0.15배, ≤0.1배, ≤0.05배, 또는 ≤0.01배로 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 생체내에서 암의 발생 및/또는 진행을 억제한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 암세포의 사멸, 예를 들어 이펙터 면역 세포에 의한 사멸의 증가를 유발한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 생체내에서 예를 들어 적절한 대조 조건과 비교하여 암세포의 수의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 예를 들어, 시간 경과에 따른 종양 크기/용적을 측정함으로써 결정되는 바와 같이 종양 성장을 억제한다.
본 발명의 항원-결합 분자는 적절한 생체내 모델, 예를 들어 세포주-유래 이종이식 모델에서 암의 발달 및/또는 진행을 억제하는 능력에 대해 분석될 수 있다. 세포주-유래 이종이식 모델은 HER3-발현 암세포로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 모델은 N87 세포-유래 모델, SNU16 세포-유래 모델, FaDu 세포-유래 모델, OvCAR8 세포-유래 모델, HCC95 세포-유래 모델, A549 세포-유래 모델, ACHN 세포-유래 모델 또는 HT29 세포-유래 모델이다.
암은 본원에 기재된 바와 같은 HER3-관련 암(즉, HER3 유전자/단백질 발현이 암의 증상의 발병, 발달, 진행 또는 중증도, 및/또는 전이에 대한 위험 인자이고/잉거나 양성과 연관되는 암)일 수 있다. 암은 HER3-발현 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 HER3+ 종양을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 항원-결합 분자의 투여는 다음 중 하나 이상을 야기할 수 있다: 예를 들어 적절한 HER3-발현 암세포주-유래 이종이식 모델에서 결정되는 바와 같이, 암의 발생/진행의 억제, 암의 발병의 지연/예방, 종양 성장의 감소/지연/예방, 전이의 감소/지연/예방, 암의 증상의 중증도의 감소, 암세포 수의 감소, 종양 크기/용적의 감소, 및/또는 생존율(예를 들어 무진행 생존율)의 증가.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3-발현 암세포주-유래 이종이식 모델에서 종양 성장을 항원-결합 분자를 사용한 치료의 부재하에서(또는 적절한 음성 대조군 항원-결합 분자로 치료한 후) 관찰된 종양 성장의 1배 미만, 예를 들어 ≤0.99배, ≤0.95배, ≤0.9배, ≤0.85배, ≤0.8배, ≤0.75배, ≤0.7배, ≤0.65배, ≤0.6배, ≤0.55배, ≤0.5배, ≤0.45배, ≤0.4배, ≤0.35배, ≤0.3배, ≤0.25배, ≤0.2배, ≤0.15배, ≤0.1배, ≤0.05배, 또는 ≤0.01배까지 억제할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자 또는 본원에 개시된 다른 물품(예를 들어, 조성물, 핵산 등)을 사용한 대상체의 치료는, 예를 들어, 항원-결합 분자/물품이 본원에 기재된 투여량으로 및/또는 투여 스케줄에 따라 대상체에게 투여되는 경우, 하기 결과들 중 하나 이상과 연관될 수 있다:
· 이상 반응(adverse event, AE)의 부재;
· 중대 이상 반응(serious adverse event, SAE)의 부재;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 이상 반응(AE)의 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 중대 이상 반응(SAE)의 빈도 최소화 또는 감소;
· 용량 제한 독성(dose limiting toxicity, DLT)의 부재;
· 예를 들어 엘겜투맙 및 AV-203과 같은 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여 용량 제한 독성(DLT)의 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 치료 전 동일한 대상체와 비교하여, 치료 후 순환 종양 마커(예를 들어 무세포(cf) DNA 변형 대립유전자 분획/종양 분획, ctDNA, 가용성 HER3 및/또는 가용성 NRG1)의 감소;
· 예를 들어 치료 전 동일한 대상체와 비교하여, 치료 후 pHER3, pERK, p-70S6K, Ki67 및 절단된 카스파제3의 감소;
· 주입 관련 반응, 예를 들어 사이토카인 방출 증후군의 부재, 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 엘겜투맙 및 AV-203과 같은 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 위장관 독성의 부재, 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 저칼륨혈증 및/또는 저마그네슘혈증의 부재, 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 발진 또는 피부염의 부재, 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 혈액학적 변화의 부재, 빈도 최소화 또는 감소;
· 예를 들어 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 심장독성의 부재, 빈도 최소화 또는 감소; 및/또는
· 예를 들어 GSK2849330와 같은 다른 항-HER3 치료 항체와 비교하여, 알부민 증가의 부재, 빈도 최소화 또는 감소.
이상 반응(AE)은 임상시험용 의약품(IMP), 비교기 제품 또는 승인된 약물을 투여받은 환자에서 예기치 않거나, 원하지 않거나, 계획되지 않은 의학적 발생이다. AE는 IMP 또는 비교기와 관련되거나 관련되지 않을 수 있는 징후, 증상, 질환 및/또는 실험실 또는 생리학적 관찰일 수 있다. AE는 다음 목록의 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
· 기존 병태의 임상적으로 유의한 악화. 이것은 완전히 해결되었다가 다시 비정상이 될 수 있는 병태를 포함한다.
· 우발적이든 의도적이든 IMP의 과다 복용으로 인해 발생하는 AE.
· 예를 들어 조사자가 약물 배치가 효과적이지 않다고 의심하거나 IMP가 질환 진행에 기여했다고 의심하는 경우 IMP의 효능 부족으로 인해 발생하는 AE.
중대 이상 반응(SAE)은 용량, 인과 관계 또는 예기됨에 관계없이 다음과 같은 임의의 AE이다:
· 죽음에 이르게 하고;
· 생명을 위협하며, 즉 이상 반응이 발생했을 때 환자가 사망할 상당한 위험이 있었거나 환자의 사망을 초래할 수 있는 장치 또는 기타 의료 제품을 계속 사용한 경우;
· 입원이 필요하거나 기존 입원 환자가 입원을 연장하고(일부 입원은 SAE 보고에서 면제된다, 예를 들어 환자가 임상시험에 들어가기 전에 계획된 병원 입원; 수혈과 같은 계획된 절차를 위한 하룻밤 입원);
· 지속적이거나 심각한 무능력 또는 장애를 초래하며;
· 선천성 기형 또는 선천적 결손이고;
· 임의의 다른 의학적으로 중요한 사건, 즉 환자를 위험에 빠뜨릴 수 있거나 위에 나열된 결과 중 하나를 방지하기 위해 개입이 필요할 수 있는 사건이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 치료에 대한 반응은 종양/병변 반응을 참조하여 특징지을 수 있다. 일부 실시양태에서, 종양/병변 반응은 고형 종양에서의 반응 평가 기준(response evaluation criteria in solid tumours, RECIST) 기준, 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Eisenhauer et al., Eur J Cancer. 2009 Jan;45(2):228-47]에 기재된 바와 같은 RECIST 1.1 기준에 따라 평가된다. 일부 실시양태에서, 종양/병변 반응은 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Scher et al., J Clin Oncol. 2016 Apr 20; 34(12):1402-18]에 기재된 바와 같은 전립선암 실무 그룹 3(Prostate Cancer Working Group 3, PCWG3) 기준에 따라 평가된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항원-결합 분자 또는 물품을 사용한 대상체의 치료(예를 들어, 항원-결합 분자/물품은 본원에 기재된 투여량으로 및/또는 투여 스케줄에 따라 투여된다)는 예를 들어 치료 시작일로부터 12개월 및/또는 24개월에 (적절하게는, RECIST 1.1 또는 PCWG3 기준에 따라 평가된 바와 같이; 자세한 내용 및 평가 방법에 대해서는 실시예 16.10 참조) 하기 결과 중 하나 이상과 관련될 수 있다:
· 항종양 반응;
· 완전 반응(CR). CR은 모든 표적 및/또는 비표적 종양의 완전한 거시적 소멸을 지칭한다. CR은 종양 마커 수준의 정상화를 포함할 수 있다;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에 대한 CR의 가능성과 비교하여, 완전 반응(CR)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 CR을 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 완전 반응(CR)을 나타내는 대상체의 증가된 비율;
· 전체 생존율(OS). OS는 치료 시작부터 모든 원인으로 인한 사망까지의 시간으로서 정의된다.
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에서의 OS의 가능성과 비교하여, 전체 생존율(OS)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 OS를 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 전체 생존율(OS)을 입증하는 대상체의 증가된 비율;
· 무진행 생존율(PFS). PFS는 치료 시작부터 질환 진행 또는 사망까지의 시간을 지칭한다.
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에서의 PFS의 가능성과 비교하여, 무진행 생존율(PFS)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 PFS를 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 무진행 생존율(PFS)을 입증하는 대상체의 증가된 비율;
· 부분 반응(PR). PR은 치료 전에 계산된 기준선 합계 직경과 비교하여 모든 표적 종양 직경의 합계의 적어도 30% 감소를 지칭한다.
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에서의 PR의 가능성과 비교하여, 부분 반응(PR)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 PR을 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 부분 반응(PR)을 입증하는 대상체의 증가된 비율;
· 혼합 반응(MR). MR은 PR에 대한 기준을 충족하는 하나 이상의 종양 병변 및 진행성 질환에 대한 기준을 충족하는 기타 종양 병변(들)을 지칭한다(가장 작은 종양 크기 및/또는 새로운 종양 병변의 출현으로부터 모든 종양 직경의 합계의 적어도 20% 증가).
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에서의 MR의 가능성과 비교하여, 혼합 반응(MR)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 MR을 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 혼합 반응(MR)을 입증하는 대상체의 증가된 비율;
· 안정 질환(SD). SD는 치료 시작시 종양 부담에 비해 부분 반응이나 진행성 질환이 아님을 지칭한다.
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않은 동일한 대상체, 항원-결합 분자를 제공받지 않은 대상체, 또는 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 대상체에서의 SD의 가능성과 비교하여, 안정 질환(SD)의 증가된 가능성;
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 SD를 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 안정 질환(SD)을 입증하는 대상체의 증가된 비율;
· 전체 반응(OR). OR은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성하는 것으로서 정의된다.
· 전체 반응률(ORR). ORR은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성한 환자의 비율로서 정의된다.
· 예를 들어, 항원-결합 분자로 치료를 받지 않았거나 다른 항-HER3 항원-결합 분자로 치료된 OR을 나타내는 대상체의 비율과 비교하여, 증가된 ORR;
· 종양 조직에서의 HER3 인산화의 감소;
· 예를 들어, pERK 및 p-70SK6와 같은 다운스트림 마커의 변화에 의해 입증되는 바와 같은 종양 조직에서의 다운스트림 경로 활성화의 감소;
· 일련의 cfDNA 샘플에서 종양 분획의 감소;
· Ki67 발현의 변화에 의해 입증되는 바와 같은 종양 세포 증식의 감소;
· 절단된 카스파제 3의 변화에 의해 입증되는 바와 같은 종양 세포 사멸의 증가;
· 전체 반응률의 결정을 통해 입증되는 바와 같은 항종양 활성의 입증(여기서, 전체 반응률은 선택한 종양 유형에 적용 가능한 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) v1.1 또는 전립선 실무 그룹 3(PCWG3) 기준에 기반하여 완전 반응 또는 부분 반응을 달성한 환자의 비율로 정의된다).
종양 반응은 종양 및 이의 위치에 따라 적절한 영상 기법, 예를 들어 CT 스캔, MRI 스캔 및 FDG-PET를 사용하여 평가할 수 있다. 적절한 기술은 숙련가에게 친숙할 것이며, 본원의 문헌[Eisenhauer et al, supra], 및/또는 실시예 16.10에 기재되어 있다.
대상체는, 예를 들어, 본 개시내용에 따르면, 암 또는 고형 종양을 갖거나, 갖고 있는 것으로 결정된 본원에 정의된 대상체일 수 있다.
키메라
항원 수용체(CAR)
본 발명은 또한 본 발명의 항원-결합 분자 또는 폴리펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다.
CAR은 항원-결합 및 T 세포 활성화 기능을 모두 제공하는 재조합 수용체이다. CAR 구조 및 조작은 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1)]에 검토되어 있다. CAR은 세포막 앵커 영역 및 신호전달 영역에 연결된 항원-결합 영역을 포함한다. 임의의 힌지 영역은 항원-결합 영역과 세포막 앵커 영역 사이의 분리를 제공할 수 있고, 가요성 링커로서 작용할 수 있다.
본 발명의 CAR은 본 발명의 항원-결합 분자를 포함하거나 이들로 구성되거나, 본 발명에 따른 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 구성되는 항원-결합 영역을 포함한다.
세포막 앵커 영역은 CAR의 항원-결합 영역과 신호전달 영역 사이에 제공되고, CAR을 발현하는 세포의 세포막에 CAR을 고정하기 위해 제공되며, 항원-결합 영역은 세포외 공간에 있고 신호전달 영역은 세포 내부에 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 CD3-ζ, CD4, CD8 또는 CD28 중 하나에 대한 막관통 영역 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이로부터 유래되는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 세포막 앵커 영역을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 기준 아미노산 서열로부터 '유래'되는 영역은 기준 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성 중 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
CAR의 신호전달 영역은 T 세포의 활성화를 가능하게 한다. CAR 신호전달 영역은 CAR-발현 T 세포의 인산화 및 활성화를 위한 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 제공하는 CD3-ζ의 세포내 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. FcγRI와 같은 다른 ITAM-함유 단백질의 서열을 포함하는 신호전달 영역이 또한 CAR에 사용되었다(Haynes et al., 2001 J Immunol 166(1):182-187). CAR의 신호전달 영역은 또한 표적 단백질에 결합시 CAR-발현 T 세포의 활성화를 촉진하기 위해 공동-자극 분자의 신호전달 영역으로부터 유래된 공동-자극 서열을 포함할 수 있다. 적합한 공동-자극 분자는 CD28, OX40, 4-1BB, ICOS 및 CD27을 포함한다. 일부 경우에 CAR은 상이한 세포내 신호전달 경로의 공동-자극을 제공하도록 조작된다. 예를 들어, CD28 공동자극과 관련된 신호전달은 포스파티딜이노시톨 3-키나제(P13K) 경로를 우선적으로 활성화하는 반면, 4-1BB-매개된 신호전달은 TNF 수용체 관련 인자(TRAF) 어댑터 단백질을 통해 이루어진다. 따라서 CAR의 신호전달 영역은 때때로 하나 이상의 공동자극 분자의 신호전달 영역으로부터 유래된 공동자극 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 CAR은 CD28, OX40, 4-1BB, ICOS 및 CD27 중 하나 이상의 세포내 도메인의 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이로부터 유래되는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 하나 이상의 공동-자극 서열을 포함한다.
임의의 힌지 영역은 항원-결합 도메인과 막관통 도메인 사이의 분리를 제공할 수 있고, 가요성 링커로서 작용할 수 있다. 힌지 영역은 IgG1로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 CAR은 IgG1의 힌지 영역의 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이로부터 유래되는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되는 힌지 영역을 포함한다.
또한, 본 발명에 따른 CAR을 포함하는 세포가 제공된다. 본 발명에 따른 CAR은 CAR-발현 면역 세포, 예를 들어 CAR-T 또는 CAR-NK 세포를 생성하는데 사용될 수 있다. CAR을 면역 세포로 조작하는 것은 시험관내에서 배양 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 CAR의 항원-결합 영역에는 임의의 적절한 형식, 예를 들어, scFv, scFab 등이 제공될 수 있다.
핵산 및 벡터
본 발명은 본 발명에 따른 항원-결합 분자, 폴리펩티드 또는 CAR을 암호화하는 핵산 또는 복수의 핵산을 제공한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 예를 들어 다른 핵산, 또는 자연적으로 발생하는 생물학적 물질로부터 정제되거나 단리된다. 일부 실시양태에서, 핵산(들)은 DNA 및/또는 RNA를 포함하거나 이들로 구성된다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산 또는 복수의 핵산을 포함하는 벡터, 또는 복수의 벡터를 제공한다.
뉴클레오티드 서열은 벡터, 예를 들어 발현 벡터에 포함될 수 있다. 본원에서 사용되는 "벡터"는 외인성 핵산을 세포 내로 전달하기 위한 비히클로서 사용되는 핵산 분자이다. 벡터는 세포 내 핵산의 발현을 위한 벡터일 수 있다. 이러한 벡터는 발현될 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 또한 종결 코돈 및 발현 인핸서를 포함할 수 있다. 당업계에 공지된 임의의 적합한 벡터, 프로모터, 인핸서 및 종결 코돈은 본 발명에 따른 벡터로부터 펩티드 또는 폴리펩티드를 발현시키는데 사용될 수 있다.
용어 "작동 가능하게 연결된"은 선택된 핵산 서열 및 조절 핵산 서열(예를 들어, 프로모터 및/또는 인핸서)이 조절 서열의 영향 또는 제어하에 핵산 서열의 발현을 위치시키는 방식으로 공유적으로 연결되는 상황을 포함할 수 있다(이에 따라 발현 카세트를 형성한다). 따라서, 조절 서열이 핵산 서열의 전사에 영향을 미칠 수 있는 경우, 조절 서열은 선택된 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된다. 그후, 생성된 전사체(들)는 원하는 펩티드(들)/폴리펩티드(들)로 번역될 수 있다.
적합한 벡터는 플라스미드, 바이너리 벡터, DNA 벡터, mRNA 벡터, 바이러스 벡터(예를 들어 감마레트로바이러스 벡터(예를 들어 뮤린 백혈병 바이러스(MLV)-유래 벡터), 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터 및 헤르페스바이러스 벡터), 트랜스포손-기반 벡터, 및 인공 염색체(예를 들어 효모 인공 염색체)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 벡터는 진핵생물 벡터, 예를 들어, 진핵 세포 내의 벡터로부터 단백질의 발현에 필요한 요소들을 포함하는 벡터일 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는, 예를 들어 단백질 발현을 유도하기 위해 시토메갈로바이러스(CMV) 또는 SV40 프로모터를 포함하는 포유류 벡터할 수 있다.
본 발명에 따른 항원-결합 분자의 구성적 폴리펩티드는 복수의 핵산의 상이한 핵산에 의해, 또는 복수의 벡터의 상이한 벡터에 의해 암호화될 수 있다.
항원-결합 분자 및 폴리펩티드를 포함/발현하는 세포
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항원-결합 분자, 폴리펩티드 또는 CAR을 포함하거나 발현하는 세포를 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 핵산, 복수의 핵산, 벡터 또는 복수의 벡터를 포함하거나 발현하는 세포가 제공된다.
세포는 진핵 세포, 예를 들어 포유류 세포일 수 있다. 포유류는 영장류(레서스, 시노몰구스, 비인간 영장류 또는 인간) 또는 비인간 포유류(예를 들어 토끼, 기니피그, 래트, 마우스 또는 기타 설치류(Rodentia 목의 임의의 동물 포함), 고양이, 개, 돼지, 양, 염소, 소(암소, 예를 들어 젖소, 또는 Bos 목의 임의의 동물 포함), 말(Equidae 목의 임의의 동물 포함), 당나귀, 및 비인간 영장류)일 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산, 복수의 핵산, 벡터 또는 복수의 벡터를 세포 내에 도입하는 단계를 포함하여, 본 발명에 따른 핵산(들) 또는 벡터(들)를 포함하는 세포를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 단리된 핵산(들) 또는 벡터(들)를 세포 내로 도입하는 것은 형질전환, 형질감염, 전기천공 또는 형질도입(예를 들어, 레트로바이러스 형질도입)을 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산, 복수의 핵산, 벡터 또는 복수의 벡터를 세포 내에 도입하는 단계를 포함하여, 본 발명에 따른 항원-결합 분자, 폴리펩티드 또는 CAR을 발현/포함하는 세포를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 추가로 세포에 의한 핵산(들) 또는 벡터(들)의 발현에 적합한 조건하에서 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험관내에서 수행된다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 방법에 의해 수득되거나 수득될 수 있는 세포를 제공한다.
항원-결합 분자 및 폴리펩티드 생산
본 발명에 따른 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 숙련가에게 공지된 폴리펩티드의 생산을 위한 방법에 따라 제조될 수 있다.
폴리펩티드는 화학적 합성, 예를 들어 액체 또는 고체 상 합성에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 펩티드/폴리펩티드는 예를 들어, 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Chandrudu et al., Molecules (2013), 18:4373-4388]에 기재된 방법을 사용하여 합성할 수 있다.
대안적으로, 항원-결합 분자 및 폴리펩티드는 재조합 발현에 의해 제조될 수 있다. 폴리펩티드의 재조합 생산에 적합한 분자 생물학 기술은 문헌[Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Edition), Cold Spring Harbor Press, 2012, and in Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146]에 기재된 것과 같이 당업계에 잘 공지되어 있으며, 이들 둘 다는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 항원-결합 분자의 재조합 생산을 위한 방법이 또한 문헌[Frenzel et al., Front Immunol. (2013); 4: 217 and Kunert and Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451-3461]에 기재되어 있으며, 이들 둘 다는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 경우에, 본 발명의 항원-결합 분자는 하나 이상의 폴리펩티드 쇄로 구성된다. 이러한 경우에, 항원-결합 분자의 생산은 하나 이상의 폴리펩티드의 전사 및 번역, 및 항원-결합 분자를 형성하기 위한 폴리펩티드 쇄의 후속 결합을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 재조합 생산을 위해, 폴리펩티드의 발현에 적합한 임의의 세포가 사용될 수 있다. 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 원핵 세포, 예를 들어 고세균 또는 박테리아의 세포이다. 일부 실시양태에서, 박테리아는 그람-음성 박테리아, 예를 들어 장내세균과(Enterobacteriaceae)의 박테리아, 예를 들어 대장균(Escherichia coli)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 진핵 세포, 예를 들어 효모 세포, 식물 세포, 곤충 세포 또는 포유류 세포, 예를 들어 CHO, HEK(예를 들어, HEK293), HeLa 또는 COS 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 폴리펩티드를 일시적으로 또는 안정적으로 발현하는 CHO 세포이다.
일부 원핵 세포는 진핵 세포와 동일한 접힘 또는 번역후 변형을 허용하지 않기 때문에 일부 경우에 세포는 원핵 세포가 아니다. 또한, 진핵생물에서는 매우 높은 발현 수준이 가능하며 단백질은 적절한 태그를 사용하여 진핵생물로부터 더 쉽게 정제할 수 있다. 배지로의 단백질 분비를 향상시키는 특정 플라스미드가 또한 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함된 문헌[Zemella et al. Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431]에 기재된 시스템을 사용하여 무세포 단백질 합성(CFPS)에 의해 제조될 수 있다.
생산은 관심 폴리펩티드(들)를 발현하도록 변형된 진핵 세포의 배양 또는 발효를 포함할 수 있다. 배양 또는 발효는 영양분, 공기/산소 및/또는 성장 인자의 적절한 공급이 제공되는 생물반응기에서 수행될 수 있다. 분비된 단백질은 세포로부터 배양 배지/발효 브로스를 분할하고, 단백질 함량을 추출하고, 개별 단백질을 분리하여 분비된 폴리펩티드를 단리함으로써 수집할 수 있다. 배양, 발효 및 분리 기술은 당업계의 숙련가들에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Edition; 상기 본원에 참고로 포함됨)]에 기재되어 있다.
생물반응기는 세포가 배양될 수 있는 하나 이상의 용기를 포함한다. 생물반응기에서의 배양은 반응물이 반응기 내로 연속적으로 유동하고, 반응기로부터 배양된 세포가 연속적으로 유동하면서 연속적으로 발생할 수 있다. 대안적으로, 배양은 배치식으로 발생할 수 있다. 생물반응기는 배양 중인 세포에 최적의 조건을 제공하도록 pH, 산소, 용기 안팎의 유속, 및 용기 내 교반과 같은 환경 조건을 모니터링하고 제어한다.
항원-결합 분자/폴리펩티드(들)를 발현하는 세포를 배양한 후, 관심 폴리펩티드(들)를 단리할 수 있다. 당업계에 공지된 세포로부터 단백질을 분리하기 위한 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 폴리펩티드를 단리하기 위해서는 영양 배지로부터 세포를 분리하는 것이 필요할 수 있다. 폴리펩티드(들)가 세포로부터 분비되는 경우, 세포는 관심있는 분비된 폴리펩티드(들)를 함유하는 배양 배지로부터 원심분리에 의해 분리될 수 있다. 관심 폴리펩티드(들)가 세포 내에 수집되는 경우, 단백질 단리는 세포 배양 배지로부터 세포를 분리하기 위한 원심분리, 용해 완충액을 사용한 세포 펠릿의 처리, 및 예를 들어 초음파화, 급속 동결-해동 또는 삼투압 용해에 의한 세포 파쇄를 포함할 수 있다.
그후 다른 단백질 및 비-단백질 성분을 함유할 수 있는 상청액 또는 배양 배지로부터 관심 폴리펩티드(들)를 단리하는 것이 바람직할 수 있다. 상청액 또는 배양 배지로부터 단백질 성분을 분리하는 일반적인 방법은 침전이다. 상이한 용해도의 단백질을 황산암모늄과 같은 상이한 농도의 침전제에서 침전시킨다. 예를 들어, 낮은 농도의 침전제에서는 수용성 단백질이 추출된다. 따라서, 상이한 증가하는 농도의 침전제를 첨가함으로써, 상이한 용해도의 단백질이 구별될 수 있다. 투석은 분리된 단백질로부터 황산암모늄을 제거하기 위해 후속적으로 사용될 수 있다.
상이한 단백질을 구별하기 위한 다른 방법, 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피 및 크기 크로마토그래피가 당업계에 공지되어 있다. 이들은 침전에 대한 대안으로 사용될 수 있거나, 침전에 후속적으로 수행될 수 있다.
관심 폴리펩티드(들)가 배양물로부터 단리되면, 폴리펩티드(들)를 농축시키는 것이 바람직하거나 필요할 수 있다. 단백질을 농축하기 위한 다수의 방법, 예를 들어 한외여과 또는 동결건조가 당업계에 공지되어 있다.
조성물
본 발명은 또한 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산, 발현 벡터 및 세포를 포함하는 조성물을 제공한다.
본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산, 발현 벡터 및 세포는 임상적 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제로서 제형화될 수 있고, 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 포함할 수 있다. 조성물은 주사 또는 주입을 포함할 수 있는 국소, 비경구, 전신, 강내, 정맥내, 동맥내, 근육내, 척수강내, 안구내, 결막내, 종양내, 피하, 피내, 척수강내, 경구 또는 경피 투여 경로를 위해 제형화될 수 있다.
적합한 제형은 멸균 또는 등장성 배지 내의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 약제 및 약제학적 조성물은 겔을 포함한 유체 형태로 제형화될 수 있다. 유체 제형은 인체 또는 동물 신체의 선택된 부위에 주사 또는 주입(예를 들어, 카테터를 통해)에 의해 투여하기 위해 제형화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물은 예를 들어 혈관 또는 종양으로의 주사 또는 주입을 위해 제형화된다.
본원에 기재된 발명에 따르면 또한 약제학적으로 유용한 조성물의 제조를 위한 방법이 제공되며, 이러한 제조 방법은 다음으로부터 선택되는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다: 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수) 또는 세포를 생산하는 단계; 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수) 또는 세포를 단리하는 단계; 및/또는 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수) 또는 세포를 약제학적으로 허용되는 담체, 보조제, 부형제 또는 희석제와 혼합하는 단계.
예를 들어, 본원에 기재된 본 발명의 추가 측면은 질환/병태(예를 들어, 암)의 치료에 사용하기 위한 약제 또는 약제학적 조성물을 제형화 또는 제조하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수) 또는 세포를 약제학적으로 허용되는 담체, 보조제, 부형제 또는 희석제와 혼합하여 약제학적 조성물 또는 약제를 제형화하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 측면 및 실시양태에서, 항원-결합 분자는 특정된 농도/비율로 특정 화학 성분을 포함하는 조성물로 제공될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 완충액으로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같이, "완충액"은 이의 산-염기 접합체 성분의 작용에 의해 pH의 변화에 저항하는 완충 용액을 지칭한다. 본 개시내용의 완충액은 바람직하게는 약 4.5 내지 약 7.0, 바람직하게는 약 5.0 내지 약 6.5 범위의 pH를 갖는다. 이 범위에서 pH를 조절하는 완충액의 예는 아세테이트, 히스티딘, 히스티딘-아르기닌, 히스티딘-메티오닌 및 기타 유기산 완충액을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자를 포함하는 조성물은 4.0 내지 7.0의 pH, 예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~5.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~5.8의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~6.5의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아세테이트 완충액, 즉 아세테이트 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 2 mM 내지 200 mM 아세테이트, 예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나의 최종 농도로 아세테이트를 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 아세테이트를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 히스티딘 완충액, 즉 히스티딘 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나의 최종 농도로 히스티딘을 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 히스티딘을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 인산나트륨 완충액, 즉 나트륨 및 포스페이트 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 2 mM 내지 200 mM 인산나트륨, 예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나의 최종 농도로 인산나트륨을 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 인산나트륨을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아세트산 나트륨 완충액, 즉 나트륨 및 아세테이트 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 2mM 내지 200mM 아세트산 나트륨, 예를 들어 5mM 내지 100mM, 10mM 내지 40mM, 12mM 내지 30mM, 15 내지 25mM, 또는 18 내지 22mM 중 하나의 최종 농도로 아세트산 나트륨을 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 아세트산 나트륨을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 아르기닌 완충액, 즉 아르기닌 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 1 mM 내지 250 mM 아르기닌, 예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나의 최종 농도로 아르기닌을 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 아르기닌을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 히스티딘-아르기닌 완충액, 즉 히스티딘 및 아르기닌 이온을 포함하는 완충액으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나의 최종 농도로 히스티딘을 포함하고, 1 mM 내지 300 mM 아르기닌, 예를 들어, 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나의 최종 농도로 아르기닌을 포함하는 조성물로 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~20mM 히스티딘 및 ~150mM 아르기닌을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 염화나트륨을 포함하는 조성물로 제공된다. 조성물의 염화나트륨 성분은 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 예를 들어 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나의 최종 농도로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~150mM 염화나트륨을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 메티오닌을 포함하는 조성물로 제공된다. 조성물의 메티오닌 성분은 1mM 내지 250mM 메티오닌, 예를 들어 10mM 내지 250mM, 50mM 내지 200mM, 75mM 내지 200mM, 100mM 내지 180mM, 또는 125 내지 175mM 중 하나의 최종 농도로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~150mM 메티오닌을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자를 포함하는 조성물은 등장화제를 포함한다. 등장화제는 등장성 제형을 제공하는데 사용될 수 있다. 등장화제의 예는 예를 들어 염(예를 들어 염화나트륨, 염화칼륨) 및 당(예를 들어 수크로스, 글루코스, 트레할로스)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 수크로스를 포함하는 조성물로 제공된다. 조성물의 수크로스 성분은 2% 내지 20%, 예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나의 최종 농도(용적 기준 중량)로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~2, ~4, ~6, 또는 ~8%(w/v) 수크로스를 포함할 수 있다. 조성물의 수크로스 성분은 200 내지 300 nM, 예를 들어 ~240 mM의 최종 농도로 제공될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자를 포함하는 조성물은 계면활성제를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "계면활성제"는 계면 장력을 낮추는 제제를 지칭한다. 계면활성제는 바람직하게는 비이온성 계면활성제이다. 계면활성제의 예는 폴리소르베이트(폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-80), 폴록사머(폴록사머-188) 및 트리톤 X-100을 포함한다. 계면활성제는 바람직하게는 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.5%(w/v)의 범위로 조성물에 존재한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 폴리소르베이트-20을 포함하는 조성물로 제공된다. 조성물의 폴리소르베이트-20 성분은 0.001% 내지 0.1%, 예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나의 최종 농도(용적 기준 중량)로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~0.02%(w/v)의 폴리소르베이트-20을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~0.05%(w/v)의 폴리소르베이트-20을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 폴리소르베이트-80을 포함하는 조성물로 제공된다. 조성물의 폴리소르베이트-80 성분은 0.001% 내지 0.1%, 예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나의 최종 농도(용적 기준 중량)로 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~0.01%(w/v)의 폴리소르베이트-80을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 ~0.02%(w/v)의 폴리소르베이트-80을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나의) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.8.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.1.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
1% 내지 20% (예를 들어 1% 내지 15%, 2% 내지 10%, 또는 3% 내지 8% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~4% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.8.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
0.5% 내지 10% (예를 들어 1% 내지 8%, 1.5% 내지 5%, 또는 1.8% 내지 3% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~2% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.3.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.1.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-20 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.8.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-20 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 포스페이트, 예를 들어 인산나트륨, 보다 바람직하게는 ~20 mM 포스페이트;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 아세테이트, 예를 들어 아세트산나트륨, 보다 바람직하게는 ~20 mM 아세테이트;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 아세테이트, 보다 바람직하게는 ~20 mM 아세테이트;
1 mM 내지 250 mM (예를 들어 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나) 염화나트륨, 보다 바람직하게는 ~150 mM 염화나트륨;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.09%, 0.006% 내지 0.08%, 또는 0.008% 내지 0.07% 중 하나) 폴리소르베이트-20 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.05% (w/v) 폴리소르베이트-20; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
1 mM 내지 250 mM (예를 들어 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나) 아르기닌, 보다 바람직하게는 ~150 mM 아르기닌;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.09%, 0.006% 내지 0.08%, 또는 0.008% 내지 0.07% 중 하나) 폴리소르베이트-20 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.05% (w/v) 폴리소르베이트-20; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
1 mM 내지 250 mM (예를 들어 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나) 아르기닌, 보다 바람직하게는 ~150 mM 아르기닌;
00.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
1 mM 내지 250 mM (예를 들어 10 mM 내지 250 mM, 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 180 mM, 또는 125 내지 175 mM 중 하나) 염화나트륨, 보다 바람직하게는 ~150 mM 염화나트륨;
00.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 히스티딘, 보다 바람직하게는 ~20 mM 히스티딘;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~6.5.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 다음을 포함하는 조성물로 제공된다:
2 mM 내지 200 mM (예를 들어 5 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 40 mM, 12 mM 내지 30 mM, 15 내지 25 mM, 또는 18 내지 22 mM 중 하나) 숙시네이트, 예를 들어 숙신산나트륨, 보다 바람직하게는 ~20 mM 숙시네이트;
2% 내지 20% (예를 들어 2% 내지 15%, 3% 내지 12%, 또는 4% 내지 10% 중 하나) 수크로스 (w/v), 보다 바람직하게는 ~8% (w/v) 수크로스;
0.001% 내지 0.1% (예를 들어 0.002% 내지 0.08%, 0.006% 내지 0.05%, 또는 0.008% 내지 0.04% 중 하나) 폴리소르베이트-80 (w/v), 보다 바람직하게는 ~0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80; 및
pH 4.0 내지 7.0 (예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.8, pH 4.6 내지 pH 6.4, pH 4.8 내지 pH 6.2, 또는 pH 5.0 내지 pH 6.2 중 하나), 보다 바람직하게는 pH ~5.5.
상기 조성물은 약 0.5 mg/mL 내지 약 100 mg/mL 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 0.5 mg/mL 내지 약 80 mg/mL 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 0.75 mg/mL 내지 약 70 mg/mL 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 1 mg/mL 내지 약 60 mg/mL 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 1.2 mg/mL 내지 약 50 mg/mL의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다.
항원-결합 분자는 약 30 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 65 mg/mL, 또는 약 70 mg/mL, 또는 그 중 임의의 범위의 농도로, 예를 들어, 본 개시내용에 따른 조성물로 제형화될 수 있다. 항원-결합 분자는 약 50 mg/mL의 농도로, 예를 들어 본 개시내용에 따른 조성물로 제형화될 수 있다.
항원-결합 분자는 약 0.5 mg/mL, 0.6 mg/mL, 0.7 mg/mL, 0.8 mg/mL, 0.9 mg/mL, 1.0 mg/mL, 1.1 mg/mL, 1.2 mg/mL, 1.3 mg/mL, 1.4 mg/mL, 1.5 mg/mL, 1.6 mg/mL, 1.7 mg/mL, 1.8 mg/mL, 1.9 mg/mL 또는 2.0 mg/mL의 농도로, 예를 들어 본 개시내용에 따른 조성물로 제형화될 수 있다. 항원-결합 분자는 약 1.2 mg/mL의 농도로, 예를 들어 본 개시내용에 따른 조성물로 제형화될 수 있다.
50 mg/mL 항원-결합 분자 용액은 임의의 적절한 부형제를 사용하여 투여 전에 희석될 수 있다. 일부 실시양태에서, 50 mg/mL 항원-결합 분자 용액은 투여를 위해 0.9% 염화나트륨(NaCl)에 희석된다. 일부 실시양태에서, 50 mg/mL 항원-결합 분자 용액은 투여를 위해 예를 들어 100 내지 250mL의 용적으로 적어도 1.2 mg/mL의 농도로 희석된다. 일부 실시양태에서, 희석된 항원-결합 분자 용액은 그후, 예를 들어 정맥내 투여를 통해, 예를 들어 본 개시내용에 따른 용량/투여 섭생을 사용하여, 예를 들어 본 개시내용에 따른 질환/병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 희석된 항원-결합 분자 용액은 초기 희석 단계로부터 48시간 이내에 대상자에게 투여된다.
치료적 및 예방적 적용
본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산, 발현 벡터, 세포 및 조성물은 치료적 및 예방적 방법에서 사용된다.
본 발명은 의학적 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물을 제공한다. 또한, 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물의 용도가 제공된다. 또한, 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물의 치료적 또는 예방적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법이 제공된다.
상기 방법은 질환/병태의 발병 또는 진행을 감소시키거나, 질환/병태의 증상을 완화하거나, 질환/병태의 병리를 감소시키는 데 효과적일 수 있다. 상기 방법은 질환/병태의 진행을 예방하는 데, 예를 들어 질환/병태의 악화를 방지하거나 발병 속도를 늦추는 데 효과적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 질환/병태의 개선, 예를 들어, 질환/병태의 증상의 감소 또는 질환/병태의 중증도/활성의 일부 다른 상관관계에서의 감소를 야기할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 질환/병태의 후기 단계(예를 들어, 만성 단계 또는 전이)의 발달을 예방할 수 있다.
본 발명의 물품은 HER3를 발현하는 세포의 수 및/또는 활성의 감소로부터 치료적 또는 예방적 이득을 얻을 수 있는 임의의 질환/병태의 치료/예방을 위해 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 질환/병태는 HER3를 발현하는 세포가 병리학적으로 연루된 질환/병태, 예를 들어, HER3를 발현하는 세포의 증가된 수/비율이 질환/병태의 발병, 발달 또는 진행, 및/또는 질환/병태의 하나 이상의 증상의 중증도와 양성으로 연관되거나 HER3를 발현하는 세포의 증가된 수/비율이 질환/병태의 발병, 발달 또는 진행에 대한 위험 요인인 질환/병태일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료/예방되어야 할 질환/병태는, 예를 들어, 질환/병태의 부재하에서 HER3를 발현하는 세포의 수/비율/활성과 비교하여, HER3를 발현하는 세포의 수/비율/활성의 증가를 특징으로 하는 질환/병태이다.
일부 실시양태에서, 치료/예방되어야 할 질환/병태는 암이다.
암은 임의의 원치 않는 세포 증식(또는 원치 않는 세포 증식에 의해 나타나는 임의의 질환), 신생물 또는 종양일 수 있다. 암은 양성 또는 악성일 수 있으며 원발성 또는 이차성(전이성)일 수 있다. 신생물 또는 종양은 세포의 비정상적인 성장 또는 증식일 수 있으며 임의의 조직에 위치할 수 있다. 암은 예를 들어 부신, 부신 수질, 항문, 맹장, 방광, 혈액, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 맹장, 중추 신경계(뇌를 포함하거나 제외함) 소뇌, 자궁경부, 결장, 십이지장, 자궁내막, 상피 세포(예를 들어 신장 상피), 담낭, 식도, 신경교세포, 심장, 회장, 공장, 신장, 눈물샘, 후두, 간, 폐, 림프, 림프절, 림프모세포, 상악, 종격동, 장간막, 근막, 비인두, 장막, 구강, 난소, 췌장, 이하선, 말초 신경계, 복막, 흉막, 전립선, 타액선, S상 결장, 피부, 소장, 연조직, 비장, 위, 고환, 흉선, 갑상선, 혀, 편도선, 기관, 자궁, 외음부 및/또는 백혈구로부터 유래된 조직/세포의 암일 수 있다.
치료하고자 하는 종양은 신경계 또는 비신경계 종양일 수 있다. 신경계 종양, 예를 들어 신경교종(glioma), 수모세포종(medulloblastoma), 수막종(meningioma), 신경섬유종(neurofibroma), 뇌실막종(ependymoma), 슈반세포종(Schwannoma), 신경섬유육종(neurofibrosarcoma), 성상세포종(astrocytoma) 및 희소돌기아교종(oligodendroglioma)은 중추 또는 말초 신경계에서 기원할 수 있다. 비신경계 암/종양은 임의의 다른 비신경 조직에서 기원할 수 있으며, 예는 흑색종(melanoma), 중피종(mesothelioma), 림프종(lymphoma), 골수종(myeloma), 백혈병(leukemia), 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma, NHL), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 만성 골수성 백혈병(chronic myelogenous leukemia, CML), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome, MDS), 피부 T 세포 림프종(cutaneous T-cell lymphoma, CTCL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 간종양(hepatoma), 표피모양 암종(epidermoid carcinoma), 전립선 암종(prostate carcinoma), 유방암(breast cancer), 폐암(lung cancer), 결장암(colon cancer), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 흉선 암종(thymic carcinoma), NSCLC, 혈액암 및 육종을 포함한다.
HER3 및 이의 암과의 연관성 및 암에서의 역할은 예를 들어 문헌[Karachaliou et al., BioDrugs. (2017) 31(1):63-73 and Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39-48]에 검토되어 있으며, 이들 둘 다 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 암은 다음으로부터 선택된다: HER3를 발현하는 세포를 포함하는 암, 고형 종양, 유방암, 유방 암종, 유관 암종, 위암, 위 암종, 위 선암종, 결장직장암, 결장직장 암종, 결장직장 선암종, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종(SCCHN), 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐 암종, 난소암, 난소 암종, 난소 장액성 선암종, 신장암, 신세포 암종, 신장 투명 세포 암종, 신세포 선암종, 신장 유두상 세포 암종, 췌장암, 췌장 선암종, 췌관 선암종, 자궁경부암, 자궁경부 편평 세포 암종, 피부암, 흑색종, 식도암, 식도 선암종, 간암, 간세포 암종, 담관암종, 자궁암, 자궁체암 자궁내막암, 갑상선암, 갑상선 암종, 크롬친화세포종(pheochromocytoma), 부신경절종(paraganglioma), 방광암, 방광 요로상피 암종, 전립선암, 전립선 선암종, 육종 및 흉선종.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 다음으로부터 선택된다: HER3-발현 암, 위암(예를 들어 위 암종, 위 선암종, 위장관 선암종), 두경부암(예를 들어 두경부 편평 세포 암종), 유방암(예를 들어 삼중 음성 유방암), 난소암(예를 들어 난소 암종), 폐암(예를 들어 NSCLC, 폐 선암종, 편평 폐 세포 암종), 흑색종, 전립선암(예를 들어 거세 저항성 전립선암), 구강암(예를 들어 구인두 암), 신장암(예를 들어 신세포 암종) 또는 결장직장암(예를 들어 결장직장 암종; RAS 야생형 결장직장암), 식도암, 췌장암, 고형암 및/또는 액체암.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 다음으로부터 선택되는 HER3를 발현/과발현하는 고형암이다: 위암(예를 들어 위 암종, 위 선암종, 위장관 선암종), 두경부암(예를 들어 두경부 편평 세포 암종), 유방암(예를 들어 삼중 음성 유방암), 난소암(예를 들어 난소 암종), 폐암(예를 들어 NSCLC, 폐 선암종, 편평 폐 세포 암종, 침습성 점액성 선암종), 흑색종, 전립선암(예를 들어 거세 저항성 전립선암), 구강암(예를 들어 구인두암), 결장직장암(예를 들어 결장직장 암종; RAS 야생형 결장직장암), 식도암, 췌장암, 방광암, 자궁경부암, 자궁내막암 또는 간세포 암종(HCC). 암은 전이성일 수 있다.
치료/예방은 다음 중 하나 이상을 목표로 할 수 있다: 암의 증상의 개시/진행을 지연/예방하는 것, 암의 증상의 중증도를 감소시키는 것, 암의 세포의 생존/성장/침습/전이를 감소시키는 것, 암의 세포의 수를 감소시키는 것, 및/또는 대상체의 생존을 증가시키는 것.
일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 EGFR 계열 구성원을 발현하는 세포(예를 들어, HER3, EGFR, HER2 또는 HER4), 및/또는 EGFR 계열 구성원에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 EGFR 계열 구성원에 대해 양성인 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 계열 구성원 및/또는 EGFR 계열 구성원에 대한 리간드를 과발현한다. 과발현은 등가의 비-암성 세포/비-종양 조직에 의한 발현 수준보다 큰 발현 수준의 검출에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 HER3 및 다른 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2 또는 HER4)을 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 HER3를 과발현하고 또 다른 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2 또는 HER4)을 과발현하는 세포를 포함한다. HER3/다른 EGFR 계열 구성원의 과발현은 등가의 비-암성 세포/비-종양 조직에 의한 발현 수준보다 큰 HER3/다른 EGFR 계열 구성원의 발현 수준의 검출에 의해 확인할 수 있다.
발현은 임의의 적절한 수단에 의해 결정될 수 있다. 발현은 유전자 발현(예를 들어 전사 상향조절) 또는 단백질 발현일 수 있다. 유전자 발현은 예를 들어 HER3를 암호화하는 mRNA의 검출에 의해, 예를 들어 정량적 실시간 PCR(qRT-PCR)에 의해 결정될 수 있다. 단백질 발현은 예를 들어 항체-기반 방법, 예를 들어 웨스턴 블롯, 면역조직화학, 면역세포화학, 유세포 분석 또는 ELISA에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 HER3를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 HER3에 대해 양성인 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 HER3를 과발현한다. HER3의 과발현은 등가의 비암성 세포/비종양 조직에 의한 발현 수준보다 큰 HER3의 발현 수준의 검출에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 환자는 예를 들어 환자로부터 수득된 샘플에서, HER3를 발현하거나 HER3를 과발현하는 암의 검출에 기반하여 본원에 기재된 치료를 위해 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 환자는 예를 들어 환자로부터 수득된 샘플에서, HER3 및 다른 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2 또는 HER4)을 발현하거나 HER3 및 다른 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2 또는 HER4)을 과발현하는 암의 검출에 기반하여 본원에 기재된 치료를 위해 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 HER3에 대한 리간드(예를 들어, NRG1 및/또는 NRG2)를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료/예방될 암은 등가의 비-암성 세포/비-종양 조직에 의한 발현 수준보다 큰 NRG1 및/또는 NRG2의 발현 수준을 발현하는 세포를 포함한다. 암은 NRG1 및/또는 NRG2를 과발현하는 세포를 포함하는 것으로 설명될 수 있다.
본원에 기재된 HER3-결합 항원-결합 분자는 HER3이 NRG에 의해 결합될 때(즉, HER3이 '개방' 형태로 제공될 때) 및 또한 HER3이 NRG에 의해 결합되지 않을 때(즉, HER3이 '폐쇄' 형태로 제공될 때) 극도로 높은 친화도로 HER3에 결합하는 것으로 입증된다.
따라서, 본 발명의 항원-결합 분자는 HER3 리간드 발현/과발현을 특징으로 하는 암, 예를 들어 HER3에 대한 리간드를 발현/과발현하는 세포를 포함하는 암/종양의 치료/예방에 특히 유용하다.
일부 실시양태에서, 환자는 예를 들어 대상체로부터 수득된 샘플에서 NRG1 및/또는 NRG2를 발현/과발현하는 세포를 포함하는 암과 같은 HER3 리간드 발현/과발현에 의해 특징지어지는 암의 검출에 기반하여 본원에 기재된 치료를 위해 선택될 수 있다. HER3 리간드 발현/과발현의 검출에 기반한 선택은 HER3 및/또는 다른 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2 또는 HER4)의 검출에 기반한 선택과 조합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 유전적 변이체를 포함하지 않는 기준 대립유전자(예를 들어, 돌연변이되지 않은, 또는 '야생형' 대립유전자)를 지닌 필적하는 세포에 비해, HER3에 대한 리간드의 증가된 (유전자 및/또는 단백질) 발현을 유발하는 유전적 변이체(예를 들어, 돌연변이체)를 지닌 세포를 포함한다. 유전적 변이체는 기준 대립유전자에 비해 뉴클레오티드 서열의 삽입, 결실, 치환, 또는 더 큰 규모의 전위/재배열일 수 있거나 이를 포함할 수 있다.
HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 '초래하는' 돌연변이는 HER3에 대한 리간드의 증가된 유전자/단백질 발현을 유발하는 것으로 알려지거나 예측될 수 있거나, 또는 이와 관련될 수 있다. HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이는 '활성화' 돌연변이로 지칭될 수 있다.
HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는 돌연변이를 지니지 않은 등가의 세포의 게놈 핵산에 의해 발현되지 않거나 암호화되지 않는 HER3에 대한 리간드의 유전자 또는 단백질 발현을 초래할 수 있다. 즉, HER3에 대한 리간드는 돌연변이의 결과로 발생하는 신생항원인 수 있으며, 따라서 '증가된 발현'은 발현이 없는 것일 수 있다. 예시로서, CD74- NRG1 유전자 융합을 포함하는 세포는 CD74-NRG1 유전자 융합이 결핍된 세포에 비해 유전자 융합에 의해 암호화된 CD74-NRG1 융합 폴리펩티드의 증가된 발현을 나타낸다.
HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 의해 발현되고/되거나 게놈 핵산에 의해 암호화되는 HER3에 대한 리간드의 증가된 유전자 또는 단백질 발현을 초래할 수 있다. 예시로서, 세포는 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 의한 NRG1을 암호화하는 핵산의 전사 수준에 비해 NRG1을 암호화하는 핵산의 전사 수준의 증가를 초래하는 돌연변이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 비해 HER3에 대한 리간드의 유전자 발현의 증가를 야기할 수 있다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 비해 HER3에 대한 리간드의 단백질 발현의 증가를 야기할 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는, 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 비해, 돌연변이를 포함하는 세포의 세포 표면 상에서 또는 세포 표면에서 HER3에 대한 리간드의 수준의 증가를 야기할 수 있다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이는, 돌연변이를 포함하지 않는 등가의 세포에 비해, 돌연변이를 포함하는 세포로부터 HER3에 대한 리간드의 분비 수준의 증가를 야기할 수 있다.
기준 세포에 의한 HER3에 대한 리간드의 발현 수준에 비해 HER3에 대한 리간드의 발현이 증가된 세포(예를 들어, 돌연변이의 결과로서)는 HER3에 대한 리간드를 '과발현'하거나, HER3에 대한 리간드의 '상향조절된 발현'을 갖는 것으로 설명될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이가 결핍된 등가의 세포에 비해 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 지닌 세포를 포함하는 암은 HER3에 대한 리간드의 과발현/상향조절된 발현을 나타내는 세포를 포함하는 암으로 설명될 수 있다. 일부 실시양태에서, 돌연변이가 결핍된 기준 세포는 (예를 들어, 등가의 세포 유형의) 비-암성 세포 또는 (예를 들어, 등가의 암 유형의) 암성 세포일 수 있다.
본원에서 'HER3에 대한 리간드'는 일반적으로 HER3의 도메인 I 및 III에 의해 형성된 HER3의 리간드 결합 영역을 통해 HER3에 결합할 수 있는 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3의 도메인 I 및/또는 III과의 상호작용을 통해 HER3에 결합한다. HER3에 대한 예시적인 리간드는 NRG1 및 NRG2와 같은 뉴레굴린을 포함하며, 이들은 이들의 EGF-유사 도메인과 HER3의 리간드 결합 영역 사이의 상호작용을 통해 HER3에 결합한다.
HER3 리간드는 바람직하게는 HER3를 포함하는 HER3 수용체 및/또는 수용체 복합체를 통해 결합하고 신호전달을 촉발할 수 있다. 본 개시내용으로부터 명백해지는 바와 같이, HER3를 포함하는 수용체 복합체는 본원에 기재된 바와 같은 HER3에 대한 상호작용 파트너, 예를 들어 HER3, HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R 및/또는 cMet)를 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3 리간드의 증가된 발현을 갖는 세포 이외의 세포에 의해 발현되는 HER3 수용체/수용체 복합체에 결합할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3-발현 암세포에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3 리간드의 증가된 발현을 갖는 세포에 의해 발현되는 HER3 수용체/수용체 복합체에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료될 암은 (i) HER3를 발현하는 세포, 및 (ii) (예를 들어, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이의 결과로서, 예를 들어, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 갖는) HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료될 암은 (i) HER3를 발현하고 (ii) 또한 (예를 들어, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이의 결과로서, 예를 들어, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 갖는) HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3에 대한 리간드의 HER3-결합 영역의 아미노산 서열, 또는 HER3에 대한 리간드의 HER3-결합 영역으로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. HER3에 대한 리간드의 HER3-결합 영역으로부터 유래된 아미노산 서열은 이들이 유래되는 아미노산 서열에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3에 결합할 수 있는 EGF-유사 도메인, 또는 이의 HER3-결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, HER3-결합 EGF-유사 도메인/단편은 EGF 계열 구성원(예를 들어, 헤파린-결합 EGF-유사 성장 인자(HB-EGF), 형질전환 성장 인자-α(TGF-α), 암피레굴린(AR), 에피레굴린(EPR), 에피겐, 베타셀룰린(BTC), NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4)이거나 이들로부터 유래된다.
EGF 계열 구성원은 서열 번호 240에 나타낸 보존된 아미노산 서열의 하나 이상의 반복을 포함하며, 이는 3개의 분자내 이황화 결합을 형성하는 6개의 시스테인 잔기를 함유하여, 이들의 동족 수용체에 대한 고친화성 결합에 필요한 3개의 구조적 루프를 제공한다(참조; Harris et al. Experimental Cell Research (2003) 284(1): 2-13). 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 서열 번호 240에 나타낸 컨센서스 서열에 따르는 아미노산 서열의 하나 이상의 카피를 포함한다.
HER3에 대한 예시적인 리간드는 뉴레굴린(NRG)을 포함한다. 뉴레굴린은 NRG1, NRG2, NRG3 및 NRG4를 포함한다. 인간 NRG1(알파 이소형)의 아미노산 서열은 서열 번호 232에 나타내어져 있다. 인간 NRG1의 알파 이소형 및 여러 다른 이소형(알파1a 이소형(UnitProt: Q02297-2 참조), 알파2b 이소형(UnitProt: Q02297-3 참조) 및 알파3 이소형(UnitProt: Q02297-4 참조) 포함)은 서열 번호 233에 나타낸 EGF-유사 도메인을 포함하며, 이를 통해 HER3에 결합한다. 인간 NRG2(이소형 1)의 아미노산 서열은 서열 번호 234에 나타내어져 있다. 인간 NRG2의 이소형 1 및 여러 다른 이소형(이소형 3(UniProt:O14511-3 참조), 이소형 5(UniProt:O14511-5 참조), 이소형 6(UniProt:O14511-6 참조), 이소형 DON-1B(UniProt:O14511-7 참조) 및 이소형 DON-1R(UniProt:O14511-8 참조) 포함)은 서열 번호 235에 나타낸 EGF0유사 도메인을 포함하며, 이를 통해 HER3에 결합한다. 인간 NRG3의 아미노산 서열은 서열 번호 236에 나타내어져 있고, 인간 NRG3의 EGF-유사 도메인은 서열 번호 237에 나타내어져 있다. 인간 NRG4의 아미노산 서열은 서열 번호 238에 나타내어져 있고, 인간 NRG3의 EGF-유사 도메인은 서열 번호 239에 나타내어져 있다. 일부 실시양태에서, NRG는 NRG1, NRG2, NRG3 및 NRG4로부터 선택된다. 일부 실시예들에서, NRG는 NRG1 및 NRG2로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, EGF-유사 도메인/단편은 NRG(NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4)의 EGF-유사 도메인에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, EGF-유사 도메인/단편은 서열 번호 233, 235, 237 또는 239 중 하나에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 NRG(예를 들어 NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4; 예를 들어, NRG1 또는 NRG2)이거나, NRG의 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다(NRG의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%(예를 들어 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다).
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 HER3에 대한 리간드(예를 들어 NRG, 예를 들어 NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4; 예를 들어 NRG1 또는 NRG2)의 HER3-결합 영역에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 NRG의 EGF-유사 도메인(예를 들어, NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4; 예를 들어, NRG1 또는 NRG2)에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 EGFR 계열 단백질(예를 들어, HER3, HER2, EGFR, HER4, HGFR, IGF1R, cMet)이 아니다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이는 NRG 유전자 융합이다. 일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드는 NRG 유전자 융합(즉, 이에 의해 암호화된 폴리펩티드)의 산물이다. 일부 실시양태에서, 암은 NRG 유전자 융합을 갖는 세포를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "NRG 유전자 융합"은 (i) NRG 단백질(예를 들어, NRG1, NRG2, NRG3 또는 NRG4; 예를 들어, NRG1 또는 NRG2)의 아미노산 서열, 및 (ii) NRG 단백질 이외의 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 유전적 변이체를 지칭한다.
NRG 유전자 융합은 바람직하게는 본원에 기재된 바와 같은 HER3 리간드를 암호화하는 것으로 인지될 것이다. 일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 NRG 단백질의 HER3-결합 영역을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 NRG 단백질의 EGF-유사 도메인, 또는 HER3에 결합할 수 있고 NRG 단백질의 EGF-유사 도메인에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다.
일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 막관통 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 NRG 단백질 이외의 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드를 암호화한다.
일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 NRG1 유전자 융합이다. 일부 실시양태에서, NRG1 유전자 융합은 NRG1의 EGF-유사 도메인, 또는 HER3에 결합할 수 있고 NRG1의 EGF-유사 도메인에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다.
NRG1 유전자 융합은 예를 들어, 제WO 2018/182422 A1호, 제WO 2019/051155 A1호, 문헌[Dhanasekaran et al., Nat Commun. (2014) 5: 5893, Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695, Nagasaka et al., Journal of Thoracic Oncology (2019) 14(8):1354-1359 and Jonna et al., Clin Cancer Res. (2019) 25(16):4966-4972]에 기재되어 있으며, 이들 모두는 전문이 본원에 참고로 포함된다. NRG1 유전자 융합의 다양성은 NRG1이 염색체 8에 위치하기 때문에 발생할 수 있으며, 이는 특히 게놈 전위 사건에 취약하다(Adelaide et al., Genes Chromosomes Cancer. (2003) 37(4):333-45).
일부 실시양태에서, NRG1 유전자 융합은 CLU - NRG1 , CD74- NRG1 , DOC4 - NRG1 , SLC3A2-NRG1, RBPMS - NRG1 , WRN - NRG1 , SDC4 - NRG1 , RAB2IL1 - NRG1 , VAMP2 - NRG1 , KIF13B-NRG1, THAP7 - NRG1 , SMAD4 - NRG1 , MDK - NRG1 , TNC- NRG1 , DIP2B - NRG1 , MRPL13 -NRG1, PARP8 - NRG1 , ROCK1 - NRG1 , DPYSL2 - NRG1 , ATP1B1 - NRG1 , CDH6 - NRG1 , APP- NRG1 , AKAP13-NRG1, THBS1 - NRG1 , FOXA1 - NRG1 , PDE7A - NRG1 , RAB3IL1 - NRG1 , CDK1 - NRG1 , BMPRIB-NRG1, TNFRSF10B - NRG1 , 및 MCPH1 - NRG1로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, NRG1 유전자 융합은 CLU - NRG1이다.
CD74- NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Fernandez-Cuesta et al. Cancer Discov. (2014) 4:415-22 and Nakaoku et al., Clin Cancer Res (2014) 20:3087-93]에 기재되어 있다. DOC4 - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Liu et al., Oncogene. (1999) 18(50):7110-4 and Wang et al., Oncogene. (1999) 18(41):5718-21]에 기재되어 있다. SLC3A2 - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Nakaoku et al., Clin Cancer Res (2014) 20:3087-93, Shin et al., Oncotarget (2016) 7:69450-65 and Shin et al., Mol Cancer Ther. (2018) 17(9):2024-2033]에 기재되어 있다. RBPMS-NRG1, WRN - NRG1 , RAB2IL1 - NRG1 및 SDC4 - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Dhanasekaran et al., Nat Commun. (2014) 5: 5893]에 기재되어 있다. VAMP2 -NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Jung et al., J Thorac Oncol. (2015) 10(7):1107-11 and Shim et al., J Thorac Oncol. (2015) 10(8):1156-62]에 기재되어 있다. KIF13B - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Xia et al., Int J Surg Pathol. (2017) 25(3):238-240]에 기재되어 있다. SMAD4 - NRG1 , AKAP13 - NRG1 , THBS1-NRG1, FOXA1 - NRG1 , PDE7A - NRG1 , RAB3IL1 - NRG1 및 THAP7 - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695]에 기재되어 있다. MDK - NRG1 , TNC- NRG1 , DIP2B - NRG1 , MRPL13 - NRG1 , PARP8 - NRG1 , ROCK1 - NRG1 및 DPYSL2-NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Jonna et al., Clin Cancer Res. (2019) 25(16):4966-4972]에 기재되어 있다. ATP1B1 - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695 and Jones et al., Annals of Oncology (2017) 28:3092-3097]에 기재되어 있다. CLU - NRG1 유전자 융합은 예를 들어 문헌[Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695 and Nagasaka et al., Journal of Thoracic Oncology (2019) 14(8):1354-1359]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, NRG 유전자 융합은 NRG2 유전자 융합이다. 일부 실시양태에서, NRG2 유전자 융합은 NRG2의 EGF-유사 도메인, 또는 HER3에 결합할 수 있고 NRG2의 EGF-유사 도메인에 대해 적어도 60%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다.
NRG2 유전자 융합은 예를 들어 제WO 2015/093557 A1호에 기재된 SLC12A2 -NRG2 및 문헌[Dupain et al., Mol Ther. (2019) 27(1):200-218]에 기재된 ZNF208 -NRG2를 포함한다.
HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는 (예를 들어, NRG 유전자 융합, 예를 들어, NRG1 유전자 융합 또는 NRG2 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하는) 암은 본원에 기재된 임의의 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 암은 폐, 유방, 두부, 목, 신장, 난소, 췌장, 전립선, 자궁, 담낭, 결장, 직장, 방광, 연조직 또는 비인두로부터 유래된 조직/세포의 암일 수 있다.
일부 실시양태에서, HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는 (예를 들어, NRG 유전자 융합, 예를 들어, NRG1 유전자 융합 또는 NRG2 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하는) 암은 폐암(lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma), 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma), 유방암(breast cancer), 유방 암종(breast carcinoma), 유방 침습성 암종(breast invasive carcinoma), 두경부암(head and neck cancer), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 신장암(renal cancer), 신장 투명세포 암종(renal clear cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 난소 장액성 낭선암종(ovarian serous cystadenocarcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinoma), 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma), 전립선암(prostate cancer), 전립선 선암종(prostate adenocarcinoma), 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁 암육종(uterine carcinosarcoma), 담낭암(gallbladder cancer), 담관암종(cholangiocarcinoma), 결장직장암(colorectal cancer), 방광암(bladder cancer), 요로상피 방광암(urothelial bladder cancer), 육종(sarcoma), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor) 및 비인두의 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor of the nasopharynx)으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 NRG1 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하는 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma) 또는 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma))이다.
본원의 실시양태에서, 특정된 특성을 갖는 세포를 포함하는 암은 이러한 특성을 갖는 세포를 포함하는 종양일 수 있거나 이를 포함할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
당업계에서 일반적인 바와 같이, 특정된 특성을 갖는 세포를 포함하는 암/종양은 본원에서 단순히 이러한 특성을 갖는 암/종양으로 지칭될 수 있다. 예시로서, NRG1 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하는 암/종양은 단순히 "NRG1 유전자 융합을 포함하는 암/종양" 또는 "NRG1 유전자 융합 암/종양"으로 지칭될 수 있다.
본 발명의 물품의 투여는 바람직하게는 "치료적 유효" 또는 "예방적 유효" 양이며, 이는 대상체에게 치료적 또는 예방적 이득을 나타내기에 충분하다. 실제 투여량, 투여 속도 및 시간 경과는 질환/병태의 성질 및 중증도 및 투여된 특정 물품에 따라 좌우될 것이다. 치료의 처방, 예를 들어 투여량 등의 결정은 일반 개업의 및 기타 의사의 책임 내에 있으며, 전형적으로 치료할 질환/장애, 개별 대상체의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 개업의에게 알려진 기타 요인을 고려한다. 상술한 기술 및 프로토콜의 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins]에서 찾을 수 있다.
투여는 단독으로 또는 다른 치료와 조합하여, 치료할 병태에 따라 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다. 본원에 기재된 항원-결합 분자 또는 조성물 및 치료제는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 예를 들어 암의 치료/예방을 위한 추가의 치료적 또는 예방적 중재를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 중재는 화학요법, 면역요법, 방사선요법, 수술, 백신접종 및/또는 호르몬 요법으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 중재는 백혈구 분반술(leukapheresis)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 중재는 줄기세포 이식을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다.
따라서, 본 발명은 본 발명에 따른 물품(예를 들어 본 발명에 따른 항원-결합 분자) 및 EGFR 계열 구성원(예를 들어 EGFR, HER2, HER3 또는 HER4)에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 다른 제제를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본원에 기재된 질환/병태의 의학적 치료 및 예방의 방법에서의 이러한 조성물의 용도가 제공된다.
또한, 본 발명에 따른 물품(예를 들어 본 발명에 따른 항원-결합 분자) 및 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 다른 제제를 투여함을 포함하여 본원에 기재된 질환/병태를 치료/예방하는 방법이 제공된다.
EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 소분자 억제제(예를 들어 티로신 키나제 억제제), 단클론 항체(및 이의 항원-결합 단편), 펩티드/폴리펩티드 억제제(예를 들어 유인 리간드(decoy ligand)/수용체 또는 펩티드 앱타머) 및 핵산(예를 들어 안티센스 핵산, 스플라이스-스위칭 핵산 또는 핵산 앱타머)을 포함한다. EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제는 EGFR 계열 구성원, 이에 대한 상호작용 파트너, 및/또는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달에 관여하는 다운스트림 인자에 대한 직접적인 영향을 통해 신호전달을 억제하는 제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제는 EGFR, HER2, HER4 및 HER3 중 하나 이상에 의해 매개되는 신호전달을 억제한다. EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제는 예를 들어, 문헌[Yamaoka et al., Int. J. Mol. Sci. (2018), 19, 3491]에 기재되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, 길항제는 pan-ErbB 억제제이다. 일부 실시양태에서, 길항제는 EGFR에 의해 매개되는 신호전달의 억제제이다(예를 들어, 세툭시맙, 파니투무맙, 게피티닙, 엘로티닙, 라파티닙, 아파티닙, 브리가티닙, 이코티닙, 오시머티닙, 잘루투무맙, 반데타닙, 네시투무맙, 니모투주맙, 다코미티닙, 둘리고투주맙 또는 마투주맙). 일부 실시양태에서, 길항제는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 억제제이다(예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 라파티닙, 네라티닙, 아파티닙, 다코미티닙, MM-111, MCLA-128 또는 마제툭시맙). 일부 실시양태에서, 길항제는 HER3에 의해 매개되는 신호전달의 억제제이다(예를 들어 세리반투맙, 룸레투주맙, 엘겜투맙, KTN3379, AV-203, GSK2849330, REGN1400, MP-RM-1, EV20, 둘리고투주맙, MM-111, 이스티라투맙, MCLA-128, 패트리투맙, EZN-3920, RB200 또는 U3-1402). 일부 실시양태에서, 길항제는 HER4에 의해 매개되는 신호전달의 억제제이다(예를 들어, 라파티닙, 이브루티닙, 아파티닙, 다코미티닙 또는 네라티닙).
일부 실시양태에서, EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제는 EGFR 계열 구성원에 의한 신호전달의 다운스트림 이펙터를 억제한다. EGFR 계열 구성원에 의한 신호전달의 다운스트림 이펙터는 예를 들어 PI3K, AKT, KRAS, BRAF, MEK/ERK 및 mTOR를 포함한다. 일부 실시양태에서, EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제는 MAPK/ERK 경로의 억제제이다. 일부 실시양태에서, EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제는 PI3K/ATK/mTOR 경로의 억제제이다. 일부 실시양태에서 길항제는 PI3K 억제제(예를 들어, 피틸리십, 부팔리십, 이델라리십, 코판리십 또는 듀벨리십)이다. 일부 실시양태에서 길항제는 AKT 억제제(예를 들어, MK-2206, AZD5363, 이파타세르팁, VQD-002, 페리포신 또는 밀테포신)이다. 일부 실시양태에서 길항제는 BRAF 억제제(예를 들어, 베무라페닙, 다브라페닙, SB590885, XL281, RAF265, 엔코라페닙, GDC-0879, PLX-4720, 소라페닙, 또는 LGX818)이다. 일부 실시양태에서 길항제는 MEK/ERK 억제제(예를 들어, 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, PD-325901, CI-1040, PD035901, 또는 TAK-733)이다. 일부 실시양태에서 길항제는 mTOR 억제제(예를 들어, 라파마이신, 데포롤리무스, 템시롤리무스, 에베로리무스, 리다포롤리무스 또는 사파니세르팁)이다.
일부 실시양태에서, (단독요법 또는 병용요법을 포함하는) 본 발명의 측면에 따라 치료될 암은 EGFR 계열 구성원(예를 들어, EGFR, HER2, HER4 및/또는 HER3)에 의해 매개되는 신호전달의 길항제, 예를 들어 앞의 세 단락에서 기술된 바와 같은 길항제에 의한 치료에 내성이 있는 암이다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 내성이 있는 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 대한 내성을 발달시킨 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 이전에 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 반응하였고, 현재 길항제에 의한 치료에 내성이 있는 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제로 치료 후에 재발 및/또는 진행된 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 처음에는 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 반응하였으나, 나중에 상기 치료에도 진행된 암을 가지고 있었다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따라 치료될 대상체는 (예를 들어 본원에 기재된 바와 같은) HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는 암을 갖는 것으로 결정되었을 수 있다(즉, 갖는 것으로 진단되었을 수 있다). 일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 대상체가 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는 암을 가지고 있는지 여부를 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 암의 세포로부터의 핵산을 분석하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 유발하는 돌연변이를 검출하는 단계를 포함한다.
숙련가는 본원에 기재된 암 및 대상체를 쉽게 식별할 수 있다. 이러한 암 및 대상체는, 예를 들어 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 길항제로의 치료 과정 동안에, 예를 들어 시간 경과에 따른 암의 발달/진행(및/또는 이들의 상관관계)의 모니터링을 통해 식별될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 대상체/암의 식별은 예를 들어 시험관내에서 샘플의 분석(예를 들어, 생검)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 길항제에 의한 치료에 대한 감소된 감수성 및/또는 내성과 연관되는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는 것으로 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 계열 구성원의 상향조절된 발현을 갖는 세포를 포함하는 것으로 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 치료될 암은 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 내성이 있는 암이다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 내성이 있는 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 대한 내성을 발달시킨 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 이전에 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 반응하였고, 현재 길항제에 의한 치료에 내성을 갖는 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제로 치료 후에 재발 및/또는 진행된 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 처음에는 EGFR 및/또는 HER2에 의해 매개되는 신호전달의 길항제에 의한 치료에 반응하였으나, 나중에 상기 치료에도 진행된 암을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 치료될 대상체는 EGFR 계열 구성원, 예를 들어 EGFR 및/또는 HER2의 신호전달의 증폭과 관련된 암을 가지고 있다.
특정 실시양태에서, 치료될 암은 BRAF의 억제제에 의한 치료에 내성을 부여하는 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 BRAF V600에서의 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 BRAF V600E 또는 V600K이다. 암은 갑상선암이나 결장암, 예를 들어 RAS 야생형 결장직장암일 수 있다.
특정 실시양태에서, 치료될 암은 BRAF의 억제제(예를 들어, BRAF V600에서의 돌연변이)를 사용한 치료에 내성을 부여하는 돌연변이를 포함하고, 치료는 베무라페닙 또는 다라페닙의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 분자는 예를 들어, PD-1, CTLA-4, LAG-3, VISTA, TIM-3, TIGIT 또는 BTLA이다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 촉진시킬 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 공동자극 수용체는 예를 들어 CD28, CD80, CD40L, CD86, OX40, 4-1BB, CD27 또는 ICOS이다.
따라서, 본 발명은 본 발명에 따른 물품(예를 들어, 본 발명에 따른 항원-결합 분자) 및 면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명의 물품 및 공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 촉진할 수 있는 제제를 포함하는 조성물이 제공된다. 또한, 본원에 기재된 질환/병태의 의학적 치료 및 예방의 방법에서의 이러한 조성물의 용도가 제공된다.
또한, 본 발명에 따른 물품(예를 들어, 본 발명에 따른 항원-결합 분자) 및 면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제를 투여함을 포함하여 본원에 기재된 질환/병태를 치료/예방하는 방법이 제공된다. 또한, 본 발명에 따른 물품(예를 들어, 본 발명에 따른 항원-결합 분자) 및 공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제를 투여함을 포함하여 본원에 기재된 질환/병태를 치료/예방하는 방법이 제공된다.
면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 면역 체크포인트 분자 또는 이의 리간드에 결합하고 면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 항체를 포함한다. 면역 체크포인트 분자에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 다른 제제는 면역 체크포인트 분자 또는 면역 체크포인트 분자에 대한 리간드의 유전자/단백질 발현을 (예를 들어, 면역 체크포인트 분자/리간드를 암호화하는 유전자(들)의 전사를 억제하거나, 면역 체크포인트 분자/리간드를 암호화하는 RNA의 전사후 처리를 억제하거나, 면역 체크포인트 분자/리간드를 암호화하는 RNA의 안정성을 감소시킴으로써, 면역 체크포인트 분자/리간드를 암호화하는 RNA의 분해를 촉진시킴으로써, 면역 체크포인트 분자/리간드의 번역후 처리를 억제함으로써, 면역 체크포인트 분자/리간드의 안정성을 감소시키거나, 면역 체크포인트 분자/리간드의 분해를 촉진함을 통해) 감소시킬 수 있는 제제, 및 소분자 억제제를 포함한다.
공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 촉진할 수 있는 제제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 공동자극 수용체에 결합하고 공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 유발 또는 증가시킬 수 있는 효능제 항체를 포함한다. 공동자극 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 촉진할 수 있는 다른 제제는 공동자극 수용체 또는 공동자극 수용체에 대한 리간드의 유전자/단백질 발현을 (예를 들어, 공동자극 수용체/리간드를 암호화하는 유전자(들)의 전사를 촉진하거나, 공동자극 수용체/리간드를 암호화하는 RNA의 전사후 처리를 촉진하거나, 공동자극 수용체/리간드를 암호화하는 RNA의 안정성을 증가시키거나, 공동자극 수용체/리간드를 암호화하는 RNA의 분해를 억제하거나, 공동자극 수용체/리간드의 번역후 처리를 촉진하거나, 공동자극 수용체/리간드의 안정성을 증가시키거나, 공동자극 수용체/리간드의 분해를 억제함을 통해) 증가시킬 수 있는 제제, 및 소분자 효능제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 PD-1에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. PD-1에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 PD-1- 또는 PD-L1-표적호된 제제일 수 있다. PD-1에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어, PD-1 또는 PD-L1에 결합하고 PD-1-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 CTLA-4에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. CTLA-4에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 CTLA-4-표적화된 제제, 또는 CD80 또는 CD86과 같은 CTLA-4에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, CTLA-4에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어 CTLA-4, CD80 또는 CD86에 결합하고 CTLA-4-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 LAG-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. LAG-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 LAG-3-표적화된 제제, 또는 MHC 클래스 II와 같은 LAG-3에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, LAG-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어 LAG-3 또는 MHC 클래스 II에 결합하고 LAG-3-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 VISTA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. VISTA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 VISTA-표적화된 제제, 또는 VSIG-3 또는 VSIG-8과 같은 VISTA에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, VISTA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어, VISTA, VSIG-3 또는 VSIG-8에 결합하고 VISTA-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 TIM-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. TIM-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 TIM-3-표적화된 제제, 또는 갈렉틴 9와 같은 TIM-3에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, TIM-3에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어, TIM-3 또는 갈렉틴 9에 결합하고 TIM-3-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 TIGIT에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. TIGIT에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 TIGIT-표적화된 제제, 또는 CD113, CD112 또는 CD155와 같은 TIGIT에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, TIGIT에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어, TIGIT, CD113, CD112 또는 CD155에 결합하고 TIGIT-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 BTLA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제와 조합하여 투여된다. BTLA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 BTLA-표적화된 제제, 또는 HVEM과 같은 BTLA에 대한 리간드에 대해 표적화된 제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, BTLA에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제는 예를 들어, BTLA 또는 HVEM에 결합하고 BTLA-매개된 신호전달을 억제할 수 있는 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자 및 면역 체크포인트 분자(예를 들어, PD-1)에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제의 조합을 사용하는 방법은 어느 한 제제가 단독요법으로서 사용될 때 관찰되는 효과와 비교하여 개선된 치료 효과를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자 및 면역 체크포인트 분자(예를 들어, PD-1)에 의해 매개되는 신호전달을 억제할 수 있는 제제의 조합은 상승작용적(즉, 상가적) 치료 효과를 제공한다.
동시 투여는 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물 및 치료제를 함께, 예를 들어 두 제제를 모두 함유하는 약제학적 조성물로서(조합 제제), 또는 서로 바로 뒤에 그리고 임의로 동일한 투여 경로를 통해, 예를 들어 동일한 동맥, 정맥 또는 기타 혈관에 투여하는 것을 지칭한다. 순차적 투여는 항원 결합 분자/조성물 또는 치료제 중 하나를 투여한 다음 주어진 시간 간격 후에 다른 제제를 별도로 투여하는 것을 지칭한다. 두 제제가 동일한 경로에 의해 투여될 필요는 없지만, 이는 일부 실시양태에서의 경우이다. 시간 간격은 임의의 시간 간격일 수 있다.
화학요법 및 방사선요법은 각각 약물 또는 이온화 방사선(예를 들어 X선 또는 γ선을 사용한 방사선요법)으로 암을 치료하는 것을 지칭한다. 약물은 화학적 실체, 예를 들어, 소분자 약제, 항생제, DNA 인터컬레이터, 단백질 억제제(예를 들어 키나제 억제제), 또는 생물학적 제제, 예를 들어 항체, 항체 단편, 앱타머, 핵산(예를 들어 DNA, RNA), 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질일 수 있다. 상기 약물은 약제학적 조성물 또는 약제로서 제형화될 수 있다. 제형은 하나 이상의 약물(예를 들어, 하나 이상의 활성제)을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 희석제, 부형제 또는 담체와 함께 포함할 수 있다.
치료는 하나 이상의 약물의 투여를 수반할 수 있다. 약물은 단독으로 또는 다른 치료와 병용하여, 치료할 병태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학요법은 두 가지 약물의 투여를 수반하는 공동요법(co-therapy)일 수 있으며, 이들 중 하나 이상은 암을 치료하기 위해 의도될 수 있다.
화학요법은 하나 이상의 투여 경로, 예를 들어, 비경구, 정맥 주사, 경구, 피하, 피내 또는 종양내로 투여될 수 있다.
화학요법은 치료 섭생에 따라 투여될 수 있다. 치료 섭생은 의사 또는 의료 종사자에 의해 준비될 수 있고 치료를 필요로 하는 환자에게 맞게 조정될 수 있는 화학요법 투여의 미리 결정된 시간표, 계획, 체계 또는 일정일 수 있다. 치료 섭생은 다음 중 하나 이상을 나타낼 수 있다: 환자에게 투여할 화학요법의 유형; 각 약물 또는 방사선의 용량; 투여 사이의 시간 간격; 각 치료의 길이; 치료 휴일(treatment holiday)의 횟수 및 성질(있는 경우). 공동요법의 경우, 각 약물의 투여 방법을 나타내는 단일 치료 섭생이 제공될 수 있다.
화학요법 약물은 다음으로부터 선택될 수 있다: 아베마시클립, 아비라테론 아세테이트, 아비트렉세이트(메토트렉세이트), 아브락산(파클리탁셀 알부민-안정화된 나노입자 제형), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, 아칼라브루티닙, AC-T, 애드세트리스(브렌툭시맙 베도틴), ADE, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 아드리아마이신(독소루비신 염산염), 아파티닙 디말레에이트, 아피니토르(에베로리무스), 아킨제오(네투피탄트 및 팔로노세트론 염산염), 알다라(이미퀴모드), 알데스류킨, 알레센사(알렉티닙), 알렉티닙, 알렘투주맙, 알림타(페메트렉세드 이나트륨), 알리코파(코판리십 염산염), 주사용 알케란(멜팔란 염산염), 알케란 정제(멜팔란), 알록시(팔로노세트론 염산염), 알룬브리그(브리가티닙), 암보클로린(클로람부실), 암보클로린(클로람부실), 아미포스틴, 아미노레불린산, 아나스트로졸, 아프레피탄트, 아레디아(파미드로네이트 이나트륨), 아리미덱스(아나스트로졸), 아로마신(엑세메스탄), 아라논(넬라라빈), 삼산화비소, 아르제라(오파투무맙), 아스파라기나제 에르위니아 크리산테미, 아테졸리주맙, 아바스틴(베바시주맙), 아벨루맙, 악시캅타젠 실로류셀, 액시티닙, 아자시티딘, 바벤시오(아벨루맙), BEACOPP, 베세눔(카르무스틴), 벨레오닥(벨리노스타트), 벨리노스타트, 벤다무스틴 염산염, BEP, 베스폰사(이노투주맙 오조가마이신), 베바시주맙, 벡사로텐, 벡사르(토시투모맙 및 요오드 I 131 토시투모맙), 비칼루타마이드, BiCNU(카르무스틴), 블레오마이신, 블리나투모맙, 블린사이토(블리나투모맙), 보르테조밉, 보술리프(보수티닙), 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, 부멜, 부설판, 부설펙스(부설판), 카바지탁셀, 카보메틱스(카보잔티닙-S-말레이트), 카보잔티닙-S-말레이트, CAF, 칼퀄스(아칼라브루티닙), 캠패스(알렘투주맙), 캄프토사르(이리노테칸 염산염), 카페시타빈, CAPOX, 카락(플루오로우라실--국소), 카보플라틴, 카보플라틴-탁솔, 카필조밉, 카무브리스(카무스틴), 카무스틴, 카무스틴 임플란트, 카소덱스(비칼루타마이드), CEM, 세리티닙, 세루비딘(다우노루비신 염산염), 서바릭스(재조합 HPV 2가 백신), 세툭시맙, CEV, 클로람부실, 클로람부실-프레드니손, CHOP, 시스플라틴, 클라드리빈, 클라펜(사이클로포스파미드), 클로파라빈, 클로파렉스(클로파라빈), 클로라(클로파라빈), CMF, 코비메티닙, 코메트릭(카보잔티닙-S-말레이트), 코판리십 염산염, COPDAC, COPP, COPP-ABV, 코스메겐(닥티노마이신), 코텔릭(코비메티닙), 크리조티닙, CVP, 사이클로포스파미드, 사이포스 (이포스파미드), 시람자(라무시루맙), 시타라빈, 시타라빈 리포좀, 시토사르-U(시타라빈), 사이톡산(사이클로포스파미드), 다브라페닙, 다카르바진, 다코겐(데시타빈), 닥티노마이신, 다라투무맙, 다르잘렉스(다라투무맙), 다사티닙, 다우노루비신 염산염, 다우노루비신 염산염 및 시타라빈 리포좀, 데시타빈, 데피브로타이드 나트륨, 데피텔리오(데프로브로타이드 나트륨), 데가렐릭스, 데닐루킨 디프티톡스, 데노수맙, 디포시트(시타라빈 리포좀), 덱사메타손, 덱스라족산 염산염, 디누툭시맙, 도세탁셀, 독실(독소루비신 염산염 리포좀), 독소루비신 염산염, 독소루비신 염산염 리포좀, Dox-SL(독소루비신 염산염 리포좀), DTIC-Dome(다카르바진), 더발루맙, 에푸덱스(플루오로우라실--국소), 엘리테크(라스부리카제), 엘렌스(에피루비신 염산염), 엘로투주맙, 엘록사틴(옥살리플라틴), 엘트롬보팍 올아민, 에멘드(아프레피탄트), 엠플리시티(엘로투주맙), 에나시데닙 메실레이트, 엔잘루타미드, 에피루비신 염산염, 에포크, 에르비툭스(세툭시맙), 에리불린 메실레이트, 에리베지(비스모데깁), 엘로티닙 염산염, 에르위나제(아스파라기나제 에르위니아 크리산테미), 에티올(아미포스틴), 에토포포스(에토포사이드 포스페이트), 에토포사이드, 에토포시드 포스페이트, 에바셋(독소루비신 염산염 리포좀), 에베로리무스, 에비스타(랄록시펜 염산염), 에보멜라(멜팔란 염산염), 엑세메스테인, 5-FU(플루오로우라실 주입), 5-FU(플루오로우라실--국소), 파레스톤(토레미펜), 파리닥(파노비노스타트), 파슬로덱스(풀베스트란트), FEC, 페마라(레트로졸), 필그라스팀, 플루다라(플루다라빈 포스페이트), 플루다라빈 포스페이트, 플루오로플렉스(플루오로우라실--국소), 플루오로우라실 주사제, 플루오로우라실--국소, 플루타마이드, 폴렉스(메토트렉세이트), 폴렉스 PFS(메토트렉세이트), 폴피리, 폴피리-베바시주맙, 폴피리-세툭시맙, 폴피리녹스, 폴폭스, 폴로틴(프랄라트렉세이트), FU-LV, 풀베스트란트, 가다실(재조합 HPV 4가 백신), 가다실 9(재조합 HPV 4가 백신), 가지바(오비누투주맙), 게피티닙, 겜시타빈 염산염, 겜시타빈-시스플라틴, 겜시타빈-옥살리플라틴, 겜투주맙 오조가마이신, 젬자르(겜시타빈 염산염), 길로트리프(아파티닙 디말레이트), 글리벡(이마티닙 메실레이트), 글리아델(카르무스틴 임플란트), 글리아델 웨이퍼(카무스틴 임플란트), 글루카르피다제, 고세렐린 아세테이트, 할라벤(에리불린 메실레이트), 헤만게올(프로프라놀롤 염산염), 허셉틴(트라스투주맙), HPV 2가 백신, 재조합, HPV 9가 백신, 재조합, HPV 4가 백신, 재조합, 하이캄틴(토포테칸 염산염), 하이드레아(하이드록시우레아), 하이드록시우레아, 하이퍼-CVAD, 이브란스(팔보시클립), 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, ICE, 이클루시그(포나티닙 염산염), 이다마이신(이다루비신 염산염), 이다루비신 염산염, 이델라리십, 이디파(에나시데닙 메실레이트), 이펙스(이포스파미드), 이포스파미드, 이포스파미드(이포스파미드), IL-2(알데스류킨), 이마티닙 메실레이트, 임브루비카(이브루티닙), 임핀지(더발루맙), 이미퀴모드, 임리직(탈리모진 라헤르파레벡), 인리타(액시티닙), 이노투주맙 오조가마이신, 인터페론 알파-2b, 재조합, 인터루킨-2(알데스류킨), 인트론 A(재조합 인터페론 알파-2b), 요오드 I 131 토시투모맙 및 토시투모맙, 이필리무맙, 이레사(게피티닙), 이리노테칸 염산염, 이리노테칸 염산염 리포좀, 이스토닥스(로미뎁신), 익사베필론, 익사조밉 시트레이트, 익셈프라(익사베필론), 자카피(룩소리티닙 포스페이트), JEB, 제브타나(카바지탁셀), 카드실라(아도-트라스투주맙 엠탄신), 케옥시펜(랄록시펜 염산염), 케피반스(팔리페르민), 키트루다(펨브롤리주맙), 키스칼리(리보시클립), 킴리아(티사젠레클류셀), 키프롤리스(카르필조밉), 란레오타이드 아세테이트, 라파티닙 디토실레이트, 라트루보(올라라투맙), 레날리도마이드, 렌바티닙 메실레이트, 렌비마(렌바티닙 메실레이트), 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류케란(클로람부실), 류프롤라이드 아세테이트, 류스타틴(클라드리빈), 레불란(아미놀레불린산), 린폴리진(클로람부실), 리포독스(독소루비신 염산염 리포좀), 로무스틴, 론서프(트리플루리딘 및 티피라실 염산염), 루프론(류프롤라이드 아세테이트), 루프론 데포트(류프롤라이드 아세테이트), 루프론 데포트-페드(류프롤라이드 아세테이트), 린파자(올라파립), 마르키보(빈크리스틴 설페이트 리포좀), 마툴란(프로카르바진 염산염), 메클로르에타민 염산염, 메게스트롤 아세테이트, 메키니스트(트라메티닙), 멜팔란, 멜팔란 염산염, 머캅토퓨린, 메스나, 메스넥스(메스나), 메타졸라스톤(테모졸로마이드), 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF(메토트렉세이트), 메틸날트렉손 브로마이드, 멕세이트(메토트렉세이트), 멕세이트-AQ(메토트렉세이트), 미도스타우린, 미토마이신 C, 미톡산트론 염산염, 미토지트렉스(미토마이신 C), MOPP, 모조빌(플레릭사포르), 무스타겐(메클로르에타민 염산염), 무타마이신(미토마이신 C), 마일란(부설판), 밀로사르(아자시티딘), 밀로타르그(겜투주맙 오조가마이신), 나노입자 파클리탁셀(파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제형), 나벨빈(비노렐빈 타르트레이트), 네시투무맙, 넬라라빈, 네오사르(사이클로포스파미드), 네라티닙 말레에이트, 너링스(네라티닙 말레에이트), 네투피탄트 및 팔로노세트론 염산염, 뉴라스타(페그필그라스팀), 뉴포젠(필그라스팀), 넥사바르(소라페닙 토실레이트), 닐란드론(닐루타마이드), 닐로티닙, 닐루타마이드, 닌라로(익사조밉 시트레이트), 니라파립 토실레이트 일수화물, 니볼루맙, 놀바덱스(타목시펜 시트레이트), 엔플레이트(로미플로스팀), 오비누투주맙, 오돔조(소니데깁), OEPA, 오파투무맙, OFF, 올라파립, 올라라투맙, 오마세탁신 메페석시네이트, 온카스파르(페가스파르가제), 온단세트론 염산염, 오니비드(이리노테칸 염산염 리포좀), 온탁(데닐루킨 디프티톡스), 옵디보(니볼루맙), OPPA, 오시머티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제형, PAD, 팔보시클립, 팔리퍼민, 팔로노세트론 염산염, 팔로노세트론 염산염 및 네투피탄트, 파미드로네이트 이나트륨, 파니투무맙, 파노비노스타트, 파라플라틴(카보플라틴), 파라플라틴(카보플라틴), 파조파닙 염산염, PCV, PEB, 페가스파르가제, 페그필그라스팀, 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론(페그인터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 페메트렉시드 이나트륨, 페르제타(퍼투주맙), 퍼투주맙, 플라티놀(시스플라틴), 플라티놀-AQ(시스플라틴), 플레릭사포르, 포말리도마이드, 포말리스트(포말리도마이드), 포나티닙 염산염, 포트라자(네시투무맙), 프랄라트렉세이트, 프레드니손, 프로카바진 염산염, 프롤류킨(알데스류킨), 프롤리아(데노수맙), 프로막타(엘트롬보파크 올아민), 프로프라놀롤 염산염, 프로벤지(시풀류셀-T), 퓨리네톨(메르캅토퓨린), 퓨릭산(메르캅토퓨린), [항목 없음], 라듐 223 디클로라이드, 랄록시펜 염산염, 라무시루맙, 라스부리카제, R-CHOP, R-CVP, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 2가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 9가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 4가 백신, 재조합 인터페론 알파-2b, 레고라페닙, 렐리스터(메틸날트렉손 브로마이드), R-EPOCH, 레블리미드(레날리도마이드), 류마트렉스(메토트렉세이트), 리보시클립, R-ICE, 리툭산(리툭시맙), 리툭산 하이셀라(리툭시맙 및 히알루로니다제 인간), 리툭시맙, 리툭시맙 및 히알루로니다제 인간, 롤라피탄트 염산염, 로미뎁신, 로미플로스팀, 루비도마이신(다우노루비신 염산염), 루브라카(루카파립 캄실레이트), 루카파립 캄실레이트, 룩소리티닙 포스페이트, 리답트(미도스타우린), 스클레로솔 흉막내 에어로졸(Talc), 실툭시맙, 시풀류셀-T, 소마툴린 데포트(란레오타이드 아세테이트), 소니데깁, 소라페닙 토실레이트, 스프라이셀(다사티닙), 스탠포드 V, 멸균 활석 분말(활석), 스테리탈크(활석), 스티바르가(레고라페닙), 수니티닙 말레이트, 서텐트(수니티닙 말레이트), 사일라트론(페그인터페론 알파-2b), 실반트(실툭시맙), 신리보(오마세탁신 메페석시네이트), 타블로이드(티오구아닌), TAC, 타핀라(다브라페닙), 타그리소(오시머티닙), 활석, 탈리모진 라헤르파렙벡, 타목시펜 시트레이트, 타라빈 PFS(시타라빈), 타세바(에를로티닙 염산염), 타그레틴(벡사로텐), 타시그나(닐로티닙), 탁솔(파클리탁셀), 탁소테레(도탁셀), 테센트릭(아테졸리주맙), 테모다르(테모졸로마이드), 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 탈리도마이드, 탈로마이드(탈리도마이드), 티오구아닌, 티오테파, 티사젠레클류셀, 톨락(플루오로우라실--국소), 토포테칸 염산염, 토레미펜, 토리셀(템시롤리무스), 토시투모맙 및 요오드 I 131 토시투모맙, 토텍트(덱스라족산 염산염), TPF, 트라벡테딘, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트레안다(벤다무스틴 염산염), 트리플루리딘 및 티피라실 염산염, 트리세녹스(비소 삼산화물), 타이커브(라파티닙 디토실레이트), 유니툭신(디누툭시맙), 우리딘 트리아세테이트, VAC, 발루비신, 발스타(발루비신), 반데타닙, VAMP, 바루비(롤라피탄트 염산염), 벡티빅스(파니투무맙), VeIP, 벨반(빈블라스틴 설페이트), 벨케이드(보르테조밉), 벨사르(빈블라스틴 설페이트), 베무라페닙, 벤클렉스타(베네토클락스), 베네토클락스, 베르제니오(아베마시클립), 비아두르(류프롤라이드 아세테이트), 비다자(아자시티딘), 빈블라스틴 설페이트, 빈카사르 PFS(빈크리스틴 설페이트), 빈크리스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트 리포좀, 비노렐빈 타르트레이트, VIP, 비스모데깁, 비스토가드(우리딘 트리아세테이트), 보락사제(글루카르피다제), 보리노스타트, 보트리언트(파조파닙 염산염), 빅세오스(다우노루비신 염산염 및 시타라빈 리포좀), 웰코보린(류코보린 칼슘), 잘코리(크리조티닙), 젤로다(카페시타빈), 젤리리, 젤록스, 엑스게바(데노수맙), 엑스오피고(라듐 223 이염화물), 엑스탄디(엔잘루타미드), 예르보이(이필리무맙), 예스카르타(악시캅타진 실로류셀), 욘델리스(트라벡테딘), 잘트랩(지브-애플리버셉트), 자르시오(필그라스팀), 제줄라(니라파립 토실레이트 일수화물), 젤보라프(베무라페닙), 제발린(이브리투모맙 티우세탄), 지네카드(덱스라족산 염산염), 지브-애플리버셉트, 조프란(온단세트론 염산염), 졸라덱스(고세렐린 아세테이트), 졸레드론산, 졸린자(보리노스타트), 조메타(졸레드론산), 자이델리그(이델라리십), 지카디아(세리티닙) 및 자이티가(아비라테론 아세테이트).
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 다음 중 하나 이상과 조합하여 투여된다: HER2 억제제 (예를 들어, 항-HER2 항체), EGFR 억제제 (예를 들어, 항-EGFR 항체), 알킬화제, 피리미딘 유사체, 티미딜레이트 합성효소 억제제 (또는 이의 전구체), 및/또는 안드로겐 수용체 억제제.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 다음 중 하나 이상과 조합하여 투여된다: 트라스투주맙, 세툭시맙, 시스플라틴, 5-FU 또는 카페시타빈. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 트라스투주맙 및 시스플라틴, 및 5-FU 또는 카페시타빈과 조합하여 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 항-EGFR 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 세툭시맙과 조합하여 투여된다. 세툭시맙과의 병용투여는 특히 두경부암(예를 들어 두경부 편평세포 암종) 또는 결장직장암(예를 들어 RAS 야생형 결장직장암)의 치료를 위해 고려된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 엔잘루타미드 또는 다른 안드로겐 수용체 억제제(예를 들어, 아팔루타미드, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드, 또는 다롤루타미드)와 조합하여 투여된다. 엔잘루타미드 또는 다른 안드로겐 수용체 억제제와의 병용투여는 특히 전립선암(예를 들어 거세 저항성 전립선암)의 치료를 위해 고려된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 항-HER2 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 트라스투주맙과 조합하여 투여된다. 트라스투주맙과의 병용투여는 특히 유방암(예를 들어 삼중 음성 유방암) 또는 위암의 치료를 위해 고려된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 다른 항-HER3 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항원-결합 분자는 다음 중 하나 이상과 조합하여 투여된다: MM121 (SAR256212/세리반투맙; NCT04383210, NCT04790695), LJM-716 (엘겜투맙; NCT02167854), AV203 (Sarantopoulos. J et al. 2014, Journal of Clinical Oncology, 32: 11113-13), CDX-3379/ KTN3379 (NCT03254927, Duvvuri et al. Clin Cancer Res. 2019 Oct 1;25(19):5752-5758, NCT03254927), RG7116 (룸레투주맙; Meulendijks et al. 2016, Clin Cancer Res, 22: 877-85), RG7597 (둘리고투주맙; Juric et al. 2015, Clin Cancer Res, 21: 2462-70), U3-1287 (파트리투맙/AMG 888; LoRusso et al. 2013, Clin Cancer Res, 19: 3078-87), GSK2849330 (NCT01966445), ISU-104 (Kim et al. 2019, Annals of Oncology, 30; NCT03552406), REGN-1400 (Papadopoulos et al. 2014, Journal of Clinical Oncology, 32: 2516-16), MCLA-128 (제노쿠투주맙; Alsina et al. 2018 Annals of Oncology, 29; Calvo et al. AACR 107th Annual Meeting 2016; April 16-20, 2016, NCT03321981, NCT02912949), MM-111, MM-141 (Calvo et al. 2016 supra, Kundranda et al. 2020, Ann Oncol, 31: 79-87), 바를리티밉 (NCT02992340, NCT03499626) 또는 BDTX-189 (NCT04209465), 모든 참조문헌은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
용량/투여 섭생
항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물의 다중 용량이 제공될 수 있다. 다음 단락에서 "항원-결합 분자"에 대한 언급은 또한 본 개시내용에 따른 하나 이상의 다른 물품(폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물)을 포함하며, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 하나 이상 또는 각각의 용량은 다른 치료제의 동시 또는 순차적 투여에 의해 달성될 수 있다.
다중 용량은 소정의 시간 간격에 의해 분리될 수 있으며, 이는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31일, 또는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월 중 하나로 선택될 수 있다. 예를 들어, 용량은 7, 14, 21 또는 28일(플러스 또는 마이너스 3, 2, 또는 1일: 예를 들어 4, 5, 6, 8, 9 또는 10일; 11, 12, 13, 15, 16 또는 17일; 18, 19, 20, 22, 23, 또는 24일; 또는 25, 26, 27, 29, 30 또는 31일)마다 한 번 제공될 수 있다. 즉, 7일마다, 14일마다, 21일마다 또는 28일마다 한 번의 치료 이벤트가 있을 수 있다. 용량/투여 사이에는 각각 약 7일(플러스 또는 마이너스 3, 2 또는 1일), 약 14일(플러스 또는 마이너스 3, 2 또는 1일), 약 21일(플러스 또는 마이너스 3, 2 또는 1일) 또는 약 28일(플러스 또는 마이너스 3, 2 또는 1일)의 치료 휴일이 있을 수 있다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 항원-결합 분자는 매 주에 한 번(예를 들어, 매 7일 플러스 또는 마이너스 3, 2, 또는 1일 마다 한 번), 매 2주마다 한 번(예를 들어, 매 14일 플러스 또는 마이너스 3, 2, 또는 1일 마다 한 번), 매 3주마다 한 번(예를 들어, 매 21일 플러스 또는 마이너스 3, 2일 또는 1일 마다 한 번) 또는 매 4주마다 한 번(예를 들어 매 28일 플러스 또는 마이너스 3, 2 또는 1일 마다 한 번) 투여된다. 즉, 1주일마다, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 1회의 치료 이벤트/투여가 있을 수 있다.
일부 실시양태에서, 매주마다, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 항원-결합 분자의 다중 투여가 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 28일/4주마다 4회, 28일/4주마다 2회, 28일/4주마다 3회, 또는 21일/3주마다 3회 투여된다. 치료는 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 또는 그 이상 지속될 수 있다. 치료는 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30주 또는 그 이상 또는 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30주 또는 그 이상 지속될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 매주, 매 4주마다 한 번 투여된다(즉, 4주 기간당 총 4회 용량). 즉, 항원 결합 분자는 28일의 기간에 걸쳐 7일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 마다 한 번 투여될 수 있다. 이를 1회 투여 '사이클'이라고 지칭할 수 있다. 한 사이클은 28일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 또는 1개월일 수 있다. 사이클당 4회 용량이 있을 수 있다. 항원-결합 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 사이클 동안 매주 한 번 투여될 수 있다(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 또는 그 이상, 또는 28일의 기간 동안 매주 한 번, 또는 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28주, 30주 또는 그 이상 동안 매주 한 번).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 매 2주마다(예를 들어, 격주), 매 4주마다(즉, 4주 기간당 총 2회 용량) 한 번 투여된다. 즉, 항원-결합 분자는 28일의 기간에 걸쳐 매 14일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 마다 한 번 투여될 수 있다. 이를 1회 투여 '사이클'이라고 지칭할 수 있다. 한 사이클은 28일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 또는 1개월일 수 있다. 사이클당 2회 용량이 있을 수 있다. 항원-결합 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 사이클 동안 매 2주마다 한 번 투여될 수 있다(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 또는 그 이상, 또는 28일의 기간에 걸쳐 매 2주마다 한 번, 또는 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28주, 30주 또는 그 이상 동안 매 2주마다 한 번).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 매 3주마다 한 번 투여된다. 즉, 항원-결합 분자는 매 21일(플러스/마이너스 3, 2, 또는 1일) 마다 한 번 투여될 수 있다. 이를 1회 투여 '사이클'이라고 지칭할 수 있다. 한 사이클은 21일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일)일 수 있다. 사이클당 1회 용량이 있을 수 있다. 항원-결합 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 사이클 동안 매주 1회 투여될 수 있다(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 또는 그 이상, 또는 21일의 기간 마다 한 번, 또는 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30주 또는 그 이상 동안 매 3주마다 한 번).
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자는 매 4주마다 한 번 투여된다. 즉, 항원-결합 분자는 매 28일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 마다 한 번 투여될 수 있다. 이를 1회 투여 '사이클'이라고 지칭할 수 있다. 한 사이클은 28일(플러스/마이너스 3, 2 또는 1일) 또는 1개월일 수 있다. 사이클당 1회 용량이 있을 수 있다. 항원-결합 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 사이클 동안 매주 1회 투여될 수 있다(즉, 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 또는 그 이상, 또는 28일의 기간 마다 한 번, 또는 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28주 또는 그 이상 동안 매 4주마다 한 번).
일부 실시양태에서, 투여(예를 들어, 상기 일정에서, 예를 들어, 7일, 14일, 21일 또는 28일당 한 번의 투여, 및/또는 예를 들어 21일 또는 28일의 하나 이상의 기간에 걸친 총 투여(들))는 적어도 150 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 적어도 175 mg, 적어도 200 mg, 적어도 225 mg, 적어도 250 mg, 적어도 275 mg, 적어도 300 mg, 적어도 325 mg, 적어도 350 mg, 적어도 375 mg, 적어도 400 mg, 적어도 425 mg, 적어도 450 mg, 적어도 475 mg, 적어도 500 mg, 적어도 525 mg, 적어도 550 mg, 또는 적어도 575 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 적어도 600 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 3000 mg 이하의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 투여(예를 들어, 상기 일정에서, 예를 들어, 7, 14, 21 또는 28일당 1회 투여, 및/또는 예를 들어, 21일 또는 28일의 하나 이상의 기간에 걸친 총 투여(들))는 적어도 600 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 적어도 625 mg, 적어도 650 mg, 적어도 675 mg, 적어도 700 mg, 적어도 725 mg, 적어도 750 mg, 적어도 775 mg, 적어도 800 mg, 적어도 825 mg, 적어도 850 mg, 적어도 875 mg, 적어도 900 mg, 적어도 925 mg, 적어도 950 mg, 적어도 975 mg, 적어도 1000 mg, 적어도 1050 mg, 적어도 1100 mg, 적어도 1150 mg, 적어도 1200 mg, 적어도 1250 mg, 적어도 1300 mg, 적어도 1350 mg, 적어도 1400 mg, 적어도 1450 mg, 적어도 1500 mg, 적어도 1550 mg, 적어도 1600 mg, 적어도 1650 mg, 적어도 1700 mg, 적어도 1750 mg, 적어도 1800 mg, 적어도 1850 mg, 적어도 1900 mg, 적어도 1950 mg, 적어도 2000 mg, 적어도 2050 mg, 적어도 2100 mg, 적어도 2150 mg, 적어도 2200 mg, 적어도 2250 mg, 적어도 2300 mg, 적어도 2350 mg, 적어도 2400 mg, 적어도 2450 mg, 적어도 2500 mg, 적어도 2550 mg, 적어도 2600 mg, 적어도 2650 mg, 적어도 2700 mg, 적어도 2750 mg, 적어도 2800 mg, 적어도 2850 mg, 적어도 2900 mg, 또는 적어도 2950 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여(예를 들어, 상기 일정에서, 예를 들어, 7, 14, 21 또는 28일당 1회 투여)는 150-600 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 600-3000 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 900-3000 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 900-2400 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 1500-3000 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 1500-2400 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 1500-2100 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 약 1800mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여는 약 2100mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 투여는 7일 또는 14일마다(즉, 매주 한 번 또는 매 2주마다 한 번) 약 180 0mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 7일 또는 14일마다(즉, 매주 한 번 또는 매 2주마다 한 번) 약 2100 mg의 항원-결합 분자를 투여하는 것을 포함한다.
상술한 바와 같이 21일 또는 28일의 기간에 걸쳐 항원-결합 분자의 하나 이상의 투여를 포함하는 각각의 투여 사이클은 투여된 항원-결합 분자의 총량을 초래한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클(즉, 상기와 같이 21일 또는 28일의 기간에 걸쳐 항원-결합 분자의 하나 이상의 투여를 포함함)는 적어도 150 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다(즉, 1회 투여를 통해, 또는 2회 이상의 투여 후 전체적으로). 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 300 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 600 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 900mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 1500 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 1800 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 2100 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 2400 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 적어도 2700 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 150-600 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 600-3000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 900-3000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 900-2400 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 1500-3000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 1500-2400 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 1500-2100 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 3000-12000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 5400-12000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 3600-8400 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 4800-7200 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 약 4800 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 약 7200 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 약 8400 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 약 12000 mg의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 항원-결합 분자는 투여 사이클 당 투여되는 항원-결합 분자의 총량에 도달하기 위해 다중 용량(예를 들어, 일주일에 한 번)으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 2100 mg 이하의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 2400 mg 이하의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 3000 mg 이하의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이클은 5000 mg 이하의 항원-결합 분자의 투여를 포함한다.
본원에서 "투여 사이클"은 21일 또는 28일(예를 들어, 3주 또는 4주)의 기간을 지칭하기 위해 사용된다. 본원에 기재된 치료는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 투여 사이클에 걸쳐 본원에 제공된 하나 이상의 투여 스케줄에 따라 투여될 수 있다. 투여 사이클이 "x mg 항원-결합 분자의 투여를 포함하는"으로 기재되는 경우, 이는 "x mg의 항원-결합 분자가 매 21일 또는 28일마다 투여된다" 또는 "항원-결합 분자가 매 21 또는 28일마다 x mg의 용량으로 투여된다"로 대체하여 기재될 수 있다.
항원-결합 분자는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 조성물로 투여될 수 있다. 항원-결합 분자 또는 조성물의 투여는 주사 또는 주입을 포함할 수 있는 투여의 국소, 비경구, 전신, 강내, 정맥내, 동맥내, 근육내, 척수강내, 안구내, 결막내, 종양내, 피하, 피내, 척수강내, 경구 또는 경피 경로일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원-결합 분자의 투여는 정맥내 주사 또는 주입이다. 항원-결합 분자는 120분에 걸쳐 정맥내 투여될 수 있다. 항원-결합 분자는 60분에 걸쳐 정맥내 투여될 수 있다. 항원-결합 분자는 45-150분, 50-135분, 또는 60-120분에 걸쳐, 또는 이들 한계 내의 임의의 기간에 걸쳐 정맥내 투여될 수 있다.
검출 방법
본 발명은 또한 HER3, 또는 HER3를 발현하는 세포를 검출, 국소화 또는 이미징하기 위한 방법에 사용하기 위한 본 발명의 물품을 제공한다.
본원에 기재된 항원-결합 분자는 HER3에 대한 항원-결합 분자를 포함하는 방법에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 항원-결합 분자 및 HER3의 결합된 복합체의 검출을 수반할 수 있다.
이와 같이, HER3를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 샘플과 접촉하는 단계, 및 항원-결합 분자 및 HER3의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 또한, HER3를 발현하는 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 샘플과 접촉하는 단계, 및 항원-결합 분자 및 HER3를 발현하는 세포의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
적합한 방법 형식은 샌드위치 분석, 예를 들어 ELISA와 같은 면역분석을 포함하여 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 방법은 항원-결합 분자, 또는 표적(들), 또는 둘 다를 검출 가능한 모이어티, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 형광 표지, 인광 표지, 발광 표지, 면역-검출 가능 표지, 방사선 표지, 화학적, 핵산 또는 효소 표지로 표지하는 것을 포함할 수 있다. 검출 기술은 당업계의 숙련가들에게 잘 알려져 있으며, 표지화제에 상응하도록 선택될 수 있다.
이러한 종류의 방법은 질환 또는 병태, 예를 들어 암의 진단 및/또는 예후 평가를 위한 방법의 기초를 제공할 수 있다. 이러한 방법은 환자 샘플에 대해 시험관내에서, 또는 환자 샘플의 처리 후에 수행될 수 있다. 샘플이 수집되면, 시험관내 방법을 수행하기 위해 환자가 참석할 필요가 없으므로 방법은 인간 또는 동물의 신체에 시행되지 않는 방법일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체내에서 수행된다.
샘플에서의 검출은 질환/병태(예를 들어, 암)의 진단, 질환/병태에 대한 소인, 또는 질환/병태, 예를 들어 본원에 기재된 질환/병태에 대한 예후(예측)를 제공하기 위해 사용될 수 있다. 진단 또는 예후는 기존(이전에 진단된) 질환/병태와 관련이 있을 수 있다.
이러한 방법은 HER3 또는 HER3를 발현하는 세포를 예를 들어 환자 샘플에서 검출 또는 정량화하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법이 관련 인자를 정량화하는 단계를 포함하는 경우, 상기 방법은 진단 또는 예후 평가의 일부로서 결정된 양을 표준 또는 기준 값과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 진단 또는 예후의 정확성을 향상시키거나 본원에 기재된 검사를 사용하여 수득된 결과를 확인하기 위해 다른 진단/예후 검사가 본원에 기재된 것과 함께 사용될 수 있다.
샘플은 임의의 조직 또는 체액으로부터 채취될 수 있다. 샘플은 다음을 포함하거나 다음으로부터 유래될 수 있다: 피브린 응고 및 혈액 세포의 제거 후에 수득된 혈액의 유체 부분을 포함할 수 있는 개체의 혈액으로부터 유래된 일정량의 혈청; 조직 샘플 또는 생검; 흉수; 뇌척수액(CSF); 또는 상기 개체로부터 단리된 세포. 일부 실시양태에서, 샘플은 질환/병태에 의해 영향을 받는 조직 또는 조직(예를 들어, 질환의 증상이 나타나거나, 질환/병태의 발병에 관여하는 조직 또는 조직들)으로부터 수득되거나 유래될 수 있다.
본 발명은 또한 HER3-표적화된 제제로 치료할 대상체를 선택/계층화하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 본 발명에 따른 치료/예방을 위해 선택되거나, HER3 또는 HER3를 발현하는 세포의 검출/정량화에 기초하여, 예를 들어 개체로부터 수득된 샘플에서 이러한 치료/예방으로부터 이득을 얻을 수 있는 대상체로서 식별된다.
대상체
본원에 기재된 본 발명의 측면에 따른 대상체는 임의의 동물 또는 인간일 수 있다. 대상체는 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간이다. 대상체는 비-인간 포유류일 수 있으나, 보다 바람직하게는 인간이다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있다. 대상체는 환자일 수 있다. 대상체는 치료가 필요한 질환 또는 상태(예를 들어 암)로 진단받았을 수 있거나, 이러한 질환/병태가 의심될 수 있거나, 이러한 질환/병태가 발생/걸릴 위험이 있을 수 있다.
본 발명에 따른 실시양태에서, 대상체는 바람직하게는 인간 대상체이다. 일부 실시양태에서, 본원에서 본 발명의 치료적 또는 예방적 방법에 따라 치료될 대상체는 암을 가지고 있거나, 또는 암이 발병할 위험이 있는 대상체이다. 본 발명에 따른 실시양태에서, 대상체는 이러한 질환/병태의 특정 마커에 대한 특성화에 기초한 방법에 따라 치료를 위해 선택될 수 있다.
본 개시내용에 따른 대상체는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현하거나 과발현하는 암(예를 들어, 암세포)을 포함할 수 있다. 본 개시내용에 따른 대상체는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 NRG 유전자 융합을 발현하는 세포를 포함할 수 있다. 본 개시내용에 따른 대상체는 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현 또는 과발현하는 종양 세포를 포함할 수 있고/있거나 본원에 기재된 바와 같은 NRG 유전자 융합을 포함할 수 있다.
대상체는 예를 들어 (예를 들어 종양 생검에 대한 면역조직화학을 통해) 조직학적으로 확인된 진행성 또는 전이성 고형 종양을 포함할 수 있다. 종양은 기존 치료에 내성 또는 불응성이 있을 수 있거나, 기존 치료법이 존재하지 않을 수도 있다. 대상체는 HER3를 발현하는 것으로 알려지거나 시험된 암, 예를 들어 방광암(bladder cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 자궁경부암(cervical cancer), RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 위암(gastric cancer), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma, HCC), 흑색종(melanoma), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer, NSCLC), 식도암(oesophageal cancer), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및/또는 두경부의 편평세포암(squamous cell cancers of the head and neck)(예를 들어 HNSCC)을 가지고 있을 수 있다.
본 개시내용에 따른 방법은, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 대상체로부터 수득된 샘플에서 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하거나 과발현하는 암/암세포를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 본 개시내용에 따른 방법은 상기 암/암세포/발현의 검출에 기초하여 치료 대상체를 선택하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드, 및/또는 NRG 유전자 융합 중 하나 이상을 발현하거나 과발현하는 암/암세포의 존재는 대상체가 본원에 개시된 항원-결합 분자를 사용한 치료에 적합함을 나타낼 수 있다.
본 개시내용에 따른 방법은 다른 바이오마커, 예를 들어, 인산화된 HER3(pHER3), p70S6K 활성, Ki67 발현, 절단된 카스파제 3의 존재, 무세포 DNA(cfDNA) 변형 대립유전자 분획/종양 분획(예를 들어 ctDNA와 같은 종양-유래 cfDNA)를 포함하는 순환 종양 마커, 가용성 HER3, 가용성 NRG1, PI3/MAPK 경로 활성 및/또는 PI3/MAPK 경로 돌연변이를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 (예를 들어, 대상체로부터 수득된 샘플에서) pHER3, p70S6K, Ki67, 절단된 카스파제 3, ctDNA, 가용성 HER3, 가용성 NRG1, PI3/MAPK 경로 활성 및/또는 PI3/MAPK 경로 돌연변이의 발현/존재/활성은 대상체가 본원에 개시된 항원-결합 분자를 사용한 치료에 적합함을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 (예를 들어, 대상체로부터 수득된 샘플에서; 예를 들어, 대상체로부터 수득된 이전 샘플과 비교하여) pHER3, p70S6K, Ki67, 절단된 카스파제 3, ctDNA, 가용성 HER3, 가용성 NRG1, PI3/MAPK 경로 활성 및/또는 PI3/MAPK 경로 돌연변이의 감소된 발현/존재/활성은 암의 발달, 진행 또는 병리학의 감소/개선, 또는 다른 긍정적인 결과, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 결과를 나타낸다.
HER3, pHER3, 또 다른 EGFR 계열 구성원, HER3에 대한 리간드(예를 들어 NRG1), p70S6K, Ki67 및/또는 절단된 카스파제 3의 발현은 예를 들어 생검에 의해 수득된 종양 조직에 대한 표준 면역조직화학 기법을 사용하여 검출할 수 있다. 세포 중의 NRG 유전자 융합의 존재, 혈장 중의 cfDNA/ctDNA의 수준, 또는 종양 조직에서의 PI3/MAPK 경로 활성 및/또는 돌연변이는 예를 들어 차세대 시퀀싱을 사용하여 검출할 수 있다. 순환 가용성 HER3 및/또는 가용성 NRG1은 혈장/혈청 샘플에서 예를 들어 표준 ELISA 기법을 사용하여 검출할 수 있다.
난소암에서 CA-125, HE4 및 OVA1; 결장직장암에서 CEA; 췌장암 및 위암에서 CA19-9; 전립선암에서 PSA, PAP, PCA3, Oncotype DX GPS 서명 및 Prolaris 서명; 방광암에서 BTA, FGFR2 및/또는 FGFR3 유전자 돌연변이, NMP22 및 염색체 3, 7, 17 및 9p21; NSCLC에서 ALK 유전자 재배열 및 과발현, EGFR 유전자 돌연변이, NSE, PD-L1 및 ROS1 유전자 재배열; 난소암 및 유방암에서 BRCA1 및/또는 BRCA2; 예를 들어 결장직장암 및 NSCLC에서 BRAF V600(예를 들어 BRAF V600E/) 및 KRAS 돌연변이; 유방암에서 CA15-3/CA27.29, ER/PR, uPA, PAI-1 및 Mammaprint 서명; 폐암에서 사이토케라틴 단편 21-1; HCC에서 DCP, 유방암, 결장직장암, 위암 및 췌장암에서 DPD 돌연변이; 갑상선암에서 갑상선 글로불린; 및 임의의 고형 종양에서 NTRK 유전자 융합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 종양 혈청 마커(또는 마커 패널)는 대상체의 종양 유형에 적합하게, 대상체가 치료를 받기 전, 받는 동안 및 받은 후에 평가될 수 있다.
본원에 기재된 임의의 바이오마커는 예를 들어, 치료에 적합한 대상체를 선택하고/하거나 치료의 경과 또는 성공을 모니터링하기 위해 본원에 개시된 방법을 사용하여 치료 전, 치료 동안 및/또는 치료 후에 검출될 수 있다. 치료 후 바이오마커의 검출은 치료 전 해당 바이오마커의 검출과 비교될 수 있다.
키트
본원에 기재된 본 발명의 일부 측면에서, 부품 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물의 미리 결정된 양을 갖는 적어도 하나의 용기를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 예를 들어, 본 개시내용에 따른 조성물에 항원-결합 분자의 50mg/mL 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80 pH 5.8을 포함하는 조성물에 50mg/mL 항원 결합 분자를 포함한다.
50mg/mL 항원-결합 분자를 포함하는 조성물은 사용 전에 희석될 수 있다. 키트는 희석에 대한 지침을 포함할 수 있다. 키트는 조성물을 희석하는데 사용하기 위해, 예를 들어 정맥내 투여에 적합한 조성물에 도달하기 위해 0.9% 염화나트륨(NaCl)을 포함할 수 있다. 키트는 희석된 조성물이 초기 희석 시간의 48시간 이내에 환자에게 투여되어야 한다는 지침을 포함할 수 있다.
키트는 예를 들어 그대로 제공되거나, 상기와 같이 NaCl로 희석한 후 적어도 1.2 mg/mL의 농도로 항원-결합 분자를 포함하는 조성물을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 항원-결합 분자, 또는 다른 물품은 동결건조될 수 있다(즉, 용기는 동결건조된 항원-결합 분자 또는 다른 물품을 포함할 수 있다). 동결건조된 제제는, 예를 들어, 본 개시내용에 따른 조성물 완충액으로 재구성될 수 있다. 키트는 항원-결합 분자/다른 물품을 재구성하기 위한 지침을 포함할 수 있다.
용기는 임의의 적절한 용기, 예를 들어, 유리 바이알일 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물을 생산하기 위한 물질을 포함할 수 있다.
키트는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 용량/투여 섭생을 사용하여 병시된 질환/병태를 치료하고/하거나 본원에 기재된 바와 같은 질환/병태를 치료하기 위해 항원-결합 분자, 폴리펩티드, CAR, 핵산(또는 이들의 복수), 발현 벡터(또는 이들의 복수), 세포 또는 조성물을 환자에게 투여하기 위한 지침과 함께 제공할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 다른 치료제(예를 들어, 항감염제 또는 화학요법제)의 미리 결정된 양을 갖는 적어도 하나의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 키트는 또한 2개의 약제 또는 약제학적 조성물이 동시에 또는 개별적으로 투여되어 특정 질환 또는 병태에 대한 조합된 치료를 제공할 수 있도록 제2 약제 또는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 치료제는 또한 종양 또는 혈액에 주사 또는 주입하기에 적합하도록 제형화될 수 있다. 치료제는 본원에 기재된 임의의 그러한 제제, 예를 들어 세툭시맙, 엔잘루타미드 또는 다른 안드로겐 수용체 억제제, 또는 트라스투주맙일 수 있다.
서열 동일성
본원에 사용된 바와 같이, "서열 동일성"은 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 서열 사이의 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하기 위해 갭을 도입한 후, 기준 서열의 뉴클레오티드/아미노산 잔기와 동일한 대상체 서열의 뉴클레오티드/아미노산 잔기의 퍼센트를 지칭한다. 둘 이상의 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 목적의 쌍별 및 다중 서열 정렬은 당업계의 숙련가에게 알려진 다양한 방식으로, 예를 들어, ClustalOmega (Soding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960), T-coffee(Notredame et al. 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217), Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298)) 및 MAFFT (Katoh and Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772-780 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 이러한 소프트웨어를 사용할 때, 예를 들어, 갭 페널티 및 연장 페널티에 대한 기본 매개변수가 바람직하게 사용된다.
서열
번호가 매겨진 단락
하기 번호가 매겨진 단락(paras)은 본 발명과 관련하여 고려되는 특징 및 특징의 조합에 대한 추가 설명을 제공한다:
1. 세포외 영역 하위도메인 II에서 HER3에 결합할 수 있는, 임의로 단리된, 항원-결합 분자.
2. 항원-결합 분자가 HER3과 HER3의 상호작용 파트너 사이의 상호작용을 억제하는, 단락 1에 따른 항원-결합 분자.
3. 항원 결합 분자가 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성된 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 단락 1 또는 단락 2에 따른 항원-결합 분자.
4. 항원-결합 분자가 서열 번호 23 또는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 단락 1 내지 3 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
5. 항원-결합 분자가 서열 번호 21 또는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
6. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 5 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
7. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
8. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
9. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 96의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
10. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 98의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
11. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
12. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
13. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 93의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
14. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
15. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 97의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
16. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
17. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 5 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 158의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 159의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 160의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 165의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 166의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 167의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
18. 항원-결합 분자 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
19. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 128의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 129의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 130의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 136의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 137의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 138의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
20. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 144의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 145의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 146의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 151의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 152의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 153의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
21. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자:
(i) 서열 번호 24의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 74의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(ii) 서열 번호 25의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 75의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(iii) 서열 번호 26의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 76의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(iv) 서열 번호 27의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 77의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(v) 서열 번호 28의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 78의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
:또는
(vi) 서열 번호 29의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 78의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(vii) 서열 번호 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 78의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(viii) 서열 번호 31의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 79의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(ix) 서열 번호 32의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 79의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(x) 서열 번호 33의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 80의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xi) 서열 번호 34의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 81의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xii) 서열 번호 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 82의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xiii) 서열 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
:또는
(xiv) 서열 번호 37의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xv) 서열 번호 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xvi) 서열 번호 39의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xvii) 서열 번호 40의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xviii) 서열 번호 127의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xix) 서열 번호 143의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 150의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역;
또는
(xx) 서열 번호 157의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 164의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
22. 항원-결합 분자가 인간 HER3 및 마우스 HER3, 래트 HER3 및 시노몰구스 마카크 HER3 중 하나 이상에 결합할 수 있는, 단락 1 내지 21 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
23. (i) 단락 1 내지 22 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자 및 (ii) HER3 이외의 항원에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함하는, 임의로 단리된, 항원-결합 분자.
24. 항원-결합 분자가 세포 표면에서 HER3를 발현하는 세포에 결합할 수 있는, 단락 1 내지 23 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
25. 항원-결합 분자가 HER3-매개된 신호전달을 억제할 수 있는, 단락 1 내지 24 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
26. 항원-결합 분자가 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역이 (i) 위치 242에 상응하는 위치에 C, 및 위치 334에 상응하는 위치에 C, 및 (ii) 다음 중 하나 이상: 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 위치 332에 상응하는 위치에 E, 위치 330에 상응하는 위치에 L, 위치 345에 상응하는 위치에 K, 위치 430에 상응하는 위치에 G를 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 단락 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
27. Fc 영역이 위치 242에 상응하는 위치에 C, 위치 334에 상응하는 위치에 C, 위치 236에 상응하는 위치에 A, 위치 239에 상응하는 위치에 D, 위치 332에 상응하는 위치에 E, 및 위치 330에 상응하는 위치에 L을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 단락 1 내지 26 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자.
28. 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR).
29. 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자 또는 단락 28에 따른 CAR을 암호화하는, 임의로 단리된, 핵산 또는 복수의 핵산.
30. 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산을 포함하는 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터.
31. 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 또는 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터를 포함하는 세포.
32. 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산을 포함하는 세포, 또는 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터를 핵산(들) 또는 발현 벡터(들)로부터의 항원-결합 분자 또는 CAR의 발현에 적합한 조건하에서 배양하는 단계를 포함하는 방법.
33. 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 또는 단락 31에 따른 세포를 포함하는 조성물.
34. 의학적 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한, 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 31에 따른 세포, 또는 단락 33에 따른 조성물.
35. 암의 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한, 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 31에 따른 세포, 또는 단락 33에 따른 조성물.
36. 암의 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 31에 따른 세포, 또는 단락 33에 따른 조성물의 용도.
37. 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 28에 따른 CAR, 단락 29에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 30에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 31에 따른 세포, 또는 단락 33에 따른 조성물의 치료적 또는 예방적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 암을 치료 또는 예방하는 방법.
38. 상기 방법이 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제의 투여를 추가로 포함하고, 임의로 여기서 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제가 HER2 및/또는 EGFR에 의해 매개되는 신호전달의 억제제인, 단락 34 또는 단락 35에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, CAR, 핵산 또는 복수의 핵산, 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 세포 또는 조성물, 단락 36에 따른 용도 또는 단락 37에 따른 방법.
39. 암이 다음으로부터 선택되는, 단락 34 내지 단락 38 중 어느 하나에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, CAR, 핵산 또는 복수의 핵산, 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 세포 또는 조성물, 용도 또는 방법: EGFR 계열 구성원을 발현하는 세포를 포함하는 암, HER3를 발현하는 세포를 포함하는 암, 고형 종양, 유방암, 유방 암종, 유관 암종, 위암, 위 암종, 위 선암종, 결장직장암, 결장직장 암종, 결장직장 선암종, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종(SCCHN), 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐 암종, 난소암, 난소 암종, 난소 장액성 선암종, 신장암, 신세포 암종, 신장 투명 세포 암종, 신세포 선암종, 신장 유두상 세포 암종, 췌장암, 췌장 선암종, 췌관 선암종, 자궁경부암, 자궁경부 편평 세포 암종, 피부암, 흑색종, 식도암, 식도 선암종, 간암, 간세포 암종, 담관암종, 자궁암, 자궁체암 자궁내막암, 갑상선암, 갑상선 암종, 크롬친화세포종(pheochromocytoma), 부신경절종(paraganglioma), 방광암, 방광 요로상피 암종, 전립선암, 전립선 선암종, 육종 및 흉선종.
40. HER3-발현 세포를 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계를 포함하여, HER3-매개된 신호전달을 억제하는 방법.
41. HER3-발현 세포를 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계를 포함하여, HER3-발현 세포의 수 또는 활성을 감소시키는 방법.
42. HER3에 결합된 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자를 포함하는, 임의로 단리된, 시험관내 복합체.
43. HER3를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계 및 HER3과 항원-결합 분자의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
44. 시험관내에서, 대상체로부터의 샘플을 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계 및 HER3과 항원-결합 분자의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하여, HER3-표적화된 제제로 치료할 대상체를 선택 또는 계층화하는 방법.
45. 시험관내 또는 생체내 진단제 또는 예후제로서의 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자의 용도.
46. 암을 검출, 국소화 또는 이미징하기 위한 방법에서의 단락 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자의 용도로서, 임의로 여기서 암이 EGFR 계열 구성원을 발현하는 세포를 포함하는 암, HER3를 발현하는 세포를 포함하는 암, 고형 종양, 유방암, 유방 암종, 유관 암종, 위암, 위 암종, 위 선암종, 결장직장암, 결장직장 암종, 결장직장 선암종, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종(SCCHN), 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐 암종, 난소암, 난소 암종, 난소 장액성 선암종, 신장암, 신세포 암종, 신장 투명 세포 암종, 신세포 선암종, 신장 유두상 세포 암종, 췌장암, 췌장 선암종, 췌관 선암종, 자궁경부암, 자궁경부 편평 세포 암종, 피부암, 흑색종, 식도암, 식도 선암종, 간암, 간세포 암종, 담관암종, 자궁암, 자궁체암 자궁내막암, 갑상선암, 갑상선 암종, 크롬친화세포종(pheochromocytoma), 부신경절종(paraganglioma), 방광암, 방광 요로상피 암종, 전립선암, 전립선 선암종, 육종 및 흉선종으로부터 선택되는 용도.
47. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, HER3에 결합할 수 있는, 임의로 단리된, 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
48. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 47에 따른 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3.
49. 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 단락 47 또는 단락 48에 따른 항원-결합 분자:
서열 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역.
50. (i) 단락 47 내지 49 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자 및 (ii) HER3 이외의 항원에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함하는, 임의로 단리된, 항원-결합 분자.
51. 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR).
52. 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자 또는 단락 51에 따른 CAR을 암호화하는, 임의로 단리된, 핵산 또는 복수의 핵산.
53. 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산을 포함하는 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터.
54. 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 또는 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터를 포함하는 세포.
55. 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산을 포함하는 세포, 또는 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터를 핵산(들) 또는 발현 벡터(들)로부터의 항원-결합 분자 또는 CAR의 발현에 적합한 조건하에서 배양하는 단계를 포함하는 방법.
56. 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 또는 단락 54에 따른 세포를 포함하는 조성물.
57. 의학적 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한, 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 54에 따른 세포, 또는 단락 56에 따른 조성물.
58. 암의 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한, 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 54에 따른 세포, 또는 단락 56에 따른 조성물.
59. 암의 치료 또는 예방의 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 54에 따른 세포, 또는 단락 56에 따른 조성물의 용도.
60. 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자, 단락 51에 따른 CAR, 단락 52에 따른 핵산 또는 복수의 핵산, 단락 53에 따른 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 단락 54에 따른 세포, 또는 단락 56에 따른 조성물의 치료적 또는 P방적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 암을 치료 또는 예방하는 방법.
61. 상기 방법이 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제의 투여를 추가로 포함하고, 임의로 여기서 EGFR 계열 구성원에 의해 매개되는 신호전달의 억제제가 HER2 및/또는 EGFR에 의해 매개되는 신호전달의 억제제인, 단락 57 또는 단락 58에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, CAR, 핵산 또는 복수의 핵산, 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 세포 또는 조성물, 단락 59에 따른 용도 또는 단락 60에 따른 방법.
62. 암이 다음으로부터 선택되는, 단락 57 내지 단락 61 중 어느 하나에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, CAR, 핵산 또는 복수의 핵산, 발현 벡터 또는 복수의 발현 벡터, 세포 또는 조성물, 용도 또는 방법: EGFR 계열 구성원을 발현하는 세포를 포함하는 암, HER3를 발현하는 세포를 포함하는 암, 고형 종양, 유방암, 유방 암종, 유관 암종, 위암, 위 암종, 위 선암종, 결장직장암, 결장직장 암종, 결장직장 선암종, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종(SCCHN), 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐 암종, 난소암, 난소 암종, 난소 장액성 선암종, 신장암, 신세포 암종, 신장 투명 세포 암종, 신세포 선암종, 신장 유두상 세포 암종, 췌장암, 췌장 선암종, 췌관 선암종, 자궁경부암, 자궁경부 편평 세포 암종, 피부암, 흑색종, 식도암, 식도 선암종, 간암, 간세포 암종, 담관암종, 자궁암, 자궁체암 자궁내막암, 갑상선암, 갑상선 암종, 크롬친화세포종(pheochromocytoma), 부신경절종(paraganglioma), 방광암, 방광 요로상피 암종, 전립선암, 전립선 선암종, 육종 및 흉선종.
63. HER3-발현 세포를 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계를 포함하여, HER3-매개된 신호전달을 억제하는 방법.
64. HER3-발현 세포를 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계를 포함하여, HER3-발현 세포의 수 또는 활성을 감소시키는 방법.
65. HER3에 결합된 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자를 포함하는, 임의로 단리된, 시험관내 복합체.
66. HER3를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계 및 HER3과 항원-결합 분자의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
67. 시험관내에서, 대상체로부터의 샘플을 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자와 접촉시키는 단계 및 HER3과 항원-결합 분자의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하여, HER3-표적화된 제제로 치료할 대상체를 선택 또는 계층화하는 방법.
68. 시험관내 또는 생체내 진단제 또는 예후제로서의 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자의 용도.
69. 암을 검출, 국소화 또는 이미징하기 위한 방법에서의 단락 47 내지 50 중 어느 하나에 따른 항원-결합 분자의 용도로서, 임의로 여기서 암이 EGFR 계열 구성원을 발현하는 세포를 포함하는 암, HER3를 발현하는 세포를 포함하는 암, 고형 종양, 유방암, 유방 암종, 유관 암종, 위암, 위 암종, 위 선암종, 결장직장암, 결장직장 암종, 결장직장 선암종, 두경부암, 두경부의 편평 세포 암종(SCCHN), 폐암, 폐 선암종, 편평 세포 폐 암종, 난소암, 난소 암종, 난소 장액성 선암종, 신장암, 신세포 암종, 신장 투명 세포 암종, 신세포 선암종, 신장 유두상 세포 암종, 췌장암, 췌장 선암종, 췌관 선암종, 자궁경부암, 자궁경부 편평 세포 암종, 피부암, 흑색종, 식도암, 식도 선암종, 간암, 간세포 암종, 담관암종, 자궁암, 자궁체암 자궁내막암, 갑상선암, 갑상선 암종, 크롬친화세포종(pheochromocytoma), 부신경절종(paraganglioma), 방광암, 방광 요로상피 암종, 전립선암, 전립선 선암종, 육종 및 흉선종으로부터 선택되는 용도.
***
본 발명은 이러한 조합이 명백히 허용되지 않거나 명백하게 회피되는 경우를 제외하고, 기재된 측면 및 바람직한 특징의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 조직적 목적으로만 사용되며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 발명의 측면 및 실시양태는 이하에서 예를 들어 첨부된 도면들을 참조하여 예시될 것이다. 추가의 측면 및 실시양태는 당업계의 숙련가들에게 명백할 것이다. 이 텍스트에 언급된 모든 문서는 본원에 참고로 포함된다.
문맥상 달리 요구되지 않는 한, 뒤따르는 청구항을 포함하여, 본 명세서 전반에 걸쳐, 단어 "포함하다(comprise)", 및 "포함하다(comprises)" 및 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹을 포함하는 것을 의미하지만, 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹을 배제하는 것은 의미하지 않는 것으로 이해될 것이다.
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수형 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다는 것을 주지해야 한다. 범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 값으로부터 및/또는 "약" 다른 특정 값까지로서 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현될 때, 다른 실시양태는 하나의 특정 값으로부터 및/또는 다른 특정 값까지를 포함한다. 유사하게, 값들이 근사치로서 표현될 때, 선행 "약"의 사용에 의해, 특정 값이 또 다른 실시양태를 형성하는 것으로 이해될 것이다.
핵산 서열이 본원에 개시되는 경우, 이의 역 보체가 또한 명백히 고려된다.
본원에 기재된 방법은 바람직하게는 시험관내에서 수행될 수 있다. 용어 "시험관내"는 배양 중인 세포로 수행되는 절차를 포함하는 것으로 의도되는 반면 "생체내"라는 용어는 온전한 다세포 유기체를 사용한/상에서의 절차를 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명의 원리를 예시하는 실시양태 및 실험은 이하에서 첨부된 도면을 참조하여 논의될 것이다.
도 1a 및 1b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (1a, 1b) 항-HER3 항체 클론 10D1 및 (1b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 2a 및 2b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (2a, 2b) 항-HER3 항체 클론 4-35-B2 및 (2b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 3a 및 3b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (3a, 3b) 항-HER3 항체 클론 4-35-B4 및 (3b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 4. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 항-HER3 항체 클론 10A6에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 5a 및 5b. (5a) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3 및 (5b) 인간 EGFR 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 6a 및 6b. (6a) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3 및 (6b) 인간 EGFR 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B2의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 7a 및 7b. (7a) 인간 HER3, 인간 EGFR 및 인간 HER2, 및 (7b) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B4의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 8. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 9. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B2의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램.
도 10. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B4의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램.
도 11. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1의 안정성의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 12. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 재조합 발현된 항-HER3 항체 클론 10D1의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 13. SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1 발현의 분석 결과를 보여주는 이미지. 레인: M1 = TaKaRa 단백질 마커 Cat. No. 3452; M2 = GenScript 단백질 마커 Cat. No. M00521; 1 = 환원 조건; 2 = 비환원 조건; P = 양성 대조군: 인간 IgG1, 카파(Sigma Cat. No. I5154). 웨스턴 블롯의 경우, 사용된 1차 항체는 염소 항인간 IgG-HRP(GenScript Cat No. A00166) 및 염소 항인간 카파-HRP(SouterhnBiotech Cat No. 2060-05)였다.
도 14a 및 14b. HER3에 결합하기 위한 상이한 항-HER3 항체 클론 간의 경쟁 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램 및 표.
도 15. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 HER3과 HER2 사이의 상호작용의 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 16a 및 16b. 상이한 암 세포주에 의한 EGFR 단백질 계열 구성원 및 이들의 리간드의 유전자 및 단백질 발현을 보여주는 표 및 히스토그램.
도 17. 포스포-웨스턴 블롯에 의한 N87 및 FaDu 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지. UN = 비처리; T = 항-HER3 항체 클론 10D1로 처리.
도 18. 인단백질 항체 어레이 분석 키트를 사용한 FaDu 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지 및 그래프. 비처리 = 비처리 FaDu 세포; 처리 = 항-HER3 항체 클론 10D1로 처리된 FaDu 세포.
도 19a 및 19b. 항-HER3 항체 클론 10D1의 존재하에서 배양 후 CCK8 분석에 의해 결정된 바와 같은 표시된 세포주에 대한, 비처리 대조군 조건(100%)에 비한 세포의 융합도 퍼센트를 보여주는 그래프. (19a)는 N87 세포에 대해 수득된 결과를 나타내고, (19b)는 FaDu 세포에 대해 수득된 결과를 나타낸다.
도 20. N87 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 10회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 21. N87 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 4-35-B2를 총 4회 용량에 대해 용량당 11mg/kg으로 매주 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 양의 이소타입 대조 항체(이소타입)를 제공받았다.
도 22. SNU16 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 9회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 23. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 매주 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클) 또는 동일한 용량의 이소타입 대조 항체(이소타입)를 제공받았다.
도 24. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 8회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 25. 난소 암종의 OvCAR8 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 9회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 26. 편평 폐세포 암종의 HCC-95 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 27. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 10회 용량에 대해 용량당 500μg로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 28. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 4-35-B2를 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 29. 신세포 암종의 ACHN 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 7회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 30. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c89에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 31. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c90에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 32. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c91에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 33a 및 도 33b. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. (33a)는 항-HER3 항체 클론 10D1(10D1P로 지칭됨), 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78, 10D1_11B(v11b78L로 지칭됨), 10D1_c85, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c93, LJM716 및 hIgG(음성 대조군)의 결합을 보여준다. (33b)는 33a와 동일한 데이터를 보여주지만, 클론 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91 및 LJM716에 대해서만 보여준다.
도 34a 및 도 34b. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 재조합-발현된 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 분석 결과를 보여주는 그래프. (34a)는 항-HER3 항체 클론 10D1_c93, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78, 10D1_11B(C78 v11b로 지칭됨), 10D1_c85, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91 및 10D1_c93에 대한 결과를 보여준다. (34b)는 33a와 동일한 데이터를 보여주지만, 클론 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91에 대해서만 보여준다.
도 35a 내지 도 35c. 시차 주사 형광측정법 분석에 의한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프. (35a)는 항-HER3 항체 클론 LJM716(엘겜투맙으로 지칭됨), 10D1(10D1(parental)로 지칭됨), 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77 및 10D1_c78에 대한 결과를 보여준다. (35b)는 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_11B(c78_V11B로 지칭됨), 10D1_c85 및 10D1_c85o1에 대한 결과를 보여준다. (35c)는 10D1_c90, 10D1_c91 및 10D1_c93에 대한 결과를 보여준다.
도 36a 내지 도 36m. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다. (36a)는 클론 10D1_c89에 대한 결과를 보여주고, (36b)는 클론 10D1_c90에 대한 결과를 보여주고, (36c)는 클론 10D1_c91에 대한 결과를 보여주고, (36d)는 클론 10D1_c11B에 대한 결과를 보여주고, (36e)는 클론 10D1_c85o2에 대한 결과를 보여주고, (36f)는 클론 10D1_c87에 대한 결과를 보여주고, (36g)는 클론 10D1_c93에 대한 결과를 보여주고, (36h)는 클론 10D1_c76에 대한 결과를 보여주고, (36i)은 클론 10D1_c77에 대한 결과를 보여주고, (36j)는 클론 10D1_c78에 대한 결과를 보여주고, (36k)는 클론 10D1_c75에 대한 결과를 보여주고, (36l)은 클론 10D1_c85에 대한 결과를 보여주고, (36m)은 클론 10D1_c85o1에 대한 결과를 보여준다.
도 37. 안전성 및 발달가능성과 관련된 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 특성을 요약한 표.
도 38a 및 도 38b. CH2 영역에 GASDALIE 및 LCKC 치환을 포함하는 Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1의 생물층 간섭측정(38a) 및 열안정성(38b) 분석. (38a) BLI는 Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 FcγRIIIa에 대한 결합의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램을 나타낸다. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 39a 및 도 39b. CH2 영역에 GASD 치환을 포함하는 (39a) 비-Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1 및 (39b) Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 FcγRIIIa에 대한 결합의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 40. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1 GASD 변이체의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 41a 및 도 41b. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB (GASDALIE-LCKC 변이체)의 마우스 및 인간 Fc 수용체에 대한 결합 친화도를 침묵 변이체 N297Q, 이소형 변이체 및 상업적으로 이용 가능한 항체와 비교하여 보여주는 표. ND = KD가 낮은 결합 친화도로 인해 결정되지 않음.
도 42a 및 도 42b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (42a) 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 (42b) 항-HER3 항체 클론 10D1 및 LJM-716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 43. 인간 EGFR(HER1) 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 44. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 및 항-HER4 항체에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA, 항-HER3 항체 LJM-716 및 MM-121, 및 상업적 항-HER4 항체에 의한 HEK293 HER4 과발현 세포의 염색을 보여준다.
도 45. 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 46a 및 도 46b. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 (46a) 10D1F.FcA 및 (46b) 10D1F.FcB의 결합 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 47a 및 도 47b. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 (47a) 10D1F.FcA 및 (47b) 10D1F.FcB의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 48a 및 도 48b. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 항-HER3 항체 클론 (48a) 10D1F.FcA 및 (48b) 10D1F.FcB의 순도 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 49a 및 도 49b. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA와 항-HER3 항체 M-05-74 및 M-08-11 간의 HER3 결합에 대한 경쟁 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램 및 표.
도 50. 마우스에서 항-HER3 항체 클론 10D1의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 51a 내지 도 51f. 마우스에서 혈구 세포 수(51a), 전해질 지표(51b) 및 간독성, 신독성 및 췌장 독성 지표(51c-51f)에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과를 보여주는 그래프. 왼쪽 막대는 비히클 대조군을 나타내고, 오른쪽 막대는 10D1 처리를 나타낸다. 점선은 Charles River 기준 범위의 종점을 나타낸다. 간독성, 신독성 및 췌장 독성 지표는 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST), 혈중 요소 질소(BUN), 크레아티닌(CREA), 알칼리성 포스파타제(ALP), 글루코스(GLU), 칼슘(CAL), 총 빌리루빈(BIL), 총 단백질(TPR) 및 알부민(ALB)을 포함한다.
도 52. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 항체 MM-121, LJM-716 및 Roche M05에 의한 HER2와 HER3 간의 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 53. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 항체 MM-121 및 LJM716에 의한 EGFR과 HER3 간의 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 54. 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA(10D1F.A), 10D1F.FcB(10D1F.B), 10D1F-hIgG1(N297Q) 및 항-HER3 항체 LJM-716 및 세리반투맙(MM-121)의 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. EC50 값이 표시된다.
도 55a 내지 도 55c. 포스포-웨스턴 블롯에 의한 (55a) N87, (55b) FaDu 및 (55c) OvCar8 세포에서 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 치료 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 56a 및 도 56b. 마우스에서 항-HER3 항체 클론 (56a) 10D1F.FcA 및 (56b) 10D1F.FcB의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. 매개변수: 최대 농도(Cmax), Tmax, AUC(0-336hr), AUC(0-무한대), 반감기(t1/2), 청소율(clearance, CL), 정상 상태에서의 분포 용적(Vss).
도 57a 내지 도 57d. 래트에서 (57a) 10mg/kg, (57b) 25mg/kg, (57c) 100mg/kg 및 (57d) 250mg/kg의 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. 매개변수: 최대 농도(Cmax), Tmax, AUC(0-336hr), AUC(0-무한대), 반감기(t1/2), 청소율(CL), 정상 상태에서의 분포 용적(Vss).
도 58a 내지 도 58f. (58a, 58b) 적혈구 지표, (58c) 백혈구 지표, (58d) 간독성, (58e) 신장 및 췌장 지표, 및 (58f) 전해질 지표에 대한 200ug(∼10mg/kg), 500ug(∼25mg/kg), 2mg(∼100mg/kg) 또는 5mg(∼250mg/kg)의 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB의 치료 효과를 보여주는 그래프.
도 59a 내지 도 59d. (59a & 59b) 항-HER3 항체 세리반투맙 및 LJM-716 및 (59c & 59d) EGFR 계열 치료제 세툭시맙, 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 비교하여, N87 세포(위암), HCC95 세포(폐암), FaDu 세포(두경부암), SNU-16 세포(위암), A549 세포(폐암), OvCar8 세포(난소암), ACHN 세포(신장암) 및 HT29 세포(결장직장암)를 사용한 시험관내 마우스 암 모델에서 종양 억제율에 대한 치료 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 효과를 보여주는 그래프.
도 60. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 격주 치료 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6, 비히클 대조군 n=8). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 61. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 매주 치료 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 62. 난소 암종의 OvCAR8 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 매주 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 63a 내지 도 63d. 시험관내 인산화 분석에서 10D1F.FcA, LJM-716 또는 세리반투맙으로 처리된 암세포주에 대한 유전자 세트 농축 분석에 의한 경로 활성화의 분석 결과를 보여주는 상자 그림. 63a는 N87 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63b는 A549 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63c는 OvCar8 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63d는 FaDu 세포로부터 수득된 결과를 보여준다.
도 64. 표시된 시점에서 포스포-웨스턴 블롯에 의한 A549 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 치료 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 65. PathHunter 퍼투주맙 생물검정에 의해 결정된 바와 같은 10D1F.FcA 또는 퍼투주맙에 의한 HER2:HER3 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프. IC50 (M) 값이 표시된다.
도 66a 내지 도 66c. (66a) BCPAP, (66b) BHT101 및 (66c) SW1736 세포에 의한 EGFR, HER2 및 HER3의 발현의 분석 결과를 보여주는 히스토그램. 1 = 염색되지 않은 세포, 2 = 이소타입 대조군, 3 = 세툭시맙, 4 = 트라스투주맙, 5 = 10D1F.FcA.
도 67a 내지 도 67c. 시험관내 BRAFV600E 돌연변이 갑상선암 세포주의 증식을 억제하는 상이한 항-ErbB 항체의 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프. 67a는 BHT101 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68b는 BCPAP 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 67c는 SW1736 세포에 대해 수득된 결과를 보여준다.
도 68a 내지 도 68c. 10D1F.FcA 단독으로 또는 베무라페닙과 조합하여 시험관내 BRAFV600E 돌연변이 갑상선암 세포주의 증식을 억제하는 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프. 68a는 BHT101 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68b는 SW1736 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68c는 BCPAP 세포에 대해 수득된 결과를 보여준다.
도 69a 내지 도 69c. 10 mg/kg, 25 mg/kg, 100 mg/kg 또는 250 mg/kg의 10D1F.FcA 또는 동일 용적의 PBS를 투여한 후 BALB/c 마우스의 대표적인 혈액학적 프로파일을 보여주는 표. 69a는 적혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 69b는 백혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 69c는 간, 신장 및 췌장 기능 및 전해질 수준의 상관관계를 분석한 결과를 보여준다. RBC = 적혈구, MVC = 평균 혈구 용적, MCH = 평균 혈구 혈색소, MCHC = 평균 혈구 혈색소 농도, WBC = 백혈구, ALB = 알부민, ALT = 알라닌 아미노트랜스퍼라제, ALP = 알칼리성 포스파타제, CREA = 크레아티닌, BUN = 혈중 요소 질소, GLU = 글루카곤, AMY = 아밀라제, NA = 나트륨, K = 칼륨, P = 인, 및 CA = 칼슘.
도 70a 내지 70c. 250 mg/kg 10D1F.FcA 또는 동일 용적의 PBS를 투여한 후 표시된 시점에서 SD 래트의 대표적인 혈액학적 프로필을 보여주는 표. 70a는 적혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 70b는 백혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 70c는 간, 신장 및 췌장 기능 및 전해질 수준의 상관관계를 분석한 결과를 보여준다. RBC = 적혈구, MVC = 평균 혈구 용적, MCH = 평균 혈구 혈색소, MCHC = 평균 혈구 혈색소 농도, WBC = 백혈구, ALB = 알부민, ALT = 알라닌 아미노트랜스퍼라제, ALP = 알칼리성 포스파타제, CREA = 크레아티닌, BUN = 혈중 요소 질소, GLU = 글루카곤, AMY = 아밀라제, NA = 나트륨, K = 칼륨, P = 인, 및 CA = 칼슘.
도 71. 포스포-웨스턴 블롯에 의해 결정된 바와 같은 FaDu 또는 OvCar8 세포 유래 종양의 세포에서 생체내 HER3-매개된 신호전달에 대한 10D1F.FcA 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 72. 표시된 세포주에 의한 상이한 항-ErbB 항체의 내재화 분석 결과를 보여주는 상자 블롯.
도 73a 및 도 73b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 상이한 시점에서의 표시된 세포주에 의한 10D1F.FcA 또는 트라스투주맙의 내재화 분석 결과를 보여주는 히스토그램 및 표. 73b는 73a에 도시된 히스토그램으로부터 결정된 PE-양성 세포의 중간 형광 강도 및 백분율을 보여준다.
도 74. 6주 동안 표시된 농도의 표시된 항-ErbB 항체로 격주 처리한 후 위암의 N87 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 75a 및 도 75b. 10D1F.FcA를 사용한 악성 및 정상 인간 조직의 면역조직화학적 염색을 보여주는 이미지. 75a 및 75b는 상이한 조직의 염색을 보여준다.
도 76. 표시된 배율에서 10D1F 또는 토끼 다클론 항-HER3 항체에 의한 A549 종양 이종이식 크리오섹션의 면역조직화학적 염색을 보여주는 이미지. 2차-단독 대조군 염색이 표시된다.
도 77a 및 도 77b. 25 mg/kg으로 마우스에 IP 투여 후 항체가 Cmax에 도달하는 혈청 농도에서 표시된 암 세포주의 시험관내 증식을 억제하는 표시된 항-ErbB 항체의 능력의 분석 결과를 보여주는 막대 차트. 77a 및 77b는 상이한 세포주를 사용하여 수득된 결과를 보여준다.
도 78a 내지 도 78f. 인간 NRG1의 부재하에서 (78a, 78c, 78e) 및 인간 NRG1의 존재하에서 (78b, 78d, 78f) 항-HER3 항체 10D1F.A (78a, 78b), MM-121 (78c, 78d) 및 LJM-716 (78e, 78f)에 의한 인간 HER3에 대한 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 79. CLU - NRG1 융합을 포함하는 난소암의 환자-유래 이종이식 모델에서 25 mg/kg의 10D1F 또는 이소타입-일치 대조 항체(치료 그룹 당 n=10)로 격주로 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 80a 내지 도 80e. 40℃에서 1개월 저장 후 상이한 액체 제형에서 항체의 안정성을 보여주는 그래프: (80a) 단백질 농도, (80b) pH, (80c) HPLC-SEC에 의한 응집 형성, (80d) 전하 변이체 변화, (80e) 항원 결합 능력.
도 81a 및 도 81b. 상이한 액체 제형에서 고농도 항체의 안정성을 보여주는 표 및 그래프: (81a) 눈에 보이는 응집체 또는 입자에 대한 육안 검사, (81b) HPLC-SEC에 의한 가용성 응집 형성.
도 82. 상이한 액체 제형에서 항체의 동결-해동 안정성을 보여주는 그래프.
도 83a 내지 도 83d. (83a) 동결/해동, (83b) 주사기 및 바늘 흡인, (83c) 교반, (83d) 모든 시험에 의한 스트레스 시험 후 CE-SDS에 의한 항체 제형의 상대적 순도를 보여주는 그래프 및 표. "환원"은 경쇄, 비당화 중쇄 및 중쇄의 조합된 상대량을 지칭한다. "비환원"은 온전한 IgG의 상대량을 지칭한다.
도 84a 내지 도 84e. 12주에 걸쳐 IgG 항체 제형 1, 4 및 5의 (84a) 단량체 순도, (84b) 응집 및 (84c) 단편을 보여주는 그래프. (84d) +5℃ 및 (84e) +25℃에서 29주까지 IgG 항체 제형 1, 4 및 5의 단량체 순도의 외삽을 보여주는 그래프(~95% 단량체 IgG 순도).
도 85a 내지 85c. IE-HPLC로 측정한, 12주에 걸쳐 +5℃ 및 +25℃에서 배양된 제형 1, 4 및 5에 대한 (85a) 주, (85b) 산성 및 (85c) 염기성 이소형의 상대량을 보여주는 그래프.
도 86a 및 도 86b. 12주에 걸쳐 +5℃ 및 +25℃에서 제형 1, 4 및 5의 (86a) 비환원 및 (86b) 환원 샘플에 대한 CD-SDS 데이터를 보여주는 그래프.
도 87a 및 도 87b. (87a) 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정된 바와 같은, 8회 동결-해동 사이클 후 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스(240mM), 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.8에서 항원 결합 분자의 단량체 순도를 보여주는 그래프. (87b) SEC에 의해 측정된 바와 같은, 200mg/mL에서 제형화된 항원-결합 분자의 응집의 부재를 보여주는 그래프.
도 88a 및 도 88b. (88a) -65℃에서 저장된 원료의약품 및 (88b) -20℃에서 저장된 의약품에 대한 안정성 결과를 보여주는 표.
도 89a 내지 도 89d. 25mg/kg의 표시된 항체로 처리한 후 NCr 누드 마우스의 (89a) N87, (89b) A549, (89c) FaDu 및 (89d) OvCAR8 세포주 유래 이종이식 모델에서 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 90. A549 모델에서 2, 5 및 10 mg/kg HMBD-001에 대한 용량 반응을 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 1a 및 1b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (1a, 1b) 항-HER3 항체 클론 10D1 및 (1b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 2a 및 2b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (2a, 2b) 항-HER3 항체 클론 4-35-B2 및 (2b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 3a 및 3b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (3a, 3b) 항-HER3 항체 클론 4-35-B4 및 (3b) 항-HER3 항체 클론 LJM716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 4. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포의 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 항-HER3 항체 클론 10A6에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 5a 및 5b. (5a) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3 및 (5b) 인간 EGFR 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 6a 및 6b. (6a) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3 및 (6b) 인간 EGFR 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B2의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 7a 및 7b. (7a) 인간 HER3, 인간 EGFR 및 인간 HER2, 및 (7b) 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B4의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 8. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 9. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B2의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램.
도 10. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 4-35-B4의 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램.
도 11. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1의 안정성의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 12. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 재조합 발현된 항-HER3 항체 클론 10D1의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 13. SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1 발현의 분석 결과를 보여주는 이미지. 레인: M1 = TaKaRa 단백질 마커 Cat. No. 3452; M2 = GenScript 단백질 마커 Cat. No. M00521; 1 = 환원 조건; 2 = 비환원 조건; P = 양성 대조군: 인간 IgG1, 카파(Sigma Cat. No. I5154). 웨스턴 블롯의 경우, 사용된 1차 항체는 염소 항인간 IgG-HRP(GenScript Cat No. A00166) 및 염소 항인간 카파-HRP(SouterhnBiotech Cat No. 2060-05)였다.
도 14a 및 14b. HER3에 결합하기 위한 상이한 항-HER3 항체 클론 간의 경쟁 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램 및 표.
도 15. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 HER3과 HER2 사이의 상호작용의 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 16a 및 16b. 상이한 암 세포주에 의한 EGFR 단백질 계열 구성원 및 이들의 리간드의 유전자 및 단백질 발현을 보여주는 표 및 히스토그램.
도 17. 포스포-웨스턴 블롯에 의한 N87 및 FaDu 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지. UN = 비처리; T = 항-HER3 항체 클론 10D1로 처리.
도 18. 인단백질 항체 어레이 분석 키트를 사용한 FaDu 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지 및 그래프. 비처리 = 비처리 FaDu 세포; 처리 = 항-HER3 항체 클론 10D1로 처리된 FaDu 세포.
도 19a 및 19b. 항-HER3 항체 클론 10D1의 존재하에서 배양 후 CCK8 분석에 의해 결정된 바와 같은 표시된 세포주에 대한, 비처리 대조군 조건(100%)에 비한 세포의 융합도 퍼센트를 보여주는 그래프. (19a)는 N87 세포에 대해 수득된 결과를 나타내고, (19b)는 FaDu 세포에 대해 수득된 결과를 나타낸다.
도 20. N87 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 10회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 21. N87 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 4-35-B2를 총 4회 용량에 대해 용량당 11mg/kg으로 매주 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 양의 이소타입 대조 항체(이소타입)를 제공받았다.
도 22. SNU16 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 9회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 23. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 매주 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클) 또는 동일한 용량의 이소타입 대조 항체(이소타입)를 제공받았다.
도 24. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 8회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 25. 난소 암종의 OvCAR8 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 9회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 26. 편평 폐세포 암종의 HCC-95 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 27. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 10회 용량에 대해 용량당 500μg로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 28. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 4-35-B2를 총 4회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 29. 신세포 암종의 ACHN 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항-HER3 항체 클론 10D1을 총 7회 용량에 대해 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다. 대조 처리군은 동일한 용적의 PBS(비히클)를 제공받았다.
도 30. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c89에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 31. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c90에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 32. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1_c91에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 33a 및 도 33b. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. (33a)는 항-HER3 항체 클론 10D1(10D1P로 지칭됨), 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78, 10D1_11B(v11b78L로 지칭됨), 10D1_c85, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c93, LJM716 및 hIgG(음성 대조군)의 결합을 보여준다. (33b)는 33a와 동일한 데이터를 보여주지만, 클론 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91 및 LJM716에 대해서만 보여준다.
도 34a 및 도 34b. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 재조합-발현된 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 분석 결과를 보여주는 그래프. (34a)는 항-HER3 항체 클론 10D1_c93, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78, 10D1_11B(C78 v11b로 지칭됨), 10D1_c85, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91 및 10D1_c93에 대한 결과를 보여준다. (34b)는 33a와 동일한 데이터를 보여주지만, 클론 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91에 대해서만 보여준다.
도 35a 내지 도 35c. 시차 주사 형광측정법 분석에 의한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프. (35a)는 항-HER3 항체 클론 LJM716(엘겜투맙으로 지칭됨), 10D1(10D1(parental)로 지칭됨), 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77 및 10D1_c78에 대한 결과를 보여준다. (35b)는 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_11B(c78_V11B로 지칭됨), 10D1_c85 및 10D1_c85o1에 대한 결과를 보여준다. (35c)는 10D1_c90, 10D1_c91 및 10D1_c93에 대한 결과를 보여준다.
도 36a 내지 도 36m. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다. (36a)는 클론 10D1_c89에 대한 결과를 보여주고, (36b)는 클론 10D1_c90에 대한 결과를 보여주고, (36c)는 클론 10D1_c91에 대한 결과를 보여주고, (36d)는 클론 10D1_c11B에 대한 결과를 보여주고, (36e)는 클론 10D1_c85o2에 대한 결과를 보여주고, (36f)는 클론 10D1_c87에 대한 결과를 보여주고, (36g)는 클론 10D1_c93에 대한 결과를 보여주고, (36h)는 클론 10D1_c76에 대한 결과를 보여주고, (36i)은 클론 10D1_c77에 대한 결과를 보여주고, (36j)는 클론 10D1_c78에 대한 결과를 보여주고, (36k)는 클론 10D1_c75에 대한 결과를 보여주고, (36l)은 클론 10D1_c85에 대한 결과를 보여주고, (36m)은 클론 10D1_c85o1에 대한 결과를 보여준다.
도 37. 안전성 및 발달가능성과 관련된 항-HER3 항체 10D1 변이체 클론의 특성을 요약한 표.
도 38a 및 도 38b. CH2 영역에 GASDALIE 및 LCKC 치환을 포함하는 Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1의 생물층 간섭측정(38a) 및 열안정성(38b) 분석. (38a) BLI는 Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 FcγRIIIa에 대한 결합의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램을 나타낸다. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 39a 및 도 39b. CH2 영역에 GASD 치환을 포함하는 (39a) 비-Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1 및 (39b) Fc-변형된 항-HER3 항체 클론 10D1에 의한 FcγRIIIa에 대한 결합의 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 40. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 10D1 GASD 변이체의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 41a 및 도 41b. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB (GASDALIE-LCKC 변이체)의 마우스 및 인간 Fc 수용체에 대한 결합 친화도를 침묵 변이체 N297Q, 이소형 변이체 및 상업적으로 이용 가능한 항체와 비교하여 보여주는 표. ND = KD가 낮은 결합 친화도로 인해 결정되지 않음.
도 42a 및 도 42b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 (42a) 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 (42b) 항-HER3 항체 클론 10D1 및 LJM-716에 의한 HEK293 세포(HER3를 발현하지 않음) 또는 HEK293 HER3 과발현 세포(HEK293 HER3 O/E)의 염색을 보여준다.
도 43. 인간 EGFR(HER1) 및 인간 HER2에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 44. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 및 항-HER4 항체에 의한 세포 염색을 보여주는 히스토그램. 히스토그램은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA, 항-HER3 항체 LJM-716 및 MM-121, 및 상업적 항-HER4 항체에 의한 HEK293 HER4 과발현 세포의 염색을 보여준다.
도 45. 인간, 마우스, 래트 및 시노몰구스 마카크 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 결합의 ELISA 분석 결과를 보여주는 그래프. EC50 값이 표시된다.
도 46a 및 도 46b. 인간 HER3에 대한 항-HER3 항체 클론 (46a) 10D1F.FcA 및 (46b) 10D1F.FcB의 결합 친화도 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 47a 및 도 47b. 시차 주사 형광측정 분석에 의한 항-HER3 항체 클론 (47a) 10D1F.FcA 및 (47b) 10D1F.FcB의 안정성 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 48a 및 도 48b. 크기 배제 크로마토그래피에 의한 항-HER3 항체 클론 (48a) 10D1F.FcA 및 (48b) 10D1F.FcB의 순도 분석 결과를 보여주는 그래프.
도 49a 및 도 49b. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA와 항-HER3 항체 M-05-74 및 M-08-11 간의 HER3 결합에 대한 경쟁 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램 및 표.
도 50. 마우스에서 항-HER3 항체 클론 10D1의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 51a 내지 도 51f. 마우스에서 혈구 세포 수(51a), 전해질 지표(51b) 및 간독성, 신독성 및 췌장 독성 지표(51c-51f)에 대한 항-HER3 항체 클론 10D1 처리의 효과를 보여주는 그래프. 왼쪽 막대는 비히클 대조군을 나타내고, 오른쪽 막대는 10D1 처리를 나타낸다. 점선은 Charles River 기준 범위의 종점을 나타낸다. 간독성, 신독성 및 췌장 독성 지표는 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST), 혈중 요소 질소(BUN), 크레아티닌(CREA), 알칼리성 포스파타제(ALP), 글루코스(GLU), 칼슘(CAL), 총 빌리루빈(BIL), 총 단백질(TPR) 및 알부민(ALB)을 포함한다.
도 52. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 항체 MM-121, LJM-716 및 Roche M05에 의한 HER2와 HER3 간의 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 53. ELISA에 의해 결정된 바와 같은 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 항체 MM-121 및 LJM716에 의한 EGFR과 HER3 간의 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표.
도 54. 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA(10D1F.A), 10D1F.FcB(10D1F.B), 10D1F-hIgG1(N297Q) 및 항-HER3 항체 LJM-716 및 세리반투맙(MM-121)의 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. EC50 값이 표시된다.
도 55a 내지 도 55c. 포스포-웨스턴 블롯에 의한 (55a) N87, (55b) FaDu 및 (55c) OvCar8 세포에서 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 치료 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 56a 및 도 56b. 마우스에서 항-HER3 항체 클론 (56a) 10D1F.FcA 및 (56b) 10D1F.FcB의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. 매개변수: 최대 농도(Cmax), Tmax, AUC(0-336hr), AUC(0-무한대), 반감기(t1/2), 청소율(clearance, CL), 정상 상태에서의 분포 용적(Vss).
도 57a 내지 도 57d. 래트에서 (57a) 10mg/kg, (57b) 25mg/kg, (57c) 100mg/kg 및 (57d) 250mg/kg의 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 약동학 분석 결과를 보여주는 그래프 및 표. 매개변수: 최대 농도(Cmax), Tmax, AUC(0-336hr), AUC(0-무한대), 반감기(t1/2), 청소율(CL), 정상 상태에서의 분포 용적(Vss).
도 58a 내지 도 58f. (58a, 58b) 적혈구 지표, (58c) 백혈구 지표, (58d) 간독성, (58e) 신장 및 췌장 지표, 및 (58f) 전해질 지표에 대한 200ug(∼10mg/kg), 500ug(∼25mg/kg), 2mg(∼100mg/kg) 또는 5mg(∼250mg/kg)의 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB의 치료 효과를 보여주는 그래프.
도 59a 내지 도 59d. (59a & 59b) 항-HER3 항체 세리반투맙 및 LJM-716 및 (59c & 59d) EGFR 계열 치료제 세툭시맙, 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 비교하여, N87 세포(위암), HCC95 세포(폐암), FaDu 세포(두경부암), SNU-16 세포(위암), A549 세포(폐암), OvCar8 세포(난소암), ACHN 세포(신장암) 및 HT29 세포(결장직장암)를 사용한 시험관내 마우스 암 모델에서 종양 억제율에 대한 치료 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA의 효과를 보여주는 그래프.
도 60. 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 격주 치료 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6, 비히클 대조군 n=8). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 61. 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 매주 치료 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 62. 난소 암종의 OvCAR8 세포주 유래 마우스 모델에서 6주 동안 표시된 농도의 항체로 매주 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 63a 내지 도 63d. 시험관내 인산화 분석에서 10D1F.FcA, LJM-716 또는 세리반투맙으로 처리된 암세포주에 대한 유전자 세트 농축 분석에 의한 경로 활성화의 분석 결과를 보여주는 상자 그림. 63a는 N87 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63b는 A549 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63c는 OvCar8 세포로부터 수득된 결과를 보여주고, 63d는 FaDu 세포로부터 수득된 결과를 보여준다.
도 64. 표시된 시점에서 포스포-웨스턴 블롯에 의한 A549 세포의 HER3-매개된 신호전달에 대한 항-HER3 항체 치료 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 65. PathHunter 퍼투주맙 생물검정에 의해 결정된 바와 같은 10D1F.FcA 또는 퍼투주맙에 의한 HER2:HER3 상호작용 억제의 분석 결과를 보여주는 그래프. IC50 (M) 값이 표시된다.
도 66a 내지 도 66c. (66a) BCPAP, (66b) BHT101 및 (66c) SW1736 세포에 의한 EGFR, HER2 및 HER3의 발현의 분석 결과를 보여주는 히스토그램. 1 = 염색되지 않은 세포, 2 = 이소타입 대조군, 3 = 세툭시맙, 4 = 트라스투주맙, 5 = 10D1F.FcA.
도 67a 내지 도 67c. 시험관내 BRAFV600E 돌연변이 갑상선암 세포주의 증식을 억제하는 상이한 항-ErbB 항체의 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프. 67a는 BHT101 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68b는 BCPAP 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 67c는 SW1736 세포에 대해 수득된 결과를 보여준다.
도 68a 내지 도 68c. 10D1F.FcA 단독으로 또는 베무라페닙과 조합하여 시험관내 BRAFV600E 돌연변이 갑상선암 세포주의 증식을 억제하는 능력의 분석 결과를 보여주는 그래프. 68a는 BHT101 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68b는 SW1736 세포에 대해 수득된 결과를 보여주고, 68c는 BCPAP 세포에 대해 수득된 결과를 보여준다.
도 69a 내지 도 69c. 10 mg/kg, 25 mg/kg, 100 mg/kg 또는 250 mg/kg의 10D1F.FcA 또는 동일 용적의 PBS를 투여한 후 BALB/c 마우스의 대표적인 혈액학적 프로파일을 보여주는 표. 69a는 적혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 69b는 백혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 69c는 간, 신장 및 췌장 기능 및 전해질 수준의 상관관계를 분석한 결과를 보여준다. RBC = 적혈구, MVC = 평균 혈구 용적, MCH = 평균 혈구 혈색소, MCHC = 평균 혈구 혈색소 농도, WBC = 백혈구, ALB = 알부민, ALT = 알라닌 아미노트랜스퍼라제, ALP = 알칼리성 포스파타제, CREA = 크레아티닌, BUN = 혈중 요소 질소, GLU = 글루카곤, AMY = 아밀라제, NA = 나트륨, K = 칼륨, P = 인, 및 CA = 칼슘.
도 70a 내지 70c. 250 mg/kg 10D1F.FcA 또는 동일 용적의 PBS를 투여한 후 표시된 시점에서 SD 래트의 대표적인 혈액학적 프로필을 보여주는 표. 70a는 적혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 70b는 백혈구 구획의 분석 결과를 보여주고, 70c는 간, 신장 및 췌장 기능 및 전해질 수준의 상관관계를 분석한 결과를 보여준다. RBC = 적혈구, MVC = 평균 혈구 용적, MCH = 평균 혈구 혈색소, MCHC = 평균 혈구 혈색소 농도, WBC = 백혈구, ALB = 알부민, ALT = 알라닌 아미노트랜스퍼라제, ALP = 알칼리성 포스파타제, CREA = 크레아티닌, BUN = 혈중 요소 질소, GLU = 글루카곤, AMY = 아밀라제, NA = 나트륨, K = 칼륨, P = 인, 및 CA = 칼슘.
도 71. 포스포-웨스턴 블롯에 의해 결정된 바와 같은 FaDu 또는 OvCar8 세포 유래 종양의 세포에서 생체내 HER3-매개된 신호전달에 대한 10D1F.FcA 처리의 효과의 분석 결과를 보여주는 이미지.
도 72. 표시된 세포주에 의한 상이한 항-ErbB 항체의 내재화 분석 결과를 보여주는 상자 블롯.
도 73a 및 도 73b. 유세포 분석에 의해 결정된 바와 같은 상이한 시점에서의 표시된 세포주에 의한 10D1F.FcA 또는 트라스투주맙의 내재화 분석 결과를 보여주는 히스토그램 및 표. 73b는 73a에 도시된 히스토그램으로부터 결정된 PE-양성 세포의 중간 형광 강도 및 백분율을 보여준다.
도 74. 6주 동안 표시된 농도의 표시된 항-ErbB 항체로 격주 처리한 후 위암의 N87 세포주 유래 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프(n=6). 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 75a 및 도 75b. 10D1F.FcA를 사용한 악성 및 정상 인간 조직의 면역조직화학적 염색을 보여주는 이미지. 75a 및 75b는 상이한 조직의 염색을 보여준다.
도 76. 표시된 배율에서 10D1F 또는 토끼 다클론 항-HER3 항체에 의한 A549 종양 이종이식 크리오섹션의 면역조직화학적 염색을 보여주는 이미지. 2차-단독 대조군 염색이 표시된다.
도 77a 및 도 77b. 25 mg/kg으로 마우스에 IP 투여 후 항체가 Cmax에 도달하는 혈청 농도에서 표시된 암 세포주의 시험관내 증식을 억제하는 표시된 항-ErbB 항체의 능력의 분석 결과를 보여주는 막대 차트. 77a 및 77b는 상이한 세포주를 사용하여 수득된 결과를 보여준다.
도 78a 내지 도 78f. 인간 NRG1의 부재하에서 (78a, 78c, 78e) 및 인간 NRG1의 존재하에서 (78b, 78d, 78f) 항-HER3 항체 10D1F.A (78a, 78b), MM-121 (78c, 78d) 및 LJM-716 (78e, 78f)에 의한 인간 HER3에 대한 결합 친화도의 분석 결과를 보여주는 대표적인 센서그램. Kon, Koff 및 KD가 표시된다.
도 79. CLU - NRG1 융합을 포함하는 난소암의 환자-유래 이종이식 모델에서 25 mg/kg의 10D1F 또는 이소타입-일치 대조 항체(치료 그룹 당 n=10)로 격주로 치료한 후 시간 경과에 따른 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 80a 내지 도 80e. 40℃에서 1개월 저장 후 상이한 액체 제형에서 항체의 안정성을 보여주는 그래프: (80a) 단백질 농도, (80b) pH, (80c) HPLC-SEC에 의한 응집 형성, (80d) 전하 변이체 변화, (80e) 항원 결합 능력.
도 81a 및 도 81b. 상이한 액체 제형에서 고농도 항체의 안정성을 보여주는 표 및 그래프: (81a) 눈에 보이는 응집체 또는 입자에 대한 육안 검사, (81b) HPLC-SEC에 의한 가용성 응집 형성.
도 82. 상이한 액체 제형에서 항체의 동결-해동 안정성을 보여주는 그래프.
도 83a 내지 도 83d. (83a) 동결/해동, (83b) 주사기 및 바늘 흡인, (83c) 교반, (83d) 모든 시험에 의한 스트레스 시험 후 CE-SDS에 의한 항체 제형의 상대적 순도를 보여주는 그래프 및 표. "환원"은 경쇄, 비당화 중쇄 및 중쇄의 조합된 상대량을 지칭한다. "비환원"은 온전한 IgG의 상대량을 지칭한다.
도 84a 내지 도 84e. 12주에 걸쳐 IgG 항체 제형 1, 4 및 5의 (84a) 단량체 순도, (84b) 응집 및 (84c) 단편을 보여주는 그래프. (84d) +5℃ 및 (84e) +25℃에서 29주까지 IgG 항체 제형 1, 4 및 5의 단량체 순도의 외삽을 보여주는 그래프(~95% 단량체 IgG 순도).
도 85a 내지 85c. IE-HPLC로 측정한, 12주에 걸쳐 +5℃ 및 +25℃에서 배양된 제형 1, 4 및 5에 대한 (85a) 주, (85b) 산성 및 (85c) 염기성 이소형의 상대량을 보여주는 그래프.
도 86a 및 도 86b. 12주에 걸쳐 +5℃ 및 +25℃에서 제형 1, 4 및 5의 (86a) 비환원 및 (86b) 환원 샘플에 대한 CD-SDS 데이터를 보여주는 그래프.
도 87a 및 도 87b. (87a) 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정된 바와 같은, 8회 동결-해동 사이클 후 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스(240mM), 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.8에서 항원 결합 분자의 단량체 순도를 보여주는 그래프. (87b) SEC에 의해 측정된 바와 같은, 200mg/mL에서 제형화된 항원-결합 분자의 응집의 부재를 보여주는 그래프.
도 88a 및 도 88b. (88a) -65℃에서 저장된 원료의약품 및 (88b) -20℃에서 저장된 의약품에 대한 안정성 결과를 보여주는 표.
도 89a 내지 도 89d. 25mg/kg의 표시된 항체로 처리한 후 NCr 누드 마우스의 (89a) N87, (89b) A549, (89c) FaDu 및 (89d) OvCAR8 세포주 유래 이종이식 모델에서 종양 용적의 분석 결과를 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
도 90. A549 모델에서 2, 5 및 10 mg/kg HMBD-001에 대한 용량 반응을 보여주는 그래프. 항체 투여는 x축을 따라 삼각형으로 표시된다.
실시예
하기 실시예에서, 본 발명자들은 HER3 분자 내의 특정 관심 영역에 표적화된 신규한 항-HER3 항체 클론의 생성, 및 이들 항원-결합 분자의 생물물리학적 및 기능적 특성화 및 치료적 평가를 설명한다.
실시예
1:
HER3
표적 설계 및 항-
HER3
항체
하이브리도마
생산
본 발명자들은 HER3-결합 단클론 항체를 양성하기 위해 인간 HER3(서열 번호 9)의 세포외 영역에서 2개의 영역을 선택하였다.
1.1
하이브리도마
생산
대략 6주령의 암컷 BALB/c 마우스를 InVivos (Singapore)로부터 입수하였다. 동물은 특정 병원체-비함유 조건하에서 사육하였으며 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee) 지침에 따라 다루었다.
하이브리도마 생산을 위해, 마우스를 항원 펩티드, 재조합 표적 단백질 또는 표적 단백질을 발현하는 세포의 독점적인 혼합물로 면역화하였다.
융합을 위해 비장을 수확하기 전에, 마우스에게 3일 연속 또는 단 하루 동안 항원 혼합물을 추가 접종하였다. 최종 추가 접종 24시간 후 총 비장세포를 단리하고, 제조업체의 지침(Stemcell Technologies, Canada)에 따라 ClonaCell-HY 하이브리도마 클로닝 키트를 사용하여 PEG로 골수종 세포주 P3X63.Ag8.653 (ATCC, USA)과 융합시켰다.
융합된 세포를 5% CO2 배양기에서 37℃에서 밤새 ClonaCell-HY 배지 C(Stemcell Technologies, Canada)에서 배양하였다. 다음날, 융합된 세포를 원심분리하고 10ml의 ClonaCell-HY 배지 C에 재현탁시킨 다음 HAT 성분을 함유하는 반고체 메틸셀룰로스-기반 ClonaCell-HY 배지 D(StemCell Technologies, Canada) 90ml와 부드럽게 혼합하였으며, 이것은 하이브리도마 선택 및 클로닝을 한 단계로 조합한다.
그후 융합된 세포를 96웰 플레이트에 플레이팅하고 5% CO2 배양기에서 37℃에서 성장시켰다. 7-10일 후, 단일 하이브리도마 클론을 단리하고, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA) 및 형광-활성화 세포 분류(FAC)에 의해 상청액을 스크리닝하여 항체 생산 하이브리도마를 선택하였다.
1.2 항체 가변 영역 증폭 및 시퀀싱
총 RNA를 제조업체의 프로토콜을 사용하여 TRIzol 시약(Life Technologies, Inc., USA)을 사용하여 하이브리도마 세포로부터 추출하였다. 이중-가닥 cDNA는 제조업체의 지침에 따라 SMARTer RACE 5'/3' 키트(Clontech™, USA)를 사용하여 합성하였다. 간략하게, 5'-RACE CDS 프라이머(키트에 제공됨)를 사용하여 전장 cDNA를 생성하기 위해 1μg의 총 RNA를 사용한 다음 5'-어댑터(SMARTer II A 프라이머)를 제조업체의 지침에 따라 각 cDNA에 통합하였다. cDNA 합성 반응은 다음을 함유하였다: 5X First-Strand 완충액, DTT(20mM), dNTP 믹스(10mM), RNase 억제제(40U/μl) 및 SMARTScribe 역전사효소(100U/μl).
race-준비 cDNA는 SeqAmp DNA 중합효소(Clontech™, USA)를 사용하여 증폭시켰다. 증폭 반응은 SeqAmp DNA 중합효소, 2X Seq AMP 완충액, 어댑터 서열에 대한 보체인 5' SMARTer Race 키트에 제공된 5' 범용 프라이머, 및 각각의 중쇄 또는 경쇄 불변 영역 프라이머에 어닐링하는 3' 프라이머를 함유하였다. 5' 불변 영역은 문헌[Krebber et al. J. Immunol. Methods 1997; 201: 35-55, Wang et al. Journal of Immunological Methods 2000, 233; 167-177 or Tiller et al. Journal of Immunological Methods 2009; 350:183-193]에 의해 이전에 보고된 프라이머 혼합물을 기반으로 설계되었다. 다음 열 프로토콜이 사용되었다: 94℃에서 1분 동안 변성-전 사이클; 94℃, 30초, 55℃, 30초 및 72℃, 45초의 35회 사이클; 72℃에서 3분의 최종 연장.
생성된 VH 및 VL PCR 산물, 대략 550bp,을 CloneJET PCR 클로닝 키트(Thermo Scientific, USA)를 사용하여 pJET1.2/blunt 벡터로 클로닝하고 매우 적격 대장균 DH5α를 형질전환하는 데 사용하였다. 생성된 형질전환체로부터, Miniprep 키트(Qiagene, Germany)를 사용하여 플라스미드 DNA를 제조하고 시퀀싱하였다. DNA 시퀀싱은 AITbiotech에 의해 수행하였다. 이러한 시퀀싱 데이터는 개별 CDR 및 프레임워크 서열을 특성화하기 위해 국제 IMGT(ImMunoGeneTics) 정보 시스템(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D 413-22)을 사용하여 분석하였다. VH 및 VL의 5' 말단에 있는 신호 펩티드는 SignalP (v 4.1; Nielsen, in Kihara, D (ed): Protein Function Prediction (Methods in Molecular Biology vol. 1611) 59-73, Springer 2017)에 의해 식별되었다.
추가 개발을 위해 4개의 단클론 항-HER3 항체 클론이 선택되었다: 10D1, 10A6, 4-35-B2 및 4-35-B4.
10D1의 인간화 버전은 상보성 결정 영역(CDR)을 인간 항체 프레임워크 영역을 포함한 VH 및 VL에 이식함으로써 인실리코 (in silico ) 설계되었으며, 효모 디스플레이 방법에 의한 항원 결합을 위해 추가로 최적화되었다.
효모 디스플레이를 위해, 인간화 서열을 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 단일쇄 단편 가변(scFv) 형식으로 전환시키고 무작위 돌연변이 유발에 의해 돌연변이 라이브러리를 생성하기 위한 주형으로 사용하였다. 그후 돌연변이 PCR 라이브러리를 선형화된 pCTcon2 벡터와 함께 효모로 전기천공하여 효모 라이브러리를 생성하였다. 라이브러리를 인간 HER3 항원으로 염색하고 상단 결합제를 분류하였다. 4-5 차례의 분류 후, 개별 효모 클론을 시퀀싱하여 독특한 항체 서열을 식별하였다.
실시예
2: 항체 생산 및 정제
2.1
VH
및
VL을
발현 벡터로
클로닝
:
항-HER3 항체 클론의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열을 인간-마우스 키메라 항체의 작제를 위해 pmAbDZ_IgG1_CH 및 pmAbDZ_IgG1_CL(InvivoGen, USA) 진핵생물 발현 벡터로 서브클로닝하였다.
대안적으로, 항-HER3 항체 클론의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열을 인간-마우스 키메라 항체의 작제를 위해 pFUSE-CHIg-hG1 및 pFUSE2ss-CLIg-hk(InvivoGen, USA) 진핵생물 발현 벡터로 서브클로닝하였다. pFUSE-CHIg-hG1에 의해 암호화된 인간 IgG1 불변 영역은 인간 IgG1 불변 영역(IGHG1; UniProt:P01857-1, v1; 서열 번호 176)에 비해 CH3 영역에 치환 D356E, L358M (EU 넘버링에 따라 번호매겨진 위치)을 포함한다. pFUSE2ss-CLIg-hk는 인간 IgG1 경쇄 카파 불변 영역(IGCK; UniProt: P01834-1, v2)을 암호화한다.
신호 펩티드와 함께 가변 영역은 제조업체의 프로토콜에 따라 SeqAmp 효소(Clontech™, USA)를 사용하여 클로닝 벡터로부터 증폭되었다. VH 또는 VL 내의 적절한 영역과의 15-20bp 플러스 제한 부위로서 5' 말단에서 6bp를 갖는 정방향 및 역방향 프라이머가 사용되었다. DNA 삽입물 및 벡터는 프레임시프트가 도입되지 않도록 제조업체에서 권장하는 제한 효소로 소화시키고 T4 리가제 효소(Thermo Scientific, USA)를 사용하여 이의 각각의 플라스미드에 결찰하였다. 벡터에 대한 DNA 삽입물의 3:1의 몰 비가 결찰에 사용되었다.
2.2 포유류 세포에서의 항체의 발현
항체는 제조업체의 지침에 따라 1) Expi293 일과성 발현 시스템 키트(Life Technologies, USA) 또는 2) HEK293-6E 일과성 발현 시스템(CNRC-NRC, Canada)을 사용하여 발현되었다.
1) Expi293 일과성 발현 시스템:
세포주 유지:
HEK293F 세포(Expi293F)는 Life Technologies, Inc(USA)로부터 입수하였다. 세포를 진탕 플랫폼이 있는 8% CO2 및 80% 가습 배양기에서 37℃에서 50IU/ml 페니실린 및 50μg/ml 스트렙토마이신(Gibco, USA)이 보충된 무혈청, 무단백질, 화학적으로 정의된 배지(Expi293 Expression Medium, Thermo Fisher, USA)에서 배양하였다.
형질감염:
Expi293F 세포는 제조업체의 프로토콜에 따라 ExpiFectamine 293 시약 키트(Gibco, USA)를 사용하여 발현 플라스미드로 형질감염하였다. 간략하게, 유지시 세포는 배양액을 스핀 다운하여 항생제를 제거하기 위해 배지 교환을 거쳤고, 세포 펠릿은 형질감염 1일 전에 항생제 없이 신선한 배지에 재현탁시켰다. 형질감염 당일, 각 형질감염에 대해 2.5 x 106/ml의 생존 가능한 세포를 진탕기 플라스크에 시딩하였다. DNA-ExpiFectamine 복합체를 세포에 첨가하기 전에 실온에서 25분 동안 혈청-환원 배지인 Opti-MEM(Gibco, USA)에서 형성하였다. 인핸서를 형질감염 후 16-18시간에 형질감염된 세포에 첨가하였다. 세포 응집을 방지하기 위해 형질감염 후 4일째에 동일한 양의 배지를 형질감염체에 가득 채웠다. 형질감염체를 7일째에 4000 x g에서 15분 동안 원심분리하여 수거하고, 0.22μm 멸균 필터 유닛을 통해 여과하였다.
2) HEK293-6E 일과성 발현 시스템
세포주 유지:
HEK293-6E 세포는 캐나다 국립 연구 위원회(National Research Council Canada)로부터 입수하였다. 세포를 진탕 플랫폼이 있는 5% CO2 및 80% 가습 배양기에서 37℃에서 0.1% Kolliphor-P188 및 4mM L-글루타민(Gibco, USA) 및 25μg/ml G-418이 보충된 무혈청, 무단백질, 화학적으로 정의된 Freestyle F17 배지(Invitrogen, USA)에서 배양하였다.
형질감염:
HEK293-6E 세포는 제조업체의 프로토콜에 따라 PEIproTM(Polyplus, USA)을 사용하여 발현 플라스미드로 형질감염하였다. 간략하게, 유지시 세포는 원심분리에 의해 항생제를 제거하기 위해 배지 교환을 거쳤고, 세포 펠릿은 형질감염 1일 전에 항생제 없이 신선한 배지로 재현탁시켰다. 형질감염 당일, 각 형질감염에 대해 1.5-2 x 106개 세포/ml의 생존 가능한 세포를 진탕기 플라스크에 시딩하였다. DNA와 PEIproTM를 1:1의 비율로 혼합하고 복합체를 세포에 첨가하기 전에 RT에서 5분 동안 F17 배지에서 형성하도록 하였다. 0.5% (w/v)의 트립톤 N1을 형질감염 후 24-48시간에 형질감염체에 공급하였다. 형질감염체를 4000 x g에서 15분 동안 원심분리하여 6-7일째에 수거하고, 상청액을 0.22μm 멸균 필터 유닛을 통해 여과하였다.
세포는 하기 폴리펩티드의 조합을 암호화하는 벡터로 형질감염되었다:
2.3 항체 정제
친화성 정제, 완충액 교환 및 저장:
형질감염된 세포에 의해 배양 상청액으로 분비된 항체는 액체 크로마토그래피 시스템 AKTA Start(GE Healthcare, UK)를 사용하여 정제하였다. 구체적으로, 상청액을 5ml/분의 결합 속도로 HiTrap 단백질 G 컬럼(GE Healthcare, UK)에 로딩한 다음 10 컬럼 용적의 세척 완충액(20mM 인산나트륨, pH 7.0)으로 컬럼을 세척하였다. 결합된 mAb를 용출 완충액(0.1M 글리신, pH 2.7)으로 용출하고, 용출액을 적절한 양의 중화 완충액(1M Tris, pH 9)을 함유한 수집 튜브로 분별하였다. 정제된 mAb를 함유하는 중화된 용출 완충액을 30K MWCO 단백질 농축기(Thermo Fisher, USA) 또는 3.5K MWCO 투석 카세트(Thermo Fisher, USA)를 사용하여 PBS로 교환하였다. 단클론 항체는 0.22μm 필터를 통해 통과시켜 멸균하고, 분취하고, 저장을 위해 -80℃에서 스냅-동결하였다.
2.4 항체-순도 분석
크기 배제 크로마토그래피(SEC):
항체 순도는 AKTA Explorer 액체 크로마토그래피 시스템(GE Healthcare, UK)에서 PBS 실행 완충액 중 Superdex 200 10/30 GL 컬럼(GE Healthcare, UK)을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 분석하였다. 500μl PBS pH 7.2 중의 항체 150μg을 실온에서 0.75ml/분의 유속으로 컬럼에 주입하였다. 단백질을 이들의 분자량에 따라 용출하였다.
항-HER3 항체 클론 10D1(실시예 2.2의 [1])에 대한 결과는 도 12에 나타내어져 있다.
상이한 10D1 변이체 클론에 대해 수득된 결과는 도 34에 나타내어져 있다.
나트륨-
도데실
설페이트
폴리아크릴아미드
겔 전기영동(SDS-PAGE):
항체 순도를 또한 표준 방법에 따라 환원 및 비환원 조건하에서 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. 간략하게, Mini-Protean 전기영동 시스템(Bio-Rad, USA)을 사용하여 단백질을 분해하기 위해 4%-20% TGX 단백질 겔(Bio-Rad, USA)을 사용하였다. 비환원 조건의 경우, 단백질 샘플을 2x Laemmli 샘플 완충액(Bio-Rad, USA)과 혼합하여 변성시키고, 겔에 로딩하기 전에 95℃에서 5-10분 동안 비등시켰다. 환원 조건의 경우, 5%의 β-머캅토에탄올(βME) 또는 40mM DTT(디티오트레이톨)를 함유하는 2x 샘플 완충액을 사용하였다. 전기영동은 SDS 실행 완충액(25 mM Tris, 192 mM 글리신, 1% SDS, pH 8.3)에서 1시간 동안 150V의 정전압에서 수행하였다.
웨스턴
블롯
:
단백질 샘플(30μg)을 상기한 바와 같이 SDS-PAGE에 의해 분별하고 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 그후 막을 차단하고 4℃에서 밤새 항체로 면역블롯팅하였다. PBS-Tween에서 3회 세척한 후, 막을 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRP)-접합 2차 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 결과는 화학발광 Pierce ECL 기질 웨스턴 블롯 검출 시스템(Thermo Scientific, USA) 및 방사능 사진 촬영 필름(Kodak XAR 필름)에 대한 노출을 통해 시각화하였다.
검출에 사용된 1차 항체는 염소 항인간 IgG-HRP(GenScript Cat No. A00166) 및 염소 항인간 카파-HRP(SouterhnBiotech Cat No. 2060-05)였다.
항-HER3 항체 클론 10D1(실시예 2.2의 [1])에 대한 결과는 도 13에 나타내어져 있다. 10D1은 고농도에서 쉽게 발현, 정제 및 처리되었다.
실시예
3: 생물물리학적
특성화
3.1
유세포
분석에 의한 세포 표면 항원-결합의 분석
야생형 HEK293 세포(높은 수준의 HER3를 발현하지 않음) 및 인간 HER3를 암호화하는 벡터로 형질감염된 HEK293 세포(즉, HEK 293 HER O/E 세포)를 4℃에서 1.5시간 동안 20μg/ml의 항-HER3 항체 또는 이소타입 대조 항체와 함께 배양하였다. 항-HER3 항체 클론 LJM716(예를 들어, 문헌[Garner et al., Cancer Res (2013) 73:6024-6035]에 기재됨)이 양성 대조군으로서 분석에 포함되었다.
세포를 FACS 완충액(5mM EDTA 및 0.5% BSA를 갖는 PBS)으로 3회 세척하고, 2-8℃에서 40분 동안 FITC-접합 항-FC 항체(Invitrogen, USA)에 재현탁시켰다. 세포를 다시 세척하고 MACSQuant 10(Miltenyi Biotec, Germany)을 사용한 유세포 분석을 위해 200μL의 FACS 유동 완충액(5mM EDTA를 갖는 PBS)에 재현탁시켰다. 수집 후, 모든 원시 데이터는 Flowlogic 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 전방 및 측면 산란 프로파일을 사용하여 세포를 게이팅하고 양성 세포의 백분율을 천연 및 과발현 세포 집단에 대해 결정하였다.
결과는 도 1 내지 4 및 도 30 내지 32에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체는 높은 특이성으로 인간 HER3에 결합하는 것으로 나타났다. 10D1 및 LJM716은 인간 HER3-발현 세포에 유사한 정도로 결합하는 것으로 나타났다.
3.2 항체 특이성 및 교차-반응성을 결정하기 위한 ELISA
ELISA는 항체의 결합 특이성을 결정하기 위해 사용하였다. 항체를 인간 HER3 폴리펩티드 뿐만 아니라 HER3의 각각의 마우스, 래트 및 원숭이 상동체에 대한 결합에 대해 분석하였다(Sino Biological Inc., China). 항체를 또한 인간 EGFR 및 인간 HER2에 결합하는 능력에 대해 분석하였다(Sino Biological Inc., China).
ELISA는 표준 프로토콜에 따라 수행하였다. 간략하게, 96웰 플레이트(Nunc, Denmark)를 4℃에서 16시간 동안 인산염-완충 염수(PBS) 중의 0.1μg/ml의 표적 폴리펩티드로 코팅하였다. 실온에서 트리스 완충 염수(TBS) 중의 1% BSA로 1시간 동안 차단한 후, 항-HER3 항체를 최고 농도인 10μg/ml로 연속적으로 희석하여 플레이트에 첨가하였다. 실온에서 1시간 배양한 후, 플레이트를 0.05% Tween 20을 함유하는 TBS(TBS-T)로 3회 세척한 다음 실온에서 1시간 동안 HRP-접합 항-His 항체(Life Technologies, Inc., USA)와 함께 배양하였다. 세척 후, 플레이트를 비색 검출 기질 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(Turbo-TMB; Pierce, USA)로 10분 동안 현상시켰다. 반응을 2M H2SO4로 중단시키고 OD를 450nM에서 측정하였다.
ELISA의 결과는 도 5 내지 7 및 도 33에 나타내어져 있다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 항체의 고농도에서도 인간 HER2 또는 인간 EGFR에 결합하지 않는 것으로 밝혀졌다(도 5a). 항-HER3 항체 클론 10D1은 또한 마우스 HER3, 래트 HER3 및 시노몰구스 마카크 HER3과 상당한 교차-반응성을 나타내는 것으로 밝혀졌다(도 5b).
항-HER3 항체 클론 4-35-B2는 인간 HER2 및 인간 EGFR에 결합하는 것으로 밝혀졌다(도 6a). 항-HER3 항체 클론 4-35-B2는 또한 마우스 HER3, 래트 HER3 및 시노몰구스 마카크 HER3과 상당한 교차-반응성을 나타내었다(도 6b).
항-HER3 항체 클론 4-35-B4는 인간 HER2 및 인간 EGFR에 결합하는 것으로 밝혀졌다(도 7a). 항-HER3 항체 클론 4-35-B4는 또한 마우스 HER3, 래트 HER3 및 시노몰구스 마카크 HER3과 상당한 교차-반응성을 나타내었다(도 7b).
모든 10D1 변이체는 인간 HER3에 결합하는 것으로 입증되었다(도 33a 및 33b).
3.3 Octet QK384 시스템을 사용한 전역 친화도 연구
IgG1 형식의 항-HER3 항체 클론을 인간 HER3에 대한 결합 친화도에 대해 분석하였다.
생물층 간섭측정(BLI) 실험은 Octet QK384 시스템(ForteBio)을 사용하여 수행하였다. 항-HER3 항체(25 nM)에 항-인간 IgG 포획(AHC) Octet 센서 팁(Pall ForteBio, USA)을 사용하였다. 모든 측정은 25℃에서 1000rpm에서 교반하여 수행하였다. 항원 결합에 대한 역학 측정은 120초 동안 상이한 농도로 His-태그된 인간 HER3 항원을 로딩한 다음 바이오센서를 분석 완충액 함유 웰로 옮김으로써 120초의 해리 시간을 수행함으로써 수행하였다. 완충 효과에 대해 센소그램을 참조한 다음 Octet QK384 사용자 소프트웨어(Pall ForteBio, USA)를 사용하여 피팅하였다. 역학 반응은 결합(Kon), 해리(Koff) 속도 상수 및 평형 해리 상수(KD)에 대한 값을 수득하기 위해 단일 부위 결합 모델을 사용한 전역 피팅을 거쳤다. 소프트웨어(R2>0.90)로 안정적으로 피팅될 수 있는 곡선만 분석에 포함되었다.
클론 10D1의 분석을 위한 대표적인 센서그램이 도 8에 나타내어져 있다. 클론 10D1은 KD = 9.58 nM의 친화도로 인간 HER3에 결합하는 것으로 밝혀졌다.
인간화/최적화된 10D1 변이체는 매우 높은 친화도로 인간 HER3에 결합한다. 대표적인 센서그램은 도 36a 내지 도 36m에 나타내어져 있다.
10D1 클론 변이체에 대해 결정된 친화도는 아래에 나타내어져 있다:
클론 4-35-B2는 KD = 80.9nM의 친화도로 인간 HER3에 결합하는 것으로 밝혀졌고(도 9), 클론 4-35-B4는 KD = 50.3nM의 친화도로 인간 HER3에 결합하는 것으로 밝혀졌다(도 10).
3.4 시차 주사 형광측정법에 의한
열안정성의
분석
간략하게, 0.2mg/mL의 항체와 SYPRO 오렌지 염료(ThermoFisher)의 삼중 반응 혼합물을 25μL의 PBS에서 제조하고, MicroAmp 광학 96웰 반응 플레이트(ThermoFisher)의 웰로 옮기고, MicroAmp 광학 접착 필름(ThermoFisher)으로 밀봉하였다. 용융 곡선은 TAMRA를 리포터로, ROX를 수동 참조로 선택하여 7500 고속 실시간 PCR 시스템(Applied Biosystems)에서 실행되었다. 열 프로파일은 25℃에서 2분의 초기 단계 및 99℃에서 2분의 최종 단계를 포함하였으며, 램프 속도는 1.2%이다. 원시 데이터의 1차 도함수는 도함수 용융 곡선을 수득하기 위해 온도의 함수로 플롯팅되었다. 항체의 용융 온도(Tm)는 도함수 곡선의 피크로부터 추출되었다.
항체 클론 10D1의 열안정성의 시차 주사 형광측정 분석에 대해 수득된 원시 데이터의 1차 도함수가 도 11에 나타내어져 있다. 세 가지 상이한 항체 샘플을 분석하였다. Tm은 70.3℃인 것으로 결정되었다.
분석을 또한 10D1 변이체 클론 및 LJM716에 대해 수행하였다. 원시 데이터의 1차 도함수 및 결정된 Tm은 도 35a 내지 도 35c에 나타내어져 있다.
3.5 항-
HER3
항체
10D1
에피토프의
분석
항-HER3 항체 10D1을 HER3에 결합하기 위해 항-HER3 항체 MM-121 및/또는 LJM-716과 경쟁하는지 여부를 알아보기 위해 분석하였다. MM-121에 대한 에피토프는 HER3의 도메인 I에 매핑되었다: 이것은 NRG 리간드 결합 부위를 차단한다. LJM-716에 대한 에피토프는 도메인 II 및 IV를 가로질러 분포된 구조적 에피토프에 매핑되었으며, 이것은 HER3를 비활성 형태로 고정한다.
생물층 간섭측정(BLI) 실험은 Octet QK384 시스템(ForteBio)을 사용하여 수행하였다. 항-Penta-HIS (HIS1K) 코팅된 바이오센서 팁(ForteBio, USA)을 사용하여 His-태그된 인간 HER3(75nM; 300s)를 포획하였다. 포화 항체(400nm; 600s)에 의한 결합을 검출한 다음 해리 단계(120s)를 수행한 후, 경쟁 항체(300nM; 300s)와의 결합을 검출한 다음 해리 단계(120s)를 수행하였다. MM-121 항체의 가변 영역은 인간 IgG2 및 Ig카파 Fc 골격을 갖는 PDZ 벡터에서 클로닝되었다. LJM-716 항체의 가변 영역은 인간 IgG1 및 Ig카파 Fc 골격을 갖는 PDZ 벡터에서 클로닝되었다.
분석 결과는 도 14a 및 14b에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체는 HER3에 결합하기 위해 MM-121 및/또는 LJM-716과 경쟁하지 않는 것으로 밝혀졌다.
10D1은 MM-121 및/또는 LJM-716보다 뚜렷하고 위상학적으로 동떨어진 HER3의 에피토프와 결합하는 것으로 밝혀졌다.
10D1에 대한 에피토프는 전체 HER3 세포외 도메인을 커버하기 위해 중첩되는 15-mer 아미노산을 사용하여 매핑되었다. 각각의 고유한 15-mer를 C 및 N-말단에서 GS 링커에 의해 연장하고, 384개의 웰 플레이트에서 고유한 웰에 접합하고, 플레이트를 4℃에서 16시간 동안 0.1, 1, 10 및 100ug/ml의 10D1 항체와 함께 배양하였다. 플레이트를 세척한 다음 POD-접합 염소 항인간 IgG와 함께 20℃에서 1시간 동안 배양하였다. 마지막으로 POD 기질 용액을 20분 동안 웰에 첨가한 다음 LI-COR Odyssey 이미징 시스템을 사용하여 425nm에서 화학발광을 측정함으로써 결합을 평가하고 PepSlide 분석기 소프트웨어 패키지를 사용하여 정량화 및 분석을 수행하였다. 실험은 이중으로 수행하였다.
10D1 에피토프는 도메인 II에 위치한 HER3 이량체화 암의 β-헤어핀 구조에 직접 위치하지 않고, 대신 β-헤어핀에 대한 이량체화 인터페이스 N-말단에 위치하는 것으로 밝혀졌다.
10D1 및 10D1-유래 클론이 결합하는 것으로 결정된 HER3의 부위는 인간 HER3의 아미노산 서열의 위치 218 내지 235에 상응한다(예를 들어, 서열 번호 1에 나타낸 바와 같이); HER3의 이 영역에 대한 아미노산 서열은 서열 번호 229에 나타내어져 있다. 이 영역 내에서, 두 개의 컨센서스 결합 부위 모티프가 확인되었고, 서열 번호 230 및 231에 나타내어져 있다.
HER3의 이 위치에 결합하는 것은 HER 계열 이종이량체화 및 그에 따른 다운스트림 신호전달 경로를 방해하는 역할을 한다(실시예 4 참조). 결합은 리간드(NRG) 비의존적이다. 10D1 결합 부위는 개방 및 폐쇄 HER3 형태 모두에서 용매에 접근 가능하며, HER3과 다른 HER 계열 구성원 사이에서는 보존되지 않고, 인간, 마우스, 래트 및 원숭이 HER3 오르소로그 사이에서는 100% 보존된다.
실시예
4: 기능적
특성화
4.1
HER2
및
HER3의
이량체화
억제
항-HER3 항체를 HER3 및 HER2의 이종이량체화를 억제하는 능력에 대해 분석하였다.
간략하게, 96웰 플레이트(Nunc, Denmark)를 4℃에서 16시간 동안 PBS 중의 0.1μg/ml His-태그된 HER2 단백질로 코팅하였다. 실온에서 PBS 중의 1% BSA로 1시간 동안 차단한 후, 재조합 비오틴화된 인간 HER3 단백질을 상이한 농도의 항-HER3 항체 클론 10D1의 존재하에서 첨가하고, 페이트를 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서 플레이트를 3회 세척한 다음 실온에서 1시간 동안 HRP-접합 2차 항체와 함께 배양하였다. 세척 후, 플레이트를 비색 검출 기질 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(Turbo-TMB; Pierce, USA)으로 10분 동안 현상시켰다. 반응을 2M H2SO4로 중단시키고 OD를 450nM에서 측정하였다.
결과는 도 15에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1은 용량 의존적 방식으로 HER2와 HER3 사이의 상호작용을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
추가 실험에서, HER2:HER3 이량체화의 억제를 분석하였다.
추가 실험에서, HER2:HER3 이량체화의 억제는 제조업체의 지침에 따라 PathHunter 퍼투주맙 생물검정 키트(DiscoverX)를 사용하여 평가하였다.
간략하게, HER2 및 HER3 과발현 U2OS 세포를 1ml의 예열된 CP5 배지를 사용하여 해동하고, 웰당 5,000개의 세포를 시딩하고 5% CO2 대기에서 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 그후 세포를 25μg/ml에서 시작하여 10D1F.FcA 또는 퍼투주맙의 8점 연속 희석물로 처리하였다.
4시간 배양 후, 30ng/ml의 헤레굴린-β2를 각 웰에 첨가하고 세포를 추가로 16시간 동안 배양하였다. 10μL의 PathHunter 생물검정 검출 시약 1을 웰에 첨가하고, 어두운 곳에서 실온에서 15분 동안 배양하였다. 그후 40μL PathHunter 생물검정 검출 시약 2를 첨가하고 어두운 곳에서 실온에서 60분 동안 배양하였다. 그후 플레이트를 Synergy4 Biotek을 사용하여 1초 지연으로 판독하였다.
결과는 도 65에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 이의 낮은 IC50에 의해 반영된 바와 같이 퍼투주맙보다 더 높은 효율로 HER2:HER3 이량체화를 억제하는 것으로 밝혀졌다.
4.2 분석을 위한
암세포주의
확인
본 발명자들은 HER3의 억제를 조사하기 위해 적절한 세포를 식별하기 위해 암 세포주에 의한 EGFR 단백질 계열 구성원의 발현을 특성화하였다.
도 16a는 Cancer Cell Line Encyclopaedia (CCLE; Barretina et al., Nature (2012) 483: 603-607 and The Cancer Cell Line Encyclopedia Consortium & The Genomics of Drug Sensitivity in Cancer Consortium, Nature (2015) 528: 84-87)에 따라 N87, SNU16, HT29, FaDu, A549, HCC95, OvCAR8 및 AHCN 세포에 의한 EGFR 계열 구성원 및 리간드의 mRNA 발현 데이터를 보여준다. 도 16a는 또한 FlowLogic에 의해 결정된 바와 같은 EGFR, HER2 및 HER3에 대한 단백질 발현 데이터를 보여준다.
실험에 사용된 세포주는 ATCC로부터 구입하여 권장하는 대로 배양하였다. 간략하게, 세포주는 10% FBS 및 1% Pen/Strep이 보충된 표시된 세포 배양 배지에서 유지하였다. 세포를 37℃에서 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 배양된 세포를 96웰 플레이트에서 적절한 시딩 밀도로 플레팅하였다: HT29, HCC95, FADU 및 OvCar8 세포는 2000개 세포/웰로 시딩하고, NCl-N87 세포는 5000개 세포/웰로 시딩하고, SNU-16, ACHN 및 세포는 1500개 세포/웰로 시딩하고, A549 세포는 1200개 세포/웰로 시딩하였다.
도 16b는 유세포 분석d 의해 측정된 바와 같은 EGFR, HER2 및 HER3의 표면 발현을 보여준다. 간략하게, 500,000개의 세포를 4℃에서 1.5시간 동안 1차 항체(20μg/ml)를 사용하여 0.5% BSA 및 2mM EDTA를 함유한 염색 완충액에서 염색하였다. 사용되는 2차 항체는 4℃에서 20분 동안 10 μg/ml의 항인간 Alexafluor488이었다.
4.3
HER3
-
매개된
신호전달의 억제
항-HER3 항체 10D1을 시험관내에서 HER-3 매개된 신호전달을 억제하는 능력에 대해 분석하였다.
간략하게, N87 및 FaDu 세포를 37℃, 5% CO2에서 10% 혈청이 있는 6웰 플레이트의 웰에 시딩하였다. 16시간 후, 세포를 1% FBS 세포 배양 배지에서 밤새 배양하여 기아시켰다(혈청 중의 성장 인자에 의해 유도된 신호전달을 줄이기 위해). 다음날 세포를 50μg/ml의 항-HER3 항체 10D1로 4시간 동안 처리한 다음 NRG(100ng/ml)로 15분 동안 자극하였다. 그후 단백질을 추출하고, 표준 Bradford 단백질 분석을 사용하여 정량화하고, SDS-PAGE로 분별하고, 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 그후 막을 차단하고 4℃에서 밤새 다음의 항체로 면역블롯팅하였다: 항-pHER3, 항-pAKT, pan 항-HER3, pan 항-AKT 및 항-베타-액틴. 블롯은 Bio-Rad Clarity Western ECL 기질을 통해 시각화되었으며, 밴드는 밀도 분석을 사용하여 정량화하였다; 데이터는 베타 액틴 대조군에 대해 정규화되었다.
결과는 도 17에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1은 HER3 인산화 및 다운스트림 신호전달을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
추가 실험에서, 본 발명자들은 HER3의 항-HER3 항체-매개된 억제에 의해 영향을 받는 세포내 신호전달 경로를 조사하였다.
FaDu 세포를 37℃, 5% CO2에서 10% 혈청이 있는 6웰 플레이트의 웰에 시딩하였다. 16시간 후, 세포를 1% FBS 세포 배양 배지에서 밤새 배양하여 기아시켰다. 다음날 세포를 50μg/ml의 항-HER3 항체 10D1로 4시간 동안 처리한 다음 NRG(100ng/ml)로 15분 동안 자극하였다. 그후 단백질을 추출하고, 표준 Bradford 단백질 분석을 사용하여 정량화하고, 4℃에서 사전-차단된 인단백질 항체 어레이 막(Ray Biotech)과 함께 밤새 배양하였다. 그후 막을 세척 완충액으로 세척하고 검출 항체 칵테일과 함께 실온에서 2시간 동안 배양한 다음 세척하고 HRP-접합 항-IgG와 함께 배양하였다. 2시간 후 막을 세척하고 키트 검출 완충액을 사용하여 프로빙하였다. 이미지를 Syngene Gbox 이미징 시스템으로 캡처하고, 각 점/인단백질의 강도를 측정하고, 항체의 부재하에서 동일한 방식으로 처리한 세포에 대해 측정된 강도와 비교하여 억제율을 계산하였다.
결과는 도 18에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1은 PI3K/AKT/mTOR 및 MAPK 신호전달을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
추가 실험에서, 본 발명자들은 HER3-발현 세포의 증식에 대한 항-HER3 항체 10D1 처리의 효과를 조사하였다.
간략하게, N87 및 FaDu 세포를 9점 하프 로그 희석으로 100μg/ml에서 시작하여 연속적으로 희석된 농도의 항-HER3 항체 10D1로 처리하였다. 세포 증식은 제조업체의 지침에 따라 5일의 기간 후 CCK-8 증식 분석(Dojindo, Japan)을 사용하여 측정하였다. 간략하게 1x CCK-8 용액을 각 웰에 첨가한 다음 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 그후 OD를 450nm에서 측정하였다.
도 19a 및 19b는 비처리 대조 세포에 비한 세포 융합 퍼센트를 보여준다(데이터 포인트는 3회 반복실험의 평균이다).
항-HER3 항체 10D1은 N87 및 FaDu 세포에 의한 세포 증식의 용량-의존적 억제를 나타내었다.
실시예
5:
생체내
분석
5.1 약동학 분석
대략 6-8주령된 암컷 NCr 누드 마우스를 특정 병원체-비함유 조건하에서 사육하고 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee) 지침에 따라 다루었다.
500μg의 항-HER3 항체를 투여하고, 기준선(-2시간), 투여 후 0.5시간, 6시간, 24시간, 96시간, 168시간 및 336시간에 심장 천자에 의해 3마리의 마우스로부터 혈액을 수득하였다. 혈청 중 항체를 ELISA에 의해 정량화하였다.
결과는 도 50에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1은 NCr 누드 마우스에서 16.3일의 반감기를 갖는 것으로 밝혀졌다.
5.2 안전성 면역독성
항-HER3 항체 클론 10D1을 IMGT DomainGapAlign(Ehrenmann et al., Nucleic Acids Res., 38, D301-307(2010)) 및 IEDB 탈면역(Dhanda et al., Immunology. (2018) 153(1):118-132) 도구를 사용하여 안전성 및 면역원성에 대해 인실리코 분석하였다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 낮은 면역원성 위험으로 간주될 만큼 적은 잠재적인 면역원성 펩티드의 수를 가졌으며, 잠재적인 발달가능성 문제를 일으킬 수 있는 다른 특성을 가지고 있지 않았다.
도 37의 표는 안전성 및 발달가능성과 관련된 10D1 변이체 클론의 특성에 대한 개요를 제공한다.
실시예 5.3에 기술된 실험에서 항-HER3 항체로 처리된 마우스는 체중 및 전체 부검의 변화에 대해 모니터링하였다. 이들 마우스에서는 비히클 단독으로 처리된 마우스와 비교하여 차이가 검출되지 않았다.
6-8주령 암컷 BALB/c 마우스(20-25g)에 단일 용량의 1000μg 항-HER3 10D1 항체 또는 동일한 용적의 PBS를 복강내 주사한 실험에서 혈액독성을 조사하였다. 혈액 샘플은 주사 후 96시간에 수득하고 유세포 분석 및 NA+, K+, 및 Cl-에 대한 전해질 지표에 의해 상이한 유형의 백혈구 수에 대해 분석하였다.
도 51a 및 도 51b는 상이한 세포 유형 및 전해질 지표의 수가 Charles River 기준 범위(3마리 마우스) 내에 있는 것으로 밝혀졌고 PBS-처리군(3마리 마우스)과 유의하게 다르지 않았음을 보여준다. 왼쪽 막대는 비히클을 나타내고, 오른쪽 막대는 10D1 처리를 나타내며, Charles River 기준 범위의 종점은 점선으로 표시된다. 임상 징후, 전체 부검 또는 체중의 차이는 상이한 그룹들 간에 검출되지 않았다.
마우스를 또한 주사 후 96시간에 간독성, 신독성 및 췌장 독성의 상관관계에 대해 분석하였다. 단일 용량의 1000μg 항-HER3 항체의 투여 후 검출된 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST), 혈중 요소 질소(BUN), 크레아티닌(CREA), 알칼리성 포스파타제(ALP), 글루코스(GLU), 칼슘(CAL), 총 빌리루빈(BIL), 총 단백질(TPR) 및 알부민(ALB)의 수준은 Charles River 기준 범위 내에 있는 것으로 밝혀졌으며, PBS-처리군에서의 이러한 마커 수준과 유의하게 다르지 않았다. 이들은 도 51c 내지 도 51f에 나타내어져 있다. 왼쪽 막대는 비히클을 나타내고, 오른쪽 막대는 10D1 처리를 나타내며, Charles River 기준 범위의 종점은 점선으로 표시된다. 10D1 처리는 신장, 간 또는 췌장 지표에 영향을 미치지 않았으며, 따라서 정상적인 신장, 간 또는 췌장 기능에 영향을 미치지 않는다.
5.3
생체내
암을 치료하는 효능의 분석
대략 6-8주령의 암컷 NCr 누드 마우스는 InVivos (Singapore)로부터 구입하였다. 동물은 특정 병원체-비함유 조건하에서 사육하였으며 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee) 지침에 따라 다루었다.
사용된 세포주는 N87 세포(위암), FaDu 세포(두경부암), OvCAR8 세포(난소암), SNU16 세포(위암), HT29 세포(결장직장암), A549 세포(폐암), HCC95 세포(폐암) 및 AHCN 세포(신장암)를 포함하였다.
종양 용적은 디지털 캘리퍼를 사용하여 일주일에 3회 측정하고 [L x W2/2] 공식을 사용하여 계산하였다. 연구 종점은 대조군의 종양 길이가 >1.5cm로 측정되면 도달한 것으로 간주되었다.
5.3.1 N87 모델
도 20은 N87 세포주 유래 마우스 위암 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 N87 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 10회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였다; 대조 처리균은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~76%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
도 21은 항-HER3 항체 클론 4-35-B4를 11mg/kg(총 4회 용량)의 용량으로 매주 IP 투여한 유사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 항-HER3 항체 클론 4-35-B4는 유사하게 이 모델에서 매우 강력하고 종양 성장을 ~60%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.2
SNU16
모델
도 22는 SNU16 세포주 유래 마우스 위 암종 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 SNU16 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 9회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~68%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.3
FaDu
모델
도 23은 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 FaDu 세포를 암컷 NPG 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(NOD scid 감마 표현형; n = 치료군당 6마리 마우스).
10D1은 (총 4회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 매주 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용량의 PBS 또는 동일한 용량의 이소타입 대조 항체를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~85%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
도 24는 두경부 편평세포 암종의 FaDu 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 FaDu 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 8회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하고 ~86%까지 종양 성장을 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.4
OvCAR8
모델
도 25는 난소 암정의 OvCAR8 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 OvCAR8 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 9회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~74%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.5
HCC
-95 모델
도 26은 편평세포 폐 암종의 HCC-95 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 HCC-95 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 4회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~90%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.
6 A549
모델
도 27은 폐 선암종의 A549 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 A549 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 10회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하며 종양 성장을 ~91%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
도 28은 암컷 NPG 마우스(NOD scid 감마 표현형)의 오른쪽 옆구리에 1 x 106개 A549 세포를 주사하여 확립된 A549 세포주 유래 모델에서 항-HER3 항체 클론 4-35-B2의 항암 효과를 조사한 유사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 항-HER3 항체 클론 4-35-B2는 (총 4회 용량에 대해) 용량당 500μg의 용량으로 매주 IP 투여하였다. 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다(치료군당 6마리 마우스).
항-HER3 항체 클론 4-35-B2는 유사하게 이 모델에서 매우 강력하고 종양 성장을 ~63%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.3.6
ACHN
모델
도 29는 신세포 암종의 ACHN 세포주 유래 마우스 모델에서 항-HER3 항체 10D1(실시예 2.2의 [1])의 항암 효과를 조사한 실험에서 수득된 결과를 보여준다. 이 모델은 1 x 106개 ACHN 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 주사함으로써 확립되었다(치료군당 n=6마리 마우스).
10D1은 (총 7회 용량에 대해) 용량당 500μg으로 격주로 IP 투여하였고; 대조 치료군은 동일한 용적의 PBS를 제공받았다.
항-HER3 항체 클론 10D1은 이 모델에서 매우 강력하고, 종양 성장을 ~61%까지 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
5.4 위
암종의
치료
인간 최초
트라스투주맙을 투여받지 못했거나 투여할 수 없는 HER2+ 진행성 위암 환자는 안전성-조정된 '최소 예상 생물학적 효과 수준'(Minimal Anticipated Biological Effect Level, MABEL) 접근법에 따라 계산된 용량으로 다음으로부터 선택된 항-HER3 항체의 정맥내 주사에 의해 치료된다: 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92 및 10D1_c93. 환자는 투여 후 28일 동안 모니터링된다.
그후 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE)에 따라 환자를 평가하여 치료의 안전성 및 내약성을 결정하고, 분자의 약동학을 결정한다.
항-HER3 항체를 사용한 치료는 안전하고 내약성이 있는 것으로 밝혀졌다.
용량 증량 - 단독요법
트라스투주맙을 투여받지 못했거나 투여할 수 없는 HER2+ 진행성 위암 환자 12-48명은 과다복용 제어(EWOC) 용량 증량을 사용한 3+3 모델 기반 증량에 따라 다음으로부터 선택된 항-HER3 항체의 정맥내 주사에 의해 치료된다: 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92 및 10D1_c93 (예를 들어 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91; 예를 들어 10D1_c89).
그후 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE)에 따라 환자를 평가하여 치료의 안전성 및 내약성을 결정하고, 분자의 약동학 및 치료 효능을 평가한다. 최대 허용 용량(MTD) 및 최대 투여 용량(MAD)을 또한 결정한다.
용량 증량 - 병용 요법
트라스투주맙을 투여받지 못한 HER2+ 진행성 위암 환자 9-18명은 항-PD-L1 항체(3mg/kg)를 사용한 3+3 모델 기반 증량에 따라 트라스투주맙과 조합하여 다음으로부터 선택된 항-HER3 항체의 정맥내 주사에 의해 치료된다: 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92 및 10D1_c93 (예를 들어 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91; 예를 들어 10D1_c89).
그후 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE)에 따라 환자를 평가하여 치료의 안전성 및 내약성을 결정하고, 분자의 약동학 및 치료 효능을 평가한다.
용량 확장
최근 트라스투주맙를 투여받지 못했고 종양이 유전적 및 조직학적으로 잘 특성화된 HER2+ 진행성 위암 환자는 트라스투주맙, 시스플라틴, 및 5-FU 또는 카페시타빈과 조합하여 다음으로부터 선택된 항-HER3 항체로 치료된다: 10D1, 10D1_c75, 10D1_c76, 10D1_c77, 10D1_c78v1, 10D1_c78v2, 10D1_11B, 10D1_c85v1, 10D1_c85v2, 10D1_c85o1, 10D1_c85o2, 10D1_c87, 10D1_c89, 10D1_c90, 10D1_c91, 10D1_c92, 10D1_c93 (예를 들어 10D1_c89, 10D1_c90 또는 10D1_c91; 예를 들어 10D1_c89).
항-HER3 항체는 안전하고 내약성이 있으며, 암세포의 수/비율을 줄이고, 종양 세포 마커 발현을 감소시키며, 무진행 생존율을 증가시키고, 전체 생존율을 증가시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
실시예
6: 친화성
성숙되고
인간화된 클론
부모 마우스 항체 10D1P의 가변 영역의 인간화는 CDR 이식에 의해 수행되었다. 이식을 위한 인간 프레임워크 서열을 인간 V 도메인 데이터베이스에 대해 부모 아미노산 서열을 블라스팅하여 식별하고, 부모 서열에 대해 가장 높은 동일성을 가진 유전자를 선택하였다. 마우스 CDR을 선택된 인간 프레임워크에 이식시, 프레임워크의 정준 위치에 있는 잔기는 항원 결합을 보존하기 위해 부모 마우스 서열로 복귀 돌연변이되었다. 10D1P의 총 9개의 인간화 변이체가 설계되었다.
인간 HER3에 대한 친화도는 효모 디스플레이를 사용한 2 라운드의 친화성 성숙에 의해 증가되었다. 첫 번째 라운드에서는, 무작위 돌연변이 유발에 의해 9개의 설계된 변이체의 혼합 라이브러리를 작제하고, 비오틴화된 항원을 사용하여 유세포 분석으로 스크리닝하였다. 두 번째 라운드에서는 첫 번째 라운드에서 단리된 하나의 중쇄 클론과 하나의 경쇄 클론을 주형으로 사용하여 두 번째 라이브러리를 생성하고 스크리닝하였다. 총 10개의 인간화되고 친화성 성숙된 클론이 단리되었다.
10D1P의 설계되고 단리된 인간화 변이체의 가변 영역에서의 잠재적 책임(면역원성, 당화 부위, 노출된 반응성 잔기, 응집 가능성)는 인실리코 예측 도구를 사용하여 평가하였다. 서열은 IEDB 탈면역 도구를 사용하여 탈면역하였다. 10D1F의 최종 서열은 이의 발달가능성 특성 뿐만 아니라 시험관내 물리화학적 및 기능적 특성에 기반하여 최적화된 변이체 중에서 선택하였다.
클론 10D1F는 서열 번호 36의 VH 및 서열 번호 83의 VL을 포함한다. 10D1F는 인간 중쇄와 89.9% 상동성 및 인간 경쇄와 85.3% 상동성을 나타낸다.
10D1F 가변 영역 및 인간 IgG1 불변 영역을 포함하고 서열 번호 206 및 207의 폴리펩티드로 구성되는 항원-결합 분자는 10D1F.FcA로 지정된다(또한 본원에서 때때로 "10D1F.A" 또는 "항-HER3 클론 10D1_c89 IgG1"로 지칭된다 - 예를 들어, 실시예 2.2의 [16] 참조).
실시예
7:
Fc
조작
10D1 및 10D1 변이체를 항체의 효능을 증가시키기 위해, 예를 들어 Fc 이펙터 기능을 최적화하고, 항체-의존성 세포 독성(ADCC) 및/또는 항체-의존성 세포 식균작용(ADCP)을 향상시키고, 반감기를 개선하기 위해 CH2 및/또는 CH3 영역에 돌연변이를 포하하도록 조작하였다.
클론 10D1 및 10D1F.FcA의 Fc 영역은 CH2 영역에 변형체 'GASDALIE'(G236A, S239D, A330L, I332E) 및 'LCKC'(L242C, K334C)를 포함하도록 변형시켰다. GASDALIE 치환은 C1q(AL)에 대한 친화도를 감소시키고 CDC를 감소시키는 반면 FcγRIIa(GA) 및 FcγRIIIa(SDALIE) 수용체에 대한 친화도를 증가시키고 ADCP 및 NK-매개 ADCC(실시예 8.8 참조)를 향상시키는 것으로 밝혀졌다. LCKC 치환은 새로운 분자내 이황화 다리를 생성함으로써 Fc 영역의 열 안정성을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.
GASDALIE 및 LCKC 돌연변이를 포함하는 10D1F.FcA 중쇄 폴리펩티드의 변형된 버전은 서열 번호 225에 나타내어져 있다. 서열 번호 225 및 207의 폴리펩티드로 구성되는 항원-결합 분자는 10D1F.FcB로 지정된다(또한 본원에서 때때로 "10D1F.B"로 지칭됨).
CH2 영역에 GASDALIE 및 LCKC 치환을 포함하는 10D1의 변형된 버전을 제조하고 Fc 수용체 FcγRIIIa와 결합하는 능력을 생물층 간섭측정으로 분석하였다. G236A, S239D, A330L, I332E 및 L242C, K334C에 상응하는 치환 GASDALIE 및 LCKC를 포함하는 10D1 VH-CH1-CH2-CH3에 대한 서열은 서열 번호 227에 나타내어져 있다.
간략하게, 항-Penta-HIS (HIS1K) 코팅된 바이오센서 팁(Pall ForteBio, USA)을 사용하여 120초 동안 His-태그된 FcγRIIIa(V158)(270nM)를 포획하였다. 모든 측정은 1000rpm에서 교반하면서 25℃에서 수행하였다. 항원 결합에 대한 결합 역학 측정은 항-HER3 항체를 상이한 농도(500nM 내지 15.6nM)로 60초 동안 배양한 다음 바이오센서를 분석 완충액(pH 7.2) 함유 웰로 옮겨 120초의 해리 시간을 수행함으로써 수행하였다. 완충 효과에 대해 센소그램을 참조한 다음 Octet QK384 사용자 소프트웨어(Pall ForteBio, USA)를 사용하여 피팅하였다. 역학 반응은 결합(Kon), 해리(Koff) 속도 상수 및 평형 해리 상수(KD)에 대한 값을 수득하기 위해 단일 부위 결합 모델을 사용한 전역 피팅을 거쳤다. 소프트웨어(R2>0.90)로 안정적으로 피팅될 수 있는 곡선만 분석에 포함되었다.
변이체의 열안정성은 또한 실시예 3.4에 기재된 바와 같이 시차 주사 형광측정 분석에 의해 분석하였다.
도 38a 및 도 38b는 GASDALIE 및 LCKC Fc 치환을 포함하는 10D1에 대한 BLI 분석 및 열안정성 분석을 각각 보여준다. Fc 조작된 10D1 변형체는 60℃ 이상으로 유지된 열 안정성을 갖는 비-Fc-조작된 10D1(도 39a 참조)에 비해 FcγRIIIa에 대한 유의하게 개선된 결합을 보였다(친화도 ~9배 증가).
CH2 영역에 GASD 치환을 포함하는 10D1에 대한 작제물을 또한 제조하였다; G236A 및 S239D에 상응하는 치환을 포함하는 10D1 VH-CH1-CH2-CH3의 서열은 서열 번호 228에 나타내어져 있다.
항-HER3 항체 클론 10D1(실시예 2.2의 [1]) 및 이의 GASD 변이체의 친화도는 FcγRIIIa에 대한 결합의 친화도에 대해 생물층 간섭측정에 의해 분석하였다. BLI는 상기한 바와 같이 수행하였다.
도 39a 및 도 39b는 대표적인 센서그램, Kon, Koff 및 KD 값을 보여준다. 예상대로, 10D1 GASD 변이체(39b)는 10D1(39a)에 비해 FcγRIIIa에 대한 극적으로 증가된 친화도를 나타내었다.
10D1 GASD 변이체의 열안정성은 또한 실시예 3.4에 기재된 바와 같이 시차 주사 형광측정 분석에 의해 분석하였다. 결과는 도 40에 나타내어져 있다.
추가
10D1F
Fc
변이체
CH2 영역에 N297Q 치환을 포함하는 또 다른 항체 변이체를 생성하였다. N297Q 치환을 포함하는 10D1F VH-CH1-CH2-CH3에 대한 대표 서열은 서열 번호 226에 나타내어져 있다. 이러한 '침묵의 형태'는 Fc 영역의 N-결합된 당화 및 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합을 모두 방지하며 음성 대조군으로서 사용된다.
도 41a 및 도 41b는 상기한 바와 같이 결정된 인간 및 마우스 Fc 수용체에 대한 10D1F hIgG1 Fc 변이체 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 결합 친화도를 보여준다. 10D1F.FcB는 비-변형된 10D1F.FcA 또는 상업적으로 이용 가능한 항체에 비해 인간 및 마우스 Fcγ 및 FcRn 수용체에 대한 유의하게 개선된 결합을 보이는 것으로 밝혀졌다. ND = KD가 낮은 결합 친화도로 인해 결정되지 않음.
실시예
8: 인간화된 변형 클론의 특성화
8.1
유세포
분석에 의한 세포 표면 항원-결합의 분석
야생형(WT) HEK293 세포(높은 수준의 HER3를 발현하지 않음) 및 인간 HER3을 암호화하는 벡터로 형질감염된 HEK293 세포(즉, HEK293 HER O/E 세포)를 10μg/ml의 인간화 항-HER3 항체 10D1F.FcA(10D1F), 항-HER3 항체 10D1(10D1P) 또는 이소타입 대조 항체와 함께 4℃에서 1.5시간 동안 배양하였다. 항-HER3 항체 클론 LJM716(예를 들어, 문헌[Garner et al., Cancer Res (2013) 73:6024-6035] 및 실시예 3.5에 기재됨)은 양성 대조군으로서 분석에 포함되었다.
세포를 완충액(2mM EDTA 및 0.5% BSA를 함유한 PBS)으로 세척하고, 4℃에서 20분 동안 10μg/ml의 FITC-접합 항-FC 항체(Invitrogen, USA)에 재현탁시켰다. 세포를 다시 세척하고 MACSQuant 10(Miltenyi Biotec, Germany)을 사용한 유세포 분석을 위해 200μL의 FACS 유동 완충액(5mM EDTA를 갖는 PBS)에 재현탁시켰다. 염색되지 않은 WT 및 형질감염된 HEK293 세포가 음성 대조군으로서 분석에 포함되었다. 수집 후 모든 원시 데이터는 Flowlogic 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 전방 및 측면 산란 프로파일을 사용하여 세포를 게이팅하고 양성 세포의 백분율을 천연 및 과발현 세포 집단에 대해 결정하였다.
결과는 도 42a 및 도 42b에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 높은 특이성으로 인간 HER3에 결합하는 것으로 나타났다(42a). 10D1F.FcA, 10D1P 및 LJM716은 유사한 정도로 인간 HER3-발현 세포에 결합하는 것으로 나타났다(42b).
8.2 항체 특이성 및 교차-반응성을 측정하기 위한 ELISA
ELISA는 10D1F.FcA 항체의 결합 특이성을 확인하기 위해 사용하였다. 항체는 인간 HER3 폴리펩티드 뿐만 아니라 인간 HER1(EGFR) 및 인간 HER2(Sino Biological Inc., China)에 결합하는 이들의 능력에 대해 분석하였다. 인간 IgG 이소타입 및 관련 없는 항원이 음성 대조군으로 포함되었다.
ELISA는 표준 프로토콜에 따라 수행하였다. 플레이트를 4℃에서 16시간 동안 인산염 완충 염수(PBS) 중의 0.1μg/ml의 표적 폴리펩티드로 코팅하였다. 실온에서 트리스 완충 염수(TBS) 중의 1% BSA로 1시간 동안 차단한 후, 항-HER3 항체를 최고 농도인 10μg/ml로 연속적으로 희석하여 플레이트에 첨가하였다. 실온에서 1시간 배양한 후, 플레이트를 0.05% Tween 20을 함유하는 TBS(TBS-T)로 3회 세척한 다음 실온에서 1시간 동안 HRP-접합 항-His 항체(Life Technologies, Inc., USA)와 함께 배양하였다. 세척 후, 플레이트를 비색 검출 기질 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(Turbo-TMB; Pierce, USA)으로 10분 동안 현상시켰다. 반응을 2M H2SO4로 중단시키고 OD를 450nM에서 측정하였다.
결과는 도 43에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 고농도 항체에서도 인간 HER2 또는 인간 HER1(EGFR)에 결합하지 않는 것으로 나타났다.
HER4와 결합하는 10D1F.FcA의 능력은 유세포 분석을 사용하여 분석하였다. 야생형(WT) HEK293 세포(높은 수준의 HER4를 발현하지 않음) 및 인간 HER4를 암호화하는 벡터로 형질감염된 HEK293 세포(즉, HEK293 HER O/E 세포)를 4℃에서 1.5시간 동안 10μg/ml의 항-HER3 항체 10D1F.FcA(10D1F) 또는 이소타입 대조 항체(음성 대조군)와 함께 배양하였다. 실시예 3.5에 기재된 바와 같이, 항-HER3 항체 클론 LJM716(예를 들어, 문헌[Garner et al., Cancer Res (2013) 73:6024-6035]에 기재됨) 및 MM-121(세리반투맙)은 양성 대조군으로서 분석에 포함되었다. 또한 상업용 항-HER4 항체(Novus, Cat: FAB11311P)가 포함되었다. 염색되지 않은 HEK293 세포는 음성 대조군으로서 분석에 포함되었다.
HEK293 세포를 4℃에서 1시간 동안 각 항체 10μg/ml와 함께 배양하였다. 유세포 분석은 상기한 바와 같이 수행하였다. 세포를 4℃에서 30분 동안 FITC-접합 항-FC 항체(Invitrogen, USA)와 접촉시켰다.
결과는 도 44에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 세포-표면 발현된 HER4에 결합하지 않는 것으로 밝혀졌다.
또한, 항체 10D1F.FcA는 마우스, 래트 및 원숭이로부터의 HER3 폴리펩티드 상동체에 결합하는 능력에 대해 분석하였다(Sino Biological Inc., China). M. 무스쿨루스(M. musculus), R. 노르베기쿠스(R. norvegicus) 및 M. 시노몰구스(M. cynomolgus) HER3 상동체는 인간 HER3과 각각 91.1, 91.0 및 98.9% 서열 동일성을 공유하며 HER3 신호전달 경로는 4가지 종 간에 보존된다.
ELISA는 상기와 같이 수행하였다.
결과는 도 45에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA 항체는 HER3 시노, 마우스, 래트 및 인간 오르소로그에 높은 친화도로 결합하여 종 간에 상당한 교차-반응성을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
8.3 Octet QK384 시스템을 사용한 전역 친화도 연구
항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 인간 HER3에 대한 결합 친화도에 대해 분석하였다.
생물층 간섭측정(BLI) 실험은 Octet QK384 시스템(ForteBio)을 사용하여 수행하였다. 항체(25nM)를 항-인간 IgG 포획(AHC) Octet 센서 팁(Pall ForteBio, USA)에 코팅하였다. 결합은 적정된 HIS-태그된 인간 HER3를 사용하여 기준선(60초), 로딩(120초), 기준선2(60초), 결합(120초), 해리(FcA 120초, FcB 600초) 및 재생(15초) 단계에서 검출하였다. 항원 농도는 도 46a 및 도 46b의 표에 나타내어져 있다. 센서그램은 실시예 3.3에 기재된 바와 같이 분석하였다. 결합(Kon), 해리(Koff) 속도 상수 및 평형 해리 상수(KD)에 대한 값을 수득하였다.
클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 분석에 대한 대표적인 센서그램이 도 46a 및 도 46b에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 KD = 72.6 pM의 높은 친화도로 인간 HER3에 결합한다(46a). 10D1F.FcB는 KD = 22.2 pM의 높은 친화도로 인간 HER3에 결합한다(46b).
8.4 시차 주사 형광측정에 의한
열안정성의
분석
시차 주사 형광측정은 실시예 3.4에 기재된 바와 같이 항체 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB에 대해 수행하였다.
항체 클론 10D1F.FcA의 열안정성에 대한 시차 주사 형광측정 분석에 대해 수득된 원시 데이터의 1차 도함수는 도 47a에 나타내어져 있다. 항체의 3개의 상이한 샘플을 분석하였으며 Tm은 70.0℃인 것으로 결정되었다.
항체 클론 10D1F.FcB의 열안정성에 대한 시차 주사 형광측정 분석에 대해 수득된 원시 데이터의 1차 도함수는 도 47b에 나타내어져 있다. 항체의 3개의 상이한 샘플을 분석하였으며 Tm은 62.7℃인 것으로 결정되었다.
8.5 항체 순도 분석
항체 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 순도는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 분석하였다. 500 μl PBS pH 7.2 중의 10D1F.FcA 150 μg 또는 500 μl PBS pH 7.45 중의 10D1F.FcB 150 μg을 실온에서 각각 0.75 min/ml 또는 0.5 min/ml의 유속으로 PBS 실행 완충액에서 Superdex 200 10/30 GL 컬럼에 주입하고 통과액의 A280을 기록하였다.
결과는 도 48a(10D1F.FcA) 및 48b(10D1F.FcB)에 나타내어져 있다.
8.6 항-
HER3
항체
10D1F.FcA
에피토프의
분석
항-HER3 항체 10D1F.FcA는 HER3에 결합하기 위해 항-HER3 항체 M-05-74 또는 M-08-11(Roche)과 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해 분석하였다. M-05-74 및 M-08-11의 에피토프는 모두 도메인 II에 위치한 HER3 이량체화 암의 β-헤어핀 구조에 매핑되었다. M-08-11은 HER4에 결합하지 않는 반면, M-05-74는 HER4 이량체화 암을 인식한다. HER3에 대한 M-05-74 및 M-08-11의 결합은 리간드(NRG) 비의존적이다.
BLI 실험은 하나를 변경하여 실시예 3.5에 기재된 바와 같이 수행하였다: 400nM의 경쟁 항체가 사용되었다. M-05-74 및 M-08-11 항체의 가변 영역은 인간 IgG1 및 Ig카파 Fc 골격을 갖는 PDZ 벡터에서 클로닝되었다.
분석의 결과는 도 49a 및 도 49b에 나타내어져 있다. 항-HER3 10D1F.FcA 항체는 HER3에 결합하기 위해 M-05-74 또는 M-08-11과 경쟁하지 않는 것으로 밝혀졌다. 10D1F.FcA는 M-05-74 및 M-08-11에 비해 HER3의 뚜렷하고 위상학적으로 동떨어진 에피토프와 결합하는 것으로 밝혀졌다. HER3에 대한 10D1F.FcA의 결합은 리간드(NRG) 비의존적이다.
결론:
· 인간 HER3에 대한 10D1F.FcA의 결합은 리간드-비의존적 방식으로 달성 될 수 있다.
· 10D1F.FcA 결합 에피토프는 M-05-74 및 M-08-11와는 구별되고 위상학적으로 동떨어져 있다.
8.7
HER2
-
HER3
및
EGFR
-
HER3의
이량체화의
억제
항-HER3 항체 10D1F.FcA는 HER3 및 HER2의 이종이량체화를 억제하는 능력에 대해 분석하였다.
플레이트-기반 ELISA 이량체화 분석은 표준 프로토콜에 따라 수행하였다. 플레이트를 1μg/ml HER2-Fc 단백질로 코팅하였다. 차단 및 세척 후, 플레이트를 상이한 농도의 후보 항체 10D1F.FcA, MM-121, LJM716, 퍼투주맙, Roche M05, Roche M08 또는 이소타입 대조물 및 불변 HER3 His 2μg/ml 및 NRG 0.1μg/ml와 함께 1시간 동안 배양하였다. 그후 플레이트를 세척하고 2차 항-HIS HRP 항체와 함께 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 세척하고, TMB로 10분 동안 처리하고, 2M H2SO4 정지 용액을 사용하여 반응을 정지시켰다. 450nm에서 흡광도를 판독하였다.
결과는 도 52에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA는 용량 의존적 방식으로 HER2와 HER3 사이의 상호작용을 직접적으로 억제하는 것으로 밝혀졌다.
또 다른 분석에서는 이량체화의 억제는 PathHunter® 퍼투주맙 생물검정 키트(DiscoverX, San Francisco, USA)를 사용하여 검출하였다. HER2 및 HER3 과발현 U20S 세포를 1ml의 예열된 CP5 배지를 사용하여 해동하고, 5K 세포를 37℃, 5% CO2에서 4시간 동안 시딩하였다. 세포를 8-점 연속 희석으로 25μg/ml부터 시작하여 연속적으로 희석된 농도의 10D1F.FcA, 세리반투맙 또는 퍼투주맙으로 처리하였다. 4시간 배양 후, 30ng/ml의 헤레굴린-β2를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 16시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 10μL PathHunter 생물검정 검출 시약 1을 첨가하고 어두운 곳에서 실온에서 15분 동안 배양한 다음 40μL PathHunter 생물검정 검출 시약 2를 첨가하고, 그후 어두운 곳에서 실온에서 60분 동안 배양하였다. 플레이트를 Synergy4 Biotek을 사용하여 1초 지연으로 판독하였다.
10D1F.FcA는 HER2-HER3 이종이량체의 억제에 대해 3.715e-11의 EC50 값을 갖는 것으로 밝혀졌다. 동일한 분석에서, 세리반투맙/MM-121에 대한 상대적 EC50 값은 6.788e-10인 것으로 밝혀졌고, 퍼투주맙에 대한 상대적 EC50 값은 2.481e-10인 것으로 밝혀졌다.
항-HER3 항체 10D1F.FcA는 EGFR 및 HER3의 이종이량체화를 억제하는 능력에 대해 분석하였다.
플레이트-기반 ELISA 이량체화 분석은 표준 프로토콜에 따라 수행하였다. 플레이트를 1μg/ml의 인간 EGFR-His로 코팅하였다. 차단 및 세척 후, 플레이트를 상이한 농도의 후보 항체 10D1F.FcA, MM-121, LJM716, 퍼투주맙, 또는 불변 HER3-비오틴 4μg/ml 및 NRG 0.1μg/ml를 갖는 이소타입 대조군과 함께 1시간 동안 배양하였다. 그후 플레이트를 세척하고, 2차 항-아비딘 HRP 항체와 함께 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 세척하고, TMB로 10분 동안 처리하고, 2M H2SO4 정지 용액을 사용하여 반응을 정지시켰다. 450nm에서 흡광도를 판독하였다.
결과는 도 53에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA는 용량 의존적 방식으로 EGFR과 HER3 사이의 상호작용을 직접 억제하는 것으로 밝혀졌다.
8.8
ADCC를
유도하는 능력의 분석
항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 유도하는 능력에 대해 분석하였다.
표적 세포(HER3를 과발현하는 HEK293)를 20,000개 세포/웰의 밀도로 U-바닥 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 10D1F.FcA, 10D1F.FcB, 10D1F.FcA_N297Q (침묵 형태), LJM-716, Seribantumab (MM-121) 중 하나의 희석 시리즈(50,000ng/ml - 0.18ng/ml)로 처리하거나 처리하지 않은 상태로 두고, 37℃ 및 5% CO2에서 30분 동안 배양하였다. 이펙터 세포(인간 자연 살해 세포주 No-GFP-CD16.NK-92; 176V)를 60,000개 세포/웰의 밀도로 표적 세포를 함유하는 플레이트에 첨가하였다.
다음의 대조군이 포함되었다: 표적 세포 최대 LDH 방출(표적 세포 단독), 자발적 방출(표적 세포 및 항체가 없는 이펙터 세포), 배경(배양 배지 단독). 플레이트를 스핀 다운하고 37℃ 및 5% CO2에서 21시간 동안 배양하였다.
LDH 방출 분석(Pierce LDH 세포독성 분석 키트): 분석 전에, 10μl의 용해 완충액(10X)를 표적 세포 최대 LDH 방출 대조군에 첨가하고 37℃ 및 5% CO2에서 20분 동안 배양하였다. 배양 후, 플레이트를 스핀 다운하고 50μL의 상청액을 투명한 평저 96웰 플레이트로 옮겼다. 기질을 함유하는 LDH 분석 혼합물 50μl를 상청액에 첨가하여 반응을 시작하고, 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 50 μl의 정지 용액을 첨가하여 반응을 정지시키고 BioTek Synergy HT 마이크로플레이트 판독기로 490nm 및 680nm에서 흡광도를 기록하였다.
데이터 분석을 위해, 시험 샘플로부터의 흡광도를 표적 세포 및 이펙터 세포로부터의 배경 및 자발적 방출에 대해 보정하였다. 시험 샘플의 세포독성 퍼센트를 표적 세포 최대 LDH 방출 대조군에 대해 계산하고 항체 농도의 함수로서 플롯팅하였다.
결과는 도 54에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcB는 용량 의존적 방식으로 HER3 과발현 세포에 대한 강력한 ADCC 활성을 유도하는 것으로 밝혀졌다.
8.9
HER3
-
매개된
신호전달의 억제
항-HER3 항체 10D1F.FcA는 암 세포주에서 시험관내에서 HER-3 매개된 신호전달을 억제하는 능력에 대해 분석하였다.
N87, FaDu 또는 OvCAR8 세포를 5% CO2로 37℃에서 밤새 10% 혈청이 있는 6웰 플레이트의 웰에 시딩하였다. 세포를 0.2% FBS 배양 배지로 16시간 동안 기아시킨 다음 세포주에 상응하는 IC50에서 상이한 항체로 0.5시간 동안 처리하였다. 시험된 항체는 10D1F.FcA(10D1), 세리반투맙(SBT), 엘레겜투맙(LJM), 퍼투주맙(PTM), 세툭시맙(CTX), 및 트라스투주맙(TZ)이었다.
수확 전에, 세포를 100ng/ml의 NRG1로 자극하였다. 세포주로부터 추출된 단백질은 표준 Bradford 단백질 분석을 사용하여 정량화하였다. 단백질 샘플(50μg )을 SDS-PAGE로 분별하여 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 그후 막을 차단하고 지시된 항체로 면역블롯팅하였다. 결과는 Bio-Rad Clarity Western ECL 기질을 통해 시각화되었다. 블롯은 밀도 분석을 사용하여 정량화하였으며 데이터는 베타 액틴에 대해 정규화되었다.
결과는 도 55a 내지 도 55c에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 N87 (55A), FaDu (55B), OvCar8 (55C) 및 A549 (55D) 세포주에서 HER3 인산화 및 다운스트림 신호전달을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
N87 세포, A549 세포, OvCar8 세포 및 FaDu 세포를 사용한 실험의 경우 항체 처리 후 16시간에 총 RNA를 추출하여 유전자 세트 농축 분석에 의한 주요 신호 전달 경로 단백질의 발현 수준에 기초하여 경로 활성화를 결정하기 위해 분석하였다.
분석의 결과는 도 63a 내지 도 63d에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 다운스트림 신호전달의 가장 효과적인 억제제였다.
A549 세포를 사용한 추가 실험에서, 세포를 상이한 항체로 0.5시간 또는 4시간 동안 처리한 것을 제외하고는 상기와 같이 시험관내 인산화 분석을 수행하였다. 결과는 도 64에 나타내어져 있다.
8.10 '개방' 및 '폐쇄' 형태로 제공되는
HER3에
대한 결합의 분석
추가 실험에서, NRG1 복합체의 부재하에서의 인간 HER3(즉, 결합되지 않은 '폐쇄" 형태로 제공된 HER3)에 대한 결합의 친화도와 비교하여, 인간 HER3:인간 NRG1 복합체의 맥락에서 인간 HER3(즉, 리간드-결합된 '개방' 형태로 제공된 HER3)에 대한 결합의 친화도를 결정하기 위해 항-HER3 항체를 분석하였다.
인간 HER3에 대한 항-HER3 항체의 결합은 BLI에 의해 평가하였다. 간략하게, 항-인간 IgG 포획(AHC) 센서(ForteBio)에 항-HER3 IgG 항체(25nM)를 로딩하였다. 역학 측정은 NRG1의 부재 또는 존재하에서 수행하였다. NRG1은 HER3과 함께 1:1 몰비로 사용되었으며, 여기서 복합체는 RT에서 2시간 동안 형성되도록 허용되었다. His-태그된 인간 HER3 또는 HER3-NRG1 복합체를 120초 동안 상이한 농도로 항체 코팅된 AHC 센서에 로딩한 다음 120초의 해리 시간을 진행하였다. 모든 측정은 1000rpm에서 교반하면서 25℃에서 수행하였다. 완충 효과에 대해 센소그램을 참조한 다음 Octet QK384-소프트웨어(ForteBio)를 사용하여 분석하였다. 역학 반응은 결합(Kon), 해리(Koff) 속도 상수 및 평형 해리 상수(KD)에 대한 값을 수득하기 위해 단일 부위 결합 모델을 사용한 전역 피팅되었다.
하기 항-HER3 항체를 실험에서 분석하였다: 10D1F. A(실시예 2.2의 [16]), MM-121 및 LJM-716.
결과는 도 78a 내지 도 78f에 나타내어져 있다. 10D1F.A는 NRG1의 존재 또는 부재하에서 피코몰 이하의 친화도로 인간 HER3에 결합하는 것으로 밝혀졌다(도 78a 및 78b). MM-121은 NRG1의 존재 또는 부재하에서 나노몰로 인간 HER3에 결합된다(도 78c 및 78d). LJM-716은 NRG1의 부재하에서 피코몰 이하의 친화도로 인간 HER3에 결합한다(도 78e). 그러나, NRG1의 존재하에서, HER3에 대한 결합은 극적으로 감소되었다(도 78f).
8.11 결론
종합하면, 결과는 10D1F를 HER3의 에피토프에 결합하여 (i) EGFR 또는 HER2로 HER3의 이종이량체를 경쟁적으로 억제하고(실시예 8.7 및 도 52 및 53 참조), (ii) NRG1의 존재 또는 부재하에 HER3과 유사하게 잘 결합하는(도 78a 및 78b) 특성의 고유한 조합을 제공하는 항-HER3 항체임을 확인하였다.
실시예
9:
시험관내
및
생체내
인간화되고 변형된 클론의 분석
9.1 약동학 분석
정맥내 투여된 항-HER3 항체 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB의 약동학을 마우스 및 래트에서 평가하였다. 10D1F.FcA는 본원에서 HMBD-001로도 지칭된다. 래트 및 마우스에서 약동학 분석을 위한 매개변수는 비구획 모델로부터 유도되었다: 최대 농도(Cmax), AUC(0-336hr), AUC(0-무한대), 반감기(t1/2), 청소율(CL), 정상 상태에서의 분포 용적(Vd). 모든 동물 연구는 지역 윤리 위원회 요건, 부문 표준 및 관련 법률을 엄격히 준수하여 수행하였다.
마우스
500μg 항-HER3 항체 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB를 투여하고, 기준선(-2시간), 투여 후 6시간, 24시간, 96시간, 168시간 및 336시간에 혈액을 수득하였다. 혈청 내 항체를 ELISA에 의해 정량화하였다.
결과는 도 56a 및 도 56b에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA는 NCr 누드 마우스에서 253시간의 반감기를 갖는 것으로 밝혀졌고(56a) 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcB는 273시간의 반감기를 갖는 것으로 밝혀졌다(56b).
래트
10D1F 변이체는 암컷 Sprague Dawley 래트에서 단일 용량 약동학 프로파일을 결정하기 위해 분석하였다.
항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 꼬리 정맥 느린 i.v. 주사를 통해 4 mg (∼10 mg/kg), 10 mg (∼25 mg/kg), 40 mg (∼100 mg/kg) 또는 100 mg (∼250 mg/kg)의 단일 용량으로 투여하였다. 비히클은 음성 대조군으로 투여하였다. 기준선(-24시간), 투여 후 6시간, 24시간, 96시간, 168시간 및 336시간에 혈액을 수득하였다. 혈청 내 항체는 ELISA에 의해 정량화하였다.
결과는 도 57a(10mg/kg), 57b(25mg/kg), 57c(100mg/kg) 및 57d(250mg/kg)에 나타내어져 있다.
9.2 안전성 면역독성
10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 독성학적 효과를 분석하였다.
마우스
BALB/c 마우스에게 200ug(∼10mg/kg), 500ug(∼25mg/kg), 2mg(∼100mg/kg) 또는 5mg(∼250mg/kg) 용량 중 하나의 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB의 단일 용량, 또는 동일한 용적의 PBS를 복강내 주사하였다. 3마리의 마우스에게 각 처리를 주사하였으며, 4마리의 마우스에게는 PBS 대조군을 주사하였다. 혈액 샘플은 주사 후 96시간에 수득하였으며 RBC 지표(총 RBC 수, 헤마토크리트, 혈색소, 혈소판 수, 평균 혈구 용적, 평균 혈구 혈색소, 평균 혈구 혈색소 농도) 및 WBC 지표(총 WBC 수, 림프구 수, 호중구 수, 단핵구 수)에 대해 분석하였다. 분석은 HM5 혈액학 분석기를 사용하여 수행하였다.
결과는 도 58a, 도 58b(적혈구 지표) 및 도 58c(WBC 지표)에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 적혈구 지표에 영향을 미치지 않았지만, 고용량(10D1F.FcA 250mg/kg, 10D1F.FcB 100mg/kg, 10D1F.FcB 250mg/kg)에서는 WBC 지표에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다.
간독성, 신독성 및 췌장 독성을 또한 주사 후 96시간에 분석하였다. 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 알라닌 아미노트랜스퍼라제, 알칼리성 포스파타제, 알부민, 총 단백질(간 지표; 도 58d), 크레아틴, 혈중 요소 질소, 글루코스 또는 아밀라제(신장 및 췌장 지표; 도 58e)의 수준에 영향을 미치지 않았다. 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 전해질 지표 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 인산염에 영향을 미치지 않았다(도 58f).
10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB로 처리한 마우스는 체중, 행동, 피부 상태, 구강 검사, 대변 및 소변 검사 또는 눈 검사에서 96시간 후에도 이상을 보이지 않았다. 정상 크기의 대략 1.5배에 달하는 확대된 비장(비장 비대)은 고용량으로 처리된 마우스에서 관찰되었다: 10D1F.FcA 250 mg/kg, 10D1F.FcB 100 mg/kg, 10D1F.FcB 250 mg/kg.
500 μg (∼25 mg/kg) 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB의 반복 용량의 독성학적 효과를 평가하기 위해 BALB/c 마우스에서 추가 연구를 수행하였다. 항체를 4주 동안 일주일에 한 번 투여하였다. 혈액은 첫 번째 투여 후 28일에 수득하였다. 항체에 대해 RBC, 간, 신장, 췌장 또는 전해질 지표에 대한 영향은 관찰되지 않았으며, 임상적 이상 징후 및 총 부검에서 검출된 차이는 없었다. 총 WBC 수, 림프구 수 및 호중구 수는 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB로 처리된 마우스에서 감소하는 것으로 관찰되었지만 이는 불리한 것으로 간주되지 않았다.
또 다른 연구에서는, BALB/c 마우스에 단일 용량의 10D1F.FcA 또는 동일한 용량의 PBS(비히클 대조군)를 투여하고, 96시간(비히클) 또는 336시간(10D1F.FcA) 후에 분석하였다. 대표적인 결과는 도 69a 내지 도 69c에 나타내어져 있다.
래트
Sprague Dawley 래트에게 4 mg (∼10 mg/kg), 10 mg (∼25 mg/kg), 40 mg (∼100 mg/kg), 100 mg (∼250 mg/kg)의 용량 중 하나로 10D1F.FcA 또는 10D1F.FcB 항체의 단일 용량을 복강내로 주사하였다. 혈액은 -24시간, 6시간, 24시간, 96시간, 168시간 및 336시간에 수득하였다. 주사 후 366시간까지 RBC 지표에 대한 영향은 없었고, WBC 지표에 독성 효과는 없었으며, 간, 신장, 췌장 또는 전해질 지표에는 영향이 없었다. 임상적 이상 징후는 없었고 총 부검에서 검출된 차이도 없었다.
250mg/kg 10D1F.FcA를 투여한 래트로부터 수득된 대표적인 결과는 도 70a 내지 70c에 나타내어져 있다.
설치류 독성학 모델에서 독성 신호의 부재는 임상적 유효 용량에서 이러한 항체의 내약성의 예측인자이다.
추가의 독성역학 연구는 실시예 16.4에 기재되어 있다.
9.3
시험관내
암 치료 효능의 분석
항-HER3 항체 10D1F.FcA는 N87 세포(위암), HCC95 세포(폐암), FaDu 세포(두경부암), SNU-16 세포(위암), A549 세포(폐암), OvCar8 세포(난소암), ACHN 세포(신장암) 및 HT29 세포(대장암)와 같은 다수의 종양 모델에서 시험관내 종양 성장을 억제하는 능력에 대해 분석하였다. 10D1F.FcA 효능을 다른 항-HER3 항체 세리반투맙(MM-121) 및 LJM-716, 및 다른 EGFR 계열 치료제 세툭시맙, 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 비교하였다.
세포를 9-점 희석으로 1500ug/ml에서 시작하여 연속적으로 희석된 농도의 치료 항체로 처리하였다. 세포 생존율은 처리한지 3-5일 후에 CCK-8 세포 증식 분석을 사용하여 측정하였다. 표시된 세포 억제 비율은 완충액(PBS)으로만 처리된 세포를 기준으로 나타내어져 있다. 데이터 포인트는 3회 반복실험의 평균을 나타낸다.
결과는 도 59a 내지 도 59d에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 다른 HER3 항체 (59a & 59b) 및 EGFR 계열 치료제 (59c & 59d)에 비해 다중 종양 모델에서 우수한 시험관내 종양 억제를 입증한다.
도 77a 및 도 77b는 25mg/kg의 관련 항체가 IP 투여된 마우스에서 이들이 달성한 Cmax 농도에서, 시험관내에서 상이한 암 세포주의 증식을 억제하는 상이한 항-ErbB 항체의 능력을 보여준다. 10D1F.FcA는 상이한 암세포 유형의 성장을 억제하는 뛰어난 능력을 나타낸다.
9.4
생체내
암 치료 효능의 분석
항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 생체내 암 모델에서 종양 성장에 대한 이들의 효과에 대해 평가하였다.
9.4.1 A549 모델
종양 세포를 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 삽입하였다. 항체 (25 mg/kg 10D1F. FcA, 10D1F.FcB, 세툭시맙, LJM-716 또는 MM-121) 또는 비히클을 6주 동안 격주로 투여하였다.
결과는 도 60에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 모두 폐암의 A549 모델에서 강력한 효능을 나타내었다. 10D1F.FcBr 특히 강력하며 종양을 퇴행시키는 것으로 밝혀졌다.
9.4.2 FaDu 모델
종양 세포를 마트리겔과 함께 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 삽입하였다. 항체(10 및 25 mg/kg 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB, 또는 25 mg/kg의 세툭시맙, 트라스투주맙, 퍼투주맙, LJM-716 또는 MM-121) 또는 비히클을 6주 동안 일주일에 한 번 투여하였다.
결과는 도 61에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA 및 10D1F.FcB는 두경부암의 FaDu 모델에서 종양 성장을 예방하는 데 효과적인 것으로 밝혀졌다.
9.4.3 OvCar8 모델
종양 세포를 마트리겔과 함께 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 삽입하였다. 항체 (10 및 25 mg/kg 10D1F.FcA, 또는 25 mg/kg 세툭시맙, LJM-716 또는 MM-121) 또는 비히클을 6주 동안 일주일에 한 번 투여하였다.
결과는 도 62에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 클론 10D1F.FcA는 고용량에서 종양 용적을 감소시키는데 효과적인 것으로 밝혀졌다.
9.4.4 N87 모델
종양 세포를 마트리겔과 함께 암컷 NCr 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하삽입한다. 항체 (25 mg/kg 10D1F.FcA 또는 50mg/kg 트라스투주맙, LJM-716 또는 MM-121) 또는 비히클을 6주 동안 격주로 투여하였다.
결과는 도 74에 나타내어져 있다. 항-HER3 항체 10D1F.FcA는 위암의 N87 모델에서 종양 성장을 예방하는 데 효과적인 것으로 밝혀졌다.
실시예
10:
BRAFV600E
돌연변이 갑상선암 세포주의 증식 억제의 분석
하기 세포주를 조사하였다:
세포를 유세포 분석에 의해 EGFR 계열 구성원의 표면 발현에 대해 조사하였다. 간략하게, 300,000개의 세포를 20μg/ml의 10D1F.FcA, 세툭시맙 또는 트라스투주맙과 함께 4℃에서 1시간 동안 배양하였다. Alexafluor 488-접합된 항인간 항체를 2차 항체로서 10μg/ml로 사용하였다(4℃에서 40분).
결과는 도 66a 내지 도 66c에 나타내어져 있다. SW1736, BHT101 및 BCPAP 세포는 EGFR, HER2 및 HER3를 발현하는 것으로 나타났다.
본 발명자들은 V600E BRAF 돌연변이를 지닌 상이한 갑상선암 세포주의 시험관내 증식을 억제하는 상이한 HER3-결합 항체의 능력을 조사하였다.
간략하게, 상이한 세포주의 세포를 1.5 x 105개 세포/웰의 밀도로 시딩하고, 다음날 10D1F.FcA, 세리반투맙, LJM-716, 퍼투주맙 또는 이소타입 대조 항체의 1000μg/ml에서 시작하는 10-점 연속 희석물로 처리하였다. 3일 후, CCK-8 세포 증식 분석을 사용하여 증식을 측정하였다. 증식 억제 퍼센트는 항체 대신 동일한 용적의 PBS로 처리된 세포를 기준으로 계산하였다.
결과는 도 67a 내지 도 67c에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 분석된 다른 항-HER3 항체보다 BRAF V600E 돌연변이를 지닌 세포주의 증식을 억제하는 데 더 효과적인 것으로 밝혀졌다.
추가 실험에서는 V600E BRAF 돌연변이를 지닌 상이한 갑상선암 세포주의 시험관내 증식을 억제하는 10D1F.FcA와 베무라페닙의 조합물의 능력을 조사하였다.
세포를 1.5 x 105개 세포/웰의 밀도로 시딩하고, 다음날 200nM 베무라페닙의 존재 또는 부재하에 10D1F.FcA 또는 이소타입 대조 항체의 1000μg/ml에서 시작하는 10점 연속 희석물로 처리하였다. 3일 후, CCK-8 세포 증식 분석을 사용하여 증식을 측정하였다. 증식 억제 퍼센트는 항체 대신에 동일한 용적의 PBS로 처리된 세포를 기준으로 계산하였다.
결과는 도 68a 내지 도 68c에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 베무라페닙에 취약한 SW1736 및 BHT101 세포의 증식을 억제하는 베무라페닙의 능력을 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 10D1F.FcA는 또한 베무라페닙-내성 BCPAP 세포의 증식의 강력한 억제제인 것으로 밝혀졌다.
실시예
11:
생체내
HER3
-
매개된
신호전달의 억제의 분석
본 발명자들은 생체내 HER3-매개된 신호전달을 억제하는 10D1F.FcA의 능력을 조사하였다.
1 x 106개 FaDu 또는 OvCar8 세포를 NCr 누드 마우스에 피하 도입하여 이소성 이종이식 종양을 확립하였다.
종양이 100 mm3 이상의 용적에 도달하면, 마우스를 25 mg/kg 용량의 10D1F.FcA 또는 동일한 용적의 비히클(대조군)의 격주 복강내 주사에 의해 처리하였다. 4주 후, 종양을 채취하였다. 종양으로부터 단백질 추출물을 제조하고, Bradford 분석을 통해 정량하고, 50μg 샘플을 SDS-PAGE로 분별하고, 실시예 4.3에 기재된 바와 같이, HER3 및 AKT의 생체내 인산화를 결정하기 위해 항체를 사용하여 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
결과는 도 71에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 생체내 종양 세포에서 HER3 및 AKT의 인산화를 억제하는 것으로 밝혀졌다.
실시예
12: 항-
HER3
항체의 내재화의 분석
본 발명자들은 HER3-발현 세포에 의한 항-HER3 항체의 내재화를 조사하였다.
간략하게, HER3, HCC95, N87 또는 OVCAR8 세포를 발현하도록 조작된 100,000개의 HEK293 세포를 96웰 조직 배양 플레이트의 웰에 시딩하고 5% CO2에서 37℃에서 밤새 배양하였다. 그후 세포를 120nM의 10D1F.FcA, LJM-716, 세리반투맙 또는 트라스투주맙, 및 360nM의 pHrodo iFL 녹색 시약로 처리하고, 37℃에서 5% CO2에서 배양하였다. 배양물 중의 세포를 각 웰의 4개의 상이한 필드에서 24시간 동안 30분마다 이미징하였다. 각 필드의 FITC 채널에서의 최대 신호 강도를 24시간에 정량하였다.
결과는 도 72에 나타내어져 있다. OvCar8 세포에서는 LJM-716 및 세리반투맙의 미약 내지는 중간 정도의 내재화가 관찰된 반면, N87 세포에서는 트라스투주맙의 미약한 내재화가 관찰되었다.
HCC95, N87 또는 OvCar8 세포에서는 10D1F.FcA의 유의한 내재화가 관찰되지 않았다.
예상대로, HER3를 과발현하는 HEK293 세포에서는 10D1F.FcA, LJM-716 및 세리반투맙의 유의한 내재화가 관찰되었다.
추가 실험에서는, 유세포 분석에 의해 항체 내재화를 조사하였다.
N87 세포를 50,000개 세포/웰의 밀도로 96웰 조직 배양 플레이트의 웰에 시딩하고, 밤새 부착되도록 하였다(37℃, 5% CO2). 10D1F.FcA 또는 트라스투주맙을 표지화 시약과 혼합하고, 표지된 복합체를 세포에 첨가하였다. 샘플은 세포 배양 배지의 흡인, PBS를 사용한 세척 및 아큐타제를 사용한 처리에 의해 0분, 10분, 30분, 1시간, 2시간 및 4.5시간 시점에서 수거하였다. 아큐타제 활성을 중화시키고, 세포를 FACs 완충액에 재현탁시키고, 유세포 분석으로 분석하였다.
결과는 도 73a 및 도 73b에 나타내어져 있다. 세포는 10D1F.FcA의 최소한의 내재화를 나타내었다. 대조적으로, 항-HER2 항체 트라스투주맙의 상당한 내재화가 관찰되었다.
실시예
13: 면역조직화학에서
HER3
-결합 항체의 사용
mIgG2a 형식의 항-HER3 항체 10D1F는 인간 HER3 단백질의 검출을 위한 면역조직화학에 사용될 수 있는 능력에 대해 평가하였다.
절편의 처리는 Bond 시약(Leica Biosystems)을 사용하여 수행하였다. 상업적으로 이용 가능한 냉동 조직 절편의 어레이를 수득하였다. 슬라이드를 데시케이터에서 10분 동안 건조시킨 다음 단계 사이에 물 세척 및/또는 TBS-T 세정을 사용하여 다음과 같은 처리를 실시하였다: (i) 실온에서 10분 동안 100% 아세톤으로 처리하여 고정; (ii) 실온에서 15분 동안 3%(v/v) H2O2로 처리하여 내인성 퍼옥시다제 차단; (iii) 실온에서 30분 동안 10% 염소 혈청으로 처리하여 차단, (iv) 4℃에서 밤새 6.2mg/ml 용액을 1:250 희석한 10D1F-mIgG2a와 함께 배양, (v) HRP-중합체 접합 염소 항-마우스 항체와 함께 실온에서 30분 동안 배양, 및 (vi) 실온에서 5분 동안 Bond Mixed DAB Refine으로 현상한 다음 탈이온수 및 1x 본드 워시로 세정하여 반응을 정지시킴.
그후 슬라이드를 탈수하고, 합성 봉입제(mounting media)에 봉입하고 고해상도로 스캔하였다.
결과는 도 75a 및 도 75b에 나타내어져 있다. 10D1F는 정상 조직에 대한 낮은 교차-반응성과 함께, 우선적으로 악성 인간 조직 절편을 염색하였다.
추가 실험에서 A549 이종이식 종양을 저온 PBS에서 수거하고, OCT 냉동매봉 배지에 매봉하고, 드라이아이스에서 냉동시키고, -80℃에서 저장하였다. 10μm 절편을 저온 유지 장치를 사용하여 수득하였다.
슬라이드를 데시케이터에서 10분 동안 건조시킨 다음 단계 사이에 물 세척 및/또는 TBS-T 세정을 사용하여 다음과 같은 처리를 실시하였다: (i) 실온에서 10분 동안 100% 아세톤으로 처리하여 고정; (ii) 실온에서 15분 동안 3%(v/v) H2O2로 처리하여 내인성 퍼옥시다제 차단; (iii) 실온에서 30분 동안 10% 염소 혈청으로 처리하여 차단, (iv) 4℃에서 밤새 8.8mg/ml 용액을 1:50 희석한 10D1F-mIgG2a 및 Sino Biological 토끼 항-HER3(Cat. No. 10201-T24)의 1:200 희석물과 함께 배양, (v) Invitrogen F(ab')2-염소 항-인간 IgG (H+L) HRP (A24470) (1:500), 또는 HRP-중합체 접합 염소 항-토끼 항체와 함께 실온에서 30분 동안 배양, 및 (vi) 실온에서 5분 동안 Bond Mixed DAB Refine으로 현상한 다음 탈이온수 및 1x 본드 워시로 세정하여 반응을 정지시킴.
그후 슬라이드를 헤마톡실린으로 대조염색하고, 탈수하고, 합성 봉입제에 봉입하고 고해상도로 스캔하였다.
결과는 도 76에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA는 A549 종양 이종이식 크리오섹션의 특이적 막 및 세포질 염색을 나타내었다.
실시예
14:
CLU
-
NRG1
융합을 포함하는 난소암의 환자-유래 이종이식 모델에서
HER3
-결합 항체의 치료 효능
본 발명자들은 CLU - NRG1 융합을 포함하는 난소암의 환자-유래 이종이식 모델에서 10D1F의 치료 효능을 조사하였다.
대략 약 5-7주령된 암컷 BALB/c 누드 마우스를 특정 병원체-비함유 조건하에서 사육하였으며 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee) 지침에 따라 다루었다.
CLU - NRG1 융합을 포함하는 난소암 모델은 OV6308(Crown Bioscience Inc.)로 지정된 환자-유래 이종이식편의 4개의 펠릿을 마우스 오른쪽 옆구리에 피하 접종하여 확립하였다. OV6308은 51세 여성 환자로부터 유래된 난소 고등급 장액성 선암종이며, CLU - NRG1 유전자 융합을 포함한다.
종양 용적은 디지털 캘리퍼를 사용하여 일주일에 3회 측정하고 [L x W2/2] 공식을 사용하여 계산하였다. 연구 종점은 대조군의 종양 길이가 >1.5cm로 측정되면 도달한 것으로 간주하였다.
마우스에게 (i) 25mg/kg의 10D1F.FcA(즉, 실시예 2.2의 [16]) 또는 (ii) 25mg/kg의 hIgG1 이소타입 대조군 항체(각 처리군에 대해 n=10)를 복강내 주사에 의해 격주로 투여하였다.
결과는 도 79에 나타내어져 있다. 10D1F.FcA를 사용한 치료는 이소타입 대조군에 비해 종양 성장을 111% 억제하여 매우 강력한 것으로 밝혀졌다.
실시예
15: 항체 제형 개발
제형 개발은 10D1F 가변 영역 및 인간 IgG1 불변 영역을 포함하고, 서열 번호 206 및 207의 폴리펩티드로 구성되는 항원-결합 분자에 대해 수행하였다. 항원-결합 분자는 2021년 5월 7일 ATCC 특허 기탁 번호 PTA-127062로 기탁된 세포주의 세포에 의해 생성된다.
15.
1 초기
제형 생성
항체를 포함하는 9개의 액상 제형을 다음과 같이 생성하였다:
제형 F10은 항체 및 PBS를 포함하였다. 제형은 상이한 조건하에서 이들의 안정성에 대해 평가하였다.
상이한 제형에서의 항체의 안정성은 40℃에서 1개월 동안 저장한 후 평가하였다. 모든 제형은 8.4mg/mL 단백질을 포함하였다.
도 80a는 모든 단백질 농도가 40℃에서 1개월 동안 안정적인 것으로 밝혀졌음을 보여준다.
도 80b는 제형 F8 및 F9가 40℃에서 1개월 동안 최소 pH 변화를 입증하였음을 보여준다.
도 80c는 제형 F1 내지 F7이 HPLC-SEC에 의해 측정된 최소 응집 성향을 입증하였음을 보여준다.
도 80d는 산성 변이체가 HPLC-CEX로 측정하여 0일에서 30일에 걸쳐 유의하게 증가하는 경향을 보였음을 나타낸다. 특히 산성 변이체의 현저한 프로파일 변화가 제형 F8, F9 및 F10에 대해 관찰되었다.
도 80e는 ELISA로 측정한 바와 같이 40℃에서 20일째 배양한 모든 항체 제형에 대해 HER3 항원 결합이 증가하였음을 보여준다.
상이한 제형에서의 항체의 안정성은 높은 단백질 농도에서 평가하였다.
눈에 보이는 응집체 또는 입자에 대한 육안 검사는 눈에 보이는 입자가 10mg/mL, 50mg/mL, 100mg/mL 또는 200mg/mL의 모든 제형에서 유도되지 않았음을 보여주었다(도 81a).
도 81b는 제형 F8 내지 F10이 HPLC-SEC에 의해 측정된 바와 같이, 농도가 최대 200mg/mL까지 증가함에 따라 가용성 응집 형성의 약간의 증가를 나타내었음을 보여준다.
-80℃ 및 실온의 동결-해동 주기는 3+일마다 수행하였다. 도 82는 제형 F1 내지 F9가 양호한 동결-해동 안정성을 입증하였음을 보여준다. F10은 사이클 2에서 0.6%, 사이클 5에서 0.9% 응집 증가를 보였다.
결론적으로, 항체는 제형 F8 내지 F10에 비해 제형 F1 내지 F7에서 더 안정하다.
15.2 추가 제형 생성
5개의 추가 제형을 다음과 같이 완충액 교환을 사용하여 생성하였다:
제형 5는 실시예 15.1의 제형 F2와 동일한 성분을 포함한다.
15.2.1 예비 스트레스 스크리닝
5가지 제형은 동결 및 해동에 의한 예비 스트레스 스크리닝 및 교반 및 주사기 흡인에 의한 기계적 스트레스를 거쳤다.
동결-해동: -70℃에서 동결하고 실온에서 해동하는 3회 사이클을 수행하였다. 바이알을 -70℃ 냉동고에 별도로 넣고 냉동고에서 90시간 동안 저장하였다. 바이알을 실온에서 해동하고, 빛으로부터 보호하여 별도로 두었다. 바이알을 완전히 해동될 때까지 시간당 두 번 부드럽게 와류시켰다. 세 번의 동결/해동 사이클 후, 해동된 바이알을 분석시까지 2-8℃에서 저장하였다.
주사기 및 바늘 흡인: 샘플을 흡인하고 주사기와 바늘을 통해 10회 분주하였다. 바늘은 응집체 및 입자 형성을 유도하기 위해 가능한 한 작았다. 바늘이 있는 5mL 주사기를 약 1.5mL/s의 속도로 수동 흡인 및 분주하는 데 사용하였다.
교반: 샘플을 진탕 테이블에 장착하고 2-8℃에서 72시간 동안 교반하였다. 다중-회전기(Multi RS-60 BioSan)를 진동을 포함한 엔드-투-엔드 회전을 위해 사용하였다.
샘플을 외관 및 마이크로플로우 이미징(MFI)에 의해 입자 형성에 대해, SE-HPLC에 의해 응집에 대해, CE-SDS에 의해 순도 및 분해에 대해 및 A280에 의해 단백질 함량에 대해 분석하였다. 결과는 아래에 나타내어져 있다. 육안 검사에 의해 어떠한 제형에서도 눈에 보이는 입자가 검출되지 않았다.
A280에 의한 단백질 함량. 참조 샘플과 비교하여 스트레스를 받은 샘플에서 단백질 농도에 유의한 변화가 보이지 않았다.
Ref = 참조 제형, F/T = 동결/해동, SNA = 주사기 및 바늘 흡인, Ag = 교반.
단량체 순도. 단량체 순도의 변화는 어떠한 제형에서도 스트레스 시험 후 관찰되지 않았다.
Ref = 참조 제형, F/T = 동결/해동, SNA = 주사기 및 바늘 흡인, Ag = 교반.
1) % 응집체, 2) % 주 피크, 3) % 단편; n.d., 검출 불가
Micro-Flow Imaging에 의한 눈에 보이지 않는 입자(subvisible particle)의 수/mL.
각 샘플을 스트레스 시험 후 CE-SDS로 분석하였다. 도 83a 내지 도 83d의 결과는 중쇄 또는 경쇄에서 펩티드 결합의 붕괴가 없고(환원된 조건), 전장 IgG에서 파쇄된 이황화 결합에 유의한 차이가 없음(비환원된 조건)을 나타낸다.
제형 1, 4 및 5에 대해 제형 안정성 연구를 진행하였다.
15.3 제형 안정성 연구
제형 1, 4 및 5의 안정성은 +5℃ 및 +25℃에서 12주에 걸쳐 50mg/mL에서 평가하였다. 0주, 4주, 8주 및 12주에, 샘플을 다음 기술을 사용하여 안정성에 대해 분석하였다:
1. A280에 의한 단백질 함량: UV 광 흡광도 측정에 의한 단백질 함량의 측정은 단백질에 존재하는 방향족 아미노산의 특정 특성을 기반으로 하였다. 280nm에서의 흡광도는 Beer-Lambert 법칙에 따라 단백질 농도에 정비례한다. HMBD-001에 대한 이론적 흡광 계수는 1.64 mL·mg-1·cm-1이다.
2. 눈에 보이는 입자에 대한 육안 검사.
3. SE-HPLC에 의한 순도 및 응집체 함량: 항체의 순도는 고성능 액체 크로마토그래피로 측정하였다. 순도는 검출된 모든 피크의 전체 면적에 대한 주 피크의 면적 백분율로 결정되었다. 이 분석은 항체 분획, 이량체 및 응집체와 같은 생성물 관련 불순물을 검출하는 데 사용된다.
4. IE-HPLC에 의한 전하 이질성(Charge heterogeneity): 항체의 전하 분포는 이온-교환 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 전하 변이체를 고정상과의 이온 상호작용에 따라 분리하고, 구배에 의해 용출하고, 280nm에서 UV로 검출하였다.
5. Micro-Flow Imaging에 의한 눈에 보이지 않는 입자 분석: 크기, 양, 크기 분포 및 입자 유형(들)은 Micro-Flow Imaging(MFI)에 의해 연구하였다. 이 방법은 1-2288 μm 범위의 입자를 검출하고 크기, 형태 및 투명도를 기반으로 입자 하위 유형을 구별할 수 있다.
6. Background Membrane Imaging에 의한 눈에 보이지 않는 입자 분석: 크기, 양 및 크기 분포는 Background Membrane Imaging(BMI)에 의해 연구하였다. 이 방법은 2μm 내지 4mm 범위의 입자를 검출하고 크기, 형태 및 투명도를 기반으로 입자 하위유형을 구별할 수 있다.
7. CE-SDS에 의한 순도: 이 방법은 세포 및 배지로부터 생성물 분해산물 및 기타 단백질 관련 불순물과 같은 생성물 및 비-생성물 관련 불순물을 검출하는 데 사용된다. 분석은 환원 및 비환원 조건하에서 수행하였다.
8. pH: pH 측정은 적절한 pH 범위에서 상업적으로 이용 가능한 용액으로 pH 미터를 교정한 후 수행하였다.
9. 삼투압: 삼투압은 Nova Flex로 측정하였으며 순수한 물과 비교하여 동결점의 감소를 조사함으로써 결정하였다.
10. 결합 ELISA: 이 방법은 항체가 ELISA 플레이트에 코팅된 인간 항원 HER3에 결합하는 샌드위치 ELISA이다. HRP-접합 염소 항-인간 IgG가 검출 항체로서 사용되었다. 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)이 검출을 위해 사용되었다.
15.3.1 A280에 의한 단백질 함량
각 샘플은 0주 및 12주에 분석하였다. T12와 비교하여 T0에서의 단백질 농도에서 유의한 차이는 보이지 않았다.
15.3.2 눈에 보이는
입자에 대한 육안 검사
샘플을 4주마다 눈에 보이는 입자에 대해 조사하였다. 눈에 보이는 입자는 어느 온도에서도 어떠한 제형에서도 유도되지 않았다.
15.3.3 SE-
HPLC에
의한 순도 및 응집체 함량
샘플은 12주 동안 매 4주마다 SE-HPLC로 분석하였다.
결과는 도 84a 내지 도 84c에 나타내어져 있다. 상이한 제형의 시작 값은 1.3% 차이가 났으며 이에 따라 종점 결과를 처리해야 한다. 12주에 걸친 단량체 IgG 순도의 경우, +5℃에서 제형 1은 1.1% 떨어지고, +5℃에서 제형 4는 1.1% 떨어지고, +5℃에서 제형 5는 1.8% 떨어졌다. CE-SDS 데이터가 펩티드 결합 붕괴를 나타내지 않기 때문에 단편은 해리된 서브유닛일 가능성이 높다.
도 84d 및 84e는 +5℃ 및 +25℃에서 배양할 때, 29주차까지, 즉 대략 95% 단량체 IgG 순도까지 (도 84a로부터의) 제형 1, 4 및 5의 단량체 IgG 순도의 외삽을 보여준다.
15.3.4
IE
-
HPLC에
의한 전하 이질성
IE-HPLC로부터의 하전된 분포 데이터는 도 85a 내지 85c에 나타내어져 있다.
15.3.5 Background Membrane Imaging에 의한 눈에 보이지 않는 입자 분석
눈에 보이지 않는 입자 수는 샘플 간에, 그리고 시간 경과에 따라 차이가 있었지만 완충액 유형 또는 온도의 영향이라기보다는 방법 변동에 기인하였다. 시간 경과에 따라 어떠한 제형에서도 눈에 보이지 않는 입자의 증가에 대한 명확한 추세는 없었다.
15.3.6 CE-SDS에 의한 순도
도 86a 및 도 86b는 각각 비환원 및 환원 샘플에 대한 CE-SDS 결과를 보여준다. '비환원' 데이터는 모든 이황화 결합이 손상되지 않은 상태에서 IgG의 상대량을 나타낸다. '환원된' 데이터는 유리 경쇄 및 중쇄의 요약된 상대량을 나타낸다.
데이터는 펩티드 결합 파괴로 인한 저분자량 종의 어떠한 형성도 나타내지 않는다. T4 후, T8 및 T12에서 환원된 조건에 대한 요약된 데이터에서 누락된 퍼센트를 설명하는 비-환원 가능한 중쇄/경쇄 티오에테르 결합이 검출될 수 있다.
15.3.7 pH
12주 배양에 걸쳐 제형 1, 4 또는 5에 대해 pH 변화는 검출되지 않았다.
15.3.8 삼투압
12주 배양에 걸쳐 제형 1, 4 또는 5에 대해 삼투압의 변화는 검출되지 않았다.
15.3.9 결합 ELISA
항원 결합 ELISA 데이터가 아래에 제시되어 있다. 차이는 방법 변동과 관련이 있으며 결합 용량의 유의한 변화는 관찰되지 않았다. 제형 1(T0 및 T12 +5℃)이 ELISA 플레이트 간의 내부 통제(internal control)로서 사용되었다.
1)2회 반복실험의 평균, 명시된 샘플이 개별 플레이트에서 내부 통제로 사용되었음
15.3.10 결론
A280에 의한 단백질 함량 측정은 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 의약품의 손실을 나타내지 않았다. 육안 검사에 의한 평가는 눈에 보이는 입자의 형성을 나타내지 않았다
+5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후. BMI에 의한 평가는 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 눈에 보이지 않는 입자의 유의한 형성을 나타내지 않았다. CE-SDS 결과는 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 펩티드 결합 또는 이황화 결합의 파괴를 나타내지 않았다. 하전된 변이체의 평가는 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 하전 이소형의 매우 작은 변화를 보여주었다. 항원-결합 능력의 평가는 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 어떠한 변화도 나타내지 않았다. pH 및 삼투압의 평가는 +5℃ 또는 +25℃에서 12주 배양 후 어떠한 변화도 나타내지 않았다.
SE-HPLC에 의한 단량체 IgG 순도의 평가는 상대 순도가 제형 1 및 4의 경우 1.1%, 제형 5의 경우 1.8% 감소하는 것으로 나타났다. 각 제형에 대한 결과를 플롯팅하고 95% 단량체 IgG 순도로 외삽하여 상이한 제형에서 의약품의 가장 긴 저장 수명을 추정하였다. 모든 제형에 대해 +5℃에서의 예측된 저장 수명은 28-29주였으며, 제형 5가 가장 가파른 감소 기울기를 가졌다. +25℃에서, 제형 1은 14주의 가장 짧은 예측된 저장 수명을 나타냈고, 제형 4 및 5의 경우 예측된 저장 수명이 각각 18주 및 21주였다.
제형 5(50mg/mL HMBD-001, 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스(240mM), 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, 최종 pH 5.8)가 가장 적합한 제형인 것으로 밝혀졌으며 액체 충전 의약품으로서 임상 제조를 위해 진행되도록 선택되었다. 폴리소르베이트 80은 단백질 및 응집의 잠재적인 기계적 스트레스 유도된(교반) 불안정성을 방지하기 위한 계면활성제로서 0.02%(w/v)의 농도로 첨가된다.
15.4
HMBD
-001을 포함하는 조성물의 추가 평가
20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스 (240 mM), 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.8에서 제형화된 HMBD-001을 다음에 대해 추가로 평가하였다:
· 동결-해동 안정성(크기 배제 크로마토그래피)
· 순도(응집/분해 분석), SDS-PAGE에 의한 항체 무결성(비-환원, 레인당 5μg), pH, 항체 농도, 생물반응성 - hHER3 결합, Fc 반응성 - hCD16a 결합, 및 80% 상대 습도로 40℃에서 7일 및 15일 후 외관
· 200mg/ml에서의 순도(응집/분해 분석)
제형의 pH 및 외관은 80% 상대 습도로 40℃에서 7일 또는 15일 후에도 변하지 않았다. 15일 배양 후 가용성 응집은 검출되지 않았다. 항체 무결성은 어느 길이 배양 후에도 손상되지 않았다.
HER3 결합 및 Fc 반응성은 생물층 간섭측정을 사용하여 측정하였다. 항체의 생물-반응성은 아래와 같이 7일 또는 15일 동안 배양 후 유지하였다.
도 87a는 제형 5의 항체가 8회의 동결-해동 사이클 후에 높은 단량체 순도를 유지하는 것을 보여준다.
항체를 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스(240mM), 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.8에서 200mg/mL로 농축시키고 응집에 대해 평가하였다. 도 87b는 불용성 또는 유의한 응집이 관찰되지 않았음을 보여준다.
80% 상대 습도로 40℃에서 15일 배양 후, 항체의 pH, 외관, 용해도, 단백질 무결성 및 생물-반응성은 상기 제형에서 잘 유지된다. 200mg/ml의 농도도 응집 성향 없이 달성되었다.
15.5 장기 안정성 연구
HMBD-001 원료의약품의 안정성은 ≤ -65℃에서 24개월, +5(±3)℃에서 6개월에 걸쳐 평가하였다. HMBD-001 의약품은 -20℃에서 6개월, +5(±3)℃에서 6개월에 걸쳐 평가하였다. 50mg/mL HMBD-001을 20mM 히스티딘, 8%(w/v)(240mM) 수크로스 및 0.02% 폴리소르베이트 80, pH 5.8(배치 HBO721-P5)에서 제형화하였다.
평가는 색상, 눈에 보이는 입자, pH, 삼투압, 화학적 불안정성(전하 변동(탈아미드화 및 산화)에 대한 분석 HPLC-IEC 및 등전점 전기영동(IEF) 및 단편화에 대한 SDS-PAGE 및 HPLC-SEC), 단백질 농도(A280(ε=1.64)2), 응집(HPLC-SEC), 결합 활성의 손실(ELISA) 및 제품 무결성/오염물질(내독소 LAL 및 바이오버든 시험)을 포함하였다.
결과는 도 88a(≤ -65℃에서의 원료의약품) 및 88c(-20℃에서의 의약품)에 나타내어져 있다. 원료의약품 및 의약품은 6개월 후 필수 사양/승인 기준을 충족한다. +5(±3)℃에서 6개월간 저장 후 원료의약품 및 의약품에 대해 유사한 결과가 관찰되었다.
안정성 평가는 최대 60개월, 예를 들어 12개월, 18개월, 24개월, 36개월, 48개월 및 60개월 동안 계속된다.
실시예
16:
진행성
HER3
양성 고형 종양 환자에서 단일 제제로서 및 조합하여
정맥내
투여된
HMBD
-001(항-
HER3
단클론
항체)의 I/
IIa상
개방 표지, 용량 증량 및 확장 시험
본원에 사용된 바와 같이, HMDB-001은 10D1F 가변 영역 및 인간 IgG1 불변 영역을 포함하고, 서열 번호 206 및 207의 폴리펩티드로 구성되는 IgG1 인간화 단클론 항원-결합 분자를 지칭한다.
16.1 도입
HER3는 PI3K/AKT/mTOR 및 MAPK/ERK 경로를 통해 신호를 보내 세포 생존 및 증식을 촉진하는 수용체 계열('HER 계열') 중 하나이다. 따라서 비정상적인 활성화 또는 과발현은 발암 및 암 진행을 촉진할 수 있다. HER3는 키나제 활성이 부족하다는 점에서 계열 중에서 독특하므로 신호 전달이 일어나기 위해서는 키나제-활성 파트너(일반적으로 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 또는 다른 HER 계열 구성원인 HER2)와 이량체화함으로써 활성화되어야 한다(Berger, Mendrola, and Lemmon 2004; Kim et al. 1998).
HER3 세포외 도메인은 이량체를 형성할 수 있는 "폐쇄된" 비활성 형태 및 "개방된" 활성 형태 사이의 가역적 평형으로 존재한다(Roskoski 2004; Cho and Leahy 2002). 활성화를 위한 기존 모델에서는, '리간드 의존적' 안정화(HER3 리간드 뉴레굴린 1, [NRG1]에 의해 매개됨)의 결과로서 평형이 개방 형태로 이동한다. 그러나, 충분한 농도의 이량체화 파트너의 존재는 파트너가 일시적으로 개방 형태에 있는 HER3에 결합하고 안정화하기 때문에 평형을 이동시킬 수도 있다. 이는 '리간드-비의존적' 활성화로 알려져 있다(Burgess et al. 2003; Lee-Hoeflich et al. 2008; Alimandi et al. 1995).
HER3의 과발현은 여러 종양 유형에서 자주 관찰되며 더 나쁜 임상 결과와 관련이 있다. HER3의 향상된 발현은 결장직장암, 두경부 편평세포 암종(HNSCC), NSCLC, 흑색종, 유방암, 위암, 난소암, 전립선암, 및 방광암에서 발견된다. HER3 과발현의 영향은 HER2가 또한 과발현되는 암, 예를 들어 유방암, 위암, 난소암에서 더 크다. HER3는 흑색종 및 췌장 암종에서 EGFR에 바람직한 이종이량체 파트너이다.
HER3는 HER3 유도 종양 및 HER-요법 내성 종양의 치료를 위한 유망한 치료 표적을 나타낸다. HER3 발현 및 활성의 상향조절은 다중 경로 억제제에 대한 내성과 관련이 있으며 나쁜 예후와 관련이 있다. HER3는 발암성 EGFR 계열 신호전달에 중요한 역할을 한다. HER3이 EGFR 또는 HER2와 이종이량체화하는 경우 MAPK 경로 외에도 PI3K/AKT/mTOR 경로를 통해 신호 전달을 촉발한다. 따라서 HER3 활성화는 EGFR/HER2 요법 및 BRAF 억제제와 같은 다른 MAPK 경로 요법에 대한 후천적 내성과 관련이 있으며, 여기서 PI3K 경로는 종양에 대한 일반적인 탈출 경로를 나타낸다. HER3 이종이량체화는 전통적으로 리간드 결합에 의해 유도되지만, 높은 수준의 EGFR 또는 HER2 결합 파트너에 의해서도 유도될 수 있다.
생물제제 및 소분자 제제를 포함한 다수의 항-HER3 치료법이 현재까지 임상적으로 조사되었다(Mishra et al. 2018). 면역 세포를 관여하는 치료법 외에도, 모든 HER3 치료법은 HER3 다운스트림 신호전달을 억제하는 것을 목표로 한다. HER3 신호전달은 다양한 암 치료법에 대한 약물 내성에 중요한 역할을 한다. EGFR 또는 HER2 지시된 치료법에 대한 내성의 경우, 메카니즘은 (i) HER3의 전사 상향조절(Abel et al. 2013; Wang et al. 2013), (ii) NRG1 수준 증가(Gwin and Spector 2014; Xia et al. 2013), 및 (iii) HER2 증폭(Vlacich and Coffey 2011; Yonesaka et al. 2011)을 포함한다.
SLC3A2, CD74 또는 VAMP2에서 NRG1 이소형으로의 종양 융합은 NRG1의 EGF-유사 도메인의 분비 또는 세포외 발현을 촉진하여 HER3 활성화를 증가시키는 것으로 확인되었다. NRG1 융합은 처음 확인되었으며 침습성 점액성 선암(invasive mucinous adenocarcinoma, IMA)에서 가장 흔하며, 여기서 융합은 사례의 20-30%에서 존재하지만 다른 유형의 고형 종양에서도 더 낮은 빈도(<1%)로 존재한다. 전임상 및 제한된 임상 데이터에 기반하여, HER3-표적화된 요법은 NRG1 융합 유도 IMA에서 매우 효과적인 것으로 보인다(Nakaoku et al. 2014). 갑상선 및 결장 암종에서 TKI 내성을 부여하는 BRAF V600E와 같은 다운스트림 신호전달 캐스케이드에서의 구조적 활성화 돌연변이를 표적으로 삼으려는 노력도 HER3 활성화를 통해 실패할 수 있다(Di Nicolantonio et al. 2008; Piscazzi et al. 2012; Frasca et al. 2013). 특히, NRG1에 의한 HER3의 활성화는 특정 BRAF V600E 억제제인 베무라페닙에 대한 내성을 촉진한다(Prasetyanti et al. 2015).
약물 내성에서 HER3의 역할을 뒷받침하기 위해, 항-HER3 항체는 BRAF-V600E 돌연변이 결장암에서 베무라페닙에 대한 민감성을 회복하고(Prasetyanti et al. 2015) 병용 요법을 사용한 HER2:HER3 신호전달의 차단은 HER2-양성 유방암에서 트라스투주맙 내성을 극복한다(Watanabe et al. 2019). 따라서 HER3는 HER3 유도 종양 및 HER-요법 내성 종양의 치료를 위한 유망한 치료 표적을 나타낸다.
HER3과 HER 표적 요법에 대한 민감도 또는 내성과의 관계로 인해, HER3는 신호전달을 완전히 전달하기 위해 다른 수용체 티로신 키나제와 이종이량체 또는 이종삼량체 복합체를 형성해야 하므로(Holbro et al. 2003; Lee-Hoeflich et al. 2008), HER3 및 EGFR/HER2-표적 제제의 조합은 약물 내성을 없애고 이에 따라 많은 고형 종양에서 항종양 활성을 향상시키는 효율적인 방법이 될 수 있다. 예를 들어, 여러 전임상 모델에서 항-HER3 단클론 항체와 항-EGFR 요법의 조합이 항종양 활성을 향상시키는 것으로 나타났다(Gaborit, Lindzen and Yarden 2016). 항-HER3 항체 패트리투맙은 결장직장암 세포에서 헤레굴린에 의해 매개되는 세툭시맙 내성을 없애고(Kawakami H. et al. 2014) R3 발현은 트라스투주맙 내성 종양 세포에서 상향조절되는 것으로 나타났다(Narayan M et al. 2009). 잠재적인 조합은 세툭시맙, 엔잘루타미드 또는 다른 안드로겐 수용체 억제제 및 트라스투주맙을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
생물제제 및 소분자 제제를 포함한 다수의 항-HER3 치료법이 현재까지 임상적으로 조사되었다: 접근법은 다음 메커니즘 중 하나에 의해 HER3를 표적으로 하는 것을 기반으로 한다: i) 리간드-결합 부위를 차단하거나; ii) 테더링된 형태로 HER3를 고정하거나; iii) 1차 리간드, NRG1을 포획하거나; iv) HER3 수용체의 내재화를 유발하거나; 또는 v) HER3를 과발현하는 암세포를 사멸하기 위해 면역 세포를 사용한다(Elenius et al. 1999).
항-HER3 항체를 개발하려는 이전의 시도는 임상 시험에서 제한적인 효능을 보였으며, 이는 EGFR 또는 HER2로 리간드 결합 및 이종이량체화 둘 다를 완전히 차단할 수 없었기 때문일 수 있다. 높은 HER3 발현이 보이고 다른 EGFR/HER2 치료제에 내성이 있는 종양 유형에는 상당한 미충족 수요가 남아 있다. 추가의 비-교차 내성 요법이 필요하다.
항체 HMBD-001은 상이한 메카니즘을 통해 HER3를 표적으로 한다. HMBD-001은 HER3의 이종이량체화 표면을 직접 차단하여 리간드 의존적 및 비의존적 이종이량체화를 모두 방지하여 암세포가 세툭시맙 및 트라스투주맙과 같은 치료에 내성을 갖는 것을 방지하도록 설계되었다. 메카니즘은 상이하지만 리간드 의존적 및 비의존적 신호전달을 모두 억제하기 때문에 HMBD-001과 가장 유사한 제제는 LJM716(엘겜투맙) 및 CDX3379(KTN3379)이다.
또한, 전임상 데이터는 전립선암에서 항-안드로겐 요법에 대한 내성의 환경에서 항-HER3 항체의 탐구를 뒷받침한다. 문헌[Zhang et al. 2020]에서는 암 관련 섬유아세포가 마우스 모델 및 전립선 오가노이드 배양물에서 NRG1의 증가된 수준을 통해 항-안드로겐 내성을 촉진하여 HER3 활성화를 통해 내성을 촉진할 수 있는 것으로 나타났다. 게다가, 항-NRG1 및 HER3 항체 둘 다는, 시험관내 또는 생체내에서, 항-안드로겐 내성의 환경에서 항-종양 활성을 나타내어, 안드로겐 수용체 억제제와 HMBD-001의 조합의 탐구를 위한 근거를 제공하였다.
16.2 시험 설계
이는 단일 제제로서 HMBD-001 투여의 권장 2상 용량(RP2D) 및 일정을 결정하기 위해 초기 환자내(intra-patient) 용량 증량에 이은 환자간(inter-patient) 용량 증량을 사용한 개방 표지, 다기관, 인간-최초(FIH), I/IIa상 적응 설계 시험이다.
이어서 HMBD-001과 다른 항암 병용 제제(들)의 조합이 탐구될 것이다. 각각의 새로운 조합에 대해, HMBD-001의 안전성, 약동학(PK) 및 약력학 프로파일을 추가로 특성화하고 예비 효능을 평가하기 위해 용량 증량군 및 용량 확장 코호트가 있을 것이다.
파트 A: 연구의 첫 번째 파트는 2개의 군(arm)에서 수행된 용량 증량 단계이다.
· 파트 A: 1군: HMBD-001 단일요법, 용량 증량: HMBD-001의 RP2D(권장 2상 용량) 및 일정을 결정하기 위한 단일 제제(HMBD-001) 용량 증량 연구. 용량 증량 단계는 초기에 단일 환자, 환자내 용량 증량 코호트에 이어 1단계 CRM(Bayesian Continual Reassessment Method)을 사용하여 평가된 다중-환자, 환자간 용량 증량 코호트를 따른다. HER3를 과발현하는 것으로 알려진 종양이 있는 환자는 이 단계에 모집된다.
· 파트 A: 2군: 병용 제제(들) 용량 증량: 시험의 단일요법 증량 단계로부터 이용 가능한 임상 데이터(파트 A, A군) 및 이용 가능한 전임상 및 공개된 데이터를 검토한 후, 선택된 병용 제제와 함께 HMBD-001의 Ia상 용량 증량군을 수행한다. 전임상 데이터는 결장직장암에서 세툭시맙과 조합된 HMBD-001 및 전립선암에서 엔잘루타미드와 조합된 HMBD-001의 탐구를 뒷받침한다. 병용 제제(들) 코호트는 HMBD-001 단일제제 RP2D보다 낮은 용량 수준(권장 2상 용량)인 시작 용량을 사용하며, 독성의 부재하에서 RP2D로 증량한다. 대안적으로, HMBD-001 단일 제제 RP2D는 승인된 병용 제제(들)의 권장 용량 및 특정 조합에 대해 생략된 용량 증량 단계로 직접 연구될 수 있다.
파트 B: 연구의 두 번째 파트는 HMBD-001이 다중 조합 코호트에서 단일요법으로 및 조합하여 제공되는 두 개의 군으로 구성된다.
· 파트 B: 1군: HMBD-001 단일요법, 용량 확장: 환자는 하기 종양 하위유형에서 높은 HER3 발현 상태 또는 확인된 NRG1 융합 재배열에 기반하여 선택된다: RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer) 및 두경부 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma of the head and neck). 높은 HER3 발현은 의료 기관에 대한 IVD(InVitro Diagnostic) 면제 기준(일반적으로 사내 제조(in-house manufacturing)라고 함) 하에서의 연구 분석을 사용하여 결정된다. NRG1 융합 재배열은 각 지역 의료 기관 내에서 수행된 연구 분석을 사용하여 평가되며 의료 기관에 대한 IVD 사내 제조 면제에 해당한다. 신선한 생검에서 인산화된 HER3의 발현 및/또는 높은 NRG1 발현은 획득한 데이터에 의해 표시되는 경우 예측 바이오마커로 평가될 수 있다.
· 파트 B: 2군: 병용 제제(들) 용량 확장: 최대 3개의 병용 확장 코호트.
16.3 임상시험용 의약품
HMBD-001는 특정 종양에 있는 암세포에서 크게 발현되는 수용체인 HER3을 특이적으로 표적화하는 IgG1 인간화 단클론 항체이다.
HMBD-001은 HER3의 도메인 II 이량체화 계면 상의 에피토프에 결합한다. 이것은 EGFR 또는 HER2와의 이종이량체화를 직접 억제하여 PI3K/AKT/mTOR 경로를 통한 HER3의 후속 인산화 및 다운스트림 신호전달을 억제하고 종양 세포 증식을 억제함으로써 이의 약리학적 효과를 발휘한다. HMBD-001은 HER3이 '개방' 또는 '폐쇄' 형태인지 여부에 관계없이 이의 에피토프에 결합할 수 있다(예를 들어 상기 실시예 3.5 및 8.10 참조). 이는 HER3 활성화가 NRG1 결합에 의해 리간드-의존적 방식으로 유도되는지 또는 리간드-비의존적 방식(일반적으로 HER2 또는 EGFR의 과발현에 의해)으로 유도되는지 여부에 관계없이 약리학적으로 활성임을 의미한다.
전임상 약리학 연구는 HMBD-001가 1) HER3의 수용체 이량체화 계면에 결합하고 HER2 또는 EGFR과의 이종이량체화를 억제함으로써; 2) PI3K/AKT/mTOR 경로를 통해 HER3의 후속 인산화 및 다운스트림 신호전달을 억제함으로써; 3) 종양 세포 증식을 억제함으로써 이의 약리학적 효력을 발휘한다는 것을 입증하였다. 예를 들어 상기 실시예 4.1, 4.3, 5.3, 8, 9 및 11을 참조한다.
HMBD-001는 HER3에 나노몰 이하의 친화도로 특이적으로 결합하고, HER3과 HER2 및 EGFR 둘 다의 이량체화를 억제한다. 이것은 NRG1 유도된 및 NRG1 비의존적 세포주 모델 모두에서 HER3 및 AKT의 인산화를 완전히 또는 실질적으로 억제하였다. HMBD-001에 의한 종양 세포 증식의 억제는 다양한 표현형적으로 뚜렷한 세포주에서 분명하였으며, MM-121(세리반투맙) 및 LJM716(엘겜투맙)인 포함된 다른 항-HER3 비교 항체보다 효능이 우수하였다. HMBD-001은 NRG1 유도된, 높은 HER2/EGFR 유도된, NRG1 및 HER2/EGFR 둘 다 유도된 세포에서, 및 티로신 키나제 억제제(TKI) 내성을 부여하는 BRAF V600E 돌연변이가 있는 세포에서 활성이었다. HMBD-001은 자연 살해(NK) 세포 매개된 항체-의존적 세포-매개 세포독성 분석(ADCC) 및 보체 의존적 세포독성(CDC) 분석에서 무시할 수 있는 활성을 가졌으며, 이는 이들이 예상되는 작용 메카니즘이 아님을 시사한다.
뮤린 종양 효능 연구는 마우스에서 세포주 유래 이종이식(CDX) 모델을 사용하여 수행하였다. 암컷 NCr 누드 마우스(5-8주령, 21-29g)에 N87, A549, FaDu, OvCAR8 세포를 피하 이식하였다. 종양이 대략 100-200 mm3에 도달했을 때 치료를 시작하였다. 비히클(PBS) 또는 치료 항체(25mg/kg)를 지정된 시점(매주 FaDu 및 OvCAR8, 주 2회 N87 및 A549)에 복강내(IP) 투여하였다. 캘리퍼를 사용하여 일주일에 두 번 종양을 측정하고 종양 용적(mm3)을 계산하였다. 각 데이터 포인트는 평균 종양 용적 ± SEM(n=8마리 마우스)을 나타낸다.
결과는 도 89a 내지 도 89d에 나타내어져 있다.
단일요법으로서의 HMBD-001은 높은 NRG1-유도 A549(폐암) 및 FaDu(하인두암) 및 높은 NRG1- 및 HER2/EGFR-유도 OvCAR8(난소) 모델에서 25mg/kg IP에서 종양 성장을 완전히 억제하였다. A549 및 FaDu 모델에서, HMBD-001은 각각 세툭시맙 및 트라스투주맙보다 우수한 효능을 보였다. HMBD-001은 모든 모델에서 비교 항-HER3 항체와 동등하거나 더 우수하였다. N87 모델(NRG1 비의존적)에서, HMBD-001은 효과를 보이지 않았던 비교 항-HER3 항체와 달리 유의한 항종양 효능(64% TGI)을 보였다. HMBD-001 효능은 NRG1 융합을 갖는 것을 포함하여 포함한 비-소세포 폐(NSCLC), 식도 및 난소 종양으로부터의 환자 유래 이종이식(PDX) 모델에서도 입증되었다.
HMBD-001 용량 반응의 탐색을 A549 모델에서 수행하였다. 항체(10 mg/kg, 5 mg/kg 또는 2 mg/kg) 또는 비히클을 격주로 투여하였다. 결과는 도 90에 나타내어져 있다. 종양 성장에 미치는 영향은 모든 용량에서 관찰되었으나 10mg/kg 및 5mg/kg에서 최대였으며 2mg/kg에서는 부분적인 효과만 나타났다.
16.3.1
HMBD
-001의 제형
HMBD-001은 희석 및 IV 주입을 위한 농축 용액 50mg/mL로서 공급된다.
제형 완충액: 20mM 히스티딘, 8%(w/v) 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80 pH 5.8.
HMBD-001는 -20℃ (± 5℃)에 동결시켜 저장되고 빛으로부터 보호된다.
주입을 위한 HMBD-001 농축 용액 50 mg/mL는 적어도 1.2 mg/mL의 농도로, 100 mL의 최소 용적 및 250 mL의 최대 용적으로 0.9% 염화나트륨 (NaCl)에서 희석시킨다. 주입을 위해 준비된 용액은 투여 전 최대 40시간 동안 2℃ 내지 8℃의 냉장고에 저장할 수 있으며 초기 희석 48시간 이내에 투여해야 한다.
16.4
전임상
약동학
인간 환자에게 제공할 HMBD-001의 투여량을 결정하기 위해, 종양 보유 및 비-종양 보유 마우스 및 래트에 대한 연구로부터의 HMBD-001의 약동학, 약리학 및 독성학 데이터를 사용하여 인간 용량으로 확장하였다. 예상되는 생물학적 활성 용량을 결정하기 위해, 최대 항종양 효과를 보인 종양 효능 연구로부터의 PK 데이터를 사용하여 HMBD-001의 표적 최저 수준(target trough level)을 정의하였다(예를 들어 도 90 및 실시예 16.3 참조). 추정된 약동학 매개변수는 표 1에 요약되어 있다.
HMBD-001에 대한 생체내 연구는 마우스 및 래트에서의 단일 용량 IV 독성 연구, 및 최대 28일 지속시간(매주 투여)과 28일 회복을 갖는 래트에서의 반복 용량 IV 독성 연구를 포함하였다(또한 실시예 9.1 참조). 모든 동물 연구는 지역 윤리 위원회 요건, 부문 표준 및 관련 법률을 엄격히 준수하여 수행하였다.
독성동태학 연구에서 Wistar 래트에게 IV 주사를 통해 25, 100 및 250mg/kg으로 HMBD-001의 4회 매주 용량을 투여하였다. 혈액은 1일차 이후 일련의 시점 및22일차 또는 29일차에 수득하였다. 혈청 내 항체는 면역분석에 의해 정량하였다.
1일차의 제거 반감기 추정치는 178시간 내지 251시간의 범위였다. HMBD-001 Cmax 및 AUC0 -168에 의해 평가된 바와 같은 노출은 HMBD-001 용량 수준이 25에서 250mg/kg/용량으로 증가함에 따라 증가하였으며, 전체는 25 내지 250mg/kg/용량 사이에서 대략 용량 비례적이었다. 두 연구에 대한 TK 프로파일은 HMBD-001 평균 Cmax 및 AUC0-168 값이 1일차에 비해 22일 또는 29일차에 더 높았음을 보여주었으며, 이는 래트에서 HMBD-001의 다중 투여 후 HMBD-001이 축적되었음을 나타낸다. PK 매개변수에서 수컷과 암컷 래트 간에 유의한 차이는 없었다.
NCr 누드 마우스(25mg/kg HMBD-001, IV)에서 단일 용량 PK 연구를 수행하였다. 다양한 용량 수준(2, 5, 10 및 25mg/kg HMBD-001, IP)을 포함하는 단일 용량 PK 연구는 A549 종양 보유 마우스에서 수행하였다. 약동학 매개변수는 표 1에 포함되어 있다.
HMBD-001을 사용한 GLP 독성 연구에서, 래트에서 최고 비-중증 독성 용량(highest non-severely toxic dose, HNSTD) 및 무관찰 부작용 수준(no observed adverse effect level, NOAEL)은 250mg/kg/용량(시험된 최고 용량 수준)이었다. 이 용량은 주요 투여 단계 29일차에 8490μg/mL의 Cmax 값 및 423,000h*μg/mL의 AUC0 -168 값에 상응하였다. 이는 임상적으로 투여된 다른 항-HER3 항체의 노출에 대한 상대 성장 스케일링(allometric scaling) 및 분석을 기반으로 하여 66mg/kg의 인간 등가 용량(60kg 인간)과 동일하다.
래트 및 마우스 모두에 대해 관찰된 약동학 매개변수는 건강한 동물의 단클론 항체에 대한 전형적인 값, 즉 총 혈장 용적보다 약간 더 큰 분포 용적, 며칠 범위의 생물학적 반감기 및 하루당 수 밀리리터의 청소율과 일치하였다(Oitate et al. 2011; Liu 2018).
표 1. HMBD-001에 대한 전임상 약동학 및 독성동태학 데이터의 요약.
1약동학/독성동태학 매개변수와 관련된 투여 일자.
2분모는 't'(시간)를 지정한다.
3수컷 및 암컷 데이터는 유의한 차이가 없어 조합하였다.
약어: AUC=곡선하 면적, Cl=청소율, Cmax=최대 농도, NR=보고 불가, IP=복강내, IV=정맥내, PK=약동학, t1/2- 소실 반감기
시험관내 사이토카인 방출 분석은 10명의 건강한 기증자로부터의 PBMC 및 플레이트-고정 형식의 HMBD-001을 사용하여 수행하였다. 분석에서 고정화된 HMBD-001에 의해 유도된 모든 시험된 분석물(TNF-α, IL-2, IFN-γ, IL-6 및 IL-10)의 농도는 음성 대조군에 의해 유도된 농도와 동등하거나 더 낮았다.
면역조직화학(IHC) 연구에서, HMBD-001은 충수(점막), 유선(샘, 관), 췌장(관) 및 자궁(표면, 샘)을 포함하여 검사된 몇 가지 인간 조직에서 드물거나 가끔 또는 가끔 상피 세포의 막 및 세포질을 약하게 또는 약하게 내지는 중간 정도로 염색하였으며, 이는 정상 조직의 상피 세포에서 낮은 수준으로 HER3의 보고된 발현과 일치하였다. 검사된 인간 조직에서 HMBD-001로 예상치 못한 반응성은 관찰되지 않았다. HMBD-001의 특이성은 또한 >5000개의 인간 단백질을 발현하는 재조합 세포에서의 스크리닝에 의해 확인되었다.
다른
HER3
표적
단클론
항체에 대한 약동학 정보:
관련 정보를 이용할 수 있는 다른 HER3 표적화 단클론으로부터의 약동학 데이터는 표 3에 제시되어 있다. 정보를 이용할 수 있었던 이전 항-HER3 항체의 경우, 약동학이 선형 단계에 있을 때 제거 반감기는 대략 8일 내지 14일 범위였지만, 아마도 표적 매개 약물 소실(target mediated drug disposition, TMDD)의 기여로 인해 저용량에서 더 짧은 반감기가 관찰되었다. 다른 항-HER3 제제에 대한 용량 표준화 Cmax 수치는 최대 2배까지 다양하였다(투여된 mg/kg당 19-41μg/ml). 항-HER3 항체는, 이들의 차단 메커니즘으로 인해, 약리학적 활성에 대해 사전 정의된 '최저' 수준을 표적으로 하도록 증량되는 경향이 있으며, 이는 바이오마커를 사용한 표적 관여의 직접 분석 및/또는 표적 포화의 간접 마커로서 '포화' 또는 '선형' PK 프로파일의 확립을 동반할 수 있다.
표 3. 다른 항-HER3 단클론 항체에 대한 용량 및 약동학 정보.
약어: QW= 일주일에 한 번, Q2W=2주마다, Q3W= 3주마다, T½= 소실 반감기
16.5 시험 목표 및 종점
1차 목표 및 종점:
2차 목표 및 종점:
탐색적 목표 및 종점:
HMBD-001는 본원에서 제공된 것과 같은 용량, 투여량 섭생, 제형 및 환자 선택 기준을 사용하여 인간 대상체에 투여되며, 하기 결과 중 하나 이상이 관찰된다:
a) 종양 조직에서의 HER3 인산화의 감소;
b) pERK 및 p-70SK6과 같은 다운스트림 마커의 변화에 의해 입증된 바와 같은 종양 조직에서의 다운스트림 경로 활성화의 감소;
c) 연속 cfDNA 샘플에서 종양 분획의 감소;
d) Ki67 발현의 변화에 의해 입증된 바와 같은 종양 세포 증식의 감소;
e) 절단된 카스파제 3의 변화에 의해 입증된 바와 같은 종양 세포 사멸의 증가;
f) 전체 반응률의 결정을 통해 입증된 바와 같은 항종양 활성의 입증, 여기서 전체 반응률은 선택된 종양 유형에 적용 가능한 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) v1.1 또는 전립선 실무 그룹 3(PCWG3) 기준에 기반하여 완전 반응 또는 부분 반응을 달성한 환자의 비율로서 정의된다.
16.6 투여, 용량 및 투여 일정
16.6.1
파트
A 1군: 단일요법 용량 증량
HMBD-001은 매주 1회, 2주마다, 3주마다 또는 4주마다 정맥내 주입으로 투여한다. 대상체는 150mg, 300mg, 600mg, 1200mg 및 1800mg의 HMBD-001을 투여받았다.
HMBD-001의 각 사이클은 투여 빈도에 따라 21일 내지 28일로 구성된다. 사이클당 제공되는 용량의 횟수는 투여 빈도에 따라 좌우될 것이며 환자는 초기에 최대 6회 사이클 동안 계속할 수 있다. 초기 투여 일정 및 사이클 지속기간에 대해서는 표 4를 참조한다.
환자가 HMBD-001을 단일요법으로 또는 조합하여 사용한 치료로부터 혜택을 받은 경우 (즉, RECIST 1.1에 의해 측정된 바와 같은 안정 또는 반응성 질환을 갖고 환자가 3등급 이상의 IMP-관련 이상 반응을 경험하지 않는 경우) 치료는 6회 사이클 이상 지속될 수 있다.
표 4. 투여 일정 및 사이클 지속기간
HMBD-001은 초기 단일 환자 코호트에서 매우 일정으로 시작하여 사이클 1 동안 120분의 고정 간격에 걸쳐 주입 펌프를 사용하여 느린 정맥내 주입으로 투여한다. 환자가 주입 관련 반응을 경험하지 않는다면, 주입 속도를 사이클 1 완료 후 60분으로 감소시킬 수 있다.
단일 환자, 환자내 용량 증량 체계가 적용된다. 환자내 용량 증량 단계에서, 사이클은 28일로 정의되며 HMBD-001의 4회 매주 용량으로 구성된다.
표 5. 용량 증량 코호트에 대한 투여 섭생
HMBD-001의 최근 생겨난 약동학 특성이 기대치와 일치한다고 가정한다(예를 들어, 실시예 17 참조). 대안적이고 덜 빈번한 투여 일정(즉, 2주 또는 3주마다)이 고려될 것이다. 대체 투여 일정은 일주일에 한 번의 투여보다 더 자주이거나 28일에 한 번보다 덜 자주이지는 않을 것이다.
환자내 용량 증량 단계 후, 다중 환자 코호트, 환자간 용량 증량 체계가 모색되고 있다. 단일 제제 용량 증량 단계에서 투여될 예상 최대 용량은 2100mg(예를 들어 주당)이다.
코호트의 첫 번째 환자는 두 번째 및 세 번째 환자가 HMBD-001을 투여받기 전에 사이클 1 1일차에 HMBD-001 투여로부터 7일 동안 독성에 대해 관찰된다. HMBD-001의 혜택을 받는 것으로 보이고(안정 질환 또는 완전 또는 부분 반응) 심각한 이상 반응을 경험하지 않는 환자는 추가 사이클을 계속 받을 수 있다.
예상 최대 임상 용량은 50kg 환자당 60mg/kg이며, 이는 환자당 3000mg에 해당한다.
16.6.2
파트
A 2군: 병용 제제(들) 용량 증량
각 병용 용량 증량 코호트에 대한 HMBD-001 시작 용량은 선택된 병용 제제 및 단일요법 용량 증량 단계로부터의 데이터를 기반으로 선택된다.
16.6.3
파트
B 1군:
HMBD
-001 단일요법, 용량 확장
파트 A, 1군에서 단일 제제 HMBD-001의 RP2D 및 일정을 결정할 때, 약력학 분석을 위한 쌍별 종양 생검을 제공하기 위해 환자를 단일요법 용량 확장 코호트(파트 B, 1군)에 모집한다. 항종양 활성을 평가하기 위해 3-단계 Bayesian 적응 설계가 사용되며, 여기서 10%의 실제 반응률은 바람직하지 않은 것으로 간주되고 적어도 25%가 바람직한 것으로 간주된다. 최소 10명에서 최대 25명의 평가 가능한 환자가 등록된다.
환자는 하기 종양 하위유형에서 높은 종양 세포 HER3 발현 상태 또는 확인된 NRG1 융합 재배열에 기반하여 선택된다: RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer) 및 두경부 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma of the head and neck). 신선한 생검에서 인산화 HER3의 발현 및/또는 높은 NRG1 발현은 또한 획득한 데이터에 의해 표시되는 경우 예측 바이오마커로 평가될 수 있다.
16.6.4
파트
B 2군: 병용 제제(들) 용량 확장
선택한 적응증에서의 병용 제제 용량 증량(파트 A, 2군)에서 결정된 바와 같은 선택된 병용 제제(들)와 함께 제공될 수 있는 HMBD-001에 대한 RP2D를 사용하는 다중 복합 코호트가 등록된다. 3-단계 Bayesian 적응 설계가 항종양 활성을 평가하는 데 사용되며, 이는 중재가 소용이 없는 경우 조기 중단할 수 있게 한다.
16.6.5 시작 용량, 투여 수준 및 섭생의 배후 원리
화합물의 유형(표적 생물학적), 작용 메카니즘(경쟁적 수용체 차단), 및 이용 가능한 전임상 약리학 및 독성 데이터를 고려하여, 본 발명자들은 항종양 활성과 독성 둘 다가 곡선하 면적(AUC)에 의해 및 약리학적 활성 수준 이상의 HMBD-001 혈장 수준의 유지에 의해 유도될 것임을 알아내었다.
HMBD-001은 효능제가 아니고 HER3는 고위험 표적이 아니기 때문에, 본 발명자들은 치료 용량 이하 수준에 대한 환자의 노출을 최소화하기 위해 일부 생물학적 활성을 가진 수준에서 시작하는 것을 선택하였다. 따라서 약리학적 활성 용량(PAD) 접근법이 사용되었다. 전임상 시험관내 및 생체내 약리학 데이터를 사용하여 약리학적 활성 및 효능에 대한 목표 혈장 수준을 정의하였으며, 이를 사용하여 각각 시작 용량 및 예상 효능 수준을 알아내었다.
FIH 임상 시험은 체중 기준이 아닌 고정 용량 수준을 사용한다. 이는 투여된 항체의 시뮬레이션 및 임상 약리학을 포함한 연구에 기반하며, 이는 체중 및 고정 투여 후 환자간 노출 변동이 비슷하고, 약동학적 변동성은 약력학, 효능 및 안전성에서 일반적으로 관찰되는 변동성에 비해 중간 정도임을 보여주었다(Bai et al. 2012; Hendrikx et al. 2017). 종 간의 용량 계산/스케일링은 mg/kg 기준으로 수행하였으며 인간의 경우 60kg의 체중이 이후 변환에 사용되었다.
1) 시작 용량:
전임상 시험관내 약리학 데이터를 사용하여 시작 용량에 대한 관련 목표 혈장 수준을 정의하였다; 6개 세포주에서 증식 분석에서의 평균 IC50은 108μg/mL(범위 19-168μg/ml, 세포주당 n=3)였다. 패트 PK 매개변수의 상대 성장 스케일링을 사용하여 인간 PK 매개변수를 예측하고 첫 번째 투여 후 제한된 기간 동안 원하는 범위의 인간 혈장 수준을 초래하는 용량을 모델링하였다(1주일 미만 동안 >19μg/ml). 이 분석으로부터, 2.5mg/kg이 이러한 프로파일을 달성하기 위한 적절한 용량 수준으로 선택되었다.
또한, 시작 용량을 설정할 때, PAD-기반 접근법이 시험관내 및 생체내 독성학 연구에 의해 비-유해(non-adverse)한 것으로 확립된 범위 내에 있는 시작 용량을 생성했는지 확인하고 임상에서 다른 항-HER3 항체의 시작 용량과 비교하기 위해 다음 요인을 고려하였다.
래트 연구로부터의 독성학 및 노출 데이터를 사용하여 시작 용량에 대한 상한을 제공하였다. NOAEL(무관찰 부작용 수준)은 250mg/kg(매주 투여)으로 설정되었으며, 이는 이것이 래트 GLP 반복 용량 연구에 포함된 최고 용량이기 때문이다. 이 용량 수준으로부터 래트 데이터의 모델링은 청소율 및 분포 용적에 대한 인간 예측을 생성하는 2구획 모델과 수렴되었으며, 제안된 임상 시작 용량보다 약 26배 높고 인간에서 제안된 최대 용량의 두 배인 66mg/kg(60kg 인간 기준)의 용량에서 동등한 인간 노출이 달성될 것으로 예측되었다. 이는 HER3에 대한 HMBD-001의 친화도 및 표적의 발현 및 위치가 인간과 래트에서 대체로 동일하다는 점을 고려할 때 2.5mg/kg의 제안된 시작 용량의 적합성을 뒷받침한다.
시험관내 사이토카인 방출 분석은 HMBD-001이 음성 대조군 및 기타 저위험 mAb 비교기보다 많은 사이토카인 방출을 유도하지 않았음을 나타내었다. 고정된 항체 형식으로 인해 혈중 농도를 분석과 직접 동일시하는 것은 불가능하지만, 다른 항-HER3 항체를 기반으로 한 가정을 사용하여 2.5mg/kg 시작 용량의 첫 번째 투여로부터 50-70μg/mL의 Cmax가 초래된다고 추정할 수 있으며, 이는 시험관내에서 시험된 최고 농도인 100μg/mL보다 유의하게 낮다.
HMBD-001 전임상 데이터의 모델링과 함께, HMBD-001에 대한 시작 용량 계산은 예상 반감기 및 Cmax 범위를 포함한 다른 항-HER3 항체로부터의 약동학 데이터(표 3), 및 초기 코호트에서 더 빠른 청소율을 유도하는 표적-매개 약물 소실의 개념을 고려하였다. 이미 임상에 있는 항-HER3 항체의 경우, 시작 용량은 18-360mg(0.25-5.1mg/kg)이었다(모든 시험은 Mishra, 2018에 의해 요약됨).
HMBD-001과 가장 유사한 메카니즘을 가진 항-HER3 항체의 시작 용량은 KTN3379(5mg/kg) 및 LJM716(3mg/kg)이었다.
상기 요인의 고려에 기반하여, 2.5mg/kg의 시작 용량을 선택하였다. 이 용량은 정상적인 인간 혈장 용적을 기준으로 첫 번째 투여시 50-75μg/mL의 예측된 Cmax를 초래한다. 이러한 시작 용량은 약간의 약리학적 활성을 가질 것으로 예상되지만, 이는 각 투여 후 1주일 미만의 지속기간으로 제한되므로 치료 용량으로 예상되지 않는다. 표적 매개 소실(Target mediated disposition)은 초기 코호트에서 예상되며 예측보다 표적 수준 이상의 보다 짧은 노출을 초래하지만, 이를 정확하게 모델링할 수 없기 때문에 이 시작 용량 수준이 적절한 것으로 간주된다.
2.5mg/kg의 시작 용량 수준은 코호트 1에서 150mg 고정 용량의 시작 용량에 도달하기 위해 60kg 체중을 기준으로 변환되었다.
사용된 모델의 생체내 데이터에 기반하여, 150μg/mL는 인간에서 효능을 예상될 수 있는 혈장 수준이지만, 종양 침투의 차이로 인해 동등한 종양내 농도를 달성하기 위해 인간에서 더 높은 혈장 수준이 필요할 수 있다. PK 매개변수의 분석에 기반하여, HMBD-001의 경우 이러한 Cmin 혈장 수준은 제거 반감기에 따라 매주 내지 3주마다 사이 투여 간격으로 10 내지 30 mg/kg의 용량으로 유지될 것으로 예상된다. 이러한 이유로, 최대 인간 용량은 2100mg 고정 용량으로 예상되며, 이는 이 범위의 상한이다.
HMBD-001 단일요법의 최대 허용 용량(Maximum Tolerated Dose, MTD)을 식별하기 위해, 코호트 크기가 3인 5-용량 경험적 용량-독성 모델, 용량 수준 1의 시작 용량 및 용량 수준 3의 MTD의 사전 추측을 기반으로 하는 1-단계 Bayesian CRM이 사용된다. 베타-이항 복합 분석과 함께 Bayesian 안전성-모니터링 프레임워크를 사용하여, Bayesian CRM은 최저 용량이 너무 독성이 있다는 충분한 증거가 있는 경우, 즉 최저 용량에서의 DLT 비율이 >25%일 사후 확률이 85%보다 큰 경우 조기 중단을 허용할 것이다.
16.6.6 용량 제한 독성, 최대 허용 용량/최대 투여 용량의 정의
DLT는 다음 기준 중 하나 이상을 충족하는 사이클 1 1일차 투여의 처음 28일 동안 발생하는 가능성있는, 개연성있는 또는 매우 개연성있는 HMBD-001-관련 AE로서 정의된다:
· > 5일 동안 지속되는 4등급 호중구 감소증*
· 열성 호중구 감소증(임상적 또는 미생물학적으로 보고된 감염이 없는 원인 불명의 열)과 3등급 또는 4등급 호중구 감소증(절대 호중구 수[ANC]<1.0 x 109/L) 및 발열 ≥38.5℃).
*참고: 4등급 호중구 감소증의 경우, DLT가 발생했는지 알아보기 위해 사건 발생 후 5일째에 전체 혈구 수를 측정해야 한다. 조사자는 1등급 이하로 해결될 때까지 환자를 계속 면밀히 모니터링해야 한다.
· 출혈과 관련된 4등급 혈소판 감소증 또는 3등급 혈소판 감소증.
· 3등급 또는 4등급 비-혈액학적 독성. 이것은 다음을 제외한 DLT로서 3등급 및 4등급 생화학적 AE를 포함한다:
o 항-구토제를 사용한 최적의 치료를 받지 못한 환자에서의 3등급 메스꺼움;
o 항-구토제를 사용한 최적의 치료를 받지 못한 환자에서의 3등급 또는 4등급 구토; 또는
o 지사제를 사용한 최적의 치료를 받지 못한 환자에서의 3등급 또는 4등급 설사.
o 후원자 및 수석 조사자를 포함한 연구팀이 동의한 경우 일과성 무증상 3등급 생화학적 이상.
· 치명적 이벤트(Fatal event)
· 좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction, LVEF)의 3등급 또는 4등급 감소.
· 3등급 또는 4등급 사이토카인 방출 증후군 또는 주입 관련 반응.
· 사이클 1 1일차의 28일 이내에 치료를 중단하거나 >7일의 투여 지연을 초래하는 기타 관련 독성(임상적 결정이 아닌 일정으로 인해 지연이 >7일인 경우 제외)은 후원자, CI 및 PI가 동의한 대로 DLT로 간주될 수 있다.
단일 제제 최대 투여 용량(MAD)은 MTD를 정의하지 않은 상태에서 투여되는 최고 용량으로 정의될 것이다.
16.6.7 병용 약물 및 치료
매일 프레드니솔론 >10mg(또는 동등한 용량의 다른 코르티코스테로이드)의 투여는 CI 및 후원자가 대체 사전-약물로 승인한 경우, 또는 대체 스테로이드가 필요한 경우, 또는 주입 관련 반응을 치료하기 위해 임상적으로 표시된 경우 사전-약물로서 외에는 시험 동안 또는 사이클 1일차의 2주 이내에는 허용되지 않는다.
매일 프레드니솔론 <10mg(또는 동등한 용량의 다른 코르티코스테로이드)의 투여는 허용되며 코르티코스테로이드 흡입이 허용된다.
16.7 환자 집단
HMBD-001 단일요법 용량 증량군에 등록된 환자는 HER3를 과발현하는 것으로 알려진 종양 유형을 가질 것이다. 높은 HER3 발현은 위암, 결장직장암, 전립선암, 유방암, 폐암, 난소암 및 두경부암을 포함한 종양 조직학에서 입증되었다.
단일요법 확장 및 병용 용량 증량 및 병용 용량 확장군에 모집된 모든 환자는 시험 등록 전에 확인된 높은 HER3 발현 상태에 기반하여 선택될 것이다. NRG1 융합 재배열이 확인된 환자도 등록할 수 있다.
시험을 위해 최대 135명의 평가 가능한 환자가 모집될 것이다. 최종 수치는 최대 허용 용량(MTD)/최대 투여 용량(MAD)에 도달하는 데 필요한 용량 증량 횟수, 탐색된 확장 단계 코호트의 수 및 교체가 필요할 수 있는 환자 수에 따라 좌우될 것이다.
일부 종양 유형에서는 다른 신호전달 경로 억제제와 조합하여 임상적으로 사용될 것이다.
단일요법 용량 증량 단계에서, HER3 종양 발현은 후향적으로 측정될 것이다: 높은 HER3 발현을 가질 것으로 예상되는 종양을 가진 환자가 선택될 것이다.
높은 HER3 발현이 확인된 환자가 단일요법 확장, 병용 용량 증량 및 병용 확장 코호트에 선택되며, 따라서 이는 자격 기준의 일부를 형성한다. 높은 HER3 발현은 의료 기관에 대한 시험관내 진단(IVD) 면제 기준(일반적으로 사내 제조라고 함) 하에서 연구 분석을 사용하여 결정될 것이다. 획득한 데이터에 따라, 신선한 생검 인산화 HER3 발현 및/또는 높은 NRG1 발현도 지시될 수 있다. 기존 NRG1 융합 재배열이 확인된 환자도 자격이 있는 것으로 간주될 것이다. NRG1 융합 재배열은 각 지역 의료 기관 내에서 수행되는 연구 분석을 사용하여 평가될 것이다.
16.7.1 포함 기준
1. 기존 치료에 내성 또는 불응성이거나, 기존 요법이 존재하지 않거나 조사자에 의해 적절하지 않은 것으로 간주되거나 환자에 의해 거부된 조직학적으로 확인된 진행성 또는 전이성 고형 종양.
파트 A 1군 단일요법 용량 증량:
다음을 포함하여 HER3를 과발현하는 것으로 알려진 종양 유형을 가진 환자:
· 방광암
· 삼중 음성 유방암
· 거세 저항성 전립선암
· 자궁경부암
· RAS 야생형 결장직장암
· 자궁내막암
· 위암
· 간세포 암종(HCC)
· 흑색종
· 비-소세포 폐암(NSCLC)
· 식도암
· 난소암
· 췌장암
· 두경부의 편평세포암
파트 B 1군 단일요법 용량 확장:
다음을 갖는 거세 저항성 전립선암, RAS 야생형 결장직장암, 삼중 음성 유방암 또는 두경부의 편평세포암이 있는 환자:
· 시험 실험실 매뉴얼에 명시된 대로 연구 등록 전 사전 스크리닝 생검에서 면역조직화학(IHC)에 의해 확인된 높은 HER3 발현 또는 확인된 기존 NRG1 융합 재배열. 높은 HER3 발현은 의료 기관에 대한 시험관내 진단(IVD) 면제 기준(일반적으로 사내 제조라고 함)에 따라 연구 분석을 사용하여 결정될 것이다. NRG1 융합 재배열은 각 지역 의료 기관 내에서 수행되는 연구 분석을 사용하여 평가될 것이며 이와 같이 의료 기관에 대한 IVD 사내 제조 면제에 해당한다. 획득한 데이터에 따라, 신선한 생검 인산화 HER3 발현 및/또는 높은 NRG1 발현도 지시될 수 있다.
· 생검이 가능한 질환 부위.
· 치료 전 및 치료 중 종양 생검에 대한 동의.
· RECIST(Response Evaluation Criteria in Solid Tumours) 버전 1.1에 따른 최근에 생검한 병변 외에 적어도 하나의 측정 가능한 병변. 주의. 측정 가능한 병변은 스크리닝시 및 15일째에 생검할 수 있지만 해당 병변은 RECIST v1.1에 따른 질환 평가를 위한 표적 병변으로 선택될 수 없다.
2. 적어도 12주의 기대 수명.
3. ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group) 수행 상태 0 또는 1. (부록 2).
4. 아래 나타낸 범위 내의 혈액학적 및 생화학적 지표. 이러한 측정은 환자의 적격성을 확인하기 위해 수행되어야 한다.
5. 진행성 전립선암 환자는 거세 수준의 테스토스테론을 가져야 하며 차세대 호르몬제(아비라테론, 엔잘루타미드, 아팔루타미드 또는 다롤루타미드 중 적어도 하나)를 제공받아야 한다.
6. 동의 당시 만 16세 이상이어야 한다.
파트 A 2군, 파트 B 1군 및 2군의 경우: IHC 및 기타 약력학 분석에 의한 HER3 및 NRG1 발현 분석을 위해 신선한 종양 생검을 수득한다. 이것은 전이 부위로부터 유래해야 한다. 높은 HER3 발현의 확인은 시험 등록 전에 얻어야 한다.
종양 혈청 마커는 환자의 종양 유형, 예를 들어 CA-125, CEA, CA19-9 또는 PSA에 적합하게 측정된다.
16.7.2 제외 기준
1. 시험 사이클 1 1일차 전 이전 4주 동안 방사선 요법(완화적 이유 제외), 화학요법, 내분비 요법(전립선암에서 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 제제와 같은 평생 호르몬 억제 제외), 면역요법 또는 임상시험용 의약품.
2. NCI-CTCAE 1등급 이상의 이전 치료의 지속적인 독성 증상이 있는 환자. 이에 대한 예외는 모든 등급의 탈모증, 2등급 말초 신경병증 및 조사자와 후원자의 의견에 따라 환자를 배제해서는 안 되는 기타 진행중인 독성 증상이다
3. 증상이 있는 뇌 또는 연수막 전이가 있는 환자는 제외해야 한다. 안정적인 스테로이드 용량 ≤10mg 프레드니솔론 또는 동등한 용량의 다른 코르티코스테로이드를 투여받는 무증상 환자는 시험에 자격이 있다.
4. 가임 여성(또는 이미 임신 또는 수유 중인 여성). 그러나 다음 사항을 충족하는 환자는 자격이 있는 것으로 간주된다:
· 등록 전에 혈청 또는 소변 임신 테스트에서 음성이고;
· 두 가지 형태의 피임법을 사용하는 데 동의함.
i. 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는 매우 효과적인 형태: 배란 억제와 관련된 경구, 주사, 이식, 경피 또는 질내 호르몬 피임, 자궁내 장치, 자궁내 호르몬 방출 시스템 또는 정관수술한 파트너;
ii. 플러스 차단 방법(예를 들어 콘돔 플러스 살정제)
iii. 또는 HMBD-001의 첫 번째 투여부터 시험 기간 전반에 걸쳐 그리고 제제의 마지막 투여 후 6개월 동안 효과적인 금욕에 동의함.
5. 가임 파트너가 있는 남성 환자. 그러나, 다음 사항을 충족하는 환자는 자격이 있는 것으로 간주된다:
· 배리어 피임법[콘돔 플러스 살정제]을 사용하여 아이를 낳지 않도록 조치를 취하거나 HMBD-001의 첫 번째 투여부터 시험 기간 전반에 걸쳐 그리고 IMP의 마지막 투여 후 6개월 동안 효과적인 금욕에 동의함.
· 가임 파트너가 있는 정관 수술을 받지 않은 남성은 파트너가 같은 기간 동안 매우 효과적인 피임 방법, 예를 들어 배란 억제와 관련된 호르몬 피임, 자궁내 장치, 자궁내 호르몬 방출 시스템 또는 금욕을 사용하도록 기꺼이 보장해야 한다.
· 임신 또는 수유 파트너가 있는 남성은 태아 또는 신생아의 노출을 방지하기 위해 배리어 피임법(예를 들어 콘돔 플러스 살정제)을 사용하도록 권고해야 한다.
6. 환자가 아직 회복하지 못한 큰 수술.
7. 통제되지 않는 활동성 감염을 포함하여 비-악성 전신 질환으로 인한 높은 의학적 위험에 있음. 이전에 C형 간염에 노출되었지만 현재 감염되지 않은 환자는 참여할 자격이 있다.
8. B형 간염, C형 간염 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염에 대해 혈청학적으로 양성인 것으로 알려짐. 이전에 C형 간염에 노출되었지만 현재 감염되지 않은 환자는 참여할 자격이 있다.
9. 조사자의 의견에 따라 이 연구 참여에 대한 금기 사항인 이전 생물학적 요법에 대해 알려졌거나 의심되는 과민 반응.
10. 동시 울혈성 심부전, > 클래스 II 심장 질환의 이전 병력(뉴욕 심장 협회[NYHA] - 부록 3), 임상적으로 유의한 심장 허혈증의 병력 또는 임상적으로 유의한 심장 부정맥의 이전 병력. 심각한 심혈관 질환이 있는 환자는 다음에 의해 정의된 바와 같이 제외된다:
a. 시험 참가 전 6개월 이내에 불안정 협심증 또는 심근 경색의 병력
b. 현재 임상적으로 유의한 조절되지 않는 부정맥의 병력 또는 증거. 시험 시작 전 > 30일 동안 조절된 심방 세동이 있는 환자는 자격이 있다.
c. 시험 참가 전 6개월 이내에 관상동맥 성형술 또는 스텐트 삽입술.
d. 치료가 필요한 심실 부정맥의 존재
e. LVEF <50%
f. QTcF ≥ 480 msec (다달 갈래 차단(bundle branch block)이 있는 환자의 경우 ≥500msec)
11. 중증 근무력증(myasthenia gravis), 근염(myositis), 자가면역 간염(autoimmune hepatitis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease), 항인지질 증후군과 관련된 혈관 혈전증(vascular thrombosis associated with antiphospholipid syndrome), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 길랭-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 혈관염(vasculitis) 또는 사구체신염(glomerulonephritis)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 활동성 자가면역 질환이 있는 환자. 안정적인 용량의 인슐린을 투여하는 조절된 제1형 당뇨병 환자 및 갑상선 호르몬 대체만 필요하고 안정적인 용량을 투여하는 갑상선 기능 저하증 환자는 자격이 있을 것이다. 전신 치료가 필요하지 않은 피부 질환(예를 들어 백반증, 건선 또는 탈모증)이 있거나 외부 유발 요인이 없는 경우 재발이 예상되지 않는 병태가 있는 환자는 다음 기준을 모두 충족하는 한 참여가 허락될 것이다:
· 발진은 신체 표면적의 <10%를 덮어야 함.
· 질환은 기준선에서 잘 조절되고 저-효능 국소 코르티코스테로이드만 필요함.
· 지난 12개월 이내에 소랄렌 및 자외선 A 방사선, 메토트렉세이트, 레티노이드, 생물 제제, 경구 칼시뉴린 억제제 또는 고효능 또는 경구 코르티코스테로이드가 필요한 기저 질환의 급성 악화가 발생하지 않음.
12. 연구 약물의 첫 번째 투여 전 7일 이내에 매일 프레드니솔론 >10mg 용량(또는 동등한 용량의 다른 코르티코스테로이드)을 제공받은 환자는 사전 약물로 투여되지 않는 한 자격이 없다.
13. HMBD-001의 첫 번째 투여 전 4주 이내에 생백신을 제공받은 환자.
14. HMBD-001의 I/IIa상 시험에 참여하는 동안 다른 중재적 임상 시험에 참여했거나 참여할 계획인지 여부. IMP의 투여를 포함하지 않고 조사자 및 의료 고문의 의견에 따라 환자에게 허용할 수 없는 부담을 주지 않는 관찰 시험 또는 중재적 임상 시험에 참여하는 것은 허용 가능하다.
15. 조사자의 의견에 따라 환자를 임상 시험에 적합한 후보자로 만들지 않는 기타 상태.
16. IMP의 안전성 또는 유효성 평가 또는 프로토콜 준수 또는 결과 해석에 영향을 미칠 수 있는 현재 또는 이전의 악성 종양. 근치적으로 치료된 비-흑색종 피부암(curatively-treated non-melanoma skin cancer), 비-근육-침습성 방광암(non-muscle-invasive bladder cancer) 또는 제자리 암종(carcinomas-in-situ) 환자는 일반적으로 자격이 있다.
16.8 안전성 고려사항
단일요법으로서, HER3 단클론 항체는 최대 허용 용량에 도달하지 않고 매주 최대 40mg/kg IV 용량에서 내약성이 우수하다. 대부분의 이상 반응은 NCI-CTCAE 1-2등급이다. HMBD-001에 대한 전임상 경험 및 다른 HER3 단클론 항체에 대해 보고된 임상 데이터를 기반으로 하여, 예상되는 독성에는 다음이 포함될 수 있지만 이에 제한되지 않는다:
· 사이토카인 방출 증후군을 포함한 주입 관련 반응은 인간화 단클론 항체의 알려진 부작용이다. 증상은 발진, 발열, 경직, 기관지 경련, 및 저혈압을 포함할 수 있다. 모든 환자는 필요한 경우 사전-약물을 포함한 지지 치료를 받게 될 것이며 주입 전, 주입 동안, 및 주입 후에 모니터링될 것이다. 단클론 항체 및/또는 이들의 부형제에 대한 아나필락시스 또는 중증 알레르기/과민증의 병력이 환자는 HMBD-001을 투여해서는 안 되며 이 시험에서 제외된다.
· 위장 독성. 1등급 및 2등급 설사가 다른 HER3 표적 물질에서 보고되었다. DLT는 엘겜투맙 및 AV-203 모두에 대해 보고되었다. 국소 치료 지침에 따른 지지 요법을 시행해야 하며, 임상적으로 유의한 독성의 경우 HMBD-001 치료를 보류해야 한다.
· 저칼륨혈증 및 저마그네슘혈증: 다른 HER3 표적화제에서 1등급 및 2등급 전해질 이상이 보고되었다. 설사가 있는 상태에서 엘겜투맙에 대한 DLT가 보고되었다. 국소 치료 지침에 따른 대체 요법을 시행해야 하며, 임상적으로 유의한 독성의 경우 HMBD-001 치료를 보류해야 한다. 설사가 있는 상태에서 전해질 이상이 발생하면 설사 관리를 위한 국소 치료 지침을 또한 따라야 한다.
· 발진/피부염: 다른 HER3 항체 및 기타 HER/EGFR 표적화제를 사용한 완료된 시험에서, 발진이 보고되었다. 국소 치료 지침에 따른 지지 요법을 시행해야 한다.
· 혈액학적: 다른 HER 표적화제를 사용한 시험에서는, 혈색소 값, 백혈구 수 및 림프구 수의 변화와 같은 혈액학적 소견이 있었다. 기존 골수억제 환자가 시험에 포함되지 않도록 표준 혈액학적 포함 기준이 적용될 것이다. 표준 I상 혈액학적 평가가 임상 프로그램의 일부로서 착수될 것이다.
· 심장독성. 후원자가 아는 한 다른 HER3 항체에 대한 심장독성은 보고되지 않았지만 HER2 항체 및 pan HER 항체는 심장독성과 관련이 있다. HMBD-001의 작용 메카니즘 및 이량체화의 억제로 인해, 심전도(ECG), 트로포닌 I 및 심초음파도(ECHO)/다중 개폐 획득(MUGA) 스캔이 스크리닝 조사 및 연구 모니터링의 일부를 형성할 것이다.
· 알부민 증가: 알부민 증가는 전임상 독성학 연구 및 GSK2849330의 시험에서 보고되었다. 알부민 수준은 시험 전반에 걸쳐 표준 생화학 평가의 일부로서 모니터링될 것이다.
· 생식 위험. 발달의 이 단계에서는 HMBD-001로 특정한 생식 독성학 연구를 수행하지 않았다. 생식 위험을 알 수 없기 때문에, 환자는 HMBD-001이 생식력에 영향을 미칠 가능성에 대해 통보받고 임상 시험 피임 관행을 준수해야 한다. 가족을 갖거나 확대하는 것을 고려할 수 있는 적절한 남성 환자가 있는 경우, 정자 보존 가능성에 대해 논의할 것이다. 이 시험은 예후 및 생식력이 제한될 가능성이 있는 환자를 대상으로 할 것이며, 따라서 이러한 맥락에서 가임기 여성 또는 매우 효과적인 피임법을 사용하고 있는 가임기 파트너가 있는 남성 환자를 포함하는 것은 허용 가능한 위험으로 간주된다.
· 조합 효과. 병용 제제의 잠재적인 바람직하지 않은 영향은 상당한 수정에 따라 프로토콜 내에서 업데이트될 것이다.
이상 반응(AE)은 임상시험용 의약품(IMP), 비교기 제품 또는 승인된 약물을 투여받은 환자에서 예기치 않거나, 원하지 않거나, 계획되지 않은 의학적 발생이다. AE는 IMP 또는 비교기와 관련되거나 관련되지 않을 수 있는 징후, 증상, 질환 및/또는 실험실 또는 생리학적 관찰일 수 있다. AE는 다음 목록의 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
· 기존 병태의 임상적으로 유의한 악화. 이것은 완전히 해결되었다가 다시 비정상이 될 수 있는 병태를 포함한다.
· 우발적이든 의도적이든 IMP의 과다 복용으로 인해 발생하는 AE.
· 예를 들어 연구자가 약물 배치가 효과적이지 않다고 의심하거나 조사자가 IMP가 질환 진행에 기여했다고 의심하는 경우 IMP의 효능 부족으로 인해 발생하는 AE.
중대 이상 반응(SAE)은 용량, 인과 관계 또는 예기됨에 관계없이 다음과 같은 임의의 AE이다:
· 죽음에 이르게 하고;
· 생명을 위협하며*;
· 입원이 필요하거나 기존 입원 환자가 입원을 연장하고(일부 입원은 SAE 보고에서 면제된다, 예를 들어 환자가 시험에 들어가기 전에 계획된 병원 입원; 수혈과 같은 계획된 절차를 위한 하룻밤 입원);
· 지속적이거나 심각한 무능력 또는 장애를 초래하며;
· 선천성 기형 또는 선천적 결손이고;
· 임의의 다른 의학적으로 중요한 사건이다.**
*생명을 위협하는 사건은 이상 반응이 발생했을 때 환자가 사망할 상당한 위험이 있었거나 환자의 사망을 초래할 수 있는 장치 또는 기타 의료 제품을 계속 사용한 경우로 정의된다.
**의학적으로 중요한 사건은 환자를 위험에 빠뜨릴 수 있거나 위에 나열된 결과 중 하나를 방지하기 위해 개입이 필요할 수 있는 임의의 사건으로 정의된다. 예는 응급실에서 치료가 필요한 알레르기성 기관지 경련(호흡에 심각한 문제), 입원으로 이어지지 않는 심각한 혈액 장애(혈액 질환) 또는 발작/경련을 포함한다. 약물 의존 또는 약물 남용의 발달도 중요한 의학적 사건의 예가 될 것이다.
주입-관련 반응(IRR)은 종종 단클론 항체 및 기타 치료제의 투여와 관련이 있다.
16.9 약동학 및
약력학
평가
환자는 다음을 포함한 바이오마커의 발현에 대해 평가한다:
· 예를 들어 종양 생검 샘플을 사용한 면역조직화학(IHC)에 의한 HER3 발현
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 인산화된 HER3(pHER3)
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 EGFR/HER2 발현
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 인산화 ERK(pERK)
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 p70S6K 활성
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 NRG1 발현
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 Ki67 발현
· 예를 들어 면역조직화학(IHC)에 의한 절단된 카스파제 3
· 예를 들어 차세대 시퀀싱에 의한 cfDNA의 수준(치료 후 종양 분획 감소)
· 예를 들어 ELISA에 의한 항-약물 항체
· 예를 들어 ELISA에 의한 가용성 HER3
· 예를 들어 ELISA에 의한 가용성 NRG1
· 예를 들어 차세대 시퀀싱, Nanostring에 의한 PI3/MAPK 경로 활성
· 예를 들어 차세대 시퀀싱에 의한 PI3/MAPK 경로 돌연변이.
HMBD-001 수준은 ELISA에 의해 혈장에서 측정된다. 혈장/농도/시간 데이터는 비구획 분석법을 사용하여 분석된다. HMBD-001에 대한 약동학(PK) 매개변수는 관찰된 최대 혈장 농도(Cmax), Cmax에 도달하는 시간(Tmax), 혈장 농도 시간 곡선하 면적(AUC), 소실 제거 반감기(t1/2), 정상/상태 분포 용적(VSS) 및 총 신체 청소율(CL)를 포함한다.
단일 제제 용량 증량 단계(파트 A, 1군)에서는, 사이클 1 내지 3 동안 최대 20개의 시점에서 환자로부터 대략 5mL의 혈액이 수집된다. 각 환자로부터 채취된 혈액의 대략적인 총 용적은 최대 120mL이다. 확장 단계(파트 B, 1군 및 2군) 및 병용 제제(들) 증량 단계(파트 A, 2군)에서는 각 환자에 대해 사이클 1 및 3에 대해 투여 전 및 주입 종료 1시간 후에 5mL의 혈액 샘플이 채취된다. 각 환자로부터 채취된 혈액의 대략적인 총 용적은 최대 45mL이다.
순환 바이오마커(예를 들어 NRG1, 가용성 HER3)를 측정하기 위해, 합의된 SOP 및 가용성 HER3 및 리간드 NRG1 수준을 탐색하기 위해 검증된 방법에 따라 용량 증량 및 확장 단계 동안 치료 전후 특정 시점에서 HMBD-001 활성의 잠재적 대리 마커의 분석을 위해 대략 6mL의 혈액을 수집한다. 이러한 분석을 위해 각 환자로부터 채취된 혈액의 대략적인 총 용적은 96mL이다.
대략 20mL의 혈액을 치료 전, 치료 중 및 연구 외 방문시 최대 6개의 시점에서 환자로부터 수집하여 혈장을 수득하고 cfDNA를 측정한다. cfDNA를 환자로부터의 혈장에서 측정하여 종양 분획의 변화 및 유전적 변형을 검출한다. cfDNA 분석에 게놈 및 종양 DNA 분석이 보완되어 다른 세포 기원으로부터의 단편과 달리 종양에서 기원하는 단편을 식별하고 연속 cfDNA 샘플에서 종양 분획의 감소를 입증한다. 이 분석을 위해 각 환자로부터 채취된 혈액의 대략적인 총 용적은 120mL이다.
16.10 항종양 활성의 평가
질환은 해당되는 경우 임상 시험을 위한 RECIST(Response Evaluation Criteria in Solid Tumours) v1.1 또는 PCWG3(Prostate Cancer Working Group 3) 기준에 따라 측정된다.
무진행 생존율(PFS)은 이 시험에서 HMBD-001의 첫 번째 용량 또는 병용 치료의 첫 번째 용량의 투여일로부터 모든 원인으로 인한 질환 진행 또는 사망까지의 시간으로서 정의된다. 환자가 진행되지 않고 아직 살아 있는 경우, 환자는 마지막 적절한 질환 평가 일자에 검열될 것이다.
전체 생존율(OS)은 이 시험에서 HMBD-001의 첫 번째 용량 또는 병용 치료의 첫 번째 용량의 투여일부터 모든 원인으로 인한 사망일까지의 시간으로서 정의된다. 환자가 사망하지 않은 경우, 환자는 살아 있는 것으로 알려진 가장 최근 일자에 검열될 것이다.
전체 반응률(ORR)은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성한 환자의 비율로서 정의된다.
고형 종양의 새로운 반응 평가 기준( RECIST 기준): 개정된 RECIST 지침(버전 1.1). E.A. Eisenhauer et al. (2009). European Journal of Cancer 45: 228-247
1. 기준선에서 종양의 측정 가능성
1.1. 정의
기준선에서, 종양 병변/림프절은 다음과 같이 측정 가능 또는 측정 불가능으로 분류될 것이다.
1.1.1. 측정 가능
종양 병변: 다음과 같은 최소 크기로 적어도 한 차원(측정 평면에서 가장 긴 직경이 기록되어야 함)으로 정확하게 측정되어야 한다:
· CT 스캔으로 10mm(CT 스캔 슬라이스 두께 5mm 이하, 이미징 안내에 대해 부록 II 참조).
· 임상 검사에 의한 10mm 캘리퍼 측정(캘리퍼로 정확하게 측정할 수 없는 병변은 측정 불가능으로 기록해야 함).
· 흉부 엑스레이에 의한 20mm
악성 림프절: 병리학적으로 커지고 측정 가능한 것으로 간주되려면, CT 스캔으로 평가할 때 림프절이 단축(short axis)에서 15mm여야 한다(CT 스캔 슬라이스 두께는 5mm 이하인 것이 권장됨). 기준선 및 추적관찰에서는, 단축만 측정되고 추적관찰될 것이다.
1.1.2. 측정 불가능
작은 병변(가장 긴 직경 <10mm 또는 10-<15mm 단축을 갖는 병리학적 림프절) 뿐만 아니라 실제로 측정할 수 없는 병변을 포함한 기타 모든 병변. 실제로 측정할 수 없는 것으로 간주되는 병변은 다음을 포함한다: 연수막 질환, 복수, 흉막 또는 심낭 삼출, 염증성 유방 질환, 피부 또는 폐의 림프관성 침범(lymphangitic involvement), 재현 가능한 이미징 기술로 측정할 수 없는 신체 검사로 확인된 복부 종괴(abdominal mass)/복부 장기종대(abdominal organomegaly).
1.1.3. 병변 측정 가능성에 관한 특별 고려사항
뼈 병변, 낭포성 병변, 및 이전에 국소 요법으로 치료된 병변은 특별한 설명이 필요하다:
뼈 병변:
· 뼈 스캔, PET 스캔 또는 일반 필름은 뼈 병변을 측정하는 데 적합한 이미징 기술로 간주되지 않는다. 그러나, 이러한 기술은 뼈 병변의 존재 또는 소멸을 확인하는 데 사용될 수 있다.
· CT 또는 MRI와 같은 단면 영상 기법에 의해 평가될 수 있는 식별 가능한 연조직 성분을 갖는 용해성 뼈 병변 또는 혼합된 용해-모세포성 병변은 연조직 성분이 상기한 측정 가능성의 정의를 충족하는 경우 측정 가능한 병변으로 간주될 수 있다.
· 모세포성 뼈 병변은 측정 불가능하다.
낭포성 병변:
· 방사선학적으로 정의된 단순 낭종에 대한 기준을 충족하는 병변은 정의상 단순 낭종이기 때문에 악성 병변(측정 가능하지도 측정 불가능하지도 않음)으로 간주되어서는 안 된다.
· 낭포성 전이를 나타내는 것으로 생각되는 '낭포성 병변'은 상기한 측정 가능성의 정의를 충족하는 경우 측정 가능한 병변으로 간주될 수 있다. 그러나, 비-낭포성 병변이 동일한 환자에 존재하는 경우, 이들은 표적 병변으로 선택되는 것이 바람직하다.
이전에 국소 치료된 병변:
· 이전에 방사선 조사를 받은 부위 또는 다른 국소 요법을 받은 부위에 위치한 종양 병변은 병변의 진행이 입증되지 않는 한 일반적으로 측정 가능한 것으로 간주되지 않는다. 시험 프로토콜은 이러한 병변이 측정 가능한 것으로 간주되는 조건을 자세히 설명해야 한다.
1.2. 측정 방법에 의한 사양
1.2.1. 병변의 측정
모든 측정값은 임상적으로 평가된 경우 캘리퍼를 사용하여 미터법 표기로 기록해야 한다. 모든 기준선 평가는 치료 시작에 최대한 가깝게 수행되어야 하며 치료 시작 4주 이상 전에 수행되어서는 안 된다.
1.2.2. 평가의 방법
기준선 및 추적관찰 동안 식별되고 보고된 각 병변을 특성화하기 위해 동일한 평가 방법과 동일한 기술을 사용해야 한다. 추적관찰 중인 병변을 영상화할 수 없지만 임상 검사로 평가할 수 있는 경우를 제외하고는 임상 검사보다는 이미징 기반 평가를 항상 수행해야 한다.
임상적 병변:
임상적 병변은 표재성이고 캘리퍼를 사용하여 평가한 직경이 ≥10mm인 경우(예를 들어 피부 결절)에만 측정 가능한 것으로 간주된다. 피부 병변의 경우, 병변의 크기를 추정하기 위한 자(ruler)를 포함한 컬러 사진에 의해 문서화하는 것이 추천된다. 상기 주지된 바와 같이, 병변을 임상 검사 및 이미징 모두에 의해 평가할 수 있는 경우, 이미징 평가가 더 객관적이고 시험이 종료시 검토될 수도 있기 때문에 이미징 평가를 수행해야 한다.
흉부 엑스레이:
CT는 특히 새로운 병변을 식별하는 데 있어 엑스레이보다 더 민감하기 때문에 특히 진행이 중요한 종점인 경우 흉부 CT가 흉부 엑스레이보다 바람직하다. 그러나, 흉부 엑스레이의 병변은 명확하게 정의되고 폭기된 폐로 둘러싸여 있는 경우 측정 가능한 것으로 간주될 수 있다.
CT, MRI:
CT는 반응 평가를 위해 선택된 병변을 측정하기 위해 현재 사용 가능하고 재현 가능한 가장 좋은 방법이다. 이러한 지침은 CT 슬라이스 두께가 5mm 이하라는 가정을 기반으로 CT 스캔에서 병변의 측정 가능성을 정의하였다. CT 스캔이 5mm보다 큰 슬라이스 두께를 갖는 경우, 측정 가능한 병변의 최소 크기는 슬라이스 두께의 두 배여야 한다. MRI는 특정 상황(예를 들어 신체 스캔)에서도 허용 가능하다. 객관적인 종양 반응 평가를 위한 CT 및 MRI 둘 다의 사용에 대한 보다 상세한 내용은 Eisenhauer 등으로부터의 간행물에 제공되어 있다.
초음파:
초음파는 병변 크기를 평가하는 데 유용하지 않으며 측정 방법으로 사용해서는 안 된다. 초음파 검사는 나중에 독립적인 검토를 위해 전체를 재현할 수 없으며, 작업자에 따라 다르기 때문에 한 평가에서 다음 평가로 동일한 기술과 측정이 수행될 것이라고 보장할 수 없다(부록 II에 자세히 설명됨). 시험 과정에서 초음파에 의해 새로운 병변이 확인되면, CT 또는 MRI로 확인하는 것이 권장된다. CT에서 방사선 노출이 우려되는 경우, 선택된 경우에 CT 대신 MRI를 사용할 수 있다.
내시경, 복강경:
객관적인 종양 평가를 위해 이러한 기술을 사용하는 것은 권장되지 않는다. 그러나, 생검이 수득될 때 완전한 병리학적 반응을 확인하거나 완전 반응 또는 외과적 절제 후 재발이 종점인 시험에서 재발을 결정하는 데 유용할 수 있다.
종양 마커:
종양 마커만으로는 객관적인 종양 반응을 평가하는데 사용할 수 없다. 그러나, 마커가 처음에 정상 상한을 초과하는 경우, 환자가 완전 반응으로 간주되려면 이들이 정상화되어야 한다.
세포학, 조직학:
이러한 기술은 프로토콜에 의해 요구되는 경우 드물게 PR과 CR을 구별하는 데 사용할 수 있다(예를 들어 알려진 잔류 양성 종양이 남아 있을 수 있는 생식 세포 종양과 같은 종양 유형의 잔류 병변). 삼출액이 치료(예를 들어 특정 탁산 화합물 또는 혈관신생 억제제 사용)의 잠재적인 부작용인 것으로 알려진 경우, 반응(또는 안정 질환)과 진행성 질환을 구별하기 위해 측정 가능한 종양이 반응 또는 안정 질환에 대한 기준을 충족한다면 치료 동안 나타나거나 악화되는 삼출액의 신생물성 기원에 대한 세포학적 확인을 고려할 수 있다.
2. 종양 반응 평가
2.1 전반적인 종양 부담 및 측정 가능한 질환의 평가
객관적인 반응 또는 향후 진행을 평가하기 위해, 기준선에서 전체 종양 부담을 추정하고 이를 후속 측정을 위한 비교기로 사용하는 것이 필요하다. 측정 가능한 질환은 적어도 하나의 측정 가능한 병변의 존재에 의해 정의된다(위에서 자세히 설명한 바와 같음).
2.2. '표적' 및 '비-표적' 병변의 기준 문서화
하나 이상의 측정 가능한 병변이 기준선에 존재하는 경우, 모든 관련 장기를 대표하는 최대 총 5개 병변(장기당 최대 2개의 병변)까지의 모든 병변을 표적 병변으로 식별해야 하며 기준선에서 기록 및 측정할 것이다(이는 환자가 각각 최대 2개 및 4개의 병변이 침범된 단지 하나 또는 두 개의 기관 부위를 갖는 경우가 기록된다는 것을 의미한다). 단지 5개 표적 병변의 선택을 뒷받침하는 증거에 대해서는 Bogaerts 등의 논문의 대규모 전향적 데이터베이스에 대한 분석을 참조한다. 표적 병변은 이들의 크기(직경이 가장 긴 병변)를 기준으로 선택해야 하며, 관련된 모든 장기를 대표해야 하지만, 또한 재현 가능한 반복 측정에 적합한 병변이어야 한다. 때때로, 가장 큰 병변이 재현 가능한 측정에 적합하지 않은 경우도 있을 수 있으며, 이 상황에서는 재현 가능하게 측정할 수 있는 다음으로 큰 병변을 선택해야 한다. Eisenhauer 등의 간행물의 도 3의 예.
림프절은 종양에 의해 침범되지 않더라도 이미징에 의해 볼 수 있는 정상적인 해부학적 구조이기 때문에 특별히 언급할 가치가 있다. 측정 가능한 것으로 정의되고 표적 병변으로 식별될 수 있는 병리학적 결절은 CT 스캔에 의해 ≥15mm의 단축의 기준을 충족해야 한다. 이러한 결절의 단축 만이 기준선 합계에 기여한다. 결절의 단축은 방사선 전문의가 결절이 고형 종양에 의해 침범되었는지 판단하기 위해 일반적으로 사용하는 직경이다. 결절 크기는 일반적으로 이미지가 얻어진 평면에서 2차원으로 보고된다(CT 스캔의 경우 이는 거의 항상 축 평면이고; MRI의 경우 획득 평면은 축, 시상 또는 관상일 수 있음). 이러한 측정값 중 더 작은 것이 단축이다. 예를 들어, 20mm x 30mm인 것으로 보고된 복부 결절은 20mm의 단축을 가지며 악성 측정 가능한 결절에 해당한다. 이러한 예에서, 20mm는 결절 측정치로서 기록되어야 한다. 다른 모든 병리학적 결절(단축이 ≥10mm이지만 <15mm인 것)은 비-표적 병변으로 간주되어야 한다. 단축 <10mm을 갖는 결절은 비-병리학적인 것으로 간주되며 기록하거나 추적관찰하지 않아야 한다.
모든 표적 병변에 대한 직경(비-결절 병변의 경우 가장 긴 직경, 결절 병변의 경우 단축)의 합을 계산하고 기준선 합계 직경으로 보고한다. 림프절이 합계에 포함되는 경우, 상기 주지된 바와 같이, 단축 만이 합계에 추가된다. 기준선 합계 직경은 측정 가능한 치수의 질환에서 객관적인 종양 퇴행을 추가로 특성화하기 위한 참조로 사용된다.
병리학적 림프절을 포함한 다른 모든 병변(또는 질환 부위)은 비-표적 병변으로 식별되어야 하며 또한 기준선에서 기록되어야 한다. 측정은 필요하지 않으며 이러한 병변은 '존재', '부재' 또는 드물게 '명백한 진행'으로 따라야 한다(자세한 내용은 추후 참조). 또한, 동일한 장기를 침범한 여러 비-표적 병변을 사례 기록 양식에 단일 항목으로 기록할 수 있다(예를 들어 '다발성 골반 림프절 비대' 또는 '다발성 간 전이').
2.3. 반응 기준
2.3.1. 표적 병변의 평가
완전 반응(CR): 모든 표적 병변의 소실. 모든 병리학적 림프절(표적이든 비-표적이든)은 단축이 <10mm로 감소해야 한다.
부분 반응(PR): 기준선 합계 직경을 참고로 하여, 표적 병변의 직경 합의 적어도 30% 감소.
진행성 질환(PD): 시험에서 가장 작은 합계를 참고로 하여, 표적 병변의 직경의 합계의 적어도 20% 증가(이것이 시험에서 가장 작은 경우 기준선 합계를 포함함). 20%의 상대적 증가 외에도, 합계는 또한 적어도 5mm의 절대 증가를 입증해야 한다(참고: 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주됨).
안정 질환(SD): 시험 중 가장 작은 합계 직경을 참고로 하여, PR에 대한 자격을 얻기에 충분한 수축이나 PD에 대한 자격을 얻기에 충분한 증가가 없음.
2.3.2. 표적 병변의 평가에 대한 특별 참고사항
림프절:
표적 병변으로 확인된 림프절은 시험에서 림프절이 10mm 미만으로 퇴행하더라도 항상 실제 단축 측정값(기준선 검사와 동일한 해부학적 평면에서 측정)을 기록해야 한다. 이것은 림프절이 표적 병변으로 포함되는 경우, 정상 림프절은 <10mm의 단축을 갖는 것으로 정의되기 때문에 완전 반응 기준이 충족되더라도 병변의 '합계'가 0이 아닐 수 있음을 의미한다. 따라서 사례 보고 양식 또는 기타 데이터 수집 방법은 CR에 대한 자격을 얻기 위해 각 결절이 단축 <10mm을 달성해야 하는 경우 별도의 섹션에 표적 결절 병변을 기록하도록 설계될 수 있다. PR, SD 및 PD에 대해, 결절의 실제 단축 측정은 표적 병변의 합계에 포함되어야 한다.
'측정하기에는 너무 작은' 표적 병변:
시험 중에, 기준선에서 기록된 모든 병변(결절 및 비-결절)은 매우 작더라도(예를 들어 2mm) 각 후속 평가에서 실제 측정값을 기록해야 한다. 그러나, 때때로 기준선에서 표적 병변으로 기록된 병변 또는 림프절이 CT 스캔에서 너무 희미해져서 방사선 전문의가 정확한 측정값을 지정하는 데 불편함을 느껴 이를 '측정하기에는 너무 작다'고 보고할 수 있다. 이 경우 사례 보고 양식에 값을 기록하는 것이 중요하다. 병변이 사라졌을 가능성이 있다는 방사선 전문의의 소견이 있는 경우, 측정값을 0mm로 기록해야 한다. 병변이 존재하는 것으로 여겨지고 희미하게 보이지만 너무 작아서 측정할 수 없는 경우, 5mm의 기본값을 할당해야 한다. (참고: 림프절은 일반적으로 정상일 때 정의할 수 있는 크기를 가지며 후복막에서와 같이 빈번하게 지방으로 둘러싸여 있기 때문에 이 규칙이 림프절에 사용될 가능성은 적다; 그러나, 림프절이 존재하는 것으로 여겨지고 희미하게 보이지만 너무 작아서 측정할 수 없는 경우, 이 상황에서도 5mm의 기본값을 할당해야 한다). 이 기본값은 5mm CT 슬라이스 두께로부터 유래된다(그러나 CT 슬라이스 두께가 달라짐에 따라 변경되어서는 안 됨). 이러한 병변의 측정은 잠재적으로 재현할 수 없으므로 이 기본값을 제공하면 측정 오류에 기반한 잘못된 반응 또는 진행을 방지할 것이다. 그러나, 반복하자면, 방사선 전문의가 실제 측정값을 제공할 수 있는 경우, 5mm 미만이더라도 기록해야 한다.
치료시 갈라지거나 합쳐지는 병변:
비-결절 병변이 '단편화'될 때, 단편화된 부분의 가장 긴 직경을 합산하여 표적 병변 합계를 계산해야 한다. 유사하게, 병변이 합쳐짐에 따라, 이들 사이의 평면이 유지될 수 있으며, 이는 각 개별 병변의 최대 직경 측정을 얻는 데 도움이 될 것이다. 병변이 더 이상 분리할 수 없을 정도로 실제로 합쳐진 경우, 이 경우 가장 긴 직경의 벡터가 '합쳐진 병변'에 대한 최대 가장 긴 직경이어야 한다.
2.3.3. 비-표적 병변의 평가
일부 비-표적 병변은 실제로 측정할 수 있지만, 측정할 필요는 없으며 대신 프로토콜에 명시된 시점에서만 정성적으로 평가해야 한다.
완전 반응(CR): 모든 비-표적 병변의 소멸 및 종양 마커 수준의 정상화. 모든 림프절은 크기가 비-병리학적이어야 한다(<10mm 단축).
비-CR/비-PD: 하나 이상의 비-표적 병변(들)의 지속 및/또는 정상 한계 이상으로 종양 마커 수준의 유지.
진행성 질환(PD): 기존 비-표적 병변의 명백한 진행(아래 설명 참조). (참고: 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주됨)
2.3.4. 비-표적 질환의 진행의 평가에 관한 특별 참고사항
비-표적 질환의 진행에 대한 개념은 다음과 같은 추가 설명을 필요로 한다:
환자가 또한 측정 가능한 질환을 갖는 경우:
이러한 환경에서, 비-표적 질환에 기초하여 '명백한 진행'을 달성하기 위해서는, 표적 질환에 SD 또는 PR이 존재하더라도 전반적인 종양 부담이 치료를 중단할 만큼 충분히 증가할 정도로 비-표적 질환의 전반적인 악화 수준이 있어야 한다. 하나 이상의 비-표적 병변의 크기가 약간 '증가'하는 것만으로는 일반적으로 명백한 진행 상태에 대한 자격을 갖기에는 충분하지 않다. 따라서 표적 질환의 SD 또는 PR에도 불구하고 비-표적 질환의 변화에만 기반하여 전반적인 진행을 지정하는 것은 극히 드물다.
환자가 측정 불가능한 질환만 갖는 경우:
이러한 상황은 측정 가능한 질환을 갖는 것이 시험 참여 기준이 아닌 경우에 일부 3상 시험에서 발생한다. 상기 주지된 바와 동일한 일반 개념이 여기에 적용되지만, 이 경우 측정 불가능한 질환 부담의 증가를 해석하는 데 요인으로 포함할 있는 측정 가능한 질환 평가가 없다. 비-표적 질환의 악화는 쉽게 정량화할 수 없기 때문에(정의상: 모든 병변이 실제로 측정 불가능한 경우) 명백한 진행에 대해 환자를 평가할 때 적용할 수 있는 유용한 검사는 측정 불가능한 질환의 변화에 기반한 전체 질환 부담의 증가가 측정 가능한 질환에 대해 PD를 선언하는 데 필요한 증가와 규모가 비슷한지 고려하는 것이다: 즉, 종양 부담의 증가는 '용적'의 추가 73% 증가를 나타낸다(이는 측정 가능한 병변에서 직경 20% 증가에 해당함). 예는 흉막 삼출액이 '미량'에서 '대량'으로 증가하거나, 림프관성 질환이 국소적인 것에서 광범위한 것으로 증가하는 것을 포함하거나, 프로토콜에서 '치료의 변화가 필요할 만큼 충분한' 것으로 기재될 수 있다. '명백한 진행'이 보이면, 환자는 그 시점에서 전반적인 PD를 갖는 것으로 간주해야 한다. 측정 불가능한 질환에 적용할 수 있는 객관적인 기준을 갖는 것이 이상적이겠지만, 그 질환의 특성상 그렇게 하는 것은 불가능하다; 따라서 증가가 상당해야 한다.
2.3.5. 새로운 병변
새로운 악성 병변의 출현은 질환 진행을 나타낸다; 따라서, 새로운 병변의 발견에 대한 몇 가지 의견이 중요하다. 새로운 방사선학적 병변의 식별에 대한 특별한 기준은 없다; 그러나, 새로운 병변의 발견은 명백해야 한다: 즉, 스캐닝 기술의 차이, 이미징 양식의 변화 또는 종양이 아닌 어떤 것을 나타내는 것으로 생각되는 소견에 기인하지 않아야 한다(예를 들어, 일부 '새로운' 뼈 병변은 단순히 기존 병변의 치유 또는 신호탄일 수 있음). 이는 환자의 기준선 병변이 부분 또는 완전 반응을 보일 때 특히 중요하다. 예를 들어, 간 병변의 괴사는 CT 스캔 보고서에서 '새로운' 낭포성 병변으로 보고될 수 있지만 그렇지 않다.
기준선에서 스캔되지 않은 해부학적 위치의 추적관찰 시험에서 확인된 병변은 새로운 병변으로 간주되며 질환 진행을 나타낸다. 이의 예는 기준선에서 내장 질환을 갖고 시험 중에 CT 또는 MRI 뇌 검사를 의뢰하여 전이가 밝혀진 환자이다. 환자의 뇌 전이는 기준선에서 뇌 영상이 없더라도 PD의 증거로 간주된다.
예를 들어, 새로운 병변이 이의 작은 크기 때문에 모호한 경우, 지속적인 치료 및 추적관찰 평가가 이것이 정말로 새로운 질환인지를 명확히 할 것이다. 반복 스캔을 통해 확실히 새로운 병변이 있는 것으로 확인되면, 초기 스캔 일자를 사용하여 진행을 선언해야 한다.
FDG-PET 반응 평가에는 추가 연구가 필요하지만, 진행(특히 가능한 '새로운' 질환)의 평가시 CT 스캔을 보완하기 위해 FDG-PET 스캐닝의 사용을 포함시키는 것이 때때로 합리적이다. FDG-PET 이미징을 기반으로 한 새로운 병변은 다음 알고리즘에 따라 식별할 수 있다:
a. 기준선에서 FDG-PET가 음성이고 추적관찰시 FDG-PET가 양성이면 새로운 병변에 기반한 PD의 징후이다.
b. 기준선에서 FDG-PET가 없고 추적관찰시 양성 FDG-PET:
· 추적관찰시 양성 FDG-PET가 CT로 확인된 새로운 질환 부위와 상응하면, 이것은 PD이다.
· 추적관찰시 양성 FDG-PET가 CT에서 새로운 질환 부위로 확인되지 않은 경우, 해당 부위에서 실제로 진행이 발생하는지 알아보기 위해 추가 추적관찰 CT 스캔이 필요하다(그렇다면, PD 일자가 초기 비정상 FDG-PET 스캔 일자가 될 것이다). '양성' FDG-PET 스캔 병변은 감쇠 보정 이미지에서 주변 조직의 두 배 이상의 흡수로 FDG avid인 것을 의미한다.
· 추적관찰시 양성 FDG-PET가 해부학적 영상에 기반하여 진행되지 않는 CT의 기존 질환 부위에 상응하면, 이는 PD가 아니다.
임상 시험에서 전립선암 실무 그룹 3(
PCWG3
) 기준 (
Scher
et al. 2016)
반응에 대한 이미징-기반 종양 평가는 전립선암 실무 그룹 3(PCWG3) 지침에 따라 흉부, 복부 및 골반의 CT 스캔 또는 MRI 및 뼈 신티그래피(scintigraphy)를 사용하여 수행될 것이다.
PCWG3-포함된 수정된 RECIST 1.1 기준은 연조직 병변 평가에 사용되어야 하고 뼈 스캔은 뼈 질환 평가에 사용되어야 한다. PCWG3는 골격계외 질환에 대해 RECIST 1.1을 따를 것을 권고하지만, 다음 수정을 권장한다: 질환 이질성을 해결하고 전이성 진행의 패턴을 추적하기 위해 전이성 확산 부위(예를 들어 별도의 부위로서 폐, 간, 림프절, 부신 및 뇌)당 최대 5개의 병변을 기록해야 한다.
RECIST 1.1에 따라, 림프절의 측정 가능한 질환에 대해, 단축에서 ≥ 1.5cm 병변의 변화만 보고한다; 내장 측정 가능한 병변의 경우 가장 긴 치수에서 ≥ 1cm 병변의 변화만 보고한다. 뼈 질환은 RECIST v1.1에 의해 평가되는 비-표적 병변으로 간주되지 않지만 PCWG3에 의해 진행성 질환으로 평가될 것이다. 뼈 병변은 뼈 스캔을 사용하여 별도로 기록해야 한다.
RECIST 1.1 기준에 따른 연조직 반응 유형:
· 완전 반응(CR): 종양(표적 및 비-표적 모두)의 모든 임상적 및 방사선학적 증거의 소실. 모든 병리학적 림프절(표적이든 비표적이든)은 단축이 <10mm로 감소해야 한다.
· 부분 반응(PR): 기준선 합계를 참고로 하여 표적 병변의 직경 합계의 적어도 30% 감소, 기존 비표적 병변의 명백한 진행 없음 및 새로운 병변의 출현 없음.
· 안정 질환: 질환의 안정된 상태. 연구 중 가장 작은 합계 직경을 참고로 하여, PR에 대한 자격을 얻기에 충분한 수축이나 진행성 질환에 대한 자격을 얻기에 충분한 증가가 없음. 기존 비표적 병변의 명백한 진행 없음 및 새로운 병변의 출현 없음.
· 진행성 질환: 연구에서 가장 작은 합계 = 천저(nadir)를 참고로 하여 표적 병변의 직경 합계의 적어도 20% 증가(이것이 연구에서 가장 작은 경우 기준선 합계를 포함함). 20%의 상대적 증가 외에도, 합계는 적어도 5mm의 절대 증가를 입증해야 한다. 기존의 비표적 병변의 명백한 진행 또는 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행성 질환을 구성할 것이다.
PCWG3에 따른 뼈 병변 반응 유형:
· 뼈 스캔은 새로운 병변이 없는지(안정) 악화되는지(새로운 병변)를 평가하는 데 사용될 것이다
· 흡수 강도의 변화만으로는 진행 또는 퇴행을 구성하지 않는다.
· 새로운 병변은 다른 진행 징후(예를 들어 위의 RECIST 1.1에 의한 연조직 진행)가 없는 경우 치료의 지속을 나타내지 않는다.
· 새로운 병변 및 진행의 경우, 2x2 규칙이 사용된다: 첫 번째 치료-후 스캔에서 적어도 2개의 새로운 병변, 다음 스캔에서 적어도 2개의 추가 병변. 다음 (확인) 스캔에서 적어도 2개의 추가의 새로운 병변이 보이는 경우, 진행의 일자는 첫 번째 치료-후 스캔 일자이다.
· 첫 번째 치료-후 스캔 후 스캔의 경우, 첫 번째 치료-후 스캔에 비해 적어도 2개의 새로운 병변 및 후속 스캔에서의 확인은 확인된 진행 상태를 제공한다(참조 문헌의 도 2 참고)
참고문헌
실시예 16에 기재된 모든 참고문헌은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
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실시예
17: 최초 인간 시험으로부터의 PK 및
AE
데이터
인간 대상체에게 실시예 16에 기재된 바와 같이 HMBD-001을 투여하였다.
8명의 대상체는 용량 증량 단계(파트 A, 1군)의 일부로서 HMBD-001 단일요법을 제공받았다. 1일차와 15일차(1st 및 3rd 투여시)에 전체 PK 프로파일을 획득하고 Phoenix WinNonLin을 사용한 원시 데이터의 분석을 수행하였다. PK 매개변수는 이 종류의 단클론 항체에 대해 예상된 것과 일치하였다(표 6 참조). 평균 농도-시간 프로파일은 HMBD-001의 평균 농도가 일반적으로 용량 수준의 증가에 따라 증가하였음을 보여준다. HMBD-001 Cmax 및 AUC0-168 값의 증가는 일반적으로 용량 비례적이었다.
표 6. 인간 대상체에서 HMBD-001에 대한 PK 매개변수.
환자는 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(NCI-CTCAE)에 따라 치료 응급 이상 작용에 대해 관찰하였다. 4 또는 5등급에서는 AE가 관찰되지 않았고, DLT도 관찰되지 않았다(실시예 16.6.6에 기재된 바와 같음). 관찰된 AE의 85% 이상이 경증 또는 중등도(1-2등급)로 등급이 매겨졌다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (45)
- HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자를 포함하는 조성물.
- 제1항에 있어서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 조성물:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - 제1항 또는 제2항에 있어서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 조성물:
(i) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 2% 내지 20% (w/v) 수크로스, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(ii) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 2% 내지 20% (w/v) 수크로스, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0를 갖거나;
(iii) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(iv) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(v) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 아르기닌, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(vi) 2 mM 내지 200 mM 히스티딘, 1 mM 내지 250 mM 아르기닌, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖거나;
(vii) 2 mM 내지 200 mM 아세테이트, 1 mM 내지 250 mM 염화나트륨, 0.001% 내지 0.1% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 4.0 내지 7.0을 갖는 조성물. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(ii) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.1을 갖거나;
(iii) 20 mM 히스티딘, 4% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(iv) 20 mM 히스티딘, 2% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.3를 갖거나;
(v) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 6.1을 갖거나;
(vi) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.8를 갖거나;
(vii) 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.5를 갖거나;
(viii) 20 mM 히스티딘, 150 mM 염화나트륨; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 6.5를 갖거나;
(ix) 20 mM 아세테이트, 150 mM 염화나트륨; 0.05% (w/v) 폴리소르베이트-20을 포함하고, pH 5.5를 갖는 조성물. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 20 mM 히스티딘, 8% (w/v) 수크로스; 0.02% (w/v) 폴리소르베이트-80을 포함하고, pH 5.8을 갖는 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 적어도 1.2 mg/mL의 항원-결합 분자를 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 최대 50 mg/mL의 항원-결합 분자를 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 조성물:
서열 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역; 및
서열 번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 조성물:
다음 프레임워크 영역(framework region; FR)을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 조성물:
다음 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 120의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4. - 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 분자가 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 분자가 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 약제(medicament)로서 사용하기 위한 조성물.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체(subject)에서 암을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 조성물.
- 대상체에서 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하여, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법.
- 암이 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함하는, 제15항에 따른 사용하기 위한 조성물, 제16항에 따른 용도, 또는 제17항에 따른 방법.
- 암이 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하는, 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 암이 NRG 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하는, 제15항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- NRG 유전자 융합이 CLU - NRG1 , CD74- NRG1 , DOC4 - NRG1 , SLC3A2 - NRG1 , RBPMS -NRG1, WRN - NRG1 , SDC4 - NRG1 , RAB2IL1 - NRG1 , VAMP2 - NRG1 , KIF13B - NRG1 , THAP7 - NRG1 , SMAD4-NRG1, MDK - NRG1 , TNC- NRG1 , DIP2B - NRG1 , MRPL13 - NRG1 , PARP8 - NRG1 , ROCK1 -NRG1, DPYSL2 - NRG1 , ATP1B1 - NRG1 , CDH6 - NRG1 , APP- NRG1 , AKAP13 - NRG1 , THBS1 - NRG1 , FOXA1-NRG1, PDE7A - NRG1 , RAB3IL1 - NRG1 , CDK1 - NRG1 , BMPRIB - NRG1 , TNFRSF10B -NRG1, MCPH1 - NRG1 및 SLC12A2 - NRG2로부터 선택되는, 제20항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 암이 폐, 유방, 머리, 목, 신장, 난소, 자궁경부, 췌장, 위, 간, 식도, 전립선, 자궁, 담낭, 결장, 직장, 방광, 연조직 또는 비인두로부터 유래되는, 제15항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 암이 폐암(lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma), 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma), 유방암(breast cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer), 유방 암종(breast carcinoma), 유방 침습성 암종(breast invasive carcinoma), 두경부암(head and neck cancer), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 신장암(renal cancer), 신장 투명세포 암종(renal clear cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 난소 장액성 낭선암종(ovarian serous cystadenocarcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinoma), 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma), 전립선암(prostate cancer), 전립선 선암종(prostate adenocarcinoma), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁 암육종(uterine carcinosarcoma), 담낭암(gallbladder cancer), 담관암종(cholangiocarcinoma), 결장직장암(colorectal cancer), RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 위암(gastric cancer), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma, HCC), 식도암(oesophageal cancer), 방광암(bladder cancer), 요로상피 방광암(urothelial bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 육종(sarcoma), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor) 및 비인두의 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor of the nasopharynx)으로부터 선택되는, 제15항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 방법이 대상체에서 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암 세포를 검출하는 단계를 포함하는, 제15항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 대상체가 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암 세포가 검출될 때 조성물로의 치료를 위해 선택되는, 제24항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 조성물이 HER2-표적 요법, EGFR-표적 요법, 및/또는 안드로겐 수용체-표적 요법 중 하나 이상과 조합하여 투여되는, 제15항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 조성물이 세툭시맙, 엔잘루타미드 및/또는 트라스투주맙 중 하나 이상과 조합하여 투여되는, 제15항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물, 용도 또는 방법.
- 다음을 포함하는, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - 대상체에서 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의 HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 용도로서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 용도:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - HER3에 결합할 수 있는 항원-결합 분자의 치료적 또는 예방적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 항원-결합 분자가 다음을 포함하는 방법:
(i) 다음 CDR을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역:
서열 번호 91의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 99의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 제28항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 제29항에 따른 용도 또는 제30항에 따른 방법:
(i) 다음 CDR을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR1
서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR2
서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 HC-CDR3; 및
(ii) 다음 CDR을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 88의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR1
서열 번호 92의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR2
서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 LC-CDR3. - 항원-결합 분자가 다음을 포함하는, 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법:
다음 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 VH 영역:
서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1
서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2
서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3
서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4; 및/또는
다음 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 VL 영역:
서열 번호 104의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1
서열 번호 110의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2
서열 번호 120의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR3
서열 번호 125의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR4. - 항원-결합 분자가 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고/하거나 항원-결합 분자가 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- (i) 암이 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, 및/또는 HER3에 대한 리간드를 발현하는 세포를 포함하고;
(ii) 암이 HER3에 대한 리간드의 증가된 발현을 초래하는 돌연변이를 갖는 세포를 포함하고/하거나;
(iii) 암이 NRG 유전자 융합을 갖는 세포를 포함하고, 임의로 NRG 유전자 융합이 CLU-NRG1, CD74-NRG1, DOC4-NRG1, SLC3A2-NRG1, RBPMS-NRG1, WRN-NRG1, SDC4-NRG1, RAB2IL1-NRG1, VAMP2-NRG1, KIF13B-NRG1, THAP7-NRG1, SMAD4-NRG1, MDK-NRG1, TNC-NRG1, DIP2B-NRG1, MRPL13-NRG1, PARP8-NRG1, ROCK1-NRG1, DPYSL2-NRG1, ATP1B1-NRG1, CDH6-NRG1, APP-NRG1, AKAP13-NRG1, THBS1-NRG1, FOXA1-NRG1, PDE7A- NRG1, RAB3IL1-NRG1, CDK1-NRG1, BMPRIB-NRG1, TNFRSF10B-NRG1, MCPH1-NRG1 및 SLC12A2-NRG2로부터 선택되는, 제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법. - 암이 폐, 유방, 머리, 목, 신장, 난소, 자궁경부, 췌장, 위, 간, 식도, 전립선, 자궁, 담낭, 결장, 직장, 방광, 연조직 또는 비인두로부터 유래되고;
임의로 암이 폐암(lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐 선암종(lung adenocarcinoma), 침습성 점액성 폐 선암종(invasive mucinous lung adenocarcinoma), 폐 편평세포 암종(lung squamous cell carcinoma), 유방암(breast cancer), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer), 유방 암종(breast carcinoma), 유방 침습성 암종(breast invasive carcinoma), 두경부암(head and neck cancer), 두경부 편평세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 신장암(renal cancer), 신장 투명세포 암종(renal clear cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 난소 장액성 낭선암종(ovarian serous cystadenocarcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinoma), 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma), 전립선암(prostate cancer), 전립선 선암종(prostate adenocarcinoma), 거세 저항성 전립선암(castration resistant prostate cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁 암육종(uterine carcinosarcoma), 담낭암(gallbladder cancer), 담관암종(cholangiocarcinoma), 결장직장암(colorectal cancer), RAS 야생형 결장직장암(RAS wild type colorectal cancer), 위암(gastric cancer), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma, HCC), 식도암(oesophageal cancer), 방광암(bladder cancer), 요로상피 방광암(urothelial bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 육종(sarcoma), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor) 및 비인두의 신경내분비 종양(neuroendocrine tumor of the nasopharynx)으로부터 선택되는, 제28항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법. - 방법이 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암 세포를 검출하는 단계를 포함하고; 임의로 대상체가 HER3, EGFR, HER2, HER4, NRG1, NRG2, HER3에 대한 리간드 및/또는 NRG 유전자 융합을 발현하는 암 세포가 검출될 때 항원-결합 분자로의 치료를 위해 선택되는, 제28항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 항원-결합 분자가 HER2-표적 요법, EGFR-표적 요법, 및/또는 안드로겐 수용체-표적 요법 중 하나 이상과 조합하여 투여되는, 제28항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 항원-결합 분자가 세툭시맙, 엔잘루타미드 및/또는 트라스투주맙 중 하나 이상과 조합하여 투여되는, 제28항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 조성물 또는 항원-결합 분자가 7일마다 1회, 14일마다 1회, 21일마다 1회 또는 28일마다 1회 투여되는, 제14항 내지 제38항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 조성물 또는 항원-결합 분자가 28일마다 4회, 28일마다 2회, 또는 21일마다 3회 투여되는, 제14항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 조성물 또는 항원-결합 분자가 21일 또는 28일의 기간에 걸쳐 1, 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상 투여되는, 제14항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 치료가 투여당 및/또는 21일 또는 28일의 각 기간당 150 mg 내지 3000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함하는, 제14항 내지 제41항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 치료가 투여당 1500-2500 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함하는, 제14항 내지 제42항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 치료가 21일 또는 28일마다 총 적어도 600 mg, 적어도 900 mg, 적어도 1200 mg, 적어도 1500 mg, 적어도 1800 mg, 적어도 2100, 적어도 2400 mg, 적어도 2700 mg, 적어도 3000 mg, 적어도 3300 mg, 적어도 3600 mg, 적어도 3900 mg, 적어도 4200 mg, 적어도 4500 mg, 적어도 4800 mg, 적어도 5100 mg, 적어도 5400 mg, 적어도 5700 mg, 적어도 6000 mg, 적어도 6300 mg, 적어도 6600 mg, 적어도 6900 mg, 적어도 7200 mg, 적어도 7500 mg, 적어도 7800 mg, 적어도 8100 mg, 적어도 8400 mg, 적어도 8700 mg, 적어도 9000 mg, 적어도 9300 mg, 적어도 9600 mg, 적어도 9900 mg, 적어도 10200 mg, 적어도 10500 mg, 적어도 10800 mg, 적어도 11100 mg, 적어도 11400 mg, 적어도 11700 mg 또는 적어도 12000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함하는, 제14항 내지 제43항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
- 치료가 7일마다, 임의로 적어도 21일 또는 적어도 28일 동안 1800-3000 mg의 항원-결합 분자를 투여함을 포함하는, 제14항 내지 제44항 중 어느 한 항에 따른 사용하기 위한 조성물 또는 항원-결합 분자, 용도 또는 방법.
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